PARENTE, H. M. A. P. Prevalência do Helicobacter pylori e das cepas cagA em portadores de doença inflamatória intestinal atendidos no Hospital Universitário Walter Cantídio em Fortaleza-CE. 2016. 80 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-17T12:19:23Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_hmaparente.pdf: 4336071 bytes, checksum: 75fe231aeabdff46e927a7fb35956cc5 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-17T12:19:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_hmaparente.pdf: 4336071 bytes, checksum: 75fe231aeabdff46e927a7fb35956cc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T12:19:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_hmaparente.pdf: 4336071 bytes, checksum: 75fe231aeabdff46e927a7fb35956cc5 (MD5) Previous issue date: 2016-12-23 / Several studies have investigated the possible protective role of H. pylori infection in inflammatory bowel disease (Crohn's disease and ulcerative colitis), but the results are controversial. This prospective cross-sectional, observational study was conducted between August 2014 and November 2016 to evaluate the prevalence of H. pylori and cagA virulence gene in patients with IBD and in controls treated at the gastroenterology outpatient clinic Of the University Hospital of the Federal University of Ceará - Fortaleza. A total of 182 patients were analyzed, 41 patients with IBD in which 31.7% (13/41) were men and 68.3% (28/41) were women aged 18-72 years and 39.84 ± 14 , 76 (mean ± SD) years; And 141 dyspeptic patients without IBD were 39.9% (55/141) men and 60.1% (86/141) women aged 18-70 years and 40.1 ± 14.20 (mean ± SEM) SD) years, age-matched, who signed a free informed consent form (ICF). All patients were submitted to upper digestive endoscopy (EDA), and biopsies were collected (antrum, body and notch). The detection of H. pylori was done by means of the urease test, the histological analysis and the Polymerase Chain Reaction (PCR) for the ureA gene. PCR was also performed for the cagA virulence gene. Of the 41 patients with IBD, 36.5% (15/41) had Crohn's disease and 63.5% (26/41) ulcerative colitis. On the endoscopic findings, patients with IBD presented gastric erosion in 41.5% (17/41), associated with chronic pangastritis found in 64.3% (9/14) of patients with Crohn's disease; And 56.5% (13/23) in patients with ulcerative colitis, the most frequent histopathological findings were 71.4% (10/14) and 73.9% (17/23); 64.3% (9/14) and 56.5% (13/23) in Crohn's Disease and Ulcerative Colitis, respectively. The bacterium was found in 73.2% (30/41) in the DII group, in the control group this prevalence was 75.1% (106/141). Among the DC and RCU groups, the prevalence of H. pylori was 73.3% (11/15) and 73.1% (19/26), respectively. The cagA gene was positive in 43.9% (15/26) of the DII group and in 76.3% (80/103) of the control, (p = 0.038). The prevalence of H. pylori in patients with IBD and controls was similar. CagA strains were significantly less prevalent in patients with IBD. / Vários trabalhos têm investigado o possível papel protetor da infecção pelo H. pylori na doença inflamatória intestinal (Doença de Crohn e Retocolite ulcerativa), contudo os resultados são controversos. Esse estudo prospectivo, transversal e de caráter observacional foi realizado entre agosto/2014 e novembro/2016, teve como objetivo avaliar a prevalência do H. pylori e do gene de virulência cagA, nos pacientes portadores de DII e em controles atendidos no ambulatório de Gastrenterologia do Hospital Universitário da Universidade Federal do Ceará - Fortaleza. Foram analisados 182 pacientes, sendo 41 pacientes com DII nos quais 31,7% (13/41) eram homens e 68,3% (28/41) eram mulheres com idade variando entre 18-72 anos e com 39,84 ± 14,76 (média ± SD) anos; e 141 pacientes dispépticos não portadores de DII sendo 39,9% (55/141) homens e 60,1% (86/141) mulheres com idade variando entre 18-70 anos e com 40,1±14,20 (média±SD) anos, pareados para a idade, os quais assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE). Todos os pacientes foram submetidos à endoscopia digestiva alta (EDA), sendo coletadas biópsias (antro, corpo e incisura). A detecção de H. pylori foi feita por meio do teste da urease, da análise histológica e da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o gene ureA. Além disso foi realizado PCR para o gene de virulência cagA. Dos 41 pacientes com DII, 36,5% (15/41) eram portadores da Doença de Crohn e 63,5% (26/41) Retocolite ulcerativa. Sobre os achados endoscópicos, os pacientes com DII apresentaram erosão gástrica em 41,5% (17/41), associada a pangastrite crônica encontrada em 64,3,% (9/14) dos pacientes com Doença de Crohn; e 56,5% (13/23) nos pacientes com Retocolite ulcerativa, a inflamação ativa e leve foram os achados histopatológicos mais encontrados sendo visualizados em 71,4% (10/14) e 73,9% (17/23); 64,3% (9/14) e 56,5% (13/23) na Doença de Crohn e Retocolite Ulcerativa respectivamente. A bactéria foi encontrada em 73,2% (30/41) no grupo DII, no grupo controle essa prevalência foi de 75,1% (106/141). Entre os grupos DC e RCU as prevalências do H. pylori foram de 73,3% (11/15) e 73,1% (19/26) respectivamente. O gene cagA foi positivo em 43,9% (15/26) do grupo DII e em 76,3% (80/103) do controle, (p=0.038). A prevalência de H. pylori nos pacientes portadores de DII e controles foi similiar. As cepas cagA foram significantemente menos prevalentes nos pacientes com DII.

LUCETTI, Larisse Tavares. Efeito da pentoxifilina e da dexametasona na resposta inflamatória e nas alterações da motilidade digestiva associadas à mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil em ratos. 2009. 75 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-13T13:04:43Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_ltlucetti.pdf: 2602818 bytes, checksum: 9713e09aba4a4edd5e296341d4c44b74 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-13T16:15:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_ltlucetti.pdf: 2602818 bytes, checksum: 9713e09aba4a4edd5e296341d4c44b74 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-13T16:15:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_ltlucetti.pdf: 2602818 bytes, checksum: 9713e09aba4a4edd5e296341d4c44b74 (MD5) Previous issue date: 2009 / One of the most important limitation of antineoplasic chemotherapy is the intestinal mucositis. Mucositis is a clinical term wich describes a syndrome characterized for ulceration in the digestive tract. Gastrointestinal tract is vulnerable because it have elevated proliferation cellular renovation. Intestinal mucositis results in inflammatory events, that leads the alterations in permeability and gastrointestinal motility in the inflammatory phase, as in the post-inflammatory phase. Pentoxifylline (PTX) is important inhibitor of the cytokines synthesis, with a protective effect against 5-FU- induced oral mucositis in hamster. Dexamethasone (DEXA) is glucorticoide with anti-inflammatory and immunosuppressive effects. Aim: To evaluate the effect of the pentoxifylline or dexamethasone treatments in the inflammatory response and alterations of the gastrointestinal motility associate with 5-FU- induced intestinal mucositis. Methods: Male Wistar rats (200 – 250g) treated in d0 by 5-FU (150 mg/Kg, i.p. only dose) or 5-FU + PTX (90 mg/Kg, s.c.) or 5-FU + DEXA (2.5mg/Kg, i.p.). PTX or DEXA were administrated 30’ after 5-FU, and then daily. In d3, animals were sacrificed, samples duodenum, jejunum and ileum were removed for assessment epithelial damage for morphometric, histological scores, MPO activity and GSH concentration. In order to evaluate the concentration of TNF- and IL-1, duodenum samples were removed and ELISA or imunohistoquimic for this cytocines were performed. In order to evaluated the gastrointestinal motility, animals received same treatment described previously, then were fasted for 18h of the d2 to d3. In d3 the animals were gavage-fed with a test meal and sacrificed 20 min later. Stomach and consecutive intestinal segments same (proximal, medial and distal) were obtained. Each segment was placed in a measuring cylinder and the volume measured by adding 100 mL of 0.1 NaOH. The absorbance of the sample was read at a 540 nm. Results: The treatment with 5-FU induced intestinal damage with an important disruption of the functional epithelial barrier and presence of these following alterations: shortening villus, partial necrosis crypts, vacuolated cells, presence of infiltrated mono and polymorphonuclears, production of free radicals with GSH consumption, increase in the concentration of TNF- and IL-1 in the duodenum, and gastrointestinal dismotility. The treatment with DEXA and PTX significantly reduced the intestinal damage, with recovery of the high villus, depth of crypt, reduction of the neutrophil infiltration, increase of the levels of glutathione and reduction in the TNF- and IL-1 concentrations. However, only the treatment with DEXA was able to reverse the delays gastric emptying and gastrointestinal transit induced by intestinal mucositis. Conclusion: 5-FU induces intestinal mucositis in rats with the participation of TNF- and IL-1. It associates with delayed gastric emptying and gastrointestinal transit. We conclude also that PTX or DEXA- treatments decreases the inflammatory response. On the other hand, only DEXA treatment reversed gastrointestinal dismotility associate with 5– FU- induced intestinal mucositis in rats. / A mucosite induzida por antineoplásicos é um fator limitante na terapia anticâncer. Mucosite é um termo clínico que descreve uma síndrome caracterizada por ulceração da mucosa de todo o trato digestivo. O trato gastrintestinal é vulnerável por causa da alta proliferação e freqüência de renovação celular. Assim, a mucosite intestinal resulta de eventos inflamatórios, que levam as alterações de permeabilidade e trânsito intestinal e de alterações na motilidade intestinal tanto na fase inflamatória, como na fase pós-inflamatória. Pentoxifilina (PTX) é um importante inibidor da síntese de citocinas, além de apresentar efeito protetor sobre a mucosite oral por 5-FU em hamster. A dexametasona (DEXA) é um glicocorticóide cujo principal efeito farmacológico decorre de sua ação antiinflamatória e imunossupressora. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com pentoxifilina ou dexametasona na resposta inflamatória e nas alterações da motilidade digestiva associadas a mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. Métodos: Ratos Wistar machos (200 – 250g) foram tratados no d0 com 5-FU (150 mg/Kg, i.p. dose única) ou com 5-FU + PTX (90mg/Kg, s.c.) ou 5-FU + DEXA (2,5mg/Kg, i.p.). A PTX e a DEXA foram administradas meia hora após a administração de 5-FU no d0 e diariamente até o sacrifício. No d3 os animais foram sacrificados, amostras do duodeno, jejuno e íleo, foram removidas para avaliar a injúria epitelial por morfometria, escores histológicos, pela atividade de MPO e pela concentração de GSH. Para avaliação de citocinas amostras de duodeno foram retiradas e pelo método de ELISA foi determinada a concentração de TNF- e IL-1 e pela imunohistoquímica foi observado a imunomarcação. Já na técnica de esvaziamento gástrico os animais receberam o mesmo tratamento descrito anteriormente. Posteriormente, foram deixados em jejum de 18 horas do d2 para o d3. No d3, foram administrados 1,5 ml da solução glicosada (5%) contendo vermelho de fenol (VF) a 0,75 mg/ml em cada animal. Após 20 min, os animais foram sacrificados e submetidos a uma laparotomia mediana. O intestino delgado foi exposto e divido em 3 partes iguais: proximal, medial e distal. Com o auxílio de uma proveta contendo uma solução de NaOH (100ml, 0,1N) o volume do estômago e dos segmentos do intestino delgado foram determinados. A absorbância da amostra foi lida sob um comprimento de onda de 540 nm. Resultados: O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir uma lesão intestinal com um importante comprometimento da barreira epitelial funcional com a presença das seguintes alterações: encurtamento acentuado das vilosidades intestinais, necrose parcial de criptas, vacuolização de células, presença de infiltrado mono e polimorfonucleares, produção de radicais livres com consumo de GSH, aumento na concentração de TNF- e IL-1 com maior imunomarcação (no duodeno) e alterações na motilidade digestiva. O tratamento com DEXA e PTX reduziu significativamente as lesões intestinais, com recuperação da altura dos vilos, recuperação da profundidade das criptas, diminuição do infiltrado neutrofílico, aumento dos níveis de glutationa e redução da concentração de TNF-, IL-1 com uma menor imunomarcação. Contudo somente o tratamento com DEXA foi capaz de reverter o retarde do esvaziamento gástrico e do transito gastrintestinal. Conclusão: 5-FU induz mucosite intestinal em ratos com a participação de TNF- e IL-1, a qual se associa com retarde no esvaziamento gástrico e no transito gastrintestinal. O tratamento com PTX ou DEXA foram capaz de reverter parte dos achados inflamatórios, entretanto, somente o tratamento com DEXA foi capaz de reverter parcialmente às alterações na motilidade digestiva associadas a mucosite por 5- FU em ratos.

JUSTINO, Priscilla Fernanda Campos. Saccharomyces boulardii reverte a resposta inflamatória e funcional presente na mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil em camundongos. 2011. 89 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-09T14:06:08Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_pfcjustino.pdf: 2173455 bytes, checksum: 6190a3fb5bece18f1d9124dcc4fb94e1 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-14T16:01:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_pfcjustino.pdf: 2173455 bytes, checksum: 6190a3fb5bece18f1d9124dcc4fb94e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-14T16:01:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_pfcjustino.pdf: 2173455 bytes, checksum: 6190a3fb5bece18f1d9124dcc4fb94e1 (MD5) Previous issue date: 2011 / Intestinal mucositis is a frequent side-effect associated to 5-fluorouracil (5-FU) clinical use and results in inflammatory events. It is characterized by epithelial ulcerations in the mucosa and clinical manifestations of abdominal pain, nauseas and diarrhea. Saccharomyces boulardii is a probiotic yeast which has been shown to protect the gastrointestinal microflora from disequilibrium and from associated gastrointestinal disorders. Aim: To evaluate the effect of treatment with Saccharomyces boulardii in inflammatory response and alterations in the gastrintestinal motility in the course of intestinal mucositis experimental induced by 5-FU. Methods: Swiss male mice (25-30g) were treated with 5-FU (450mg/Kg, ip) or saline (control). Other groups received 3 or 6 days during SB (800mg/Kg, gavage) until the day of sacrifice, every day. A group pretreated received the SB for 3 days before and 3 days after administration of 5-FU (SB 6D) and another group received SB only 3 days after administration of 5-FU (SB 3D). At day 3 after 5-FU, the animals were sacrificed, samples of jejunum and ileum were collected to assess the injury epithelial morphometry, histological scores, the activity of MPO, nitrite levels and the concentration of GSH. For evaluation of cytokine samples of jejunum and ileum were removed and the ELISA was determined concentrations of IL-1β and CXCL1. In the technique of gastric emptying, the animals received the same treatment described above. Later, they were left to fast for 18 hours from d6 to d7. At d7, were administered 0.3 ml of glucose solution (5%) containing phenol red (VF) to 0.75 mg / ml in each animal. After 20 min, the animals were sacrificed and underwent a laparotomy. The small intestine was exposed and divided into 3 equal parts: proximal, medial and distal. With the aid of a beaker containing a solution of NaOH (100ml, 0.1 N) the volume of the stomach and small intestine segments were determined. The sample absorbance was read in a wavelength of 540 nm. Results: Treatment with 5-FU was able to induce intestinal injury with a significant impairment of epithelial barrier function in the presence of the following changes: severe shortening of the villus, crypts of partial necrosis, vacuolization of cells, infiltration and mono polymorphonuclear free radical production with consumption of GSH, increased levels of nitrite, increased concentration of IL-1β and CXCL1 and changes in gastrointestinal motility. Treatment with SB significantly reduced intestinal damage, with recovery of villous height, crypt depth recovery, decreased neutrophil infiltration and nitrite levels, increased levels of glutathione and reduced concentrations of IL-1β and CXCL1. However, treatment with SB was able to reverse the delayed gastric emptying and gastrointestinal transit. Conclusion: 5-FU induces intestinal mucositis in mice involving IL-1β and CXCL1, which is associated with delayed gastric emptying and gastrointestinal transit in. Treatment with SB, both 3D and 6D, were able to reverse the inflammatory changes, and revert the changes in gastrointestinal motility associated with mucositis by 5 - FU in mice. / A mucosite induzida por antineoplásicos é um fator limitante na terapia anticâncer. O trato gastrintestinal é vulnerável por causa da alta proliferação e frequência de renovação celular. Saccharomyces boulardii (SB) é uma levedura probiótica que é utilizado para proteger a microflora gastrintestinal do desequilíbrio e de distúrbios gastrintestinais associados. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com SB na resposta inflamatória e nas alterações da motilidade digestiva no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. Métodos: Camundongos machos Swiss (25-30g) foram tratados com 5-FU (450mg/Kg, i.p.) ou com solução salina (controle). Outros grupos receberam durante 3 ou 6 dias SB (800mg/Kg, gavagem) até o dia do sacrifício, diariamente. Um grupo pré-tratado recebeu o SB por 3 dias antes e 3 dias depois da administração do 5-FU (SB 6D) e outro grupo recebeu SB somente 3 dias após a administração do 5-FU (SB 3D). No 3º dia após o 5-FU ou 5-FU+SB (3D ou 6D), os animais foram sacrificados, amostras de jejuno e íleo foram retiradas para avaliar a injúria epitelial por morfometria, escores histológicos, atividade de MPO, níveis de nitrito e concentração de GSH. Para avaliação de citocinas pelo método de ELISA foi determinada a concentração de IL-1β e CXCL1. Já na técnica de esvaziamento gástrico os animais receberam o mesmo tratamento descrito anteriormente. Posteriormente, foram deixados em jejum de 18 horas. No 7º dia foram administrados 0,3 ml da solução glicosada (5%) contendo vermelho de fenol (VF) a 0,75 mg/ml em cada animal. Após 20 min, os animais foram sacrificados e submetidos a uma laparotomia mediana. O intestino delgado foi exposto e divido em 3 partes iguais: proximal, medial e distal. Com o auxílio de uma proveta contendo uma solução de NaOH (100ml, 0,1N) o volume do estômago e dos segmentos do intestino delgado foram determinados. A absorbância da amostra foi lida à 540nm. Resultados: O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir uma lesão intestinal com um importante comprometimento da barreira epitelial funcional com a presença das seguintes alterações: encurtamento acentuado das vilosidades intestinais, necrose parcial de criptas, vacuolização de células, presença de infiltrado de polimorfonucleares, produção de radicais livres com consumo de GSH, aumento dos níveis de nitrito, aumento na concentração de IL-1β e CXCL1 e alterações na motilidade digestiva. O tratamento com SB reduziu significativamente as lesões intestinais, com recuperação da altura dos vilos, recuperação da profundidade das criptas, diminuição do infiltrado neutrofílico e dos níveis de nitrito, aumento dos níveis de glutationa e redução da concentração de IL-1β e CXCL1. Contudo, o tratamento com SB foi capaz de reverter o retarde do esvaziamento gástrico e do transito gastrintestinal. Conclusão: 5-FU induz mucosite intestinal em camundongos com a participação de IL-1β e CXCL1, a qual se associa com retarde no esvaziamento gástrico e no transito gastrintestinal. O tratamento com SB foi capaz de reverter os achados inflamatórios e as alterações na motilidade digestiva associadas à mucosite por 5- FU em camundongos.

O estresse oxidativo tem um papel importante no desenvolvimento de diferentes doenças inflamatórias agudas, mas intervenções que diminuem a geração ou os efeitos das espécies reativas de oxigênio têm papel controvérsio em modelos animais e humanos. Neste trabalho avaliamos os efeitos de uma combinação de antioxidantes (N-acetilcisteína e deferoxamina) em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas: sepse induzida por ligação cecal e perfuração (CLP), insuficiência hepática aguda e lesão pulmonar aguda. No modelo de CLP os ratos tratados com antioxidantes apresentaram uma significativa redução na atividade de mieloperoxidase (como marcador de infiltração neutrofílica) e uma menor quantidade de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico em diferentes órgãos envolvidos na resposta à sepse.A produção mitocondrial de superóxido foi significativamente diminuída pelo tratamento antixodante. Além disto o tratamento melhora o equilíbrio entre superóxido dismutase e catalase e melhora a sobrevida dos animais submetidos a CLP. No modelo de insuficiência hepática aguda o tratamento com antioxidantes significativamente diminui o dano oxidativo hepático e no sistema nervoso central, atenua marcadores de insuficiência hepática e melhora a sobrevida dos animais. No modelo de lesão pulmonar aguda o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina diminui o conteúdo de proteínas do lavado bronco-alveolar, assim como o influxo de células inflamatórias, marcadores de dano oxidativo e citocinas inflamatórias.Em conclusão, nossos dados demonstram pela primeira vez que o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina é superior ao uso isolado destes antioxidantes em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas. Este efeitos é parcialmentesecundário a uma diminuição do estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e resposta inflamatória no rato. / Oxidative stress plays an important role in the development of acute inflammatory diseases, but interventions that reduce the generation or the effects of reactive oxygen species exert controversial effects in animal models and in humans. Here we have evaluated the effects of a combination of antioxidants (N-acetylcysteine plus deferoxamine) in a murine model of polymicrobial sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP), in a murine model of acute hepatic failure and in a murine model of acute lung injury. In the CLP model of sepsis rats treated with antioxidants had significantly lower myeloperoxidase activity (as an index of neutrophil infiltration) and thiobarbituric acid reactive species formation in several organs involved in septic response. Mitochondrial superoxide production was significantly reduced by antioxidant treatment. Furthermore, antioxidants significantly improved the balance between catalase and superoxide dismutase activities, and improved survival to 66%. In the acute hepatic failure model, N-acetylcysteine plus deferoxamine treatment significantly attenuated hepatic and central nervous system oxidative damage, attenuated markers of hepatic failure and improves survival to 80%. In the acute lung injury model, N-acetylcysteine plus deferoxamine decreased bronchoalveolar lavage fluid protein, inflammatory cells, oxidative damage variables, and proinflammatory cytokines. In conclusion, our data provide the first experimental demonstration that N-acetylcysteine plus deferoxamine is superior to each antioxidant used alone in different animal models of acute inflammatory diseases. This effect is partially secondary to a decrease in oxidative stress, mitochondrial dysfunction and inflammatory response in the rat.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-03-04T19:58:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 309417.pdf: 3595166 bytes, checksum: b6e48ae70a6fa8f624beb4e094cb8e9e (MD5) / As doenças inflamatórias intestinais (IBD) são classificadas como um grupo de disfunções do trato gastrointestinal e representam importante problema de saúde pública mundial. Atualmente, as opções terapêuticas de primeira escolha para o tratamento das IBDs apresentam eficácia limitada, além de diversos efeitos adversos. Por essa razão, a busca por terapias mais promissoras para o tratamento dessas doenças é extremamente necessária. Os flavonoides são compostos fenólicos amplamente distribuídos na natureza e possuem inúmeras propriedades biológicas, dentre elas, atividade antinociceptiva e anti-inflamatória, e dessa forma, são apontados na literatura, como alvo potencial para o tratamento das IBDs. O flavonoide miricitrina é encontrado em uma grande variedade de vegetais, especialmente nas folhas da espécie Eugenia uniflora. O presente estudo avaliou a ação anti-inflamatória da miricitrina no modelo de colite induzida pelo sulfato sódico de dextrana (DSS), bem como, alguns dos mecanismos envolvidos em seus efeitos em camundongos. Além disso, para que a atividade farmacológica da miricitrina, no modelo de colite experimental, fosse corretamente interpretada, desenvolvemos e validamos um método analítico, o qual foi aplicado com sucesso para a determinação do perfil farmacocinético da miricitrina em plasma de roedores. Nossos resultados demonstraram que o tratamento oral com miricitrina (1, 3, e 10 mg / kg) causou ação anti-inflamatória na colite aguda induzida pelo DSS, através da prevenção das lesões macro- e microscópicas do cólon, bem como, pela inibição da migração de neutrófilos para o local inflamado. Além disso, a miricitrina reduziu significativamente os níveis de citocinas/quimiocinas pró-inflamatórias, como, TNF-?, CXCL1/KC e IL-6 e a expressão das enzimas, NOS2 e COX-2, em tecido colônico dos animais com colite experimental. O tratamento oral com a miricitrina inibiu importantes vias inflamatórias após o tratamento DSS, incluindo a proteína quinase PKC?, proteínas quinases ativadas por mitógeno, e o fator de transcrição nuclear kB. Por fim, os métodos analíticos validados neste trabalho mostraram-se seletivos, lineares, sensíveis, reprodutíveis e, apresentaram precisão e exatidão dentro dos limites preconizados pelas agências regulamentadoras e, por esta razão, puderam ser corretamente aplicados para a determinação do perfil farmacocinético deste composto em ratos e camundongos. Os resultados do perfil farmacocinético da miricitrina em plasma de roedores nos permitem sugerir que, tanto a forma glicosilada da miricitrina, como os seus metabólitos formados, parecem ser os responsáveis pela sua ação anti-inflamatória e antinociceptiva após a administração oral do composto. / Inflammatory bowel diseases (IBD) are classified as a group of gastrointestinal disorders representing an important public health problem. The current therapy used for the management of human inflammatory bowel disease has limited efficacy and many adverse effects. For this reason, the search for most promising therapies for the treatment of these diseases is extremely needed. Flavonoids are phenolic compounds widely distributed in nature and have a number of biological properties, including, antinociceptive and antiinflammatory activities. Therefore, the flavonoids are cited in the literature as a potential target for the treatment of IBDs. The flavonoid myricitrin is found in a wide variety of plants, especially in the leaves of the species Eugenia uniflora. In order to better understanding the biological activity of the compound, the determination of its pharmacokinetic profile is extremely important. Thus, this study aimed to investigate the antiinflamatory and antinociceptive actions of myricitrin in the model of acute colitis induced by dextran sulfate sodium (DSS). Furthermore, we have also developed and validated an analytical method which was successfully applied to determine the pharmacokinetic profile of myricitrin in the plasma of rodents. Our results showed that oral treatment with myricitrin (1, 3, and 10 mg/kg) exerted a marked anti-inflammatory action in DSS-induced acute colitis in mice, by preventing macro- and microscopic damage to the colon and the migration of neutrophils to the infected site. Furthermore, myricitrin significantly impaired the levels of pro-inflammatory cytokines/chemokines, namely TNF-?, CXCL1/KC and IL-6 and the expression of NOS2 and COX-2 enzymes in murine colon tissue. Moreover, the oral treatment with myricitrin also prevented important inflammatory pathways following DSS treatment, including the protein kinase PKC?, mitogen-activated protein kinases, and the ?B nuclear transcription factor. The analytical methods validated in this work were selective, linear, sensitive, reproducible, and showed precision and accuracy within the limits preconized by regulatory agencies. Thus, it could be properly used to determine the pharmacokinetic profile of myricitrin in rats and mice. The pharmacokinetic profile in plasma of rodents allows us to suggest that both, the glycosylated form of myricitrin, as well as, their metabolites, seem to be the responsibles for its pharmacological activity in the present study.

O estresse oxidativo tem um papel importante no desenvolvimento de diferentes doenças inflamatórias agudas, mas intervenções que diminuem a geração ou os efeitos das espécies reativas de oxigênio têm papel controvérsio em modelos animais e humanos. Neste trabalho avaliamos os efeitos de uma combinação de antioxidantes (N-acetilcisteína e deferoxamina) em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas: sepse induzida por ligação cecal e perfuração (CLP), insuficiência hepática aguda e lesão pulmonar aguda. No modelo de CLP os ratos tratados com antioxidantes apresentaram uma significativa redução na atividade de mieloperoxidase (como marcador de infiltração neutrofílica) e uma menor quantidade de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico em diferentes órgãos envolvidos na resposta à sepse.A produção mitocondrial de superóxido foi significativamente diminuída pelo tratamento antixodante. Além disto o tratamento melhora o equilíbrio entre superóxido dismutase e catalase e melhora a sobrevida dos animais submetidos a CLP. No modelo de insuficiência hepática aguda o tratamento com antioxidantes significativamente diminui o dano oxidativo hepático e no sistema nervoso central, atenua marcadores de insuficiência hepática e melhora a sobrevida dos animais. No modelo de lesão pulmonar aguda o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina diminui o conteúdo de proteínas do lavado bronco-alveolar, assim como o influxo de células inflamatórias, marcadores de dano oxidativo e citocinas inflamatórias.Em conclusão, nossos dados demonstram pela primeira vez que o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina é superior ao uso isolado destes antioxidantes em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas. Este efeitos é parcialmentesecundário a uma diminuição do estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e resposta inflamatória no rato. / Oxidative stress plays an important role in the development of acute inflammatory diseases, but interventions that reduce the generation or the effects of reactive oxygen species exert controversial effects in animal models and in humans. Here we have evaluated the effects of a combination of antioxidants (N-acetylcysteine plus deferoxamine) in a murine model of polymicrobial sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP), in a murine model of acute hepatic failure and in a murine model of acute lung injury. In the CLP model of sepsis rats treated with antioxidants had significantly lower myeloperoxidase activity (as an index of neutrophil infiltration) and thiobarbituric acid reactive species formation in several organs involved in septic response. Mitochondrial superoxide production was significantly reduced by antioxidant treatment. Furthermore, antioxidants significantly improved the balance between catalase and superoxide dismutase activities, and improved survival to 66%. In the acute hepatic failure model, N-acetylcysteine plus deferoxamine treatment significantly attenuated hepatic and central nervous system oxidative damage, attenuated markers of hepatic failure and improves survival to 80%. In the acute lung injury model, N-acetylcysteine plus deferoxamine decreased bronchoalveolar lavage fluid protein, inflammatory cells, oxidative damage variables, and proinflammatory cytokines. In conclusion, our data provide the first experimental demonstration that N-acetylcysteine plus deferoxamine is superior to each antioxidant used alone in different animal models of acute inflammatory diseases. This effect is partially secondary to a decrease in oxidative stress, mitochondrial dysfunction and inflammatory response in the rat.

Orientadora : Profª. Drª. Maria Fernanda de Paula Werner / Coorientadora : Profa. Dra. Cristiane Hatsuko Baggio / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 22/02/2017 / Inclui referências: f. 153-179 / Resumo: A colite ulcerativa é uma doença crônica caracterizada por inflamação difusa que afeta a mucosa colônica com diarreia sanguinolenta como característica predominante. Estudos epidemiológicos sugerem que a ocorrência da doença inflamatória intestinal está crescendo consideravelmente no mundo todo e a razão permanece desconhecida. Atualmente, tem sido apontado que a colite apresenta caráter multifatorial, sendo o resultado da interação entre fatores genéticos e ambientais. Apesar da relevância e do impacto da doença na saúde e na vida social dos pacientes, a colite ulcerativa não é totalmente compreendida e a terapêutica disponível tem pouca eficácia associada a inúmeros efeitos adversos, dando espaço à procura urgente por novas alternativas terapêuticas. Recentemente, tem sido observado que polissacarídeos purificados de plantas poderiam melhorar respostas biológicas assim como a resposta imune. Sendo assim, este estudo foi desenhado para investigar os efeitos protetores e de cicatrização da ramnogalacturonana (RGal) isolado da Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen em um modelo experimental agudo de inflamação intestinal induzida quimicamente com dextrano sulfato de sódio (DSS) em camundongos, investigando os possíveis mecanismos de ação envolvidos. Além disso, também avaliamos os mecanismos complementares em células heterogêneas de adenocarcinoma colorretal epitelial humano (Caco-2). Os resultados obtidos são bastante promissores e demonstraram que o tratamento com RGal durante 7 dias claramente reduziu a gravidade da colite induzida por DSS através da proteção do epitélio do cólon e neurônios do plexo mioentérico quando observados por técnicas histológicas. Ademais, o tratamento com RGal também aumentou os fatores protetores da mucosa, como o muco gástrico e a proliferação de novas células seguido pela manutenção do trânsito intestinal e redução da alodinia abdominal. Ainda, em um ensaio de função de barreira in vitro, RGal promoveu a cicatrização e reduziu a permeabilidade das células Caco-2 em placas transwell, reduziu a secreção de citocina e manteve a integridade dos complexos intercelulares de junção epitelial, nomeadamente ocludina e claudina-1. Assim, nossos resultados sugerem que RGal pode representar uma molécula promissora para o desenvolvimento de fármacos para melhorar o tratamento terapêutico da colite ulcerativa. Palavras chaves: Colite ulcerative, doença inflamatória intestinal, Acmella oleracea, RGal, Caco-2. / Abstract: Ulcerative colitis is a chronic disease characterized by diffuse inflammation that affects the colonic mucosa with bloody diarrhea as a predominant symptom. Epidemiological studies suggest that the occurrence of inflammatory bowel disease (IBD) is increasing /worldwide and the reason remains unknown. Currently, it has been pointed out that the colitis presents multifactorial character, being the result of interaction between genetic and environmental factors. Despite the relevance and the impact of the disease on health and social life of patients, ulcerative colitis is not fully understood and the available therapy has low effectiveness associated with numerous adverse effects, giving space for the urgent quest for new therapeutic alternatives. Recently, it has been observed that several polysaccharides purified from plants could improve biological responses in diseases as well as enhance immune responses. Thus, this study was designed to investigate the protective and healing effects of rhamnogalacturonan (RGal) isolated from Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen in an acute experimental model of intestinal inflammation chemically induced with dextran sulfate sodium (DSS) in mice with the possible mechanisms underlying this activity. Furthermore, we also evaluated the complementary mechanisms in heterogeneous human epithelial colorectal adenocarcinoma cells (Caco-2). The findings obtained are very promising and demonstrated that RGal treatment for 7 days clearly reduced the severity of DSS colitis in mice through the protection of colon epithelium and neurons of the myenteric plexus. Besides, RGal treatment increased mucosal protective factors followed by the maintenance of the intestinal transit and reduction of abdominal allodynia. Furthermore, in an in vitro barrier function assay, RGal promoted healing and markedly reduced the Caco-2 permeability on transwell inserts chambers, reduced cytokine secretion and maintained the integrity of intercellular junctional complexes, namely occludin and claudin-1. Thus, our promising results suggest that RGal may represent an attractive and promising molecule for drug development to improve the therapeutic management of ulcerative colitis. Keywords: Ulcerative colitis, inflammatory bowel disease, Acmella oleracea, RGal, Caco-2.

O estresse oxidativo tem um papel importante no desenvolvimento de diferentes doenças inflamatórias agudas, mas intervenções que diminuem a geração ou os efeitos das espécies reativas de oxigênio têm papel controvérsio em modelos animais e humanos. Neste trabalho avaliamos os efeitos de uma combinação de antioxidantes (N-acetilcisteína e deferoxamina) em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas: sepse induzida por ligação cecal e perfuração (CLP), insuficiência hepática aguda e lesão pulmonar aguda. No modelo de CLP os ratos tratados com antioxidantes apresentaram uma significativa redução na atividade de mieloperoxidase (como marcador de infiltração neutrofílica) e uma menor quantidade de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico em diferentes órgãos envolvidos na resposta à sepse.A produção mitocondrial de superóxido foi significativamente diminuída pelo tratamento antixodante. Além disto o tratamento melhora o equilíbrio entre superóxido dismutase e catalase e melhora a sobrevida dos animais submetidos a CLP. No modelo de insuficiência hepática aguda o tratamento com antioxidantes significativamente diminui o dano oxidativo hepático e no sistema nervoso central, atenua marcadores de insuficiência hepática e melhora a sobrevida dos animais. No modelo de lesão pulmonar aguda o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina diminui o conteúdo de proteínas do lavado bronco-alveolar, assim como o influxo de células inflamatórias, marcadores de dano oxidativo e citocinas inflamatórias.Em conclusão, nossos dados demonstram pela primeira vez que o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina é superior ao uso isolado destes antioxidantes em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas. Este efeitos é parcialmentesecundário a uma diminuição do estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e resposta inflamatória no rato. / Oxidative stress plays an important role in the development of acute inflammatory diseases, but interventions that reduce the generation or the effects of reactive oxygen species exert controversial effects in animal models and in humans. Here we have evaluated the effects of a combination of antioxidants (N-acetylcysteine plus deferoxamine) in a murine model of polymicrobial sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP), in a murine model of acute hepatic failure and in a murine model of acute lung injury. In the CLP model of sepsis rats treated with antioxidants had significantly lower myeloperoxidase activity (as an index of neutrophil infiltration) and thiobarbituric acid reactive species formation in several organs involved in septic response. Mitochondrial superoxide production was significantly reduced by antioxidant treatment. Furthermore, antioxidants significantly improved the balance between catalase and superoxide dismutase activities, and improved survival to 66%. In the acute hepatic failure model, N-acetylcysteine plus deferoxamine treatment significantly attenuated hepatic and central nervous system oxidative damage, attenuated markers of hepatic failure and improves survival to 80%. In the acute lung injury model, N-acetylcysteine plus deferoxamine decreased bronchoalveolar lavage fluid protein, inflammatory cells, oxidative damage variables, and proinflammatory cytokines. In conclusion, our data provide the first experimental demonstration that N-acetylcysteine plus deferoxamine is superior to each antioxidant used alone in different animal models of acute inflammatory diseases. This effect is partially secondary to a decrease in oxidative stress, mitochondrial dysfunction and inflammatory response in the rat.

Orientador: Rogério Saad Hossne / Resumo: Introdução: As Doenças inflamatórias intestinais (DII), que tem como principais entidades a Retocolite Ulcerativa (RCU) e a Doença de Crohn (DC), tem altas taxas de incidência e prevalência em países desenvolvidos, especialmente da Europa e América do Norte, porém com aumento progressivo de sua frequência em todas os continentes. Este estudo visa estimar as taxas de incidência e prevalência das DII no Estado de São Paulo, Brasil, entre os anos de 2012 e 2015, e correlacionar os resultados com dados nacionais sobre estas doenças. Material e Método: Este é um estudo observacional analítico, do tipo descritivo e transversal. Foram incluídos dados epidemiológicos de 22.638 pacientes que iniciaram seu tratamento para Doença Inflamatória Intestinal através do programa de fornecimento gratuito de medicamentos do Estado de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2015. As variáveis analisadas foram a data do início do tratamento, o diagnóstico clínico (DC ou RCU), a idade, gênero, cor/raça/etnia dos pacientes, assim como sua região de residência no Estado de São Paulo. As análises estatísticas incluíram média e desvio padrão para variáveis quantitativas. O nível de significância adotado foi de 1% Resultados: A taxa de incidência de DII no Estado de São Paulo foi, em média, de 13,31 casos novos / 100.000 habitantes / ano, enquanto a prevalência de DII no Estado de São Paulo foi de 52,5 casos / 100.000 habitantes. Os portadores de DC somavam 10.451 (46,16%), e os de RCU somavam 12.187 (53,83... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory bowel disease (IBD), which has as its main entities Ulcerative Colitis (UC) and Crohn's Disease (CD), have high rates of incidence and 11 prevalence in developed countries, especially in Europe and North America, but with increasing frequency in all continents. This study aims to verify the incidence and prevalence rates of IBD in São Paulo State, Brazil, between the years 2012 and 2015, and correlate with the national data on these diseases. Casuistic and Methods: This is an observational, descriptive and cross-sectional study. We included data from 22.638 patients who started their treatment for Inflammatory Bowel Disease through the Program of free medication supply of São Paulo State, between the years of 2012 and 2015. The variables analyzed were the date of beginning of treatment with drugs provided by the clinical diagnosis (CD or UC), the age, gender, color/race/ethnicity of the patients, as well as their region of residence in São Paulo State. Statistical analyses included mean and standard deviations for quantitative variables. The level of significance adopted was 1% Results: The incidence rate of IBD in the State of São Paulo was 13.31 new cases / 100.000 inhabitants per year, while the overall prevalence of IBD in the state of São Paulo was 52,5 cases/100.000 inhabitants. The patients with CD were 10,451 (46.16%), and those with UC were 12,187 (53.83%), from 1 to 97 years of age, with a mean of 45.5 years (SD = 16.7), of wich 9,124 (40.30%) were male... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

É bem estabelecido que respostas imunes possam ser influenciadas pelo sistema nervoso. O neuropeptídeo, peptídeo liberador de gastrina (GRP) tem sido detectado na produção e liberação de citocinas, em modelo animal e em humanos com doenças inflamatórias e sabe-se que o antagonista do receptor de GRP, RC-3095 modula a resposta de citocinas pro-inflamatórias em macrófagos ativados por lipopolissacarídeo (LPS) molhando a sobrevivência em modelo animal de sepse induzida por ligação e perfuração cecal (CLP). Neste contexto, neste estudo avaliamos o efeito modulatório de GRP em modelos animais de doenças inflamatórias agudas: injúria pulmonar associada à pleurisia induzida por carragenina e sepse induzida por CLP e adicionalmente, em pacientes sépticos através da correlação dos seus níveis com o desfecho clínico. Para esta proposta, no Capítulo 1 avaliamos em pleurisia induzida por carragenina os seguintes parâmetros: migração celular, atividade da lactato desidrogenase, conteúdo de proteínas totais, concentração de nitrito/nitrato e níveis de TNF-α e IL- β no exsudato pleural e atividade da mieloperoxidade e marcadores de dano oxidativo em lipídios e proteínas no tecido pulmonar. Assim, o RC-3095 exibiu significante ação anti-inflamatória através da inibição do influxo de leucócitos e bloqueio da mieloperoxidade, conteúdo de nitrito/nitrato e níveis de citocinas. Além disso, os resultados mostraram que RC-3095 exerce ação contra o dano oxidativo em lipídios e proteínas, bem como o aumento na viabilidade celular. Isto sugere que RC- 3095 tem propriedades anti-inflamatórias que podem estar relacionadas com a redução do dano oxidativo. No Capítulo 2, entretanto, nós seguimos no modelo animal de sepse onde buscamos o entendimento do papel protetor que exerce o RC-3095. Vários estudos sugerem o envolvimento de TLR-4 como um importante elemento de defesa do hospedeiro durante a infecção, e importantes eviências indicam que esses receptores também possuem um papel na patofisiologia da sepse, onde camundongos deficientes de TLR-4 não apresentam falência na migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal durante a sepse polimicrobiana induzida por CLP letal, e como conseqüência, foram mais resistentes para sepse que controles. Nossos resultados indicam que este efeito protetor pode ser atribuído para uma atenuação de sinalização de TLR-4 em cultura de células RAW 264.7 estimuladas por LPS e tecido pulmonar em ratos CLP, levando a uma diminuição de citocinas proinflamatórias as quais a via de ativação de GRPR mostra seletividade como verificado no Capítulo 3, possibilitando a explicação dos baixos níveis de citocinas pro-inflamatórias em pacientes sépticos tratados com RC-3095. Esta atenuação favorece a infiltração de neutrófilos, resultando na diminuição de bacteremia preservando o controle da infecção no local melhorando o desfecho da sepse. Nossos resultados ainda mostram que níveis plasmáticos de GRP podem predizer o desfecho na sepse, mas não em pacientes SIRS sugerindo que GRP exerce funções diferenciais nas duas condições e sugere que o antagonismo de GRPR modula a inflamação incontrolada por agir em respostas mediadas por TLR-4 e funcionalidade imunoregulatória. Em conclusão, os presentes resultados indicam que o antagonista de GRPR exerce um papel na inflamação aguda e pode ser utilizado como uma nova terapia alternativa para sepse bacteriana Gram-negativa. / It is well established that immune responses may be influenced by the nervous system. The neuropeptide gastrin-releasing peptide (GRP) has been detected on the production and release of cytokines, both in animal models and humans with inflammatory diseases and reported that the GRP receptor antagonist RC-3095 modulates the response of proinflammatory cytokines in activated macrophages by lipopolysaccharide and improved the survival in an animal model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). Within this context, in this work we evaluate the GRP modulatory effect in animal models of acute inflammatory illnesses: lung injury associated with carrageenan-induced pleurisy, and in CLP-induced sepsis and additionally in septic patients through the correlations of its levels with the clinical outcome. For this purpose, in Chapter 1 we evaluated in carrageenan-induced pleurisy the following parameters: cell migration, lactate dehydrogenase activity, total protein content, nitrite/nitrate concentration, TNF-α and interleukin-1β (IL-1β) levels in pleural exudates; myeloperoxidase activity and lipid and protein oxidative damage markers in lung tissue. Thus, RC-3095 exhibited pronounced anti-inflammatory actions by inhibition of leukocyte influx and blockade of myeloperoxidase, nitrite/nitrate content and cytokine levels. Moreover, the results showed that RC-3095 elicits action against oxidative damage in lipids and proteins, as well as increases cell viability. These suggest that RC-3095 has anti-inflammatory properties that can be related with the reduction of oxidative damage. In Chapter 2, however, we follow the animal model of sepsis where we search the agreement of the protective role that RC-3095 exerts. Increasing evidences suggest the evolvement of TLR-4 as an important element of host defense during an infection, a growing body of evidence indicates that these receptors also may play a role in the pathophysiology of sepsis where TLR-4 defective mice did not present failure of neutrophil migration to the peritoneal cavity during polymicrobial sepsis induced by lethal CLP, and as consequence, they were more resistant to sepsis than controls Our results further indicate that this protective effect can be attributed to an attenuation of TLR-4 signaling in RAW 264.7 cell culture stimulated by LPS and lung tissue in CLP rats, leading to a decrease of release of proinflammatory cytokines which the pathway of activation of GRPR shows selectivity as verified in Chapter 3, and can additionally explain the lower levels of the proinflammatory cytokine in RC-3095-treated septic patients. This attenuation favors neutrophil infiltration, resulting in decreased bacteremia preserving the control of infection in situ improving sepsis outcome. Our finding still show that plasma GRP levels could predict outcome in sepsis but not SIRS patients suggesting that GRP plays different roles in the two conditions and suggest that GRPR antagonism modulates uncontrolled inflammation by targeting TLR-4-mediated responses and immunoregulatory functionality. Taken together, the present results indicate that a GRPR antagonist plays a role in acute inflammation and could be developed as a new alternative therapy for Gram-negative bacterial sepsis.