Orientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Helio José Montassier / Banca: Silvia Regina Ricci Lucas / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Resumo: O linfoma é a neoplasia hematopoiética mais comum nos cães e uma das mais frequentes, dentre todas as neoplasias, nesta espécie. Apresenta-se em diversas localizações anatômicas e pode apresentar classificações histológicas e imunofenotipos distintos. Dependendo da resposta imune do paciente frente à instalação de um tumor, algumas informações sobre o prognóstico podem ser obtidas. Atualmente, as células T reguladoras (Tregs) vêm sendo estudadas em algumas neoplasias caninas, por seu comprovado potencial imunossupressor, principalmente por inibir a resposta antitumoral. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos quantificar, por citometria de fluxo, as células Tregs em sangue periférico de cães com linfoma multicêntrico de imunofenótipos B e T, respectivamente 14 e 8 cães, no momento do diagnóstico e após o primeiro ciclo de quimioterapia antineoplásica com o protocolo Madison-Wisconsin (MW) de 19 semanas adaptado, e comparar com cães saudáveis (n=10), buscando quantificá-las em cães com linfoma de diferentes imunofenótipos antes e após a 5ª semana do protocolo MW. Os resultados mostraram que cães com linfoma apresentaram uma porcentagem significativamente maior de Tregs (18,84±2,56) quando comparada aos cães sem neoplasia (4,70±0,50) (p<0,01). Além disso, após a 5ª semana de tratamento houve uma significante redução da população de Tregs (7,54±1,08), atingindo valores semelhantes a dos cães controle (4,70±0,50) (p>0,05). Não houve diferença nas Tregs em relação aos imunofenotipos B (17,45±2,77) e T (21,27±5,27) (p>0,05). Concluiu-se que o linfoma em cães leva a um aumento de células Tregs e que o tratamento com o protocolo quimioterápico MW reduz significativamente as células Tregs em sangue periférico, atingindo valores próximos aos dos cães saudáveis / Abstract: Lymphoma is the most common hematopoietic malignancy in dogs and one of the most frequent among all neoplastic diseases in this species. It can occur in several anatomical locations with distinct histological and immunophenotypes. Depending on the host immune response towards the tumor, prognosis information could be collected. Because its well established immunosuppressant, antitumor activity, the function of regulatory T cells (Tregs) in canine neoplasias has been investigated. In this study, we sought to quantify, using flow cytometry, the Tregs subpopulation in peripheral blood of healthy dogs (10) and in those diagnosed with type-B (14) and type-T (8) multicentric lymphoma before (at diagnosis) and after the first cycle (5-week) of 19-week Madison- Wisconsin (MW) protocol of chemotherapy. Our results indicated that dogs with lymphoma showed higher percentage of Tregs (18,84±2,56) when compared to healthy dogs (4,70±0,50) (p<0,01). In addition, 5-week chemotherapy treatment reduced the Tregs subpopulation (7,54±1,08) to levels similar to control (4,70±0,50) (p>0,05). There was no difference in Tregs percentage between B-type (17,45±2,77) and T-type (21,27±5,27) lymphoma (p>0,05). With this, we conclude that canine lymphoma increases Tregs in the peripheral blood and the MW protocol of chemotherapy reduces this cell subpopulation to control values / Doutor

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Coorientador: Alexandra Ivo Medeiros / Banca: Carlos Pelleschi Taborda / Banca: Sonia Rozental / Banca: Maria do Rosário Rodrigues Silva / Banca: Anderson Assunção Andrade / Resumo: O fungo do gênero Paracoccidioides é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose de grande importância no Brasil e América Latina. Há diferentes terapias disponíveis, como os antifúngicos da classe dos poliênicos, azóis e sulfonamidas. O desenvolvimento de novos antifúngicos com eficácia superior é necessário para prevenir recaídas e diminuir os efeitos secundários, o período de tratamento e sequelas. A molécula de ácido gálico com diferentes modificações (galatos de alquila) apresentou atividade antifúngica contra um painel representativo de fungos patogênicos. O galato de decila (G14) foi objeto de estudo deste trabalho, para o qual a interação Paracoccidioides¬-hospedeiro foi relacionada ao mecanismo de ação. Para tanto, o fungo Paracoccidioides lutzii (Pl01) foi desafiado com o G14 para análise das alterações no desenvolvimento de brotamentos e na viabilidade celular pelo ensaio de MTT. Foi avaliada a influência do G14 na taxa de interação de Pl01 com a linhagem de macrófago alveolar murino AMJ2-C11, com as linhagens pulmonares de mamífero A549 e MRC-5, e hemócitos da larva de Galleria mellonella utilizando ensaios por citometria de fluxo. O G14 ainda foi avaliado quanto à taxa de sobrevivência da larva de G. mellonella infectada e a capacidade na modulação da produção de óxido nítrico em macrófago RAW. O estudo do mecanismo de ação foi realizado pelo ensaio de interação químico-genética seguida da interação genética, que consiste na comparação de uma coleç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fungus of genus Paracoccidioides is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), an important mycosis in Brazil and Latin America. There are different available therapies, as antifungals belong to the class of polyenes, azoles and sulfonamides. The development of new antifungal agents with greater effectiveness is required to prevent relapse and reduce side effects, the period of treatment and sequelae. The gallic acid molecule with different modifications (alkyl gallates) showed antifungal activity against a representative panel of pathogenic fungi. The decyl gallate (G14) was the study object of this work, for which the Paracoccidioides-host interaction was connected with the mechanism of action. Therefore, the fungus Paracoccidioides lutzii (Pl01) was challenged with the G14 to analyze the changes in the development of budding and cell viability by MTT assay. Then, it was assessed the influence of the G14 in the interaction rate of Pl01 with murine alveolar macrophage lineage AMJ2-C11, with mammalian lung lineage A549 and MRC-5, and hemocytes of Galleria mellonella larvae using assays by flow cytometry. The compound G14 was evaluated for survival rate of infected G. mellonella larvae and to capacity of modulation of nitric oxide production in RAW macrophages. The mechanism of action was performed by chemical-genetic interaction assay followed by genetic interaction, which involves comparing a mutant collection, of Saccharomyces cerevisiae yeast, with hypersen... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Vergílio Antonio Rensi Colturato / Coorientador: Maura Rosane Valério Ikoma / Banca: Mihoko Yamamoto / Banca: Paula de Oliveira Montandon Hokama / Resumo: A Leucemia Linfocítica Crônica (LLC) é uma neoplasia de linfócitos B maduros, de curso clínico heterogêneo, com alguns pacientes necessitando de tratamento imediato e outros vivendo sem tratamento por décadas. Por essa característica, se faz necessária a identificação de marcadores prognósticos acessíveis e de valor clínico. O objetivo principal foi avaliar retrospectivamente os indicativos prognósticos de progressão da doença (ZAP-70, CD38, ploidia de DNA e Fase S) em pacientes portadores de LLC, frente a sua evolução clínica. Como objetivos secundários, foram comparadas as metodologias de análise de ZAP-70 por citometria de fluxo(CF) ISO Método e Análise em Tubo Único, assim como as técnicas de análise de conteúdo de DNA pelo modelo matemático (ModFit LT™) e estratégia de gating boleano (Infinicyt™). Na cauística foram incluídos 27 pacientes que possuíam disponíveis os dados clínicos e laboratoriais em estudo e que concordaram e preencheram o termo de consentimento livre e esclarecido. A avaliação da situação clínica foi feita uma única vez, e assim como os resultados das expressões de CD 38 e ZAP 70, foi realizada através de revisão de prontuário médico. A análise do conteúdo de DNA por CF foi avaliada pelos dois métodos supracitados, a partir de arquivos do laboratório de citometria de fluxo da instituição. Como resultados, não se observou relação das expressões de ZAP-70 e CD38 com o estado clínico dos pacientes. Em relação à análise de índice de DNA e Fase S, não houve diferença estatística (p=0,69 e p=0,08 respectivamente utilizando-se os softwares ModFit LT™ e Infinicyt™). Também foi encontrado que os dados obtidos na análise de DNA indicam a possibilidade de utilização da Fase S na avaliação prognóstica dessa série de pacientes. Todos os três fatores estudados são considerados prognósticos. Não houve relação dos marcadores estudados com a evolução ... / Abstract: The Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is a mature B lymphocytes malignancy, on heterogeneous clinical course, where some patients require immediate treatment and others live for decades without treatment. For this peculiarity, it's required the identification of prognostic markers and clinical value. The main objective was to retrospectively, evaluate the prognostic indicator of the disease progression (ZAP- 70, CD38, DNA ploidy and S phase) in patients under CLL, facing the clinical evolution. As secondary purposes, methodologies were compared to ZAP- 70 analysis by flow cytometry (FC) ISO Method and Single-Tube Analysis, as well as technical analysis of DNA content by the mathematical model (ModFit LT ™) and boolean gating principle (Infinicyt ™ ). On the registration of the cases observed, there were included 27 patients under the clinical and laboratory data who had available and filled in the term consenting agreement. The evaluation of the clinical situation was made only once, and the results of expressions and CD38 and ZAP 70, were held by reviewing medical records. The analysis of DNA content by CF was evaluated by the above two methods files from a laboratorial flow cytometry institution. As a result, no relation of the expressions of CD38 and ZAP- 70 with the clinical status of the patients was observed. Concerning the analysis of DNA index and S phase, there wasn't any statistical difference (p = 0.69 and p = 0.08 respectively using the ModFit LT ™ and Infinicyt ™ software ). It was also found that the data obtained in the analysis of DNA indicates the possibility of using the S phase in the prognostic evaluation of those patients. Conclusion: all the three factors studied are considered prognostic. There was no relation of the markers studied to the clinical course of patients. To correlate these data with clinical follow-up of those patients, it is necessary a longer period of time / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Resumo: O mastocitoma é uma neoplasia caracterizada pela proliferação de mastócitos e corresponde ao tumor cutâneo mais frequente em cães. Seu comportamento biológico extremamente variável dificulta a determinação prognóstica e terapêutica, o que torna necessário a busca por indicadores prognósticos mais confiáveis. As células T regulatórias (Tregs) constituem um subgrupo dos linfócitos T que expressam CD4 e CD25, e são transcritas pelo fator Foxp3. As Tregs, através de seu potencial imunossupressor, regulam as respostas imunes em diversas enfermidades. Do ponto de vista oncológico, elas são responsáveis pela limitação da resposta imune antitumoral, promovendo uma tolerância imunológica às células neoplásicas mastocitárias. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo quantificar, através da citometria de fluxo, a expressão de Tregs e a relação Treg/CD8+ no sangue periférico de cães portadores de mastocitoma cutâneo (n = 18) no momento do diagnóstico. Tais variáveis também foram avaliadas entre diferentes graus histológicos de mastocitoma, segundo classificação de Kiupel et al. (2011). Os resultados mostraram que cães portadores de mastocitoma (8,99 ± 1,15) apresentaram porcentagem significativamente maior (p<0,01) de Tregs do que cães saudáveis (4,71 ± 0,51). Não houve diferença nas quantidades de Tregs obtidas para cães portadores de mastocitoma de alto grau (5,55 ± 1,16) e baixo grau (4,96 ± 0,70). Cães com mastocitoma (0,27 ± 0,04) também apresentaram relação Treg/CD8+ significativamente maior (p = 0,04) do que os cães controle (0,12 ± 0,01). Concluiu-se que o mastocitoma em cães leva a um aumento na população de Tregs no sangue periférico, além de propiciar um aumento na relação Treg/CD8+ / Abstract: Mast cell tumor is a neoplastic proliferation of mast cells which is the most frequent cutaneous tumor in dogs. Its extremely variable biological behavior makes the prognostic and therapeutic determination more difficult, which demands the search for more reliable prognostic indicators. The regulatory T cells (Tregs) are a subset of T lymphocytes that express CD4 and CD25, and are transcribed by Foxp3 factor. The Tregs, through their immunosuppressive potential, regulate the immune responses in several diseases. Regarding the oncological aspects, they are responsible for the limitation of the antitumoral immune response, promoting an immunological tolerance to the neoplastic mast cells. In this context, the current study had the objective to quantify, through flow cytometry, the expression of Tregs and the Treg/CD8+ ratio in the peripheral blood of dogs with cutaneous mast cell tumor (n = 18) at diagnosis. Such variables were also evaluated in different histologic grades of mast cell tumor, according to the grading system proposed by Kiupel et al. (2011). The results indicated that dogs with mast cell tumor (8,99 ± 1,15) showed significantly higher percentage (p<0,01) of Tregs when compared to healthy dogs (4,71 ± 0,51). There was not difference in the quantities of Tregs for dogs with high (5,55 ± 1,16) and low (4,96 ± 0,70) grade mast cell tumor. Dogs with mast cell tumor (0,27 ± 0,04) also presented significantly higher Treg/CD8+ ratio (p = 0,04) when compared to control dogs (0,12 ± 0,01). It was concluded that the mast cell tumor in dogs increases Tregs in the peripheral blood, and also leads to a higher Treg/CD8+ ratio / Mestre

Orientador: Raul José Silva Girio / Coorientador: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Ana Paula Massae Nakage Canesin / Banca: Maria Angélica Dias / Resumo: Atualmente, a citometria de fluxo está tornando-se uma ferramenta útil na Medicina Veterinária, particularmente na clínica de pequenos animais. O presente ensaio teve como objetivo imunomarcar as subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+, com a utilização de marcadores de superfície (anticorpos monoclonais), em quatro diferentes raças de cães domésticos e correlacionar esses dados com o eletroforetograma de proteínas séricas desses animais. Foram utilizados 40 cães adultos, machos e fêmeas, das raças Beagle, Golden Retriever, Bulldog Inglês e sem raça definida, divididos em 4 grupos, sendo 10 cães por grupo experimental. Os cães foram submetidos à avaliação clínica, hematológica (hemograma) e à análise quantitativa, no sangue periférico, das subpopulações de linfócitos CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+. Paralelamente, foi realizada a análise qualiquantitativa das proteínas séricas totais e suas frações. As proteínas séricas foram separadas por eletroforese em matriz de gel de poliacrilamida, e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. O número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos T citotóxicos foi significativamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses e cães SRD, comparativamente aqueles encontrados nos grupos Beagles e Golden Retrievers. Ademais, observou-se que o número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos B foi significavamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses, quando comparado àquele dos Beagles. No presente estudo, não foi possível estabelecer correlação entre as subpopulações linfocitárias analisadas e as proteínas totais e suas frações / Abstract: Flow cytometry is useful tool in veterinary medicine, particularly in small animal practice. The objective of this study was to determine lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+ in four different breeds of domestic dogs and correlate these data with the electrophoretogram of serum proteins in these animals. A total of 40 adult dogs, males and females of Beagles, Golden Retrievers, English Bulldogs and crossbreed dogs were divided in four groups, with 10 dogs per experimental group. The dogs were submitted to clinical, hematological and quantitative analysis, in peripheral blood, of lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+. Also we performed a qualitative and quantitative analysis of total serum protein and its fractions. The serum proteins were separated by electrophoresis in polyacrylamide gel matrix, and their concentrations were determined by computerized densitometry. The average number of cells obtained for the subsets of cytotoxic T lymphocytes was significantly higher (p<0,05) in the British Bulldogs and crossbreed dogs compared to those found in Beagles and Golden Retrievers. Furthermore, it was observed that the average number of cells obtained for the subsets of B lymphocytes was significavamente higher (p<0,05) in English Bulldogs compared to that of Beagles. In the present study, there was no correlation between lymphocyte subsets with total proteins and its fractions / Doutor

Orientador: Maria Rita Pacheco / Coorientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Janaina Fernanda Gonçalves Neto / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Luciane Helena Gargaglioni Batalhão / Banca: Márcio Mateus Beloti / Resumo: A destruição dos micro-organismos ocorre principalmente por mecanismos dependentes de oxigênio e pela liberação de enzimas líticas dos grânulos intracelulares dos neutrófilos. Neutrófilos ativados in vitro e in vivo geram espécies reativas de oxigênio e sofrem apoptose rapidamente. O resveratrol possui efeitos protetores na aterosclerose, possui potencial anticancerígeno e antiinflamatório podendo também atuar como protetor e regenerador dos antioxidantes primários do organismo. O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito protetor de diferentes concentrações de resveratrol na apoptose e produção de superóxido de neutrófilos. Uma suspensão de neutrófilos final de 1 x 106 mL de 10 cães adultos hígidos foram aliquotadas e pré- incubadas com diferentes concentrações finais de resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) durante 4 horas. A taxa de apoptose foi determinada por citometria de fluxo capilar, utilizando-se do sistema Anexina V-PE e a de superoxido por sonda HE. Nos grupos tratados com resveratrol (30, 60 e 90 Rmol) e estimulados com CAM (camptotecina) não houve diminuição nos índices apoptóticos. Na presença de PMA (forbol-12-miristato 13 acetato) a fluorescência média do brometo foi superior em todos os tratamentos. Nos grupos tratados com RV e estimulados com PMA não houve diminuição na quantidade de superóxido. Conclusões: Nas doses utilizadas o resveratrol não inibiu a apoptose de neutrófilos. A incubação dos neutrófilos com RV não afetou a viabilidade celular. As taxas de produção de superóxido não diferiram entre os tratamentos utilizados p>0,05, constatado através de citometria de fluxo / Abstract: The destruction of microorganisms occurs mainly by oxygendependent mechanisms involving the generation of reactive oxygen metabolites and also the liberation of lytic enzymes from intracellular granules. Activated neutrophils generate ROS and suffer apoptosis quickly, verified in-vitro and in- vivo. Resveratrol has protective effects against atherosclerosis, it has anticarcinogenic and anti inflammatory potential and it may also protect and regenerate body's primary antioxidants. The objective of the present study was to examine the possible protective effect of different concentrations of resveratrol on apoptosis and superoxide production of stimulated neutrophils. A final neutrophil suspension of 1 x 106 of 10 adult healthy dogs was aliquoted and pre-incubated with different final concentrations of resveratrol (0, 30, 60 e 90 Rmol) for 4 hours. Superoxide production rate and apoptosis was determined by capillary flow cytometry used anexin V-PE system and HE probe. In PMA(forbol-12-miristato 13 acetato) presence, bromide average fluorescence was superior in every treatment. In the groups treated with resveratrol and stimulated with PMA there was no reductions in amount of superoxide. In groups treated with resveratrol and stimulated with CAM (camptotecina) there was no decrease in apoptotic index. It was also observed that the concentrations of RV used did not affected cellular viability / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438061-Texto+Completo-0.pdf: 2839596 bytes, checksum: 6a94dcd2e48c0f8aa666231a6a1d1a83 (MD5) Previous issue date: 2012 / This study aimed to evaluate the antiproliferative effect of catechin, as if it has the capacity to reverse the phenotype of GRX cells, and the mechanisms involved in these outcomes. We evaluated the growth and cell proliferation in hepatic stellate cell line activated, the GRX, which were treated with catechin, and cocoa extract, and between the possible mechanisms involved in cell growth was assessed by cell necrosis release of lactate dehydrogenase, apoptosis, by expression of caspase 3 and PARP, as well as the expression of autogagia LC3. The cell cycle was measured by the expression of p53 and p27, as well as inflammatory pathways of IL-6 and COX-2 were assessed by RTPCR Real-time quantification and fibrogenic factor TGF-β. The phenotypic reversion was determined by the presence of fat in the cells with Oil-Red, as well as the expression of PPAR γ, an important regulator of adipogenesis. We evaluated the total collagen and collagen type 1 cells after treatment. It can be seen that both catechin as the cocoa extract decreased the cell growth and proliferation and that this decrease was not due to necrosis and even the activation of apoptosis and autophagy. Catechin induced cell cycle arrest by the reduction of p53 and p27, as well as decreasing the expression of inflammatory proteins such as IL-6 and COX-2 and TGF-β factor fibrogenic. The phenotypic reversion, can observe the presence of fat droplets in the cells after treatment with catechin and cocoa extract, as well as a reduction in collagen type I and an increase in expression following treatment with PPAR γ catechin. In conclusion, catechin decreases cell growth GRX, probably anti-inflammatory activity and for stopping the cell cycle. Catechin decreases the synthesis of TGF-β by cells demonstrating the potential antifibrotic effect. It also presents the property to revert the activated phenotype of GRX cells to a quiescent state and this mechanism may be via activation of PPAR gamma metabolic pathway. / O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito antiproliferativo da catequina, assim como, se esta apresenta capacidade de reverter o fenótipo das células GRX, e quais os mecanismos envolvidos nestes desfechos. Foi avaliado o crescimento e proliferação celular em linhagem de células estreladas hepáticas ativadas, as GRX, as quais foram tratadas com catequina e extrato de cacau, e entre os possíveis mecanismos envolvidos no crescimento celular foi avaliada necrose celular pela liberação da lactato desidrogenase, apoptose, pela expressão de Caspase 3 e PARP, assim como, autogagia pela expressão de LC3. O ciclo celular foi avaliado pela expressão de p53 e p27, assim como, as rotas inflamatórias da IL-6 e COX-2 foram avaliadas por RT-PCR em tempo real e a quantificação do fator fibrogênico TGF-β. A reversão fenotípica foi avaliada pela presença de gordura nas células, por Oil-Red, assim como, pela expressão de PPARγ, um importante fator regulador da adipogênese. Foi avaliado o colágeno total e o colágeno do tipo 1 nas células após os tratamentos. Pode-se observar que tanto a catequina como o extrato de cacau diminuiu o crescimento e proliferação celular e que esta diminuição não foi por necrose e nem mesmo pela ativação da apoptose e autofagia. A catequina induziu uma parada no ciclo celular, pela redução da p53 e p27, assim como, diminuiu a expressão de proteínas inflamatórias como a IL-6 e COX-2 e o fator fibrogênico TGF-β. Quanto a reversão fenotípica, pode-se observar a presença de gotículas de gordura nas células após tratamento com catequina e extrato de cacau, assim como, uma diminuição do colágeno tipo I e um aumento na expressão de PPARγ após tratamento com catequina. Em conclusão, a catequina diminui o crescimento das células GRX, provavelmente por atividade anti-inflamatória e por parar o ciclo celular.A catequina diminui o síntese de TGF-β pelas células demostrando um potencial efeito antifibrótico. Apresenta ainda, a propriedade de reverter o fenótipo ativado das células GRX para um estado quiescente e este mecanismo pode ser via ativação da rota metabólica PPARγ.

Resumo não disponível.

Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calonego_SoraiaBuchignani_M.pdf: 2208836 bytes, checksum: 3e7ce4af19669508b96c417947e2c491 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os antígenos eritrocitários são estruturas polimórficas correspondendo glicoproteínas ou glicolípides localizados na membrana eritrocitária. Os antígenos Fya e Fyb são os mais importantes do sistema Duffy e carreados por glicoproteínas de múltipla passagem transmembrana. Os antígenos S e s, pertencentes ao sistema MNS, são carreados pela glicoforina B (GPB). Há relatos na literatura de que todos eles seriam sensíveis à ação enzimática leucocitária e assim podem apresentar alteração de expressão durante o armazenamento. O nosso objetivo foi estudar a influência da remoção de leucócitos e do tempo de armazenamento na expressão dos antígenos Fya, Fyb, S e s em concentrados de hemácias (CH) coletados com CPDA-1 e armazenados para fins transfusionais e produção de reagentes eritrocitários. Estudamos 49 unidades de CH. Elas foram subdivididas em duas bolsas logo após a coleta sem abertura do sistema e uma foi leucodepletada com filtros SepacellTM antes do armazenamento. A outra foi utilizada como controle. Foi realizada avaliação dos antígenos nos dias 1 e 35 de armazenamento através da hemaglutinação em tubo, aglutinação em gel e imunofenotipagem por citometria de fluxo. Foi utilizado o QIFIKITTM para determinar o número de sítios antigênicos através da citometria de fluxo. O antígeno Fya apresentou um aumento na intensidade de fluorescência (p=0,02) apenas no dia 35 de armazenamento quando a bolsa foi leucodepletada antes do armazenamento. Os outros antígenos (Fyb, S e s) não apresentaram diferença de expressão com a leucodepleção. Em relação ao tempo de armazenamento, não detectamos alteração significativa na densidade dos antígenos Fya, Fyb, S e s durante os 35 dias estudados. O resultado do número de sítios estimados através da citometria de fluxo para os respectivos antígenos foi: Fya 1,1 e 2,3 x 104 em doadores Fy(a+b+) e Fy(a+b-) respectivamente; Fyb 0,72 e 0,78 x 104 em doadores Fy(a+b+) e Fy(a-b+); S 1,0 e 2,1 x 104 em indivíduos Ss e SS e para o antígeno s 1,0 e 2,4 x 105 em doadores Ss e ss. A citometria de fluxo demonstrou ser uma técnica sensível e capaz de detectar alterações não perceptíveis com os outros métodos. Foi mais reprodutível, estável e adequada para os antígenos Fya e Fyb que para os antígenos S e s. Isto talvez seja devido às características dos soros anti-S e anti-s disponíveis comercialmente. O estudo da expressão durante o armazenamento e a estimativa do número de sítios antigênicos são importantes no controle de qualidade e validade dos reagentes eritrocitários utilizados na prática transfusional. A leucodepleção influenciou somente o antígeno Fya no dia 35 de armazenamento / Abstract: Not informed. / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Silvana Pereira Barros, Decio dos Santos Pinto Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vaz_SoniaAndradeSilveira_D.pdf: 1101467 bytes, checksum: b3ab61ba8bad61148a6ab70c57bece91 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Muitas pesquisas a respeito do paratormônio (PTH) têm demonstrado que o efeito anabólico (neoformativo) desse peptídeo sobre o tecido ósseo, quando administrado de um modo intermitente, resulta na indução de nódulos de mineralização em cultura de osteoblastos, deposição óssea e aumento da resistência a fraturas em todo o esqueleto. Frente a esses possíveis benefícios, o PTH foi aprovado recentemente pela US Food & Drug Administration (FDA) com o nome genérico de Teriparatide e com o nome comercial de Forteo® (Lilly) que já está sendo comercializado para o tratamento da osteoporose, mas, no entanto ainda vem suscitando grande interesse na comunidade científica, uma vez que o seu complexo mecanismo de ação não está totalmente esclarecido. Relatos científicos indicam que parte do anabolismo do PTH se deve a diferenciação e proliferação dos osteoblastos, aumentando significativamente o número destas células, e parte a um efeito inibidor da apoptose nos osteoblastos. O presente estudo investigou in vitro a capacidade anti-apoptótica do hPTH(1-34) em osteoblastos induzidos à apoptose pelo TNF-a, elegendo como modelo de estudo o cultivo de osteoblastos de calvária de rato. As células foram cultivadas em MEM- a, suplementado com SFB, ácido ascórbico, ß-glicerofosfato e gentamicina, e foram divididas em grupos experimentais que receberam tratamentos diferentes. No grupo I, as células foram induzidas à apoptose, recebendo tratamento com o TNF-a; no grupo II, as células não foram induzidas à apoptose e receberam tratamento intermitente com o hPTH(1-34); no grupo III, as células foram induzidas à apoptose e receberam tratamento com o hPTH(1-34); e no grupo IV, as células não foram induzidas à apoptose e não receberam tratamento com o PTH (controle). Para a detecção da apoptose foram empregados os métodos de exclusão por marcação com o corante azul de Trypan (câmara de Neubauer) e a citometria de fluxo (FACSCalibur). Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística que demonstrou que o tratamento intermitente com o PTH inibiu a apoptose em torno de 60% nos osteoblastos induzidos pelo TNF-a, aumentando, desta forma, o número de osteoblastos / Abstract: It is still not clear why sustained elevation of parathyroid hormone (PTH) stimulates bone resorption, whereas intermittent administration stimulates bone formation. Intermittent PTH administration was recently approved by the United States Food and Drug Administration as the first form of osteoporosis therapy that increases bone mass de novo, reverses the bone deficit, providing a proof-of-principle that osteoblast-targeted (anabolic) agents can effectively reduce osteoporotic fractures. Considering indications that attenuation of osteoblast apoptosis by daily injections of PTH in mice should account for the increased number of osteoblasts and, thereby, the increased bone formation produced by this treatment regimen, in the present study we aimed to investigate the anti-apoptotic ability of hPTH (1-34) in cultured osteoblastic cells through induction by TNF-a in association with PTH anabolic treatment using a calvariaderived osteoblastic cell line. Cells were cultured in MEM-a, supplemented with FBS, ascorbic acid, ß-glycerphosphate and gentamicin, and were divided in experimental groups that received different treatments. In group I, cells were induced to apoptosis, receiveing treatment with TNF-a; in group II, cells were not induced to apoptosis and received intermittent treatment with hPTH(1-34); in group III, cells were induced to apoptosis and received intermittent treatment with hPTH(1-34); and in group IV, cells were not induced to apoptosis and didn¿t receive intermittent treatment with hPTH(1-34) (control). For determination of cell death, two methods were used: staining with Trypan Blue and flow cytometry. The results were statistically analyzed and demonstrated that intermittent treatment with hPTH(1-34) was able to inhibit apoptosis induction by 60%, thereby increasing osteoblast number even in the presence of TNF-a / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental