Submitted by Nelci Antunes de Moura (nelcimoura@gmail.com) on 2016-05-20T00:29:22Z No. of bitstreams: 1 tese Nelci final.pdf: 3449766 bytes, checksum: 82850e9746cb84286bf3b3204344f1e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-23T19:39:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 moura_na_dr_bot.pdf: 3449766 bytes, checksum: 82850e9746cb84286bf3b3204344f1e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T19:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 moura_na_dr_bot.pdf: 3449766 bytes, checksum: 82850e9746cb84286bf3b3204344f1e9 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O ferro heme presente na carne vermelha está associado ao aumento da incidência do câncer colorretal (CCR). O heme pode catalisar a formação de compostos nitrosos e a peroxidação lipídica no lúmen intestinal. No entanto, os efeitos pró-carcinogênicos do heme podem ser inibidos por alguns compostos como os sais de cálcio, clorofila entre outros. Sabe-se que o indol-3-carbinol (I3C), presente nas plantas da família das Brassicas e os simbióticos são compostos promissores na prevenção do câncer de cólon, atuando em via de proliferação, apoptose e modulação da microbiota intestinal. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi o de avaliar os efeitos da ingestão de simbiótico (prebiótico inulina associado ao probiótico Bifidobacterium lactis bb-12) e de I3C, isolados ou em associação sobre o processo de carcinogênese de cólon induzido pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH) em ratos Wistar alimentados ou não com dieta suplementada com heme. Os animais foram alocados em 9 grupos, os grupos 1 a 8 (n=12) receberam quatro doses de DMH (40 mg/Kg) nas duas semanas iniciais do experimento. Os grupos 1 e 9 (n=12 e 5) receberam ração basal até o final do experimento e os grupos 2 a 8 receberam ração basal suplementada com heme, heme+I3C, heme+simbiótico, heme+I3C+simbiótico, I3C, simbiótico e I3C+simbiótico, respectivamente. A eutanásia ocorreu ao final da 25ª semana. Neste momento foi realizada a coleta do cólon com os respectivos tumores e amostras de fezes do ceco. Em seguida, procedeu-se a medida dos tumores e coleta de amostras para biologia molecular. Após a fixação em formalina tamponada e a retirada dos tumores, realizou-se a contagem de focos de criptas aberrantes (FCA) pela coloração de azul de metileno. Realizou-se a análise histológica dos tumores e a análise da expressão de 95 genes relacionados a via da carcinogênese colônica, pela técnica Taqman Low Density Array, e a expressão proteica da E-caderina, TGFB1 (Transforming growth factor beta 1) e RAF1 (Serine/threonine-protein kinase) por Western Blotting. Foram analisados os índices de proliferação celular e apoptose pelo PCNA (Proliferating cell nuclear antigen) e caspase 3-clivada, respectivamente, tanto nos cólons como em tumores, e a expressão de β-catenina e E-caderina nos tumores, por imunoistoquímica. Células da linhagem Caco-2 foram incubadas com água fecal extraída das fezes do ceco e submetidas a testes de citotoxicidade e genotoxidade pelos testes do MTT (mitochondrial tetrazolium test) e Cometa, respectivamente. Os dados foram comparados utilizando-se o software Sigma Stat 3.5 e Expression Suíte para expressão gênica. Foi observado aumento significativo no número de criptas aberrantes (CA) no grupo que recebeu heme (G2) quando comparado ao grupo que recebeu apenas ração basal (G1). Redução significativa no número de CA foi observada no grupo que recebeu heme+I3C (G3) e heme+simbiótico (G4) quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). O número de FCA totais com ≥ 9 criptas aberrantes foi significativamente menor no grupo que recebeu heme+simbiótico (G4) quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). Entretanto, aumento significativo no número de tumores com mais de 60 mm3 foi observado no grupo suplementado com heme+I3C+simbiótico (G5), quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). Além disso, foi observado aumento significativo na incidência de tumores invasivos no grupo que recebeu heme+I3C+simbiótico (G5) quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). Os tumores do grupo suplementado com heme+I3C+simbiótico (G5) apresentaram baixa expressão dos genes Cdh1, Tgfb1, Appl1 e alta expressão do Raf1, já os tumores do grupo suplementado com heme +I3C (G3) apresentaram baixa expressão do Cdh1. A água fecal do grupo que recebeu heme (G2) apresentou significativamente maior citotoxicidade e genotoxicidade quando comparado ao grupo que recebeu ração basal (G1). Com relação aos tratamentos, a água fecal do grupo que recebeu heme+I3C (G3) e heme e simbiótico (G4) apresentaram água fecal significativamente com menor potencial genotóxico quando comparada ao grupo que recebeu heme (G2). No entanto, o grupo que recebeu heme+I3C+simbiótico (G5) apresentou aumento significativo na genotoxicidade da água fecal. Dessa forma, concluímos que o heme associado a uma dieta com níveis normais de cálcio não é um potente indutor de FCA, mas aumenta a citotoxicidade e genotoxicidade da água fecal. No entanto, tanto o I3C como o simbiótico reduzem os efeitos citotóxicos/genotóxicos da ingestão de heme. Contudo, a associação do heme+I3C+simbiótico apresentou efeito promotor da carcinogênese de cólon. / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer worldwide. Hemin iron, which is found in red meat, catalyzes the formation of carcinogenic N-nitroso compounds and lipid peroxidation end-products in the colon lumen. The procarcinogenic effect of hemin is known to be inhibited by molecules, such as calcium, chlorophyll and others. However, the preventive effect of indole 3-carbinol and synbiotics on colon carcinogenesis remains uninvestigated. The aim of this study was to assess the modifying effects of a synbiotic (inulin+ Bifidobacterium lactis) and/or I3C against dimethylhidrazine (DMH)-induced colon carcinogenesis in hemin-fed male Wistar rats. Nine groups of animals were evaluated. Groups 1–8 received a total of four s.c. DMH injections (40 mg/kg b.w.) over 2 weeks, whereas group 9 was given EDTA solution (vehicle). Two weeks after DMH-initiation, G1 and G9 were fed a basal diet while groups G2, G3, G4, G5, G6, G7 and G8 received a basal diet containing hemin, hemin+I3C, hemin+synbiotic, hemin+I3C+synbiotic, I3C, synbiotic and I3C+synbiotic, respectively, during 23 weeks. At 25 week, all animals were killed and their colons were removed. Cecal contents were collected to determine fecal water cytotoxicity and genotoxicity (DNA damage) in Caco-2 cells. Colon tumors were measured and samples were collected and stored at -800C. The colons were fixed flat in 10% buffered formalin for 24 h and stained with 1.0% methylene blue for classical ACF analysis and quantification. Tumor incidence and multiplicity were assessed after histopathological analysis. Gene and protein expression were determined in tumor samples alone. The total number of aberrant crypts (AC) was significantly higher (p= 0.03) in the hemin group (G2) than in the group fed basal diet (G1). AC number in both hemin+I3C (G3) and hemin+synbiotic (G4) groups was also significantly lower than in the group fed hemin (G2). Tumor volume was higher in the hemin+I3C+ synbiotic (G5) group and invasive adenocarcinoma was more frequent in the hemin+I3C+synbiotic group (G5) than in the group fed hemin (G2). Colon tumor expression analysis showed that in comparison with the group fed hemin (G2), Cdh1, Tgfb1 and Appl1 were downregulated while Raf1 was upregulated in the group hemin+I3C+synbiotic (G5), and Cdh1 was down-regulated in the group hemin+I3C (G3). Fecal water cytotoxicity in the hemin group (G2) was higher than in groups fed basal diet (G1) and hemin+I3C (G3). Fecal water genotoxicity was also significantly higher in the group fed hemin alone (G2) than in the basal diet group (G1), as well as, in groups fed hemin+I3C (G3) and hemin+synbiotics (G4). However, when compared to hemin alone (G2), fecal water from group hemin+I3C+ synbiotics (G5) presented the highest DNA damage levels. Our results suggest that although hemin in a regular-calcium diet was not a powerful ACF promoter, it increased fecal water citotoxicity and genotoxicity. On the other hand, hemin associated with either I3C or synbiotics prevented ACF promotion. Nonetheless, a synergistic interaction among hemin, I3C and synbiotic did promote DMH-induced tumorigenesis. / FAPESP: 2011/23699-4

Orientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ana Elizabeth Silva / Banca: Ana Paula Girol / Banca: Leonardo Augusto Moraes / Banca: Marcia Pereira de Oliveira Duarte / Resumo: O câncer colorretal (CCR) é o terceiro mais comum no mundo e a quarta causa de morte por câncer no ocidente. A origem e desenvolvimento dessa patologia têm sido amplamente associados com alterações no estado inflamatório do intestino. A Anexina A1 (AnxA1) é uma proteína anti-inflamatória envolvida na manutenção da homeostase intestinal e na regulação do desenvolvimento tumoral. Os mastócitos (MCs), que também expressam AnxA1, são amplamente envolvidos nos danos associados no trato gastrointestinal promovido por agentes carcinógenos. No presente estudo foi avaliado o papel da AnxA1 na resposta funcional de MCs na carcinogênese colorretal induzida por N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG). Para esse objetivo, animais deficientes de AnxA1 (AnxA1-/-) receberam instilações de MNNG e o efeito agudo do composto foi avaliado após 8, 24 e 48h. Nossos resultados mostram que o MNNG induz, no epitélio do cólon, aumento da expressão da AnxA1, que limita a lesão tecidual e inflamação local, regulando a produção exacerbada de IL-1, IL-6, IL-12, TNF- α, INF- γ na condição controle e, principalmente, após 24h da exposição. A AnxA1 também reduz a migração e desgranulação de MCs, polarizando a diferenciação dessas células para maior expressão de quimase após o dano carcinogênico. Em seguida, a contribuição dos MCs à tumorigênese induzida pelo MNNG foi avaliada 24 semanas após a exposição crônica dos camundongos deficientes de mastócitos (Kit-/-) ao composto. Nessas condições foi observado... / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer in the world, the forth cancer-related death cause in the Western counties, and its origin and development has been wildly related to alterations in bowel inflammatory state. Annexin A1 (AnxA1) is a protein involved in the maintenance of intestinal homeostasis and the regulation of tumoral development through the inhibition of inflammatory pathways. Mast cells (MCs), which also expressed AnxA1, were extensively involved in carcinogens-associated damage in gastrointestinal tract. The present study was conducted to evaluate the role of AnxA1 in the functional response of MCs in colorectal carcinogenesis induced by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG). Thus, we measured MCs recruitment, activation, proteases (tryptase and chymase) expression and the levels of cytokines (IFN-γ, IL-1, IL-4, IL-6, IL12 and TNF-α) in the colon of AnxA1-deficient mice (AnxA1-/-) during the acute response to MNNG. Mast cells-deficient mice (Kit-/-) were also exposed to MNNG carcinogenic activity in order to check, after 24 weeks, the contribution of MCs in tumor growth. Our results showed that MNNG damage increased the expression of AnxA1 which promoted tissue protection and regulated the migration and activation of MCs. The carcinogen induced local immune deregulation with increased levels of pro inflammatory cytokines found in AnxA1-/-. Chymase positive MCs were found at higher number in acute exposure to MNNG and also in the established ... / Doutor

Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Coorientador: Beatriz Stringhetti Ferreira Cury / Banca: Leila Aparecida Chiavacci Favorin / Banca: Ruy Carlos Ruver Beck / Resumo: A nanotecnologia farmacêutica é uma relevante ferramenta tecnológica para o desenvolvimento de novos sistemas para a veiculação de fármacos, pois devido às suas dimensões reduzidas são capazes de circular por capilares que irrigam os tecidos, escapar da fagocitose por células do sistema imunológico e permear passivamente células e epitélios. Além disso, esses sistemas possibilitam a encapsulação de fármacos de baixa estabilidade, protegendo-os contra degradação prematura e/ou permitindo a modulação de suas propriedades físico-químicas, bem como a interação biológica na biointerface. O metotrexato (MTX) é um dos fármacos mais utilizados no tratamento de tumores sólidos e doenças inflamatórias intestinais, no entanto, por ser altamente citotóxico e não seletivo promove diversos efeitos colaterais. Sua eficácia terapêutica é comprometida devido à resistência adquirida pelas células tumorais e por sua baixa permeabilidade intestinal, principalmente por meio do mecanismo de efluxo da forma livre. Nesse trabalho, nanopartículas poliméricas (NPs) orais compostas por quitosana (QS), ácido hialurônico (AH) e ftalato de hidroxipropilmetilcelulose (HP), polímeros que possuem propriedades como solubilidade pH dependente, mucoadesividade e de funcionalização, foram desenvolvidas como plataforma tecnológica para a vetorização do MTX para o cólon, visando o tratamento local de patologias intestinais. As análises de peso molecular e coeficiente viral demostraram a adequação dos polímeros e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The pharmaceutical nanotechnology is a relevant technological tool for the development of new drug delivery systems, because of their small size they are able to circulate through capillaries that irrigate tissues, escape from phagocytosis by the immune system cells and passively permeate cells and epithelia. In addition, these systems enable the encapsulation of low stability drugs, protecting them against premature degradation and/or allowing the modulation of their physico-chemical properties, as well as the biological interaction in the biointerface. Methotrexate (MTX) is one of the most used drug in the treatment of solid tumors and inflammatory bowel diseases, however, because MTX highly cytotoxic and nonselectivity promotes several side effects. Its therapeutic efficacy is compromised due to the resistance acquired by tumor cells and it low intestinal permeability, mainly through the efflux mechanism of the free form. In this work, oral nanoparticles composed of chitosan (CS), hyaluronic acid (HA) and hydroxypropylmethylcellulose (HP) phthalate, polymers that have properties such as pH-dependent solubility, mucoadhesiveness and functionalization have been developed as a technological platform for the target of MTX to the colon, aiming the treatment of local pathologies. Molecular weight and second viral coefficient analyzes demonstrated the suitability of polymers and solvents to obtain nanostructures by the polyelectrolyte complexation method. The evaluation of the pH... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

The survey and subsequent knowledge of the records of patients who underwent surgical treatment due to the colon and rectum tumor are fundamental to the knowledge of the epidemiological profile of this prevalent malignancy today. Thus, knowledge of such data are relevant for developing strategies for prevention and treatment of this disease in the population. Thus, the objective of the study was to evaluate the data of patients undergoing colectomy and rectosigmoidectomy by colorectal tumor at the University Hospital of Santa Maria (HUSM) in the period 2010 to 2014. This is a cross-sectional, descriptive study with data obtained from medical records on the demographic profile, length of stay, number and type of surgical procedure, stage, location and histological-pathological type of colon tumor among others. During the study period were performed 224 surgeries colectomy and rectosigmoidectomy in patients with colorectal cancer in HUSM. Most (52.7%) patients were female. The merits, 30.8% were from Santa Maria, 11.2% of São Sepe and 58.0% from another location of the Rio Grande do Sul state. The average age of patients was 63.2 years, and 97.7% were between 40 and 89 years and the most frequent age group 60-69 years (28.1%). Regarding the onset of symptoms time, time of diagnosis to surgical treatment, hospital stay and time to diagnosis of treatment related to staging there was no improvement in service levels over the years analyzed. Furthermore, in relation to Dukes classification there was no difference in clinical evolution during the study period. This study reveals the need for reevaluation of continuously service, so that we can develop alternatives in order to optimize the service to patient with the colon and rectum cancer, and mainly seek strategies for early diagnosis. / O levantamento e conhecimento dos registros dos pacientes submetidos ao tratamento cirúrgico para tumor maligno de cólon e reto são fundamentais para determinar o perfil epidemiológico dessa neoplasia maligna tão prevalente nos dias atuais. Conhecer esses dados é relevante para a estruturação de estratégias de prevenção e tratamento desta moléstia na população. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar as informações sobre os pacientes submetidos a colectomia e retossigmoidectomia por câncer colorretal no Hospital Universitário de Santa Maria (HUSM) no período de 2010 a 2014. Trata-se de um estudo transversal, descritivo com dados obtidos de prontuários sobre o perfil demográfico, tempo de internação, quantidade e tipo de procedimento cirúrgico, estadiamento, localização e tipo histológico-patológico do tumor de cólon e reto entre outros. Foram realizadas 224 cirurgias de colectomia e retossigmoidectomia em pacientes portadores de neoplasia colorretal. A maioria (52,7%) dos pacientes era do sexo feminino. Quanto à procedência, 30,8% eram de Santa Maria, 11,2% do município de São Sepé e 58,0% de outra localidade do estado do Rio Grande do Sul. A média de idade dos pacientes foi de 63,2 anos, sendo que 97,7% tinham entre 40 e 89 anos, e a faixa etária mais frequente a de 60 a 69 anos (28,1%). Com relação ao tempo do inicio dos sintomas, tempo do diagnóstico ao tratamento cirúrgico, tempo de internação hospitalar e tempo do diagnóstico ao tratamento relacionado ao estadiamento não houve melhora nos índices do Serviço no decorrer dos anos analisados, pelo contrário, o tempo do diagnóstico até a cirurgia e o tempo de internação antes da cirurgia aumentaram, significativamente, de 2010 para 2012. Em relação a classificação de Dukes não houve diferença na evolução clínica no período estudado. Os resultados obtidos nesse estudo revelam a necessidade de reavaliação do Serviço de forma continuada, afim de que se possam desenvolver alternativas no sentido de melhorar o atendimento ao paciente portador de neoplasia do cólon e reto, além de, principalmente, buscar estratégias para o diagnóstico precoce.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:25Z : No. of bitstreams: 1 000829940.pdf: 916653 bytes, checksum: 09926f007a66538b3dedd4cb298c6c6a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / We have recently observed that treatment of colon tumor cells with low concentration of paclitaxel increased the expression of several genes associated with antigen-presenting machinery. Since 5-fluoruracil (5-FU) is the main antineoplastic agent for colon cancer, in this study we aimed to evaluate immunomodulatory properties analyzing: a) if the DC transfection with drug-treated tumor cells RNA, enhances the effectiveness of DC-based vaccine; b) if the modulatory effects of vaccine can be observed in vivo, and c) if the combination of DC with low dose chemotherapy schedule improves the antitumor responsiveness. To achieve these goals s.c. MC-38 bearing C57/Bl-6 mice were treated with DC sensitized with RNA from tumor cells pre-treated with the minimum effective concentration (MEC) of 5-fluorouracil. Our results of studies show that vaccination with tumor RNA-transfected DC delays the tumor growth, increases the percentage of CD86+ (35%) CD40+ (63%) and MHC class II+ (47%) DC and significantly increases the in vitro production of IFN-ɣ. These results suggest that treatment of tumor cells with 5-FU induces transcriptional changes that can be transfered to DC by RNA transfection, enhancing their ability to stimulate the antitumor response / CNPq: 555857/2010-07 / FAPESP: 2009/18331-8

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-03. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000873411.pdf: 2339919 bytes, checksum: 7129156182cf0eb33c4a8fd25783f307 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O metotrexato (MTX) é um fármaco com solubilidade pH dependente, utilizado no tratamento de doenças do trato gastrointestinal, como a doença de Crohn, retocolite ulcerativa e carcinomas colorretal. O desenvolvimento de micro/nanossuspensões podem ser uma estratégia promissora para incorporação de fármacos que possuem solubilidade pH dependente, oferecendo vantagens como a redução do tamanho da partícula do fármaco que pode levar ao aumento da taxa de dissolução e da permeabilidade. Adicionalmente, polímeros estímulo-responsivos podem sofrer transição de fase sol-gel in situ, promovendo a mucoadesão e uma maior retenção do sistema no local de ação. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver micro/nanossuspensões contendo polímeros mucoadesivos para liberação cólon-específica do MTX. As partículas foram obtidas pelo método Bottom-up, utilizando reações de ácido-base e estabilizadas com hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) e poloxâmero 407 (P407), através de agitação em Ultra-turrax ou Sonicador. Foram incorporados polímeros derivados do ácido poliacrílico como, Carbopol® ETD 2020 e Ultrez 10NF, poloxâmero 407 e goma gelana, pois estes polímeros atuam por diferentes mecanismos na mucoadesão como pH, temperatura e concentração iônica. A caracterização fíquico-química das micro/nanossuspensões foi realizada por espalhamento de luz, medida do potencial zeta, microscopia eletrônica de varredura (MEV), análise de textura (TPA) e ensaios de mucoadesão ex vivo. No método Bottom-up foram otimizadas condições para alcançar a solubilização e principalmente a precipitação do fármaco. Essa variação nas condições de precipitação, demonstrou que o aumento da proporção de ácido, permite modular o tamanho da partícula para a escala micro/nanométrica, na ausência... / The methotrexate (MTX) is pH-dependent solubility drug used in the treatment of gastrintestinal diseases, such as Crohn's disease, ulcerative colitis and colorectal carcinomas. The micro/nanosuspensions development is a promising strategy to incorporate this type of drug, since it offers important advantages, such as particle size reducing of drug, which may lead to the increase of the dissolution and permeability rates of the drug. Additionaly, responsive-polymers can undergo in situ sol-gel phase transition, promoting mucoadhesion process followed by a greater retention of system in the action site. In this sense, the aim of this work was to develop micro and nanosuspensions associated to mucoadhesive polymers for colon specific release of MTX. The particles were obtained from Bottom-up method by acid-base reactions, employing the Ultra- Turrax or Sonicator and hydroxypropylmethylcellulose (HPMC) and poloxamer 407 (P407) as stabilizing. Polyacrylic acid (PAA), poloxamer 407 and gellan gum, which have different mucoadhesion mechanisms (pH, temperature and ionic concentration) were incorporated. The physic-chemical characterization of micro/nanosuspensions was realized by light scattering, measurement of zeta potential, scanning electron microscopy (SEM), texture profile analysis (TPA) and ex vivo mucoadhesion test. In the bottom-up method, the conditions were optimized to reach the solubilization and, mainly, the precipitation of drug. This variation in precipitation conditions showed that increasing the acid proportion is possible to modulate the particle size to the micro/nano-range, in the absence of stabilizer. The nanosuspensions exhibited pH above 5.0, while the microsuspensions below 4.0. For microsuspensions, analysis of the results showed that depending on the stirring process and type of stabilizer used it was possible ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-20Bitstream added on 2014-06-13T20:30:37Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_lg_me_jabo.pdf: 1248709 bytes, checksum: abf07304609e643fddd58d8b10e9193e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Avaliou-se por meio de análises clínico-laboratoriais e morfológicas, a evolução cicatricial de dois segmentos distintos do cólon descendente. Os equinos foram alocados em um único grupo e submetidos a três fases experimentais: obstrução experimental (F I), seguida de 13 dias pós-operatórios; anastomose término-terminal (F II) e videolaparoscopia (F III), ambas seguidas, cada uma, de seis dias pós-operatórios. O segmento distendido (SD) foi submetido a 240 minutos de distensão intraluminal, com pressão de 40 mmHg. O segmento controle (SC) não sofreu distensão. Colheram-se amostras do cólon descendente antes da obstrução (M0), após a desobstrução (M1) e durante a anastomose (M2). Realizou-se exame clínico antes de cada cirurgia (M0a, M0b e M0) e nos dias pós-operatórios (M12a-M312a, M24b-M120b e M24-M120). A colheita de sangue foi realizada antes de cada cirurgia (M0a, M0b e M0), durante a obstrução (M2a-M4a) e nos respectivos momentos pós-operatórios (M6a-M240a, M24b- M120b e M24-M120). Dois animais foram a óbito, sendo um durante F I e outro na F II. Verificou-se que a as alterações morfológicas e morfométricas intestinais foram mais evidentes na camada serosa no M2, no SD e SC, com muita semelhança entre os dois segmentos. Não houve diferença (p>0,5) na quantidade de colágeno determinada histologicamente e dosagem espectrofotométrica de hidroxiprolina. Durante a F II e F III, três e dois equinos, respectivamente, apresentaram aderências intestinais. Foram observadas diferenças (p>0,5) nos parâmetros clínicos e hematológicos apenas durante F I e F II. Concluiu-se que os equinos submetidos à obstrução experimental apresentaram pior prognóstico em relação à enteroanastomose... / The healing progression of two distinct segments of equine descending colon was evaluated by clinical, laboratorial and morphological analysis. Horses were allocated in only one group and submitted to three following experimental stages: experimental obstruction (F I) followed by thirteen days of postoperative care; end-toend anastomosis (F II) and the videolaparoscopy (F III), both last stages followed by six days of postoperative care. The distended segment (DS) underwent 40 mmHg intraluminal distension pressure for 240 minutes long. The control segment (CS) didn’t suffer any distension. Samples of the tissue of the descending colon was obtained before the obstruction (M0), after the desobstruction (M1) and during the anastomosis (M2). Clinical exam was done before each surgery (M0a, M0b and M0) and during the postoperative care days (M12a-M312a, M24b-M120b e M24-M120). Two animals died, one during F I and the other during F II. The intestinal morphological and morphometric changes were observed markedly on the serous layer on the M2 stage, on the DS and the CS, and it had similarity among the two segments. There was no difference (p>0,5) in the amount of collagen determined by histology and hydroxyproline spectrophotometric analysis. During F II and F III, three and two horses respectively, presented intestinal adhesions. Differences (p<0,5) in some of the clinical and hematological parameters were only observed during F I and F II. In conclusion, the horses that underwent experimental obstruction presented poor prognosis compared to the enteroanastomosis. The serialized clinical exams and the laboratory analyses provided good monitoring of the physiological immune responses during and after the intestinal obstruction or the anastomosis

Orientador: Ramon Kaneno / Banca: Denise Fecchio / Banca: Priscila R. Martins / Banca: Orlando Ribeiro Filho / Resumo: Não disponível / Abstract: We have recently observed that treatment of colon tumor cells with low concentration of paclitaxel increased the expression of several genes associated with antigen-presenting machinery. Since 5-fluoruracil (5-FU) is the main antineoplastic agent for colon cancer, in this study we aimed to evaluate immunomodulatory properties analyzing: a) if the DC transfection with drug-treated tumor cells RNA, enhances the effectiveness of DC-based vaccine; b) if the modulatory effects of vaccine can be observed in vivo, and c) if the combination of DC with low dose chemotherapy schedule improves the antitumor responsiveness. To achieve these goals s.c. MC-38 bearing C57/Bl-6 mice were treated with DC sensitized with RNA from tumor cells pre-treated with the minimum effective concentration (MEC) of 5-fluorouracil. Our results of studies show that vaccination with tumor RNA-transfected DC delays the tumor growth, increases the percentage of CD86+ (35%) CD40+ (63%) and MHC class II+ (47%) DC and significantly increases the in vitro production of IFN-ɣ. These results suggest that treatment of tumor cells with 5-FU induces transcriptional changes that can be transfered to DC by RNA transfection, enhancing their ability to stimulate the antitumor response / Doutor

Orientador: Ramon Kaneno / Banca: Elaine Guadelupe Rodrigues / Banca: Daniela B. Kaneno / Resumo: O interferon alfa (IFN-α), um IFN do tipo I, se apresenta como uma citocina com grande potencial terapêutico, pois atua no combate direto às células tumorais, além de agir sobre a maturação de células dendríticas (DCs), que são células apresentadoras de antígenos profissionais e peças chave na elaboração da uma resposta antitumoral. Entretanto, a administração sistêmica de citocinas pode produzir toxicidade importante nos pacientes, de modo que a indução de sua produção in situ poderia representar uma forma de imunomodulação mais adequada. Assim, o objetivo deste estudo é verificar a ação de vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α para transdução de células tumorais, permitindo assim a produção localizada de IFN-α, a fim de explorar, in vitro, seu potencial lítico e imunomodulatório sobre DCs. Vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α humano (Lego-IFN) ou GFP (Lego-GFP) foram utilizados para a transdução in vitro de células de câncer colorretal. A transdução foi feita com diferentes multiplicidades de infecção (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0, 4.0) para avaliarmos o efeito dose-dependente, seguido de co-cultura com DCs derivadas de monócitos de doadores saudáveis (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0, DC-4.0). Após 48h de co-cultura, as DCs foram avaliadas fenotípica e funcionalmente, através da análise dos marcadores de membrana por citometria de fluxo, capacidade de aloestimulação e de indução de linfócitos T citotóxicos (CTLs). Nós observamos que a transdução com Lego-GFP, mas não com Lego-IFN, aumentou a imunogenicidade das células tumorais, com aumento de expressão de CD54 e HLA-DR. A co-cultura de DCs com células tumorais transduzidas com Lego-IFN aumentou discretamente seu perfil de ativação, mas não seu potencial aloestimulatório in vitro. Observamos que linfócitos cultivados com DC-2.0 produziram níveis mais altos de IFN-γ, sugerindo a indução de um perfil Th1, enquanto que... / Abstract: Interferon alpha (IFN-α) is a type I IFN with great therapeutic potential, since it is able to directly fight tumor cells and enhance the maturation of dendritic cells (DCs), the main antigen-presenting cells, required for an effective antitumor response. However, the systemic administration of cytokines can induce severe collateral effects. Therefore, the induction of cytokine secretion in situ should represent a more adequate approach for cytokine-based immunotherapy. Thus, the goal of this study was to induce IFN-α secretion by colon cancer cells by transduction with a lentivirus vector carrying the human IFN-α gene, followed by analysis of its immunomodulatory potential over DCs. Transduction was made with different multiplicities of infection (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0 and 4.0) to evaluate the dose-dependent effects. Such cells were co-cultured with monocyte-derived DCs from healthy donors (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0 and DC-4.0). Forty-eight hours later, DCs were evaluated for their phenotype (surface activation/maturation markers) by flow cytometry, their ability to induce allogeneic response in a mixed leukocyte reaction (MLR) and effectiveness to induce cytotoxic T cells. We observed that transduction with Lego-GFP, but not Lego-IFN, increased tumor cells' immunogenicity with up-regulation of the markers CD54 and HLA-DR. Co-culture of Lego-IFN-transduced tumor cells with DCs slightly enhanced their activation phenotype but not their potential to stimulate T cell proliferation in vitro. Furthermore, we observed that lymphocytes cultured with DC-2.0 produced higher levels of IFN-γ, suggesting an induction of Th1 profile on T cells, while DC-GFP induced more IL-10 and IL-4. Additionally, DC-4.0 was more efficient in generating cytotoxic T lymphocytes (CTLs) that the control DC, however DC-GFP induced even more CD8+T cell proliferation. The enhancement of tumor cell immunogenicity and the superior induction of CLTs ... / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marchesan Rodrigues / Coorientador: Luís Fernando Barbisan / Banca: Carla Adriene da Silva Franchi / Banca: Fernando Silva Ramalho / Banca: Juliana Elaine Perobelli / Banca: Luis Antonio Justilin Junior / Resumo: Investigamos as repercussões do padrão alimentar ocidental, rico em gordura, (óleo de milho) (20%) e pobre em micronutrientes [ácido fólico (1 mg/g), colina (0,12%) e fibra (2%)], ocorrido durante a gestação, lactação e puberdade na susceptibilidade ao desenvolvimento de câncer do cólon induzido pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH) no rato. Avaliamos se a reintrodução da dieta Ocidental durante a vida adulta em animais previamente expostos à dieta Ocidental durante a vida intrauterina, lactação e puberdade, pode modificar a susceptibilidade à oncogênese do cólon pela DMH. Ratas fêmeas SD prenhes receberam dieta semi-purificada controle (AIN-93) ou do tipo Ocidental (WD - Western Style Diet) a partir do dia gestacional 12 (DG 12). Após o desmame (dia 21), a prole de machos permaneceu com o mesmo tipo de dieta de suas mães até o dia pós-natal 50 (DPN 50). Nesse momento, receberam quatro injeções subcutâneas de DMH (40mg/kg) e foram divididos nos seguintes grupos/dietas: Grupo I (AIN-93/DMH/AIN-93) recebeu dieta controle durante todo o experimento (DG 12- DPN 370), o Grupo II (AIN-93/DMH/Ocidental) recebeu dieta Ocidental somente na vida adulta, a partir do DPN 260, Grupo III (Ocidental/DMH/AIN-93) recebeu dieta Ocidental desde a vida intrauterina até o início da puberdade (DG 12 - DPN 50), e o Grupo IV (Ocidental/DMH/Ocidental) recebeu dieta Ocidental desde a vida intrauterina até o início da puberdade (DG 12 - DPN 50), e foi reintroduzido à dieta Ocidental na vida adulta (DPN 260). Todos os animais foram eutanasiados ao final da 50ª semana de experimento (DPN 370). O cólon foi removido e submetido à análise estereoscópica e histológica para determinar o número, distribuição e multiplicidade dos focos de criptas aberrantes (FCAs). As características das lesões neoplásicas e os níveis séricos de insulina e leptina foram analisados à necropsia. A exposição à dieta Ocidental durante a gestação,... / Abstract: We examined the effects of a Western Style Diet (WD), high in fat (corn oil) (20%) and low in micronutrients [i.e.; folic acid (1 mg/g), choline (0.12%) and fiber (2%)] during pregnancy, lactation and in prepubertal stage to examine the susceptibility to colon carcinogenesis induced by dimethylhydrazine (DMH) in male Sprague-Dawley (SD) rats as later adults. We also evaluated whether WD reintroduction during adulthood can modify susceptibility to colon carcinogenesis. Pregnant SD rats received one of two diets AIN-93G or WD at gestational day 12 (GD 12). F1 male pups were weaned (21d) and fed the same AIN- 93G or WD diets from their dams until postnatal day 50 (PND 50). At this point, they were given four subcutaneous injections of carcinogen DMH (40 mg/body weight) and were shared the following diets/group: group I (AIN-93/DMH/AIN-93) a lifetime control diet-fed group (GD 12 until postnatal day - PND 370), group II (AIN-93/DMH/WD) received WD only in adulthood (at PND 260), group III (WD/DMH/AIN-93) received WD during pregnancy from dams until prepubertal stage (GD 12 - PND 50) and group IV (WD/DMH/WD), received WD since pregnancy from dams (GD 12) until prepubertal stage (PND 50) and was reintroduced to WD during adulthood (PND 260). All groups were euthanized at the end of 50th week (PND 370). The colon was removed and the aberrant crypt foci (ACF) were stereoscopically and histologically scored for number, distribution and multiplicity. Neoplastic lesions and serum insulin and leptin concentrations were analysed at necropsy. ACF multiplicity and dysplastic lesions were significantly higher in the group fed WD during pregnancy until prepubertal stage (group III) than control group (group I). In the group III, the number of adenocarcinomas were higher than control (group I). In the group fed WD only in adulthood (group II), ACF multiplicity was significantly higher than in the control (group I). The group ... / Doutor