INTRODUÇÃO: Sabe-se que as técnicas de reprodução assistida estão associadas com potenciais riscos, principalmente relacionados às gestações múltiplas, em torno de 20 a 25%, em consequência da estimulação ovariana associada à transferência de vários embriões. As gestações múltiplas apresentam maior incidência de complicações maternas e neonatais, além de aumentarem consideravelmente a proporção de partos cesarianos. Frente a esta realidade, as gestações múltiplas podem ser evitadas pela transferência eletiva de embrião único (eSET, do inglês elective Single Embryo Transfer), uma prática que vem crescendo em todo mundo. Apesar dos diversos estudos publicados, o grande desafio ainda é comprovar os benefícios da eSET aplicada corretamente, impactando na incidência das complicações sem comprometimento do sucesso do tratamento. O objetivo deste estudo foi comparar as taxas de sucesso cumulativas da transferência eletiva de até dois embriões transferidos um a um (eSET), versus a taxa de sucesso da transferência eletiva de dois embriões em um único evento (DET, do inglês Double Embryo Transfer), em casais inférteis de bom prognóstico. MÉTODOS: Estudo retrospectivo avaliou 610 casais inférteis de bom prognóstico submetidos às TRA, divididos em dois grupos: grupo SET: pacientes submetidas à transferência eletiva de um único embrião de boa qualidade e que possuíam ao menos um embrião excedente congelado (grupo SET, n=237), possibilitando uma segunda transferência eletiva de um embrião descongelado em caso de não ocorrência de gestação; e grupo DET: pacientes submetidas a transferência eletiva de dois embriões de boa qualidade e que possuíam ao menos um embrião excedente (grupo DET, n=373). RESULTADOS: As taxas de gestação clínica acumulada após a transferência de dois embriões foram semelhantes (DET: 46.6% e SET acumulado: 45,9%; p=0,898). Por outro lado, a taxa de gestação múltipla foi significantemente inferior no grupo que recebeu transferência de dois embriões um a um versus a transferência eletiva de dois embriões em um único evento (DET: 32,2% e SET acumulado: 6,1%; p < 0,001). CONCLUSÕES: A política de SET deve ser estimulada para casais de bom prognostico, já que resulta em taxas de gestação clínica acumulada semelhantes a DET, evita gestações múltiplas e consequentemente as complicações materno-fetais, levando a reduzido custo indireto do tratamento quando considera-se os gastos obstétricos e neonatais / INTRODUCTION: It is known that Assisted Reproductive Techniques are associated with potential risks, mainly related to multiple pregnancies, which are around 20 to 25% due to ovarian stimulation associated with high number of embryos transferred. Multiple pregnancies lead to higher incidence of complications for mother and newborns, as well as a significant increase in the proportion of cesarean deliveries. This way, iatrogenic multiple pregnancies can be avoided by the elective single embryo transfer (eSET), a growing practice worldwide. Despite the several published studies, adequately applied eSET, which impact on the incidence of complications without compromising treatment success, is still a challenge. The aim of this study was to compare the cumulative success rates of elective transfer of two embryos when transferred one by one (eSET), versus the success rates of elective double embryos transfer (DET) in a single procedure, in a good prognosis population. METHODS: This retrospective study evaluated 610 good prognosis infertile couples undergoing ART, split into two groups: SET group included those receiving elective single good quality embryo transfer and having at least one spared good quality embryo cryopreserved (SET group, n=237). For those who did not become pregnant, they could receive a second frozen-thawed elective embryo transfer; and DET group (n=373) who received elective transfer of two good quality embryos in the first transfer and had at least one spared good quality embryo cryopreserved. RESULTS: The accumulated clinical pregnancy outcomes after a transfer of two embryos were similar between groups (DET: 46.6% vs accumulated SET: 45.9%; p=0.898). On the other hand, the multiple pregnancy rate was significantly lower in the group receiving transfer of two embryos, one by one, compared to DET in a single procedure (DET: 32.2% vs accumulatedSET: 6.1%; p < 0.001). CONCLUSIONS: The SET policy should be stimulated for good prognosis couples, as it maintain the accumulated clinical pregnancy rates, avoid multiples pregnancies and consequently the maternal and neonates complication and indirect costs of treatment when considering obstetrics spends are reduced

INTRODUÇÃO: Sabe-se que as técnicas de reprodução assistida estão associadas com potenciais riscos, principalmente relacionados às gestações múltiplas, em torno de 20 a 25%, em consequência da estimulação ovariana associada à transferência de vários embriões. As gestações múltiplas apresentam maior incidência de complicações maternas e neonatais, além de aumentarem consideravelmente a proporção de partos cesarianos. Frente a esta realidade, as gestações múltiplas podem ser evitadas pela transferência eletiva de embrião único (eSET, do inglês elective Single Embryo Transfer), uma prática que vem crescendo em todo mundo. Apesar dos diversos estudos publicados, o grande desafio ainda é comprovar os benefícios da eSET aplicada corretamente, impactando na incidência das complicações sem comprometimento do sucesso do tratamento. O objetivo deste estudo foi comparar as taxas de sucesso cumulativas da transferência eletiva de até dois embriões transferidos um a um (eSET), versus a taxa de sucesso da transferência eletiva de dois embriões em um único evento (DET, do inglês Double Embryo Transfer), em casais inférteis de bom prognóstico. MÉTODOS: Estudo retrospectivo avaliou 610 casais inférteis de bom prognóstico submetidos às TRA, divididos em dois grupos: grupo SET: pacientes submetidas à transferência eletiva de um único embrião de boa qualidade e que possuíam ao menos um embrião excedente congelado (grupo SET, n=237), possibilitando uma segunda transferência eletiva de um embrião descongelado em caso de não ocorrência de gestação; e grupo DET: pacientes submetidas a transferência eletiva de dois embriões de boa qualidade e que possuíam ao menos um embrião excedente (grupo DET, n=373). RESULTADOS: As taxas de gestação clínica acumulada após a transferência de dois embriões foram semelhantes (DET: 46.6% e SET acumulado: 45,9%; p=0,898). Por outro lado, a taxa de gestação múltipla foi significantemente inferior no grupo que recebeu transferência de dois embriões um a um versus a transferência eletiva de dois embriões em um único evento (DET: 32,2% e SET acumulado: 6,1%; p < 0,001). CONCLUSÕES: A política de SET deve ser estimulada para casais de bom prognostico, já que resulta em taxas de gestação clínica acumulada semelhantes a DET, evita gestações múltiplas e consequentemente as complicações materno-fetais, levando a reduzido custo indireto do tratamento quando considera-se os gastos obstétricos e neonatais / INTRODUCTION: It is known that Assisted Reproductive Techniques are associated with potential risks, mainly related to multiple pregnancies, which are around 20 to 25% due to ovarian stimulation associated with high number of embryos transferred. Multiple pregnancies lead to higher incidence of complications for mother and newborns, as well as a significant increase in the proportion of cesarean deliveries. This way, iatrogenic multiple pregnancies can be avoided by the elective single embryo transfer (eSET), a growing practice worldwide. Despite the several published studies, adequately applied eSET, which impact on the incidence of complications without compromising treatment success, is still a challenge. The aim of this study was to compare the cumulative success rates of elective transfer of two embryos when transferred one by one (eSET), versus the success rates of elective double embryos transfer (DET) in a single procedure, in a good prognosis population. METHODS: This retrospective study evaluated 610 good prognosis infertile couples undergoing ART, split into two groups: SET group included those receiving elective single good quality embryo transfer and having at least one spared good quality embryo cryopreserved (SET group, n=237). For those who did not become pregnant, they could receive a second frozen-thawed elective embryo transfer; and DET group (n=373) who received elective transfer of two good quality embryos in the first transfer and had at least one spared good quality embryo cryopreserved. RESULTS: The accumulated clinical pregnancy outcomes after a transfer of two embryos were similar between groups (DET: 46.6% vs accumulated SET: 45.9%; p=0.898). On the other hand, the multiple pregnancy rate was significantly lower in the group receiving transfer of two embryos, one by one, compared to DET in a single procedure (DET: 32.2% vs accumulatedSET: 6.1%; p < 0.001). CONCLUSIONS: The SET policy should be stimulated for good prognosis couples, as it maintain the accumulated clinical pregnancy rates, avoid multiples pregnancies and consequently the maternal and neonates complication and indirect costs of treatment when considering obstetrics spends are reduced

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-10-17T16:03:22Z No. of bitstreams: 1 2015 - Paula Cardoso de Almeida Silva.pdf: 2121155 bytes, checksum: b827c0e7a20bdec7ae36fca85e2c8455 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-17T16:03:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Paula Cardoso de Almeida Silva.pdf: 2121155 bytes, checksum: b827c0e7a20bdec7ae36fca85e2c8455 (MD5) Previous issue date: 2015-11-06 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Embryo transfer and other biotechnologies are intensivelyused for equine reproduction and other species as well. Even though there is an expansion of the mule market and an increase in the number of animals, researches working with reproduction of these animals are still scarce. The aim of this study was to evaluate aspects of embryo transfer, embryo morphology and gender identification of hybrid (horses x donkeys) embryos, checking either their similarity or divergence with the characteristics already known of equine embryos. Attempts of embryo collection on Day 6 -9 after OV were performed in mares previously bred with a P?ga donkey. The embryo recovery rates, the characteristics related to age, morphology and embryonic diameter were evaluated. After these assessments, a group of embryos was cut using an adapted technique, where, the cutting process was carried out with the aid of an ophthalmic scalpel blade. The resulting biggest cut portion was used for embryo transfer, and the smallest parts and the others whole embryos to determination of the embryo gender. Data were analyzed using Fisher's exact test, with 5% significance, except the daily growth of embryos, which was analyzed by linear regression. The overall embryo recovery rate was 55,9% (71/127), and for each group D6, D7, D8 and D9, was 57,1% (28/49), 51% (25/49), 63% (15/24) 60% (3/5), respectively. The developmental stage of the collected embryos were, morula: 18.3% (13/71); early blastocysts: 26,8% (19/71); blastocyst: 29,6% (21/71); and expanded blastocysts: 25,3% (18/71). The measured diameter revealed that the size of the embryos ranged from 147 to 1688?m, the mean diameter of all collected embryos was 438,04?m, and according to different groups, the average size (smallest and largest diameter) of embryos were D6 (n = 29) - 183,4?m (147 - 253?m), D7 (n = 24) - 463,2?m (168 - 886?m), D8 (n = 15) - 727,2?m (422 - 1224?m ) and D9 (n = 3) - 1350,6?m (844 - 1688?m), and daily growth rate was 312,7?m. After the section, the 23 embryos were transfered, only one recipient mare was diagnosed as pregnant at 15 days after ovulation, however after 30 days the embryo was lost. The efficiency of the sex identification by PCR using the primers SRY and ZFX / ZFY was 85,9% (61/71), being 55,7% (34/61) determined as female: and 39,3% (27/61) as male. Embryo transfer has shown to be favorable to aid mule reproduction, whereas the recovery rate and the characteristics of the embryos are similar to equine embryos. Altough, the methodology used to section of embryos had unable the gestational development, the most part of the biopsy derived cutting allowed sexing of the embryos / A transfer?ncia de embri?es e outras biotecnologias reprodutivas s?o cada vez mais utilizadas para a produ??o de equinos e de outros animais, entretanto, mesmo com a expans?o do mercado de muares e com crescimento do n?mero de animais, as pesquisas relacionadas com a produ??o desses animais ainda s?o raras. O presente estudo avaliou as caracter?sticas relacionadas ? transfer?ncia de embri?es, a morfologia e a identifica??o do sexo de embri?es h?bridos (muares), verificando sua semelhan?a ou diverg?ncia com as caracter?sticas j? conhecidas em equinos. Foram realizadas colheitas de embri?es provenientes do cruzamento de ?guas com um jumento P?ga, nos dias 6, 7, 8 e 9 ap?s a ovula??o, a taxa de recupera??o embrion?ria, e as caracter?sticas relacionadas com a idade, morfologia e di?metro embrion?rio foram avaliadas para os diferentes dias. Ap?s essas avalia??es, uma parte dos embri?es coletados foi seccionada, com uma t?cnica adaptada onde o corte foi realizado com o aux?lio de uma l?mina de bisturi oftalmol?gico. A maior por??o resultante do corte foi destinada para transfer?ncia de embri?es e a menor parte, juntamente com os embri?es inteiros, foram utilizados para verificar a efici?ncia dos primers SRY e ZFX/ZFY, na an?lise molecular para a determina??o do sexo dos embri?es. Os dados foram analisados pelo teste Exato de Fisher, com 5% de signific?ncia, exceto o crescimento di?rio dos embri?es que foi analisado atrav?s da regress?o linear. A taxa de recupera??o embrion?ria total foi de 55,9% (71/127), e para os diferentes dias de colheita D6, D7, D8 e D9, foi 57,1% (28/49), 51% (25/49), 63% (15/24), 60% (3/5), respectivamente. Os embri?es coletados apresentavam-se nos seguintes est?gios de desenvolvimento, m?rulas: 18,3% (13/71); blastocistos iniciais: 26,8% (19/71); blastocistos: 29,6% (21/71); e blastocistos expandidos: 25,3% (18/71). O di?metro mensurado revelou que o tamanho dos embri?es variou entre 147 - 1688?m, a m?dia do di?metro de todos os embri?es recolhidos foi de 438,04?m, e de acordo com os diferentes dias de colheita, o tamanho m?dio (maior e menor di?metro) dos embri?es foi de: D6 (n = 29) ? 183,4?m (147 - 253?m), D7 (n = 24) ? 463,2?m (168 - 886?m), D8 (n = 15) ? 727,2?m (422 - 1224?m) e D9 (n = 3) ? 1350,6?m (844 ? 1688?m), e a taxa de crescimento di?ria foi de 312,7?m. Ap?s a sec??o e transfer?ncia de 23 embri?es, apenas uma receptora foi diagnosticada como gestante aos 15 dias, mas aos 30 dias, o embri?o tinha sido absorvido. A identifica??o do sexo atrav?s da t?cnica de PCR, utilizando os primers SRY e ZFx/ZFy foi de 85,9% (61/71), sendo determinado f?meas: 55,7% (34/61) e machos: 39,3% (27/61). A transfer?ncia de embri?es ? favor?vel para auxiliar na produ??o de muares, a taxa de recupera??o e as caracter?sticas dos embri?es s?o semelhantes aos embri?es equinos. A metodologia de sec??o dos embri?es, inviabilizou o desenvolvimento gestacional, entretanto a biopsia oriunda do corte permitiu a sexagem da maioria dos embri?es coletados.

La ICSI porcina es una herramienta con gran potencial aplicativo en diversos campos, entre los que destacan la producción de animales transgénicos, y la recuperación de razas en peligro de extinción. Aunque en la actualidad existen referencias de obtención de descendencia viva, el rendimiento es inferior al de otras especies, posiblemente debido al desconocimiento de las condiciones idóneas, y la dificultad de los cigotos para alcanzar el estadío de blastocisto in vitro. El presente trabajo se llevó a cabo para determinar diferentes factores que podrían afectar al rendimiento de la técnica, estudiando el efecto de 1) la secuencia de cultivo de los zigotos recién inyectados; 2) modificaciones en el sistema de MIV tradicional, y por último 3) la activación exógena del ovocito mediante la inyección de inositol trifosfato con el espermatozoide. El objetivo global de este estudio fue el de incrementar el rendimiento final de la ICSI en la especie porcina. / ICSI in pigs is a tool with an important applicable potential in diverse fields. One of this is the production of transgenic animals, and the conservation of endangered species. Even though there are some cases of living offspring, its output is still quite low comparing to other species, possibly due to unknown factors referring to ideal conditions for the development, and to the difficulty of the zygotes to reach the blastocyst stage in vitro. The goal of this study was to evaluate different factors affecting the ICSI performance. This was done by studying 1) the sequence of culture of the injected oocytes; 2) In vitro maturation (IVM) modifications, through meiotic inhibitors, such as roscovitine, and changes in IVM duration time, and finally 3) the exogenous oocyte activation through inositol triphosphate (InsP3) injection together with the sperm. The main objective of this study was to increase the final performance of ICSI in pigs.

La transgénesis es una potente herramienta biotecnológica para la generación de animales modificados genéticamente con aplicaciones en diversas áreas como veterinaria, biomedicina y agricultura. La técnica de transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT) se basa en la habilidad intrínseca de las células espermáticas para unir e interiorizar ADN exógeno y permitir su transferencia al interior de los ovocitos tras la fecundación, e integrarse en el genoma del nuevo embrión. El objetivo global de este estudio fue desarrollar un método eficiente de producción in vitro de embriones porcinos y lechones transgénicos aprovechando la capacidad de transferencia de ADN exógeno que presenta el espermatozoide.La combinación de la técnica de ICSI y SMGT es un método eficiente para la producción de lechones y embriones transgénicos, viéndose incrementada su eficiencia mediante el uso de la recombinasa RecA, obteniendo los primeros lechones nacidos en España mediante ICSI, de los cuales 2 fueron transgénicos. / The transgenesis is a powerful biotechnological tool for the generation of genetically modified animal with applications in different areas such as veterinary medicine, biomedicine and agriculture. The technique of sperm mediated gene transfer (SMGT) is based on the intrinsic ability of the spermatozoa to bind exogenous DNA and to allow its transference to the oocytes after fertilization, and to integrate in the genome of the new embryo. The global objective of this study was to develop an efficient method of in vitro production of transgenic embryos and piglets using the spermatozoa capacity to bind to exogenous DNA.The combination of the ICSI technique and SMGT is an efficient method for the production of transgenic embryos and pigs. The efficiency was increased by the use of recombinase RecA, obtaining the first piglets born in Spain by means of ICSI and two of them were transgenic.

The efficiency of superovulation protocols with different levels of progesterone in dairy cows was evaluated on the ovulated follicles rate. Twenty five high producing female were distributed in control group (n = 5), and four treatments with progesterone device (CIDR). Used CIDR for 4 and 5 days, new CIDR for 4 and 5 days (n=5 in each treatment). All cows received a pre synchronization with prostaglandin F2α (PGF) and GnRH. On Day 10 of the estrous cycle started the follicle stimulating hormone (FSH) treatment in nine decreasing doses for 4.5 days. Two applications of PGF were also used along with the 5th and 6th FSH injection. Ovaries were evaluated daily by transrectal ultrasonography to determine the start of the second follicular wave, evaluation of recruitment, follicles growth, also for monitoring the ovulation. Superovulation with used CIDR 4 resulted in a higher ovulation rate between 36-60h after device removal (94.9%, P <0.0001) compared to the control group (49.5%), used CIDR 5 (68.3%), new CIDR 4 (52.8%), or new CIDR 5 (70.6%). Thus, artificial insemination could be performed within 24-36h after removal the used 4 days CIDR. The number of follicles in control cows (38 ± 9.27) was similar (P=0.739) to used CIDR 4 (31.4 ± 6.8), new CIDR 4 (31 ± 4.6), used CIDR 5 (33.4 ± 8.4), or new CIDR 5 (38.6 ± 10.6). Our finds supported the hypothesis that low levels of exogenous progesterone during superovulation were sufficient to allow pulses of luteinizing hormone to enable ovulation induction. / Protocolos de superovulação com diferentes concentrações de progesterona foram avaliados sobre o percentual de folículos ovulados em vacas leiteiras de alta produção. Vinte e cinco fëmeas foram distribuídas em grupo controle (não tratadas; n=5) e quatro tratamentos com uso de dispositivos intravaginais de progesterona (CIDR): CIDR novo ou usado, por 4 ou 5 dias (n=5 em cada tratamento). Todas as vacas receberam prostaglandina F2α (PGF) e GnRH via IM. No Dia 10 (D10) do ciclo estral iniciou o tratamento com hormônio folículo estimulante (FSH) em 9 doses decrescentes, por 4,5 dias. Concomitante com a 5ª e 6ª aplicação de FSH as vacas receberam PGF. Os ovários foram avaliados diariamente por ultrassonografia transretal para determinar o início da segunda onda folicular, o recrutamento e crescimento dos folículos, bem como o monitoramento das ovulações. O CIDR usado por 4 dias resultou em maior percentual de folículos ovulados entre 36 e 60h após a remoção do dispositivo (94,9%; P<0.0001) comparado ao controle (49,5%) e tratamentos: CIDR usado 5 (68,3%), CIDR novo 4 (52,8%) e CIDR novo 5 (70,6%). A inseminação artificial deste protocolo é recomendada entre 24 a 36h após a retirada do CIDR usado por 4 dias. O número de folículos das vacas controle (38±9,27), CIDR usado 4 (31,4±6,8), CIDR novo 4 (31±4,6), CIDR usado 5 (33,4±8,4) e CIDR novo 5 (38,6±10,6) foi similar (P=0.739). Confirma-se a hipótese de que baixo nível de progesterona exógena durante o tratamento com FSH permite pulsos de hormônio luteinizante suficientes para indução da ovulação.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 113788 bytes, checksum: 1929349f4645b01bcad721a3e55a32ba (MD5) Previous issue date: 2004-12-21 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The purpose of this work was to evaluate the effects of rbST on the gestation rate and in the endogenous progesterone concentrations in embryo recipient heifers. Fifty two recipients were selected randomly and allocated in two treatments: (i) The first (T1) - 22 heifers with no application of rbST (Control treatment); (ii) and the second one with 30 heifers, were treated with a single subcutaneous injection of 250 mg rbST (rbST treatment), applied at detected estrus. Heifers from both treatments received fresh embryos, on day six or eight from the detected estrus. At the same time, blood samples were collected from the coccygeal vein or artery so as to perform the progesterone analysis using the radioimmunoassay technique. Twenty eight days after detected estrus, heifers were ultrasonically scanned per rectum to determine the pregnancy rate. No significant difference (P>0.05) was observed in the pregnancy rate between control (50%) and rbST (46.6%) treated heifers, or in the progesterone concentration, with mean values of 1.71 ± 0.74 ng/mL, and by 1.48 ± 0.72 ng/mL for control and rbST treated animals, respectively. In conclusion, the application of 250 mg rbST, at detected estrus in heifers, was not effective to increases pregnancy rate and progesterone concentration. / O objetivo deste trabalho foi avaliar a taxa de gestação e concentração sérica de progesterona, em novilhas receptoras de embrião, tratadas com dose única de rbST. Foram selecionadas 52 novilhas como receptoras, distribuídas aleatoriamente em dois tratamentos (T1 e T2), onde T1 corresponde a 22 novilhas que não receberam rbST (controle), e T2 a 30 novilhas que receberam 250 mg de rbST por via subcutânea, na fossa ísqueo-retal, durante o estro. As novilhas de ambos tratamentos foram inovuladas com embriões recém coletados entre o sexto e oitavo dia do ciclo estral. No momento da transferência dos embriões, coletou-se sangue da veia ou artéria coccígea para análise da concentração sérica de progesterona pela técnica de radioimunoensaio. A taxa de gestação foi determinada por ultra-som, 28 dias após a detecção do estro das receptoras. Observou-se um total de 14 novilhas gestantes (46,6%) nos animais do tratamento 2 e 11 novilhas gestantes nos animais do tratamento 1. Nenhum efeito (P>0,05) foi evidenciado com o uso da rbST sobre a taxa de gestação. A concentração média de progesterona no dia da inovulação dos embriões foi de 1,71 ± 0,74 ng/mL para o grupo de animais do T1 (Controle) e de 1,48 ± 0,72 ng/mL para o grupo de animais do T2 (rbST), não sendo observado diferença (P<0,05). Concluiu-se que a aplicação de 250 mg de rbST, em novilhas receptoras de embrião na detecção de estro, não afetou a concentração sérica de progesterona, nem tampouco a taxa de gestação.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-27Bitstream added on 2014-06-13T18:58:52Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_rm_me_jabo.pdf: 499475 bytes, checksum: adcc6fc6d838f270b207706f21c18463 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os objetivos do estudo foram: avaliar o efeito antioxidante do Trolox® 1) no meio de manutenção de embriões sobre as taxas de concepção (25 e 46 dias) e a perda gestacional de receptoras bovinas Holandesas repetidoras de serviço, em dois períodos (abril-junho/setembro-novembro) e 2) no meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários de abatedouro sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão in vitro. No Experimento 1, doadoras de embriões foram superovuladas e submetidas à lavagem uterina. Os embriões colhidos foram divididos em dois grupos, deixados em meio com ou sem antioxidante, por 2 a 6h. No Experimento 2, folículos foram aspirados e os complexos cumulus-oócito grau I e II foram divididos em quatro grupos: Controle 8h, Antioxidante 8h, Controle 20h e Antioxidante 20h. Então, foram mantidos em uma transportadora de oócitos (37ºC) por 8 ou 20 horas. Após a maturação, fecundação e cultivo in vitro, as taxas de clivagem (D3), blastocisto (D6, 7 e 9) e eclosão (D11) foram avaliadas. Alíquotas de 200 μL do meio de transporte foram retiradas em cada momento experimental (0, 8 e 20h) para realização dos testes de capacidade antioxidante total (CAT). No Experimento 1, não houve efeito de tratamento sobre as variáveis avaliadas. Foi verificado efeito de período experimental (P=0,001), categoria da doadora (P<0,05), qualidade embrionária (P=0,049) e intervalo Divisão dos Grupos-Inovulação (P<0,0001). No Experimento 2, não houve efeito de tratamento sobre as taxas analisadas. No entanto, houve redução das taxas de clivagem e blastocisto (D7 e 9) nos grupos 20 horas. Ainda, no D6 foram obtidas taxas de blastocisto semelhantes nos grupos Antioxidante 8 e 20h. A análise da CAT evidenciou que o Trolox® auxiliou o combate às ROS. / The objectives of the present study were to evaluate the effect of the addition of an antioxidant (Trolox®) 1) to a holding media for bovine in vivo produced embryos, on conception rates 25 and 46 days of pregnancy and pregnancy loss, in Holstein bovine recipients at 4th or more service, during two periods of the year (April-June/September-November) and 2) to a transport media for bovine oocytes aspirated from slaughter house ovaries, on in vitro cleavage, blastocyst and hatching rates. In Experiment 1, donor cows were superovulated and submitted to uterine flushings. The recovered embryos were divided into two groups, kept in holding media with or without antioxidant, for 2-6h. In Experiment 2, follicles were aspirated and cumulus-oocyte complexes grade I and II were divided into four groups: Control 8h, Antioxidant 8h, Control 20h and Antioxidant 20h. Oocytes were kept in a transportable machine (37ºC) for 8 or 20 hours. After in vitro maturation, fertilization and culture, cleavage (D3), blastocyst (D6, 7 and 9) and hatching rates (D11) were evaluated. Samples (200 μL) of the transport media were collected in each experimental moment (0, 8 e 20h) for total antioxidant capacity assay (TACA). In Experiment 1, no effect of treatment was observed. Effects of experimental period (P=0.001), donor category (P<0.05), embryo quality (P=0.049) and interval Group division-embryo transfer (P<0.0001) were detected. In Experiment 2, no effect of treatment was found on the analyzed rates. However, reduction on cleavage and blastocyst (D7 e 9) rates was detected on Groups 20h. Also, on D6 similar blastocyst rates were observed in Groups Antioxidant 8 and 20h. The analysis of TACA evidenced that Trolox® collaborated with the combat against the ROS.

Orientador: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Antônio Cláudio Tedesco / Banca: Francisco Guilherme Leite / Resumo: Os objetivos do estudo foram: avaliar o efeito antioxidante do Trolox® 1) no meio de manutenção de embriões sobre as taxas de concepção (25 e 46 dias) e a perda gestacional de receptoras bovinas Holandesas repetidoras de serviço, em dois períodos (abril-junho/setembro-novembro) e 2) no meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários de abatedouro sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão in vitro. No Experimento 1, doadoras de embriões foram superovuladas e submetidas à lavagem uterina. Os embriões colhidos foram divididos em dois grupos, deixados em meio com ou sem antioxidante, por 2 a 6h. No Experimento 2, folículos foram aspirados e os complexos cumulus-oócito grau I e II foram divididos em quatro grupos: Controle 8h, Antioxidante 8h, Controle 20h e Antioxidante 20h. Então, foram mantidos em uma transportadora de oócitos (37ºC) por 8 ou 20 horas. Após a maturação, fecundação e cultivo in vitro, as taxas de clivagem (D3), blastocisto (D6, 7 e 9) e eclosão (D11) foram avaliadas. Alíquotas de 200 μL do meio de transporte foram retiradas em cada momento experimental (0, 8 e 20h) para realização dos testes de capacidade antioxidante total (CAT). No Experimento 1, não houve efeito de tratamento sobre as variáveis avaliadas. Foi verificado efeito de período experimental (P=0,001), categoria da doadora (P<0,05), qualidade embrionária (P=0,049) e intervalo Divisão dos Grupos-Inovulação (P<0,0001). No Experimento 2, não houve efeito de tratamento sobre as taxas analisadas. No entanto, houve redução das taxas de clivagem e blastocisto (D7 e 9) nos grupos 20 horas. Ainda, no D6 foram obtidas taxas de blastocisto semelhantes nos grupos Antioxidante 8 e 20h. A análise da CAT evidenciou que o Trolox® auxiliou o combate às ROS. / Abstract: The objectives of the present study were to evaluate the effect of the addition of an antioxidant (Trolox®) 1) to a holding media for bovine in vivo produced embryos, on conception rates 25 and 46 days of pregnancy and pregnancy loss, in Holstein bovine recipients at 4th or more service, during two periods of the year (April-June/September-November) and 2) to a transport media for bovine oocytes aspirated from slaughter house ovaries, on in vitro cleavage, blastocyst and hatching rates. In Experiment 1, donor cows were superovulated and submitted to uterine flushings. The recovered embryos were divided into two groups, kept in holding media with or without antioxidant, for 2-6h. In Experiment 2, follicles were aspirated and cumulus-oocyte complexes grade I and II were divided into four groups: Control 8h, Antioxidant 8h, Control 20h and Antioxidant 20h. Oocytes were kept in a transportable machine (37ºC) for 8 or 20 hours. After in vitro maturation, fertilization and culture, cleavage (D3), blastocyst (D6, 7 and 9) and hatching rates (D11) were evaluated. Samples (200 μL) of the transport media were collected in each experimental moment (0, 8 e 20h) for total antioxidant capacity assay (TACA). In Experiment 1, no effect of treatment was observed. Effects of experimental period (P=0.001), donor category (P<0.05), embryo quality (P=0.049) and interval Group division-embryo transfer (P<0.0001) were detected. In Experiment 2, no effect of treatment was found on the analyzed rates. However, reduction on cleavage and blastocyst (D7 e 9) rates was detected on Groups 20h. Also, on D6 similar blastocyst rates were observed in Groups Antioxidant 8 and 20h. The analysis of TACA evidenced that Trolox® collaborated with the combat against the ROS. / Mestre

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-05-04T13:28:46Z No. of bitstreams: 1 Luis Eduardo Pereira de Andrade Ferreira.pdf: 1304369 bytes, checksum: 620d432e3b7c65dcc3630bba676e1517 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T13:28:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luis Eduardo Pereira de Andrade Ferreira.pdf: 1304369 bytes, checksum: 620d432e3b7c65dcc3630bba676e1517 (MD5) Previous issue date: 2014-08-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The efficiency of different biotechnologies applied to reproduction of the bovine female is closely related to the quality of ovulatory follicles. The recombinant bovine somatotropin (bST-r) has been described as stimulating follicle and oocyte. In this work we evaluated its influence on superovulatory response and embryo quality in Bos indicus cows, located at State of Pernambuco, Brazil.. Twenty cows, 10 in control group and 10 in treatment group (BST) were used. The animals in the BST group were treated with 500 mg of r-bST and controls with sterile saline solution every seven days totaling four applications until beginning of superovulation protocol (SOV). This began on a random day of estrous cycle considered D0, with the introduction of intravaginal Progesterone device (P4) combined with 2 mg of estradiol benzoate. At D4 it started follicular stimulation with 200mg of Follicle Stimulating Hormone in eight decreasing doses, with two daily applications. At D6 0.5 mg of cloprostenol was administered, with the P4 being removed in D7 and 24 hours after 1500 IU of Human Chorionic Gonadotropin was administered, and artificial insemination was performed 12 and 24 hours later. In D15 and 16 collections of embryos were carried out by non-surgical method, evaluated, classified and stored for later evaluation by fluorescence microscopy. All animals underwent monitoring of follicular dynamics in the days of treatment, collection and during the SOV protocol and collection of embryos; body condition score (BCS) was evaluated every seven days. The results were analyzed by ANOVA with a significance level of 5% . The BST group showed follicular diameter and number of follicles significante higher at some moments and it was seen a significant reduction of ECC (p<0.05). In other hand, only a numeric increase (p<0.05) was observed in the number of corpus luteum, total and viable embryos. It was observed a higher proportion of embryonic development stages more mature in BST group. So it was concluded that r-bST favors a strengthening of the SOV, however not targeting the ultimate goal, or a greater number of embryos, although numerically this occurred. Further study are necessary on application form and dosage used, based upon high variability of the results showed in other studies. / A eficiência das diferentes biotécnicas aplicadas à reprodução da fêmea bovina está intimamente relacionada à qualidade dos folículos ovulatórios. A somatotropina recombinante bovina (r-bST) tem sido descrita como estimuladora dos folículos e oócitos. Nesse trabalho avaliou-se sua influência na resposta superovulatória e na qualidade dos embriões de vacas Bos indicus, localizadas no agreste meridional de Pernambuco. Foram utilizadas 20 vacas, 10 no grupo controle e 10 no grupo tratamento (BST). Os animais do grupo BST foram medicados com 500 mg de r-bST e as controles com solução fisiológica estéril de sete em sete dias somando-se quatro aplicações até o inicio do protocolo de superovulação (SOV). Este se iniciou em dia aleatório do ciclo estral com a introdução do implante intravaginal de Progesterona (P4), associado a 2 mg de Benzoato de Estradiol, sendo considerado D0. No D4 se iniciou a estimulação folicular com 200 mg do Hormônio Folículo Estimulante, em oito doses decrescentes, com duas aplicações diárias. No D6 foi aplicado 0,5 mg de Cloprostenol, sendo a P4 retirado no D7 e 24 horas depois aplicado 1500 UI de Gonadotrofina Coriônica Humana, e inseminação feitas 12 e 24 horas depois. Nos D15 e 16 foram realizadas as coletas dos embriões, pelo método não cirúrgico, avaliados, classificados e armazenados para avaliação do total de células por fluorescência. Todos os animais passaram por acompanhamento da dinâmica folicular nos dias de tratamento, da coleta e durante o protocolo de SOV e coleta dos embriões, sendo avaliados de sete em sete dias o seu escore de condição corporal (ECC). Os resultados obtidos foram analisados por ANOVA com nível de significância de 5%. O grupo BST apresentou diâmetro folicular e número de folículos mais elevados em alguns momentos e redução do ECC (p<0,05), sendo observada elevação numérica (p>0,05) no número de corpos lúteos, embriões totais e viáveis, além de uma maior proporção de estádios embrionários mais maduros. Assim, conclui-se que o r-bST possivelmente potencializa os resultados da SOV, apesar de não atingir o objetivo final que seria um maior número de embriões, mesmo sendo visto nestas condições experimentais um aumento numérico dos mesmos. Mais estudos com relação a forma de aplicação e a dose utilizada são necessário, devido a alta variabilidade dos resultados.