Submitted by Natalie Mendes (nataliermendes@gmail.com) on 2015-07-24T01:11:42Z No. of bitstreams: 1 marcus_vinicius_pinheiro_mendonca_tese.pdf: 8890182 bytes, checksum: 8c3486b869dff02251529c805a28b23c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-24T01:11:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcus_vinicius_pinheiro_mendonca_tese.pdf: 8890182 bytes, checksum: 8c3486b869dff02251529c805a28b23c (MD5) Previous issue date: 2014-10-10 / Despite the advancement in the care of patients with spinal cord injury, currently there is no specific treatment for neurological lesion. Therapy with mesenchymal stem cells from bone marrow (BMMC) has shown to be a safe and promising technique in various medical fields. The objective of this study is to evaluate the safety of autologous BMMC transplantation for the treatment of chronic spinal cord injury of traumatic origin.Fourteen paraplegic patients (classified as A in ASIA scale) with at least 6-month thoracic or thoracolumbar spinal cord injurywere selected. They underwent aspiration of bone marrow tissue from the iliac crest with further expansion and in vitro characterization; by means of microsurgical procedure, the BMMC suspension was introduced at the level of the spinal cord injury. A 6-month clinical follow-up was performed after surgery, including functional and imaging tests. There was a change in ASIA scale in 7 patients, increased bladder capacity in 5 patients and appearance of the SSEP waveform in one patient. Throughout the observation period, no major complications were observed. The present protocol proved to be safe and, due to significant improvements in neurological symptoms in many patients, also a potentially promising therapeutic method for patients with spinal cord injury. / A despeito do avan?o na assist?ncia do paciente com trauma raquimedular, atualmente n?o h? tratamento espec?fico para a les?o neurol?gica. A terapia com c?lulas-tronco mesenquimais da medula ?ssea (CMMO) tem-se mostrado uma t?cnica segura e promissora em diversas ?reas m?dicas. O objetivo deste estudo ? avaliar a seguran?a do transplante aut?logo de CMMO para o tratamento de les?o medular cr?nica de origem traum?tica. Foram selecionados 14 pacientes parapl?gicos (classificados como A na escala ASIA) com les?o medular tor?cica ou t?raco-lombar h? mais de 6 meses. Eles foram inicialmente submetidos ? aspira??o de tecido da medula ?ssea da crista il?aca, com posterior expans?o e caracteriza??o in vitro de CMMO e, por meio de procedimento microcir?rgico, introduziu-se a suspens?o de CMMO na medula espinhal no n?vel da les?o. Os pacientes foram acompanhados clinicamente, com realiza??o de exames funcionais e de imagem por um per?odo de 6 meses ap?s o procedimento cir?rgico. Houve mudan?a na escala ASIA em 7 pacientes, aumento da capacidade vesical em 5 pacientes e aparecimento de onda ao SSEP em 1 paciente. Durante todo o tempo de observa??o, n?o foram identificadas complica??es potencialmente graves. O presente protocolo se mostrou seguro e, ainda, devido a melhoras significativas no quadro neurol?gico em boa parte dos pacientes, um m?todo terap?utico potencialmente promissor para pacientes com trauma raquimedular.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 407116.pdf: 4086224 bytes, checksum: 0d63db77cbcec70fa4573faaf2637eea (MD5) Previous issue date: 2008-09-29 / A aplica??o de diferentes c?lulas-tronco na regenera??o de tecidos lesionados ou na engenharia de tecidos tem recebido grande aten??o. Devido ?s dificuldades pr?ticas de obten??o de c?lulas-tronco embrion?rias e considerando os aspectos ?ticos e legais, in?meros pesquisadores t?m realizado seus estudos com c?lulas-tronco adultas, principalmente aquelas derivadas do estroma da medula ?ssea. No entanto, estudos recentes comprovam que essa popula??o celular tamb?m pode ser isolada do tecido adiposo (PLA) obtida atrav?s de lipoaspira??o. Esse tipo de c?lula tem a caracter?stica de se diferenciar numa variedade de tecidos mesod?rmicos, dentre eles o tecido ?sseo. O processo de osteoindu??o ? influenciado por v?rios fatores e consiste na indu??o de c?lulas-tronco mesenquimais indiferenciadas a formarem c?lulas osteoprogenitoras. Os fatores osteoindutores utilizados mais freq?entemente s?o a rhBMP-4 ou DAG (Dexametasona/?cido asc?rbico/b-glicerolfosfato). Este estudo teve como objetivo avaliar a ades?o, prolifera??o e diferencia??o de c?lulas-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo quando cultivadas em meio indutor espec?fico, contendo rhBMP-4 ou DAG. C?lulas-tronco adultas foram obtidas do tecido adiposo de tr?s pacientes pela t?cnica de lipossuc??o, realizada pelo Servi?o de Cirurgia Pl?stica do Hospital S?o Lucas da PUCRS. Ap?s tratamento com colagenase para dissocia??o do tecido, as c?lulas foram quantificadas, caracterizadas com rela??o aos marcadores de membrana celular e cultivadas em meio contendo rhBMP-4, DAG ou convencional (controle). As culturas foram avaliadas no 7?, 14? e 21? dia ap?s indu??o em meio espec?fico. A express?o da fosfatase alcalina, osteopontina e osteocalcina foram avaliadas pela t?cnica de RT-PCR nas culturas de c?lulas derivadas do tecido adiposo de dois pacientes. A express?o das prote?nas osteopontina e osteocalcina foi determinada pela t?cnica do PCR em tempo real em uma cultura de c?lulas derivada de um paciente. Igualmente, nesta mesma cultura foram realizada colora??es para fosfatase alcalina e von Kossa para demonstrar a diferencia??o das c?lulas-tronco mesenquimais (MSC) em c?lulas osteobl?sticas pela detec??o da transforma??o osteobl?stica e mineraliza??o da matriz. O n?mero m?dio de c?lulas tronco adultas derivadas de tecido adiposo foi de 1,2 x 107/mL. A m?dia da freq??ncia de express?o dos marcadores CD34 e CD117 foram semelhantes, 0,73% e 0,72%, respectivamente, embora tenha ocorrido uma grande varia??o entre as amostras. Para os marcadores CD45 e CD105 a m?dia das freq??ncias foram de 1,17% e 1,57%, respectivamente. A freq??ncia do CD105 foi mais elevada nas tr?s amostras. Este estudo mostrou que as c?lulas-tronco adultas derivadas de tecido adiposo cultivadas, ou n?o em meio osteog?nico aderem e proliferam em cultura, sofrem osteoindu??o e expressam prote?nas marcadoras da linhagem osteog?nica como a fosfatase alcalina, osteocalcina e osteopontina. C?lulas-tronco adultas derivadas de tecido adiposo s?o capazes de realizar a deposi??o de matriz mineralizada somente quando cultivadas em meio contendo DAG.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 412790.pdf: 4945836 bytes, checksum: ee40952653059296bd5709107e36417b (MD5) Previous issue date: 2009-03-17 / INTRODU??O: As c?lulas mononucleares de medula ?ssea t?m sido utilizadas em diversas patologias na tentativa de regenera??o tecidual. O objetivo deste estudo foi avaliar o seu potencial efeito na cicatriza??o de perfura??es agudas da membrana timp?nica (MT). M?TODOS: Foram realizadas perfura??es timp?nicas bilateralmente por meio de miringotomia em 10 ratos Wistar. C?lulas mononucleares de medula ?ssea foram utilizadas de um lado e solu??o fisiol?gica no lado contralateral. Avaliou-se o tempo de cicatriza??o, a mobilidade timp?nica e a histologia. RESULTADOS: O lado que utilizou c?lulas mononucleares cicatrizou em m?dia 3 dias antes que o controle (p=0,006). N?o houve diferen?a de mobilidade ou padr?o histol?gico entre os grupos. CONCLUS?O: As c?lulas mononucleares de medula ?ssea proporcionaram uma cicatriza??o mais r?pida da MT que o grupo controle.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422850.pdf: 2953890 bytes, checksum: a9a608f4e09d0de94b994f35e62d2827 (MD5) Previous issue date: 2010-03-22 / Introdu??o: Evid?ncias crescentes t?m demonstrado que o transplante de c?lulas-tronco pode tornar-se uma terapia eficaz em hepatopatias. A inje??o sist?mica de c?lulas-tronco tem demonstrado que um percentual significativo dessas c?lulas fica retido no pulm?o e no ba?o. Assim, a pun??o percut?nea da veia porta orientada por ultrassonografia com Doppler colorido, em ratos, para administra??o de c?lulas-tronco apresenta-se como uma alternativa. O objetivo deste estudo foi avaliar a exequibilidade da t?cnica de pun??o percut?nea da veia porta e a efic?cia do transplante intraportal de c?lulas mononucleares de medula ?ssea em ratos com cirrose induzida. Metodologia: Para a execu??o do experimento, foram selecionados 24 ratos f?meas da ra?a Wistar com cirrose induzida atrav?s da ligadura do ducto biliar. Quatorze dias ap?s a ligadura, os animais foram preparados com tricotomia abdominal, seda??o e orienta??o do procedimento por ecografia abdominal com Doppler colorido para facilitar a localiza??o da veia porta. A fra??o mononuclear obtida da medula ?ssea de ratos machos doadores foi infundida utilizando uma agulha de gauge 30, com pun??o direta pela parede abdominal por via transhep?tica at? a veia porta, junto do hilo do f?gado. No 28? dia do experimento, os ratos foram sacrificados e avaliou-se o repovoamento hep?tico de c?lulas-tronco atrav?s da an?lise imunohistoqu?mica das c?lulas portadoras do cromossoma Y e a quantidade de c?lulas atrav?s da citometria de fluxo. Resultados: Os resultados obtidos atrav?s da infus?o de c?lulas-tronco diretamente na veia porta, orientada por ultrassonografia com Doppler colorido, evidenciaram que, dos 24 ratos estudados, sete animais (29,2%) morreram nas primeiras 24 horas. Houve um significativo repovoamento hep?tico com c?lulas da medula ?ssea do doador em 77,8% dos ratos estudados e uma efic?cia de 31,5%. Conclus?o: A t?cnica de pun??o percut?nea da veia porta mostrou-se de f?cil execu??o e com visualiza??o do material no interior do sistema portal durante o procedimento, embora aproximadamente 1/3 dos animais tenham morrido no per?odo relacionado ao procedimento. A infus?o da fra??o mononuclear da medula ?ssea diretamente na veia porta de ratos cirr?ticos permitiu a nida??o, fus?o e/ou fagocitose das c?lulas do animal doador no f?gado do receptor, sugerindo potencial terap?utico no tratamento da cirrose humana.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438174.pdf: 7206240 bytes, checksum: f165d17261aed0c4f2179085d14a7f93 (MD5) Previous issue date: 2012-03-19 / Considering the high incidence of epilepsy (2-3% of world population) and the high rate of resistance to treatment with available antiepileptic drugs (20-30%) it is essential to be considered and made available new therapeutic options. In epilepsy, like other central nervous system disorders, there is loss of neuronal subpopulations, which represents an important consequence in the pathogenesis of the disease. Therapeutic strategies involving the transplantation of stem cells and gene therapy have been studied in experimental models of epilepsy. The genetic model of EL/Suz epilepsy mouse highlights among the experimental models. In this model, seizures originate close to the parietal lobe and spread to other brain regions such as the hippocampus. Some of the behavioral manifestations that they show are the manipulations of seizures associated with handling and vestibular stimulation, and this behavior is exacerbated by the increase with age of the animal. In order to exploit this potential, our study was to evaluate the effect of administration of bone marrow mononuclear cells in the treatment of genetics epilepsy by peripheral injection of these C57BL/6-EGFP cells in EL/Suz mice. The study was distributed in four groups: I) EL+Control (C), II) EL+Saline (S); III) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells Inactivated (BMMCI), IV) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells (BMMC). The animals were stimulated from birth with direct observation of behavioral manifestations from 30 days of life. Observation and stimulation of the animals were held once a week with the movement up and down the animal and commuting (goaround) in the four directions. To verify the presence of BMMC transplanted in the hippocampus and other brain structures, other agencies use the technique of polymerase chain reaction (PCR). The observation of the pro-and post-transplant groups was used as a parameter to infer that the transplanted mononuclear cells were able to migrate to the nerve tissue and reduce the number of seizures. Counting the number of seizures was evaluated in the pre and post-transplant record electroencephalographic (EEG) in groups EL+Saline and EL+BMMC for intensity control of seizures. Electrophysiological recordings in brain slices were done to evaluate the synaptic response using the paradigm of paired pulse stimulation. Our results show a gradual reduction in seizure frequency over a period of 240 days reaching 50%. To compare our findings to reduce crises we study the brain electrical activity by recording EEG in which we observed a higher intensity of ictal phase in EL+Saline group compared with the group EL+BMMC. We observed that the animals in the EL+Saline showed a significantly higher neuronal excitability compared to the control group and EL+BMMC proving the therapeutic effect of BMC. In the study of stimulus condition we saw that the three groups were facilitated induction of longterm potentiation (LTP) with a greater amplitude of excitatory postsynaptic potential in the group EL+Saline. Based on data obtained in this study, we conclude that the mononuclear bone marrow may have therapeutic effect on epilepsy genetics in the mouse model of EL/Suz. / Considerando-se a elevada incid?ncia da epilepsia (2-3% da popula??o mundial) e o alto ?ndice de refratariedade ao tratamento com f?rmacos antiepil?pticos dispon?veis (20-30%) torna-se fundamental que sejam estudadas e disponibilizadas novas alternativas terap?uticas. Na epilepsia, a exemplo de outros dist?rbios do sistema nervoso central, h? perda de sub-popula??es neuronais, o que representa uma consequ?ncia importante na patogenia da doen?a. Estrat?gias terap?uticas envolvendo o transplante de c?lulas-tronco e terapia g?nica come?am a ser estudadas em modelos experimentais de epilepsia. Entre os modelos experimentais destaca-se o modelo de epilepsia gen?tica do camundongo EL/Suz. Neste modelo, as crises se originam pr?ximos ao lobo parietal e se propagam para as outras regi?es do c?rebro como o hipocampo. Algumas das manifesta??es comportamentais que os animais apresentam s?o as manipula??es de crises associadas ? estimula??o vestibular, sendo que este comportamento ? exacerbado com o aumento com a idade do animal. Visando explorar este potencial, nosso estudo se prop?s a verificar o efeito da administra??o de c?lulas mononucleares da medula ?ssea no tratamento da epilepsia gen?tica atrav?s da inje??o perif?rica destas c?lulas (C57BL/6-EGFP) em camundongos EL/Suz. O estudo foi distribu?do em 4 grupos: I) EL+Controle (C); II) EL+Salina (S); III) EL+C?lulas-Inativadas (CI); IV) EL+C?lulas Mononucleares (CMMO). Os animais foram estimulados desde o nascimento com observa??o direta das manifesta??es comportamentais a partir de 30 dias de vida. A observa??o e a estimula??o dos animais foram realizadas uma vez por semana com o movimento de subida e descida do animal e movimentos pendulares (ir-vir) nas quatro dire??es. Para verificar a presen?a de CMMO transplantadas no hipocampo bem como em outras estruturas encef?licas e outros ?rg?os utilizamos a t?cnica da polymerase chain reaction (PCR). A observa??o dos grupos pr? e p?s-transplante foi usada como par?metro para que se infira que as c?lulas mononucleares transplantadas foram capazes de migrar para o tecido nervoso e diminuir o n?mero de crises convulsivas. A contagem do n?mero de crises foi avaliada no per?odo pr? e p?s-transplante com registro eletroencefalogr?fico (EEG) nos grupos EL+Salina e EL+CMMO para controle de intensidade das crises. Os registros eletrofisiol?gicos in vitro avaliaram a resposta sin?ptica utilizando o paradigma de estimula??o por pulso pareado em fatias de c?rebro. Nossos resultados mostram uma redu??o gradual da frequ?ncia de crises num per?odo de 240 dias chegando a 50%. Para comparar nossos achados de redu??o de crises fizemos estudo da atividade el?trica cerebral atrav?s do registro EEG onde observamos nos tra?ados eletroencefalogr?ficos uma intensidade maior da fase ictal no grupo EL+Salina comparado com o grupo EL+CMMO. Observamos que os animais do grupo EL+Salina apresentaram uma excitabilidade neuronal significamente maior comparado ao grupo controle e o grupo EL+CMMO comprovando o efeito terap?utico das CMMO. No estudo de est?mulo condicionante podemos observar que os tr?s grupos apresentaram indu??o facilitada de potencia??o de longa dura??o (LTP) com uma maior amplitude do potencial p?ssin?ptico excitat?rio no grupo EL+Salina. Com base nos dados obtidos no presente estudo, conclu?mos que as c?lulas mononucleares da medula ?ssea podem ter efeito terap?utico na epilepsia gen?tica no modelo do camundongo EL/Suz.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 443581.pdf: 2098354 bytes, checksum: 0b5ec85f1b50d0c42f83f9793d9e1af5 (MD5) Previous issue date: 2012-08-29 / Lateral amyotrophic sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disease characterized by the selective loss of both lower and upper motoneurons in the spinal cord, brain stem and motor cortex. Loss of motoneurons leads to progressive paralysis, and death in 2 to 5 years. Treatment is based on symptomatic measures and pharmacological therapy available is not curative. Thus, it is of great importance to develop new therapeutic strategies to manage this disease. Alternatively, stem cells to replace could be used to replace degenerating neurons or to stop/delay neuronal death. The aim of this study was to verify if bone marrow mononuclear cells (BMMC) have therapeutic potential in transgenic mice superexpressing SOD1G93A. These animals phenotypic and physiopathological characteristics mimic those of ALS. Seventy-day-old or 110-day-old mice were administered with 107 BMMC in the tail vein. BMMC were obtained from C57BL/6-EGFP or SOD1G93A donors. Control animals received saline. In order to determine disease onset and progression, animals were evaluated in the Rotarod test, by electromyography and had their body weight measured. Survival was also evaluated. Tissue samples were collected for PCR analysis of cell migration. Additional groups of animals were euthanized at 120-days-old for histological analysis and the alkaline comet assay. Our results indicate that EGFPBMMC transplantation in 70-day-old mice (pre-symptomatic) mice prolong survival, preserve motor function and preserve motoneurons in the ventral horn of the spinal cord. However, for mSOD1BMMC the observed effect is intermediary. Furthermore, in 110-day-old (symptomatic) mice, only EGFPBMMC prolonged survival. This effect was more discrete than the one observed for pre-symptomatic-treated animals. Finally, systemically administered BMMC migrate into the spinal cord where fragments of their DNA were identified by PCR. There were no differences between the experimental groups in the electromyographical evaluation or DNA integrity measured by the alkaline comet assay. Our results suggest that BMMC have therapeutic potential in ALS since we observed improved motor performance and prolonged survival in animals that received the transplant. Nonetheless, outcomes were better when intervention was early and the transplanted cells did not express the mutated SOD1. Thus, our data represent a step forward in making cell-based therapy available for ALS patients. However, questions associated to the time of intervention and the source of the cells should be carefully addressed. / A esclerose lateral amiotr?fica (ELA) ? uma doen?a neurodegenerativa caracterizada por uma perda seletiva de neur?nios motores na medula espinhal, tronco encef?lico e c?rtex motor. A perda de motoneur?nios d? in?cio a uma paralisia progressiva, levando o paciente a ?bito em 2 a 5 anos. O tratamento se baseia principalmente em medidas sintom?ticas e a terapia farmacol?gica existente n?o ? curativa. Assim, ? de m?xima import?ncia o desenvolvimento de novas estrat?gias terap?uticas. Como alternativa, existe a perspectiva do uso de c?lulas-tronco para substituir neur?nios em degenera??o, ou impedir/retardar o processo de morte neuronal. O objetivo deste estudo foi verificar se as c?lulas mononucleares da medula ?ssea (CMMO) apresentam potencial terap?utico em camundongos transg?nicos que superexpressam SOD1G93A. Estes animais apresentam caracter?sticas fisiopatol?gicas e fenot?picas que se assemelham ? ELA. Aos 70 dias (pr?-sintom?tico) ou 110 dias (sintom?tico) de vida os animais receberam 107 CMMO pela veia da cauda. Camundongos C57BL/6-EGFP ou SOD1G93A foram utilizados como doadores. Animais controle receberam solu??o salina. Para determinar a idade em que os animais passam a apresentar sintomas da doen?a e diferen?as na progress?o, foram utilizados o teste motor do Rotarod, eletroneuromiografia e o peso corporal dos animais. A sobrevida dos animais tamb?m foi analisada. Ap?s a eutan?sia foram coletadas amostras para avalia??o da migra??o celular por PCR. Grupos adicionais de animais foram tratados conforme previamente descrito e eutanasiados aos 120 dias de vida para avalia??o histol?gica e ensaio do cometa alcalino. Nossos resultados indicam que o transplante intravenoso de EGFPCMMO aumenta a sobrevida de animais tratados aos 70 ou aos 110 dias de vida. Quando a interven??o ? feita no per?odo pr?-sintom?tico, o aumento da sobrevida ? acompanhado de preserva??o da fun??o motora e de motoneur?nios do corno ventral da medula espinhal. Entretanto, quando as c?lulas transplantadas s?o mSOD1CMMO, o efeito observado nos mesmos par?metros ? apenas intermedi?rio. Al?m disso, quando o transplante ocorre no per?odo sintom?tico, somente as EGFPCMMO promovem aumento na sobrevida, embora discreto. A perda de fun??o motora e a progress?o n?o se modificam. Finalmente, embora as c?lulas tenham sido administradas sistemicamente, migram para a medula espinhal, onde foram identificados fragmentos de seu DNA. N?o foram identificadas diferen?as entre os grupos na avalia??o por eletroneuromiografia, nem da integridade de do DNA avaliada pelo ensaio do cometa alcalino. Nossos resultados at? o momento sugerem que a fra??o mononuclear da medula ?ssea tem potencial terap?utico no tratamento da ELA, uma vez que verificamos melhora de desempenho motor e aumento de sobrevida em animais submetidos ao transplante. Apesar disso, os desfechos s?o mais favor?veis quando o tratamento ? precoce e as c?lulas n?o expressam a muta??o da SOD1 desencadeadora da ELA. Assim, nossos dados representam avan?o na disponibiliza??o do tratamento com c?lulas-tronco para pacientes com ELA, mas quest?es relacionadas ao per?odo de interven??o e fonte das c?lulas devem ser cuidadosamente avaliadas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449056.pdf: 2018454 bytes, checksum: e1cb8245a85f0c29d0e1f07814420e60 (MD5) Previous issue date: 2013-03-15 / Chronic cartilage lesions, like septal and auricular perforations, are easily found at the otolaryngologist office. Its treatment is a challenge for physicians and patients, due to few alternatives and limit success. With the objective to decrease the surgical procedures, it s been studying alternative methods for the total regeneration of the cartilaginous defects. The use of cellular therapy had been used in some cases, but there are no chronic cartilaginous protocols well written in the medical literature to compare the different results. This paper has the objective to describe a chronic cartilaginous lesion in an experimental model, for future studies with cellular therapy. / Les?es cartilaginosas cr?nicas, como as perfura??es septais e auriculares, s?o facilmente encontradas no consult?rio do otorrinolaringologista. Seu tratamento ? um desafio tanto para o m?dico quanto para o paciente, devido a poucas alternativas e sucesso limitado. Com o objetivo de diminuir a morbidade dos procedimentos cir?rgicos, cada vez mais t?m sido estudados m?todos alternativos para a regenera??o completa dos defeitos cartilaginosos. O uso de terapia celular j? est? sendo utilizado em alguns casos, por?m n?o h? protocolos de les?es cartilaginosas cr?nicas bem descritos na literatura m?dica a fim de se obter compara??es adequadas desses resultados. Este trabalho tem por objetivo descrever uma les?o cartilaginosa cr?nica em um modelo experimental, para estudos futuros com terapia celular.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-04T21:15:20Z No. of bitstreams: 1 AngelicaFernandesGurgelDeSousa_DISSERT.pdf: 4154120 bytes, checksum: 9b7e3179ef04b1aafa2fdd770a6124d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-08T23:03:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AngelicaFernandesGurgelDeSousa_DISSERT.pdf: 4154120 bytes, checksum: 9b7e3179ef04b1aafa2fdd770a6124d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T23:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AngelicaFernandesGurgelDeSousa_DISSERT.pdf: 4154120 bytes, checksum: 9b7e3179ef04b1aafa2fdd770a6124d4 (MD5) Previous issue date: 2017-05-26 / Os problemas relacionados com defeitos ?sseos continuam a motivar a busca de terapias mais eficazes. Assim, a combina??o de biomateriais, c?lulas-tronco e mol?culas bioativas fazem parte das ferramentas usadas pela medicina regenerativa para alcan?ar esse objetivo. Diversos estudos j? mostraram o potencial osteog?nico dos polissacar?deos sulfatados (PSs) extra?dos de macroalgas marinhas. Entre eles, o fucoidan, isolado da alga marrom Fucus vesiculosus, ? o mais estudado, sendo j? comercializado por algumas empresas. As algas verdes tamb?m s?o fonte de PSs, mas estas s?o ainda pouco exploradas para aplica??es na regenera??o ?ssea. Em geral, as aplica??es cl?nicas dos PSs extra?dos de algas ainda s?o limitadas devido ? escassez de estudos sobre os seus efeitos, como por exemplo, o potencial genot?xico ? desconhecido na maioria dos casos. Assim, neste trabalho avaliamos a atividade osteog?nica 1) do Fucoidan de F. vesiculosus (um extrato comercializado pela Sigma), 2) das amostras ricas em PSs obtidas do subfracionamento do fucoidan comercial, e 3) do extrato rico em PSs extra?dos da alga verde Caulerpa sertularioides usando como modelo c?lulas-tronco humanas isoladas da geleia de Wharton de cord?es umbilicais (CTMH-GW). Estudou-se tamb?m o potencial genot?xico dos extratos totais de F. vesiculosus e C. sertularioides e posteriormente, da subfra??o do fucoidan que apresentou maior potencial osteog?nico, utilizando do ensaio de micron?cleo com bloqueio da citocinese (CBMN) na linhagem CHO-K1. Os ensaios de redu??o do MTT evidenciaram que as amostras ricas em PSs n?o apresentaram citotoxicidade significativa ao longo de 72 h, at? 10 ?g.mL-1. Os ensaios de atividade da fosfatase alcalina (ALP) e de mineraliza??o sugerem que as amostras ricas em PSs possuem atividades osteog?nicas diferentes: a subfra??o do fucoidan FUC 0.5 (5 ?g.mL-1) foi a que apresentou melhor resultado, aumentando 124% a atividade da ALP em rela??o ao controle positivo (c?lulas mantidas em meio osteog?nico). J? o extrato total de C. sertularioides (5 ?g.mL-1) aumentou 192% a atividade da ALP. Adicionalmente, todas as amostras testadas induziram o ac?mulo de c?lcio na matriz extracelular. Quanto ? genotoxicidade, os resultados do ensaio CBMN sugerem que, nas condi??es testadas, estas amostras n?o s?o genot?xicas, indicando que podem ser uma alternativa para terapias de regenera??o ?ssea. / Problems related with bone defects continue to motivate the search for more effective therapies. Thus, the combination of biomaterials, stem cells and bioactive molecules is part of the tools used by regenerative medicine to achieve this goal. Several studies have already shown the osteogenic potential of sulfated polysaccharides (SPs) extracted from marine macroalgae. Among them, fucoidan, isolated from brown algae Fucus vesiculosus, is the most studied, and is already commercialized by some companies. Green algae are also a source of SPs, but these are even more unexploited in the scope of bone regeneration. In general, the clinical applications of SPs from algae are very limited, because studies on their effects are scarce, for example, their genotoxic effects are unknown in most cases. Thus, in this work, we evaluated the osteogenic activity of Fucoidan from F. vesiculosus (an extract commercialized by Sigma), 2) SPs-rich samples obtained from subfractionation of commercial fucoidan, and 3) SPs-enriched extract from green algae Caulerpa Sertularioides, using human mesenchymal stem cells isolated from the Wharton jelly of umbilical cords (CTMH-GW) as cell model. It was also studied the genotoxic potential of the total extracts of F. vesiculosus and C. sertularioides, using the cytokinesis block micronucleus assay (CBMN) in the line CHO-K1. The genotoxicity of fucoidan?s subfraction that presented greater osteogenic potential was also evaluated. The MTT reduction assays showed that SPs-enriched samples did not show significant cytotoxicity over 72 h, up to 10 ?g.mL-1. Alkaline phosphatase (ALP) activity and mineralization assays suggest that SPs-enriched samples have different osteogenic activities: fucoidan subfraction FUC 0.5 (5 ?g.mL-1) showed the best result, increasing 124% the ALP activity in relation to the positive control (cells maintained in osteogenic medium). The total extract of C. sertularioides (5 ?g.mL-1) increased the ALP activity by 192%. In addition, all samples tested induced calcium accumulation in the extracellular matrix. Concerning to genotoxicity, CBMN assay results suggest that, under the tested conditions, these samples are not genotoxic, indicating their potential as alternative bone regeneration therapy.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-08-25T20:42:57Z No. of bitstreams: 1 JamileMarinhoBezerraDeOliveiraMoura_TESE.pdf: 18433655 bytes, checksum: e3b33cd1bc7a5e8e3f1a6cdd83ebdcbd (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-26T20:02:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JamileMarinhoBezerraDeOliveiraMoura_TESE.pdf: 18433655 bytes, checksum: e3b33cd1bc7a5e8e3f1a6cdd83ebdcbd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T20:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JamileMarinhoBezerraDeOliveiraMoura_TESE.pdf: 18433655 bytes, checksum: e3b33cd1bc7a5e8e3f1a6cdd83ebdcbd (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / As neoplasias de gl?ndulas salivares exibem uma ampla variedade de comportamento biol?gico e grande diversidade morfol?gica, e esta heterogeneidade inerente a este grupo de tumores suscita o interesse em pesquisar estas les?es. As c?lulas-tronco s?o a principal fonte para a gera??o e manuten??o da diversidade celular e homeostase do tecido, dist?rbios na regula??o destas c?lulas podem levar ? produ??o de c?lulas-tronco alteradas, denominadas de c?lulas-tronco tumorais, que possuem potencial proliferativo e capazes de originar e/ou manter o tumor. Pesquisas acerca das c?lulas-tronco tumorais e das prote?nas a elas associadas em algumas neoplasias orais t?m sido desenvolvidas, no entanto, o papel destas em neoplasias de gl?ndulas salivares n?o est? ainda bem estabelecido. Desta forma, o objetivo deste estudo foi identificar c?lulas do par?nquima tumoral que expressam marcadores de c?lulas-tronco tumorais, atrav?s da avalia??o da imunoexpress?o do OCT4 e CD44, em uma s?rie de casos de neoplasias de gl?ndulas salivares. A amostra foi constitu?da por 20 adenomas pleom?rficos, 20 carcinomas mucoepiderm?ides e 20 carcinomas aden?ides c?sticos localizados nas gl?ndulas salivares menores e maiores. Todos os casos estudados exibiram express?o positiva para OCT4 e CD44, sendo observado que para ambos marcadores, as neoplasias localizadas nas gl?ndulas salivares maiores exibiram maior imunomarca??o quando comparada com as les?es das gl?ndulas salivares menores apresentando diferen?a estatisticamente significativa (p=<0,001). Na amostra total e no grupo das gl?ndulas salivares menores, as neoplasias malignas exibiram maior imunorreatividade para OCT4 do que o adenoma pleom?rfico. No entanto, n?o foi encontrada diferen?as estatisticamente significativas de imunoexpress?es entre as les?es e entre suas classifica??es/grada??es histomorfol?gicas. Analisando a correla??o entre as imunoexpress?es de OCT4 e CD44 foi observada uma correla??o positiva moderada (r=0,444) com signific?ncia estat?stica entre os mesmos. A elevada express?o de OCT4 e CD44 pode indicar que estas prote?nas desempenham papel importante na identifica??o de c?lulas-tronco tumorais, permitindo uma previs?o do comportamento biol?gico das neoplasias de gl?ndula salivar, apresentando n?veis menores em tumores benignos e maiores nos tumores malignos. / Salivary gland neoplasms exhibit a wide variety of biological behavior and a high morphological diversity raises the interest in researching these lesions. The stem cells are the main source for the generation and maintenance of cell diversity, disorders in the regulation of these cells can lead to the production of altered stem cells, termed cancer stem cells capable of generate the tumor. Researches on cancer stem cells and associated proteins have been developed in some oral cancers; however, their role in salivary gland neoplasms is not well established. Thus, the aim of this study was to identify the tumor parenchyma cells exhibiting stem cell characteristics, by evaluating the immunoreactivity of OCT4 and CD44, in a number of cases of salivary gland neoplasms. The sample consisted of 20 pleomorphic adenomas, 20 mucoepidermoid carcinomas and 20 adenoid cystic carcinoma located in minor and major salivary glands. The expression of OCT4 and CD44 was evaluated by the percentage of positive cells (PP) and the intensity of expression (IE), it is realized the sum of the scores, resulting in the total score immunostaining (PIT) ranging 0-7. All studied cases showed positive expression of OCT4 and CD44 and higher values than the control groups. It was observed that for OCT4 luminal cells and non-luminal were immunostained in the case of pleomorphic adenomas and adenoid cystic carcinoma. Already the immunoreactivity of CD44 was particularly evident in the non-luminal cells of these lesions. In mucoepidermoid carcinomas for both markers, there was immunoreactivity in squamous and intermediate cells and absence of staining mucous cells. For both markers, a statistically significant higher immunostaining was verified in neoplasms located in the major salivary glands compared with lesions in the minor salivary (p<0.001). At the total sample and in the group of minor salivary glands, malignant neoplasms exhibited higher immunoreactivity for OCT4 than pleomorphic adenoma. However, there was no statistically significant difference between the lesions and between their classifications histomorphologic. Analyzing the correlation between OCT4 and CD44 immunoexpressions, a statistically significant moderate positive correlation (r = 0.444) was observed. The high expression of OCT4 and CD44 may indicate that these proteins play an important role in identifying cancer stem cells, allowing a prediction of biological behavior of salivary gland neoplasms.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-11T17:13:30Z No. of bitstreams: 1 EduardoAlonsoCruzMonroy_DISSERT.pdf: 2026837 bytes, checksum: 07d08221eedeeea6100a427aaf6ca1d9 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-14T17:30:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EduardoAlonsoCruzMonroy_DISSERT.pdf: 2026837 bytes, checksum: 07d08221eedeeea6100a427aaf6ca1d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T17:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoAlonsoCruzMonroy_DISSERT.pdf: 2026837 bytes, checksum: 07d08221eedeeea6100a427aaf6ca1d9 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Les?es odontog?nicas epiteliais benignas s?o entidades de grande import?ncia cl?nica que se desenvolvem nos ossos maxilares a partir dos tecidos que formam os dentes. Tem sido demonstrado que em tumores benignos e malignos, est?o presentes um grande n?mero de c?lulas tronco tumorais, as quais tem grandes implica??es no desenvolvimento dos tumores. Oct-4 e CD44 t?m sido demostrados como importantes marcadores para c?lulas-tronco tumorais. O objetivo deste estudo foi identificar c?lulas epiteliais que expressam marcadores de c?lulas tronco atrav?s da express?o imuno-histoqu?mica de Oct-4 e CD44 em uma s?rie de casos de les?es odontog?nicas epiteliais ben?gnas. A amostra foi constitu?da por 20 casos de ceratocisto odontog?nico (CCO), 20 caos de Ameloblastoma s?lido/multic?stico e 20 casos de Tumor Odontog?nico Adenomatoide (TOA). A express?o de Oct-4 e CD44 foi avaliada no epit?lio das les?es atrav?s do percentual de c?lulas positivas(PP) e da intensidade da express?o ( IE ), sendo realizado o somat?rio destes escores, resultando na Pontua??o de Imunomarca??o Total (PIT) que variou de 0 a 7. Os resultados do presente estudo foram analisados pelo valor da pontua??o de PIT. Todos os casos apresentaram positividade para os dois marcadores e a maioria exibiu alta express?o para ambos os marcadores. A an?lise da express?o de Oct-4 n?o revelou diferen?as estatisticamente significativas (p = 0,406) entre as les?es estudadas. Com rela??o ? express?o do CD44, houve diferen?a estatisticamente significativa entre os casos de ameloblastoma e CCO, apresentando este ?ltimo maior n?mero de casos no score 7 (p = 0,034). Na analise da correla??o da imunoexpress?o de ambos os marcadores nas tr?s les?es estudadas, n?o houve correla??o estatisticamente significativa . Os resultados do presente estudo identificaram a presen?a de c?lulas com caracter?sticas troncais dispostas em locais variados do componente epitelial das les?es ora estudadas sugerindo a sua poss?vel participa??o na histog?nese e diferencia??o em les?es odontog?nicas epiteliais benignas contribuindo assim para o desenvolvimento destas les?es. / benign epithelial odontogenic lesions are great clinical importance entities that develop in the jaws from the tissues that form teeth. It has been shown that in benign and malignant tumors, are present in a large number of tumor stem cells, which has great implications in the development of these lesions. Oct-4 and CD44 have been demos as important markers for tumoral stem cells. The objective of this study was to identify epithelial cells expressing stem cell markers by immunohistochemical expression of Oct-4 and CD44 in a series of cases of benign epithelial odontogenic lesions. The sample was comprised of 20 cases of odontogenic keratocyst (OKC), 20 cases of solid/multicystic ameloblastoma and 20 cases of adenomatoid odontogenic tumor (AOT). The expression of Oct-4 and CD44 was evaluated in epithelial lesions using the percentage of positive cells (PP) and the intensity of expression (IE), being realized the sum of these scores, resulting in Total Immunostaining Score (TIS) ranging 0 to 7. The results were submitted to the appropriate statistical test (nonparametric Kruskal-Wallis and Spearman correlation coefficient). All cases were positive for both markers and most showed high expression of both markers. The analysis of Oct-4 expression revealed no statistically significant differences (p = 0.406) among the studied lesions. Regarding the CD44 expression, there was a statistically significant difference between the cases of ameloblastoma and TOA in relation to the CCO, with the latter show more cases in the score 7 (p = 0.034). In the correlation analysis of the immunoreactivity of both markers in the three lesions studied, there was no statistically significant correlation. The results of this study identified the presence of cells with stemness characteristics arranged at various sites in the epithelial component of the studied lesions suggesting their possible role in the histogenesis and differentiation in benign epithelial odontogenic lesions, thus contributing to the development of these lesions.