Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Agroecossistemas, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T13:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 273304.pdf: 1105793 bytes, checksum: 7d02cad7becd49a144ea837abae28bb3 (MD5) / O presente trabalho foi realizado entre outubro de 2007 e fevereiro de 2008 no Centro Paranaense de Referência em Agroecologia, Pinhais/PR. Foram realizados três ensaios. No primeiro, objetivou-se determinar a dinâmica de flutuação da população dos ixodídeos mais abundantes no habitat de pastagem de campo nativo melhorado sob pastejo rotativo com 12 novilhas da raça Jersey, através de amostragens em pastagem naturalmente infestada utilizando a técnica de arrasto com flanela branca. Esta foi realizada em 18 piquetes, escolhidos aleatoriamente, sendo que seis piquetes foram tratados com pulverização de preparados biodinâmicos, seis com acelerador de compostagem Embiotic® e os outros seis ficaram como testemunha, sem pulverizações. A variável resposta, quantidade de larvas de R. microplus registrada na pastagem, foi relacionada com os diferentes tratamentos e com as variáveis climáticas temperatura, pluviosidade e umidade relativa do ar. De acordo com a análise estatística o tratamento no pasto com preparados biodinâmicos e a temperatura exercem influência significativa (p<0,05) sobre a variável resposta. Outro ensaio buscou observar o grau de infestação nas diferentes regiões do corpo dos bovinos (cabeça, pescoço/barbela, peito/axila, membro anterior, tórax/abdome, membro posterior e úbere/períneo), assim como determinar a eficiência do tratamento parcial seletivo com extrato hidro-alcoólico de capim-limão (Cymbopogon citratus) em 12 novilhas leiteiras da raça Jersey infestadas naturalmente com R. microplus. Foram realizadas contagens de carrapatos acima de 4,0 mm na metade direita do corpo de todos os animais e os que apresentaram contagem igual ou superior a 50 carrapatos foram pulverizados com 2,5 litros de extrato de capim-limão a 2,72%. Verificou-se maior presença do carrapato no úbere/períneo (42,6%) e peito/axila (23%). O tratamento testado não obteve redução significativa (p>0,05) no número de fêmeas ingurgitadas de carrapatos, portanto concluisse que o tratamento com o capim-limão na concentração testada não é efetivo no controle do carrapato-do-boi. O terceiro ensaio, realizado em laboratório, avaliou por meio de teste de imersão in vitro a susceptibilidade do R. microplus a diferentes concentrações (0; 1,36; 2,72; 5,44; 10,88; 21,76; 43,52; 87,04%) de extrato hidro-alcoólico de C. citratus. Estatisticamente os resultados não foram significativos (p>0,05).

Orientadora: Maria Izabel Camargo-Mathias / Coorientadora: Karim C. S. Furquim / Banca: Rusleyd Maria Magalhães de Abreu / Banca: Priscila Cintra Socolowski / Banca: Solange Aparecida Rossini de Oliveira / Banca: Luciana Fioretti Gracioli Vitti / Resumo: No presente trabalho foram realizados testes para demonstrar o potencial antitumoral de extratos de glândulas salivares de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus com 2 (EGS2) dias de alimentação sobre células das linhagens DH82 e HL-60 (in vitro) , bem como os efeitos de duas concentrações diferentes (0,2 e 0,04μg/μL) de extratos (com uma ou duas injeções) obtidos a partir das mesmas glândulas da espécie de carrapato com o mesmo tempo de alimentação sobre a morfofisiologia da musculatura de pernas posteriores de ratas Wistar inoculadas com células do tumor de Walker 256 (in vivo). In vitro as células tumorais foram expostas às concentrações do extrato pelo período de 24 horas e então encaminhadas para as avaliações quantitativa (análise dos parâmetros viabilidade e o número total de células) e morfológica (análises sob microscopia de luz convencional: coloração pela hematoxilina e eosina, e sob microscopia confocal: marcação do citoesqueleto/núcleo, verificação da viabilidade celular, bem como detecção da atividade das caspases 3 e 7). Os resultados quantitativos mostraram que o extrato EGS2 afetou negativamente tanto a viabilidade quanto a proliferação das células tumorais, sendo que a concentração de 0,2 reduziu a viabilidade das DH82 e a de 0,5 reduziu a proliferação destas. Para as células HL-60 as concentrações de 0,2 e de 0,5 reduziram a viabilidade, sendo ainda que a concentração de 0,5 foi mais eficaz nesse processo. Os dados morfológicos revelaram que tanto as DH82 (exposição a 0,2 μg/mL do EGS2) quanto as HL-60 (exposição a 0,2 e 0,5 μg/mL do EGS2) tiveram a viabilidade comprometida. Além disso, detectou-se alterações citoplasmáticas e nucleares como: a) desorganização do citoesqueleto (actina e tubulina), b) condensação e concentração da cromatina em blocos distribuídos ou por todo o núcleo ou somente na sua periferia (marginalização cromatínica), picnose... / Abstract: In this study, tests were conducted to demonstrate the antitumor potential of salivary gland extract of female ticks Rhipicephalus sanguineus 2 (EGS2) days of feeding on the DH82 cell lines HL-60 and (in vitro), as well as the effects of two different concentrations (0,2 and 0,04μg/uL) extracts (one or two injections) obtained from the same glands of the same species at the same time of tick feeding on morphophysiology muscle of hind legs of female Wistar rats inoculated with Walker 256 tumor cells (in vivo). In vitro, tumor cells were exposed to concentrations of the extract for 24 hours and then forwarded to the quantitative assessments (analysis parameters and viability percentage of total cells) and morphology (analysis under conventional light microscopy: hematoxylin and eosin and under confocal microscopy: marking cytoskeletal / core check cell viability, as well as the detection of the activity of caspases 3 and 7). The quantitative results show that the extract EGS2 adversely affects both the viability as the proliferation of tumor cells, and the concentration of 0,2 reduced the viability of DH82 and 0,5 reduced the proliferation of these. For HL-60 concentrations of 0,2 and 0,5 reduced the viability still being the concentration of 0,5 was most effective in this process. Morphological data showed that both DH82 (exposure to 0,2 mg / mL of EGS2) and HL-60 (exposure to 0,2 to 0,5 mg / mL of EGS2) had impaired viability, or in such concentrations there was death of EGS2 cell, which occurred earlier in DH82 (presence of large blocks containing cell debris). Moreover, it was detected cytoplasmic and nuclear changes resulting from exposure to the extracts, which were: a) disruption of the cytoskeleton (actin and tubulin), b) condensation of chromatin and concentration in blocks or distributed throughout the core or only on its periphery (chromatin marginalization), pyknosis, training "blebbs" and nuclear fragmentation, c) activity of... / Doutor

Os carrapatos estão distribuídos por todo mundo e impactam tanto a saúde animal quanto humana. A espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o principal parasita que afeta a bovinocultura nas regiões tropicais e subtropicais do globo, causando grandes prejuísos econômicos. Os métodos de controle estão baseados no uso de acaricidas químicos, o que resulta na seleção de populações resistentes e no risco de poluição do meio ambiente e dos alimentos. As vacinas têm-se mostrado um método de controle factível, e representam uma alternativa ao uso de acaricidas químicos. No entanto, dez anos após a disponibilização da primeira vacina comercial contra carrapatos, ainda não foi encontrada uma formulação capaz de alcançar a proteção necessária para dispensar o uso de agentes químicos. Sendo assim, estudar a biologia do parasita e conhecer mecanismos de importância fisiológica pode ser uma boa estratégia para encontrar moléculas alvo que possam ser usadas como antígenos no desenvovimento de uma vacina eficaz. Com este objetivo, nesta tese foi estudada a reprodução em carrapatos e avaliada a eficácia de uma enzima evolvida neste processo como antígeno vacinal. Foram abordados os processos de vitelogênese e de embriogênese. Em uma primeira etapa, usando carrapatos da espécie Amblyomma hebraeum como modelo, foi investigada a atuação do hormônio 20- hidroxiecdisona (20E) e de fatores adicionais, presentes na hemolinfa, na captação de vitelogenina (Vg) pelos oócitos. Neste trabalho, verificamos que existem diferentes estratégias de controle da captação de Vg pelo ovário nos carrapatos Ixodide, e que para que ocorra capatação de Vg pelos oócitos de A. hebraeum é necessaário um fator adicional presente na hemolinfa das fêmeas. Uma vez que o desenvolvimento do embrião depende da disponibilidade do material do vitelo estocado nos oócitos, a segunda parte da tese explorou uma cisteíno endopeptidase envolvida na degradação de vitelina (Vt) em ovos do carrapato R. microplus denominada Vitellin Degrading Cysteine endopeptidase (VTDCE). As enzimas da classe das cisteíno endopeptidases estão amplamente distribuidas nas fêmeas deste carrapato. Os estudos com VTDCE mostraram que esta é uma enzima de origem materna, com provável síntese extraovariana e transporte pela hemolinfa, até ser internalizada pelos oócitos. A VTDCE está presente durante todo o desenvolvimento embrionário, assim como em larvas. Interessantemente, esta cisteíno endopeptidase apresenta a propriedade de se associar a Vt por um outro sítio, além do sítio ativo. A VTDCE é a enzima mais eficiente na degradação de vitelina (Vt) em ovos de R. microplus, e devido a sua importância fisiológica, a VTDCE foi testada como antígeno em experimento de vacinação de bovinos e desafio com larvas de R. microplus. Os parâmetros mais afetados nos carrapatos alimentados em bovinos vacinados, com relação aos controles, foram o peso das fêmeas ingurgitadas (19,3 %) e a fertilidade dos ovos (17,6 %). Relacionado os parâmetros análisados, vimos que este antígeno confere uma proteção de 21% aos animais imunizados quando infestados por R. microplus. A proteção parcial alcançada pela VTDCE pode ser complementar a de outros antígenos no desenvolvimento de um coquetel antigênico contra carrapatos, uma vez que nenhum antígeno encontrado até o momento foi capaz de oferecer a proteção necessária para ser empregado individualmente na composição de uma vacina. Estudos como os realizados nesta tese contribuem para o melhor entendimento da biologia dos carrapatos, assim como para o desenvolvimento de novos e melhores métodos de controle desses parasitas. / Ticks are distributed worldwide impacting human and animal health. The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the main parasite that affects livestock in tropical and subtropical regions of world, causing large economical losses. Tick control methods are based on the application of chemical acaricides, which has resulted in selection of resistant ticks and a potential risk of environmental pollution and food contamination. Vaccines have been shown to be a feasible tick control method that offers a cost-effective, environmentally friendly alternative to chemical control. However, ten years after the commercialization of the first vaccine against ticks, to identify tickprotective antigens remains a limiting step in the development of an efficient formulation that would avoid the use of chemical acaricides. In face of this situation, to study the parasite biology and understanding physiological important mechanisms could be a good strategy to find new targets to be used in an efficient vaccine. In order that, this thesis subject was to investigate the reproduction process in ticks and to evaluate the efficiency of an enzyme involved in this process as vaccinal antigen. The process of vitellogenesis and embryogenesis were studied. In the first part, using Amblyomma hebraeum ticks as model, the role of 20- hydroxiecdisone and additional hemolymph borne factors in vitellogenin (Vg) uptake by oocytes were investigated. Our findings showed that there are different strategies to control Vg uptake by ovary in Ixodide ticks. Additionally, for Vg uptake in A. hebraeum ovaries, a vitellogenin uptake factor (VUF) present in female hemolymph is required. As embryo development depends on the availability of yolk material stored into the oocytes, in the second part we studied a cysteine endopeptidase involved in Vt digestion in R. microplus eggs, named vitellin-degrading cysteine endopeptidase (VTDCE). Cysteine endopeptidase enzymes are widely distributed in these tick females. Studies with VTDCE demonstrate that it is a maternal derived endopeptidase involved in a route including extraovarian synthesis, transport, and ovary uptake, before internalization by oocytes. VTDCE is present during all tick development, as well as in larva. Interestingly, this cysteine endopeptidase is able to associate with Vt in another site than the active site. VTDCE showed to be the most efficient Vt hydrolytic enzyme in R. microplus eggs. So, supported by its physiological role, VTDCE was used as antigen in bovine vaccination and R. microplus challenge experiment. The most affected biological parameters in ticks fed on vaccinated animals were weight of engorged ticks (19.3 %), and egg fertility (17.6 %). Relating the biological parameters analyzed, bovine vaccination with VTDCE as antigen resulted in an overall protection of 21%. Therefore, this partial protection could be complementary in the formulation of an antigenic cocktail against tick, once there is not one single protein that achieves the protection level necessary for an efficient and practical vaccine development. Studies like that contribute to the better understanding of tick biology, as well as to the development of new and more efficient methods of control.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-22T17:13:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1578494 bytes, checksum: d7fa5a752b4c56f8611d2e504d7afa84 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T17:13:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1578494 bytes, checksum: d7fa5a752b4c56f8611d2e504d7afa84 (MD5) Previous issue date: 2017-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os carrapatos são artrópodes parasitas que se alimentam obrigatoriamente de sangue, sendo capazes de parasitar diversos hospedeiros vertebrados. O intestino dos carrapatos machos e fêmeas possui diferenças morfológicas, tendo como principal função a digestão intracelular dos componentes do sangue obtidos durante a alimentação. Este órgão possui várias proteínas relacionadas com o desenvolvimento, metabolismo e mecanismo de digestão da hemoglobina. Neste trabalho, as proteínas do intestino de carrapatos Amblyomma sculptum, machos e fêmeas foram analisadas com o auxílio da cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas. O algoritmo PEAKS identificou um maior número de proteínas do intestino nas estratégias fracionadas e não fracionadas em relação aos algoritmos MASCOT e SCAFFOLD, tanto para o banco de dados Chelicerata quanto para o banco de dados Oryctolagus, utilizando os analisadores Ion Trap e QTOF. Pelo KOG, as classes das proteínas analisadas no intestino dos carrapatos machos e fêmeas que se destacaram estão envolvidas na dinâmica e estrutura da cromatina, tradução, biogênese e estrutura ribossomal, modificação pós-traducional, turnover proteico, chaperonas, citoesqueleto, conversão e produção de energia, metabolismo e transporte de carboidratos, lipídeos e íons inorgânicos. Na identificação das proteínas do hospedeiro, a hemoglobina, componente de maior volume no sangue, foi encontrada em ambos os sexos. As informações obtidas neste trabalho podem fornecer uma base sobre a fisiologia do intestino de machos e fêmeas A. sculptum e auxiliar na escolha de proteínas como alvos moleculares potenciais, visando avanço nas estratégias de controle aplicadas para estes artrópodes. / Ticks are parasitic arthropods that feed necessarily of blood, being able of parasitizing various vertebrate hosts. The midgut of males and females ticks has morphological differences, having as main function the intracellular digestion of blood components obtained during feeding. This organ has several proteins related to the development, metabolism, and mechanism of hemoglobin digestion. In this work, the midgut proteins of Amblyomma sculptum ticks, males and females were analyzed with aid of liquid chromatography coupled with mass spectrometry. The PEAKS algorithm identified a larger number of proteins in fractional and non-fractionated strategies in relation to algorithms MASCOT and SCAFFOLD for both Chelicerata and Oryctolagus databases, using Ion Trap and QTOF analyzers. By KOG, the classes of proteins analyzed in the midgut of the males and females ticks are involved in the chromatin structure and dynamics, translation, ribosomal structure and biogenesis, post- translational modification, protein turnover and chaperones, cytoskeleton, energy production and conversion, metabolism and transport of carbohydrates, lipids and inorganic ions. In the identification of the host proteins, the hemoglobin, greater blood volume component, was found in both genders. The informations obtained in this work can provide a basis about the midgut phisiology of males and females A. sculptum and assist in the selection of proteins as potencial molecular targets, aiming advance in the control strategies applied to these arthropods.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-10-25T17:11:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1261921 bytes, checksum: 067fce7911dd12871ca7da328ba82529 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T17:11:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1261921 bytes, checksum: 067fce7911dd12871ca7da328ba82529 (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O carrapato Amblyomma sculptum pertence ao complexo Amblyomma cajennnense, taxon mais importante na transmissão e como hospedeiro da bactéria Rickettsia rickettsii, principal agente etiológico da Febre Maculosa Brasileira e da Febre Maculosa das Montanhas Rochosas nos EUA. Como membro deste complexo de espécies, o carrapato A. sculptum é atualmente muito importante sob o aspecto médico veterinário atuando como vetor deste agente zoonótico no Brasil. Seu papel no ciclo biológico da riquétsia, bem como a relação Rickettsia-carrapato, precisam ser bem compreendidos pois estudos recentes encontraram esta espécie de bactéria no carrapato A. sculptum. Como parte desta relação, as funções de RNAs não codificantes de cadeias longas (lncRNA) são desconhecidas e precisam ser descobertas. Os lncRNAs estão envolvidos em uma infinidade de atividades celulares tais como transcrição, silenciamento gênico e abertura cromossômica, por exemplo. Dessa forma, apresentamos aqui uma abordagem in silico da modulação de lncRNAs pela Rickettsia amblyommii em carrapatos da espécie A. sculptum. Tomando como dados trabalhos publicados anteriormente nós identificamos e avaliamos possíveis lncRNAs para expressão diferencial em intestinos e ovários desta espécie de carrapato. Dois montadores de sequencias foram testados, Trinity e CLC Genomics, para construção de contigs e um filtro a partir de um pipeline caseiro para selecionar apenas sequências com características de lncRNA. Um total de 31.888 e 23.733 contigs foram montados pelo Trinity e CLC Genomics, respectivamente. Nós anotamos mais de 500 sequências possíveis de lncRNA contra os bancos de dados RefSeq RNA, RNA Central e NONCODE. Nossos resultados sugerem que a R. amblyommii está induzindo expressão diferencial de lncRNAs nos tecidos dos intestinos e ovários. Nosso trabalho contribui para o aumento do banco de dados de lncRNA de carrapatos bem como fornecer idéias iniciais de quais sequências de lncRNA estão envolvidas na relação Rickettsia- carrapato / The Amblyomma sculptum tick belongs to Amblyomma cajennnense complex, the most important taxon in transmission and host for Rickettsia rickettsii bacteria, the main etiologic agent of Brazilian Spotted Fever in Brazil and Rocky Mountain Spotted Fever in USA. As a member of this species complex, A. sculptum tick is actually very important under human and veterinary subject acting as vector for this zoonotic agent in Brazil. Its role in biological cycle of rickettsia strains, as well Rickettsia-tick interactions, still need to be better understood since recent studies found these strains infecting A. sculptum ticks. As putative modulators of these pathogen-host interaction, the roles of long non-coding RNAs (lncRNA) of ticks are unknown and need to be discovered and characterized. The lncRNAs are involving in modulation of a plethora of cell activities as transcription, gene silencing and chromosome opening, for example. Thus, herein we present an in silico approach for analyze the modulation of lncRNAs by R. amblyommii in A. sculptum tick. Using previously published data sets of A. sculptum transcriptomes, we identified putative lncRNAs and evaluated for differential expression in midgut and ovaries in this tick specie. Two assemblers were tested, Trinity and CLC Genomics, to construct the contigs and a pipeline to select the sequences with lncRNA characteristics. We obtained 31,888 and 23,733 contigs of putative lncRNAs using Trinity and CLC Genomics, respectively. We further identified more than 500 sequences of putative lncRNA that significantly aligned to sequences of RefSeq RNA, RNA Central and NONCODE databases. The transcriptome analysis further suggests that R. amblyommii is inducing differential expression of putative lncRNAs in midgut and ovary tissues. The work herein contributes for tick lncRNA database increasing and the initials insights of which lncRNA sequences are involving in Rickettsia-tick relationship

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-08T19:24:42Z No. of bitstreams: 1 TESE_PesquisaRickettsiaAnimais.PDF: 2788368 bytes, checksum: 2bae56a7ebc11ae8a045b81894ff639f (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-11T17:53:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_PesquisaRickettsiaAnimais.PDF: 2788368 bytes, checksum: 2bae56a7ebc11ae8a045b81894ff639f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-11T17:53:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_PesquisaRickettsiaAnimais.PDF: 2788368 bytes, checksum: 2bae56a7ebc11ae8a045b81894ff639f (MD5) Previous issue date: 2010 / A febre maculosa é uma doença transmitida por carrapatos e tem como agente etiológico bactérias do gênero Rickettsiia, envolvendo no ciclo da Febre Maculosa Brasileira, cães, roedores e marsupiais como reservatórios vertebrados e carrapatos e pulgas como seus vetores invertebrados com os humanos atuando como hospedeiros acidentais, e constituindo elo terminal no ciclo dessas bactérias. A patogenicidade atribuída a estes microorganismos é ainda desconhecida para varias espécies, bem como os fatores de risco, demográficos e sazonais relacionados às respectivas doenças ocasionadas. Para a realização deste estudo, foram selecionados dois municípios do estado de Minas Gerais com prévio histórico de ocorrência destas enfermidade em humanos, sendo dois casos recentes no município de Pingo D'água, localizado na região do Vale do Rio Doce e o município de Santa Cruz do Escalvado, localizado no Vale do Piranga, Zona da Mata Mineira, estado de Minas Gerais foco antigo para riquetsioses, que sofreu alteração recente em sua paisagem natural, devido a construção de uma usina hidrelétrica na localidade de Soberbo no ano de 2004. Assim, com o objetivo de melhor compreender a atual situação epidemiológica das riquetsioses nesses municípios, dentro de uma concepção de ocupação e transformação do espaço geográfico por ação antrópica, buscou-se avaliar o nível de contato destes agentes nas populações de animais domésticos e sinantrópicos, realizaram-se ensaios sorológicos e ferramentas da biologia molecular. Eqüinos, cães, roedores e gambás foram capturados e identificados, tendo sido ainda coletadas amostras de soro bem como ectoparasitas. Dos roedores capturados foram colhidas amostras de tecidos (fígado e baço), e dos gambás amostras de sangue total, sendo realizado ainda nestes animais colheita de material por swab anal. Das amostras de sangue, tecidos, ectoparasitas e swabs anal extraiu-se DNA, que foram amplificadas através de PCR usando oligonucleotídeos iniciadores para amplificação gênero específica do gene da citrato sintase (gltA). Os produtos amplificados obtidos foram visualizados em gel de agarose a 1,5%. Apenas amostras de ectoparasitas das espécies Amblyomma cajennense coletados de cães, eqüinos, gambás-Didelphis aurita e Ctenocefalides canis e Ctenocefalides felis em pulgas de gambás apresentaram resultados positivos à PCR. As amostras de soros de animais silvestres e domésticos foram investigadas quanto à presença de anticorpos reativos à antígenos de Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettsia belli, Ricketssia rhipicephali e Rickettsia amblyommii pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Amostras que apresentaram títulos iguais ou superiores a 1:64 foram considerados positivas para Rickettsia. No município de Pingo D’ Água das 46 amostras de soros de roedores analisadas, dentre estas 31 da espécie Rattus rattus, 7 Oryzomys subflavus, 7 Nectomys squamipes e 1 Bolomys sp. 26 (83,88%) das amostras de R. rattus, seis (85,72%) das amostras de Oryzomys e Nectomys e a única amostra de soro de Bolomys analisada apresentaram resultados positivos para bacterias do grupo da febre maculosa. No município de Santa Cruz do Escalvado das 62 amostras de soro de roedores analisadas, dentre estas 32 da espécie R. rattus, 2 Oryzomys subflavus, e 23 Nectomys squamipes e 5 Akodon sp. 30 amostras de R. rattus testadas, 30 foram reativas à RIFI para Rickettsia do Grupo das Febres Maculosas, totalizando 93,75% das amostras. Os dados sorológicos obtidos nos municípios de Pingo D’ Água e Santa Cruz do Escalvado, apontam a espécie R. rattus como a mais representativa entre os roedores, o que a credencia para participação no ciclo enzoótico das riquetsioses nas referidas regiões. Levando em consideração o agravante de essa ser a espécie mais sinantrópica em relação às outras estudadas neste projeto, é importante atentar-se para o possível risco de dispersão de organismos do gênero Rickettsia por esses animais no município. Foram analisadas ainda 42 amostras de soros de eqüinos e 24 amostras de soros de cães provenientes de Pingo D’ Água, com reatividade sorológica contra riquétsias do GFM em 16 (38,09%) dentre as amostras de eqüinos e em duas (8,33%) dentre as amostras de cães. Em Santa Cruz do Escalvado foram analisadas 66 amostras de soros de eqüinos e 67 amostras de soros de cães, verificando-se uma sororeatividade contra riquétsias do GFM em dez (15,15%) dentre as amostras de soros de eqüinos e em 14 (20,89%) dentre as amostras de soros de cães. Das 38 amostras de soro de D. aurita coletados no município de Santa Cruz do Escalvado, em 16 verificou-se a presença de Rickettsia, sendo que em 42,1% dos soros foram reativos contra R. rickettsii, 39,5% contra R. parkeri, 18,4% contra de R. amblyommi e 2,6% contra R. felis. Os achados sorológicos e de biologia molecular obtidos neste trabalho recomendam a manutenção de uma vigilância epidemiológica permanente nos municípios estudados, bem como em seu entorno, buscando-se desta maneira evitar a ocorrência de novos casos humanos causada pela invasão destes focos naturais pelo homem ou pela dispersão de potenciais reservatórios e vetores de agentes riquetsiais para novas áreas do estado ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / Spotted fever is a disease transmitted by ticks presenting as his etiological agent bacteria of the genus Rickettsia. Involved in her natural cycle, dogs, rodents, and marsupials actuated as vertebrate reservoirs, been ticks, and fleas the invertebrates vectors. Humans actuating as accidental hosts are becoming the final link in the cycle of these bacteria. The pathogenicity attributed to these microorganisms is still unknown for several of the Rickettsia species, including the involved factors of risk and the demographic and seasonal factors related. For this study, we selected two counties in the state of Minas Gerais, Brazil, that have prior history of occurrence of this disease in humans: Pingo D'Água, located in Vale do Rio Doce, with two recent cases reported, and Santa Cruz do Escalvado, located in Vale do Piranga, Zona da Mata Mineira, a former focus for rickettsial diseases, which has suffered recent change in their natural landscape due to the construction of a hydroelectric plant in the town of Superb in 2004. Thus, in order to better understand the current epidemiological situation of the rickettsial diseases in these municipalities, under a conception of occupation and transformation of geographic space by anthropic actions, we sought to evaluate the level of transmission of these agents in populations of domestic and synanthropic animals, realizing serological and molecular biology assays. Horses, dogs, rodents and opossums were captured and identified, from whom were collected serum samples and ectoparasites. From rodents captured were collected samples of tissues (liver and spleen). From opossums were collected samples of whole blood and anal swab. From blood, tissues, ectoparasites, and anal swabs were extracted DNA samples, which were subsequently amplified by PCR using primers for amplification of Rickettsia genus-specific citrate synthase gene (gltA). The amplified products obtained were visualized in agarose gel 1.5%. Only samples of parasites of the species Amblyomma cajennense collected from dogs, horses, and opossums, and fleas (Ctenocefalides canis and Ctenocefalides felis) collected from opossums tested positive by PCR. Serum samples from wild and domestic animals were investigated by Immunofluorescence Assay (IFA) for the presence of antibodies reactive to antigens of Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettsia belli, Rickettsia rhipicephali and Rickettsia amblyommii. Samples that had titers equal or greater than 1:64 in the IFA were considered positive for Rickettsia. In the municipality of Pingo D’Água, from 46 serum samples rodents tested, among these 31 species of Rattus rattus, seven Oryzomys subflavus, seven Nectomys squamipes, and one Bolomys sp., 26 (83.88%) samples of R. rattus, six (85.72%) samples of Oryzomys and Nectomys, and the single serum sample of Bolomys examined were positive for bacteria of the spotted fever group (SFG). In Santa Cruz do Escalvado, serum samples from 62 rodents tested, among these 32 species of R. rattus, two Oryzomys subflavus and five Nectomys squamipes, and 23 Akodon sp., 30 samples of R.rattus were reactive by IFA for Rickettsia agents from the SFG, totaling 93.75% of the samples. The serological data obtained in the municipalities of Pingo D'Água and Santa Cruz do Escalvado, indicated that the species R. rattus is the most representative among the rodents, which accredits to participate in the enzootic cycle of rickettsial diseases in these regions. Taking into account the aggravating factor that is the most synanthropic species over all others studied in this project, it is important to pay attention to the possible risk of dispersal of the genus Rickettsia by these animals in the municipalities. We also analyzed serum samples of 42 horses and 24 serum samples of dogs from Pingo D'Água, which showed serological reactivity against rickettsiae from SFG. Sixteen (38.09%) among the samples from horses and two (8, 33%) among the samples of dogs tested showed positive results. In Santa Cruz do Escalvado were we analyzed 66 serum samples from horses and 67 serum samples from dogs, were found a seroreactivity against rickettsiae organisms of SFG in ten (15.15%) among the serum samples of horses and in 14 (20 89%) among the serum samples of dogs tested. Of 38 serum samples from D. aurita collected in Santa Cruz do Escalvado, in 16 were verified the response against Rickettsia, been 42.1% of sera reactive against R. rickettsii, 39.5% against R. parkeri, 18.4% against R. amblyomma and 2.6% against R. felis. The findings of serological and molecular biology in this work recommend the maintenance of effective epidemiological surveillance in the municipalities studied, as well as its surroundings, searching in this way avoid the occurrence of new human cases of outbreaks caused by invasion by man or by natural dispersal of potential reservoirs and vectors for Rickettsia to new areas of the state.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Agroecossistemas / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:44:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 229448.pdf: 508386 bytes, checksum: bfa3326df99dd265e6b06cadb9c53193 (MD5)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4442.pdf: 2821536 bytes, checksum: ea15d47fe66848e3d4486eab59656124 (MD5) Previous issue date: 2012-06-04 / Financiadora de Estudos e Projetos / Infestations caused by ectoparasites are among the main problems that affect stock raising in tropical countries, and in Brazil, the Rhipicephalus (Boophilus) tick is responsible for substantial losses in the animal production. The aim of this study was to evaluate the response of three genetic groups of cattle artificially infested with Rhipicephalus (Boophilus) microplus. For this, skin samples from Nellore (NX) and crossbreeds, Senepol x Nellore (SN) and Angus x Nellore (TA) heifers were collected before and 24 hours after the last artificial infestation with Rhipicephalus (Boophilus) microplus larvae for gene expression analysis and histology. We collected hair and performed behavioral analysis in order to relate them to the cattle parasite load. There were significant differences (P <0.01) for the tick count within three studied groups. TA animals (0.92 ± 0.07) had higher mean and the NX group (0.28 ± 0.07), the lowest mean. In the differential leukocyte count, TA animals had higher numbers of monocytes that NX (P <0.05), not differing from SN. No significant differences were evaluated for other leukocytes. However, the NX genetic group had higher mean for mast cells than SN and TA (P <0.01). NX had more CD4 cells that TA that did not differ from SN. Negative correlation was observed between the number of ticks and CD4 T cells. In the hair and haircoat analysis, TA showed the higher values of haircoat mean (CP) and mass density (MD) of hair than SN and NX (p <0.05), which did not differ from each other. For the number of hairs per sample and number of hair/cm2, NX had larger mean (p <0.05) than SN and TA, which did not differ. Results of Pearson correlations indicated that CP and DM have a positive correlation (p <0.05) with tick count. Regarding grooming behavior it has been observed that the total of self-grooming, as well as, allogrooming events influenced the tick count evaluated, and that there is a negative correlation with the tick number, helping to reduce this parasite, especially in Nellore. On 1, 4, 6 and 7 days after infestation and at the times 7:00, 9:00 and 12:00 h animals performed more grooming events when compared to other periods. According to the large scale gene expression results, there was no difference within genetic groups. The comparison between the groups before and after 24 hours infestation showed that 1,502 genes were differentially expressed. Of these, 851 were activated and 651 had reduced expression after challenge. The microarray experiment was validated by quantitative real time PCR. 12 Among the genes and pathways activated in response to tick, the chemokine genes, MAPK signaling pathways and Jak-Stat, cytokine receptors, complement and focal adhesion molecules as well as calcium channel genes stood out. Such genes and pathways can be identified as candidates to play the role of host protection at this time of bovine parasitic cycle. In this way, it was observed that mechanisms as grooming and increase of mast cells should confer resistance to tick. Furthermore, we found metabolic pathways that were not previously described in the literature may be novel targets for the development of strategies prevent tick infestation, as vaccines and drugs. / Entre os principais problemas da pecuária brasileira está o parasitismo por carrapatos da espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta de bovinos de três grupos genéticos infestados com R. microplus. Para isso, amostras de pele de fêmeas Nelore (NX) e cruzadas, Senepol x Nelore (SN) e Angus x Nelore (TA), foram coletadas, antes e após a infestação artificial com larvas de R. microplus para análises de expressão gênica e de histologia. Foram também coletados pelos e realizada análise comportamental visando relacioná-los com a carga parasitária dos animais. Foi verificada diferença significativa (P<0,01) para a contagem de carrapatos entre os três grupos avaliados, sendo que os animais TA (0,92±0,07) apresentaram maiores médias e o grupo NX (0,28±0,07), a menor média. Na contagem diferencial de leucócitos, animais TA tiveram maiores (P<0,05) quantidades de monócitos que NX, não diferindo de SN. Não houve diferença significativa para os outros leucócitos avaliados. Entretanto, o grupo genético NX teve maiores médias (P<0,01) de mastócitos que SN e TA. NX apresentou mais células TCD4 que TA, não diferindo de SN. Foi observada correlação negativa entre o número de carrapatos e de células TCD4. Nas análises de pelo e pelame, o grupo genético TA apresentou maiores valores das características comprimento médio de pelo (CP) e densidade de massa (DM) dos pelos que SN e NX (p < 0,05), que não diferiram entre si. Já para as características de número de pelos por amostra e número de pelos/cm2, NX apresentou maiores médias (p < 0,05) que SN e TA, que não diferiram entre si. Os resultados da correlação de Pearson indicaram que CP e DM têm correlação positiva (P<0,05) com a contagem de carrapatos. Na análise de comportamento foi possível observar que o total dos eventos de auto-limpeza (grooming) avaliados influenciou a contagem de carrapatos e que há correlação negativa com o número de carrapatos, auxiliando a redução desse parasita, especialmente na raça Nelore e que nos dias 1, 4, 6 e 7 após a infestação e nos horários das 7:00, 9:00 e 12:00 h os animais realizaram mais eventos de grooming, quando comparados aos outros períodos. De acordo com os resultados de expressão gênica em larga escala das amostras de pele, não foi possível observar influência do grupo genético na expressão dos genes. A comparação entre os grupos antes e depois da infestação mostrou que 10 1502 genes foram diferencialmente expressos. Desses, 851 foram ativados e 651 tiveram sua expressão reduzida após o desafio. Os resultados encontrados no experimento de microarranjos foram validados por PCR quantitativo em tempo real. Entre os genes e vias metabólicas ativados na resposta ao carrapato destacaram-se as quimiocinas, os genes de sinalização das vias MAPK e Jak-Stat, os receptores de citocinas, do complemento e de moléculas de adesão focal. Tais vias e genes podem ser apontados como candidatos a desempenhar papel de proteção do hospedeiro bovino nesse período do ciclo parasitário. Dessa maneira, foi possível observar que mecanismos como, comportamento de auto-limpeza e aumento no número de mastócitos devem conferir resistência ao carrapato. Além disso, foram encontradas vias metabólicas ainda não descritas na literatura que podem ser novos alvos para o desenvolvimento de estratégias de combate ao carrapato, como vacinas e fármacos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:05:16Z : No. of bitstreams: 1 veronez_va_dr_jabo.pdf: 622519 bytes, checksum: 8c09bda0244e349ed6030a5dfb6aedd7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cerrado, considerado a savana sul-americana, abrange cerca de dois milhões de km2 e é muito rica em espécies endémicas, mas ameaçada pela agricultura. Neste trabalho são apresentadas espécies de carrapatos e sua distribuição sazonal e relativa dentro das diferentes fitofisionomias na Estação Ecológica do Panga, uma pequena reserva de Cerrado, no Estado de Minas Gerais, Brasil. Ao longo de dois anos foram coletados do ambiente 2.694 carrapatos. Destes, 73,5% eram da espécie Amblyomma cajennense e 0,6%. Amblyomma dubitatum Todos os outros carrapatos (25,9%) eram formas imaturas e caracterizados como Amblyomma spp. Os carrapatos adultos de A. cajennense apresentaram picos numéricos na primavera e as ninfas no inverno dos dois anos. Bolos de larval Amblyomma spp foram encontrados no outono e inverno. Os carrapatos adultos (46,7%) e ninfas (39,5%) foram mais freqüentemente encontrados em matas, enquanto a maioria dos grupos de larvas foram encontradas nas veredas ou próximo a elas (39%). Amblyomma cajennense, Anocentor nitens, Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Rhipicephalus sanguineus foram encontrados em animais domésticos de propriedades vizinhas. Não foram encontradas formas características de Rickettsia na hemolinfa de 497 A. cajennense e de um A. dubitatum. Os resultados confirmam relatos anteriores sobre a prevalência esmagadora de carrapatos A. cajennense no bioma Cerrado do Brasil e acrescentou informações sobre as preferências de habitat desta espécie de carrapato, um vetor importante no Brasil da febre maculosa. / Cerrado biome, the South American savannah, covers about two million km2 and is very rich in endemic species but threatened by agriculture. In this work free-living tick species are presented, and their seasonal and relative distribution within the various phytophysiognomies in a Stacey Ecologic Panga, small Cerrado reserve, in Minas Gerais State, Brazil. Overall 2,694 free-living ticks were found during a two years sampling period with CO2 traps and cloth dragging. Of these, 73.5% were Amblyomma cajennense and 0.6% Amblyomma dubitatum. All other ticks (25.9%) were retained as Amblyomma spp. Adults of A. cajennense peaked in spring, the nymphs in winter of both years. Amblyomma larval clusters were found in autumn and winter. Adult ticks (46.7%) and nymphs (39.5%) were most often found in woodlands, whereas most larval clusters were found in valley-side marshes (39%). Amblyomma cajennense, Anocentor nitens, Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Rhipicephalus sanguineus ticks were found on domestic animals from neighboring properties. Search for Rickettsia in the hemolymph of 497 A. cajennense and one A. dubitatum ticks yielded negative results. Results confirmed earlier reports on the overwhelming prevalence of A. cajennense ticks in the Cerrado biome of Brazil and added information to habitat preferences of this tick species, a major vector in Brazil of the Rocky Mountain spotted fever.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:05Z : No. of bitstreams: 1 000832891.pdf: 490565 bytes, checksum: 77601b8f608fafdf82886451724e56fc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No presente trabalho foram realizados testes para demonstrar o potencial antitumoral de extratos de glândulas salivares de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus com 2 (EGS2) dias de alimentação sobre células das linhagens DH82 e HL-60 (in vitro) , bem como os efeitos de duas concentrações diferentes (0,2 e 0,04μg/μL) de extratos (com uma ou duas injeções) obtidos a partir das mesmas glândulas da espécie de carrapato com o mesmo tempo de alimentação sobre a morfofisiologia da musculatura de pernas posteriores de ratas Wistar inoculadas com células do tumor de Walker 256 (in vivo). In vitro as células tumorais foram expostas às concentrações do extrato pelo período de 24 horas e então encaminhadas para as avaliações quantitativa (análise dos parâmetros viabilidade e o número total de células) e morfológica (análises sob microscopia de luz convencional: coloração pela hematoxilina e eosina, e sob microscopia confocal: marcação do citoesqueleto/núcleo, verificação da viabilidade celular, bem como detecção da atividade das caspases 3 e 7). Os resultados quantitativos mostraram que o extrato EGS2 afetou negativamente tanto a viabilidade quanto a proliferação das células tumorais, sendo que a concentração de 0,2 reduziu a viabilidade das DH82 e a de 0,5 reduziu a proliferação destas. Para as células HL-60 as concentrações de 0,2 e de 0,5 reduziram a viabilidade, sendo ainda que a concentração de 0,5 foi mais eficaz nesse processo. Os dados morfológicos revelaram que tanto as DH82 (exposição a 0,2 μg/mL do EGS2) quanto as HL-60 (exposição a 0,2 e 0,5 μg/mL do EGS2) tiveram a viabilidade comprometida. Além disso, detectou-se alterações citoplasmáticas e nucleares como: a) desorganização do citoesqueleto (actina e tubulina), b) condensação e concentração da cromatina em blocos distribuídos ou por todo o núcleo ou somente na sua periferia (marginalização cromatínica), picnose... / In this study, tests were conducted to demonstrate the antitumor potential of salivary gland extract of female ticks Rhipicephalus sanguineus 2 (EGS2) days of feeding on the DH82 cell lines HL-60 and (in vitro), as well as the effects of two different concentrations (0,2 and 0,04μg/uL) extracts (one or two injections) obtained from the same glands of the same species at the same time of tick feeding on morphophysiology muscle of hind legs of female Wistar rats inoculated with Walker 256 tumor cells (in vivo). In vitro, tumor cells were exposed to concentrations of the extract for 24 hours and then forwarded to the quantitative assessments (analysis parameters and viability percentage of total cells) and morphology (analysis under conventional light microscopy: hematoxylin and eosin and under confocal microscopy: marking cytoskeletal / core check cell viability, as well as the detection of the activity of caspases 3 and 7). The quantitative results show that the extract EGS2 adversely affects both the viability as the proliferation of tumor cells, and the concentration of 0,2 reduced the viability of DH82 and 0,5 reduced the proliferation of these. For HL-60 concentrations of 0,2 and 0,5 reduced the viability still being the concentration of 0,5 was most effective in this process. Morphological data showed that both DH82 (exposure to 0,2 mg / mL of EGS2) and HL-60 (exposure to 0,2 to 0,5 mg / mL of EGS2) had impaired viability, or in such concentrations there was death of EGS2 cell, which occurred earlier in DH82 (presence of large blocks containing cell debris). Moreover, it was detected cytoplasmic and nuclear changes resulting from exposure to the extracts, which were: a) disruption of the cytoskeleton (actin and tubulin), b) condensation of chromatin and concentration in blocks or distributed throughout the core or only on its periphery (chromatin marginalization), pyknosis, training blebbs and nuclear fragmentation, c) activity of...