Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-17T08:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-24T23:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 274964.pdf: 1041847 bytes, checksum: 78f57ef1cf2c57cdff4ea5a802c1bb57 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo avaliar e comparar os mecanismos de defesa inata e induzida pela aplicação de ulvana à infecção de Colletotrichum gloeosporioides em macieira. Para tanto, plântulas resistentes foram tratadas com água destilada aos 6 dias antes da inoculação (DAI), enquanto que suscetíveis foram pulverizadas com ulvana (10mg/mL). Plântulas foram inoculadas com C. gloeosporioides e a severidade da Mancha Foliar de Glomerella (MFG) foi avaliada diariamente de 4 a 10 dias pós-inoculação (DPI), baseada na estimativa visual da porcentagem de tecido necrosado. Aos 10 DPI, todas as folhas foram destacadas e escaneadas para determinar a área foliar necrosada usando o Software Quant. A germinação dos conídios e a formação de apressórios de C. gloeosporioides foi avaliada às 24, 48 e 72 horas após a inoculação (HAI) na 2a e 3a folha expandida de plântulas. Discos foliares foram coletados, clareados e conservados em lactoglicerol até o exame em microscópio óptico. As atividades de peroxidases e glucanases foram determinadas em tecidos remanescentes da 2a e 3a folha expandida de plântulas de macieira às 24, 48 e 72 HAI. Plântulas com resistência inata nunca apresentaram sintomas da MFG. A ulvana pulverizada aos 6 DAI reduziu significativamente a severidade da MFG em plântulas. A germinação de conídios de C. gloeosporiodes não foi alterada pela resistência inata ou induzida por ulvana. O desenvolvimento de estruturas de infecção em plântulas resistentes foi semelhante às testemunhas, no entanto a pulverização com ulvana inibiu a formação de apressórios e elongamento do tubo germinativo do fungo. A resistência inata e induzida por ulvana aumentou a atividade de POX em plântulas de macieira, mas a atividade de GLU não foi alterada. Em suma, a resistência inata da macieira a MFG parece estar relacionada ao rápido reconhecimento do C. gloeosporioides com maior atividade de POX às 24 HAI. A redução da MFG por ulvana foi associada à menor formação de apressórios e elongamento do tubo germinativo de C. gloeosporioides, além do aumento da atividade de POX em plântulas às 72 HAI. / This study aimed to evaluate and compare the innate defense mechanisms and induced by the application of ulvan by infection of Colletotrichum gloeosporioides in apple. The resistance seedlings were treated with distillated water (control) 6 days before inoculation (DBI), while susceptible was sprayed with ulvan (10 mg/mL). Seedlings were inoculated with C. gloeosporioides and severity Glomerella Leaf Spot (GLS) was assessed daily from 4 to 10 days post-inoculation (DPI), based on visual estimation of the percentage of necrotic tissue. At 10 DPI all the leaves were detached and scanned to determine leaf area necrosis using Software Quant. Conidial germination and appressoria formation of C. gloeosporioides was evaluated at 24, 48 and 72 hours after inoculation (HAI) in 2nd and 3rd expanded leaf of seedlings. For this, foliar discs (9mm) were collected, leached and maintained in lactoglicerol until microscopical examination. The peroxidases and glucanases activity was determined in tissue remaining of the 2nd and 3rd expanded leaf of seedlings apple at 24, 48 and 72 HAI. Seedlings with innate resistance never showed symptoms of GLS. Ulvan sprayed at 6 DBI significantly reduced the severity of the GLS in seedlings. Conidial germination of C. gloeosporioides was not changed by either innate resistance or induced by ulvan. The development of structures of infection in resistance seedlings was similar to controls, however the ulvan spraying inhibited appressorium formation and germ tube elongation of fungus. Both innate resistance and induced by ulvan increased the POX activity of apple seedlings, but the activity of GLU was not changed. In sum, the innate resistance of apple against GLS seems to be related to the rapid recognition of C. gloeosporioides with increased activity of POX at 24 HAI. Disease reduction by ulvan was associated with a lesser appressorium formation and germ tube elongation of C. gloeosporioides, as well as enhanced POX activity in seedlings at 72 HAI.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T00:28:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 274975.pdf: 809433 bytes, checksum: b63aa5f59469f013c937206b22f4bf42 (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo avaliar os mecanismos de defesa bioquímicos e histológicos envolvidos na resistência inata do feijoeiro à antracnose, compará-los com aqueles induzidos pela aplicação foliar de ulvana e avaliar o efeito de inertes na armazenabilidade e eficiência da ulvana. Para a avaliação dos mecanismos de defesa, plantas resistentes e suscetíveis de P. vulgaris cv. Uirapuru foram tratadas, 6 e 3 dias antes da inoculação (DAI), com água (testemunha) ou ulvana (10mg/mL) e inoculadas com C. lindemuthianum no estádio fenológico V4. A severidade da antracnose foi avaliada em intervalos de 2 dias. As atividades de peroxidases e glucanases foram determinadas às 12, 24 e 48 horas após a inoculação (HAI) em folíolos do primeiro trifólio. A germinação de conídios, formação de apressórios de C. lindemuhianum e a reação de hipersensibilidade (RH) em plantas de P. vulgaris foram avaliadas às 12, 24 e 48 HAI em discos foliares retirados do primeiro trifólio. Para a avaliação do efeito de diferentes inertes, foram realizados quatro experimentos idênticos durante o período de 1 ano. Para tanto, plantas de P. vulgaris cv. Uirapuru foram tratadas, 6 e 3 DAI, com água destilada ou ulvana (10mg/mL) (testemunhas) ou com as formulações de ulvana com os inertes caulinita, sílica amorfa e atapulgita e inoculadas com C. lindemuthianum no estádio fenológico V4. Plantas resistentes não apresentaram sintomas da antracnose, sendo que, 4 DPI foram visualizados pequenos pontos necróticos caracterizando a RH. O efeito local da ulvana foi mais evidente que o sistêmico. A atividade de POX foi sempre maior em plantas resistentes, mas a atividade de GLU foi similar. A pulverização de ulvana elevou a atividade de POX e GLU tanto em plantas inoculadas quanto em não inoculadas. A germinação e a formação de apressórios do fungo não foram alteradas pela resistência inata ou pela aplicação de ulvana. O número de células hipersensitivas foi maior em plantas resistentes e menor em plantas tratadas com ulvana, quando comparadas com os respectivos controles. A eficiência da ulvana foi reduzida pela formulação contendo atapulgita, mas não pela que continha sílica amorfa ou caulinita.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:09:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226777.pdf: 1423317 bytes, checksum: 06344de2ef2baa141fe34897c24c9755 (MD5) / Com o estabelecimento de 39 isolados em cultivo in vitro foi realizada a caracterização morfológica pela qual foram observadas duas espécies, Colletotrichum acutatum e C. gloeosporioides. C. acutatum apresentou crescimento mais lento em meio BDA, insensibilidade ao fungicida benomyl, massa de conídios de coloração salmão, conídios de formato fusiforme, com uma ou ambas as extremidades afuniladas, e tamanho variando entre 4,3 - 4,8 x 11,4 - 13,9 µm. Isolados de C. gloeosporioides apresentaram crescimento mais rápido em meio BDA, sensibilidade ao fungicida benomyl, formação de peritécios e conídios retos com ápices obtusos e bases às vezes truncadas com tamanho variando entre 4,7 - 5,5 x 13,4 - 18,0 µm. Dentre os isolados classificados como C. gloeosporioides foi observado um grupo resistente ao fungicida benomyl, composto pelos isolados 17, 18, 19, 20 e 21, todos provenientes do município de Palmeira, PR. Teste de patogenicidade foi realizado nas cultivares Gala (suscetível) e Fuji (resistente). Somente os isolados provenientes de C. gloeosporioides causaram sintomas típicos de Mancha da Gala (MG) tanto em folhas como nos frutos da cv. Gala. Os isolados de C. acutatum não causaram sintomas de MG em folhas, e em frutos ocasionaram sintomas típicos de Podridão Amarga (PA). Nenhum dos isolados de ambas as espécies mostrou-se patogênico para a cv. Fuji. No estudo de geração de heterocariontes, foi observada a formação destes nos pareamentos dos isolados 17 x 18, 26 x 27, 27 x 28 e 32 x 33. Os heterocariontes não apresentaram diferenças significativas nas características morfológicas e culturais quando comparados aos isolados que lhes deram origem. Entretanto, no teste de patogenicidade os isolados H10, H11 e H12 não foram patogênicos quando inoculados em folhas de ambas as cultivares. A caracterização molecular de 39 isolados e 15 heterocariontes foi realizada com 10 iniciadores RAPD, que revelaram 165 bandas polimórficas, com peso molecular variando entre 0,35-2,5 kb. Pela análise de similaridade genética calculada pelo coeficiente de Jaccard, se agrupou os isolados em 7 grupos. O primeiro grupo apresentou 100% de similaridade genética e foi representado pelos isolados 1 e 2, provenientes de Caçador; o segundo grupo foi formado pelos isolados 31, 32, 33, 34, de Fraiburgo e 35, 36 e 37, de Palmas, apresentando similaridade variando entre 80 - 100%. O terceiro grupo foi formado pelos heterocariontes H10, H11 e H12, com similaridade variando entre 83 - 86,5%. O quarto grupo foi formado por 25 isolados, os quais causaram sintomas de MG em folhas da cv. Gala, com similaridade genética variando de 91,0 - 100%, oriundos de diversas localidades. O quinto grupo foi formado pelos heterocariontes H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H13, H14 e H15 com coeficiente de similaridade entre 58 - 97%. Os isolados 7 e 8 formaram o sexto grupo, de Frei Rogério, apresentando similaridade de 98%. O sétimo grupo formado pelos isolados 38, 39 e 40, apresentaram 100% de similaridade genética, procedentes de São Joaquim. Não houve relação direta entre os grupos formados pelo teste de patogenicidade e pela análise molecular, sendo que este último tipo de analise detectou um maior polimorfismo entre os isolados trabalhados.

ELOY, Ygor Raphael Gomes. Papel do peróxido de hdrogênio na interação do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp] com o fungo Colletotrichum gloesporioides (Penz.) Penz. & Sacc. [Teleomorfo Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Von Schrenk]. 2007. 158 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-19T11:58:23Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_yrgelooy.pdf: 1787072 bytes, checksum: bcc6cf1a3dc36c9e16fb8e0e1485b9e0 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:27:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_yrgelooy.pdf: 1787072 bytes, checksum: bcc6cf1a3dc36c9e16fb8e0e1485b9e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_yrgelooy.pdf: 1787072 bytes, checksum: bcc6cf1a3dc36c9e16fb8e0e1485b9e0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Cowpea is an important legume of the Northeast of Brazil and its yield is affected by Colletotrichum fungi. These fungi are known to occur on and cause disease anthracnose on the broad range of plants. In addition, the rapid and transient accumulation of reactive oxygen species, termed ‘oxidative burst’, is one of the earliest observable reaction of plant cells to microbial infection. As plant H2O2 is believed to have direct antimicrobial effects on pathogens it was raised the hypothesis that alteration of H2O2 concentrations by pharmacological compounds could confer differences in susceptibility of the cowpea genotype BR-3-Tracuateua to C. gloeosporioides attack. Thus, seeds were germinated on humid Germitest® paper and after four days seedlings were transferred to hydroponic solution. Eight days later, the primary leaves were excised, infiltrated with glucose oxidase (GO+G), salicylic acid (AS), catalase (CAT) and diphenyleneiodonium chloride (DPI) transferred to Petri dishes and inoculated with 2.0 x 105 spores mL-1 fungal suspension on the adaxial surface. After, leaves were placed in darkness and collected at 12, 24, 48 and 72 hours. By GO+G and SA leaf treatments showed 144.96 and 186.05 nmol H2O2 g-1 fresh mass (FM), respectively, and the fungus presented a subcuticular, intramural necrotrophic strategy, forming secondary hyphae associated with a quick spread and a rapid killing of the host cells. On the leaves treated with SA, it was observed lipid peroxidation and the absence of melanized appresoria. However, CAT and DPI treatment leaves presented 55.50 nmol H2O2 g-1 FM and the fungus showed hemibiotrophic infection-type, with globular vesicles and primary and secondary hyphae formation. All results suggest that despite H2O2 influenced directly the fungal infection process-type it does not confer resistance of cowpea to C. gloeosporioides. / Feijão-de-corda é um importante legume presente na região Nordeste do Brasil e sua produção é afetada por fungos do gênero Colletotrichum. Estes fungos são conhecidos por causar antracnose em uma grande variedade de plantas. Além disso, o acúmulo rápido e transiente de espécies reativas de oxigênio, nomeado de ‘oxidative burst’, é uma das primeiras reações observáveis em células de plantas diante infecção microbiana. Como H2O2 produzido por plantas é considerado por apresentar efeitos antimicrobianos diretos, foi levantada a hipótese que alterações nas concentrações de H2O2 por substâncias farmacológicas poderiam conferir diferenças na susceptibilidade do genótipo de feijão-de-corda, BR-3-Tracuateua, ao ataque do fungo C. gloeosporioides. Deste modo, sementes foram germinadas em papéis Germistest® umedecidos e, depois de 4 dias, plântulas foram transferidas para solução hidropônica. Passados oito dias, as folhas primárias foram cortadas, infiltradas com glucose oxidase (GO+G), ácido salicílico (AS), catalase (CAT) e cloreto de difenilenoiodônio (DPI), transferidas para placas de Petri e inoculadas com suspensão do fungo ajustada para concentração de 2,0 x 105 esporos mL-1. Em seguida, as folhas foram mantidas no escuro e foram coletadas em 12, 24, 48 e 72 horas. Folhas tratadas com GO+G e AS mostraram 144,96 e 186,05 nmol H2O2 g-1 de massa fresca (MF), respectivamente, e o fungo apresentou estratégia subcuticular, intramural necrotrófica, formando hifas secundárias associadas com ágil crescimento e rápida morte das células hospedeiras. Nas folhas tratadas com AS, foi observada peroxidação de lipídios e ausência de apressórios melanizados. Contudo, folhas tratadas com CAT e DPI apresentaram 55,50 nmol H2O2 g-1 MF e, o fungo, mostrou modo de infecção hemibiotrófico, com vesículas globulares e formação de hifas primárias e secundárias. Todos os resultados sugerem que, apesar do H2O2 tenha influenciado diretamente o modo de infecção do fungo, este não conferiu resistência no feijão-de-corda ao C. gloeosporioides.

SILVA, Fredy Davi Albuquerque. Homeostase redox, genes associados e a resistência do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] ao fungo hemibiotrófico Colletotrichum gloeosporioides [(Penz) Penz & Sacc.]. 2015. 145 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T15:47:22Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_fdasilva.pdf: 13172308 bytes, checksum: eec041dd293481a11b32a2b64584598a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:43:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_fdasilva.pdf: 13172308 bytes, checksum: eec041dd293481a11b32a2b64584598a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:43:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_fdasilva.pdf: 13172308 bytes, checksum: eec041dd293481a11b32a2b64584598a (MD5) Previous issue date: 2015 / Colletotrichum gloeosporioides is an important hemibiotrophic pathogen with a broad host range that causes substantial crop losses. Recent data have shown that the hypersensitive response (HR) is one event involved in the resistance of cowpea (V.unguiculata) genotype BR-3 against C.gloeosporioides (LPVD-1 isolate). Several studies have been undertaken on the defense mechanism of plant to hemibiotrophic pathogen, but overall they remain poorly understood. Previously, we have compared changes in protein expression induced in resistant cowpea genotype after infection with C.gloeosporioides using a proteomic approach. Based on these results, in the present study, we evaluated the defense responses induced by C.gloeosporioides in V.unguiculata associated with oxidative burst, accumulation of reactive oxygen species (ROS) such as superoxide anion (O2•-), hydrogen peroxide (H2O2) as well expression of antioxidant genes using RT-qPCR analysis. At the same time, we analyzed the C.gloeosporioides infection kinetics by optical microscopy (OM) and scanning electron microscopy (SEM). Increased O2•- and H2O2 was detected in cowpea 2 hours after inoculation (hai) using NBT and DAB staining, respectively. Spectrophotometric measurements showed two peaks H2O2 production, 2 and 12 hai, showing a biphasic kinetics. The increase of H2O2 was accompanied by lipid peroxidation 2 and 48 hai. OM and SEM analyzes showed that C.gloeosporioides was able to generate germ tubes and structures such as apressoria and develop under the surface of the leaves. However, despite of the development and attempt to infection, ultra-structural changes were observed on the surface of conidia and hyphae, 8 hai led to no infection of host cells. Analysis by RT-qPCR demonstrated that the genes VuFeSODI and VuCuZnSODII are up- regulated in chloroplasts at 4 hai, while the gene VuCuZnSODI was well up-regulated 12 hai. In relation to genes associated to scavenging of H2O2, VuPrxIIBCD showed a strong up-regulated of transcript at 2 hai while that VuAPXI showed up-regulated only 12 hai. VuCATI and VuCATII showed that the quantitative level of transcript expression was up- regulated 12 hai, indicating that they are important in the maintenance of H2O2 in peroxisomes. Contrarily, VuPrxIIE transcript was down-regulated in the early hours after inoculation, but showed increased expression levels at 48 hai suggesting participate in the regulation of H2O2 in chloroplasts. The present study indicates that H2O2 has an important role in the initial defense strategies of cowpea acting against C.gloeosporioides and functioning as a signaling molecule. Furthermore, genes associated with antioxidant defenses studied here seem to be involved, in combination with other molecules, in the regulation of H2O2 levels toward preventing cell death and regulating the cell redox homeostasis, important events in the resistance mechanisms of plants to pathogens. / Colletotrichum gloeosporioides é um importante patógeno hemibiotrófico com uma ampla gama de hospedeiros que causa perdas substanciais de colheitas. Dados recentes mostraram que a resposta hipersensitiva (HR) é um evento envolvido na resistência do feijão-de-corda (V.unguiculata) genótipo BR-3 contra C.gloeosporioides (isolado LPVD-1). Vários estudos têm sido realizados sobre os mecanismos de defesa de plantas a patógenos hemibiotróficos, mas em geral eles continuam a ser mal compreendidos. Anteriormente, comparamos mudanças na expressão de proteínas induzidas em genótipos resistentes de feijão-de-corda após a infecção com C. gloeosporioides utilizando uma abordagem proteômica. Com base nesses resultados, no presente estudo, avaliamos as respostas de defesa induzidas por C.gloeosporioides em V.unguiculata associadas com a explosão oxidativa, o acúmulo de espécies reativas de oxigênio (EROs), como o ânion superóxido (O2•-), e o peróxido de hidrogênio (H2O2), bem como a expressão de genes antioxidantes, utilizando análise por RT-qPCR. Ao mesmo tempo foi analisada a cinética de infecção de C.gloeosporioides por microscopia óptica (MO) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). O aumento de O2•- e H2O2 foi detectado em feijão-de-corda, 2 horas após a inoculação (hai) utilizando coloração por NBT e DAB, respectivamente. A quantificação espectrofotométrica demonstrou dois picos de produção de H2O2, 2 e 12 hai, mostrando uma cinética bifásica. O aumento de H2O2 foi acompanhado por peroxidação lipídica 2 e 48 hai. As análises de MO e MEV mostraram que C.gloeosporioides foi capaz de gerar estruturas tais como tubos germinativos e apressórios e se desenvolver sob a superfície das folhas. No entanto, apesar do desenvolvimento e tentativa de infecção, alterações ultra-estruturais foram observadas na superfície de conídios e hifas 8 hai levando a não infecção de células hospedeiras. Análise por RT-qPCR demonstrou que os genes VuFeSODI e VuCuZnSODII apresentaram aumento de expressão 4 hai, enquanto que o gene VuCuZnSODI foi bem expresso 12 hai. Em relação aos genes associados à regulação de H2O2, VuPrxIIBCD mostrou uma forte aumento de transcristos em 2 hai enquanto que, VuAPXI mostrou aumento de expressão apenas 12 hai. VuCATI e VuCATII mostram aumento de expressão quantitativa dos transcritos 12 hai, indicando que eles são associados a manutenção de H2O2 em peroxissomos. Contrariamente, a expressão dos transcritos de VuPrxIIE foi reprimida nas primeiras horas após a inoculação, contudo, apresentaram níveis aumentados de expressão em 48 hai, sugerindo participar na regulação de H2O2 nos cloroplastos. O presente estudo indica que H2O2 tem um papel importante nas estratégias de defesa iniciais de feijão-de-corda, agindo contra C.gloeosporioides e funcionando como uma molécula sinalizadora. Além disso, os genes associados com defesas antioxidantes estudados parecem estar envolvidos, em combinação com outras moléculas, na regulação dos níveis de H2O2 para prevenir a morte celular e regular a homeostase redox, eventos importantes nos mecanismos de resistência de plantas a patógenos.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-05-03T16:29:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 8727950 bytes, checksum: 9b6175ee5adac06db497bf3862a7306a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-03T16:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 8727950 bytes, checksum: 9b6175ee5adac06db497bf3862a7306a (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho descreve a síntese, caracterização e avaliação da atividade antifúngica de dezoito alilsulfonamidas, seis sulfonamidas primárias e dois intermediários sintéticos. A primeira etapa de síntese ocorreu via reação de Morita-Baylis-Hillman mediante o acoplamento entre benzaldeído e acrilato de metila sob catálise com trimetilamina, utilizando metanol como solvente. O aduto resultante, 2-[hidroxi(fenil)metil]acrilato de metila (2) foi desidratado e convertido no (Z)-2-(bromometil)-3-(fenil)acrilato de metila (3) através de reação com brometo de lítio e ácido sulfúrico em acetonitrila. Nove alilsulfonamidas com dupla ligação C=C interna foram sintetizadas a partir do brometo 3 em reação com nove diferentes sulfonamidas primárias e carbonato de potássio, utilizando acetona como solvente, sob aquecimento. Uma alilsulfonamida com dupla ligação C=C interna (6e) foi sintetizada pela reação entre o aduto 2 e a 4-nitrobenzenossulfonamida em 1,2-dicloroetano, catalisada por ácido sulfúrico, sob aquecimento. Oito alilsulfonamidas com dupla ligação C=C externa à cadeia foram sintetizadas reagindo-se primeiramente o brometo 3 com DABCO em acetonitrila e, em seguida, pela adição de carbonato de potássio e da sulfonamida primária apropriada. As dezoito alilsulfonamidas obtidas são inéditas. Quatro sulfonamidas primárias utilizadas na rota sintética estão disponíveis comercialmente. As demais foram preparadas a partir de seus cloretos de sulfonila, em reação com amônia, sob aquecimento. O aduto 2, o brometo 3, e as sulfonamidas primárias sintetizadas foram caracterizados por temperaturas de fusão e espectroscopia vibracional no infravermelho, em comparação com dados da literatura. As alilsulfonamidas inéditas com fórmulas gerais PhCH=C(COOMe)G (onde G = -NHSO2Me, -NHSO2Et, -NHSO2Bu, - NHSO2Oct, -NHSO2Ph, -NHSO2PhF, -NHSO2PhCl, -NHSO2PhBr, -NHSO2PhI, -NHSO2PhNO2) e PhCH(G)C(COOMe)=CH2 (onde G =-NHSO2Et, -NHSO2Bu,- NHSO2Oct, -NHSO2PhF, -NHSO2PhCl, NHSO2PhBr,-NHSO2PhI,- NHSO2PhNO2) foram caracterizadas pelas técnicas já mencionadas, além de espectrometria de massas de alta resolução (HR-ESI-MS) e ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H e 13 C. Os espectros vibracionais permitiram a identificação de algumas ligações químicas e grupos funcionais dos compostos inéditos. Os espectros de RMN de 1H e 13 C apresentaram o número de sinais, multiplicidades e deslocamentos químicos compatíveis com as estruturas propostas. As fórmulas moleculares sugeridas para cada composto foram confirmadas pelos espectros de HR-ESI-MS. Todos os compostos sintetizados tiveram sua atividade antifúngica avaliada frente a Colletotrichum acutatum. As alilsulfonamidas mais ativas, (E)-2-(butilsulfonamidometil)-3-fenilacrilato de metila e 2-[(4-clorofenil-sulfonamido)(fenil)metil]acrilato de metila, inibiram o crescimento de C. acutatum em 54 e 51%, respectivamente, na concentração de 1,5 mmol.L-1. As alilsulfonamidas foram, na maioria dos casos, mais ativas que as respectivas sulfonamidas primárias precursoras, sendo algumas destas inativas. Tais resultados sugerem que o caráter lipofílico associado ao valor de logP para cada composto é importante para a atividade antifúngica, visto que para todas as alilsulfonamidas os valores de logP foram superiores aos das sulfonamidas precursoras. Foi possível determinar o parâmetro IC 50 para o aduto 2 e para o brometo 3, correspondendo a 2,24 e 0,34 mmol.L -1, respectivamente. O composto 3 apresentou a atividade antifúngica mais promissora de todos os compostos testados, inibindo 100% do crescimento micelial de C. acutatum na concentração de 0,45 mmol.L -1, com uma atividade comparável à do fungicida comercial Mancozeb (valores de IC50 próximos), em ensaios biológicos in vitro. / This work describes the synthesis, characterization, and evaluation of the antifungal activity of eighteen allyl-sulfonamides, six primary sulfonamides, and two synthetic intermediates. The first step of the synthesis occurred via Morita- Baylis-Hillman reaction with the coupling between benzaldehyde and methyl acrylate, under trimethylamine catalysis, using methanol as solvent. The resulting adduct, methyl 2-[hydroxy(phenyl)methyl]acrylate (2), was dehydrated and converted into methyl (Z)-2-(bromomethyl)-3-(phenyl)acrylate (3) by the reaction with lithium bromide and sulfuric acid in acetonitrile. Nine allyl- sulfonamides with internal C=C double bond were synthesized from the bromide 3 in reaction with nine different primary sulfonamides and potassium carbonate using acetone as a solvent, under heating. One allyl-sulfonamide with internal C=C double bond C = C (6e) was synthesized by the reaction between the adduct 2 and 4-nitrobenzenesulfonamide in 1,2-dichloroethane, catalysed by sulfuric acid, under heating. Eight allyl-sulfonamides with internal C=C double bond were synthesized by the reaction of the compound 3 with DABCO in acetonitrile, followed by the addition of potassium carbonate and the appropriate sulfonamide to the reaction mixture. Four primary sulfonamides employed in the synthesis are commercially available. The remaining six sulfonamides were prepared from their respective sulfonyl chlorides in reaction with concentrated ammonia solution, under reflux. The adduct 2, the bromide 3 and the primary sulfonamides synthesized were characterized by their melting points and by infrared spectroscopy, in comparison with published data. The new allyl-sulfonamides with general formulae PhCH=C(COOMe)G (where G = - NHSO2Me, -NHSO2Et, -NHSO2Bu, NHSO2PhCl, -NHSO2PhBr, -NHSO2Oct, -NHSO2Ph, -NHSO2PhF, - -NHSO2PhI, -NHSO2PhNO2) and PhCH(G)C(COOMe)=CH2 (where G = -NHSO2Et, -NHSO2Bu, -NHSO2Oct, - NHSO2PhF, -NHSO2PhCl, -NHSO2PhBr, -NHSO2PhI, -NHSO2PhNO2) were characterized by the previously mentioned techniques, and by high-resolution electrospray ionization mass spectrometry (HR-ESI-MS) and nuclear magnetic resonance (NMR) of 1H and 13 C. The infrared spectra allowed the identification of some chemical bonds and functional groups of the unpublished compounds. The NMR spectra of 1H and 13 C showed the number of signals, multiplicities and chemical shifts compatible with the proposed structures. The molecular formulae suggested for each compound were confirmed by the HR-ESI-MS spectra. All the synthesized compounds had their antifungal activity evaluated against Colletotrichum acutatum. The most active allyl-sulfonamides, methyl(E)- 2-(butylsulfonamidomethyl)-3-phenylacrilateand methyl 2-[(4- chlorophenylsulfonamido)(phenyl)methyl]acrilate, inhibited the growth of C. acutatum in 54 and 51%, respectively, at the concentration of 1,5 mmol.L -1. Almost allallyl-sulfonamides were more active than the parent primary sulfonamides, some of which were inactive. As the allyl-sulfonamides presented higher logP values than their respective precursors, these results suggested that the greater lipophilic character of the allyl-sulfonamides is important for their antifungal activity. It was possible to determine the IC 50 values for the adduct 2 and the bromide 3, which corresponded to 2,24 and 0,34 mmol.L-1, respectively. The compound 3 exhibited the most promising antifungal activity of all tested compounds, showing 100% of inhibition of the mycelial growth of C. acutatum at 0,45 mmol.L-1, with an in vitro IC50 value close to the value for the commercial fungicide Mancozeb.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:25:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224306.pdf: 1144206 bytes, checksum: 3851e6455c9e7fcbff5c43c79ee99f3c (MD5) / Compostos presentes em algas marinhas podem desempenhar importantes funções biológicas, entre elas: atividade antimicrobiana direta, influenciando as interações entre planta-patógeno ou ativando mecanismos de defesa das plantas tratadas. O polissacarídeo ulvana, os extratos solúvel e insolúvel em metanol, o extrato etanólico obtidos de Ulva fasciata e o polissacarídeo B obtido de Ulva sp. foram testados quanto a atividade antimicrobiana e o potencial desta macroalga marinha no controle da antracnose de feijoeiro comum, causada pelo fungo Colletotrichum lindemuthianum. Para a obtenção da ulvana, algas frescas foram autoclavadas com água destilada; a solução resultante foi filtrada e precipitada com etanol. O polissacarídeo foi identificado por RNM-1H e RNM-13C e I.V. como unidades repetitivas de ácido ulvanobiurônico-3-sulfato. Para a obtenção dos extratos metanólicos e do extrato etanólico, algas secas e moídas foram extraídas com metanol em sistema de soxhlet ou com etanol, respectivamente. A atividade antimicrobiana da ulvana e dos extratos metanólicos foi determinada pelo método de difusão em ágar frente a bactérias potencialmente patogênicas ao homem: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, a levedura Candida albicans e bactérias fitopatogênicas: Xanthomonas campestris e Erwinia carotovora. A concentração inibitória mínima, através do método de microdiluição em caldo, foi determinada contra os fungos: C. lindemuthianum (fitopatogênico), Trichophyton mentagrophytes e Microsporum canis (dermatófitos). Além disto, o efeito da ulvana e dos extratos metanólicos foi avaliado, in vitro, nos testes de inibição de crescimento miceliano e inibição da germinação de conídios de C. lindemuthianum. In vivo, foi avaliado o efeito do extrato etanólico, extratos metanólicos, ulvana e polissacarídeo B na proteção de plantas de feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) contra antracnose em casa-de-vegetação. Os resultados demonstraram que os extratos metanólicos inibiram o crescimento de bactérias Gram-negativas: P. aeruginosa, X. campestris e E. carotovora. Além disso, o extrato insolúvel (2 mg/ml) em metanol inibiu o crescimento de T. mentagrophytes e o extrato solúvel em metanol (1 e 2 mg/ml) inibiu significativamente (p<0,05) o crescimento miceliano de C. lindemuthianum. Por outro lado, nenhum dos extratos testados inibiu a germinação dos conídios deste fungo e a ulvana não apresentou nenhuma atividade in vitro contra os microrganismos testados. Nos experimentos in vivo, observou-se que o extrato etanólico (10 mg de alga seca/ml) e a ulvana (10 mg/ml) de U. fasciata apresentaram uma possível indução de resistência quando pulverizados três dias e quatro dias antes da inoculação do fungo, respectivamente.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-07Bitstream added on 2014-06-13T18:45:56Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cd_dr_botfca.pdf: 609895 bytes, checksum: 7c6e8a8db45c92e029290feb971d57fa (MD5) / Espécies de Stylosanthes estão amplamente distribuídas em regiões tropicais e subtropicais das Américas, África e sudeste da Ásia, sendo o Brasil o principal centro de origem e diversidade do gênero, com 25 das 45 espécies descritas ocorrendo naturalmente em várias regiões do País. O gênero adapta-se a diferentes condições edafoclimáticas, apresentando melhor potencial de uso no Brasil. A antracnose, causada por Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., forma anamórfica de Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Scherenk tem sido o principal entrave à ampla utilização de Stylosanthes. Em 2000, o Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Corte (Embrapa Gado de Corte), da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (Embrapa), lançou a cultivar Estilosantes Campo Grande, constituída por uma mistura física de populações derivadas de 11 introduções de S. capitata e seis de S. macrocephala. Tais populações foram selecionadas durante seis gerações pelo método de “bulk”. Ainda, para a composição da cultivar, misturou-se as sementes das populações selecionadas nas proporções de 80% e 20%, respectivamente. Conforme foi desenvolvida, pressupõe-se que a cultivar seja composta de indivíduos geneticamente diferentes, porém não se sabe ao certo a proporção dos mesmos, fato que dificulta saber ao longo do tempo se a composição da cultivar mantém-se ou não a mesma. Assim, realizou-se este trabalho com os objetivos de identificar a existência de variabilidade de progênies originárias da referida cultivar e selecionar germoplasma com alto grau de resistência à antracnose e performance agronômica. Este projeto foi... . / Species of the genus Stylosanthes are widely distributed in tropical and subtropical regions of the Americas, Africa, and Asia. The main center of origin and diversity is Brazil, the native habitat of 25 of the 45 described species. The genus is adapted to a variety of edaphic and climatic conditions and showed good potential as a cultivated forage in Brazil. Anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., the anamorphic form of Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld & Scherenk, has been the main limitation to the commercial utilization of Stylosanthes. In 2000, the National Beef Cattle Research Center (Embrapa Beef Cattle), from Brazilian Agricultural Research Corporation (Embrapa) released Stylosanthes cv. Campo Grande, it is a physical mixture of hybrid-derived progenies of 11 accessions of S. capitata and six lines of S. macrocephala. The resulting populations were advanced through six generations of bulk seed production. Seeds of the two species were mixed in the proportion of 80% and 20%, respectively, to form the new cultivar. Due to its origin, the cultivar was considered as composite of genetically diverse individuals. However, the actual composition and its long-term maintenance remained unknown factors. Consequently, this project was initiated with the objective to identify the degree of variability among component progenies in the cultivar and select germplasm with a high degree of anthracnose resistance and agronomic performance. The project was carried out at Embrapa Beef Cattle, Campo Grande-MS, from 2000 to 2002. In the first instance, individual plants were raised in the green house from single seed obtained from commercial samples of the cultivar. Some 294 S. capitata plants and 124 of S. macrocephala have been established... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:45:05Z : No. of bitstreams: 1 leptokarydis_ih_dr_araiq.pdf: 4347278 bytes, checksum: 74059159e4a0a5ee40f9805bfa0d6f0d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os fungos, diferente dos vegetais são heterotróficos, mais especificamente quimiorganotróficos, por suas características específicas pertencem a um reino separado. Alguns dos fungos através de sua evolução se especializaram em invadir os espaços intercelulares das plantas passando a sobreviver dentro dos seus hospedeiros, não provocando nenhuma patologia. Estes microrganismos são denominados de fungos endofíticos. A disputa por alimentos entre os fungos no interior das espécies vegetais, gerou a necessidade dos fungos produzirem metabolitos secundários com atividades contra outros microrganismos, podendo assim demarcar seu território. Todo este processo deve acontecer de forma a não causar patologias na planta que é a fonte de seu alimento, em alguns casos essas relações de mutualismo e comensalismo se aprimoraram sendo muito comum alguns vegetais possuirem fungos endofíticos protegendo contra pragas insetos e patógenos. Este trabalho descreve o isolamento e a purificação dos fungos endofíticos associados às folhas, caules, raízes e sementes da espécie vegetal Michela champaca. Foram isolados 8 fungos, sendo 3 dos caules, 4 das folhas, 1 das raízes, nenhum fungo foi isolado das sementes. Os extratos brutos produzidos por estes fungos em caldo de dextrose e batata foram avaliados quimicamente (CLAE-DAD e RMN1H) e submetidos à bioensaios para avaliação da potencialidade anticancerígena, antifúngica e anticolinesterásica. Todos os extratos apresentaram atividade contra os fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e 40% apresentaram atividade frente às linhagens mutantes de Saccharomyces cerevisiae. Após esta triagem, os fungos endofíticos Mc-8R (ainda não identificado) e Colletotrichum gloeosporioides (Mc-7F) foram selecionados para estudo químico/biológico. / Some fungal species, through their evolution, have specialized in invading plants and surviving inside their hosts causing no warm them. These microorganisms have been called endophytic which in the invasion process, produce chemical substances that inhibit competitors to invade their neighborhood and thus survive in harmony with the host. This work seeks to evaluate the chemical diversity of substances from endophytic fungi associated to Michelia champaca L. that present biological activity by isolating and identification of their secondary metabolites. This work resulted in the isolation of eight fungi species and selection of 2 strains which presented strong antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum, both of them pathogenic fungus; and a weak antitumor activity against mutant strains of Saccharomyces cerevisiae. The first one was codified as Mc-8R and chromatographic fractionation of its EtOAc extract allowed the identification of the Pirenocines A (1), E (2) and B (3) and the Pirenochaetic acids, C (4), A (5) and B (6), and in addition to the novel (7) and (8). Ergosterol (9), was found in the hexanic extract obtained from growing Mc-8R in rice, and the Ergosterol peroxide (10), which was isolated from the hexanic extract in corn. The other selected fungi species was identified as Colletotrichum gloeosporioides. The fractioning of its EtOAc extract led to the isolation of the known substances as Uracil (11), cyclo-(S*-Pro-S*-Tyr) (12), cyclo-(S*-Pro-S*-Val) (13), 2-Aminophenyl acetic acid (2-APA), (14), p-Hydroxyphenylacetic acid (15), 4-Hydroxybenzamide (16) and (2-Hydroxy-phenyl)- acetic acid (17), in addition to the novel compounds (18) and (19). 2-Hexylidene-3-methylsuccinic acid (20) was also identified as major compound from the fungus Mc-C3, (Xylaria sp.).