Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-12-09T19:09:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T20:32:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T20:33:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-19T20:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Tatiana do Nascimento Pedrosa.pdf: 4183067 bytes, checksum: b4d1e2566da171bad171597268e6c941 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The continuous sun exposure is a major factor causing oxidative stress, stains and aging skin. The growth of the cosmetics market in the world, the growing interest of people for youthful skin, free of wrinkles and spots, has stimulated researchers to search for new assets for this purpose. Kojic acid is a well known and widely used depigmenting, mainly produced by fungi of the genus Aspergillus which has also been reported as an antioxidant and rejuvenating. However, kojic acid has disadvantages such as low stability and poor inhibition at low concentrations which encourages researchers to search for more active compounds or changes in the molecule in order to seek more active derivatives, stable and secure. Thus, this work aimed at studying the potential of nine Kojic acid derivatives synthesized by researchers at the Federal University of Pará - UFPA in order to obtain compounds with depigmenting activity, antioxidants and rejuvenating superior to those reported kojic acid. In this study we performed cytotoxicity assays, evaluation of antioxidant activity in vitro and enzyme in vitro inhibition of elastase, tyrosinase, collagenase and hyaluronidase. We evaluated the inhibition of tyrosinase activity and melanin production in B16F10 and alterations on tyrosinase gene expression. Of the nine derivatives studied, only three of them, kojato zinc, kojato copper (Cu-AK) and oleikojato copper (Cu-Ok), showed in vitro inhibitory activity on mushroom tyrosinase and were selected for the present study. The inhibition of tyrosinase in vitro kojato zinc (IC 50 - 30.4 ± 0.89µM) was higher than that presented by the kojic acid (IC50 - 60.2 ± 1.83µM) and its other derivatives Cu-AK (IC50 – 133.3 ± 6.59µM) and Cu-Ok (IC50 - 77.6 ± 4.31µM). These compounds were not cytotoxic to B16F10 cells and human dermal fibroblasts at 100 µM and showed no hemolytic potential at the concentration of 250 µM. The Kojic acid and derivatives, Cu-AK and Cu-Ok, were selected to evaluate the action on melanogenesis and enzymes that act on skin aging, as well as antioxidant activity. AK, AK-Cu and Cu-OK, apresenaram low antioxidant activity in the DPPH assay at 50 µg/mL, however, proved to be powerful metal chelating agents. In the studied concentration, 50 µg/mL, OK-Cu (76.0 ± 5.7%) showed chelating activity slightly higher than the AK (58.9 ± 5.63%) and AK-Cu (57.4 ± 5 24). The tyrosinase activity in B16F10 was strongly inhibited by Cu-AK (86.7%) and Cu- OK (92.5%), melanin production decreased by approximately 60.2% and 61.6% respectively. There were no changes in levels of gene expression of tyrosinase and there was no significant inhibition of other enzymes studied. Our results suggest that the action on melanogenesis observed for Cu-OK and Cu-AK occurs through inhibition of tyrosinase associated with an antioxidant mechanism. The compounds studied have great potential for use as cosmetic depigmenting agents. / A exposição solar contínua é um dos principais fatores causadores de estresse oxidativo, manchas e envelhecimento da pele.O crescimento do mercado de cosméticos no mundo, o interesse cada vez maior das pessoas por uma pele jovem, isenta de rugas e manchas, tem estimulado os pesquisadores na busca por novos ativos com este fim. O ácido kójico é um conhecido e bastante utilizado despigmentante, produzido principalmente por fungos do gênero Aspergillus que tem sido relatado também como antioxidante e rejuvenescedor. Entretanto, o ácido kójico apresenta desvantagens como baixa estabilidade e inibição insatisfatória em baixas concentrações o que estimula os pesquisadores na busca por compostos mais ativos ou modificações na molécula visando a busca de derivados mais ativos, estáveis e seguros. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo estudar o potencial de nove derivados do ácido kójico sintetizados por pesquisadores da Universidade Federal do Pará – UFPA, visando obter compostos com atividades despigmentantes, antioxidantes e rejuvenescedoras superiores às relatadas para o ácido kójico. No presente estudo foram realizados ensaios de citotoxicidade, avaliação da atividade antioxidante in vitro, inibição enzimática in vitro das enzimas elastase, tirosinase, colagenase e hialuronidase, inibição da atividade da tirosinase e da produção de melanina em células B16F10 e expressão gênica da tirosinase (Tyr). Dos nove derivados estudados, apenas três, kojato de zinco, kojato de cobre (Cu-AK) e oleikojato de cobre (Cu-Ok), apresentaram atividade inibitória in vitro sobre a tirosinase de cogumelo e foram selecionados para continuação deste trabalho. A inibição da tirosinase in vitrodo kojato de zinco (CI50 - 30,4 ± 0,89 µM) foi superior a apresentada pelo ácido kójico (CI 50 - 60,2 ± 1,83 µM) e seus outros derivados Cu-AK (CI50 - 133,3 ± 6,59 µM) e Cu-Ok (CI50 – 77,6 ± 4,31 µM). Estes compostos não foram citotóxicos em células B16F10 e fibroblastos de derme humana na concentração de 100 µM e não apresentaram potencial hemolítico em concentrações superiores a 250 µM. O Ácido kójico (AK) e os derivados, CuAK e Cu-Ok, foram selecionados para avaliação da ação sobre a melanogênese e enzimas que atuam no envelhecimento cutâneo, além da atividade antioxidante. AK, Cu-AK e Cu-OK, apresentaram atividade antioxidante inferior a 50 % no ensaio do DPPH a 50 µg/mL, no entanto, mostraram-se potentes agentes quelante de metais. Na concentração estudada, 50 µg/mL, Cu-OK(76,0 ± 5,7 %) apresentou atividade quelante levemente superior a do AK (58,9 ± 5,63 %) e Cu-AK (57,4 ± 5,24). A atividade da tirosinase em B16F10 foi fortemente inibida por Cu-AK (86,7 %) eCu-OK (92,5 %) a produção de melanina diminuiu em cerca de 60,2% e 61,6% respectivamente. Não houve alterações nos níveis de expressão gênica de tirosinase e não foi observada inibição significativa das demais enzimas estudadas. Nossos resultados sugerem que a ação sobre a melanogênese observada para Cu-AK eCu-OK ocorre através da inibição da tirosinase associada a um mecanismo antioxidante. Os compostos estudados apresentam grande potencial para uso cosmético como agentes despigmentantes.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-15T15:22:38Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-15T15:22:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-15T15:23:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-15T15:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pigmentary disorders such as melasma, freckles, and ephelides have motivated the search for natural products with potential for skin whitening. Given that the main regulatory enzyme of melanin production, tyrosinase can be inhibited by polyphenols and antioxidants, extracts from leaves of Passiflora nitida Kunth, which have been reported as rich in polyphenols and have antioxidant effects, can act as inhibitors of melanogenesis. This study aimed to know the total phenols, the antioxidant effect on tyrosinase, the cytotoxicity and the effect on melanin content of extracts from leaves of P. nitida. Were assessed extracts aqueous by infusion (EAI), aqueous by maceration (EAM), hydroethanolic (EHE) and ethanolic (EE). The EAM showed higher antioxidant activity by DPPH method and by the inhibition of lipid peroxidation and tyrosinase. The percentages of phenolic compounds found in the extracts were EAM = 5.63 ± 0.06%; EAI = 5.10 ± 0.04%, EHE = 3.97 ± 0.08%, EE = 3.35 ± 0, 17%. The median inhibitory concentration (IC50) of DPPH by the extracts were EAM = 38.99 ± 1.56 mg / mL, EHE = 44.16 ± 1.69 mg / mL, EAI = 45.26 ± 0.96 mg / mL, EE = 48.44 ± 0.66 mg / mL and the IC50 of gallic acid was AG = 0.80 ± 0.03 mg / mL. The inhibition of lipid peroxidation reaction at 120 minutes were BHT = 67.55 ± 1.66%, EAI = 56.29 ± 2.63%, EAM = 60.98 ± 2.07%, EHE = 45.04 ± 3 22%, EE = 23.22 ± 3.83%. The extracts also inhibited the tyrosinase which IC50 of kojic acid, the EAI, EAM, EHE and EE respectively were: 0.001 ± 1, 475 ± 28, 440 ± 27, 879 ± 32, 901 ± 29 mg / mL. The cytotoxicity of EAM on NIH 3T3 fibroblasts, melanoma B16F10 and Melan-a melanocyte was time dependent. Was lower for fibroblasts and melanocytes than melanoma. The EAM showed no antioxidant activity in NIH 3T3. EAM at concentrations of 10 and 25 mg / ml in B16F10 induced increase of melanin content to 196 ± 15% and 217 ± 20% respectively and in Melan-a concentrations of 6.25, 12.50 and 25 mg / ml reduced the melanin content to 90 ± 8, 84.8 ± 0.6 and 54 ± 4% respectively. Thus, one can say that EAM was able to reduce the level of melanin in melanocytes, with greater cytotoxicity for melanoma than for fibroblasts and melanocytes. / Distúrbios de pigmentação tais como melasmas, sardas, manchas e efélides têm motivado a procura por produtos naturais com potencial clareador de pele. Tendo em vista que a principal enzima reguladora da produção de melanina, a tirosinase, pode ser inibida por polifenóis e antioxidantes, os extratos das folhas de Passiflora nitida Kunth, que já foram relatados como ricos em polifenóis e ter efeito antioxidante, podem funcionar como inibidores da melanogênese. Esse estudo visou conhecer o teor de fenóis totais, a atividade antioxidante o efeito sobre a tirosinase, a citotoxicidade e o efeito sobre o teor de melanina de extratos das folhas de P. nitida. Foram avaliados os extratos aquoso por infusão (EAI), aquoso por maceração (EAM), hidroetanólico (EHE) e etanólico (EE). O EAM apresentou maior atividade antioxidante pelo método do DPPH e pelo método de inibição da lipoperoxidação e da tirosinase. As porcentagens de fenóis totais encontradas nos extratos foram EAM = 5,63 ± 0,06 %; EAI = 5,10 ± 0,04 %; EHE = 3,97 ± 0,08 %; EE = 3,35 ± 0,17 %. As concentrações inibitórias medianas (CI50) do DPPH pelos extratos foram EAM = 38,99 ± 1,56 μg/mL, EHE = 44,16 ± 1,69 μg/mL, EAI = 45,26 ± 0,96 μg/mL; EE = 48,44 ± 0,66 μg/mL e a CI50 do ácido gálico foi AG = 0,80± 0,03 μg/mL. A inibição da lipoperoxidação aos 120 minutos de reação foram BHT = 67,55 ± 1,66 %, EAI = 56,29 ± 2,63 %, EAM = 60,98 ± 2,07 %, EHE = 45,04 ± 3,22 %, EE = 23,22 ± 3,83 %. Os extratos também inibiram a enzima tirosinase cujas CI50 do ácido kojico, do EAI, EAM, EHE e EE respectivamente foram: 1 ± 0,001; 475 ± 28 ; 440 ± 27; 879 ± 32; 901 ± 29 μg/mL. A citotoxicidade do EAM sobre o fibroblasto NIH 3T3, o melanoma B16F10 e o melanócito Melan-a foi tempo dependente. Sendo menor para o fibroblasto e o melanócito. O EAM não apresentou atividade antioxidante em NIH 3T3. O EAM nas concentrações de 10 e 25 μg/mL em B16F10 induziu o aumento do teor de melanina para 196 ± 15 % e 217 ± 20 % respectivamente e em Melan-a nas concentrações de 6,25; 12,50 e 25 μg/mL reduziu o teor de melanina para 90 ± 8; 84,8 ± 0,6 e 54 ± 4 % respectivamente. Assim, pode-se dizer que o EAM foi capaz de diminuir o teor de melanina em melanócito, com maior citotoxicidade para melanoma do que para fibroblasto e melanócito.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Iara Filardi da Silva.pdf: 2120501 bytes, checksum: 9273a177032b8356a33154587a462474 (MD5) Previous issue date: 2012-05-18 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The search for new antimicrobial agents is necessary due to the emergence of resistant microorganisms and fatal opportunistic infections associated with the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), cancer chemotherapy and transplantation. The triazole compounds are one of the most studied heterocyclic systems today and have attracted much interest because they have a wide range of applications, ranging from use as explosives, even as agrochemicals and pharmaceuticals. This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of synthetic 1,2,3 triazole compounds in yeasts Candida sp, the bacteria Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and filamentous fungi Microsporum canis, Trichophyton rubrum and Aspergillus niger using the technique of microdilution and evaluate the cytotoxicity of the compounds showed antimicrobial activity tests for cell viability in fibroblasts NIH3T, hemolytic potential in human blood and anticoagulant activity in human plasma. Of all the compounds screened, four showed good anti-candida (MIC 0.25 to 0.06 mmol/L). These same compounds also show activity for M. canis (MIC 50-100 mg/mL), T. rubrum (25 MIC 6.25 mg/mL) and A. niger (MIC 100 mg/mL). None of the compounds tested showed antibacterial activity for P. aeruginosa, S. aureus and E. faecalis. All compounds showed antifungal activity showed low cytotoxicity for the tests analyzed. From screening of 90 new compounds were identified four 1,2,3 triazole which may have potential for the development of new drugs with antifungal activity / A pesquisa de novos agentes antimicrobianos se faz necessária devido ao surgimento de microrganismos resistentes e de infecções oportunistas fatais, associadas à síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), quimioterapia antineoplásica e transplantes. Os compostos triazólicos são um dos sistemas heterocíclicos mais estudados atualmente e têm despertado muito interesse pelo fato de possuírem um vasto campo de aplicações, que vão desde o uso como explosivos, até como agroquímicos e fármacos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de compostos triazólicos sintéticos em leveduras do gênero Candida sp, nas bactérias Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis e nos fungos filamentosos Microsporum canis, Aspergillus niger e Trichophyton rubrum através da técnica de microdiluição em caldo e avaliar a citotoxicidade dos compostos que apresentaram atividade antimicrobiana pelos testes de viabilidade celular em fibroblastos murinos NIH3T3, potencial hemolítico e atividade anticoagulante. Dos 90 compostos triados, quatro apresentaram significativa atividade anti-candida (MIC 0,25-0,06 mmol/L). Esses mesmos compostos também apresentaram atividade para M. canis (MIC 50-100 mg/mL), T. rubrum (MIC 6.25- 25 mg/mL) e para A. niger (MIC 100 mg/mL). Nenhum dos compostos testados apresentou atividade anti-bacteriana para P. aeruginosa, S. aureus e E. faecalis. Todos os compostos que apresentaram atividade antifúngica apresentaram baixa citotoxicidade para os testes analisados. A partir do screening de 90 novos compostos triazólicos foram identificados quatro os quais podem ter potencial para o desenvolvimento de novos fármacos com atividade antifúngica

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isis.pdf: 2683996 bytes, checksum: d16cccff105cf59d14e99ff763f1ade2 (MD5) Previous issue date: 2013-03-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the Amazon, the use of medicinal plants by native and riverine population is an important source of ethnopharmacological knowledge. One of the plants widely used with medicinal properties, is Vismia guianensis (Aubl) Choisy. The sap (reddish resin) obtained from the infusion of bark and leaves are widely used in folk medicine against white cloth (PV) and impinges (Tinea corporea). The development of the fungi that cause skin conditions, among other factors, is favored by the tropical climate of northern Brazil. Thus, this plant species is very promising for technology studying the sensing processing of the plant material in a standardized product which can be used with safety and therapeutic efficacy. In this sense, the present study aimed to the development and standardization of a spray dried extract of V. guianensis with proven antifungical activity. For this were used leaves as raw material, such that was characterized by pharmacopoeial techniques and not pharmacopoeial. Using a factorial design was obtained, optimized and standardized a solution with antifungal activity, from which the ESA was obtained (spray dried extract) and PSA (spray dried product), they have also been characterized and these were characterized and evaluated for antifungal activity by microdilution method. Both dry extracts showed antifungal activity against fronts of Candida albicans, Malassezia furfur and Trichophyton rubrum with MIC (minimum inhibitory concentration) ranged from 0,5 to 8 mg / mL, however, the PSA showed better performance characteristics and physical stability. With all this, it appears that the spray dried extracts of Vismia guianensis have technological characteristics that enable its future transformation into a pharmaceutical form. / Na Amazônia, o uso das plantas medicinais pelas populações nativas e ribeirinhas é uma importante fonte de conhecimentos etnofarmacológicos. Uma das plantas, com propriedade medicinal, muito utilizada é a Vismia guianensis (Aubl) Choisy. A seiva (resina avermelhada) obtida da casca e a infusão das folhas são muito utilizadas, na medicina popular, contra pano branco (Pitiriase versicolor) e impinges (Tinea corporea). O desenvolvimento dos fungos causadores de dermatoses, entre outros fatores, é favorecido pelo clima tropical da região norte do Brasil. Dessa forma, essa espécie vegetal é bastante promissora para o estudo tecnológico no sentindo de transformação do material vegetal em um produto padronizado que possa ser utilizado com segurança e eficácia terapêutica. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento e padronização de um produto seco por aspersão de V. guianensis com comprovada atividade antifúngica. Para isso, foram utilizadas folhas como matéria-prima vegetal, esta que foi caracterizada através de técnicas farmacopeicas e não farmacopeicas. Através de um planejamento fatorial foi obtida e padronizada uma solução extrativa com atividade antifúngica, a partir da qual foi obtido o ESA (extrato seco por aspersão) e o PSA (produto seco por aspersão), estes que foram caracterizados e avaliados quanto a atividade antifúngica pelo método de microdiluição. Ambos os extratos secos apresentaram atividade antifúngica frente à Candida albicans, Malassezia furfur e Trichophyton rubrum com CIM (concentração inibitória mínima) que variou de 0,5 a 8 mg/mL, entretanto, o PSA apresentou melhores características de rendimento e de estabilidade física. Com tudo isso, constata-se que os extratos secos por aspersão de V. guianensis apresentam características tecnológicas que viabilizam sua futura transformação em uma forma farmacêutica.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jessyca dos reis.pdf: 2629785 bytes, checksum: 664a61966469b33065e128fef56d7900 (MD5) Previous issue date: 2013-10-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Environmental isolates of filamentous fungi are widely studied for their ability to secrete metabolites of great commercial value, including pigments. These, in turn, find application to color textile raw materials, foods and medicines. In this context, the aim of this work was to select fungi from soil samples Amazon with potential for the production of pigments. For this, samples were collected from surface soil and colonies were isolated by serial dilution technique. The macro and microscopic characteristics of colonies grown within 72 hours were used for determining the gender of the isolates and the ITS region of the ribosomal DNA of fungal pigment producers was sequenced for identification to the species level. A cryopreservation technique and conservation at -70 C was employed to preserve the lines with biotechnological potential. A bioprocess performed in broth Czapeck enabled the selection of fungi which produce colored compounds. Fractions containing the pigments were extracted by use of solvents of different polarity and selection of the pigment of interest was due to the color intensity of the substance present in the fractions. The techniques used for the isolation and structural elucidation of the sample of interest involved chromatographic fractioning (Sephadex LH-20 column and microcrystalline cellulose column), recrystalization and NMR (Nuclear Magnetic Resonance). The influence of carbon sources and nitrogen on the yield of the isolated substance was also studied in this work. From samples collected was possible to isolate 50 soil fungi. Of these five strains were able to produce pigments during fermentation. Producing fungi were identified as Penicillium sclerotiorum 2AV2, Penicillium sclerotiorum 2AV6, Aspergillus calidoustus 4BV13, Penicillium citrinum 2AV18 e Penicillium purpurogenum 2BV41. Penicillium sclerotiorum 2AV2 produced fractions very colorful and was chosen to continue the activities of the chemical characterisation. After isolation of the substance was obtained as a yellow-orange powder, which was identified by NMR as sclerotiorin, a major metabolite that has not been previously described by synthesis by fungi from the Amazon. The influence of carbon and nitrogen sources for production of sclerotiorin was analised and it was found that rhamnose and peptone increased yield when used separately. These results indicate that Amazonian fungi bioprospecting is an alternative to search for new sources of natural dyes, since it allows to exploit the biotechnological potential of our region while allowing knowledge of species of microorganisms producers. / Isolados ambientais de fungos filamentosos são amplamente estudados por sua capacidade de secretar metabólitos de grande valor comercial, entre eles os pigmentos. Estes, por sua vez, encontram aplicação como corantes de matérias-primas têxteis, alimentos e medicamentos. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi selecionar fungos de amostras de solo Amazônico com potencial para a produção de pigmentos. Para isso, foram coletadas amostras de solo superficial e colônias foram isoladas pela técnica da diluição em série. As características macro e microscópicas das colônias crescidas em até 72 horas foram utilizadas para a determinação do gênero dos isolados e a região ITS do DNA ribossomal dos fungos produtores de pigmentos foi sequenciada para permitir a identificação em nível de espécie. Para conservar as linhagens com potencial biotecnológico foi empregada uma técnica de criopreservação e armazenamento a -70 C. Um bioprocesso realizado em caldo Czapeck possibilitou a seleção dos fungos produtores de compostos coloridos. Frações contendo os pigmentos foram extraídas pelo uso de solventes de diferentes polaridades e o pigmento de interesse foi selecionado pela intensidade da cor da substância presente nas frações. A metodologia para isolamento e caracterização química da amostra envolveu técnicas de fracionamento cromatográfico (coluna Sephadex LH-20 e coluna de celulose microcristalina), recristalização e análises de RMN (Ressonância magnética nuclear). A influência das fontes de carbono e nitrogênio sobre o rendimento da substância isolada também foi estudada nesse trabalho. A partir das amostras coletadas foi possível isolar 50 fungos do solo. Desses, 5 cepas foram capazes de produzir pigmentos durante a fermentação. Os fungos produtores foram identificados como Penicillium sclerotiorum 2AV2, Penicillium sclerotiorum 2AV6, Aspergillus calidoustus 4BV13, Penicillium citrinum 2AV18 e Penicillium purpurogenum 2BV41. Penicillium sclerotiorum 2AV2 produziu frações muito coloridas e foi escolhido para prosseguir as atividades de caracterização química. Após o isolamento da substância, obteve-se um pó amarelo-alaranjado, que foi identificado por RMN como esclerotiorina, um importante metabólito que ainda não havia sido descrito pela síntese por fungos da Amazônia. A influência das fontes de carbono e nitrogênio para a produção de esclerotiorina foi analisada, e verificou-se que ramnose e peptona aumentaram o rendimento quando utilizadas separadamente. Estes resultados indicam que a bioprospecção de fungos Amazônicos é uma alternativa para a pesquisa por novas fontes de corantes naturais, pois permite explorar o potencial biotecnológico da nossa região, ao mesmo tempo em que possibilita o conhecimento das espécies de micro-organismos produtores.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jaquelane.pdf: 1247761 bytes, checksum: c3396b2f5aa59cae9b817bf74a866e28 (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / High prevalence in Brazil, specifically in the Amazon Region, malária is a parasitic infectious disease with socioeconomic impact sin endemic areas. Plasmodium vivax is the most prevalent agent and has been associated with cases of severe malária before attributed only to Plasmodium falciparum. Genetic variability in host metabolism of antimalárial drugs, influenced by the polymorphism of cytochrome P450(CYP), could lead to significant changes in antimalárial treatment response. Little is known about the influence of genetic factors in the increase of the individual susceptibility of the host to development of severe disease. Therefore, this project aimed to determine the frequency of alleles CYP2B6*6, CYP2C8*3 and CYP2D6*4 in patients with vivax malária, to evaluate the relationship between the alleles found and the occurrence of severe malária and further establish the hematological and biochemical profile among carriers of alleles found. Therefore, we used peripheral blood samples of patients with vivax malária treated at a health care reference in Manaus-AM. Which were extracted leukocyte DNA, which in turn were amplified by real-time PCR using TaqMan ® system for allelic discrimination. The frequencies of the alleles CYP2B6*6, CYP2C8*3 and CYP2D6*4 were 28.26%, 6.7%, 8.87%, respectively. The CYP2D6*4 allele was more prevalent among patients diagnosed with severe vivax malária, and was associated with normal levels of reticulocytes, erythrocytes and hematocrit. Future studies are needed to understand the clinical implications of the polymorphisms found in patients with vivax malária. / De elevada prevalência no Brasil, especificamente na Região Amazônica, a malária é uma doença infecto-parasitária com impactos socioeconômicos em áreas endêmicas. O Plasmodium vivax é o agente de maior prevalência e tem sido associado a casos graves de malária antes atribuída apenas ao Plasmodium falciparum. A variabilidade genética do hospedeiro no metabolismo de fármacos antimaláricos, influenciada pelo polimorfismo de isoformas do citocromo P450 (CYP), poderia levar a alterações significativas na resposta terapêutica antimalárica. Pouco se conhece sobre a influência dos fatores genéticos no aumento da susceptibilidade individual do hospedeiro ao desenvolvimento de formas graves da doença. Portanto este projeto objetivou determinar a frequência dos alelos CYP2B6*6, CYP2C8*3 e CYP2D6*4 em pacientes com malária vivax, avaliar a relação entre os alelos encontrados e a ocorrência de malária grave e ainda estabelecer o perfil hematológico e bioquímico entre os portadores dos alelos encontrados. Para tanto foram utilizadas amostras de sangue periférico de pacientes com malária vivax atendidos numa unidade de saúde de referência na cidade de Manaus-AM. Dos quais foram extraídos o DNA leucocitário, que por sua vez foram amplificado por PCR em tempo real usando o sistema TaqMan® para a discriminação alélica. As freqüências dos alelos CYP2B6*6, CYP2C8*3 e CYP2D6*4 foram 28,26%, 6,7%, 8,87%, respectivamente. O alelo CYP2D6*4 foi o mais prevalente entre os pacientes diagnosticados com malária vivax grave, e também foi associado a níveis normais de reticulócitos, eritrócitos e hematócrito. Estudos futuros são necessários para compreender as implicações clínicas dos polimorfismos encontrados em pacientes com malária vivax.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanair Soares Vasconcelos.pdf: 2858178 bytes, checksum: 6b26a0905110117fcff488bcc6f386c1 (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Malignant melanoma is one of the few cancers has been increasing in prevalence and mortality worldwide. It affects mainly white populations, however, all ethnic groups are affected to some extent. Increased understanding of the causes, progression, and in particular, genes that affect the development of cancer enable improvements in tools for detecting and treating cancer, however, despite significant advances in understanding the biology of melanoma, no changes in practices involved in both approaches and therapies to treat advanced disease. Thus, malignant melanoma has been intensively investigated due to its high metastatic potential. Many patients, when diagnosed with metastatic melanoma have already, which is the leading cause of death among them. This tumor is almost insensitive to standard regimens of chemotherapy, and the chemotherapeutic agents available are limited. Some mutations are known in cutaneous melanomas and N-Ras, Tp16 and Tp53, however, changes in B-Raf significantly exceed the frequency of the other mutations (40-50%). In this context, this project explored the possible mechanisms of action of the derivative benzotiazólico (E)-2-((2-(Benzo[d] thiazole-2-ila)hydrazono) methyl)-4-nitrophenol on cell viability, the activity clonogenic, motility and invasiveness in melanoma cell lines SK-Mel-19, SK-Mel-28 and SK-Mel-103 that have different characteristics from mutations in the genes responsible for the control of cellular homeostasis, as Tp53 and B-Raf. The results of tests performed showed an IC50 at 72hours between (4.87and>10 um) and a possible selective toxicity to the gene mutated B-Raf. Other tests showed induction of cell death by apoptosis, impaired motility and invasiveness of cells treated with SK-Mel benzotiazolic derivative (E)-2-((2-(Benzo[d]thiazole-2-Ila)hydrazono)methyl)-4-nitrophenol. The obtained results make this target compound for more research to use against cancer. / O melanoma maligno é um dos poucos cânceres que vem aumentando em prevalência, bem como taxa de mortalidade em todo o mundo. Afeta principalmente populações brancas, no entanto, todos os grupos étnicos são afetados em alguma proporção. Os avanços na compreensão das causas, progressão e, em particular, dos genes que afetam o desenvolvimento do câncer possibilitam melhorias nas ferramentas para a detecção e tratamento câncer, no entanto, apesar dos avanços significativos na compreensão da biologia do melanoma e das abordagens para tratar a doença em estágio avançado agora se voltarem para inibidores de genes envolvidos nessa doença, houve poucas mudanças aprovadas nas terapias utilizadas. Assim, o melanoma maligno vem sendo intensamente investigado devido ao seu elevado potencial metastático. Muitos pacientes, ao serem diagnosticados com melanoma já tem metástases, o que é a principal causa de morte entre eles. Este tipo de tumor é quase insensível ao regime padrão de quimioterapia, e os agentes quimioterapêuticos disponíveis são limitados. Algumas mutações são conhecidas nos melanomas cutâneos como N-Ras, Tp16 e Tp53, entretanto, mutações em B-Raf excedem significativamente a frequência de outras mutações (40-50%). Nesse contexto, tratamentos mais eficazes são necessários e na constante busca por novos compostos, os derivados benzotiazólicos mostram-se como uma importante alternativa, já que tem sido apontados como possíveis agentes antitumorais. Nesse sentido, este projeto explorou os possíveis mecanismos de ação do derivado benzotiazólico (E)-2-((2-(Benzo[d]tiazo-2-ila)hidrazono)metil)-4-nitrofenol sobre a viabilidade celular, a atividade clonogênica, a motilidade e a capacidade invasiva em linhagens celulares de melanoma SK-Mel-19, SK-Mel-28 e SK-Mel-103 que possuem diferentes características de mutações nos genes responsáveis pelo controle da homeostasia celular, como Tp53 e B-Raf. Os resultados dos ensaios executados revelaram um CI50 em 72 horas entre (4,87 e >10 μM) e uma possível toxicidade seletiva para o gene B-Raf mutado. Outros testes evidenciaram indução de morte celular por apoptose, diminuição da motilidade e da capacidade invasiva das células SK-Mel tratadas com derivado benzotiazólico (E)-2-((2-(Benzo[d]tiazo-2-ila)hidrazono)metil)-4-nitrofenol. Os resultados obtidos tornam este composto alvo de mais pesquisas para sua utilização contra o câncer.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIA PSBCF.pdf: 946422 bytes, checksum: 9a7615024f31d940b37aa13463521a8f (MD5) Previous issue date: 2013-11-05 / Introduction: The increase in fungal infections, adverse effects and resistance to antifungal agents currently used, stimulate new studies in search of better antifungal. In this context, the naphthoquinones are widely studied for possessing various biological activities, among them antifungal. The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of new naphthoquinones semissintéticas against opportunistic fungi / dermatophytes and to evaluate the interference of a naphthoquinone selected in cell wall formation, membrane ergosterol and cell membrane strain of Candida albicans (ATCC 36232). Methods: The antifungal activity of four new naphthoquinones semi synthetic was evaluated against 89 cultures of microorganisms belonging to the collection of the National Institute for Amazonian Research (INPA), including opportunistic yeast, agents of dermatophytosis and opportunistic filamentous fungi. The test for determining the minimum inhibitory concentration (MIC) was performed as described by the CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) documents M27 - A2 and M38-A/CLSI, 2002. The substance showed better activity was assessed as the action in the cell wall (test sorbitol) and interference in the membrane -associated interaction with ergosterol , the osmotic balance ( K + efflux ) and an essay by leakage of substances that absorb at 260 nm. Results: All new naphthoquinones tested exhibited antifungal activity, and the IVS320 (1H - cyclopenta [ b ] naphtho [2,3 - d] furan- 5 , 10 (3Ah , 10BH) - dione) showed the lowest MICs front species tested. The MIC IV320 was particularly low for dermatophytes , with MIC averages ranging from 5-28 mg / mL and against isolates of the genus Cryptococcus spp . Mean MIC ranged from 5.3 mg / mL. So it was subjected to preliminary tests of mechanism of action. In these trials , the IVS320 caused no change in the fungal cell wall , but caused problems in cell membrane permeability ( efflux of K + and leakage of substances that absorb 260nm ) unrelated to the connection with the ergosterol membrane . / Introdução: O aumento das infecções fúngicas, os efeitos adversos e a resistência aos antifúngicos atualmente utilizados, estimulam novos estudos em busca de melhores agentes antifúngicos. Nesse contexto, as naftoquinonas são amplamente estudadas por possuir várias atividades biológicas, dentre elas antifúngica. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica de novas naftoquinonas semissintéticas frente a fungos oportunistas/dermatófitos e avaliar a interferência de uma naftoquinona selecionada na formação da parede celular, ergosterol de membrana e membrana celular de cepa de Candida albicans (ATCC 36232). Métodos: A atividade antifúngica de quatro novas naftoquinonas semissintéticas foi avaliada frente a 89 culturas pertencentes a coleção de microrganismos do Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia (INPA), incluindo leveduras oportunistas, agentes de dermatofitoses e fungos filamentosos oportunistas. O ensaio de determinação da Concentração inibitória mínima (CIM) foi realizado como descrito pela CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) nos documentos M27-A2 e M38-A/CLSI,2002. A substância que apresentou melhor atividade foi avaliada quanto à ação na parede celular (ensaio sorbitol) e a interferência na membrana associada à interação com ergosterol, ao equilíbrio osmótico (efluxo de K+) e a um ensaio de extravazamento de substâncias que absorvem a 260 nm. Resultados: Todas as novas naftoquinonas testadas exibiram atividade antifúngica, sendo que a IVS320 (1H-cyclopenta[b]naphtho[2,3-d]furan-5,10(3aH,10bH)-dione) apresentou as menores CIMs frente as espécies testadas. A CIM de IV320 foi particularmente baixas para dermatófitos, com médias de CIM variando de 5-28 μg/mL e frente aos isolados do gênero Cryptococcus spp. médias de CIM variaram de 3-5 μg/mL. Por isso, foi submetida a ensaios preliminares de mecanismo de ação. Nesses ensaios, a IVS320 não causou alteração na parede celular do fungo, mas causou problemas na permeabilidade da membrana celular (efluxo de K+ e extravasamento de substâncias que absorvem a 260nm), não relacionados à ligação com o ergosterol da membrana.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Cardoso Simpson.pdf: 1614019 bytes, checksum: 97affc7d9fbf89b128a926dd2754b01b (MD5) Previous issue date: 2013-08-14 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Aspidosperma nitidum Benth belonging to the Apocynaceae, popularly known as carapanaúba or peroba, widely used in the Amazon region, especially in the relief of symptoms of malaria, having as striking feature of the gener the great presence of indol alkaloids. Despite the widespread use of herbal folk medicine, problems as identification and standardization of the species are quite common. In this context, the present study aimed at the development and validation of an analytical method using high performance liquid chromatography, in order to determine the chromatographic profile of the ethanol extract of the stem bark of Aspidosperma nitidum. The ethanol extract was obtained by maceration and dried extract by freeze. A qualitative evaluation of chemically ethanol extract species showed the presence of alkaloids. The methodology was developed in a liquid chromatograph with high efficiency photodiode array detector, using reverse phase separation system. The validation procedure was carried out by the method of internal standardization, using the 1.8-dihidroxiantraquinona as standard. The calibration curves showed linearity (r ²> 0.99) in a wide range of concentration of the extract and standard, 62.5 to 2000 μg / mL and 15 to 500 μg / mL respectively. The test presented repeatability and reproducibility above 95%, since the coefficient of variation obtained from both assays are below 5%. The method showed good accuracy, which was shown by average recovery of 106% with a coefficient of variation of 2,2%. For all that, the chromatographic method developed and validated proved simple, linear, reproducible and accurate, It can be used therefore for determining the chromatographic profile of the ethanol extract of the stem bark Aspidosperma nitidum. / Aspidosperma nitidum Benth pertencente à Apocynaceae, conhecida popularmente como carapanaúba ou peroba, amplamente utilizada na região Amazônica, principalmente no alívio dos sintomas da malária, tendo como característica marcante do gênero a presença maciça de alcaloides indólicos. Apesar do uso em grande escala de plantas medicinais na medicina popular, problemas como identificação e padronização das espécies são bastante comuns. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento e a validação do método analítico utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência, com o objetivo de determinar o perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule de Aspidosperma nitidum. O extrato etanólico foi obtido por maceração, e o extrato seco por liofilização. A avaliação da constituição química qualitativa do extrato etanólico de espécie demonstrou a presença de alcaloides. O método analítico foi desenvolvido em um cromatógrafo a líquido de alta eficiência com detector por arranjo de fotodiodos, utilizando sistema de separação em fase reversa. A validação do método analítico foi realizada por método de padronização interna, utilizando a 1,8-dihidroxiantraquinona como padrão, com as curvas de calibração apresentando linearidade (r² > 0,99) em uma ampla faixa de concentração do extrato e do padrão, de 62,5 a 2000 μg/mL e de 15 a 500 μg/mL respectivamente. Na validação observou-se repetibilidade e reprodutibilidade acima de 95%, já que os valores de coeficiente de variação obtidos de ambos os testes estão abaixo de 5%. O método apresentou boa exatidão, a qual foi demonstrada pela recuperação média de 106% com o coeficiente de variação de 2,2%. Por tudo isso, o método cromatográfico desenvolvido e validado se mostrou simples, linear, preciso, reprodutível e exato, podendo ser utilizado, portanto, para a determinação do perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule Aspidosperma nitidum.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camila Fabbri.pdf: 1702364 bytes, checksum: aad2c6cd689b654fb570e596447becf9 (MD5) Previous issue date: 2012-01-19 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The human malaria is an infectious disease, febrile, acute or chronic, caused by protozoa transmitted by vectors, being the disease more widely distributed in the world and one of the most prevalent parasitic diseases today. About 300 to 500 million cases occur annually and about 1 to 2 million people - mostly children - die from malaria. In the state of Amazonas, between january 2007 and march 2009, 22,081 cases of malaria were diagnosed and reported, with the largest record (14,249) in 2007. Although Plasmodium vivax malaria is considered a benign form of the disease with a low mortality rate in relation to Plasmodium falciparum, it can cause a serious disease where complications such as jaundice, severe anemia, renal failure and pulmonary complications are described. Oxidative stress occurs when there is an imbalance in the concentration of oxidants, free radicals, and antioxidants, such as enzymes, vitamins C and E, β-carotene. During the malaria disease, oxidative stress may be developed by two mechanisms: by the parasite, when it is to reproduce, generates reactive species and the host immune system, which makes use of these reactive species to try to combat the parasite. In order to study oxidative stress in patients with severe vivax malaria who developed jaundice in the course of the disease in plasma and erythrocytes, and also to check the influence of this high concentration of bilirubin in oxidative stress, the following groups of patients was studied: non-severe malaria , severe malaria presenting jaundice, concurrent malaria and dengue, healthy patients with no history of malaria (control group) and one patient with deficiency in the enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase which contracted malaria. In all patients were measured the levels of antioxidant enzymes and lipid peroxidation marker malondialdehyde on day zero (when diagnosed with malaria) and on day fourteen (free of symptoms and parasitemia). The levels of malondialdehyde and the enzymes celuroplasmin, lactate dehydrogenase and glutathione reductase were increased (p <0.02) in plasma of patients with severe malaria compared with the control group, unlike the enzymes catalase, superoxide dismutase and thioredoxin reductase where levels were decreased (p <0.03) compared to the control group. The levels of glutathione reductase and malondialdehyde marker also showed significantly higher levels in severe malaria groups when compared with non-severe malaria group. The correlation between glutathione reductase and total bilirubin was significant (p < 0.0001) in all patients of each group. Patients who developed malaria and dengue fever showed levels of oxidative stress similar to patients with severe malaria. With all these results, we conclude the patients with severe vivax malaria who developed jaundice had a higher oxidative stress than the patients who contracted the disease in milder form. Thus, these high concentrations of bilirubin may develop the role of signaling to oxidation in patients with malaria / A malária humana é uma doença infecciosa, febril, aguda ou crônica, causada por protozoários transmitidos por vetores, sendo a doença mais amplamente distribuída no mundo e uma das doenças parasitárias mais prevalentes da atualidade. Cerca de 300 a 500 milhões de casos ocorrem anualmente e cerca de 1 a 2 milhões de pessoas - na maioria crianças - morrem de malária. No estado do Amazonas, entre janeiro de 2007 a março de 2009, foram diagnosticados e notificados 22.081 casos de malária, com maior registro (14.249) em 2007. Embora a malária por Plasmodium vivax seja considerada a forma benigna da doença, com uma taxa de letalidade baixa em relação ao Plasmodium falciparum, ela pode causar uma doença grave, onde complicações como icterícia, anemia grave, insuficiência renal e complicações pulmonares são descritas. O estresse oxidativo ocorre quando há um desequilíbrio na concentração de substâncias oxidantes, os radicais livres, e antioxidantes, como enzimas, vitaminas C e E, β-caroteno. Na malária, o estresse oxidativo pode ser desenvolvido por dois mecanismos: através do parasita quando este ao se reproduzir gera espécies reativas e o sistema imunológico do hospedeiro, que lança mão dessas espécies reativas para tentar combater o parasita. Com o intuito de estudar o estresse oxidativo em pacientes com malária vivax grave que desenvolveram icterícia ao decorrer doença no plasma e eritrócitos, além de verificar a influência desta alta concentração de bilirrubina no estresse oxidativo, os seguintes grupos de pacientes foram estudados: malária não grave, malária grave apresentando icterícia, malária e co-infeccão com dengue, pacientes saudáveis sem histórico de malária (grupo controle) e um paciente portador da deficiência na enzima glicose-6-fosfato desidrogenase que contraiu malária. Em todos os pacientes foram mensurados os níveis de enzimas antioxidantes e o marcador de lipoperoxidação malondialdeído no dia zero (quando diagnosticado com malária) e no dia quatorze (livre de sintomas e parasitemia). Os níveis de malondialdeído e das enzimas celuroplasmina, lactato desidrogenase e glutationa redutase estavam aumentados (p < 0,02) no plasma de pacientes com malária grave em comparação ao grupo controle, diferentemente das enzimas catalase, superóxido dismutase e tioredoxina redutase onde os níveis estavam diminuídos (p < 0,03) em comparação ao grupo controle. Os níveis da enzima glutationa redutase e do marcador malondialdeído também mostraram níveis significativamente mais elevados no grupos malária grave quando comparado com o grupo malária não grave. A correlação entre os níveis de bilirrubina e glutationa redutase foi significativa (p < 0.0001) em todos os pacientes de cada grupo. Pacientes que desenvolveram malária e dengue apresentaram níveis de estresse oxidativo semelhante aos pacientes com malária grave. Com todos estes resultados, podemos concluir que os pacientes com malária vivax grave que desenvolveram icterícia apresentaram um maior estresse oxidativo do que os pacientes que contrairam a doença na forma mais branda. Dessa forma, estas altas concentrações de bilirrubina podem estar desempenhando a função de sinalizadoras do processo oxidativo em pacientes com malária