Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-09T20:05:57Z No. of bitstreams: 1 2017_GiseledaConceiçãoSouza.pdf: 12465225 bytes, checksum: 6e3cc2edc8485dcda75a1900e8825c95 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-12T17:22:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_GiseledaConceiçãoSouza.pdf: 12465225 bytes, checksum: 6e3cc2edc8485dcda75a1900e8825c95 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T17:22:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_GiseledaConceiçãoSouza.pdf: 12465225 bytes, checksum: 6e3cc2edc8485dcda75a1900e8825c95 (MD5) Previous issue date: 2017-09-12 / Neolignanas são uma classe de produtos naturais com uma ampla gama de efeitos biológicos. Estas substâncias são de grande interesse sintético e biológico, especialmente na procura de novos agentes anticancerígenos. Neste estudo, é relatada a síntese de duas novas subclasses de análogos de 8,4'-oxineolignanas (análogos de 8,4'-oxineolignanas cinâmicas e análogos 1,2,3-triazolícos de 8,4'-oxineolignanas), assim como o seu ensaio de viabilidade celular contra vinte e quatro diferentes tipos de células câncer, dentre leucemias e carcinomas. Três compostos, prop-2-enoato de 2-oxo-2-feniletil (2E)-3-(4-(2-oxo-2-feniletóxi) fenila) (59a), acrilato de (E)-2-oxo-2-feniletil 3-(3-metóxi-4-(2-oxo-2-feniletóxi)fenila) (59b) e cinamato de 1-oxo-1- fenilpropan-2-ila (61c) inibiram o crescimento da maioria das células de câncer. O composto 59a mostrou uma atividade antiproliferativa superior à doxorrubicina contra as linhagens celulares de glioblastoma (U-87, U-138 MG) e carcinoma pulmonar (H-1299), enquanto o composto 59b foi bastante seletivo, demonstrando uma inibição de crescimento de 92,0% contra células de leucemia mielóide (KG-1). Além disso, o Composto 61c exibiu atividade de inibição significativa em uma faixa de 52,2% a 91,2% contra doze tipos de leucemia, revelando resultados excelentes e muito comparáveis à droga de referência. Estes resultados mostram a potencialidade desses novos análogos e a importância química e biológica dessa subclasse de compostos. / Neolignans are a class of natural products with a wide range of biological effects. These substances are of great synthetic and biological interest, especially in searching for novel anticancer agents. In this study, the synthesis of two new subclasses of 8,4’-oxyneolignan analogues is reported (8,4’-oxyneolignan cinnamic analogues and 8,4’-oxyneolignan 1,2,3- triazole analogues), as well as their cell viability assay on twenty four different cancer cells, among leukemias and carcinomas. Three compounds, 2-oxo-2-phenylethyl (2E)-3-(4-(2-oxo-2- phenylethoxy) phenyl)prop-2-enoate (59a), (E)-2-oxo-2-phenylethyl 3-(3-methoxy-4-(2-oxo-2- phenylethoxy)phenyl)acrylate (59b) and 1-oxo-1-phenylpropan-2-yl cinnamate (61c) inhibited the growth of most human cancer cells. Compound 59a showed an antiproliferative activity superior 2 to doxorubicin against human glioblastoma cells (U-87 MG, U-138 MG) and human non-small cell lung carcinoma (NCI-H1299) and compound 59b was found to be very selective, demonstrating a growth inhibition of 92.0% against human myeloid leukemia cells (KG-1). Furthermore, Compound 61c exhibited significant inhibition activity in a range of 52.2% to 91.2% against twelve kinds of leukemia cell lines, revealing excellent results and very comparable to the reference drug. These results show the potential of these new analogues and the chemical and biological importance of this subclass of compounds.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-01T14:41:43Z No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T12:10:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DeborahdaCostaLamar.pdf: 2872393 bytes, checksum: 9d419a56e6761d5e59959dc81459806d (MD5) / Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram positiva, produtora de cristais protéicos ou δ-endotoxinas (toxinas Cry e Cyt) durante a fase de esporulação. As toxinas. Cry apresentam atividade inseticida específica, e as toxinas Cyt apresentam atividade citolítica inespecífica. Algumas proteínas produzidas por B. thuringiensis durante a fase de esporulação que não apresentam caráter inseticida, mas apresentam-se tóxica para células tumorais foram descritas. Essas proteínas receberam o nome de Parasporinas (PS), devido à capacidade de produzir cristais paraesporais e até o momento são classificadas em seis tipos (PS1-PS6). Baculovírus são vírus de insetos usados no controle biológico de pragas da agricultura, porém também têm sido muito utilizados como vetores de expressão de proteínas heterólogas em células de inseto. No presente trabalho, o gene ps2 foi montado, por meio de PCR, através de fragmentos sintetizados a partir de uma sequência lotada no banco de dados, e o produto de PCR foi clonado em um vetor de transferência para construção de um baculovírus recombinante. Após obtenção do vírus recombinante, observou-se que células SF9 quando infectadas com vAcPS2, morriam em um tempo curto de infecção, quando comparado com células infectadas com o vírus selvagem. Após purificação, solubilização e ativação da toxina PS2 recombinante, ensaios de viabilidade celular foram feitos com linhagens de células tumorais, câncer mamário (MCF-7) e câncer mamário metastático (MDA-MB-231), células não tumorais humanas (fibroblastos) e células de inseto (Sf9), confirmando a atividade tóxica de PS2 apenas para as células tumorais. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacillus thunringiensis is a Gram positive bacterium that produces crystal forming proteins called δ-endotoxins (Cry and Cyt toxins), during sporulation phase. Cry toxins show specific insecticidal activity, and Cyt toxins shows non-specific cytolitic activity. Some proteins of B. thuringiensis produced during sporulation have not shown insecticidal activity, but a specific toxic activity to some cancer cells. These proteins were called Parasporins (PS) due to their ability to form paraporal crystals and they are divided in six groups (PS1-PS6). Baculoviruses are insect viruses that have been widely used as biological control of agricultural pests, but also as expression vectors of heterologous proteins in insect cells. In this work, the gene ps2, constructed by PCR, trough fragments synthetized using a gene sequence from a database and cloned in a transfer vector for recombinant virus construction After recombinant virus construction we observed that SF9 cells died faster than cells infected with the wild-type virus. After purification, solubilization and activation of the heterologous protein, cell viability assays was performed with cancer cell lines, breast cancer (MCF-7), metastatic brest cancer (MDA-MB-231), non-tumor human cells (fibroblasts) and insect cells (Sf9) confirming PS2 toxic activity only to cancer cells.

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-19T19:00:33Z No. of bitstreams: 1 2016_EltonBritoRibeiro.pdf: 5469605 bytes, checksum: 369a2574aa6611b0efaecfdcd0b17cfe (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-10-17T18:02:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_EltonBritoRibeiro.pdf: 5469605 bytes, checksum: 369a2574aa6611b0efaecfdcd0b17cfe (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-17T18:02:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_EltonBritoRibeiro.pdf: 5469605 bytes, checksum: 369a2574aa6611b0efaecfdcd0b17cfe (MD5) / O objetivo deste estudo foi desenvolver novas formulações contendo IFN-γ, visando sua utilização como agente imunomodulador. As formulações foram produzidas a partir de diferentes sistemas coloidais formados por nanoemulsões ou micelas nanoestruturadas. As nanoemulsões à base de água destilada, triglicerídeo de ácido cáprico/caprílico, oleoato de sorbitano (SP), polissorbato 80 (TW) e propilenoglicol (PG) ou 1-butanol (BT) foram preparadas por ultra-homogeneização. As dispersões, formadas pelo copolímero Pluronic F127 em solução tampão fosfato (pH 7.4), foram preparadas nas concentrações de 10 mg.mL-1, 50 mg.mL-1 e 250 mg.mL-1. As nanoemulsões e dispersões desenvolvidas foram caracterizadas para obter o tamanho hidrodinâmico, índice de polidispersão, carga superficial, estabilidade física preliminar e acelerada e propriedades reológicas. As nanoemulsões e dispersões estáveis foram selecionadas para incorporar nano doses de IFN-γ (100 ng.mL-1). A influência do IFN-γ incorporado nas formulações desenvolvidas na atividade funcional das células mononucleares para Escherichia coli enteropatogênica foi analisada por meio da liberação de ânion superóxido, fagocitose e atividade microbicida. Em adição, a influência das formulações sobre a atividade funcional das células mononucleares, das células de câncer de mama humano (MCF-7) e da co-cultura de ambas, foi estudada por meio do teste de permeabilidade celular ao iodeto de propídeo e da liberação de cálcio intracelular. As formulações otimizadas permaneceram estáveis em condições extremas durante 90 dias, com valores de pH biocompatíveis, sem alteração significativa dos perfis reológicos, diâmetro hidrodinâmico com dimensões nanométricas, potencial zeta negativo, e sem variações significativas da dose do IFN-γ (100 ng.mL-1). Os ensaios biológicos mostraram que as formulações desenvolvidas não alteram a taxa de viabilidade das células mononucleares e aumentaram a liberação de superóxido, o índice de fagocitose e a liberação de cálcio intracelular das células mononucleares do sangue humano, quando se comparou ao grupo espontâneo. Além disso, as nanoemulsões são capazes de promover a morte das células de câncer de mama humano MCF-7 ou em co-cultura. Os resultados indicam que as formulações produzidas podem melhorar a atividade biológica do IFN-γ. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to design and develop different formulations containing IFN-γ to probe their use as an immunomodulating agent. Produced formulations were based on two different nanoemulsion systems or nanostructured micelles. The nanoemulsions comprising distilled water, triglycerides of capric/caprylic acid, sobitan-oleate (SP), polysorbate 80 (TW) and propylene glycol (PG) or 1-butanol (BT) were prepared through ultra-homogenization. The pluronic 127 dispersions in phosphate buffer solution (pH 7.4) were prepared at concentrations of 10 mg.mL-1, 50 mg.mL-1 and 250 mg.mL-1. The developed nanoemulsions and dispersions were characterized regarding droplet size, polydispersity, surface charge, preliminary and accelerated physical stability, and rheological properties. Stable products were selected to incorporate nano doses of IFN-γ (100 ng.mL-1) and characterized under the same parameters. The influence of IFN-γ incorporated formulations on functional activity of mononuclear cell for Escherichia coli enteropathogenic was analyzed through superoxide release, phagocytosis and microbicidal activity. By means of cell permeability tests to propidium iodide and intracellular calcium release were employed to study the formulations influence on functional activity of mononuclear cell, human breast cancer (MCF-7) and co-culturing both. The optimized formulations remained stable in extreme conditions during 90 days, displaying biocompatible pH value, significant maintenance of its rheological profile, nanometric hydrodynamic diameter, negative zeta potential and no significant variations of IFN-γ dose (100 ng.mL-1). Additionaly, developed formulations did not alter the MN cell viability rates and increased the superoxide release, phagocytosis index and intracellular calcium release of mononuclear cells of human blood compared to the spontaneous group. Furthermore, the nanoemulsions were able to promote the death of MCF-7 human breast cancer or co-culturing. Our findings indicate that the produced formulations can improve the biological activity of IFN-γ.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Daniel Arcanjo Bueno Portela (dmbueno2@hotmail.com) on 2011-09-15T12:02:22Z No. of bitstreams: 1 2011_TelmaCarvalhoPereira.pdf: 2308189 bytes, checksum: 1cc961a904c5627a66beecbaae0e01ee (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-15T12:03:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_TelmaCarvalhoPereira.pdf: 2308189 bytes, checksum: 1cc961a904c5627a66beecbaae0e01ee (MD5) / Made available in DSpace on 2011-09-15T12:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_TelmaCarvalhoPereira.pdf: 2308189 bytes, checksum: 1cc961a904c5627a66beecbaae0e01ee (MD5) / Introdução: A diferenciação entre carcinoma primário e metastático e a determinação do sítio primário de uma metástase, de grande importância para o tratamento, frequentemente somente é possível somente com imuno-histoquímica. Recentemente surgiram marcadores específicos para um órgão ou alguns órgãos, por isso é necessária sua validação em amostra grande e diversificada. Objetivo: Elaborar um painel imuno-histoquímico de marcadores sítio-específicos para análise de carcinomas metastáticos. Método: Estudo de 904 carcinomas de diferentes órgãos e tipos histológicos, com microarray de tecido, utilizando 24 anticorpos: CDX-2, CK5/6, GCDFP-15, Hep-Par1, Mammaglobin, Napsin A, PAP, Pax-2, PSA, RCC, Receptor de estrogênio, Receptor de progesterona, Tiroglobulina, TTF-1, Uroplakin, Villin, WT-1, CK7, CK20, K903, p16, p63, AE1/AE3 e Cam5.2. Resultados: AE1/AE3 teve excelente positividade (83-100%) em quase todos os carcinomas. Cam5.2 teve boa positividade nos não-escamosos (80-100%). K903 foi positivo em 100% dos carcinomas escamosos. p63 foi positivo em 100% dos carcinomas escamosos, e 83% dos carcinomas uroteliais. Tireoglobulina foi positiva em 95% dos carcinomas de tireóide. PSA e PAP foram positivo respectivamente em 97% e 95% dos carcinomas de próstata. TTF-1 foi positivo em 93% de tireóide, e em 77% dos carcinoma pulmonares não-escamosos. Napsin A foi positivo em 26% dos carcinomas pulmonares escamosos, e 59% dos carcinomas pulmonares não-escamosos. CDX-2 e villin foram positivos respectivamente em 95% e 94% dos carcinomas cólon-retais, e 36% e 64% dos adenocarcinomas de estômago e 52% e 76% dos adenocarcinomas de esôfago e junção esôfago-gástrica. Para carcinoma renais, Pax-2 foi positivo em 65% e RCC em 56% dos tumores. Hep-Par1 foi positivo em 92% dos carcinomas hepatocelulares. Mammaglobin teve positividade de 61% nos carcinomas mamários. GCDFP-15 teve 67% de positividade em mama. A positividade para os receptores de estrogênio e progesterona foram, respectivamente, 89% e 63% para mama, 80% e 97% para endométrio, e 84% e 86% para ovário. WT1 foi positivo em 59% dos carcinomas de ovário. CK7 teve positividade variável em vários órgãos. CK20 foi positivo em 94% dos carcinomas cólon-retais, 49% dos uroteliais, 38% dos colangiocarcinomas, 21% dos adenocarcinomas de estômago, 21% dos adenocarcinomas de esôfago e junção esôfago-gástrica, 11% dos carcinomas de pâncreas, e 43% carcinomas mucinosos de ovário. p16 foi negativo em todos os carcinomas escamosos pulmonares e foi positivo em 24-45% dos outros tumores escamosos. Uroplakin III foi positivo em 87% dos carcinomas uroteliais. CK5/6 foi positivo em 60% dos carcinomas uroteliais, e em quase 100% dos carcinomas escamosos. Conclusões: Para carcinomas escamosos a maioria dos marcadores não contribui para determinar o sítio primário. Positividade para TTF-1 e/ou Napsin A favorece pulmão, enquanto para p16 favorece outros sítios (cabeça e pescoço, esôfago, anogenital). Para carcinoma não-escamosos metastáticos de sítio primário desconhecido o painel recomendado é: TTF-1, CDX-2, Villin, Pax-2, RCC, Uroplakin III, CK5/6, Hep-Par1, Tireoglobulina, CK7, CK20, além de PSA se paciente do sexo masculino e receptor de estrogênio, receptor de progesterona, WT-1, e GCDFP-15 se paciente do sexo feminino. Para tumores indiferenciados recomenda-se confirmar diferenciação epitelial com AE1/AE3 e Cam5.2; p63 para procurar diferenciação escamosa, e o painel de carcinomas não-escamosos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: The very important distinction between primary and metastatic carcinoma and the identification of the primary site of a metastasis are often not possible with histopathology alone, and immunohistochemistry is necessary. Recently, markers specific to an organ or a small number of organs have been described, but validation with a large and diverse sample is necessary. Objective: To develop an immunohistochemical panel of site-specific markers to the work-up of metastatic carcinomas. Method: We studied 904 carcinomas of different organs and histologic types, using tissue microarray, and 24 antibodies: CDX-2, CK5/6, Estrogen receptor, GCDFP-15, Hep-Par1, Mammaglobin, Napsin A, PAP, Pax-2, Progesterone receptor, PSA, RCC, Thyroglobulin, TTF-1, Uroplakin, Villin, WT-1, CK7, CK20, K903, p16, p63, AE1/AE3 and Cam5.2. Results: AE1/AE3 had excellent positivity (83-100%) in almost all carcinomas. Cam5.2 had good positivity in the non-squamous carcinomas (80-100%). K903 was positive in 100% of squamous carcinomas. p63 was positive in 100% of squamous carcinomas, and 83% of urothelial carcinomas. Thyroglobulin was positive in 95% of thyroid carcinomas. PSA and PAP were positive in 97% and 95% of prostate carcinomas, respectively. TTF-1 was positive in 93% of thyroid carcinomas, and 77% of pulmonary non-squamous carcinomas. Napsin A was positive in 26% of pulmonary squamous carcinomas, and 59% of pulmonary non-squamous carcinomas. CDX-2 and villin were positive respectively in 95% and 94% of colorectal carcinomas, in 36% and 64% of gastric adenocarcinomas, and in 52% and 76% of adenocarcinomas of esophagus and gastro-esophageal junction. In renal carcinomas, Pax-2 was positive in 65% and RCC in 56% of tumors. Hep-Par1 was positive in 92% of hepatocellular carcinomas. Mammaglobin had 61% positivity in breast carcinomas. GCDFP-15 had 67% positivity in breast carcinomas. The positivity of estrogen and progesterone receptors were, respectively, 89% and 63% in breast, 80% and 97% in endometrium, and 84% and 86% in ovary. WT1 was positive in 59% of ovary carcinomas. CK7 had variable positivity in several organs. CK20 was positive in 94% of colorectal carcinomas, 49% of urothelial carcinomas, 38% of cholangiocarcinomas, 21% of adenocarcinomas of esophagus, 21% of adenocarcinomas of stomach, 11% of pancreatic adenocarcinomas, and 43% of mucinous carcinomas of ovary. p16 was negative in all pulmonary squamous carcinomas and was positive in 24-45% of other squamous carcinomas. Uroplakin III was positive in 87% of urothelial carcinomas. CK5/6 was positive in 60% of urothelial carcinomas, and almost 100% of squamous carcinomas. Conclusions: Regarding squamous carcinomas the majority of markers was non-contributory to determine the primary site. Positivity to TTF-1 and/or Napsin A favors lung, while positivity to p16 favors other sites (head and neck, esophagus, anogenital). For metastatic non-squamous carcinomas of unknown primary site the recommended panel is: TTF-1, CDX-2, Villin, Pax-2, RCC, Uroplakin III, CK5/6, Hep-Par1, Thyroglobulin, CK7, CK20, and also PSA for males or estrogen receptor, progesterone receptor, WT-1, and GCDFP-15 for females. For undifferentiated tumors it is recommended to confirm epithelial differentiation with AE1/AE3 and Cam5.2; to look for squamous differentiation with p63, and use the above panel for non-squamous carcinoma.

Orientadores: Fernando Guimarães, Tereza Cristina Samico Cavalcanti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schanoski_AlessandraSoares_M.pdf: 641340 bytes, checksum: 21794b471bcf3fa9c3793f190f20cbc7 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Normalmente, para manutenção e crescimento de tumores, realizam-se passagens de células tumorais por diferentes meios. Esta prática, comum na oncologia experimental, por vezes resulta em mudanças de algumas propriedades biológicas destas células, podendo gerar novas variantes tumorais. Este fenômeno quando observado in vivo é, usualmente, atribuído à pressão seletiva do microambiente, com subseqüente propagação de um subclone de células tumorais. No presente trabalho foram realizadas passagens sucessivas da variante A (agressiva) do tumor de Walker 256 (W256) pela cavidade peritoneal de ratos, no sentido de se estudar o surgimento da variante regressiva AR. A expressão da molécula de MHC classe I pelas variantes A e AR foi determinada, visto que variações na expressão desta molécula podem explicar mudanças na imunogenicidade das células tumorais, que seriam um dos motivos do surgimento da variante regressiva AR. A variante tumoral AR foi identificada a cada passagem intraperitoneal (20x106 células tumorais/4-5 dias) por induzir o aumento da fragilidade osmótica de eritrócitos e esplenomegalia, enquanto a variante A foi identificada por induzir diminuição da FO de eritrócitos com hipertrofia moderada do baço. No decorrer de 25 passagens ip ocorreu a conversão da variante tumoral A em AR em todas as séries experimentais realizadas, sem que houvesse um número regular de passagens ip para este evento. Em uma das séries experimentais ocorreu regressão do tumor e subseqüentemente, o hospedeiro era capaz de rejeitar ambas as variantes tumorais, quando desafiado novamente. A intensidade relativa de fluorescência foi 1,6 vezes maior na variante AR (n=15, 14,1 ±1,32) do que na variante A (n=10, 9,0±1,22) indicando aumento no número de células MHC classe I positivas. Estes dados sugerem que o aparecimento da variante AR seria conseqüência de fatores presentes na cavidade peritoneal dos hospedeiros, que levariam ao aumento das células de W256 MHC classe I positivas, provavelmente devido à imunosseleção das células de W256 MHC classe I negativas / Abstract: Novel tumor cell variants can be obtained by serially passaging tumor cells in different media and/or environments. In vivo environmental selective pressures usually account for this phenomenon, leading to tumor cell changes and/or clonal expansions. Serial intraperitoneal (ip) passages of the Walker 256 (W256) tumor A variant was followed in rats for studying the generation of its immunogenic AR variant. The MHC class I molecule expression was assessed by flow cytometry, since variations in this molecule, would explain changes in tumor cell immunogenicity. The AR variant was identified in every ip passage (20x106 tumor cells every 4-5 days) by an increase in red blood cell (RBC) osmotic fragility (OF) with marked spleen hypertrophy, whereas the A variant was identified by a decrease in RBC OF with moderate spleen hypertrophy. Within 25 ip passages, all serial repetitions shifted from A to AR variant. The number of ip passages required for the shift was variable. Subsequently, tumor cells were rejected in one experimental repetition and immunity against the AR and A variants was conferred. The relative fluorescence intensity was 1,6 times higher in the AR variant (n=15, 14.21±1.32) than in the A variant (n=10, 9.10±1.22) showing an increase in the number of MHC class I positive cells.These data provide evidence that the generation of the AR variant could result from factors present in the ip environment leading to an increase in the number of W256 MHC class I positive tumor cells, probably due to immune cell selection of MHC class I negative tumor cells / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al Grado de Doctor en Química / Gracias al descubrimiento de las aplicaciones anticancerígenas del cisplatino, el interés por estos compuestos y sus propiedades ha aumentado, dando altas expectativas en la farmacéutica. En esta tesis se propuso que complejos de paladio, platino o rutenio poseen una acción doble, antineoplásica y tripanocida, a través de la presencia de dos ligandos bioactivos diferentes: 5 nitrofurano derivados de tiosemicarbazonas y PTA (1,3,5-triaza-7-fosfaadamantano). Para verificar esta posibilidad, se realizaron estudios fisicoquímicos y biológicos de los complejos, entregando alentadores resultados. En voltametría cíclica se observó una disminución en el potencial medio de la generación del radical nitro, lo que se traduce en una facilidad en generar dicho radical. En el estudio por espectroscopía de resonancia de espín electrónico, se caracterizó los complejos, siendo los de paladio y platino los de menor deslocalización, comparado con los de rutenio. Con respecto a los estudios biológicos, estos mostraron que ciertos complejos presentan un valor de IC50 inferior al del ligando libre contra tripomastigotes y células neoplásicas, sin afectar su selectividad. Por otra parte, también se realizaron estudios de inhibición de cruzipaína e inducción de apoptosis. Aunque la inhibición de cruzipaína no fue significativa, se observó una tendencia que correlaciona con los demás resultados. Además, los complejos estudiados mostraron resultados que sugieren una muerte celular por inducción de apoptosis, lo que los hace atractivos como potenciales antineoplásicos / Thanks to the studies of the anticancer applications of cisplatin, the interest in these compounds and their properties has increased significantly, delivering high expectations for pharmacopeia. In this thesis it is proposed that complexes of palladium, platinum and ruthenium have a double action, antineoplastic and trypanocidal, by the presence of two different bioactive ligands: 5 nitrofuryl, a thiosemicarbazone derivate and PTA (1,3,5-triaza-7-phosphaadamantane). To verify this possibility, physicochemical and biological studies were performed on the complexes, providing encouraging results. In cyclic voltammetry studies, the results showed a decrease in the half potential of the nitro radical generation, which in turns translates in an easy production of that radical. In the studies of palladium and platinum complexes the electron paramagnetic resonance spectroscopic studies showed that the radical was more localized that ruthenium. With regard to biological studies, they showed that certain complexes, presented an IC50 value lower than the free ligand against trypomastigotes and neoplastic cells, without affecting its selectivity. Although cruzipain inhibition was not significant, a trend was observed that correlates with the other results. Moreover, the results obtained for the complexes studied in this work suggest cellular death by apoptosis induction. This makes these compounds particularly attractive as potential antineoplastic agents / Conicyt; Mecesup

Orientador: Flávia Cristina Rodrigues-Lisoni / Banca: Ana Paula Girol / Banca: Cristiéle da Silva Ribeiro / Resumo: O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço com acometimento de sítios anatômicos do trato aerodigestivo superior representa o sexto tipo mais comum de câncer no mundo. Algumas plantas vêm sendo utilizadas no tratamento do câncer e uma delas tem despertado interesse científico, a Piper cubeba. Com relação à importância da atividade antitumoral das lignanas extraídas da Piper cubeba, incluindo seus elementos químicos, foi proposto o presente trabalho que teve como objetivo geral avaliar o potencial efeito citotóxico e genotóxico de lignanas nas células sobre a morfologia, proliferação e migração celular, citotoxicidade, genotoxicidade, apoptose e necrose celular, e expressão gênica, observando como o fitoterápico age e como essas alterações participam do processo tumorigênico. Para isso foram utilizadas duas linhagens de células tumorigênicas e uma de células normais, após o tratamento com as lignanas cubebina, dihidrocubebina, etilcubebina, extrato total, hinoquinina e metilcubebina, todas extraídas das sementes de Piper cubeba em três concentrações (10 µg/mL, 50 µg/mL e 100 µg/mL), por 4, 24, 48 e 72 horas. A observação da morfologia foi realizada em microscópio invertido, o índice de proliferação pela curva de crescimento, a viabilidade celular foi determinada pelo método colorimétrico, MTS (CC50), migração celular pelo método de transwell, genotoxicidade pelo ensaio cometa, avaliação da apoptose por citômetro de fluxo e expressão gênica pela técnica de PCR quantitativo... / Abstract: Head and neck Squamous cell carcinoma with involvement of anatomical sites of the upper aerodigestive tract represents the sixth most common type of cancer in the world. Some plants have been used in the treatment of cancer and one of them has aroused scientific interest, Piper cubeba. Regarding the importance of the antitumor activity of the lignans extracted from Piper cubeba, including its chemical elements, the present work was proposed whose general objective was to evaluate the potential cytotoxic and genotoxic effects of lignans in cells on cell morphology, proliferation and migration, cytotoxicity, genotoxicity, apoptosis and cell necrosis and gene expression, observing how the phytotherapic acts and how these alterations participate in the tumorigenic process. After the treatment with the lignans cubebin, dihydrocubebin, ethylcubebin, total extract, hinokinin and metilcubebin, all of them were extracted from Piper cubeba seeds at three concentrations (10, 50 and 100μg/ml) for 4, 24, 48 and 72 hours. The morphology was determined by inverted microscopy, proliferation index by growth curve, cell viability was determined by the colorimetric method, MTS (IC50), cell migration by transwell method, genotoxicity by comet assay, flow cytometric apoptosis evaluation and gene expression by quantitative PCR technique. Statistical analysis was performed by analysis of variance for multiple comparisons (ANOVA), followed by Bonferroni adjustment by GraphPad Prism 5.0 software ... / Mestre

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:26Z : No. of bitstreams: 1 000841338.pdf: 1301891 bytes, checksum: 81aff4aec334ee1a6c709fad576a9218 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Iniciação e Progressão das neoplasias prostáticas apresentam base hormonal, onde se destacam as alterações envolvendo estrógenos e andrógenos inerentes ao processo de envelhecimento, com incremento dos níveis estrogênicos em relação aos androgênicos. O Bisfenol A (BPA) é o xenoestrógeno mais estudado na atualidade e sua atividade estrogênica tem despertado interesse devido à ampla dispersão do composto no meio ambiente. Assim sendo, o BPA poderia contribuir para o aumento da incidência, agressividade e capacidade metastática dos tumores prostáticos. Por outro lado, a quimioproteção com os fitoquímicos dietéticos está associada à redução na incidência e na progressão de diferentes neoplasias, diminuição de processos inflamatórios e estresse oxidativo ocasionados por substâncias potencialmente nocivas. Desta forma, este estudo objetivou avaliar os efeitos dos fitoquímicos 3,3'-Di-indolil-metano (DIM) e Genisteína (Gen) isolados e/ou associados em células tumorais prostáticas humanas expostas ao BPA. Para tanto, as linhagens LNCaP e PC-3 foram cultivadas e submetidas, por 96h, aos tratamentos C (controle), B (BPA 10nM/L), BD (BPA 10nM/L + DIM 25μM/L), BG (BPA 10nM/L + Gen 25μM/L) e BDG (BPA 10nM/L + DIM 25μM/L + Gen 25μM/L); cujas doses foram estabelecidas pelo ensaio de viabilidade celular. Posteriormente, foi realizado Western Blotting para estudo das proteínas envolvidas com processos de sobrevivência, proliferação, morte celular, modulação hormonal e estresse oxidativo. A análise dos resultados mostrou que os tratamentos BD, BG e BDG, na linhagem LNCaP, apresentaram capacidade de sub-regular a expressão de AR. Acerca das proteínas ERK1/2 em PC-3, B provocou um aumento de expressão, enquanto BDG ocasionou uma diminuição. Já na linhagem LNCaP, a redução da expressão desta MAPK ficou por conta do tratamento BG. Para as proteínas JNK1/2, verificou-se a capacidade de B sub-regular a... / The prostate cancer initiation and progression present hormonal basis and this is mainly related to changes involving estrogens and androgens inherent aging process, where there is an increment of estrogens levels relative to androgens. Nowadays, Bisphenol A (BPA) is the most studied xenoestrogen and its estrogenic activity has attracted attention for its wide dispersion in the environment. Thus, this compound could contribute to the increased incidence, aggressiveness and metastatic ability of prostate tumors. Moreover, the chemoprotection with dietary phytochemicals is associated with a reduction in the incidence and progression of different cancers, decrease inflammatory processes and oxidative stress caused by potentially harmful substances. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of phytochemicals 3,3 '-Di-indolyl-methane (DIM) and Genistein (Gen) isolated and/or associated to prostatic tumor cells exposed to BPA. For this purpose, LNCaP and PC-3 cells were cultured and exposed, for 96 hours, to the treatments C (control), B (BPA10nM/L), BD (BPA 10nM/L + DIM 25μM/L), BG (BPA 10nM/L + Gen 25μM/L) e BDG (BPA 10nM/L + DIM 25μM/L + Gen 25μM/L); which doses were established by cell viability assay. Subsequently, the cells were subjected to protein extraction for Western Blotting in order to analyze proteins involved in survival, proliferation, cell death, hormonal modulation and oxidative stress processes. The results showed that BD, BG and BDG treatments, in LNCaP cells, were able to down-regulate AR expression. About the ERK1/2 proteins in PC-3 lineage, B caused an increase of expression, while BDG was responsible for a decrease. However, in LNCaP, reducing the expression of MAPK was due to BG treatment. For the JNK1/2 protein, B had ability to down-regulate its expression and, on the other hand, phytochemicals from 3 treatments (BD, BG and BDG), increasing its expression in LNCaP. For the same cell lineage, the ERα ... / FAPESP: 2013/05038-6

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-11-06T17:24:37Z No. of bitstreams: 1 2017_NataliaLemosChaves.pdf: 23423845 bytes, checksum: b3e5a1dad73107ecd8ace4dd296cccae (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-12-01T18:06:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_NataliaLemosChaves.pdf: 23423845 bytes, checksum: b3e5a1dad73107ecd8ace4dd296cccae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T18:06:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_NataliaLemosChaves.pdf: 23423845 bytes, checksum: b3e5a1dad73107ecd8ace4dd296cccae (MD5) Previous issue date: 2017-12-01 / Os nano carreadores têm o potencial de melhorar o índice terapêutico dos medicamentos atualmente disponíveis, aumentando a eficácia do fármaco, reduzindo sua toxicidade, e alcançando níveis terapêuticos por um período prolongado. A associação de citrato de ródio II (RC) com nanopartículas (NPs) magnéticas pode aumentar a especificidade da ação citotóxica, uma vez que estes complexos podem ser guiados ou transportados para um alvo através da utilização de um campo magnético externo. No entanto, a interação de nanopartículas de maghemita associada a citrato de ródio(MRC) com células, o mecanismo de captação celular, e a localização subcelular ainda não são compreendidos. Este trabalho avalia o mecanismo de captação de nanopartículas de maghemita associadas a citrato de Ródio (MRC) em linhagens de células de câncer de mama metastático e não metastático comparando-as com um modelo celular não tumoral. É possível supor que a captação de MRC NPs em células de câncer da mama é mais eficaz do que em células não tumorais, tanto na quantidade de material internalizado como na distribuição intracelular mais estratégica. Além disso, este processo ocorre através da via de endocitose dependente de clatrina com diferentes níveis de expressão basal desta proteína nas linhagens celulares testadas. MRC é um nano material promissor que pode fornecer uma rota conveniente para direcionamento de fármacos e tratamento do câncer de mama. Conjuntamente, nossos dados sugerem que as NPs MRC atuam no núcleo, inibindo a síntese de DNA e a proliferação celular e induzindo a morte celular. Os efeitos foram verificados em ambas linhagens tumorais (MCF-7 e MDAMB-231), mas as células metastáticas de câncer de mama, MDA-MB-231, parecem ser mais responsivas aos efeitos das NPs. / Nanocarriers have the potential to improve the therapeutic index of currently available drugs by increasing drug efficacy, lowering drug toxicity, and achieving steady state therapeutic levels of drugs over an extended period of time. The association of rhodium (II) citrate (RC) with magnetic nanoparticles (NPs) has the potential to increase specificity of the cytotoxic action, since these complexes can be guided or transported to a target by the use of an external magnetic field. However, these nanoparticles interaction with cells, their uptake mechanism, and subcellular localization are not understood. This work evaluates the uptake mechanism of Maghemite nanoparticleswith Rhodium citrated associated (MRC) nanoparticles in a metastatic and nonmetastatic breast cancer cell models comparing them to a non-tumor cell line. It is possible to assume that MRC NPs uptake in breast cancer cells is more effective than in normal cells both in amount of internalized material and in the achievement of a more strategic intracellular distribution. Moreover, this process occurs through clathrin-dependent endocytosis pathway with different basal expression levels of this protein in the tested cell lines. Taken together, our data suggest that MRC NPs act in cells nuclei, inhibiting DNA synthesis and cell proliferation inducing cell death. The effects were verified in both tumor cells but the metastatic line, MDA-MB-231, seemed to be more responsive to MRC NPs effects.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-07T15:22:29Z No. of bitstreams: 1 2016_JoseilmaLucianaNevesSiqueira.pdf: 1993383 bytes, checksum: d248e5f32657dc21ac1e7c6391b2837f (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-10T21:37:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JoseilmaLucianaNevesSiqueira.pdf: 1993383 bytes, checksum: d248e5f32657dc21ac1e7c6391b2837f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T21:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JoseilmaLucianaNevesSiqueira.pdf: 1993383 bytes, checksum: d248e5f32657dc21ac1e7c6391b2837f (MD5) / O citrato é um metabólito intermediário do ciclo de Krebs que possui função alostérica. Quando em altas concentrações, esta molécula modula a glicólise por meio da inibição da atividade da enzima fosfofrutoquinase no citoplasma. As células de câncer apresentam reprogramação do seu metabolismo energético, produzindo energia, preferencialmente, por via glicolítica. Esta estratégia pode ser consequência de privação de oxigênio no microambiente do tumor; da rápida obtenção de energia, quando comparada à fosforilação oxidativa; de disfunção mitocondrial; ou mesmo da manutenção da homeostase mitocondrial, preservando a organela de estresse oxidativo. Nesse sentido, o citrato pode ser explorado como potencial agente antitumoral, atuando em processos-chave do funcionamento das células neoplásicas. O objetivo deste trabalho foi investigar alterações estruturais e metabólicas induzidas por citrato em células da linhagem tumoral MCF-7 (adenocarcinoma mamário humano) e em células normais (cultura primária de fibroblastos derivados de polpa dentária humana). Ensaios de citotoxicidade por meio do método colorimétrico MTT demonstraram redução da viabilidade dos dois tipos celulares de maneira dependente do tempo e da concentração do tratamento. O citrato foi mais citotóxico em células MCF-7 do que em fibroblastos na concentração de 20 mM e nos tempos de 24 e 48 h. O teor de citrato nas células MCF-7 é elevado no grupo controle e o tratamento não reduziu a produção de lactato. Foi observado inibição da atividade da enzima fosfofrutoquinase das células MCF-7 tratadas com citrato. Análises morfométricas apontaram alterações ultraestruturais das mitocôndrias em fibroblastos, o que sugere adaptação ao estresse celular produzido pelo tratamento. Não foi observado alteração de potencial de membrana mitocondrial em ambas as células após tratamento. No entanto, MCF-7 apresentou formação de espécies reativas de oxigênio. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Citrate is an intermediate metabolite in the Krebs cycle that has allosteric function. When this molecule is present in high concentrations, it modulates the glycolysis through inhibition of the enzyme phosphofructokinase activity in the cytoplasm. Cancer cells exhibit metabolic reprogramming to the energy production preferably by glycolytic pathway. This strategy may result from oxygen deprivation in the tumor microenvironment; the rapid achievement of energy compared to oxidative phosphorylation; mitochondrial dysfunction; or even the maintenance of mitochondrial homeostasis, preserving organelle against oxidative stress. Therefore, the citrate can be explored as a potential antitumor agent, working in the key processes of cellular functions of the cancer cells. The objective of this study was to investigate structural and metabolic changes induced by citrate in tumor cell line MCF-7 (human breast adenocarcinoma) and normal cells (fibroblasts from human dental pulp). Cytotoxicity assays using the MTT colorimetric method performed in three independent experiments, demonstrated that citrate reduced the viability of both cell types in a manner dependent on the time and concentration of the treatment. Citrate was more cytotoxic in MCF-7 cells than in fibroblasts in a concentration of 20 mM at 24 and 48 h. The citrate content in MCF-7 cells is elevated in the control group and the treatment did not reduce the production of lactate. It was observed a reduction in the activity of the enzyme phosphofructokinase MCF-7 cells treated with citrate. Morphometric analysis showed ultrastructural changes of mitochondria in fibroblasts. These changes suggest adaptation to cellular stress produced by the treatment. There was no alteration in mitochondrial membrane potential in both cells after treatment. However, MCF-7 showed formation of reactive oxygen species.