Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4441.pdf: 1203185 bytes, checksum: 175865816686da28004a3a17cf8153ce (MD5) Previous issue date: 2011-07-27 / Currently there is great concern about the quality and food contamination. All food marketed "in nature" may have some kind of contamination by microorganisms can be or not pathogenic for those who consume them. The contamination can occur throughout the production chain until it reaches the final consumer. In addition to the health problem, contamination can contribute to reducing the shelf life of products "in nature." A product that can act in this chain, improving the hygiene of foods such is propolis, that since ancient times has been used to battle infections. Known as a natural antibiotic is widely used in veterinary and human medicine as well as industries such as food, pharmaceutical, cosmetics and others. Propolis is derived from a mixture of plant resins, collected by bees, and its therapeutic action is associated with a high content of flavonoids. In Brazil, the green propolis is considered the that hve best antibacterial efficiency. Thus, this study sought to characterize and identify the action of green propolis, produced in the southern state of Minas Gerais, on gram-negative bacilli collected from horticultural and from results obtained propose a possible form of incorporate extracts of propolis in horticultural production chain for the purpose of cleaning the places where food is transported, stored, and the hygiene of such foods. We evaluated the action of propolis on the bacilli collected by obtaining growth curves in the presence of propolis and the disk diffusion method, with the aim of finding the minimum concentration of propolis extract able to inhibit or delay the growth of these bacilli and that do not change the taste, smell and color of food where the propolis was applied. / Atualmente há uma grande preocupação com a qualidade e a contaminação dos alimentos. Todos os alimentos comercializados in natura podem ter algum tipo de contaminação por microrganismos podendo ser ou não patogênicos para os que os consomem. A contaminação pode acontecer em toda cadeia de produção até chegar ao consumidor final. Além do problema sanitário, a contaminação pode contribuir para a diminuição do tempo de prateleira de produtos in natura . Um produto que pode atuar nesta cadeia, melhorando a higiene dos alimentos como os hortifrutigranjeiros é a própolis que desde a antiguidade tem sido usada para combater infecções. Conhecida como um antibiótico natural é muito utilizada na medicina veterinária e humana além de indústrias como alimentícia, farmacêutica, cosmética entre outras. A própolis é originada a partir de uma mistura de resinas de plantas, coletada pelas abelhas, sendo que sua ação terapêutica está associada ao seu alto conteúdo de flavonóides. No Brasil, a própolis verde é considerada a de melhor eficiência na ação antibacteriana. Assim, neste trabalho buscou-se caracterizar e identificar a ação da própolis verde, produzida na região Sul do estado de Minas Gerais, sobre bacilos gram-negativos coletados em hortifrutigranjeiro e a partir dos resultados obtidos propor uma possível forma de incorporar os extratos de própolis na cadeia de produção de hortifrutigranjeiros com a finalidade de higienização dos locais onde os alimentos são transportados, armazenados, além da higienização de tais alimentos. Avaliou-se a ação da própolis sobre os bacilos coletados por meio da obtenção de curvas de crescimento na presença de própolis e pelo método de difusão de disco, com o objetivo de se encontrar a mínima concentração de extrato de própolis capaz de inibir ou retardar o crescimento destes bacilos e que não altere o sabor, cheiro e cor dos alimentos onde a própolis fora aplicada.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-24T12:55:10Z No. of bitstreams: 1 Eliana Maria dos Passos.pdf: 388635 bytes, checksum: e5d6eb95c9d3a471c040f1951f046959 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T12:55:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliana Maria dos Passos.pdf: 388635 bytes, checksum: e5d6eb95c9d3a471c040f1951f046959 (MD5) Previous issue date: 2009-02-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The termite Coptotermes gestroi (Wasmann) is an urban and agricultural pest that has been established in many areas of the world. The use of entomopathogenic fungi is an option to minimize the economic loss caused by this termite. It is known, however, that physiological disorders caused by a pathogen trigger defence reactions of the insects, such as humoral and cellular responses (hemocytes). Thus, this research had as objectives: 1. to verify the pathogenicity of Isaria farinosa and I. fumosorosea to the termite C. gestroi and 2. to qualify and quantify the hemocytes in workers of this insect challenged by the pathogenic and virulent isolates. All fungi isolates tested, in the concentration of 107 conidia mL-1, were pathogenic and virulent causing more than 60% mortality, with an average survival of 2.0 to 3.9 days. However, the isolate URM-4995 of I. farinosa was one of the most virulent, being selected for the LC50 determination, estimated at 6.7 x 105 conidia mL-1, and to study the cellular immune response.The total average of hemocytes found in the hemolymph of workers termites treated with that isolate, in the concentration of 107 conidia mL-1, was not different from the hemocytes average recorded for the control, within 12, 24, 36 and 48 hours intervals. Regarding the cell types, the analysis in light microscopy revealed that the most frequent cells were plasmatocytes. The differential counts in infected and uninfected insects, did not differ significantly within the timeintervals assessed, there was only a change in function of time for plasmatocytes and prohemocytes. Thus, the results of total and differential counts show that I. farinosa in the concentration 107 conidia mL-1, did not affect quantitatively and qualitatively in the number of hemocytes of C. gestroi and that this pathogen appears as a promising candidate for controllingthis insect. / O cupim Coptotermes gestroi (Wasmann) é uma praga urbana e agrícola que vem se estabelecendo em muitas áreas do mundo. A utilização de fungos entomopatogênicos é uma opção para minimizar os prejuízos econômicos causados por este cupim. Sabe-se, contudo, que distúrbios fisiológicos ocasionados por um patógeno desencadeiam reações de defesa pelos insetos, como respostas humorais e celulares (hemócitos). Desta forma, a presente pesquisa teve como objetivos: 1. verificar a patogenicidade de isolados de Isaria farinosa e Isaria fumosorosea ao cupim C. gestroi e 2. avaliar qualitativamente e quantitativamente os hemócitos em operários deste inseto desafiado por isolado patogênico e virulento. Todos isolados se mostraram patogênicos, na concentração 107 conídios mL-1, ocasionando mortalidades acima de 60% e virulentos, apresentando uma sobrevivência média de 2,0 a 3,9 dias. Porém, o isolado URM-4995 de I. farinosa destacou-se como um dos mais virulentos, sendo selecionado para a determinaçãoda CL50, estimada em 6,7 x 105 conídios mL-1, e estudo da resposta imunológica celular. A média total de hemócitos encontrada na hemolinfa de operários tratados com este isolado, na concentração de 107 conídios mL-1, não foi diferente da média de hemócitos registradas para a testemunha, nos intervalos de 12h, 24h, 36h e 48h. Com relação aos tipos celulares, a análise em microscopia de luz revelou que as células mais frequentes foram plasmatócitos A contagem diferencial nos insetos infectados e não infectados, não diferiu significativamente nos intervalos de tempo avaliado, constatou-se somente uma variação em função do tempo para os plasmatócitos e prohemócitos. Assim, os resultados das contagens total e diferencial apresentados demonstram que I. farinosa, na concentração 107 conídios mL-1, não interferiu quantitativamente e qualitativamente no número de hemócitos de C. gestroi e que tal patógeno apresenta-se como promissor para o controle deste inseto.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-01T15:40:21Z No. of bitstreams: 1 Hugo Jose Goncalves dos Santos Junior.pdf: 559829 bytes, checksum: ef023fd54c27d2757f1cfcc6eb367bf7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-01T15:40:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hugo Jose Goncalves dos Santos Junior.pdf: 559829 bytes, checksum: ef023fd54c27d2757f1cfcc6eb367bf7 (MD5) Previous issue date: 2009-01-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The combined use of the entomopathogenic Bacillus thuringiensis Berliner with other arthropod natural enemies is an approach to improve the management of insect pests. Among the natural enemies, the egg parasitoid Trichogramma (Westwood) is recognized by its efficacy against various pest species in different agroecosystems, and can be used combined with B. thuringiensis. However, although B. thuringiensis exhibit several advantages, studies are required to ascertain about its selectivity for beneficial insects. The selection of isolates of B. thuringiensis is a way to assess the virulence to target insect pests, and the discovery of new toxins with higher entomopathogenic activity. Populations of Trichogramma should also be selected to avoid failure of its use, since this parasitoid has large variation regarding host preference and environmental conditions. Thus, this study selected isolates of B. thuringiensis (Bt) and populations of Trichogramma spp. to control of Helicoverpa zea (Boddie) (Lepidoptera: Noctuidae). The selection methodology identified the Bt isolates Bt 23 and Bt 26 as promissory to control of H.zea. Among populations of Trichogramma evaluated there was variability in relation to the parameters analyzed and the thermal conditions, and the population of T. atopovirilia (Tatp1) exhibited the best performance at 25°C, and the populations Tp13 and Tp16 of T. pretiosum in thethermal conditions of 18 and 30ºC respectively. Based on these results, the populations Tatp1 of T. atopovirilia and Tp13 and Tp16 of T. pretiosum have potential as biological control agent against H. zea as well as the isolates Bt 23 and Bt 26 of B. thuringiensis. / A utilização conjunta de Bacillus thuringiensis Berliner com outros inimigos naturais é uma forma de incrementar o manejo de insetos-praga. Entre estes agentes, Trichogramma (Westwood) é reconhecido pela sua viabilidade e eficiência e, pode ser utilizado conjuntamente com B. thuringiensis. Porém, apesar de B. thuringiensis apresentar inúmeras vantagens, são necessários estudos que possibilitem comprovar sua seletividade a insetos benéficos. A seleção de isolados de B. thuringiensis é uma forma de avaliar a virulência a insetos-praga, além de possibilitar a descoberta de novas toxinas com maior atividade entomopatogênica. Populações de Trichogramma também devem ser selecionadas para evitar o insucesso da sua utilização, pois estes parasitóides apresentam grande variação, seja no comportamento de procura, preferência hospedeira e até mesmo às condições ambientais. Este trabalho teve como objetivo selecionar isolados de B. thuringiensis (B.t) e populações de Trichogramma spp. visando o controle de Helicoverpa zea (Boddie) (Lepidoptera: Noctuidae). Os resultados apresentaram variabilidade emrelação à virulência dos isolados de B.t a H. zea, sendo que alguns não apresentaram índices satisfatórios de virulência, porém afetaram o desenvolvimento de H. zea. Foram identificados isolados promissores no controle de H. zea, a exemplo do B.t 23 e B.t 26. Entre as populações deTrichogramma avaliadas verificou-se variabilidade em relação aos parâmetros analisados e as condições térmicas, sendo que a população de T. atopovirilia (Tatp1) foi a que apresentou melhor desempenho a 25ºC e, as populações Tp13 e Tp16 de T. pretiosum nas condições térmicas de 18 e 30ºC respectivamente. Em virtude dos resultados encontrados, as populações de T. atopovirilia (Tatp1) e de T. pretiosum (Tp13 e Tp16) apresentam potencial para serem utilizadas em programas de controle biológico de H. zea.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-01T16:28:25Z No. of bitstreams: 1 Laurici Maria Pires dos Santos.pdf: 3466863 bytes, checksum: 5d731758c5c5bc0c0ab7e9025027b287 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-01T16:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Laurici Maria Pires dos Santos.pdf: 3466863 bytes, checksum: 5d731758c5c5bc0c0ab7e9025027b287 (MD5) Previous issue date: 2008-02-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The control of Tuta absoluta (Meyrick) is usually done with intensive insecticide sprays, which has led to the research of alternative control methods as part of the tomato leafminer integrated management in tomato crops. The objective of this work was to evaluate the pathogenicity of Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok. and Beauveria bassiana (Bals.)Vuill isolates on eggs and larvae of T. absoluta, and their compatibility with insecticides used to control this pest. Also, it was investigated the infection process of M. anisopliae on eggs and the effect over fecundity and mortality of females. Although both fungi showed pathogenicity to eggs and larvae of T. absoluta, M. anisopliae showed higher pathogenicity than B. bassiana. Among the isolates of M. anisopliae tested, URPE-6 and URPE-19 caused 95% and 42% infection in eggs and 1st instar larvae, respectively. The LC50-value for T. absoluta eggs was 3.5 x 104 conidia.mL-1 of the URPE-6 isolate. The compatibility of isolates URPE-6 and URPE-19 with neem, chlorfenapyr, indoxacarb, spinosad and abamectin was evaluated. Field dosages of chlorfenapyrand neem were toxic to the isolate URPE-19, while abamectin and neem showed toxicity to the isolate URPE-6. Ultra-structure analysis of URPE-6 infecting eggs showed that the process of conidia penetration occurred within 6 h after application of the fungus. Bodies of hyphae presenceand intense micelle extrusion were observed in eggs at 12 and 72 h after application, respectively. The URPE-6 isolate did not show any effect on egg-laying preference and fecundity of T. absoluta females, but it affected their survivals. The use of entomopathogenic fungi is a potential alternative control for T. absoluta mainly at the egg stage, and it may be associated with insecticides used in the control of this tomato pest / Um dos fatores limitantes da produtividade da cultura do tomateiro é a ocorrência de pragas, destacando-se Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera:Gelechiidae). A aplicação intensiva de inseticidas no controle convencional desse inseto torna relevante a busca por métodos alternativos que possam compor o Manejo Integrado desta praga. Esta pesquisa teve como objetivos avaliar a patogenicidade de isolados de Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok. e Beauveria bassiana (Bals.) Vuill para ovos e lagartas de T. absoluta, estudar a compatibilidade destes patógenos com inseticidas, investigar o processo de infecção de M. anisopliae sobre ovos e avaliar seu efeito na fecundidade e mortalidade de fêmeas. Todos os isolados testados apresentaram patogenicidade a ovos e lagartas de T. absoluta, sendo M. anisopliae mais patogênico. Destacaram-se os isolados URPE-6 causando infecção de 95% sobre ovos e URPE-19 com mortalidade de 42% sobre lagartas de primeiro ínstar. Foi determinada a CL50 do isolado URPE-6 de M. anisopliae sobre ovos de T. absoluta, obtendo-se um valor de 3,5 x 104 conídios mL-1. Testou-se a compatibilidadedos isolados URPE-6 e URPE-19 com Nim, Clorfenapir, Indoxacarbe, Espinosade e Abamectina. Os produtos Clorfenapir e Nim foram tóxicos ao isolado URPE-19 e Abamectina e Nim apresentaram toxicidade para o isolado URPE-6, nas dosagens recomendadas pelo fabricante. Aavaliação ultra-estrutural dos ovos infectados pelo isolado URPE-6 de M. anisopliae nos períodos de 6, 12, 24, 48 e 72h após a aplicação do patógeno, demonstrou que o processo de penetração dos conídios ocorreu dentro do período de 6 horas, confirmando sua virulência. Foi observada a presença de corpos hifais no interior do ovo, nos períodos de 12 e 24h. No período de 72h após a infecção ocorreu intensa extrusão do micélio cobrindo a superfície externa dos ovos. O isolado URPE-6 não apresentou efeito sobre a oviposição e fecundidade de T. absoluta, porém afetou a sobrevivência. A utilização de M. anisopliae representa mais uma alternativa no controle de T. absoluta, principalmente no estágio de ovo, sendo possível associação deste patógeno com inseticidas utilizados no controle desta praga.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavio Neves Celestino.pdf: 399418 bytes, checksum: 337ada99c466400f48f7f81083580bc6 (MD5) Previous issue date: 2011-02-11 / The coffee cultivation is a very important social and agricultural activity. However, some phytosanitary problems can cause losses, diminishing productivity and ultimately their profitability economic. Among the insects the coffee berry borer, Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Scolytidae), is a major pest of the crop. This study evaluates the potential use of castor oil and its association with the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin, 1912, in order to controlling of H. hampei. The potential of castor oil through the mortality of the coffee berry borer using three different routes of application was evaluated: (1) ingestion, (2) contact and (3) combined (ingestion + contact), beyond the estimate of LC50. In association between castor oil and B. bassiana the germination, vegetative growth and sporulation were evaluated, and the biological index (BI) determined. The route application combined (ingestion + contact) has increased mortality at concentrations of 0.5, 1.0 and 3.0% (v/v), differing from the other routes of application. However, on the concentrations 1.5, 2.0 and 2.5% (v/v) there was no significant differences between the routes of application contact and contact + ingestion, and these differ from the route of application by ingestion. The route of application by ingestion + contact presented 92% mortality on the concentration 3.0% (v/v), higher than the other routes of application. This route of application also presented an LC50 of 1.31% (v/v). The CCA-UFES/Bb-4 and CCA-UFES/Bb-15 isolated showed the highest values of germination. Only CCA-UFES/Bb-4 isolate presented the vegetative growth reduced in function of increasing concentrations of castor oil. This isolate was one that showed greater sporulation at all concentrations. The oil acts both by ingestion and contact, and that the association of both provides a more efficient control. All isolates present great potential for use associated with castor oil / A cafeicultura é uma atividade de extrema importância social e agrícola. Contudo, alguns problemas fitossanitários podem ocasionar prejuízos, diminuindo a produtividade e, consequentemente, a sua rentabilidade econômica. Dentre os insetos, a broca-do-café Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Scolytidae), é considerada a principal praga da cultura. No presente estudo foi avaliado o potencial de uso do óleo de mamona e a associação com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin, 1912, visando o controle de H. hampei. Avaliou-se a potencialidade do óleo de mamona sobre a mortalidade da broca-do-café utilizando três diferentes vias de aplicação: (1) ingestão, (2) contato e (3) ingestão + contato, além da estimativa da CL50. Na associação entre o óleo de mamona e B. bassiana foram avaliados os parâmetros de germinação, crescimento vegetativo e esporulação, e determinado o índice biológico (IB). A via aplicação por ingestão + contato apresentou maior mortalidade nas concentrações de 0,5; 1,0 e 3,0% (v/v) diferindo das demais vias de aplicação. Por sua vez, nas concentrações 1,5; 2,0 e 2,5% (v/v) não houve diferença entre as vias de aplicação por contato e ingestão + contato, sendo que estas diferiram da via de aplicação por ingestão. A aplicação via ingestão + contato apresentou 92% de mortalidade na concentração 3,0% (v/v), superior as demais vias de aplicação. Esta via de aplicação também apresentou CL50 de 1,31% (v/v). Os isolados CCA-UFES/Bb-4 e CCA-UFES/Bb-15 foram os que apresentaram os maiores valores de germinação. Somente o isolado CCA-UFES/Bb-4 apresentou crescimento vegetativo reduzido em função do aumento das concentrações do óleo de mamona. Esse isolado foi o que apresentou a maior esporulação em todas as concentrações. O óleo atua tanto por ingestão quanto por contato, sendo que a associação de ambos proporciona uma melhor eficiência de controle. Todos os isolados apresentam grande potencial de utilização associados com óleo de mamona

O Brasil é o país líder no uso do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae para o controle pragas agrícolas. Pouco se conhece sobre a diversidade e o impacto dos micovírus em M. anisopliae sensu stricto. Este trabalho mostra a riqueza dos micovírus associados a isolados de M. anisopliae da coleção de entomopatógenos da Universidade de São Paulo, usinas sucroalcooleiras e produtos microbianos à base do entomopatógeno. RNAfd foram encontrados em 55% dos 36 isolados de Metarhizium e apresentaram 16 diferentes padrões eletroforéticos consistindo de 3 a 18 bandas de RNAfd em gel de poliacrilamida. RNAfd não foram detectados em nenhum dos produtos comerciais utilizados no presente estudo. Os diferentes padrões de vírus encontrados nos isolados aqui estudados, aparentemente, não têm relação com os locais onde foram coletados. O inibidor de síntese protéica ciclohexamida não foi eficiente na eliminação dos vírus de RNAfd em nenhum dos isolados de fungos testados. Colônias dos isolados de M. anisopliae ESALQ 866, M. anisopliae ESALQ 1256 e M. anisopliae CTC F8 foram curadas por meio do cultivo monoconidial ou isolamento de ponta de hifas. Alguns segmentos do isolado M. anisopliae PL26 foram perdidos após o subcultivo de ponta das hifas. Colônias de M. anisopliae ESALQ PL26 obtidas por meio do cultivo monoconidial ou subcultivo de ponta de hifas apresentaram grande variabilidade morfológica, no entanto, essa variação não foi correlacionada com a presença de micovírus. Colônias isogênicas de M. anisopliae ESALQ 1256 mostraram diferenças no crescimento, na produção de conídios e na virulência, no entanto, essas diferenças não foram associadas à presença de RNAfd. Não foram observadas diferenças na tolerância aos raios ultravioleta e ao calor entre as colônias de M. anisopliae ESALQ 1256, com e sem vírus de RNAfd. Colônias oriundas de setores formados no isolado M. anisopliae PL26 produziram menor quantidade de conídios e apresentaram menor quantidade de vírus RNAfd em comparação com as colônias oriundas de outras regiões da colônias originais com características normais. A repicagem sucessiva dos isolados de M. anisopliae ESALQ PL26, ESALQ 1256, CTC F8 e CTC F15, infectados por diferentes vírus de RNAfd, nos meios de cultura BDA, SDAY e meio de arroz, bem como a passagem dos fungos em larvas de Tenebrio molitor, em geral, não afetaram a replicação dos micovírus. / Brazil is the leading country in the use of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae against agricultural pests. Little is known about the diversity and the impact of mycovirus in M. anisopliae sensu stricto. This study shows the richness of mycovirus associated with M. anisopliae isolates from the collections of entomopathogens of the University of São Paulo, from sugar-alcohol factories and microbial based products. dsRNA were found in 55% of the 36 Metarhizium isolates and showed 16 different electrophoretic patterns consisting of 3 to 18 dsRNA bands in polyacrylamide gels. dsRNA was not detected in any of the commercial products used in this study. The different viral patterns found in the isolates studied here apparently have no relation to the locations where they were collected. The inhibitor of protein synthesis cycloheximide culture was efficient in eradicating dsRNA virus from fungi. Colonies of isolates of M. anisopliae ESALQ 866, M. anisopliae ESALQ 1256 and M. anisopliae F8 were cured by monoconidial or by hyphal tip isolation of. Some segments of the M. anisopliae PL26 isolate were lost following hyphal tip subculture. Colonies both from monoconidial culture and hyphal tip subculture of M. anisopliae ESALQ PL26 showed great morphological variability; however, this variation was not correlated with the presence of mycoviruses. Isogenic colonies of M. anisopliae ESALQ 1256 showed differences in growth, conidia production and virulence; however, these differences were not associated to the presence of the dsRNA. No difference was observed regarding tolerance to ultraviolet rays and heat among the colonies of M. anisopliae ESALQ 1256, with and without the dsRNA virus. Sectors formed in the isolate M. anisopliae PL26 produced a smaller number of conidia and fewer dsRNA virus in comparison to the original colonies with normal characteristics. The repeated subculture of isolates of M. anisopliae ESALQ PL26, ESALQ 1256, CTC F8 and CTC F15, infected by different virus of dsRNA, in the PDA, SDAY culture media and in rice, as well as the fungi passage in larvae of Tenebrio molitor, in general, did not affect the replication of the mycovirus.

O principal problema fitossanitário da citricultura atualmente é a doença conhecida como greening ou Huanglongbing (HLB), transmitida pelo inseto vetor Diaphorina citri. O presente trabalho objetivou desenvolver estratégias para incorporação dos fungos Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registrado para o controle de outras pragas e/ou I. fumosorosea ESALQ-1296 em desenvolvimento como biopesticida especialmente para o manejo de D. citri, determinando a melhor concentração de adjuvantes e de conídios dos fungos a serem utilizados, sua eficácia em laboratório, semi-campo e campo; assim como sua compatibilidade com os agroquímicos utilizados na cultura. Na comparação dos dois fungos aplicados com seis adjuvantes no controle de D. citri revelaram que exceto Tween 80 a 0,001%, todos os outros adjuvantes contribuíram para aumentar a eficácia dos fungos. Os níveis de controle obtidos nos bioensaios em laboratório com B. bassiana e I. fumosorosea foram confirmados nos bioensaios em semi-campo e em campo. Realizaram-se 12 pulverizações com os dois fungos durante o período de dezembro de 2011 a janeiro de 2013 em campo nas concentrações de 2,5x106 conídios/mL em 2000 L/ha e 5x106 conídios/mL em 1000 L/ha ambos com 0,075% do adjuvante KBRAdj. Na comparação mês a mês, somente em janeiro de 2012 o controle químico foi superior a todos os outros tratamentos. No restante dos meses, as mortalidades causadas pelos tratamentos com fungos foram semelhantes entre si e semelhantes ao controle químico. As mortalidades de adultos de D. citri pelos fungos variaram de 96,4±3,8% (dezembro/2011) a 57,8±3,5% (outubro/2012). Os efeitos de 27 agroquímicos sobre o crescimento vegetativo e esporulação das colônias e a viabilidade dos conídios in vitro e a virulência dos fungos in vivo após mistura com cada um dos produtos foram determinados e revelaram que exceto os fungicidas a maioria dos produtos são compatíveis com os fungos e podem ser misturados na calda de aplicação. Estes resultados indicam que Beauveria bassiana ESALQ-PL63 e Isaria fumosorosea ESALQ-1296 são promissores para utilização no controle de D. citri em programas de manejo integrado de pragas de citros. / The main cause of the crop loss in citrus is currently the disease known as greening or Huanglongbing (HLB), transmitted by the insect vector Diaphorina citri. This study aimed to develop strategies for incorporating the fungi Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registered for the control of other pests and Isaria fumosorosea ESALQ-1296 in development as biopesticide especially for the management of D. citri by determining the optimal concentration of adjuvants and of conidia to be used, their effectiveness in laboratory, semifield and field; as well as its compatibility with agrochemicals used in the crop. The comparison of the two fungi applied with six adjuvants for the control of D. citri revealed that except Tween 80 (0.001%), all other adjuvants contributed to increase the effectiveness of the fungi. Control levels obtained in the laboratory bioassays with B. bassiana and I. fumosorosea were confirmed in bioassays in semi-field and field. Both fungi were sprayed 12 times from December 2011 to January 2013 in the field at concentrations of 2.5x106 conidia/mL in 2000 L/ha and 5x106 conidia/mL in 1000 L/ha both with 0.075% of KBRAdj adjuvant. Only in January 2012 the chemical control was superior to all other treatments. In the remaining months, the mortalities caused by all the fungi treatments were similar to each other and similar to chemical control. The mortalities of adult D. citri by fungi ranged from 96.4 ± 3.8% (December/2011) to 57.8 ± 3.5% (October/2012). The effects of 27 agrochemicals on the vegetative growth and sporulation of colonies and conidia viability in vitro and in vivo virulence of the fungus after mixing it with each of the products were determined and showed that except the fungicides, the majority of products are compatible with the fungi and may be tank mixed. These results indicate that B. bassiana ESALQ-PL63 and I. fumosorosea ESALQ-1296 are promising for use in the control of D. citri in integrated pest management programs of citrus.

Entomopathogenic fungi (EPF) of the genera Metarhizium and Beauveria are able to endophytically colonize a wide variety of plant species, providing protection against arthropod pests; besides increasing the plant development; and act as phytopathogen antagonists. The main objective of the present project was to evaluate the potential of entomopathogenic fungi as plant inoculants against the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and the effects on plant growth promotion. Tritrophic effects were also studied, by evaluating prey consumption and feeding behavior of the predatory mite Phytoseiulus persimilis. The evaluated strategy has several potential benefits compared to the sole use of EPF as contact biocontrol agents, as it may control both pests and phytopathogens; be compatible with other natural enemies; provide limited exposure of fungal propagules to adverse environmental conditions, and accelerate seed emergence and plant growth. Considering this, the effects of seed inoculation using two isolates of Metarhizium robertsii and Beauveria bassiana were evaluated at University of Copenhagen, Denmark, on plant development (i.e. biomass and yield) and T. urticae population growth in a model system with bean plants under greenhouse conditions. Effects on feeding performance of P. persimilis were also studied in laboratory conditions. In Brazil, inoculation studies with EPF were conducted at ESALQ/USP with strawberry plants in greenhouse conditions and in the field in four commercial production areas of strawberries in Atibaia-SP and Senador Amaral-MG. In greenhouse studies, the effects of 15 isolates of Metarhizium spp., 5 isolates of B. bassiana and 5 of Cordyceps (= Isaria) fumosorosea were studied, whereas in the commercial area one isolate of Metarhizium and Beauveria was used. Strawberry roots were inoculated by submersion in fungal suspensions, and the population growth of spider mites, while plants development was assessed by measuring root lengths, biomass of roots and leaves, and the strawberry fruit weight. The results showed a significant reduction in T. urticae population and in general better plant development in both crops. The production of string beans and strawberry fruits were higher in inoculated plants than in non-inoculated plants. There was no difference in predation rate and feeding behavior of the predator mite P. persimilis towards T. urticae from fungal inoculated and uninoculated plants. In the commercial strawberry production areas there were significantly lower populations of T. urticae and fewer symptoms of plant diseases on plants in the fungal treated beds compared to plants in untreated beds. The results of this project bring a new perspective on the use of Metarhizium and Beauveria as plant protecting agents revealing that the use of entomopathogenic fungi as plant inoculants may be a promising strategy. / Fungos entomopatogênicos dos gêneros Metarhizium e Beauveria são capazes de colonizar endofiticamente uma ampla variedade de espécies de plantas e conferir à estas, proteção contra artrópodes pragas; além de acelerar o seu desenvolvimento; e atuar como antagonistas de fitopatógenos. O objetivo geral deste projeto foi avaliar o potencial de fungos entomopatogênicos como inoculantes contra o ácaro rajado Tetranychus urticae e seus efeitos na promoção de crescimento de plantas. O efeito tri-trófico no consumo e comportamento alimentar do ácaro predador Phytoseiulus persimilis também foi estudado. A estratégia avaliada traz vários potenciais benefícios comparado ao uso exclusivo de fungos entomopatogênicos como agentes de controle biológico de contato, como o controle duplo de pragas e fitopatógenos; compatibilidade com outros inimigos naturais; menor exposição de propágulos às condições ambientais adversas, além de acelerar a emergência de sementes e o crescimento de plantas. Diante disso, os efeitos da inoculação de sementes usando dois isolados de Metarhizium robertsii e Beauveria bassiana foram avaliados na Universidade de Copenhagen, Dinamarca, na promoção de crescimento das plantas (biomassa e produção) e no crescimento populacional de T. urticae em um sistema modelo com plantas de feijão em casa-de-vegetação. Efeitos no comportamento alimentar de P. persimilis foram também estudados em condições de laboratório. No Brasil, estudos foram conduzidos na ESALQ/USP com plantas de morangueiro em casa-de-vegetação e em quatro áreas de produção comercial de morangueiro em Atibaia-SP e Senador Amaral-MG. Nos estudos em casa-de-vegetação, os efeitos de 15 isolados de Metarhizium spp., 5 de B. bassiana e 5 de Cordyceps (= Isaria) fumosorosea foram estudados, enquanto em área comercial um isolado de Metarhizium e Beauveria foram utilizados. Raízes de morangueiro foram inoculadas por imersão em suspensões fúngicas, e foram avaliados o crescimento populacional do ácaro rajado e o desenvolvimento das plantas, quantificando o comprimento de raiz, biomassa de raiz e de parte aérea, e massa de frutos de morango. Os resultados mostraram redução significativa na população de T. urticae e em geral melhor desenvolvimento das plantas nas duas culturas. A produção de vagens em plantas de feijão e de frutos de morango foram superiores nas plantas inoculadas em relação às não inoculadas. Não se observou diferenças na taxa de predação e comportamento alimentar do ácaro predador P. persimilis quando oferecidos T. urticae provenientes de plantas inoculadas e não inoculadas. Em campo foram observadas populações significativamente menores de T. urticae e menos sintomas de doenças nas plantas inoculadas com os fungos, comparado às plantas não inoculadas. Os resultados obtidos por este projeto trazem uma nova perspectiva do uso de Metarhizium e Beauveria como agentes protetores de plantas revelando que a utilização de fungos entomopatogênicos como inoculantes pode ser uma estratégia promissora.

Neozygites floridana is an important natural enemy of Tetranychus urticae in many crops, including strawberry. In this crop there has been some changes in the production system from open field to low tunnel. This new system presents benefits to strawberry production, moreover this system increases problems with spider mites and some fungal plant pathogens; consequently increasing the use of pesticides. In order to integrate N. floridana in the management of spider mites in strawberry there are still many important aspects to be revealed on the biology, epizootiology of the fungus and the effect of crop systems on its prevalence in the field. For this, three studies were performed, being the first one about the effect of strawberry production systems (low tunnel and open field) and pesticide application on population dynamics of two-spotted spider mite T. urticae, its natural enemies (N. floridana and predatory mites), and plant diseases, the experiment was performed in Inconfidentes-MG. The population of T. urticae attained the highest level in treatments with chemical control of pest, independently of the crop system, low tunnel or open field. The fungus N. floridana was observed late in both crop seasons, in treatments with and without inoculative releases, and has suggested that it might be a natural occurrence of the fungus. The highest prevalence of the fungus were observed in treatments with high densities of T. urticae. The predatory mites occurred naturally during the two crop seasons, and the most abundant species was Neoseiulus anonymus (Chant) (57.5%). The incidence of fungal plant diseases are greater in the open field than in low tunnel, however it seems that the crop system do not affect the new disease \"vermelhao\". The second study aimed to reveal the abiotic and biotic factors involved in the regulation of resting spores formation in the hosts T. urticae and T. evansi. The Brazilian isolate ESALQ1420 produced a large number of resting spores (51.5%) in T. urticae at a temperature 11 °C, photoperiod of 10L:14D, light intensity of 42-46 (?mol m-2s-1), on non-senescent plants. Small percentages of mites with resting spores (0-5 %) were found for the Norwegian isolate NCRI271/04 under the conditions tested, and very low percentages of resting spores (up to 1%) were observed in T. evansi infected by the Brazilian isolate ESALQ1421.The third study was therefore conducted phylogenetic analysis of isolates of N. floridana and develops efficient real-time PCR-based analysis for detection and quantification of N. floridana propagules from the soil. The phylogenic three showed that Neozygites is a fungal group far from other Entomophthoromycota and that N. floridana present high intra-specific variability. This data indicates that the isolates from different Tetranychus species may be in fact different Neozygites species, not described yet. We developed a real-time PCR probe for detection and quantification of N. floridana in the soil. This molecular probe was successful in quantifying N. floridana at relatively high DNA concentrations seeded into the soil. / Neozygites floridana é um importante inimigo natural de Tetranychus urticae em diversas culturas, incluindo morango. Nesta cultura tem havido uma mudança no sistema de produção, passando de cultivo em campo aberto para túnel baixo. Este novo sistema apresenta benefícios na produção de morango, no entanto pode aumentar problemas com ácaros fitófagos e algumas doenças fúngicas, consequentemente aumentando o uso de agrotóxicos. Para a integração de N. floridana no manejo de ácaros fitófagos em morango, existem ainda muitos aspectos importantes a serem conhecidos sobre a biologia, epizootiologia do fungo e efeito dos sistemas de cultivo sobre a sua prevalência em campo. Para isso três estudos foram realizados, sendo o primeiro estudo sobre o efeito de sistemas de produção de morango (túnel baixo e campo aberto) e da aplicação de agrotóxicos sobre a dinâmica populacional do acaro rajado T. urticae, seus inimigos naturais (N. floridana e ácaros predadores) e doenças de plantas, o experimento foi realizado em Inconfidentes-MG. A população de T. urticae atingiu altos níveis em tratamentos com controle químico de pragas, independente do sistema de cultivo, túnel baixo ou campo aberto. O fungo N. floridana foi observado no final de ambos os ciclos de cultivos, nos tratamentos com e sem liberações inoculativas, sugerindo que houve incidência natural do fungo. As maiores prevalências do fungo foram observadas em tratamentos com altas densidades de T. urticae. Os ácaros predadores ocorreram naturalmente durante os dois ciclos de cultivo, sendo Neoseiulus anonymus (Chant) a espécie mais abundante (57.51%). A incidência de doenças fúngicas foi maior em campo aberto do que em túnel baixo, no entanto parece que o sistema de cultivo não afetou a incidência da nova doença vermelhão. No segundo estudo objetivou-se conhecer os fatores abióticos e bióticos envolvidos na formação de esporos de resistência nos hospedeiros T. urticae e Tetranychus evansi. O isolado brasileiro ESALQ1420 produziu um grande número de esporos de resistência (51.5%) em T. urticae, a uma temperatura de 11 ° C, fotoperíodo de 10F:14E, intensidade de luz de 42-46 (?mol m-2s-1), em plantas senescentes. Pequenas percentagens de ácaros com esporos de resistência (0-5%) foram encontrados para o isolado Norueguês NCRI271/04 sob as condições testadas, e muito baixas percentagens de esporos de resistência (ate 1%) foram observados em T. evansi infectados pelo isolado brasileiro ESALQ1421. O terceiro estudo objetivou analisar filogeneticamente os isolados de Neozygites patogênicos a ácaros, e desenvolver ferramenta utilizando PCR em tempo real para a detecção e quantificação de propágulos de N. floridana a partir do solo. A arvore filogenética mostrou que Neozygites e um grupo de fungos distante dos demais Entomophthoromycota, e que estes fungos apresentaram alta variabilidade intraespecífica entre isolados de N. floridana. Estes resultados indicam que isolados provenientes de diferentes espécies hospedeiras do gênero Tetranychus podem ser de fato diferentes espécies de Neozygites não descritas ainda. Desenvolveu-se uma sonda molecular para detecção e quantificação de N. floridana no solo utilizando PCR em tempo real. Esta sonda foi eficiente na quantificação de N. floridana, em concentrações relativamente altas de DNA inoculado no solo.

The growing demand for strawberries has imposed challenges, especially regarding the control of pests. Many farmers report problems with reduced chemical control efficiency, probably due to selection of resistant populations of insects and mites. An alternative is the use of biological control using pathogenic fungi as a tool in integrated pest management. Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae) are generalist entomopathogenic fungi with worldwide distribution and can cause diseases in a large number of hosts. Many studies on the development of Metarhizium as a biological control agent were performed, but this bulk of knowledge is in remarkable contrast to the lack of research on the fundamental ecology of Metarhizium in agroecosystems. This thesis aimed to evaluate the establishment, persistence and dispersal of these entomopathogenic fungi in strawberry crop soil in Inconfidentes, Minas Gerais, Brazil; and to study the diversity and abundance of species of Metarhizium isolated from organic and conventional strawberry crop soils, and the field margins in Brazil and Denmark. The effectiveness of new species of Metarhizium recently found in Brazil, was evaluated against two spotted spider mite, Tetranychus urticae. Applied isolates of M. anisopliae (ESALQ1037) and M. robertsii (ESALQ1426) were able to persist for up to 12 months after the application within the soil, and disperse to other plots and colonize the rhizosphere of strawberry plants. In the plots where ESALQ1037 and ESALQ1426 were applied, 25% and 87.5% of the isolates recovered after 12 months consisted of the same isolates inoculated. A new taxonomically unassigned lineage, referred to as Metarhizium sp. Indet. 5 in this study, was found in strawberry crop margins. The dominant species of Metarhizium in Brazil and Denmark was Metarhizium robertsii and M. brunneum respectively. Further, Metarhizium pemphigi was first detected in Denmark in this study. Soil in organically grown strawberries harbored a more diverse population of Metarhizium spp. compared with conventionally grown strawberries. These studies showed for the first time the potential of new species of Metarhizium as spider mite biological control agents, the lowest median lethal time (LT50 = 4 ± 0.17 days) was observed in mites treated with the isolate ESALQ1638 of Metarhizium sp. indet. 1. The best isolates were ESALQPL63 of B. bassiana, ESALQ1608 and ESALQ1638 of Metarhizium sp. indet. 1 and ESALQ3069 and ESALQ3222 of M. pingshaense based on the survival curve, total mortality, percentage of sporulated cadavers and LT50. Knowledge of the diversity of Metarhizium spp. and persistence in strawberry soil generated in this study may be useful in developing conservation strategies and maximize the natural biological pest control. / A crescente demanda por morangos vem impondo desafios, especialmente quanto ao controle das pragas. Muitos agricultores relatam problemas com a redução da eficiência do controle químico, provavelmente devido à seleção de populações resistentes de insetos e ácaros. Uma alternativa é o uso de controle biológico com fungos entomopatogênicos como ferramenta dentro do manejo integrado de pragas. Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae), são fungos entomopatogênicos generalistas com distribuição cosmopolita e que podem causar doenças em um grande número de hospedeiros. Muitos estudos sobre o desenvolvimento de Metarhizium como agente de controle biológico foram realizados, mas este leque de conhecimento está em contraste com a notável falta de investigação sobre a ecologia de Metarhizium nos agroecossistemas. Esta tese teve como objetivo avaliar o estabelecimento, persistência e dispersão destes fungos entomopatogênicos em solo de morangueiro em Inconfidentes, Minas Gerais, Brasil; bem como estudar a diversidade e abundância de espécies de Metarhizium isolados do solo de cultivos orgânico e convencional de morangueiro, e das margens das plantações no Brasil e Dinamarca. A eficácia de novas espécies de Metarhizium, encontradas recentemente no Brasil, foi avaliada contra o ácaro rajado, Tetranychus urticae. Os isolados inoculados de M. anisopliae (ESALQ1037) e M. robertsii (ESALQ1426) foram capazes de persistir por até 12 meses após a aplicação no solo, além de dispersar para outras parcelas e colonizar a rizosfera dos morangueiros. Nas parcelas onde ESALQ1037 e ESALQ1426 foram aplicados, 25% e 87,5% dos isolados recuperados após 12 meses consistiam dos mesmos isolados inoculados. Uma nova linhagem não taxonomicamente identificada, referida neste trabalho como Metarhizium sp. Indet. 5, foi encontrada nas margens de morangueiros cultivados. A espécie dominante de Metarhizium no Brasil e Dinamarca foi Metarhizium robertsii e M. brunneum, respectivamente. Além disso, Metarhizium pemphigi foi detectado pela primeira vez na Dinamarca neste estudo. Solos de cultivo orgânico de morangueiro em geral apresentaram uma diversidade maior de Metarhizium do que solos de cultivos convencionais. Estes estudos revelaram pela primeira vez o potencial de novas espécies de Metarhizium como agentes de controle biológico do ácaro rajado, sendo o menor tempo letal mediano (TL50= 4 ± 0.17 dias) observado em ácaros tratados com o isolado ESALQ1638 de Metarhizium sp. indet. 1. Os melhores isolados foram ESALQPL63 de B. bassiana, ESALQ1608 e ESALQ1638 de Metarhizium sp. indet. 1 e ESALQ3069 e ESALQ3222 de M. pingshaense baseado na curva de sobrevivência, mortalidade total, porcentagem de cadáveres esporulados e TL50. O conhecimento da diversidade de Metarhizium spp. e persistência em solos de morango, gerados neste estudo, poderão ser úteis no desenvolvimento de estratégias de conservação e maximizar o controle biológico natural de pragas.