El cáncer de próstata es una neoplasia frecuente con una incidencia en aumento. La etiología es desconocida pero existen factores de riesgo de carcinogénesis, entre los que destacan la edad avanzada, la etnia negra y la latitud elevada. El diagnóstico se realiza mediante la determinación del antígeno prostático específico (PSA) y el tacto rectal para indicar una biopsia prostática transrectal. Diversos estudios epidemiológicos han analizado la relación entre la vitamina D3 y el cáncer de próstata. La hipótesis de trabajo es que la disminución de la concentración sérica de 25-hidroxivitamina D3 (25-OHD3) y la elevación de los valores de parathormona (PTH) se relacionan con el riesgo de padecer cáncer de próstata y con su agresividad tumoral. Los objetivos son analizar la relación entre los valores plasmáticos de 25-OHD3 y PTH con el riesgo de desarrollar cáncer de próstata y con su agresividad tumoral. Para ello, se realiza un estudio epidemiológico analítico no experimental que consta de 479 pacientes a los que se les realiza una biopsia de próstata. Se clasifican los pacientes en 262 controles y 217 casos, que se clasifican en función de los criterios de d’Amico en relación a la agresividad tumoral. Se realizan las determinaciones plasmáticas en ambos grupos y se realiza el análisis estadístico correspondiente. Los resultados no objetivan diferencias significativas en las concentraciones plasmáticas de 25-OHD3 y PTH en relación con el diagnóstico de cáncer de próstata. Tampoco se detectan diferencias significativas en los valores de ambas hormonas al analizar la agresividad tumoral. Así, no hemos evidenciado en la población estudiada una relación significativa entre los valores séricos de 25-OHD3 y PTH con el riesgo de ser diagnosticado de cáncer de próstata ni tampoco con la agresividad tumoral de los cánceres detectados. / Prostate cancer is a frequent malignant tumour. The incidence is higher than years ago. The etiology is unknown but there are risk factors for prostatic carcinogenesis such as age, race and latitude. Patients were diagnosed by prostate biopsy using serum prostate specific antigen (PSA) determination and digital rectal exam. Many epidemiological studies have analyzed the relation between serum vitamin D3 concentrations and prostate cancer risk. Our hypothesis is that low serum 25-hydroxyvitamin D3 (25-OHD3) levels and high serum parathyroid hormone (PTH) concentrations are in relation to subsequent development of prostate cancer and tumoral aggressiveness. Our objectives are analyzed the relation between serum 25-OHD3 and PTH with prostate cancer risk and tumoral aggressiveness. For that reason, we performed an epidemiological analytical non experimental study with 479 patients to whom were performed a prostate biopsy. There are 262 controls and 217 cases. Of the 217 prostate cancer cases, they were classified by d’Amico criteria. The results examine no statistically association between serum 25-OHD3 and PTH in relation with prostate cancer. Neither there are significant association between serum 25-OHD3 and PTH and prostate aggressiveness. As a conclusion, in our study we have not seen a significant association between serum levels of 25-OHD3 and PTH and prostate cancer risk either prostate aggressiveness.

Las enfermedades cardiovasculares, subgrupo de enfermedades crónicas no trasmisibles, constituyen un importante problema de salud pública, no solo por su magnitud, reflejada en el primer lugar que ocupan entre las causas de morbi-mortalidad en el mundo, sino por su elevado poder discapacitante. Según la OMS cada año mueren más personas por esta causa que por otra. Se calcula que en 2005 murieron por esta causa 17,5 millones de personas, lo cual representa un 30% de todas las muertes registradas en el mundo; 7,6 millones de esas muertes se debieron a la cardiopatía coronaria, y 5,7 millones a los AVC. Las causas más importantes de las enfermedades cardiovasculares son los factores de riesgo. El objetivo de este estudio es cuantificar la prevalencia de los factores de riesgo cardiovascular, en el año 2008, en la población urbana del estado Lara, Venezuela. La población objetivo de este estudio esta constituida por residentes del área urbana del estado Lara, Venezuela, con 15 o más años de edad. El muestreo realizado se asocia a un diseño complejo, en cuatro etapas por conglomerados dado que se agrupan unidades urbanas en una mayor, que combina la selección aleatoria simple y sistemática de las unidades sin reemplazo. Resultado: Del total de individuos seleccionados para encuestar fueron 1675, de los cuales se entrevistó a 1294. Las prevalencias estimadas de los diferentes factores de riesgos para las enfermedades cardiovasculares fueron: El sedentarismo resultó ser la más alta prevalencia (47,6%), siendo mayor en las mujeres que en los hombres, seguida de la hipertensión, una de cada tres personas son hipertensas siendo esta mayor en hombres que en las mujeres, así como la diabetes resultó ser la menor prevalencia (5%), una de cada cinco personas presentan el factor de riesgo de tabaquismo y/o obesidad, siendo en ambas mayor en hombres que en las mujeres y una de cada seis personas tienen el colesterol alto, sin diferencia importante por sexo. Conclusiones: La prevalencia de hipertensión arterial, la obesidad y el sedentarismo en la población urbana de 15 o más años de edad se puede considerar alta. Las personas entrevistadas manifestaron conocer bien las consecuencias que genera la presión arterial elevada. Los resultados encontrados en relación a la prevalencia de angina de pecho, sugieren que en el grupo de edad 25 a 44 años existen diferencias entre hombres y mujeres, mientras que en el grupo de 45 a 74 años, no. / Cardiovascular diseases, which form a subgroup of non-transmisible chronic diseases, constitue a key problem of public health, not only in its magnitude, as manifested in the fact that they are the primary cause of morbimortality in the world, but also for its high disability power. According to the WHO, every year more people die of this cause than of any other. It was calculated that in 2005, 17.5 million people died of this cause, which represented 30% of all deaths registered in the world; 7.6 million of these deaths were due to coronary cardiopathies, and 5.7 million were affected by some AVC. The most important causes of cardiovascular diseases are risk factors.The main objective is to quantify the prevalence of cardiovascular risk factors, in 2008, among the urban population at Lara’s state in Venezuela. The purpose of this study is an analysis of a group of people aged above 15 years in the urban area of Lara’s state in Venezuela. The sampling is associated with a complex design of analysis divided into four phases for a conglomerate of population that belong to a bigger unit of population, the one combine the simple aleatory and systemic selection of the units without replacement. Results: The total number of people chosen for the survey was 1675, of which 1294 were interviewed. The results of estimated prevalence of the different risk factors for cardiovascular desease were: firstly, a sedentary lifestyle had the highest prevalence (47.6 %), this percentage was higher among women than men; the second highest prevalence was hypertension, where one above three persons had hypertension, this proportion being higher among women than in men; thirdly, diabetes had the least prevalence (5%); the last group there were smokers and/or obese people, where in both was higher among men than in women. In this last group, one of every six persons showed a higher cholesterol, independently of sex gender. Conclusions:The prevalence of high blood pressure, obesity and a sedentary lifestyle can be considered as higher in the urban population over the age of 15 years. The interviewed individuals showed well enough to know the consequences generated by a high blood pressure. The results found in relation to the prevalence of angina pectoris suggest that in the age group 25 - 44 years old there are differences between men and women, whereas in the group between 45-74 years, there were no gender differences.

En la actualidad los Estados presentan un elevado número de relaciones entre ellos, de las cuáles un alto porcentaje se regula en tratados internacionales. De esa cuenta, se estimó interesante estudiar la forma como se compatibiliza lo regulado en tales disposiciones internacionales con el derecho interno de cada uno de los Estados signatarios, por lo que surgió la inquietud de analizar el régimen constitucional establecido para los tratados internacionales, tema que al ser delimitado se circunscribió a la región centroamericana -conformada por los Estados que formaron parte de la Federación Centroamericana-, a la que pertenece la autora de la investigación. Para el desarrollo del trabajo se trazaron como preguntas de investigación ¿qué régimen se prevé en la Constitución de cada Estado centroamericano para regular lo referente a los tratados internacionales?, así como, establecer ¿cuáles son las normas de la Constitución de cada Estado centroamericano que regulan lo referente a los tratados internacionales? y ¿cuál ha sido el aporte de la jurisprudencia constitucional para determinar el régimen de los tratados internacionales en el área centroamericana?. A efecto de responder las preguntas trazadas se dividió el trabajo en tres capítulos, de los cuales el primero de ellos abarca las cuestiones doctrinarias y de derecho comparado frente al área Centroamericana con relación a la armonización del derecho interno e internacional. El segundo y tercer capítulo presentan el punto central de la investigación, desarrollándose en el segundo lo referente a Guatemala, y el análisis de cómo se recibe el derecho internacional derivado de tratados en el ámbito interno, según la regulación establecida en la Constitución, su estudio según autores que han expuesto con relación al tema y análisis de jurisprudencia con relación a esos casos. El último capítulo expone el caso de El Salvador, Honduras, Nicaragua y Costa Rica, siguiendo la misma modalidad del estudio de la normativa constitucional y legal, autores que relacionan la temática de cada Estado y su jurisprudencia. En forma seguida se estudian avances de Unión Centroamericana, mencionándose los dos tribunales que ejercen jurisdicción en el área, siendo éstos la Corte Centroamericana de Justicia y la Corte Interamericana de Derechos Humanos. Debido a que esta última Corte ejercer jurisdicción dentro de los Estados objeto de estudio, se analiza también jurisprudencia relacionada con la relación derecho interno e internacional, con lo que se finaliza la investigación. / At present foreign relations between States is at an elevated level, many of which are regulated in international treaties. This presented an interesting opportunity to study the compatibility between what is regulated in these treaties and that which is regulated internally by each member State, provoking a particular interest in analyzing the established constitutional regimen pertaining to said international instruments. This subject matter, when constrained to a particular area, was restricted to Central America -made up of States that are part of the Central American Federation-, an area where the author of the investigation originates from and resides. Essential questions guiding the investigation were: What regimen does the Constitution of each Central American State adopt to regulate international treaties? As well as: What are the Constitutional statutes of each Central American State relative to international treaties? And: What has been the contribution of Constitutional jurisprudence in determining the regimen regarding international treaties in the Central American region? In order to answer these questions the thesis was divided into three chapters, of which the first discusses the doctrinarian and comparative law aspects in terms of the Central American region with relation to the harmonization of internal and international regulations. The second and third chapters present the central point of the investigation. The former centers on Guatemala and analyzes how international law derived from treaties is received according to the Constitution, as well as studies by various authors who have written on the matter, including an analysis of jurisprudence pertaining to these cases. The final chapter follows the same dynamic as the previous one but with El Salvador, Honduras, Nicaragua and Costa Rica. It continues with a study of advances in the Central American Union, focusing on the two tribunals with jurisdiction in that area: The Central American Court of Justice and The Inter-American Court of Human Rights. Due to the fact that the latter holds jurisdiction within the State being judged, jurisprudence related to internal and international law is also analyzed, which concludes the investigation.

La presente investigación busca profundizar en cómo los hombres que participaron en el grupo de apoyo online estudiado viven la experiencia de ser padres por primera vez, pregunta que guía la presente investigación. Su objetivo general es comprender la experiencia psicocultural de la transición a la paternidad que expresan los hombres que la atraviesan por primera vez, a través de su participación en un grupo de apoyo online. Este objetivo general se concreta en tres objetivos específicos: (a) Conocer los significados de la transición a la paternidad a través del análisis de las narrativas personales expresadas por los participantes, siguiendo los lineamientos del análisis narrativo temático de Riessman; (b) Reconstruir las narrativas culturales asociadas a los significados de la transición a la paternidad expresados en el grupo de apoyo estudiado; y (c) Extraer las metanarrativas culturales que mejor expresan los aspectos transversales de las narrativas reconstruidas, teniendo en cuenta los referentes teóricos pertinentes. A nivel epistemológico se enmarca dentro del paradigma interpretativo y se utiliza como enfoque de análisis al enfoque psicocultural, utilizando como base los planteamientos de Bruner. A nivel metodológico se utiliza como estrategia de análisis la investigación narrativa y como tipo de análisis de datos el análisis narrativo guiado por una perspectiva teórica. Específicamente, se utiliza el análisis narrativo temático propuesto por Riessman. Durante el proceso de análisis se han reconstruido once narrativas culturales teniendo en cuenta tanto las secuencias intranarrativas como las internarrativas y utilizando tres niveles de análisis que iban del menor al mayor nivel de abstracción (evento o suceso, vivencia relacionada con ese evento o suceso y reconstrucción de las narrativas culturales asociadas con esas vivencias). Además, se han reconstruido tres metanarrativas culturales a través de la identificación de tres líneas argumentales transversales que se relacionaron con los referentes teóricos pertinentes, tanto los referenciados en el Marco Teórico de la presente investigación como otros que fue necesario buscar especialmente para poder discutir y explicar mejor estos hallazgos. Estas tres metanarrativas culturales reflejan tres voces diferentes pero complementarias entre sí, las cuales permiten comprender aún con mayor profundidad la experiencia psicocultural de estos hombres durante su primera transición a la paternidad y complementar la información aportada por las once narrativas encontradas durante la fase anterior del análisis. Se incluye un apartado sobre las implicaciones prácticas de estos hallazgos con información que puede ser útil, tanto a los padres primerizos y futuros padres interesados en obtener información que les ayude a facilitar su primera transición a la paternidad, como a profesionales que deseen diseñar programas de intervención o programas formativos dirigidos a ayudar a los hombres a enfrentar mejor esta transición o para diseñar otros tipos de recursos y actividades para padres primerizos como guías, libros de divulgación, seminarios, talleres, páginas webs, blogs o foros de discusión. Se resaltan algunos aspectos claves relacionados con preocupaciones y retos que deben enfrentar estos padres a nivel personal, pero también algunos que tocan la esfera de la pareja, de la vida social y de la vida laboral. Se incluyen también las limitaciones y fortalezas de la presente investigación y recomendaciones para futuras investigaciones. / This research delves into how men who participated in the online support group under study live the experience of being first-time fathers, this question guides this research. The general objective is to understand the psychocultural experience of first-time fathers, as expressed by their online support group posts. The three specific objectives are: (a) Learn meanings of transitioning to fatherhood for the first time using Riessman’s thematic narrative analysis on personal narratives; (b) Rebuild the cultural narratives associated with those meanings; (c) Extract the common cultural metanarratives among those cultural narratives and relate them to relevant theoretical references. The epistemology is defined by the interpretative paradigm using the psychocultural approach as the analytical approach, based on the ideas of Bruner. The methodology includes narrative research as the analytical strategy and the thematic narrative analysis proposed by Riessman as the data analysis approach. During the analysis process, eleven cultural narratives were reconstructed considering intra & inter narrative sequences and using three analysis levels of abstraction: event/occurrence, experience related to that event/occurrence, and reconstruction of cultural narratives associated with those experiences. Additionally, three metacultural narratives were reconstructed from three transverse storylines related to relevant theoretical references: those in the theoretical framework of this research and additional ones that better discuss and explain these findings. These metacultural narratives reflect three different but complementary voices that provide a deeper understanding of the psychocultural experience of being first-time fathers and complement the information provided by the eleven narratives found during the previous,analysis phase. A section is dedicated to practical implications of these findings with content that could be useful to first-time or expectant fathers looking for information about the first transition to fatherhood, and to professionals interested in designing interventional or educational programs, guides, books, seminars, workshops, websites, blogs, or discussion forums to help men deal better with their first transition to fatherhood. This section highlights key concerns and challenges faced by these fathers at a personal level, as part of a couple, and in their social and work life. Other sections include the limitations and strengths of this research and recommendations for future research.

La infertilitat és un problema que cada cop és més comú en la població actual. S’ha definit que la meitat dels casos de la infertilitat es deu a un factor masculí, no obstant, la gran majoria segueix sent d’etiologia desconeguda. Els grans objectius d’aquesta tesi es poden dividir en dos camps: (i) la cerca de factors genètics que puguin ser causa de la infertilitat masculina i (ii) la cerca de nous factors, com els RNAs i miRNAs, que puguin aclarir la patogenicitat de tipus determinats de infertilitat i el seu futur ús com a biomarcadors de la fertilitat. Vam utilitzar tres estratègies per identificar possibles gens candidats pel seu estudi mutacional: transcriptòmica diferencial, proteòmica diferencial i recerca bibliogràfica dels seus corresponents ratolins genoanul•lats. Els gens seleccionats van ser: (i) Protamina 1 (PRM1) i Protamina 2 (PRM2) (ii) Heat schock protein 2 (HSPA2) (iii) Subunitat 1 de la prohibitina (PHB1), (iv) Bromodomain testis specific (BRDT), (v) Bromodomain containing 2 (BRD2). Podem dividir els gens candidats seleccionats en dos tipus: (i) Gens candidats que la seva deleció en animals únicament comporten fallides en la fertilitat (PRM1, PRM2, HSPA2 i BRDT) i (ii) gens que els seus genoanul•lats presenten mort embrionària (PHB1 i BRD2). Els nostres resultats dels estudis mutacionals realitzats ens mostren que l’existència de variants potencialment patogèniques i d’alta penetrància són una causa infreqüent de la infertilitat masculina. Els nostres resultats van en concordança amb els resultats del primer estudi genome-wide en pacients azoospèrmics i oligozoospèrmics severs. Per tant, podem concloure que la infertilitat masculina possiblement sigui similar a la majoria de malalties complexes, degudes a un problema multigènic/multifactorial, on cap SNP sembla ser responsable d’una proporció considerable de casos d’infertilitat masculina idiopàtica. Per tant, cada variant rara que s’ha descrit pot tenir un petit efecte en el fenotip, però és el conjunt possiblement unit a l’ambient el que resulta en la infertilitat. Per tant, es necessita de més estudis en un nombre molt mes gran de individus, possiblement fent servir una estratègia de seqüenciació completa del genoma, per determinar els backgrounds genètics, possibles interaccions o efecte additiu entre variants i així començar a identificar les combinacions de factors responsables de la infertilitat masculina. Per altra banda tot i que l’avaluació dels paràmetres seminals és útil en el diagnosis de la infertilitat masculina té importants limitacions ja que no sempre bons paràmetres seminals són indicatius de un bon potencial de fertilitat. Per tant és necessari trobar marcadors addicionals que ens donin informació del potencial de fertilització de l’espermatozoide. S’ha descrit que l’espermatozoide humà madur conté RNA . Essencialment, hi ha dues hipòtesis que explicarien la presència de RNA en l’espermatozoide. Una és que podrien tenir una funció en la expressió de gens durant la embriogènesis primerenca. L’altra és que aquests RNA poden ser romanents de l’espermatogènesi però tot i aixo podrien ser útils com a marcadors de l’estat de fertilitat i per avaluar els esdeveniments passats que han ocorregut durant l’espermatogènesi. En aquest treball hem detectat en pacients astenozoospèrmics diversos RNAs amb una abundància alterada. Aquests resultats ens ofereixen la possibilitat d’aprofundir en l’ estudi dels mecanismes patogènics que poden actuar en l’astenozoospèrmia, com també en el plantejament de la futura utilització d’aquests RNAs alterats que hem detectat com a possibles futurs biomarcadors de la fertilitat, per tal d’aconseguir una millor caracterització dels pacients infèrtils. A més a més, els resultats ens mostren nous gens candidats per al seu estudi mutacional, amb la finalitat de cercar mutacions que ens puguin explicar les possibles alteracions en la seva transcripció, com en el cas de BRD2. En aquest treball també hem descrit un pool de miRNAs estables en els espermatozoides madurs de diferents mostres, el que ens fa pensar que aquests poden tenir una funció en els primers passos del desenvolupament embrionari o bé també ens poden explicar fets passats durant l’espermatogènesi. Per tant tenim tot un ampli camp a explorar per veure si alteracions en certs miRNAs poden estar associats a la infertilitat masculina. / There is some evidence that a significant proportion of idiopathic male infertility is due to recessive inheritance. Linkage analysis is applied in most hereditary diseases however are not appropriate in the case of infertility, because there are only one or few members’ affections in families studied. The alternative is performing mutational studies of candidate genes or genetic association studies using cases (infertile patients) and controls (fertile men). We had used three different strategies in order to identify candidate genes and therefore genetic factors associated with male infertility (comparative proteomics analysis, comparative transcriptomics analysis and bibliographic research of animal models infertile). We performed mutation analyses of 6 genes: PRM1, PRM2, HSPA2, PHB1, BRDT and BRD2 gene in different types of infertile patients. Our results in accordance with the first genome-wide study suggest that no pathogenic high penetrance mutations cause male infertility. The evaluation of seminal parameters is useful in the diagnosis of male infertility. However these parameters have important limitations since not always good seminal parameters are indicative of a good fertilization potential. Therefore there is a need for additional markers useful in the assessment of the sperm fertility potential. It is well known, that the mature human sperm cell contains RNA. Independently of the functions of the sperm RNA, the differences in RNA amounts between infertile patients and controls provide a means to assess the fidelity of past events of spermatogenesis. Therefore the analysis of the sperm RNA has the potential to be used as a marker to assess the fertility status. Our results identified several differential transcripts present in athenozoozospermic patients as compared to controls. These results open up the possibility to investigate the implication of these genes in the pathogenic mechanisms in asthenozoospermia and to consider their potential utility as infertility biomarkers.

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La primera parte de esta tesis esta dividida en tres capítulos, en los cuales se introducen los conceptos básicos de magnetoóptica y detalles experimentales. Seguidamente se discuten los resultados experimentales en los siguientes cuatro capítulos los cuales forman la segunda parte. La tercera parte incluye apéndices, información complementaria y bibliografía. El primer capitulo llamado Conceptos Básicos introduce al lector en los fundamentos de la magnetoóptica. El segundo capitulo, Transiciones Metal-Aislante, presenta las propiedades básicas de las manganitas y la magnetita. El capitulo de Detalles Experimentales describe las diferentes configuraciones elipsometricas , así como metodologías usadas en esta tesis. La segunda parte incluye un estudio magnetoóptico detallado de manganitas ferromagnéticas y magnetita abarcando el rango óptico entre el ultravioleta y en infra-rojo cercano. Se estudio la influencia del acople electrón-fonon en los espectros magnetoópticos por medio de medidas sistemáticas sobre magnanitas con diferentes composiciones químicas y diferentes interacciones entre electrón-red. Se estableció una conexión directa entre la magneto-resistencia e interacción electrón-red, mediante el extenso análisis de diferentes óxidos magnéticos, entre los cuales se encuentran manganitas y magnetita. Se introduce el concepto de cristal magnetofónico como un sistema periódicamente ordenado con algun componente magnético. Con el objetivo de estudiar la respuesta magnetoóptica intrínseca de los materiales y compararla con la respuesta fotónica, se estudiaron soluciones coloidales como un sistema aleatorio (no ordenado), además demostramos el potencial de la espectroscopia magnetoóptica en el análisis dispersiones de nanoparticulas magnética extremadamente diluidas. En el capitulo de cristales magnetofónicos se describen los mecanismos subyacentes a la interacción de la luz con un medio con modulación periódica de la permitividad. En particular nosotros analizamos la modificación espectral de la respuesta magnetoóptica debida a efectos fotónicos. El documento finaliza con un conjunto de apéndices de información complementaria donde se describe exhaustivamente el sistema de caracterización magnetoóptica que se construyo.

Tesi realitzada al Servei de Bioquímica i Genètica Molecular / Hospital Clínic / Les alteracions cromosòmiques constitucionals representen una de les principals causes d’anomalies congènites a la població, i el seu diagnòstic durant l’etapa prenatal és el principal objectiu de la majoria de procediments invasius que es realitzen durant l’embaràs. Actualment, el cariotip convencional és el gold standard del diagnòstic citogenètic prenatal, però els avanços tecnològics dels últims anys han portat al desenvolupament de tècniques de citogenètica molecular que ofereixen característiques molt atractives, la principal de les quals és l’elevada resolució. Donat que el paper que han de tenir aquestes tècniques durant l’etapa prenatal encara no està ben definit, els objectius de la present tesi han estat: a) determinar el potencial diagnòstic i la utilitat del cariotip i les tècniques de citogenètica molecular Fluorescent In Situ Hybridization (FISH), Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) i Chromosomal Microarray-based Analysis (CMA) en diagnòstic prenatal, especialment per a l’estudi de gestacions amb troballes ecogràfiques; i b) valorar la necessitat de modificar els procediments actuals de diagnòstic citogenètic prenatal. En primer lloc, s’han revisat els resultats dels 29.883 cariotips en líquid amniòtic realitzats entre 1998 i 2009 a l’Hospital Clínic de Barcelona. Els resultats obtinguts corroboren que el cariotip és una eina efectiva i robusta per a l’obtenció del cariotip fetal, revelant alteracions cromosòmiques en el 2,9% de les gestacions que es sotmeten a un procediment invasiu. La translucidesa nucal incrementada i les anomalies ecogràfiques destaquen com a indicadors excel•lents d’anomalia cromosòmica. En segon lloc, s’ha avaluat la utilitat de l’MLPA subtelomèrica per a l’estudi de gestacions amb troballes ecogràfiques i cariotip normal. Dels 229 fetus analitzats, 3 presentaven desequilibris subtelomèrics críptics (1,3%). Donat que la freqüència d’aquests desequilibris és baixa, i a més la correlació genotip-fenotip observada és pobra, l’MLPA subtelomèrica no sembla ser una eina crucial per a l’estudi d’aquestes gestacions. D’altra banda, s’ha estudiat la idoneïtat de reemplaçar els estudis de FISH de la regió 22q11.2 per kits d’MLPA dissenyats per a l’estudi d’aquesta regió i altres regions genòmiques associades a cardiopaties. S’han analitzat mitjançant aquests kits 55 gestacions amb troballes cardíaques, cariotip normal i estudi de FISH negatiu per a la microdeleció típica de 22q11.2, i no s’ha detectat cap anomalia. Aquest fet, juntament amb que l’MLPA presenta una taxa de repetició i de no obtenció de resultats superiors a la FISH, i que generalment requereix cultiu cel•lular, indica que la FISH hauria de seguir sent la tècnica d’elecció per a l’estudi de fetus amb troballes cardíaques (enfront l’MLPA). També s’ha volgut determinar la freqüència dels diferents tipus d’alteracions cromosòmiques, tant microscòpiques com críptiques, en fetus amb troballes ecogràfiques cardíaques. L’anàlisi retrospectiu dels resultats obtinguts en el període 2009-2011 a l’Hospital Clínic de Barcelona en aquest grup de gestacions (N=276) ha revelat una freqüència d’anomalies cromosòmiques microscòpiques i casos de Síndrome de la deleció cromosòmica 22q11.2 del 15,9% i 6,4%, respectivament; uns resultats que corroboren la forta associació existent entre troballes ecogràfiques cardíaques i anomalies cromosòmiques. A més, aquesta associació varia significativament en funció del tipus de troballa ecogràfica cardíaca i de la presència d’anomalies extracardíaques. D’altra banda, s’han analitzat mitjançant array CGH 51 fetus amb troballes ecogràfiques cardíaques, cariotip normal, i sense estudi o resultat de FISH negatiu per a la Sd. de la deleció cromosòmica 22q11.2. En aquest grup de gestacions, la taxa de detecció de variants en número de còpia patogèniques ha estat del 2%, i no s’han detectat variants de significat clínic incert. Si en la nostra sèrie de 276 gestacions amb troballes ecogràfiques cardíaques s’hagués utilitzat l’estratègia QF-PCR + CMA enlloc de cariotip, totes les anomalies cromosòmiques amb repercussió clínica clara diagnosticades per citogenètica convencional s’haguessin identificat, s’haguessin detectat els casos de delecions de 22q11.2, i s’hagués incrementat un 2% el nombre de casos diagnosticats. Per tant, aquests resultats mostren el potencial de les plataformes de microarray per al diagnòstic prenatal de fetus amb troballes ecogràfiques cardíaques. Finalment, s’han utilitzat les tècniques de citogenètica molecular FISH, MLPA i/o CMA per a la caracterització de 6 alteracions cromosòmiques visibles al cariotip però de difícil caracterització per citogenètica convencional. En tots els casos, la utilització d’aquestes tècniques ha contribuït a la correcte descripció de l’alteració identificada, posant de manifest la seva utilitat quan s’utilitzen de forma complementària al cariotip. L’elaboració d’aquesta tesi i la literatura recentment publicada evidencien la necessitat d’un nou plantejament dels protocols clínics de diagnòstic citogenètic prenatal, especialment en relació a la utilització de plataformes de microarray en diagnòstic prenatal. / Strategies for genetic diagnosis of fetuses with congenital malformations. Genotype-phenotype correlations. Constitutional chromosomal abnormalities represent one of the main causes of congenital abnormalities in the population, and their diagnosis during pregnancy is the main objective of most invasive procedures. Nowadays, conventional karyotyping is the gold standard for prenatal cytogenetic diagnosis, but recent technological advances have led to the development of molecular cytogenetic techniques which offer much higher resolution. Since there is still not a consensus on the role of these techniques in prenatal diagnosis, the goals of the present PhD work have been: a) to determine the diagnostic potential and usefulness of karyotype and molecular cytogenetic techniques Fluorescent In Situ Hybridization (FISH), Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) and Chromosomal Microarray-based Analysis (CMA) in prenatal diagnosis, especially in pregnancies with ultrasound findings; and b) to establish the need for modifications in current prenatal cytogenetic diagnostic protocols. The results obtained: - Corroborate the effectiveness and robustness of conventional karyotyping. The observed detection rate of chromosomal abnormalities in 29,883 consecutive amniotic fluid samples has been 2.9%, with increased nuchal translucency and ultrasound abnormalities being excellent indicators for chromosomal abnormalities. - Suggest that subtelomeric screening in pregnancies with ultrasound findings and normal karyotype is not a crucial tool, as detection rate of subtelomeric imbalances is low (1.3%; 3/229), and genotype-phenotype correlations are poor. - Reveal that FISH of 22q11.2 region is preferred to MLPA kits specific for this chromosome region and other genomic regions previously associated with congenital heart defects. - Reveal a strong association between cardiac ultrasound findings and chromosomal abnormalities, both microscopic and cryptic. In pregnancies with cardiac findings, the observed frequency of microscopic chromosomal abnormalities and chromosome 22q11.2 deletion syndrome has been 15.9% (44/276) and 6.4% (5/78), respectively. Moreover, CMA has been performed in 51 fetuses with cardiac ultrasound findings, normal karyotype and negative or no FISH study for chromosome 22q11.2 deletion syndrome, and the detection rate of pathogenic copy number variants has been 2%, without detection of variants of unknown clinical significance. If in the initial series of 276 pregnancies the strategy QF-PCR + CMA would have been applied; all the chromosomal abnormalities with clear clinical repercussion diagnosed by conventional cytogenetics would have been identified, together with the deletions of 22q11.2 region and an extra 2% of chromosomal abnormalities. These results show the potential of CMA for the prenatal diagnosis of these pregnancies. - Show the usefulness of the molecular cytogenetic techniques FISH, MLPA and CMA when used as a complement to conventional karyotyping in cases with chromosomal abnormalities not accurately characterizable by conventional cytogenetics. Accordingly, the results obtained suggest the need for updating current prenatal cytogenetic diagnostic protocols.

Resum pendent

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