Carcinoma adenóide cístico é uma neoplasia maligna de glândula salivar com alto grau de recorrência e metástase. Células tumorais que invadem tecidos subjacentes formam invadopódios, protrusões de membrana ricas em actina, cortactina e MT1-MMP capazes de degradar a matriz extracelular (MEC). Proteólise de moléculas da MEC, como a laminina, promove liberação de fragmentos e peptídeos bioativos. Nesse trabalho, estudamos o papel dos peptídeos AG73 e C16, da laminina-111, na atividade de invadopódios de células derivadas de carcinoma adenóide cístico (CAC2). Nossos resultados mostram que AG73 e C16 regulam atividade de invadopódio e aumentam a expressão de MT1-MMP em células CAC2. Silenciamento da integrina <font face=\"Symbol\">b1 e inibição da via ERK diminuem a atividade de invadopódio induzida por esses peptídeos. Já a inibição da via Rac diminui a atividade de invadopódios induzida apenas por AG73. Propomos que os peptídeos AG73 e C16 regulariam a atividade de invadopódios através da integrina <font face=\"Symbol\">b1 e da via ERK 1/2. Já a via Rac1 transduziria sinais gerados apenas pelo peptídeo AG73. / Adenoid cystic carcinoma is a frequently occurring malignant salivary gland neoplasm with high level of recurrence and metastasis. Tumor cells that invade surrounding tissues rely on invadopodia to degrade extracellular matrix (ECM). Invadopodia are actin and cortactin-rich membrane protrusions that localize MT1-MMP required for ECM degradation. Breakdown of ECM molecules, such as laminins, releases fragments and bioactive peptides. Here we addressed the role of laminin-111 peptides AG73 and C16 in invadopodia activity of cells derived from human adenoid cystic carcinoma (CAC2). Our results show that AG73 and C16 increase invadopodia activity and MT1-MMP expression in CAC2 cells. Silencing of <font face=\"Symbol\">b1 integrin and ERK pathway inhibition decrease AG73 and C16-induced invadopodia. Rac1 pathway inhibition decreases only AG73-induced invadopodia formation. We propose that AG73 and C16 increase invadopodia activity in CAC2 cells through <font face=\"Symbol\">b1 integrin. ERK1/2 pathway would transduce signals generated by both peptides, while Rac1 pathway is related to AG73 signaling.

Gliomas são tumores do sistema nervoso central e o glioblastoma multiforme (GBM) é sua forma mais comum e de pior prognóstico. A proliferação desordenada, migração estão entre os processos biológicos que conferem ao GBM um comportamento altamente agressivo. O objetivo deste estudo foi analisar in vitro o papel de PGE2 na proliferação, migração e apoptose da linhagem de glioma humano T98G através de tratamento com ácido gama-linolênico (GLA), Ibuprofeno (IBU) e adição de prostaglandina E1 (PGE1) e prostaglandina E2 (PGE2) exógeno. Nossos resultados demonstraram através uma diminuição nas taxas de proliferação e de migração e uma indução de apoptose nas células T98G tratadas com GLA ou IBU. Por outro lado, a adição exógeno de PGE1 ou PGE2 resultou num aumentou da proliferação e da migração e numa inibição da apoptose. Esses resultados demonstram a influência de PGE2 na linhagem T98G. / Gliomas are tumors of the central nervous system and glioblastoma multiforme (GBM) is the most common form with the worst prognosis. Uncontrolled cell proliferation, migration are among the biological processes that give GBM a highly aggressive behavior. The aim of this study was to analyze in vitro the role of PGE2 the proliferation, migration and apoptosis of the T98G human glioma cell line through treatment with gamma-linolenic acid (GLA), ibuprofen (IBU) and the addition of exogenous prostaglandin E1 (PGE1) and prostaglandin E2 (PGE2). Our results demonstrated through various tests a decrease in the rates of proliferation and migration and an induction of apoptosis in T98G cells treated with GLA or IBU. On the other hand, the addition of exogenous PGE1 or PGE2 resulted in increased proliferation and migration and inhibition of apoptosis. These results demonstrate the influence of PGE2 in the T98G cell line.

Exossomos (Exo) originados de células dendríticas (DCs) carregam moléculas associadas à apresentação antigênica. Neste trabalho procurou-se estabelecer se Exo de DCs seriam capazes de conferir imunogenicidade às células tumorais. Os Exo isolados de culturas de DCs expressavam as moléculas HLA-ABC, HLA-DR, CD86, CD11c, CD81, CD54 e CD18. Estes foram então adicionados às células da linhagem humana de adenocarcinoma mamário, SK-BR-3, as quais passaram a expressar as moléculas HLA-DR, CD86 e CD11c. As células tumorais modificadas pelos Exo induziram a produção de IL-6 e IL-10, detectados no sobrenadante das co-culturas destas com linfócitos T. Estas células tumorais também induziram aumento do número de linfócitos produtores de IFN-<font face=\"Symbol\">g, pré-sensibilizados contra antígenos tumorais, e aumento da expressão de SOCS3 nestes. Em conclusão, nossos resultados mostram que, Exo de DCs alteram o fenótipo de células tumorais, modificando sua interação com linfócitos T, sem induzir nas mesmas capacidade de ativar respostas proliferativas ou citotóxicas de linfócitos T in vitro. / Exosomes (Exo) originated from dendritic cells (DCs) contain molecules involved in antigen presentation. The present work sought to determine if Exo from DCs would be able to transfer immunogenicity to tumor cells. Exo isolated from DCs cultures carried HLA-ABC, HLA-DR, CD86, CD11c, CD81, CD54 and CD18. These Exo were added to cultures of the human breast adenocarcinoma cell line, SK-BR-3, which gained expression of HLA-DR, CD86 and CD11c. Tumor cells modified by Exo induced IL-6 and IL-10 production, detected in the supernatant of their co-cultures with T lymphocytes. These tumor cells also induced an increase in the frequency of IFN-<font face=\"Symbol\">g-producing T lymphocytes, pre-sensitized against tumor antigens, and an increased expression of SOCS3. In conclusion, our results show that, Exo from DCs affect the phenotype of tumor cells, modifying their interaction with T lymphocytes, without inducing the ability to activate cytotoxic or T cell proliferative responses in vitro.

O fator esteroidogênico 1 (SF-1) é um fator de transcrição envolvido no desenvolvimento, na produção de esteroides e na proliferação do córtex adrenal. POD-1/TCF21 parece estar envolvido na regulação de SF-1, inibindo sua expressão e suas funções nas células esteroidogênicas. No entanto, a expressão e a relação entre SF-1 e POD-1 em células normais adrenocorticais não está esclarecida. O objetivo desse trabalho foi determinar se Pod-1 regula a expressão de Sf-1 através da hiperexpressão de Pod-1 em culturas primárias de células adrenocorticais de rato. Foi analisada a expressão endógena de Sf-1 e Pod-1, através da reação de RT-PCR quantitativo, em células glomerulosas (G) e células fasciculadas/reticulares (F/R), bem como em células transfectadas com pCMVMycPod-1. Os resultados mostraram que Sf-1 está mais expresso nas células F/R do que nas células G e ambos os tipos celulares apresentaram baixa expressão endógena de Pod-1. As células F/R transfectadas apresentaram um aumento estatisticamente significante da expressão de Sf-1, mas não as células G. Esses resultados sugerem um mecanismo de ação de Pod-1 no controle da expressão de Sf-1 em células adrenocorticais normais distinto do descrito em células de tumores adrenais e células esteroidogênicas. / The steroidogenic factor 1 (SF-1) is a transcription factor involved in the development, steroids production and adrenal cortex proliferation. There are evidences that suggest that POD-1/TCF21 may be involved in the inhibition of SF-1 and modulating the SF-1 function in steroidogenic cells. However, the expression and the relation between SF-1 and POD-1 in normal adrenocortical cells are still unclear. The aim of this study was to determine whether Pod-1 regulates the expression of Sf-1 by overexpression of Pod-1 in primary cell cultures of rat adrenal cortex. We analyzed the expression of endogenous Sf-1 and Pod-1 by RT-PCR quantitative in glomerulosa (G) and fasciculata/reticularis (F/R) cells and also in cells transfected with plasmid CMVMycPod-1. The results showed that the SF-1 expression is higher in F/R cells than the G cells. Moreover, both cell types showed low endogenous expression of Pod-1. Analysis of Sf-1 expression in transfected cells showed a statistically significant increase in the Sf-1 expression in F/R cells but not in G cells. These results suggest a mechanism of action of Pod-1 in the regulation of Sf-1 in normal cells distinct of described in adrenocortical tumor cells and other steroidogenic cells.

No processo de metástase os movimentos de migração e invasão tem um papel essencial e em ambos a função dos microfilamentos é de grande importância. Neste contexto, o presente trabalho buscoui analisar os efeitos da droga jaspamídeo e após a determinação das concentrações de IC50 para as linhagens HT144 e NGM foram estudados os efeitos da droga. Os tratamentos mostraram que o fármaco atua desorganizando o citoesqueleto de modo dependente de sua concentração. Os ensaios de ferida mostraram diminuição da taxa de fechamento da área livre após os tratamentos e os ensaios de migração com placas de transwell mostraram que os grupos tratados sofrem aumento desse parâmetro. Nos ensaios de invasão com câmara de Boyden o tratamento mostrou-se efetivo apenas para a célula NGM quando tratadas com 75 nM de jaspamídeo e 30 <font face=\"Symbol\">mM de Y-27632. Quanto à migração, a linhagem NGM não completava este processo quando tratada com as concentrações do IC50 e do IC50/2 acrescido de Y-27632 e a linhagem HT144 apresenta aumento deste parâmetro quando tratado com jaspamídeo e 200 <font face=\"Symbol\">mM de NSC23766. / Many signaling ways are involved in metastasis and the cellular migration and invasion are important in this context. The role of microfilaments is essential in mesenchymal and amoeboid migration. In this context, the present work aimed to analyze the effects of the drug jaspamide and. after the determination of the IC50 concentrations for the HT144 and NGM cell lines, the effects of the treatment with jaspamide were studied. The wound assays indicated a decrease in the free area after the treatments, and the migration assays with transwell showed that, after the inoculation with the drug, the cells increased the process of migration. In the invasion assays with Boydens chamber, the treatment with jaspamide was effective only in NGM cells, when they are treated with 75 nM of the drug plus 30 <font face=\"Symbol\">mM of Y-27632. Regarding the migration process, the NGM cell line did not show movement when treated with the IC50 concentration and the IC50/2 concentration plus Y-27632, and the HT144 cell line increases this parameter when treated with jaspamide and 200 <font face=\"Symbol\">mM of NSC23766.

A maioria dos tumores sólidos apresentam características aneuplóides. Porém a relação entre aneuploidia e transformação maligna, ainda não está definida. Nos últimos anos diversas proteínas têm sido descritas como reguladoras de eventos durante a divisão celular, principalmente as relacionadas com a formação do fuso bipolar e segregação equacional dos cromossomos. Neste estudo propomo-nos a analisar os efeitos da interferência em dois pontos críticos da mitose, a segregação cromossômica e a citocinese, em relação à aneuploidia e à instabilidade genética tumoral. Nossos dados mostraram que o tratamento sequencial de Monastrol e Blebistatina determinou o surgimento de fusos mitóticos anormais, amplificação centrossômica, localização ectópica de Aurora A e aumento de micronúcleos. Esta interferência pode levar a um quadro de instabilidade genética e, consequentemente a progressão tumoral, abrindo novas possibilidades para o estudo dos mecanismos moleculares envolvidos na regulação do ponto de checagem mitótico e resistência a quimioterápicos. / Most solid tumors have aneuploid feature. Therefore the relationship between aneuploidy and malignant transformation is not yet understood. In the last years it has been described many proteins involved in regulation of mitosis, mainly those related to bipolar spindle and chromosome segregation. In this work we propose to study the effects of the interference on two mitotic critical points, the chromosome segregation and cytokinesis, in relation to aneuploidy and genetic tumor instability. Our data showed that sequential treatment with Monastrol and Blebbistatin led to abnormal mitotic spindle, centrosome amplification, Aurora A ectopic and micronucleus increased. This interference can lead to genetic instability and may be involved in a tumor progression, opening news possibilities to study the molecular mechanisms involved in regulation the checkpoint mitotic and resistance to chemotherapy found in genetically unstable cells.

Problemas reprodutivos ocorrem no hipo e no hipertireoidismo, mas pouco se conhece a respeito das bases moleculares destas alterações. Avaliou-se o efeito da administração de triiodotironina na atividade do gonadotrofo em ratos Wistar tireoidectomizados. O hipotireoidismo ocasionou elevação no TSH e do LH sérico, aumento do conteúdo do mRNA e redução do conteúdo protéico do LH e do FSH, redução da cauda poli (A), redução da testosterona e do FSH séricos, redução da expressão do receptor de LH, aumento da expressão do receptor de andrógenos testiculares e epididimais. O tratamento com T3 acarretou a diminuição do mRNA e aumento do conteúdo protéico de LH, aumento do FSH sérico, diminuição do conteúdo do mRNA e aumento do conteúdo protéico do FSH, aumento da expressão do receptor de LH, redução da expressão de receptores de andrógenos testiculares e epididimais. Esses resultados sugerem que o T3 age na modulação da função do gonadotrofo e na modulação da expressão dos receptores em tecidos-alvo. / Reproductive disorders occur in hypo and hyperthyroidism, but little is known about the molecular basis of these alterations. The effect of administration of triiodothyronine (T3) on the activity of gonadotropes in thyroidectomyzed male Wistar rats was evaluated. Hypothyroidism caused increased on TSH and LH serum concentrations, increased of mRNA content and decreased in protein content of LH and FSH, reduction in the length of poli(A) tail of LH, reduction in testosterone and FSH serum concentrations, reduction in the expression of LH receptor, increased in the expression of androgen receptors in the testis and epididymis. T3 treatment caused reduction on mRNA and increased on mRNA of LH and FSH, increased serum FSH, increased the expression of LH receptor, and reduction of the expression of androgen receptors in the testis and epididymis. These results suggest that T3 modulates the function of gonadotrope and the expression of the receptors in target-tissues.

O câncer cervical é o terceiro tipo de câncer mais comum entre as mulheres, sendo a infecção por HPV16 o principal fator de risco para sua etiopatogênese. Neste trabalho avaliamos o potencial profilático e terapêutico da vacina proteica E6E7, constituída de epítopos imunogênicos de E6 e E7 do HPV16, com ou sem Ubiquitina (Ub) fusionada (E6E7Ub e UbE6E7), contra tumor de células TC-1. A vacina E6E7 conferiu total proteção contra a formação de tumores em animais C57BL/6 selvagens, CD4 nocautes e TLR4 deficientes previamente imunizados e posteriormente desafiados com células TC-1. Entretanto, em animais imunizados após desafio, a fusão da Ub no antígeno E6E7 foi crucial para a vacina promover a regressão do tumor em 60% dos animais. Além da fusão da Ub na extremidade N-terminal do antígeno (UbE6E7) aumentar a poliubiquitinação in vitro, essa estratégia de fusão promoveu uma melhor resposta imunoterapêutica contra o tumor que E6E7 e E6E7Ub, sendo promissora para o desenvolvimento de vacinas terapêuticas contra câncer cervical e também contra outros tipos de câncer. / Cervical cancer is the third most common cancer women worldwide and HPV16 infection is a major risk factor for its ethiopathogenesis. In this study we evaluated in mice the prophylactic and therapeutic potential of the E6E7 proteic vaccine, consisting of immunogenic HPV16 E6 and E7 epitopes, with or without Ubiquitin-fused (E6E7Ub and UbE6E7), against TC-1 tumor cells. The E6E7 vaccine conferred complete protection against tumor growth in previously immunized wild-type, CD4 knockout and TLR4 deficient mice challenged with TC-1 cells. However, immunization of previously challenged animals with TC-1 cells, Ubiquitin-fused antigens promoted tumor regression in 60% of mice against 0% in non-Ubiquitinfused antigens. Besides, the fusion of Ubiquitin at the N-terminus of the antigen (UbE6E7) seems to enhance polyubiquitination in vitro, this Ubiquitin fusion strategy promoted an effective immunotherapeutic response against the tumor, being promising for the development of therapeutic cervical cancer vaccines and also other types of tumor.

Splicing é o processo de remoção de introns e ligação de exons em eucariotos. É realizado pelo spliceossomo, um complexo macromolecular composto por RNAs e mais de cem proteínas. Alguns introns possuem microRNAs, os quais devem ser processados para gerar moléculas maduras. O cluster intrônico miR-17-92 é composto por sete miRNAs que têm sido associados ao desenvolvimento de diferentes tumores em vários tecidos. Neste trabalho o splicing de dois miRNAs deste cluster foi analisado em células HeLa, BCPAP e TPC-I. Os resultados mostraram que introns com miR19a tem o splicing mais eficiente do que aqueles com miR18a em todas as três células analisadas. Além disso, a composição dos spliceossomos foi analisada por espectrometria de massas. Entre as principais proteínas encontradas, destaca-se a presença das hnRNPs, como hnRNP_A1 e hnRNP_A2/B1. Estes resultados são importantes para entender como esses miRNAs são processados, e quais são os principais componentes recrutados em diferentes tipos celulares. / Pre-mRNA splicing is the process of intron removal and exon ligation in eukaryotes. It is performed by the spliceosome, a multi-megadalton machinery composed of RNAs and more than a hundred proteins. Intronic miRNAs must be processed from the host gene to generate mature molecules. miR-17-92 is an intronic cluster composed of seven miRNAs which have been associated to the development of different tumors, in several different cells. In this work, we analyzed the splicing of two miRNAs belonging to this cluster in HeLa, BCPAP and TPC-I cells. Interestingly, we observed miR19a is more efficiently spliced than miR18a in all three cells. We also searched for specific proteins that can be involved in their respective splicing process. We observed hnRNP proteins are especially concentrated in spliceosomes assembled in introns containing these miRNAs, based on mass spectrometry data. These results are important to understand how these miRNAs are spliced and matured and also can explain their different expression levels in different cells.

O carcinoma tiroidiano apresenta alterações na via MAPK, destacando-se o rearranjo RET/PTC. Alterações na expressão de microRNAs também são observadas. O aumento da expressão de miR-21 nos levou a analisar o papel deste na tumorigênese tiroidiana, bem como a influência da ativação oncogênica de RET/PTC3 durante este processo. A expressão de miR-21 foi analisada em 4 linhagens e a sua modulação foi realizada em células PCCL3 e KTC-2. RET/PTC3 foi ativado em células PTC3-5 e analisou-se a sua influência na expressão de miR-21 e na proliferação celular. Todas as linhagens expressam miR-21. A transfecção de anti-miR-21 em células KTC-2 inibiu em 80% a expressão deste miRNA, observando-se um aumento de SMAD7. A super-expressão de miR-21 em PCCL3 não alterou a proliferação. A indução de RET/PTC3 aumentou a expressão de miR-21 e diminui a proliferação, e quando ativado concomitante ao tratamento com TGFb-1, a diminuição na proliferação se acentuou, sugerindo que RET/PTC3 ative a via TGFb através da inibição de SMAD7 mediada por miR-21. / Alterations in MAPK signaling are common in thyroid cancer, including RET/PTC rearrangement. Additionally, several studies described the altered expression of microRNAs. The up-regulation of miR-21 on thyroid cancer led us to evaluate the role of this molecule on thyroid tumorigenesis, and also the influence of RET/PTC3 activation in this process. MiR-21 expression was analyzed in four thyroid cell lines, and the modulation of this miRNA was performed in KTC-2 and PCCL3 cells. PTC3-5 cells were used to analyze the influence of RET/PTC3 on miR-21 expression and cell proliferation. miR-21 expression was found in both cell lines. Anti-miR-21 transfection in KTC-2 cells decreased miR-21 levels in 80% and also increased SMAD7 expression. The up-regularion of RET/PTC3 increased miR-21 expression and decreased cell growth. The activation of RET/PTC3 combined to TGFb-1 treatment accentuated decrease in proliferation, suggesting that RET/PTC3 positively regulates TGFb pathway through miR-21-dependent SMAD7 inhibition.