Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-17T19:42:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T13:22:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-20T13:26:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T13:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Lidiam Maia Leandro.pdf: 7558907 bytes, checksum: 4dd15817ba882dd32549da94c60308e6 (MD5) Previous issue date: 2011-04-18 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Eperua is a genus of the Fabaceae-Caesalpinioideae, endemic to the Central Amazon. The oilresin of E. oleifera, E. purpurea e E. falcata is used in folk medicine in order analogous to “copaiba”, as a healing agent antifungal and bactericide. In general, two class substances have been isolated from this species: terpenes and flavonoids. Despite the species E. glabriflora and E. duckeana are common in the Amazon, have never been studied chemically and pharmacologically. This study aimed to evaluate the chemical composition of extracts of bark of trunk and leaves and to determine the antioxidant, antibacterial, antifungal, antiprotozoal and cytotoxic activity against tumor cells, and analyzing the chemical composition of essential oils from leaves and stems of these species. The plant material was collected in Ducke Reserve near Manaus and the bark and leaves were dried at room temperature and later crushed. The extracts were prepared by maceration with solvent in order of increasing polarity (hexane, ethyl acetate and methanol) were obtained twelve crude extracts. The non-polar extracts of bark of trunk were analyzed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) and flame ionization detector (GC-FID). It was identified fourteen substances among them: six fatty acids (hexadecanoic acid, 9,12-octadecadienoic acid, 9- octadecenoic acid, octadecanoic acid, tetracosanoic acid and hexacosanoic acid); four diterpene acids (cativic acid, 3-hydroxylabd-7,13-dien-15-oic acid, 3-cleroden-15-oic acid and one isomer); one hydrocarbon (squalene); one vitamin (α-tocopherol); and two sterols (stigmasterol and β-sitosterol). The latter two substances were isolated in mixture and identified by spectrometric methods. From ethyl acetate extract of bark of trunk E.glabriflora was isolated from 3-O-glycoside-flavanonol, engeletin also present in the extract of E. duckeana, but in lower concentration. Other flavonoid was isolated from M+ 476 u.ma. Essential oils were obtained by hydrodistillation in Clevenger apparatus changed during 4h, then dried with sodium sulfate and analyzed by GC-FID and GC-MS. We identified 35 constituents in essential oils, and the β-caryophyllene and germacrene D the major constituents. Essential oils from leaves and stems showed cytotoxic activity against tumor cell lines of breast cancer (MDA/MB-435), colon (HCT8) and central nervous system (SKF-295) with inhibitions of growth of approximately 100%. The extracts tested showed weak or no trypanosoma cruzi or leishmania activity and antibacterial and antifungal activity, except the hexane extract of the bark of E. glabriflora that showed significant activity against grampositive bacterium Bacillus subtilis (MIC = 62.5 μg /mL). With respect to antioxidant potential, the highest activity of free radical sequestration was presented by the extracts in ethyl acetate and methanol of bark of trunk (IC50 10.5 -17.8 mg / mL) in both species. The results of this study contribute to the knowledge of chemical and biological of two species from Amazonian biodiversity. / Eperua é um gênero da família Fabaceae, endêmico da Amazônia Central. O óleo exsudado das espécies Eperua oleifera, Eperua purpurea e Eperua falcata é utilizado na medicina popular de modo análogo ao da copaíba, como cicatrizante, antifúngico e bactericida. De modo geral, duas classes de substâncias têm sido isoladas de espécies desse gênero: terpenos e flavonóides. Apesar das espécies Eperua glabriflora e Eperua duckeana serem comuns na Amazônia, nunca foram estudadas química ou farmacologicamente. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a composição química dos extratos obtidos das cascas do tronco e folhas e determinar as atividades antioxidantes, antibacteriana, antifúngica, antiprotozoária e citotoxicidade em células tumorais, além de analisar a composição química dos óleos essenciais das folhas e talos dessas espécies. O material vegetal foi coletado na Reserva Ducke em Manaus e as cascas e folhas foram secas à temperatura ambiente e posteriormente trituradas. Os extratos foram preparados por maceração com solvente em ordem crescente de polaridade (hexano, acetato de etila e metanol). Foram obtidos doze extratos brutos. Os extratos apolares das cascas foram analisados por Cromatografia à Gás acoplada ao Espectrômetro de Massas (CG-EM) e ao Detector de Ionização de Chama (CG-DIC). Foram identificadas quatorze substâncias, sendo essas: seis ácidos graxos (ácido hexadecanóico, ácido 9,12-octadecadienóico, ácido 9-octadecenóico, ácido octadecanóico, ácido tetracosanóico e ácido hexacosanóico); quatro ácidos diterpênicos (ácido catívico, ácido 3- hidroxi-labda-7,13-dieno-15-óico, ácido 3-clerodeno-15-óico e um isômero dele); um hidrocarboneto (esqualeno); uma vitamina (α-tocoferol); e dois esteróis (estigmasterol e β- sitosterol). As duas últimas substâncias foram isoladas em mistura e identificadas por métodos espectrométricos. Do extrato obtido em acetato de etila das cascas de E. glabriflora foi isolado um 3-O-glicosil-flavanonol conhecido como engeletina, presente também no extrato da E. duckeana, porém, em menor concentração; e um flavonóide de M+ 476. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação, em aparelho clevenger modificado durante 4h, e seco com sulfato de sódio e analisados por CG-DIC e CG-EM. Foram identificados nos óleos essenciais 35 constituintes, sendo o β-cariofileno e o germacreno D os constituintes majoritários. Os óleos essenciais das folhas e talos apresentaram atividade citotóxica em linhagens de células tumorais de câncer de mama (MDA/MB-435), cólon (HCT8) e sistema nervoso central (SKF-295) com inibições de crescimento de aproximadamente 90%. Os extratos testados apresentaram fraca ou nenhuma atividade antileishmania, trypanosoma cruzi, antifúngica e antibacteriana, exceto para o extrato obtido em hexano das cascas de E. glabriflora que apresentou significativa atividade contra a bactéria gram-positiva Bacillus subtilis (CIM= 62,5 μg/mL). Com relação ao potencial antioxidante, a maior atividade de seqüestro de radical livre DPPH• foi apresentada pelos extratos obtidos em acetato de etila e metanol das cascas (CI50 10,5 -17,8 μg/mL) e ambas espécies. Os resultados obtidos neste trabalho contribuem para o conhecimento químico e biológico de duas espécies da biodiversidade amazônica.

O extrato metanólico da esponja Darwinella sp. coletada na costa do Rio do Janeiro, exibiu atividade leishmanicida. O extrato bruto foi particionado em três frações: fração hexânica, fração de AcOEt e fração XAD (extração da fração orgânica do extrato aquoso mediante mistura de resinas XAD-2, XAD-4 e XAD-7). Cada uma das frações foi avaliada em bioensaio atividade leishmanicida, mostrando que a fração AcOEt apresentou 100% da morte dos parasitas. A fração de AcOEt foi fracionada usando cromatografia por exclusão de tamanho (Sephadex&reg LH-20) e extrações em fase sólida (SPE) com diferentes colunas pré-empacotadas. Os compostos foram isolados e purificados por cromatografia de alta eficiência acoplada a detector ultravioleta (CLAE-UV). Sete compostos foram isolados, dos quais quatro deles foram identificados espectroscopicamente. O membranolídeo, o éster metílico da oxeatamida A, a oxeatamida H e a oxeatina são diterpenos espongianos que possuem um esqueleto aplysulfurano nitrogenado, excetuando o membranolídeo. Tanto o éster metílico da oxeatamida A quanto a oxeatamida H, pertencem a uma série de compostos denominados de oxeatamidas. O membranolídeo, o éster metílico A e a oxeatina foram avaliados em teste de atividade antiparasitária contra Leishmania infantum, porém nenhum deles apresentou atividade leishmanicida. / The sponge Darwinella sp. was collected in Rio de Janeiro’s coast and its methanolic extract showed leishmanicidal activity. The crude extract was partitioned in three fractions: hexane, AcOEt and XAD fractions. This last one was obtained by resin adsorption (mixture of XAD-2, XAD-4 and XAD-7 resins) of organic constituents from the aqueous fraction and subsequent recovery by extraction from the resins mixture. All of three fractions were also tested in leishmanicidal bioassay. The AcOEt fraction promoted 100% of parasite death. This fraction was separated into less complex fractions by size exclusion chromatography (Sephadex&reg LH-20) and solid phase extractions (SPE). The compounds were isolated and purified by high-performance liquid chromatography (HPLC) combined with on-line UV detector. Seven substances were isolated, which four of them were spectroscopically identified. The membranolide, the oxeatamide A methyl ester, the oxeatamide H and the oxeatin are spongian diterpenes with nitrogenous aplysulphurane skeleton, except for the membranolide. The oxeatamides are a series of nitrogenous aplysulphurane metabolites that includes the oxeatamide A methyl ester and the oxeatamide H. All of these compounds, except the oxeatamide H, were evaluated for antiprotozoal activity against Leishmania infantum. None of these compounds displayed leishmanicidal activity.

Croton é um gênero gigante de Euphorbiaceae com cerca de 1.300 espécies distribuídas em regiões tropicais e subtropicais da América, África, Ásia e Austrália. O Brasil é um importante centro de diversificação da espécie, com mais de 350 espécies descritas, sendo muitas endêmicas. Muitas espécies são utilizadas como plantas medicinais pelas populações locais, para o tratamento de diversos males, como câncer, diabetes, febre, hipercolesterolemia, hipertensão, entre outros. Mesmo assim, a maioria das espécies não apresenta estudo fitoquímico para determinação de atividades biológicas. Na bibliografia consultada terpenóides se apresentaram como compostos predominantes em Croton. O presente estudo foi realizado com a análise de óleos voláteis e de extratos metanólicos de folhas e caules de 10 amostras de Croton seção Lamprocroton Todas as espécies do estudo têm descrição química inédita. Foram identificados 44 compostos de óleos voláteis por CG/EM, sendo 14 monoterpenos e 30 sesquiterpenos. Alguns compostos oxigenados, importantes do ponto de vista de atividade biológica, ocorreram em altas concentrações, como 1,8-cineol (C. ericoides: 24,1%; C.linearifolius: 26,9%; C. muellerianus: 23,9%), linalol (C. dusenii: 18,2%), bisabolol (C. ceanothifolius: 49,9%), 1-isopropil-7-metil-4-metileno-1,3,4,6,8-hexa-hidro-2H-naftalen-4-ol (C. linearifolius: 25,2%; C. pallidulus var. pallidulus: 23,6%). Já no extrato metanólico foram identificados por CG/EM 15 diterpenos, 9 triterpenos e 13 esteróides. Grupo de metabólito secundário mais caracteristico de Croton, foram detectados 3 diterpenos de cadeia aberta (fitol, hexadecatetraenol e furanona), um diterpeno alcoólico (retinol), além de diterpenos com esqueleto tipo labdano, caurano, clerodano e podocarpano. Os dois clerodanos foram identificados com estrutura similar à trans-desidrocrotonina, composto com alto potencial farmacológico. Os podocarpanos até então registrados em apenas duas espécies de Croton foram comuns à Croton seção Lamprocroton, sendo identificados podocarp-7-en-3-ona 13β-metil-13-vinil, podocarp-7,8-diien-3-ona-13-acetoxi, ácido podocarpa-7,13-dien-15-óico e metil-13(2-metoxi-2-oxoetildeno)-14-metil-7-oxopodocarpan-15-oato, distribuídos em 5 espécies. Os triterpenos e esteróides apresentaram alta diversidade e foram detectados para todas as espécies do estudo, com especial atenção para os triterpenos α-amirina, lupeol e lupenona; e os esteróides β e γ-sitosterol, pelas altas concentrações e pelo potencial farmacológico. Os dados obtidos possibilitaram listagem de compostos e atividades com sugestões de direcionamento para futuros testes e desenvolvimentos farmacológicos. / Croton is a large genus of Euphorbiaceae comprising around 1.300 species, widespread in tropical and subtropical regions of America, Africa, Asia and Australia. Brazil is one of the main hot spot in the world, with more than 350 species described, many of them endemic. Although several species are used in tradicional medicine for the treatement of diseases like cancer, diabetes, fever, high cholesterol and high blood pressure. Most species have no phytochemical studies concerning their biological activities. Literature shows terpenoids as predominant secondary metabolite constituents in Croton. The present study was carried outwith the analysis of essential oils and crude methanolic extracts obtained from leaves and bark of 10 samples of Croton sect. Lamprocroton. All species used on this study were submitted to their first chemical description. Forty four compounds were identified on essential oil by GC/MS, 14 monoterpenes and 30 sesquiterpenes. Some oxygenated compounds with important biological activity were detectaed in high concentrations: 1,8-cineol (C. ericoides: 24.1%; C.linearifolius: 26.9%; C. muellerianus: 23.9%), linalol (C. dusenii: 18.2%), bisabolol (C. ceanothifolius: 49.9%), 1-isopropil-7-metil-4-metileno-1,3,4,6,8-hexa-hidro-2H-naftalen-4-ol (C. linearifolius: 25.2%; C. pallidulus var. pallidulus: 23.6%). The metanolic extract analysis reveled by GC/MS15 diterpenes, 9 triterpenes e 13 steroids. Diterpenes are describe as the main secondary metabolite in Croton. Besides diterpenes with labdan, cauran, clerodan and podocarpan skeletal types, three opened ring diterpenes (fitol, hexadecatetraenol e furanona) and one alcoholic diterpene (retinol) were detected. Two clerodans were identified with trans-desidrocrotonin estructure-like, a compound with high pharmacological use. Podocarpans that have only been registered for two Croton species, were commonly found on Croton sect. Lamprocroton (podocarp-7-en-3-one 13β-metil-13-vinil; podocarp-7,8-diien-3-one-13-acetoxi; podocarpa-7,13-dien-15-oic acid; and metil-13(2-metoxi-2-oxoetildeno)-14-metil-7-oxopodocarpan-15-oate). Triterpenes and steroids shown high diversity and were detected at all studied species, with a highlight for compounds with high pharmacological potencial like triterpens α-amirine, lupeol and lupenone; and the steroids beta and gamma-sitosterol. The results obtained led to a list of compounds and suggestions for future pharmacological tests and developments.

Orientador: Paulo Mitsuo Imamura / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soriano_MariadelPilarCaramantin_D.pdf: 11794716 bytes, checksum: ccbc80ffb76b6fa17368a0787f22b585 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Quimica

Espécies do gênero Copaifera (Leguminosae) são nativas de regiões tropicais da América Latina e África. No Brasil, seu óleo-resina é amplamente utilizado em medicina popular como antiinflamatório, antisséptico e cicatrizante. No presente trabalho, avaliou-se, em uma primeira fase, a atividade antiinflamatória em modelo experimental agudo das seguintes amostras de óleo-resina: comercial, gentilmente cedida pela empresa Pronatus, Copaifera reticulata, C. multijuga e C. paupera. As amostras foram administradas pela via oral, sendo selecionada, das amostras identificadas botanicamente, a C. reticulata por apresentarem maior atividade. A amostra comercial também foi ensaiada no modelo experimental acima. Os óleo-resinas foram analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas tendo revelado a presença de sesquiterpenos e diterpenos. Foram identificados vinte e dois compostos na amostra comercial e vinte seis na amostra de C. reticulata. Deste total, seis substâncias foram comuns a ambas as amostras. A seguir, os óleos-resinas foram destilados e separadas suas respectivas frações sesqui e diterpênicas. Tanto os óleos-resinas quanto suas frações foram avaliados farmacologicamente. As atividades farmacológicas testadas foram: atividade antiinflamatória aguda, subcrônica, crônica e ensaios de toxicidade aguda, subcrônica e citotoxicidade. A atividade antiinflamatória foi testada em cinco modelos: edema de pata induzido pela carragenina, nistatina e miconazol; indução de formação de tecido granulomatoso e dermatite induzida pelo óleo de cróton. Nos modelos utilizados as doses testadas foram de 2,47 ml/kg (DE50 no modelo da carragenina) para a amostra comercial e suas frações sesqui e diterpênicas e 2,02 ml/kg (Dose equipotente no modelo da carragenina) para a amostra de C. reticulata e suas frações sesqui e diterpênicas). Em todos os ensaios realizados com as amostras, evidenciaram-se intensa atividade antiflogística, com exceção da C. reticulata que apresentou elevada toxicidade no modelo de indução do tecido granulomatoso. Nos ensaios de toxicidade aguda, a amostra C. reticulata (DL50 = 4,48 ml/kg) apresentou toxicidade maior que a amostra comercial (DL50 > 12,35 ml/kg). Suas frações sesquiterpênicas foram bem menos tóxicas que seus correspondentes óleos-resinas com DL50 maiores que 9,14 e 20 ml/kg, respectivamente para C. reticulata e amostra comercial: Por outro lado, a fração resinosa (diterpênica) apresentou alta toxicidade com DL50 superiores a 2,85 e 1,29 ml/kg, respectivamente para a amostra comercial e C. reticulata. Nos ensaios de toxicidade subcrônica confirmou-se a toxicidade menor para a fração sesquiterpênica da amostra de C. reticulata. O óleo-resina de C. reticulata apresentou toxicidade renal e alterações hepáticas indicando que pode haver um comprometimento hepático. / Species of the genus Copaifera (Leguminosae) are native of tropical regions in Latin America and Africa. In Brazil, its oil-resin is widely utilized in popular medicine as anti-inflammatory, antiseptic and cicatrizing medicine. In the present work, we initially evaluated the acute anti-inflammatory activity of the following samples: commercial, Copaifera reticulata, C. multijuga and C. paupera. All the samples were administered by oral route. This initial pharmacological evaluation revealed that the C. reticulata was clearly more effective. In the second part of this work, the C. reticulata and the commercial samples, kindly provided by Pronatus-Manaus, were investigated. The oil-resins of the selected samples were analyzed by gas chromatography connected with mass spectrometry, revealing the presence of sesquiterpens and diterpens. Twenty two compounds in the commercial sample and twenty six in the C. reticulata were identified. Then after, the oil-resins were distilled and separated in their respective sesqui and diterpens fractions. Both oil-resins and their fractions were pharmacologically evaluated. The pharmacological evaluations were: acute, sub-chronic and chronic anti-inflammatory activities and acute, sub-chronic toxicities and cito-toxicities assays. The anti-inflammatory activity was studied in five experimental models: carrageenan, nistatin and miconazole paw oedema; induction of granulomatous tissue formation and croton oil dermatitis. The administered doses by oral route were 2.47 ml/kg (EQ50 for carrageenan model) to commercial sample and its sesqui and diterpens fractions, and 2.02 ml/kg to C. reticulata sample and its sesqui and diterpens fractions. All the assays carried out with the selected samples showed intense anti-flogistic activity, except for C. reticulata that exhibited high toxicity in the granulomatous tissue model. In the acute toxicity studies, C. reticulata (LD50 = 4.48 ml/kg) revealed greater toxicity in comparison with the commercial sample (LD50 > 12.35 ml/kg). Its sesquiterpens fractions were less toxic that its correspondent oil-resins with LD50 higher than 9.14 and 20 m1/kg, for C. reticulata and commercial sample, respectively. On the other hand, resin fraction (diterpenic) presented high toxicity with LD50 higher than 2.85 and 1.29 ml/kg for commercial and C. reticulata samples, respectively. The sub-chronic assays, confirmed the less toxicity for the C. reticulta sesquiterpenic fraction. The C. reticulata oil-resin presented renal toxicity and hepatics alterations.

Espécies do gênero Copaifera (Leguminosae) são nativas de regiões tropicais da América Latina e África. No Brasil, seu óleo-resina é amplamente utilizado em medicina popular como antiinflamatório, antisséptico e cicatrizante. No presente trabalho, avaliou-se, em uma primeira fase, a atividade antiinflamatória em modelo experimental agudo das seguintes amostras de óleo-resina: comercial, gentilmente cedida pela empresa Pronatus, Copaifera reticulata, C. multijuga e C. paupera. As amostras foram administradas pela via oral, sendo selecionada, das amostras identificadas botanicamente, a C. reticulata por apresentarem maior atividade. A amostra comercial também foi ensaiada no modelo experimental acima. Os óleo-resinas foram analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas tendo revelado a presença de sesquiterpenos e diterpenos. Foram identificados vinte e dois compostos na amostra comercial e vinte seis na amostra de C. reticulata. Deste total, seis substâncias foram comuns a ambas as amostras. A seguir, os óleos-resinas foram destilados e separadas suas respectivas frações sesqui e diterpênicas. Tanto os óleos-resinas quanto suas frações foram avaliados farmacologicamente. As atividades farmacológicas testadas foram: atividade antiinflamatória aguda, subcrônica, crônica e ensaios de toxicidade aguda, subcrônica e citotoxicidade. A atividade antiinflamatória foi testada em cinco modelos: edema de pata induzido pela carragenina, nistatina e miconazol; indução de formação de tecido granulomatoso e dermatite induzida pelo óleo de cróton. Nos modelos utilizados as doses testadas foram de 2,47 ml/kg (DE50 no modelo da carragenina) para a amostra comercial e suas frações sesqui e diterpênicas e 2,02 ml/kg (Dose equipotente no modelo da carragenina) para a amostra de C. reticulata e suas frações sesqui e diterpênicas). Em todos os ensaios realizados com as amostras, evidenciaram-se intensa atividade antiflogística, com exceção da C. reticulata que apresentou elevada toxicidade no modelo de indução do tecido granulomatoso. Nos ensaios de toxicidade aguda, a amostra C. reticulata (DL50 = 4,48 ml/kg) apresentou toxicidade maior que a amostra comercial (DL50 > 12,35 ml/kg). Suas frações sesquiterpênicas foram bem menos tóxicas que seus correspondentes óleos-resinas com DL50 maiores que 9,14 e 20 ml/kg, respectivamente para C. reticulata e amostra comercial: Por outro lado, a fração resinosa (diterpênica) apresentou alta toxicidade com DL50 superiores a 2,85 e 1,29 ml/kg, respectivamente para a amostra comercial e C. reticulata. Nos ensaios de toxicidade subcrônica confirmou-se a toxicidade menor para a fração sesquiterpênica da amostra de C. reticulata. O óleo-resina de C. reticulata apresentou toxicidade renal e alterações hepáticas indicando que pode haver um comprometimento hepático. / Species of the genus Copaifera (Leguminosae) are native of tropical regions in Latin America and Africa. In Brazil, its oil-resin is widely utilized in popular medicine as anti-inflammatory, antiseptic and cicatrizing medicine. In the present work, we initially evaluated the acute anti-inflammatory activity of the following samples: commercial, Copaifera reticulata, C. multijuga and C. paupera. All the samples were administered by oral route. This initial pharmacological evaluation revealed that the C. reticulata was clearly more effective. In the second part of this work, the C. reticulata and the commercial samples, kindly provided by Pronatus-Manaus, were investigated. The oil-resins of the selected samples were analyzed by gas chromatography connected with mass spectrometry, revealing the presence of sesquiterpens and diterpens. Twenty two compounds in the commercial sample and twenty six in the C. reticulata were identified. Then after, the oil-resins were distilled and separated in their respective sesqui and diterpens fractions. Both oil-resins and their fractions were pharmacologically evaluated. The pharmacological evaluations were: acute, sub-chronic and chronic anti-inflammatory activities and acute, sub-chronic toxicities and cito-toxicities assays. The anti-inflammatory activity was studied in five experimental models: carrageenan, nistatin and miconazole paw oedema; induction of granulomatous tissue formation and croton oil dermatitis. The administered doses by oral route were 2.47 ml/kg (EQ50 for carrageenan model) to commercial sample and its sesqui and diterpens fractions, and 2.02 ml/kg to C. reticulata sample and its sesqui and diterpens fractions. All the assays carried out with the selected samples showed intense anti-flogistic activity, except for C. reticulata that exhibited high toxicity in the granulomatous tissue model. In the acute toxicity studies, C. reticulata (LD50 = 4.48 ml/kg) revealed greater toxicity in comparison with the commercial sample (LD50 > 12.35 ml/kg). Its sesquiterpens fractions were less toxic that its correspondent oil-resins with LD50 higher than 9.14 and 20 m1/kg, for C. reticulata and commercial sample, respectively. On the other hand, resin fraction (diterpenic) presented high toxicity with LD50 higher than 2.85 and 1.29 ml/kg for commercial and C. reticulata samples, respectively. The sub-chronic assays, confirmed the less toxicity for the C. reticulta sesquiterpenic fraction. The C. reticulata oil-resin presented renal toxicity and hepatics alterations.

Orientador: André Gonzaga dos Santos / Banca: Fábio Ferreita Perazzo / Banca: Gustavo Henrique Bianco de Souza / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Resumo: O objetivo geral deste trabalho foi realizar um estudo químico-farmacológico do extrato etanólico de folhas de Casearia sylvestris Swartz (EEtCs), frações obtidas por extração em fase sólida (EFS1: apolar; EFS2: rica em diterpenos clerodânicos; EFS3: polar) e padrões de diterpenos clerodânicos (DC). Os objetivos da parte química foram caracterizar os padrões de DC por espectrometria de massas (full scan e fragmentação) com fonte de ionização por spray de elétrons (ESI-MS e MSn) e identificar DC no EEtCs e na EFS2 por ESI-MS, ESI-MSn e por cromatografia em camada delgada de alta eficiência com detecção por imagem química formada por espectrometria de massas com fonte de dessorção por spray de elétrons (HPTLC-DESI-MS-IMAGING). A parte farmacológica consistiu na investigação da atividade anti-inflamatória e gastroprotetora do EEtCs, frações (EFS1-3) e padrões de DC. A atividade anti-inflamatória foi avaliada por meio de ensaios em ratos, pleurisia induzida pela carragenina e edema de pata induzido por uma fosfolipase A2 de veneno de Bothrops jararacussu (BthTX-II), e os seguintes ensaios in vitro: atividade enzimática das ciclo-oxigenases 1 e 2 (COX-1 e COX-2) e produção de óxido nítrico (NO) e prostaglandina E2 (PGE2) por macrófagos estimulados por lipopolissacarídeo. A atividade gastroprotetora foi avaliada em modelo de lesões gástricas induzidas por indometacina em ratos e ensaio in vitro de atividade anti-Helicobacter pylori. Os resultados levaram às conclusões a seguir. A caracterização dos padrões de DC por espectrometria de massas permitiu estabelecer o padrão de fragmentação dos DC com anel diacetálico do tipo das casearinas, o qual representa uma importante fonte de informação para desreplicação em estudos metabolômicos de extratos vegetais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to carry out a chemical-pharmacological study of the ethanol extract from leaves of Casearia sylvestris Swartz (EtECs), fractions obtained by solid phase extraction (SPE1: nonpolar; SPE2: rich in clerodane diterpenes; SPE 3: polar) and standards of clerodane diterpenes (CD). The objectives of the chemical step was to characterize standards of CD by mass spectrometry (full scan and fragmentation) using electrospray ionization (ESI-MS and MSn) and to identify CD in EtECs and SPE2 by ESI-MS, ESI-MSn and high performance thin layer chromatography/desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging (HPTLC-DESI-MS-IMAGING). The pharmacological study consisted in investigation of anti-inflammatory and gastroprotective activities of EtECs, fractions (SPE1-3) and CD standards. The anti-inflammatory activity was assessed in rats through pleurisy induced by carrageenan and paw edema induced by phospholipase A2 from Bothrops jararacussu venom (BthTX-II), and the following in vitro assays: enzymatic activity of cyclooxygenases 1 and 2 (COX-1 and COX-2) and macrophage stimulation by lipopolysaccharide to investigate the production of nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2). The gastroprotective activity was assessed in a model of indomethacin-induced gastric lesions in rats and in vitro assay of anti-Helicobacter pylori activity. The results led to the following conclusions. The characterization of the standards of CD by mass spectrometry demonstrated that it was possible to establish the fragmentation pattern of CD with diacetalic ring like casearins, which is an important source of information for dereplication in metabolomics studies of plant extracts... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 16644791 bytes, checksum: 69ff0a5dda92d534738f14cc7f745210 (MD5) Previous issue date: 2012-06-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Euphorbiaceae is the sixth largest family of plants in the world and it is represented by 300 genera and approximately 7500 species. Among the many genus that composes this family, Croton stands as the second largest, with about 800 species, possessing a neotropical distribution. It is one of the genus more studied, largely due to promising bioactive compounds produced by this group. To contribute to the chemotaxonomic study of family Euphorbiaceae and genus Croton, the extract of C. grewioides was subjected to a phytochemical study to isolate its chemical constituents, through usual chromatographic methods, and then to identify them by means of spectroscopic methods such as infrared, NMR1H and 13C and uni-dimensional, mass spectrometry, and comparison with literature data. The chemical study of aerial parts of C. grewioides resulted in the identification of thirteen compounds (ent-2-oxo-cleroda-3,13-dien-15α,16-olide-21-ate, ent-2-oxo-cleroda- 3,13-dien-15β,16-olide-21-ate, ent-15,16-epoxy-2-oxo-3,13(16),14-clerodatriene, ent-15,16- epoxy-20-acetoxy-2-oxo-3,13(16),14-clerodatriene, ent-15,16-epoxy-2-oxo-3,13(16),14- clerodatrien-20-oic acid, 2-oxo-5α,8α-cleroda-3,13-dien-15,16-olide, cleroda-3,13-dien- 15,16-olide-8-oic acid, ent-kaur-16-en-19-oic acid, ent-7α-acetoxytraquiloban-18-oic, octasyl trans-ferulate, 4-alyl-1,2-dimethoxybenzene, 2-hidroxy-4,6-dimethoxy-acetofenone e estigmast-4-en-3-one), and three first described in the literature, isolates the first time in gender and eight first reported in the species. The chemical composition of essential oil showed eighteen components, among which α-pinene (47.43%) showed up with major compound. Essential oil C. grewioides and α-pinene were tested for toxicity against Staphylococcus aureus SA-1199B and IS-58.The essential oil C. grewioides and α-pinene tested did not show any significant antibacterial activity against Staphylococcus aureus strains used, but were able to modulate the bacterial resistance to drugs. / A família Euphorbiaceae é a sexta maior família de vegetais do mundo representada por 300 gêneros e 7500 espécies. Dentre os inúmeros gêneros que compõe esta família, o gênero Croton se destaca como o segundo maior, com cerca de 800 espécies, possuindo uma distribuição neotropical. Esse gênero tem sido um dos mais estudados, em grande parte devido aos compostos químicos promissores produzido por este grupo. Visando contribuir para o estudo quimiotaxonômico da família Euphorbiaceae e do gênero Croton, o extrato de C. grewioides foi submetido a um estudo fitoquímico para isolar seus constituintes químicos, através de métodos cromatográficos usuais, e depois para identificá-los por meio de métodos espectroscópicos, tais como Infravermelho, RMN de 1H e 13C uni e bidimensionais, espectométricos, espectometria de massas, além de comparação com dados da literatura. O estudo químico das partes aéreas de C. grewioides resultou na identificação de treze substâncias (ent-2-oxo-cleroda-3,13-dien-15α,16-olideo-21-ato, ent-2-oxo-cleroda-3,13-dien- 15β,16-olideo-21-ato, ent-15,16-epoxi-2-oxo-3,13(16),14-clerodatrieno, ent-15,16-epoxi-20- acetoxi-2-oxo-3,13(16),14-clerodatrieno, ácido ent-15,16-epóxi-2-oxo-3,13(16),14- clerodatrien-20-óico, 2-oxo-5α,8α-cleroda-3,13-dien-15,16-olideo, ácido cleroda-3,13-dien- 15,16-olideo-8-óico, ácido ent-caur-16-en-19-óico, ent-7α-acetoxitraquiloban-18-óico, ferulato de octila, 4-alil-1,2-dimetoxibenzeno, 2-hidroxi-4,6-dimetoxi-acetofenona e estigmast-4-en-3-ona), sendo destes, três descritos pela primeira vez na literatura, dois isolados pela primeira vez no gênero e oito relatados pela primeira vez na espécie. A composição química do óleo essencial apresentou dezoito componentes, dentre os quais, α- pineno (47,43%) mostrou-se com o composto majoritário. O óleo essencial de C.grewioides e o α-pineno foram testados para a toxicidade contra Staphylococcus aureus SA-1199B e IS-58. O óleo essencial de C.grewioides e o α-pineno testado não mostraram qualquer atividade antibacteriana significativa contra as cepas Staphylococcus aureus usados, mas foram capazes de modular a resistência bacteriana a drogas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O presente trabalho descreve o primeiro estudo quÃmico das folhas de Croton pedicellatus Kunth.(Euphorbiaceae), um arbusto, nativo da AmÃrica do Sul, popularmente conhecido como velame, nome dado a vÃrias espÃcies de Croton. O extrato etanÃlico das folhas foi submetido a procedimentos clÃssicos de cromatografia, incluindo Cromatografia LÃquida de Alta EficiÃncia (CLAE), resultando no isolamento, de 15 metabÃlitos secundÃrios: dois sesquiterpenos conhecidos como blumenol A e roseosÃdeo; cinco diterpenos clerodanos furÃnicos: 12,20:15,16-diepoxi-3-hidroxi-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18,2-olÃdeo; 12,20:15,16-diepoxi-2,8-dihidroxi-3-acetoxi-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18-oato de metila; 12,20:15, 16-diepoxi-2-hidroxi-3-acetoxi-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18-oato de metila; 12,20:15,16-diepoxi-3,8-dihidroxi-2-acetoxi-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18-oato de metila e 12,20:15,16-diepoxi-3-hidroxi-2-acetoxi-7,20-dioxocleroda-13(16), 14-dien-18-oato de metila; seis flavonoides: alpinumisoflavona; canferol; 3-O-glicopiranosilquercetina; 6ââ-O-p-cumaroil-β-icopiranosilcanferol (tilirosÃdeo), 6ââ-O-p-cumaroil-β-galactopiranosilcanferol e 6ââ-O-p-cumaroil-β-galactopiranosil-3â-metoxi canferol, alÃm dos esterÃides β-sitosterol e seu derivado 3-O-glicosilado. A determinaÃÃo estrutural de todos os metabÃlitos secundÃrios isolados foi realizada atravÃs do emprego de tÃcnicas espectromÃtricas como ressonÃncia magnÃtica nuclear de hidrogÃnio-1 e carbono-13 (RMN de 1H e de 13C uni e bidimensionais), espectroscopia na regiÃo do infravermelho (IV), espectrometria de massas de alta resoluÃÃo, obtida com ionizaÃÃo por electrospray e comparaÃÃo com dados da literatura. / The present work describes for the first time the chemical investigation from leaves of Croton pedicellatus Kunth. (Euphorbiaceae), a shrub, native to South America and popularly known as âvelameâ, name given to several Croton species. The ethanol extract from leaves was subjected to classical chromatographic procedures including high performance liquid chromatography (HPLC), resulting in the isolation of 15 secondary metabolites: two sesquiterpenes known as blumenol A and roseosÃdeo; five clerodane furan diterpenes: 12,20:15,16-diepoxy-3-hydroxy-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18,2-olide; methyl-12,20: 15,16-diepoxy-2,8-dihydroxy-3-acetoxy-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18-oate; methyl-12.20:15,16-diepoxy-2-hydroxy-3-acetoxy-7,20-dioxocleroda-13 (16),14-dien-18-oate; methyl-12,20:15,16-diepoxy-3,8- dihydroxy-2-acetoxy-7,20 -dioxocleroda-13(16),14-dien-18-oate; methyl-12,20:15,16-diepoxy-3-hydroxy-2-acetoxy-7,20-dioxocleroda-13(16),14-dien-18-oate, and six flavonoids: alpinumisoflavone, kaempferol, quercetin-3-glucoside, Kaempferol-3-β-D-(6-trans-p-coumaroyl)glucopyranoside (tiliroside), kaempferol-3-β-D-(6-trans-pcoumaroyl)galactopyranoside and kaempferol-3â-methoxy-3-β-D-(6-trans-pcoumaroyl)glucopyranoside, besides the steroids β-sitosterol and its derivative 3-glucosylated. The structure determination of all secondary metabolites isolated was performed by spectrometric techniques such as hydrogen-1 and carbon-13 nuclear magnetic resonance (1H NMR and 13C one/two- dimensional), infrared spectrometry (IR), high resolution mass spectrometry and comparison with literature data.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / This work describes the phytochemical investigation of two specimens of Hyptis: H. carvalhoi Harley and H. crassifolia Mart. ex Benth., whose purpose is to investigate northeastern Brazil plants of the Hyptis genus, in the search for bioactive compounds, especially with anticancer activity. The chemical analysis of both species resulted in the isolation and characterization of 10 substances for H. crassifolia and 12 substances for H. carvalhoi. Of the ethanol extract from roots of H. crassifolia were isolated nine diterpenes and the known triterpene betulinic acid. Of the nine diterpenes, four are abietanes: 12-hydroxy-8,11,13-abietatriene, 12-hydroxy-8,11,13-abietatrie-7-one, 11,12,15-tri-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one and 6α,11,12,15-tetra-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one, from which 11,12,15-tri-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one is being reported for the first time in the literature as a new natural abietane diterpene and the 6α,11,12,15-tetra-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one is unknow. Three have rearranged abietanes skeletons: 11,12,14,16-tetra-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one, 11,12,16-tri-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one and (16S)-12,16-epoxy-11,14-di-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one, from which the 11,12,16-tri-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one is unknown, and to the (16S)-12,16-epoxy-11,14-di-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one is proposed a revision of the 1H and 13C NMR data previously reported in the literature. Two known labdane diterpenes: 11-oxomanoyl oxide and 11β-hydroxymanoyl oxide were also isolated. From the hexane extract of the roots of H. carvalhoi were isolated ten diterpenes, one compound from a mixed biosynthesis, 3β-[4â-acetoxyangeloiloxy]-tremetone, not yet reported for the Lamiaceae, and betulinic acid, a chemotaxonomic marker for the genus Hyptis. Of the ten diterpenes, five are abietane: 12-hydroxy-8,11,13-abietatrien-20-al, 8,11,13-abietatrien-12,20-diol, 11-hydroxy-12-metoxy-8,11,13-abietatrien-10-oic acid, 12-hydroxy-8,11,13-abietatrien-10-oic acid and 12-hydroxy-8,11,13-abietatriene, an unknown nor-diterpene, with a 20-nor-icetexane skeleton identified as 8(7),10(7)-di-epoxy-12-hydroxy-20-nor-8,11,13-abietatriene, a pimarane diterpene, 11-ketosandaracopimar-15-en-8β-ol, unknow in the Lamiaceae and three tanshinones: 7β-hydroxy-11,14-di-oxoabieta-8,13-diene, 7,12-di-hydroxy-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al and 7α-hydroxy-11,14-dioxoabieta-8,13-diene, from which the last is unknown. All compounds were isolated using successive chromatographic purification steps, including HPLC, and structural determination was performed by mean of spectroscopic techniques such as HRMS, IR, 1H and 13C NMR, including uni and bidimensional pulse sequences, and comparison with data from the literature. Among the isolated compounds, eighteen have been tested for cell-growth inhibition activity against several human cancer cell lines, and ten showed activity. From the compounds isolated from H. crassifolia, 12-hydroxy-8,11,13-abietatriene and 11,12,14,16-tetra-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one showed a moderate cytotoxic activity, while 12-hydroxy-8,11,13-abietatrie-7-one exhibited a moderate, but selective activity against leukemia cell line. All diterpenes isolated from H. carvalhoi exhibited cytotoxic activity, but 7,12-di-hydroxy-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al, after 72 hours of incubation, showed IC50 values ranging from 3.91 to 32.01 μM in colon tumor (HCT-116) and leukemic (HL-60) cells, respectively. Its possible mechanism of action was then studied. / Este trabalho descreve a investigaÃÃo fitoquÃmica de dois espÃcimes de Hyptis: H. carvalhoi Harley e H. crassifolia Mart. ex Benth. O objetivo à investigar plantas do gÃnero Hyptis do Nordeste do Brasil, na busca por compostos bioativos, principalmente com atividade anticÃncer. A prospecÃÃo quÃmica relativa Ãs duas espÃcies resultou no isolamento de 10 substÃncias para H. crassifolia e 12 substÃncias para H. carvalhoi. Do extrato etanÃlico das raÃzes de H. crassifolia foram isolados nove diterpenos e o triterpeno conhecido como Ãcido betulÃnico. Dos nove diterpenos, quatro sÃo abietanos: 12-hidroxi-8,11,13-abietatrieno, 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona, 11,12,15-tri-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona e 6α,11,12,15-tetra-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona, dos quais a 11,12,15-tri-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona està sendo relatada pela primeira vez como um novo diterpeno abietano natural e a 6α,11,12,15-tetra-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona à inÃdita na literatura. TrÃs apresentam esqueletos abietanos rearranjados: 11,12,14,16-tetra-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona, 11,12,16-tri-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona e (16S)-12,16-epoxi-11,14-di-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona, sendo a 11,12,16-tri-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona inÃdita, e para a (16S)-12,16-epoxi-11,14-di-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona està se propondo uma revisÃo dos dados de RMN de 1H e 13C relatados na literatura. Foram isolados tambÃm dois diterpenos labdanos conhecidos: Ãxido de 11β-hidroximanoila e Ãxido de 11-oxomanoila. Do extrato hexÃnico das raÃzes de H. carvalhoi foram isolados dez diterpenos, uma substÃncia de biossÃntese mista, denominada de 3β-[4â-acetoxiangeloiloxi]-tremetona, ainda nÃo relatada na famÃlia Lamiaceae e o Ãcido betulÃnico, marcador quimiotaxonÃmico no gÃnero Hyptis. Dos dez diterpenos, cinco sÃo abietanos: 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-20-al, 8,11,13-abietatrien-12,20-diol, Ãcido 11-hidroxi-12-metoxi-8,11,13-abietatrien-10-Ãico, Ãcido 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-10-Ãico e 12-hidroxi-8,11,13-abietatrieno, um nor-diterpeno, com esqueleto 20-nor-icetexano inÃdito, denominado 8(7),10(7)-diepoxi-12-hidroxi-20-nor-8,11,13-abietatrieno, um diterpeno pimarano, o 11-cetosandaracopimar-15-en-8β-ol, inÃdito na famÃlia Lamiaceae e trÃs tanshinonas: 7β-hidroxi-11,14-dioxoabieta-8,13-dieno, 7,12-di-hidroxi-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al e 7α-hidroxi-11,14-dioxoabieta-8,13-dieno, sendo a Ãltima inÃdita na literatura. Todos os compostos foram isolados utilizando sucessivos fracionamentos cromatogrÃficos, incluindo CLAE e a determinaÃÃo estrutural foi realizada atravÃs de tÃcnicas espectroscÃpicas como EMAR, IV, RMN de 1H e 13C, incluindo sequÃncias de pulsos uni e bidimensionais, e comparaÃÃo com dados descritos na literatura. Dentre os compostos isolados, dezoito foram testados com relaÃÃo a inibiÃÃo do crescimento celular de quatro linhagens de cÃlulas humanas cancerÃgenas e dez mostraram atividade. Dos compostos isolados de H. crassifolia o 12-hidroxi-8,11,13-abietatrieno e a 11,12,14,16-tetra-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona apresentaram atividade citotÃxica moderada, enquanto a 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona apresentou uma atividade citotÃxica moderada, porÃm seletiva contra cÃlulas tumorais leucÃmicas. Dos compostos isolados de H. carvalhoi todos os diterpenos apresentaram atividade citotÃxica, mas a 7,12-di-hidroxi-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al, apÃs 72 horas de incubaÃÃo, apresentou valores de CI50 que variaram de 3,91 a 32,01 μM em cÃlulas tumorais de cÃlon (HCT-116) e leucÃmicas (HL-60), respectivamente. O seu possÃvel mecanismo de aÃÃo, foi entÃo estudado.