Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Banca: Leonardo Noboru Seito / Banca: Silvio Luis De Oliveira / Resumo: Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen ("ginseng brasileiro") é uma planta medicinal que apresenta um amplo espectro de usos como tônico, antiestresse e afrodisíaco. Esta espécie pertence ao complexo grupo de plantas medicinais conhecidas como "ginseng" e compõe um grupo específico de plantas denominadas adaptógenas, definidas como produtos capazes de aumentar a resistência não específica do organismo frente a diferentes estímulos estressores; considerando-se tal definição, é previsível que os compostos fitoquímicos presentes na P. glomerata sejam úteis no controle e prevenção de doenças na qual o estresse é fator etiológico, como é o caso da Doença Inflamatória Intestinal (DII). Dessa forma, o presente trabalho possui como objetivo avaliar a atividade anti-inflamatória intestinal da fração butanólica de P. glomerata (rica em saponinas), sobre o modelo de doença inflamatória intestinal induzida por ácido 2, 4, 6-trinitrobenzenosulfônico (TNBS) em ratos. Para tal, foram estudados parâmetros macroscópicos (escore da lesão, extensão da lesão, relação peso/comprimento do cólon, diarreia e aderência) e bioquímicos (atividade da mieloperoxidase e da fosfatase alcalina e quantificação da glutationa total) do processo inflamatório intestinal. Análises fitoquímicas mostraram principalmente a presença de triterpenos e saponinas, incluindo a ecdisterona, e indícios de compostos fenólicos. Os tratamentos com a fração butanólica de P. glomerata não foram capazes de impedir a formação lesões induzidas pelo TNBS e nem de auxiliar na resolução de um quadro inflamatório intestinal pré-existente, que também foi causado pelo TNBS. Com base nestes dados, a hipótese inicial de que um produto adaptógeno modularia o sistema imune por meio de sua ação antiestresse foi rejeitada nas condições experimentais utilizadas / Abstract: Pfaffia glomerata (Spreng.) Perdersen, also called Brazilian ginseng, is a medicinal plant which has a broad use as tonic, anti-stress, and aphrodisiac. This specie belongs to the medicinal plants complex known as ginseng and it is part of a specific group of plants called adaptogens, which are defined as products that are capable of increasing non-specific body resistance against different stressors; considering the definition of adaptogens it is possible to assume that phytochemical compounds present in P. glomerata are also useful in controlling and preventing diseases in which stress is an etiological factor, such as Inflammatory Bowel Disease (IBD). Thereby, this present work aims to study the intestinal anti-inflammatory activity from the butanolic extract of P. glomerata (enriched in saponins) in the TNBS-induced inflammatory bowel disease in rats. To this, macroscopic (score, lesion extension, weight/length ratio, diarrhea and adherence) and biochemical (myeloperoxidase and alkaline phosphatase activities and total glutathione content) parameters of the inflammatory bowel disease were studied. Phytochemical analysis showed the presence of triterpens and saponins, including ecdysterone, and signs of phenolic compounds. Treatments with butanolic extract from P. glomerata were not able to prevent TNBS-induced lesions nor were able to ameliorate in the resolution of the pre-existing intestinal inflammatory process also caused by TNBS. According to these data, the initial hypothesis that an adaptogen product would modulate the immune system by its anti-stress action was rejected in the experimental conditions utilized / Mestre

Orientador: Chung Man Chin / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Gustavo Henrique Goulart Trossini / Resumo: A inflamação é caracterizada como uma resposta do organismo frente à uma agressão, a qual pode resultar em dor, edema e em alguns casos levar à disfunção do órgão ou tecido. Durante o processo inflamatório ocorre a liberação de citocinas, pequenas proteínas transcritas e traduzidas pelo metabolismo intrínseco celular, que realizam uma série de comunicações intra e intercelulares. Uma importante citocina é o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), que atua na manutenção do quadro inflamatório em situações de inflamação crônica, sendo super expressa em diversas doenças inflamatórias. A terapia anti fator de necrose tumoral α (anti-TNF-α) tornou-se uma abordagem interessante no tratamento de doenças inflamatórias crônicas, principalmente daqueles pacientes que não respondem ao tratamento convencional. Entre os fármacos utilizados no tratamento das doenças inflamatórias crônicas, encontram-se os glicocorticoides (GCs), anti-inflamatórios de natureza esteroide. Estes atuam no processo reacional de defesa do organismo minimizando o dano causado pelo agente infeccioso. Porém o uso prolongado de GCs está associado a diversos efeitos adversos, como osteoporose, síndrome metabólica, doenças cardiovasculares, catarata, entre outros, limitando o uso desses fármacos em terapias prolongadas. Dessa forma, nesse trabalho, buscou-se através da estratégia de hibridação molecular, a síntese de novos derivados anti-inflamatórios esteroides, com propriedades de modulação da citocina TNF-α, a fim de se alcançar um sinergismo de ação útil no tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Nesse contexto, foram sintetizados e caracterizados seis compostos, série Lapdesf GL-FT, derivados dos glicocorticoides prednisolona (compostos I-III) e budesonida (compostos IV-VI), ligados ao grupamento ftalimida, responsável pela inibição da síntese de TNF-α. Os compostos ... / Abstract: Inflammation is characterized as a organism response against an aggression, which can result in pain, edema and in some cases lead to organ or tissue dysfunction. During the inflammatory process are released of cytokines, small proteins transcribed and translated by intrinsic cellular metabolism, performing a variety of communication intra and intercellular. An important cytokine is tumor necrosis factor alpha (TNF-α), which acts in maintaining the inflammatory in situations of chronic inflammation, being over expressed in many inflammatory diseases. Therapy anti-tumor necrosis factor α (anti-TNF-α) has become an interesting approach in the treatment of chronic inflammatory diseases, especially those patients who do not respond to conventional treatment. Among the drugs used in the treatment of chronic inflammatory diseases are glucocorticoids (GCs), anti-inflammatory steroids. These act in the reactive process of organism defense minimizing the damage caused by the infectious agent. However, prolonged use of GCs is associated with various side effects such as osteoporosis, metabolic syndrome, cardiovascular disease, cataracts, among others, limiting the use of these drugs in prolonged therapies. Thus, in this work, we realized the viability of design and synthesis by molecular hybridization strategy of novel anti-inflammatory steroids with modulating properties of cytokine TNF-α in order to achieve a synergism of action useful in the treatment of diseases chronic inflammatory diseases. In this context, were synthesized and characterized six compounds Lapdesf series GL-FT derived from glucocorticoids prednisolone (compounds I-III) and budesonide (compounds IV-VI), connected to the phthalimide group responsible for inhibition of TNF-α. The obtained compounds were evaluated for anti-inflammatory activity in a model of paw edema and distal ulcerative colitis. Derivatives I and IV showed higher ... / Mestre

É bem estabelecido que respostas imunes possam ser influenciadas pelo sistema nervoso. O neuropeptídeo, peptídeo liberador de gastrina (GRP) tem sido detectado na produção e liberação de citocinas, em modelo animal e em humanos com doenças inflamatórias e sabe-se que o antagonista do receptor de GRP, RC-3095 modula a resposta de citocinas pro-inflamatórias em macrófagos ativados por lipopolissacarídeo (LPS) molhando a sobrevivência em modelo animal de sepse induzida por ligação e perfuração cecal (CLP). Neste contexto, neste estudo avaliamos o efeito modulatório de GRP em modelos animais de doenças inflamatórias agudas: injúria pulmonar associada à pleurisia induzida por carragenina e sepse induzida por CLP e adicionalmente, em pacientes sépticos através da correlação dos seus níveis com o desfecho clínico. Para esta proposta, no Capítulo 1 avaliamos em pleurisia induzida por carragenina os seguintes parâmetros: migração celular, atividade da lactato desidrogenase, conteúdo de proteínas totais, concentração de nitrito/nitrato e níveis de TNF-α e IL- β no exsudato pleural e atividade da mieloperoxidade e marcadores de dano oxidativo em lipídios e proteínas no tecido pulmonar. Assim, o RC-3095 exibiu significante ação anti-inflamatória através da inibição do influxo de leucócitos e bloqueio da mieloperoxidade, conteúdo de nitrito/nitrato e níveis de citocinas. Além disso, os resultados mostraram que RC-3095 exerce ação contra o dano oxidativo em lipídios e proteínas, bem como o aumento na viabilidade celular. Isto sugere que RC- 3095 tem propriedades anti-inflamatórias que podem estar relacionadas com a redução do dano oxidativo. No Capítulo 2, entretanto, nós seguimos no modelo animal de sepse onde buscamos o entendimento do papel protetor que exerce o RC-3095. Vários estudos sugerem o envolvimento de TLR-4 como um importante elemento de defesa do hospedeiro durante a infecção, e importantes eviências indicam que esses receptores também possuem um papel na patofisiologia da sepse, onde camundongos deficientes de TLR-4 não apresentam falência na migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal durante a sepse polimicrobiana induzida por CLP letal, e como conseqüência, foram mais resistentes para sepse que controles. Nossos resultados indicam que este efeito protetor pode ser atribuído para uma atenuação de sinalização de TLR-4 em cultura de células RAW 264.7 estimuladas por LPS e tecido pulmonar em ratos CLP, levando a uma diminuição de citocinas proinflamatórias as quais a via de ativação de GRPR mostra seletividade como verificado no Capítulo 3, possibilitando a explicação dos baixos níveis de citocinas pro-inflamatórias em pacientes sépticos tratados com RC-3095. Esta atenuação favorece a infiltração de neutrófilos, resultando na diminuição de bacteremia preservando o controle da infecção no local melhorando o desfecho da sepse. Nossos resultados ainda mostram que níveis plasmáticos de GRP podem predizer o desfecho na sepse, mas não em pacientes SIRS sugerindo que GRP exerce funções diferenciais nas duas condições e sugere que o antagonismo de GRPR modula a inflamação incontrolada por agir em respostas mediadas por TLR-4 e funcionalidade imunoregulatória. Em conclusão, os presentes resultados indicam que o antagonista de GRPR exerce um papel na inflamação aguda e pode ser utilizado como uma nova terapia alternativa para sepse bacteriana Gram-negativa. / It is well established that immune responses may be influenced by the nervous system. The neuropeptide gastrin-releasing peptide (GRP) has been detected on the production and release of cytokines, both in animal models and humans with inflammatory diseases and reported that the GRP receptor antagonist RC-3095 modulates the response of proinflammatory cytokines in activated macrophages by lipopolysaccharide and improved the survival in an animal model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). Within this context, in this work we evaluate the GRP modulatory effect in animal models of acute inflammatory illnesses: lung injury associated with carrageenan-induced pleurisy, and in CLP-induced sepsis and additionally in septic patients through the correlations of its levels with the clinical outcome. For this purpose, in Chapter 1 we evaluated in carrageenan-induced pleurisy the following parameters: cell migration, lactate dehydrogenase activity, total protein content, nitrite/nitrate concentration, TNF-α and interleukin-1β (IL-1β) levels in pleural exudates; myeloperoxidase activity and lipid and protein oxidative damage markers in lung tissue. Thus, RC-3095 exhibited pronounced anti-inflammatory actions by inhibition of leukocyte influx and blockade of myeloperoxidase, nitrite/nitrate content and cytokine levels. Moreover, the results showed that RC-3095 elicits action against oxidative damage in lipids and proteins, as well as increases cell viability. These suggest that RC-3095 has anti-inflammatory properties that can be related with the reduction of oxidative damage. In Chapter 2, however, we follow the animal model of sepsis where we search the agreement of the protective role that RC-3095 exerts. Increasing evidences suggest the evolvement of TLR-4 as an important element of host defense during an infection, a growing body of evidence indicates that these receptors also may play a role in the pathophysiology of sepsis where TLR-4 defective mice did not present failure of neutrophil migration to the peritoneal cavity during polymicrobial sepsis induced by lethal CLP, and as consequence, they were more resistant to sepsis than controls Our results further indicate that this protective effect can be attributed to an attenuation of TLR-4 signaling in RAW 264.7 cell culture stimulated by LPS and lung tissue in CLP rats, leading to a decrease of release of proinflammatory cytokines which the pathway of activation of GRPR shows selectivity as verified in Chapter 3, and can additionally explain the lower levels of the proinflammatory cytokine in RC-3095-treated septic patients. This attenuation favors neutrophil infiltration, resulting in decreased bacteremia preserving the control of infection in situ improving sepsis outcome. Our finding still show that plasma GRP levels could predict outcome in sepsis but not SIRS patients suggesting that GRP plays different roles in the two conditions and suggest that GRPR antagonism modulates uncontrolled inflammation by targeting TLR-4-mediated responses and immunoregulatory functionality. Taken together, the present results indicate that a GRPR antagonist plays a role in acute inflammation and could be developed as a new alternative therapy for Gram-negative bacterial sepsis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T23:21:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 294995.pdf: 2420659 bytes, checksum: 3b302fbabfc4f95b4277b38d030ff999 (MD5) / O emprego de nano- e micropartículas como carreadores de fármacos anti-inflamatórios tem sido considerada uma estratégia promissora para o tratamento de doenças inflamatórias intestinais, como a colite ulcerativa e a doença de Crohn. A naringenina, um flavonóide amplamente encontrado nos frutos e vegetais, exibe inúmeras propriedades farmacológicas, tais como antiinflamatória, antitumoral e antioxidante. Entretanto, a naringenina apresenta baixa solubilidade aquosa, além de ser extensivamente metabolizada pelas bactérias colônicas, limitando assim, o seu uso terapêutico. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi desenvolver nano- e micropartículas de lecitina e quitosana revestidas com polímero gastrorresistente visando a liberação colônica da naringenina, após administração oral. As nano- e micropartículas de lecitina/quitosana foram preparadas por meio da técnica de interação iônica. Inicialmente, vários fatores de formulação foram testados, como a massa molar da quitosana, o tipo de lecitina e a proporção de lecitina e quitosana nas formulações. Para a quantificação da naringenina, uma metodologia de cromatografia líquida de alta eficiência foi desenvolvida e validada. A eficiência de encapsulação da naringenina nas partículas de lecitina/quitosana foi superior a 94,5 % para todas as amostras e o teor variou entre 262,41 a 386,31 µg/mL. Igualmente, o tamanho, a distribuição granulométrica e o potencial zeta das partículas foram afetados pela composição das formulações. Estudos de captura celular em cultura de macrófagos murinos J774 foram realizados após a encapsulação do fluorocromo vermelho de Nilo nas partículas. Nesses estudos, a visualização da fluorescência vermelha e a alteração do tamanho e morfologia dos macrófagos indicaram que as partículas são fagocitadas, sendo essa característica vantajosa para o aumento do tempo de residência dos carreadores no sítio da inflamação. Após esses ensaios, o revestimento das partículas de lecitina/quitosana com polímero entérico foi realizado mediante ressuspensão das partículas, previamente liofilizadas, em uma solução de Eudragit® S100. Para as preparações entéricas, o teor de naringenina variou de 1,36 a 1,97 mg /100 mg. O revestimento foi evidenciado pela alteração da carga superficial positiva, das partículas de lecitina e quitosana, para negativa, caracterizando a presença do polímero entérico aniônico na superfície das mesmas. Além disso, um acréscimo no tamanho de partícula foi observado, sugerindo o revestimento de aglomerados de partículas. Os estudos de calorimetria exploratória diferencial e espectroscopia de absorção no infravermelho com transformada de Fourier evidenciaram a interação entre os componentes das formulações. O ensaio de liberação in vitro realizado em fluido gástrico simulado confirmou a obtenção de partículas gastrorresistentes, visto que somente 8,27 a 11,98 % da naringenina foram liberados após 2 horas. Por outro lado, entre 85 e 90,33 % e 97,63 e 101,83 % de naringenina foram liberados em fluido entérico simulado e fluido biorrelevante colônico, respectivamente, após 4 horas. A análise estatística da eficiência de dissolução indicou que a taxa de liberação de naringenina foi diferente nos três meios estudados, entretanto, não foi afetada pela proporção de lecitina e quitosana nas formulações.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-20T16:04:48Z No. of bitstreams: 1 Tese_Leonardo N Santos_2015.pdf: 2984020 bytes, checksum: 9d50efbbf3adc016e9e13dce54e5a3d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:34:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Leonardo N Santos_2015.pdf: 2984020 bytes, checksum: 9d50efbbf3adc016e9e13dce54e5a3d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Leonardo N Santos_2015.pdf: 2984020 bytes, checksum: 9d50efbbf3adc016e9e13dce54e5a3d2 (MD5) / FAPESB / Helmintos modulam a resposta imune do hospedeiro e, consequentemente, protegem contra doenças inflamatórias. Diferentes classes de proteínas recombinantes derivadas destes parasitos, produzidas em sistemas de expressão procarióticos e eucarióticos, têm sido capazes de inibir respostas inflamatórias em modelos experimentais de doenças imunomediadas. A identificação do conteúdo proteico de frações do extrato somático de Trichuris trichiura com efeitos imunomodulatórios foi alcançada através de análises em sistema de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em uma abordagem proteômica que indicou proteínas candidatas a serem responsáveis por esta atividade biológica. Os resultados desta abordagem foram confirmados e expandidos pela análise transcriptômica do estágio adulto de T. trichiura usando tecnologia de sequenciamento de nova geração e uma estratégia de montagem de novo, onde vinte transcritos que codificam para as proteínas previamente detectadas foram identificados, sendo que cinco desses estão entre as sequências codificadoras de proteínas mais expressas no verme adulto. Estas análises contribuirão para a anotação funcional da sequência genômica de T. trichiurarecém disponibilizada e viabilizarão a produção de proteínas recombinantes codificadas por estes transcritos que poderãolevar ao desenvolvimento de novos medicamentos para a terapia de doenças alérgicas e autoimunes. / Helminths modulate the host immune response and, consequently, protect it against inflammatory diseases. Different classes of recombinant proteins derived from these parasites, produced in prokaryotic and eukaryotic expression systems, were able to inhibit inflammatory responses in experimental models of immune mediated diseases. The identification of the protein content of Trichuris trichiura somatic extract fractions with immunomodulatory effects was achieved by liquid chromatography coupled to mass spectrometry in a proteomics approach that indicated candidate proteins to be responsible for this biological activity. The results of this approach were confirmed and expanded by transcriptomic analysis of T. trichiura adult worm using next-generation sequencing technology and a de novo assembly strategy, where twenty transcripts that code for previously detected proteins were identified, and five of whom were among the most expressed protein-encoding sequences in the adult worm. These analyses will contribute to the functional annotation of the recently released draft genomic sequence of this nematode and will enable the production of recombinant proteins, encoded by these transcripts, that may lead to the development of new drugs for the treatment of allergy, autoimmune and other inflammatory diseases.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-07-16T21:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 316512.pdf: 4091568 bytes, checksum: e830780984f331f72bf0735a379714c8 (MD5) / Os óleos de peixe, bem como alguns vegetais apresentam quantidades significantes de ácidos graxos poliinsaturados ômega-3, sendo que os principais encontrados em derivados marinhos são: o ácido graxo eicosapentaenóico (EPA) e o ácido graxo docosahexaenóico (DHA). Estudos prévios têm demonstrado que uma dieta rica em óleo de peixe pode exercer efeitos benéficos sobre inúmeras doenças com características inflamatórias, dentre as quais se destacam as doenças inflamatórias intestinais (IBD). Um novo mediador lipídico derivado do DHA, denominado maresina 1 (MaR1) têm apresentado potente atividade analgésica, antiinflamatória e pró-resolutiva em distintos modelos experimentais de inflamação, sendo assim, foi hipotetizado que o processo de resolução desencadeado pela MaR1 também poderia prevenir ou atenuar a inflamação intestinal em camundongos. Dessa forma, o presente estudo buscou avaliar o papel da MaR1, no modelo de colite aguda induzida pelo sulfato sódico de dextrana (DSS) (com um ou dois ciclos de DSS), e no modelo de colite aguda induzido pelo ácido trinitrobenzenosulfônico (TNBS) em camundongos. Os resultados observados demonstraram que o tratamento sistêmico com a MaR1 reduziu o escore clínico experimental e o dano tecidual colônico nos modelos de colite induzida pelo DSS (tanto no primeiro quanto no segundo ciclo), bem como na colite aguda induzida pelo TNBS. O efeito benéfico da MaR1 parece estar associado com sua habilidade em reduzir a liberaçaõ das citocinas: interleucina (IL)-1?, factor de necrose tumoral (TNF)-?, IL-6 e interferon (IFN)-? no modelo agudo com um único ciclo com DSS, e IL-1? e IL-6, mas não TNF-? e IFN-? no modelo agudo com dois ciclos com DSS, além da inibição da expressão da molécula de adesão ICAM-1, e de proteínas relacionadas ao inflamassoma, como o NALP3 e a pró-caspase-1, e pela ação sobre a ativação do fator nuclear ?B (NF-?B). Adicionalmente, através de experimentos in vitro, evidenciou-se que a MaR1 reduziu a liberação de IL-1?, TNF-?, IL-6 e IFN-? provenientes de macrófagos, e parece induzir a polarização de macrófagos para o fenótipo antiinflamatório M2. Em conclusão, o conjunto dos resultados contribui para estender os conhecimentos acerca dos mecanismos de ação antiinflamatório e pró-resolutivos da MaR1 e sugere uma nova abordagem terapêutica para o tratamento das IBD.

É bem estabelecido que respostas imunes possam ser influenciadas pelo sistema nervoso. O neuropeptídeo, peptídeo liberador de gastrina (GRP) tem sido detectado na produção e liberação de citocinas, em modelo animal e em humanos com doenças inflamatórias e sabe-se que o antagonista do receptor de GRP, RC-3095 modula a resposta de citocinas pro-inflamatórias em macrófagos ativados por lipopolissacarídeo (LPS) molhando a sobrevivência em modelo animal de sepse induzida por ligação e perfuração cecal (CLP). Neste contexto, neste estudo avaliamos o efeito modulatório de GRP em modelos animais de doenças inflamatórias agudas: injúria pulmonar associada à pleurisia induzida por carragenina e sepse induzida por CLP e adicionalmente, em pacientes sépticos através da correlação dos seus níveis com o desfecho clínico. Para esta proposta, no Capítulo 1 avaliamos em pleurisia induzida por carragenina os seguintes parâmetros: migração celular, atividade da lactato desidrogenase, conteúdo de proteínas totais, concentração de nitrito/nitrato e níveis de TNF-α e IL- β no exsudato pleural e atividade da mieloperoxidade e marcadores de dano oxidativo em lipídios e proteínas no tecido pulmonar. Assim, o RC-3095 exibiu significante ação anti-inflamatória através da inibição do influxo de leucócitos e bloqueio da mieloperoxidade, conteúdo de nitrito/nitrato e níveis de citocinas. Além disso, os resultados mostraram que RC-3095 exerce ação contra o dano oxidativo em lipídios e proteínas, bem como o aumento na viabilidade celular. Isto sugere que RC- 3095 tem propriedades anti-inflamatórias que podem estar relacionadas com a redução do dano oxidativo. No Capítulo 2, entretanto, nós seguimos no modelo animal de sepse onde buscamos o entendimento do papel protetor que exerce o RC-3095. Vários estudos sugerem o envolvimento de TLR-4 como um importante elemento de defesa do hospedeiro durante a infecção, e importantes eviências indicam que esses receptores também possuem um papel na patofisiologia da sepse, onde camundongos deficientes de TLR-4 não apresentam falência na migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal durante a sepse polimicrobiana induzida por CLP letal, e como conseqüência, foram mais resistentes para sepse que controles. Nossos resultados indicam que este efeito protetor pode ser atribuído para uma atenuação de sinalização de TLR-4 em cultura de células RAW 264.7 estimuladas por LPS e tecido pulmonar em ratos CLP, levando a uma diminuição de citocinas proinflamatórias as quais a via de ativação de GRPR mostra seletividade como verificado no Capítulo 3, possibilitando a explicação dos baixos níveis de citocinas pro-inflamatórias em pacientes sépticos tratados com RC-3095. Esta atenuação favorece a infiltração de neutrófilos, resultando na diminuição de bacteremia preservando o controle da infecção no local melhorando o desfecho da sepse. Nossos resultados ainda mostram que níveis plasmáticos de GRP podem predizer o desfecho na sepse, mas não em pacientes SIRS sugerindo que GRP exerce funções diferenciais nas duas condições e sugere que o antagonismo de GRPR modula a inflamação incontrolada por agir em respostas mediadas por TLR-4 e funcionalidade imunoregulatória. Em conclusão, os presentes resultados indicam que o antagonista de GRPR exerce um papel na inflamação aguda e pode ser utilizado como uma nova terapia alternativa para sepse bacteriana Gram-negativa. / It is well established that immune responses may be influenced by the nervous system. The neuropeptide gastrin-releasing peptide (GRP) has been detected on the production and release of cytokines, both in animal models and humans with inflammatory diseases and reported that the GRP receptor antagonist RC-3095 modulates the response of proinflammatory cytokines in activated macrophages by lipopolysaccharide and improved the survival in an animal model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). Within this context, in this work we evaluate the GRP modulatory effect in animal models of acute inflammatory illnesses: lung injury associated with carrageenan-induced pleurisy, and in CLP-induced sepsis and additionally in septic patients through the correlations of its levels with the clinical outcome. For this purpose, in Chapter 1 we evaluated in carrageenan-induced pleurisy the following parameters: cell migration, lactate dehydrogenase activity, total protein content, nitrite/nitrate concentration, TNF-α and interleukin-1β (IL-1β) levels in pleural exudates; myeloperoxidase activity and lipid and protein oxidative damage markers in lung tissue. Thus, RC-3095 exhibited pronounced anti-inflammatory actions by inhibition of leukocyte influx and blockade of myeloperoxidase, nitrite/nitrate content and cytokine levels. Moreover, the results showed that RC-3095 elicits action against oxidative damage in lipids and proteins, as well as increases cell viability. These suggest that RC-3095 has anti-inflammatory properties that can be related with the reduction of oxidative damage. In Chapter 2, however, we follow the animal model of sepsis where we search the agreement of the protective role that RC-3095 exerts. Increasing evidences suggest the evolvement of TLR-4 as an important element of host defense during an infection, a growing body of evidence indicates that these receptors also may play a role in the pathophysiology of sepsis where TLR-4 defective mice did not present failure of neutrophil migration to the peritoneal cavity during polymicrobial sepsis induced by lethal CLP, and as consequence, they were more resistant to sepsis than controls Our results further indicate that this protective effect can be attributed to an attenuation of TLR-4 signaling in RAW 264.7 cell culture stimulated by LPS and lung tissue in CLP rats, leading to a decrease of release of proinflammatory cytokines which the pathway of activation of GRPR shows selectivity as verified in Chapter 3, and can additionally explain the lower levels of the proinflammatory cytokine in RC-3095-treated septic patients. This attenuation favors neutrophil infiltration, resulting in decreased bacteremia preserving the control of infection in situ improving sepsis outcome. Our finding still show that plasma GRP levels could predict outcome in sepsis but not SIRS patients suggesting that GRP plays different roles in the two conditions and suggest that GRPR antagonism modulates uncontrolled inflammation by targeting TLR-4-mediated responses and immunoregulatory functionality. Taken together, the present results indicate that a GRPR antagonist plays a role in acute inflammation and could be developed as a new alternative therapy for Gram-negative bacterial sepsis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:53:16Z : No. of bitstreams: 1 almeidajunior_ld_me_botib_parcial.pdf: 353637 bytes, checksum: e154d67d475601f9d66edd862735410a (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-04T11:39:27Z: almeidajunior_ld_me_botib_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-04T11:40:12Z : No. of bitstreams: 1 000725128.pdf: 1021495 bytes, checksum: 10e5b8e91e721bace643318731693faa (MD5) / A Doença Inflamatória Intestinal (DII) é uma doença com etiologia desconhecida e sem terapêutica curativa disponível, englobando, fundamentalmente, duas doenças distintas: a Doença de Crohn (DC) e a Retocolite Ulcerativa (RCU), ambas caracterizadas por uma inflamação crônica do intestino, com períodos de exacerbação seguidos de intervalos prolongados com remissão dos sintomas, cujo tratamento com os fármacos disponíveis apresentam sérios efeitos colaterais. Portanto, o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento que combinem eficácia e segurança é uma importante meta na terapia da DII, sendo que as plantas medicinais são indispensáveis fontes de novos compostos de valor terapêutico. Physalis angulata L. é uma planta nativa brasileira que cresce especialmente nas regiões norte e nordeste do Brasil e em outros países tropicais da África, América e Ásia, sendo amplamente utilizada pela população para o tratamento de uma série de doenças, especialmente aquelas que possuem características inflamatórias. Estudos in vitro em culturas de células realizados por nosso grupo de pesquisa, somados aos dados descritos na literatura mostram que a P. angulata é capaz de modular vários mediadores inflamatórios. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade anti-inflamatória intestinal do extrato padronizado em fitoesteróis totais de P. angulata, nas fases aguda e crônica (com recidiva) do processo inflamatório intestinal induzido por acido trinitrobenzenosulfônico (TNBS) em ratos. Os resultados obtidos mostraram, pela primeira vez, que o extrato padronizado produziu uma série de efeitos que melhoraram a resposta dos animais frente à lesão intestinal promovida pelo TNBS. Estes efeitos foram mais pronunciados nos estudos de fase aguda, indicando uma propriedade preventiva importante... / Inflammatory Bowel Disease (IBD) is a disease with unknown etiology and no curative treatment available, embracing essentially two distinct diseases: Crohn's disease (CD) and ulcerative colitis (UC), both characterized by chronic inflammation of the intestine, with periods of exacerbation followed by long intervals with symptom remission, whose treatment with available drugs have serious side effects. Therefore, the development of new treatment strategies that combine effectiveness and safety is an important goal in the treatment of IBD, where medicinal plants are sources of essential novel compounds of therapeutic value. Physalis angulata L. is a native Brazilian plant that grows especially in Northern and Northeastern Brazil and other tropical countries of Africa, America and Asia and is widely used by people to treat a number of diseases, especially those with inflammatory characteristics. In vitro studies in cell cultures conducted by our research group, combined with the previously reported data, show that P. angulata is capable of modulating several inflammatory mediators. Thus, the objective of this study was to evaluate the intestinal anti-inflammatory activity of P. angulata standardized extract in total phytosterols, in the acute and chronic (with relapse) phases of the intestinal inflammatory process induced by trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) in rats. The results showed, for the first time, that the standardized extract produced a series of effects that improved the response of animals against intestinal injury promoted by TNBS. These effects were more pronounced in the acute studies, indicating an important preventive property by reducing the activity of myeloperoxidase and alkaline phosphatase, in addition with the ability of the extract to prevent depletion of glutathione induced by intestinal... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010Bitstream added on 2014-06-13T20:03:08Z : No. of bitstreams: 1 witaicenis_a_dr_botib.pdf: 2812216 bytes, checksum: 889ab136e47219cee54a1e64f718d6cf (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Not available

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-30Bitstream added on 2014-06-13T20:03:08Z : No. of bitstreams: 1 kushima_h_dr_botib.pdf: 1089562 bytes, checksum: 1afece4aabc68a6b84aa6879f8e72585 (MD5) / A doença inflamatória intestinal (DII) corresponde a um conjunto de desordens crônicas inflamatórias intestinais, de etiologia ainda desconhecida, sendo a retocolite (RCU) e a doença de Crohn (DC) as duas doenças mais representativas e de maior importância clínica. Devido a pouca eficácia das terapias convencionais, muitos pacientes recorrem a métodos alternativos, como o uso de plantas medicinais. As espécies Davilla elliptica St. Hil e Davilla nitida (Vahl) Kubitzki (família Dilleniaceae) são plantas arbustivas comumente encontradas no Cerrado brasileiro. D. elliptica, conhecida como lixeirinha, é utilizada na medicina popular para o tratamento de afecções do trato gastrointestinal, como úlceras e gastrites, e também utilizado como antiinflamatório. D. nitida (cipó de fogo) apresenta um grande potencial para o tratamento de doenças do trato gastrointestinal, pois semelhante a D. elliptica, apresenta comprovada ação gastroprotetora e ambas possuem perfis fitoquímicos semelhantes, compostos basicamente de polifenóis. Os objetivos deste trabalho foram avaliar os efeitos preventivos e/ou curativos dos extratos metanólicos de D. elliptica (EDE) e D. nitida (EDN) em modelos experimentais de colite (agudo e crônico) induzidos pelo ácido trinitrobenzenosulfônico (TNBS) em ratos e os possíveis mecanismos decorrentes dessas ações farmacológicas. A partir dos resultados anteriormente obtidos da ação gastroprotetora de ambos os extratos, foram selecionadas as doses empregadas nos modelos experimentais de colite. Foi constatado que altas doses (500 mg/kg) de EDE e EDN administradas oralmente, promovem o agravamento das injúrias no cólon (aumento de 47 e 21% das lesões, respectivamente). Porém, ao avaliar os efeitos agudos de ambos os extratos no modelo de colite com doses menores (31.2, 62.5 e 125 mg/kg), ocorreram reduções significativas das áreas... / Inflammatory bowel disease (DII) represents a group of chronic inflammatory bowel disorders of unknown etiology, and ulcerative colitis (RCU) and Crohn's disease (DC) both diseases are most representative and important among the DII clinic. Because the conventional therapies ineffectiveness, many patients resort to alternative methods, such as the use of medicinal plants. The species Davilla elliptica St. Hil and Davilla nitida (Vahl) Kubitzki (family Dilleniaceae) are shrubs commonly found in the Brazilian Cerrado. D. elliptica, known as “lixeirinha”, is used in folk medicine for the gastrointestinal disorders treatment such as gastritis and ulcers and also used as antiinflammatory. D. nitida (“cipó de fogo”) has great potential to treat gastrointestinal diseases, thus similar to D. elliptica, has proven gastroprotective action and both have similar phytochemical profiles, composed primarily of polyphenols. Our objectives were to evaluate the preventive and/or healing effects of the D. elliptica (EDE) and D. nitida (EDN) methanolic extracts in the colite experimental models (acute and chronic) induced by trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) in rats and possible mechanisms resulting from these pharmacological actions. From the previous results of gastroprotective action of both extracts, we selected the doses used in experimental models of UC. It was found that high doses (500 mg / kg) of EDN and EDE administered orally, promoted the colon injury aggravation (lesion increasing of 47 and 21%, respectively). However, in assessing the acute effects of both extracts in the UC model at lower doses (31.2, 62.5 and 125 mg/kg), there were significant reductions in areas (for both extracts) and scores of the injuries (EDN only) promoted by TNBS. The colonic lesions reduction in the animals treated with EDE and EDN did not alter the weight/length parameter of colon and feed... (Complete abstract click electronic access below)