Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundo de Auxílio aos docentes e Alunos (FADA) / Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Neurociência Translacional (INCT-INNT) / Cooperação Interinstitucional de Apoio a Pesquisas sobre o Cérebro (CInAPCe) / A epilepsia é um distúrbio que afeta o Sistema Nervoso Central (SNC), sendo a Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) a forma mais freqüente dentre as epilepsias focais em adultos, representando 40% de todos os casos. Sua incidência é de 1-2% da população mundial, com destaque para o sexo feminino por apresentar certas peculiaridades, como ciclo menstrual e período gestacional. Alterações nos níveis dos hormônios sexuais estrógeno e progesterona podem interferir no curso da epilepsia. A produção e liberação destes hormônios são influenciadas pela melatonina, um hormônio sincronizador do ritmo circadiano, e protetor do SNC. Desta forma, uma alteração nos níveis de melatonina poderia interferir na produção dos hormônios esteróides, e influenciar na excitabilidade do SNC. Objetivo: estudar o efeito da pinealectomia na epileptogênese em ratas Wistar adultas, com ciclo estral regular, submetidas ao modelo experimental da pilocarpina, através de análise comportamental e morfológica. Método: 4 grupos: SAL– fêmeas controle (n=5); PNTX+SAL– animais pinealectomizados e que receberam solução salina (n=5); PILO– animais que receberam pilocarpina (n=46); PNTX+PILO– animais pinealectomizados e que receberam pilocarpina (n=47). Os animais do grupo PILO e PNTX+PILO foram vídeo-monitorados por 60 dias após a primeira crise espontânea para estudo dos parâmetros comportamentais e então, perfundidos para técnica de neo-Timm. Resultados: os animais pinealectomizados apresentaram maior freqüência na fase de estro. Os animais PNTX+PILO tiveram diminuição nos períodos de latência para ocorrência da primeira crise após administração de pilocarpina, para ocorrência do SE e ocorrência da primeira crise espontânea, quando comparado com o grupo PILO. A mortalidade durante o SE foi maior no grupo PNTX+PILO, no entanto, a mortalidade por crise tônica foi maior no grupo PILO. Também foi maior no grupo PILO a porcentagem de animais que evoluíram para o SE. Quanto a freqüência de crises e ao grau de brotamento de fribras musgosas, não observamos diferença entre os grupos. Conclusão: A pinealectomia além de promover alterações no ciclo estral da rata, de maneira diferente daquela observada em ratas não pinealectomizadas e submetidas ao modelo da pilocarpina, promove uma epileptogênese menos intensa do que aquela vista em machos pinealectomizados, ou até mesmo em fêmeas intactas ou castradas. / Epilepsy is a disorder that affects Central Nervous System (CNS) and the Temporal Lobe Epilepsy is among the most frequent t ypes of epilepsy representing 40% all cases. Its incidence is 1-2% of the world-w ide population, with prominence for the female sex by presenting peculiarities such as menstrual cycle and gestational period. Alterations in the levels of sexual hormone s estrogen and progesterone can intervene with the course of the epilepsy. The prod uction and release of these hormones are influenced by melatonin a hormone that synchronize the circadian rhythms and promote the protection of the CNS. In t his context alteration in the melatonin levels could intervene with the productio n of sexual hormones and promote alterations in the excitability of the CNS. Objective: In order to study the effects of pinealectomy in the development of the p ilocarpine model of epilepsy in adult female rats, the behavioral and morphological aspects were analyzed. Method : Animals were divided in four groups: SAL - female control (n=5); PNTX+SAL - Pinealectomized animals that received saline (n=5); PILO - Animals that received pilocarpine (n=46); PNTX+PILO - Pinealectomized animals that received pilocarpine (n=47). The animals of PILO and PNTX+PILO groups we re video-monitored 24h/day during 60 days in order to observe the latency to t he first seizure and seizure frequency. After this period the animals were kille d and the brain sections were neo- Timm stained. Results: The pinealectomized animals presented a higher fre quency of the proestrus phase in the estrous cycle. The a nimals of PNTX+PILO group presented a reduced period of latency to occurrence of the first seizure after pilocarpine administration and to occurrence of status epilepticus (SE), as well as, a reduced silent phase when compared with animals of the PILO group. The mortality during SE was increased in PNTX+PILO group, however , the mortality by seizure tonic was increased in the PILO group and this grou p presented an increase rate of animals that evolved to SE. About seizure frequenc y and mossy fiber sprouting we do not observe difference between the groups. Conclusion: Our data showed that the pinealectomy promotes alterations in the estrou s cycle of the female rats in different aspects when compared with female rats no t pinealectomized submitted to the pilocarpine model of epilepsy. On the other han d a less intense epileptogenesis was observed in this rats when compared with castra ted and intact females rats or pinealectomized males rats. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

LOPES, Kamila Soares. Estudo do potencial terapêutico do veneno de Dinoponera quadriceps sobre modelos de convulsão in vivo e sobre astrócitos in vitro. 2014. 81 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-24T11:35:52Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_kslopes.pdf: 4611187 bytes, checksum: 3718e06727cb5607b5e54f7c7b41c51c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-24T11:39:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_kslopes.pdf: 4611187 bytes, checksum: 3718e06727cb5607b5e54f7c7b41c51c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-24T11:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_kslopes.pdf: 4611187 bytes, checksum: 3718e06727cb5607b5e54f7c7b41c51c (MD5) Previous issue date: 2014 / In last years, considerable efforts have been made to identify neuroactive and neuroprotective peptides derived from the venom of different natural species. In this work, were studied the activity of Dinoponera quadriceps native (DqV) and denatured (DqDV) venom on chemically induced seizures models in vivo and on in vitro cortical astrocytes viability. Male Swiss mice (28- 33g) were pretreated with DqV (0.1 or 0.5 mg/kg, e.v., n = 6-8), DqDV (0.5 or 2.0 mg/kg, i.p., n = 6-8) or DqDV (0.1 or 0.5 mg/kg, e.v., n = 6-8). 30 minutes after the intraperitoneal pretreatment or ten minutes after intravenous pretreatment with the venom was induced seizures in all animals by the administration of pentylenetetrazole (80 mg/kg) pilocarpine (400 mg/kg) or strychnine (3.0 mg/kg). In behavioral analysis, we recorded the time to the first seizure and to death and the percentage of survival. To determine the parameters of oxidative stress was dissected three brain areas (prefrontal cortex, hippocampus and striatum) of animals used in behavioral analysis, in order to determine the degree of lipid peroxidation, by measuring the levels of malondialdehyde (MDA), and the content of nitrite. In in vitro assay, cell viability of cortical astrocytes was determined after treatment with different concentrations of DqV, PTZ and DqV + PTZ. The data were analyzed by ANOVA followed by a Student Newman-Keuls (for in vivo tests) or Bonferroni (for in vitro experiments) as post hoc tests. It was observed that the DqV had effect only on the PTZ model, both in behavioral analysis as for the determination of the oxidative parameters. Pretreatment with DqV significantly reduced the time until the occurrence of first seizure (0.1 mg/kg: 77.83 ± 5.27 compared to the 101.0 ± 3.31 seconds in the control group; 0.5 mg/kg: 74.43 ± 3.94 compared to the 101.0 ± 3.31 seconds in the control group), while DqDV caused an increase in the percentage of survival when pretreated by i.p. (0.5 mg/kg: 25% of survival compared with 0% in the control group, 2.0 mg/kg: 62.5% of survival compared with 0% in control group) and e.v (0.5 mg/kg: 28.57% of survival compared with 0% in control group). routes. In relation to the oxidative stress parameters, both pretreatments with DqV and with DqDV caused increases of MDA levels in all three brain areas analyzed. The nitrite content also increased after pretreatment with DqV in the three areas of the brain and after pretreatment with DqDV via e.v., only in the hippocampus. About cell viability assays, were observed that DqV was not able to change this parameter. The PTZ reduced the cell viability of astrocytes in a dose-dependent way, with an IC 50 (cytotoxicity index to 50% of the cell population under study) corresponding to 33.12 mM. The combined treatment of DqV (100 µg/mL) and PTZ (IC 50) also caused a reduction in cell viability. The results suggest that the DqV, probably, has both neurotoxic and neuroprotective components, and that the astrocytes should be the cells involved in the venom’s neurotoxicity. / Nos últimos anos, esforços consideráveis têm sido feitos no sentido de identificar peptídeos naturais neuroativos e neuroprotetores derivados do veneno de diferentes espécies animais. Nesse trabalho foi estudada a atividade do veneno de Dinoponera quadriceps nativo (vDq) e desnaturado (vdDq) em modelos animais de convulsão quimicamente induzidos in vivo e sobre a viabilidade de astrócitos corticais in vitro. Camundongos Swiss machos (28-33g) foram pré-tratados com o vDq (0,1 ou 0,5 mg/kg, e.v, n= 6-8), vdDq (0,5 ou 2,0 mg/kg, i.p., n= 6-8) ou com vdDq (0,1 ou 0,5 mg/kg, e.v., n= 6-8). Meia hora após o pré-tratamento intraperitoneal ou dez minutos após o pré-tratamento endovenoso com o veneno foi induzida a convulsão em todos os animais através da administração de pentilenotetrazol (80 mg/kg), pilocarpina (400 mg/kg,) ou estricnina (3,0 mg/kg). Na análise comportamental, foram registrados os tempos para ocorrência da primeira convulsão e morte e o percentual de sobrevida. Para determinação dos parâmetros de stress oxidativo foram utilizadas três áreas cerebrais (córtex pré-frontal, hipocampo e corpo estriado) de animais utilizados na análise comportamental, a fim de se determinar o grau de peroxidação lipídica, pela mensuração dos níveis de malondialdeído (MDA), e o conteúdo de nitrito. No ensaio in vitro, foi determinada a viabilidade celular de astrócitos corticais após o tratamento com diferentes concentrações de vDq, PTZ e vDq + PTZ. Os dados foram analisados por ANOVA e Student-Newman-Keuls como pós-teste, para os ensaios in vivo, e ANOVA seguido pelo pós-teste de Bonferroni, para as experimentações in vitro. Foi observado que o vDq apresentou efeito apenas no modelo de PTZ, tanto na análise comportamental quanto na determinação dos parâmetros oxidativos. O pré-tratamento com vDq reduziu significativamente o tempo para ocorrência da primeira convulsão (0,1 mg/kg: 77,83 ± 5,27 comparado com 101,0 ± 3,31 segundos no grupo controle; 0,5 mg/kg: 74,43 ± 3,94 comparado com 101,0 ± 3,31 segundos no grupo controle), enquanto que o vdDq causou aumento do percentual de sobrevida quando pré-tratado por via i.p. (0,5 mg/kg: 25% de sobrevida comparado com 0% no grupo controle; 2,0 mg/kg: 62,5% de sobrevida comparado com 0% no grupo controle) e e.v (0,5 mg/kg: 28,57% de sobrevida comparado com 0% no grupo controle). Em relação aos parâmetros de estresse oxidativo, tanto o pré-tratamento com o vDq quanto com o vdDq causaram aumentos dos níveis de MDA nas três áreas cerebrais analisadas. O conteúdo de nitrito também sofreu elevação após pré-tratamento com vDq, nas três áreas cerebrais, e após o pré-tratamento com vdDq, via e.v., apenas no hipocampo. Quanto aos ensaios de viabilidade celular, foi observado que o vDq, isoladamente, não foi capaz de alterar esse parâmetro. O PTZ causou redução da viabilidade de astrócitos de modo dose-dependente e com uma IC 50 (índice de citotoxicidade para 50% da população celular em estudo) correspondente a 33,12 mM. O tratamento combinado entre vDq (100 µg/mL) e PTZ (IC 50) também causou redução da viabilidade das células. Os resultados sugerem que o vDq possivelmente apresenta ambos componentes neurotóxicos e neuroprotetores, e os astrócitos devem ser uma das células envolvidas na neurotoxicidade do veneno.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, FLorianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-13T04:05:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334816.pdf: 729185 bytes, checksum: feda479223aab1d6591a83c25aa8f67c (MD5) Previous issue date: 2015 / Objetivo: avaliar a validade global e a utilidade para rastreio de depressão da Escala de Depressão de Hamilton (HRSD), do Inventário de Depressão de Beck (BDI), da Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (HADS) total e da subescala Depressão (HADS-D) em pacientes com epilepsia mesial temporal com esclerose do hipocampo (EMT-EH) refratária. Método: Cento e vinte e três pacientes com EMT-EH refratária foram arrolados consecutivamente. Todos os pacientes tiveram exame neurológico, análise interictal e ictal de vídeo-EEG e imagem de ressonância magnética (IRM) do crânio como exame complementar. A avaliação psiquiátrica foi baseada na quarta edição do Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais (DSM-IV-TR) como ?padrão-ouro? diagnóstico. HRSD, Beck, HADS e HADS-D foram as escalas psicométricas utilizadas como instrumento de rastreio para depressão. Resultado: Na análise de característica de operação do receptor (ROC) todas as escalas apresentaram áreas sob a curva (AUC) próximas a 0,8, sem diferença significativa entre elas. O ponto de corte = 9 na HRSD e = 8 na HADS-D mostraram sensibilidades maiores que 70% e especificidades próximas a 80%, com valores preditivos positivos (VPP) na faixa de 50% e valores preditivos negativos (VPN) próximos a 90%. O ponto de corte = 19 em ambas as escalas, Beck e HADS, apresentou cerca de 55% de sensibilidade e cerca de 90% de especificidade, com VPP maiores que 60% e VPN na faixa de 80%. Conclusões: Todos os instrumentos demonstraram capacidade discriminativa e boa validade global na avaliação da depressão na ELTM-EH refratária. HRSD e HADS-D tiveram pontos de corte ótimos próximos aos pontos de corte padrão na depressão geral, com um bom balanço entre sensibilidade e especificidade, e assim parecem úteis para uso clínico sem maiores ajustes. BDI e HADS foram pouco sensíveis nos pontos de corte ótimos. Para todas as escalas, o VPP foi moderado e o VPN alto nos pontos de corte ótimos, indicando maior utilidade para descartar depressão em um contexto de rastreio.<br> / Abstract : Objective: To evaluate the global validity and utility for screening of depression of the Hamilton Rating Scale for Depression (HRSD), Beck Depression Inventory (BDI), Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) and Hospital Anxiety and Depression Scale Depression subscale (HADS-D) in patients with refractory mesial temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis (MTLE-HS).Methods: One hundred and three consecutive patients with refractory MTLE-HS were enrolled. All patients had neurological examination, interictal and ictal video-EEG analyses and MRI as complementary exams. Psychiatric evaluation was based on 4th Edition of the Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-IV-TR) criteria and ILAE Commission of Psychobiology as gold standard diagnosis. HRSD, BDI, HADS and HADS-D were utilized as psychometric screening tools to be evaluated.Results: All the area under the curve (AUC) were approximately 0.8, there were no statistically significant differences among them. A cutoff point = 9 on the HRSD and a cutoff point = 8 on the HADS-D showed sensitivity greater than 70% and specificity of around 80% with positive predictive values (PPV) in the range of 50% and negative predictive values (NPV) near 90%. A cutoff point = 19 on the BDI and HADS total showed a sensitivity of around 55% and a specificity of 90% with PPV greater than 60% and NPV around of 80% .Significance: all instruments showed discriminative capacity and good global validity in assessing depression in refractory TLE-HS. HRSD and HADS-D had optimal cutoffs close to the standard cutoff points for the general depression, with a good balance between sensitivity and specificity, and thus appear useful for clinical use without major adjustments. BDI and HADS had low sensitivity in optimal cutoffs. For all scales, the PPV was moderate and the NPV was high in optimal cutoffs, indicating more useful to rule out depression in a screening context.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-16T19:43:50Z No. of bitstreams: 1 Daniele Pinheiro de Freitas Células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente....pdf: 2028523 bytes, checksum: cd8d31def021492a032a820714bfde3d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-16T19:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Pinheiro de Freitas Células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente....pdf: 2028523 bytes, checksum: cd8d31def021492a032a820714bfde3d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Terapia celular é o conjunto de métodos e abordagens tecnológicas com a utilização de células no tratamento de doenças. A terapia com células-tronco tem despertado grande interesse na comunidade científica devido à capacidade que essas células indiferenciadas têm de preservar sua própria população e de se diferenciar em células dos diversos tecidos. Encontrar a fonte de célula-tronco apropriada para uso terapêutico depende de diversos fatores, como a sua capacidade de proliferação e estabilidade citogenética, assim como suas características fenotípicas e seu potencial de diferenciação. A epilepsia é uma desordem neurológica que acomete de 1 a 3% da população mundial. É caracterizada pela presença de crises espontâneas recorrentes (CER) e possui seu tratamento clínico baseado no emprego de drogas anti-epilépticas (DAES). O uso de células tronco apresenta-se como uma alternativa ao tratamento desta patologia. Este trabalho tem como objetivos caracterizar as células-tronco mesenquimais de polpa de dente decíduo humano e avaliar seu papel terapêutico no modelo de epilepsia do lobo temporal induzido por lítio-pilocarpina em ratos Wistar. As células da polpa de dente humano utilizadas nesse estudo foram submetidas à avaliação fenotípica, do seu potencial de diferenciação, e da estabilidade cromossômica. Para verificar os efeitos terapêuticos das células-tronco de polpa de dente em modelo experimental de epilepsia os animais foram divididos nos seguintes grupos: SE-salina (n=10), que no transplante recebeu solução salina; SE-CDLH1 (n=13) que recebeu células-tronco de polpa de dente humano (107 células/animal), SE-CMO (n=8) que recebeu células mononucleares de medula óssea (107 células/animal) e o grupo controle (n=10) que não foi submetido ao status epilepticus (SE). As células foram transplantadas por via intraperitoneal. Foram realizadas análises, em diferentes espaços de tempo para avaliar migração celular por imunofluorescência e as crises espontâneas recorrentes. Para avaliar alterações de memória foi estudado o desempenho dos animais no labirinto aquático de Morris (LAM). As CDLH1 apresentaram estabilidade cromossômica (até a 8ª passagem); características imunofenotípicas de células mesenquimais, com alta expressão de CD105, CD73, CD 44, CD90, CD166, CD54, OCT-4, e STRO-1; capacidade de diferenciação nas linhagens adipogênicas, osteogênicas e condrogênicas. As CDLH1 migraram para o cérebro e baço dos ratos. Dos resultados terapêuticos observou-se a redução das crises espontâneas recorrentes nos animais tratados após 30 dias do SE e transplante, mas as células não foram capazes de bloquear essas crises (observado 60 dias pós-SE). Obtendo-se os mesmos resultados com o transplante de CMO. Já no estudo da memória não houve diferença estatística na latência de escape nos animais dos grupos epilépticos (tratado e não-tratado). Os animais do grupo controle (não epiléptico), apresentaram retenção de memória em relação aos animais dos grupos SE-salina e SE-CDLH1. Novos estudos devem ser realizados para que se possa estabelecer a utilização ideal das células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente humano em relação às necessidades terapêuticas da epilepsia. / Cell therapy is the set of methods and technological approaches to the use of cells in treating diseases. The stem cell therapy has aroused great interest in the scientific community due to the capacity of these undifferentiated cells in preserving its own population and to differentiate into cells of various tissues. Finding the source of stem cells suitable for therapeutic use depends on various factors such as their ability to proliferate and cytogenetic stability, as well as their phenotypic characteristics and their potential of differentiation. Epilepsy is a neurological disorder that affects 1-3% of world population. It is characterized by recurrent spontaneous seizures (RSS) and has its medical treatment based on use of antiepileptic drugs (AEDs). The use of stem cells is an alternative treatment for this pathology. This work aims to characterize the mesenchymal stem cells from human deciduous dental pulp and evaluate its therapeutic role in the model of temporal lobe epilepsy induced by lithium-pilocarpine in rats. The cells of the human dental pulp used in this study were subjected to phenotypic analysis of their potential of differentiation and chromosomal stability. To verify the therapeutic effects of stem cells from dental pulp in experimental epilepsy, the animals were divided into the following groups: SE-Saline (n = 10) transplanted with saline; SE-CDLH1 (n = 13) who received stem cells from human dental pulp (107 cells / animal), SE-CMO (n = 8) who received bone marrow mononuclear cells (107 cells / animal) and the control group (n = 10) who did not undergo status epilepticus (SE). The cells were transplanted by intraperitoneal route. Analyses were performed in different time to assess cell migration by immunofluorescence and recurrent spontaneous seizures. To evaluate changes in memory we studied the performance of the animals in the Morris water maze, after cell transplantation. Stem cells analyzed showed chromosomal stability (up to 8th passage); immunophenotypic characteristics of mesenchymal cells with high expression of CD105, CD73, CD 44, CD90, CD166, CD54, OCT-4, and STRO-1; ability to differentiate into adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages. The CDLH1 migrated throughout the brain and spleen of mice. The therapeutic results observed the reduction of recurrent spontaneous seizures in treated animals after 30 days of transplantation and SE, but cells were not able to block these seizures (observed 60 days post-SE). The same results were obtained with the transplantation of BMC. In the study of memory there was no statistical difference in escape latency of the epileptic groups (treated and untreated). Animals of control group (non epileptic) showed memory retention in comparison to groups saline-SE and SE-CDLH1. Further studies should be conducted so that we can determine the optimal use of mesenchymal stem cells derived from human dental pulp in relation to the therapeutic needs of the epilepsy.

A epilepsia é um distúrbio que afeta 1-2% da população e uma percentagem significativa destes pacientes não respondem aos medicamentos anticonvulsivantes disponíveis no mercado, sugerindo a necessidade de investigar novos tratamentos farmacológicos. Vários estudos demonstram que a inflamação ocorre durante a epileptogênese e pode contribuir para o desenvolvimento e progressão da epilepsia, demonstrando níveis aumentados de interleucinas pró-inflamatórias em modelos animais e em humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do anti-inflamatório não-esteroidal diclofenaco de sódio na severidade das crises convulsivas e os níveis de interleucinas pró-inflamatórias em animais no modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ). O modelo de kindling foi induzido por injeções de doses subconvulsantes de PTZ (20 mg/kg) em dias alternados durante 15 dias de tratamento. Os animais foram divididos em quatro grupos: grupo controle recebeu solução salina, grupo tratado com diazepam (2 mg/kg) e os grupos tratados com o diclofenaco de sódio (5 e 10 mg/kg). Após o primeiro dia de tratamento, os testes de labirinto em cruz elevada e de campo aberto foram realizados. A gravidade das crises foi avaliada pela escala de Racine. Foram avaliados os níveis de IL- 1 beta, IL-6 e TNF-alfa no sangue, hipocampo e no córtex de animais. O tratamento com diclofenaco de sódio, no modelo de kindling induzido pelo PTZ, diminuiu a severidade das convulsões e os níveis de interleucina-6 e de TNF-alfa no hipocampo de animais tratados com doses de 5 e 10 mg/kg. Novos estudos são necessários para investigar uma nova abordagem terapêutica para o tratamento da epilepsia, com este anti-inflamatório nãoesteroidal. / Epilepsy is a disorder that affects 1-2% of the population and a significant percentage of these patients do not respond to anticonvulsant drugs available in the market suggesting the need to investigate new pharmacological treatments. Several studies have shown that inflammation occurs during epileptogenesis and may contribute to the development and progression of epilepsy, demonstrating increased levels of pro-inflammatory interleukins in animal models and human patients. The objective of this study was to evaluate the effect of non-steroidal anti-inflammatory diclofenac sodium on the severity of seizures and levels of pro-inflammatory interleukins in animals with kindling model induced by PTZ. The kindling model was induced by injections of subconvulsant doses of PTZ (20mg/kg) in alternated days for 15 days of treatment. The animals were divided into four groups: control group given saline, group treated with diazepam (2mg/kg) and groups treated with diclofenac sodium (5 and 10 mg/kg). After treatment the plus-maze and open field tests were conducted. The severity of seizures was evaluated by the Racine scale. We evaluated the levels of IL-1beta, IL-6 and TNF-alpha in the blood, hippocampus and cortex of animals. The treatment with diclofenac sodium, in the PTZ induced kindling model, decreased severity of seizures and interleukin-6 and TNF-alpha levels in the hippocampus of animals treated with doses of 5 and 10 mg/kg. New studies are needed to investigate a new therapeutic approach in the treatment of epilepsy with this anti-inflammatory nonsteroidal.

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Cuidados Intensivos e Paliativos, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-04-19T04:08:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337772.pdf: 1601839 bytes, checksum: d8fabd2b8e3979f7614e6d523bff3d93 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introdução: morte súbita e inesperada em epilepsia (sudden unexpected death in epilepsy - SUDEP) é a principal causa de óbitos em pacientes jovens com epilepsia. Seus mecanismos ainda não estão completamente compreendidos, porém parecem relacionar-se com disfunção cardíaca e/ou respiratória durante a crise. O objetivo deste trabalho é traçar o perfil eletrocardiográfico de pacientes com epilepsia (PCE) e compará-lo com indivíduos saudáveis. Métodos: estudo observacional do tipo caso-controle em que foram obtidos registros de eletrocardiogramas (ECGs) convencionais com 12 derivações, com velocidade de papel de 25 mm/s e sensibilidade de 1 mV/cm. Incluiu-se 62 PCE com diagnóstico de acordo com critérios da International League Against Epilepsy (ILAE), acompanhados no Ambulatório de Epilepsia do HU-UFSC e 57 controles saudáveis pareados por sexo, idade e índice de massa corporal (IMC). Parâmetros de ECG foram analisados por cardiologista membro da Sociedade Brasileira de Cardiologia (SBC) de acordo com as recomendações para padronização e interpretação de ECGs da AHA/ACCF/HRS. Resultados: dentre os 62 pacientes avaliados, 56 (90,3%) apresentavam epilepsia focal sintomática, sendo 35 (56,4%) epilepsia do lobo temporal. Os pacientes tinham média de 22,02 ± 14,96 anos de duração de epilepsia (crises epilépticas regulares). Dentre os parâmetros de ECG analisados, observou-se onda P (p < 0,001) e intervalo PR (p = 0,02) mais prolongados em pacientes do que em controles. Adicionalmente, o intervalo QT corrigido (tanto pelo método de Bazett, quanto Framingham) foram mais prolongados em pacientes que em controles (p < 0,01). Dispersão patológica do intervalo QT foi predominante no grupo de pacientes que controles (p = 0,001), bem como sobrecarga do átrio esquerdo (p = 0,002).Conclusão: o perfil eletrocardiográfico de PCE é diferente de indivíduos saudáveis. Parâmetros como dispersão patológica do intervalo QT, intervalo PR e QT corrigido mais longos podem participar da patogênese de SUDEP.<br> / Abstract : Background: sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP) is a major cause of mortality in young patients with epilepsy (PWE). Although their mechanisms are still poorly understood, they may be related to respiratory and / or cardiac dysfunction. We investigated interictal 12-lead electrocardiogram (EKG) abnormalities in PWE, in comparison with healthy controls. Methods: standard 12-leads EKGs were obtained from all participants: 62 PWE diagnosed according to ILAE's criteria, followed in epilepsy?s outpatient clinics in HU-UFSC, without seizures in the date of EKG, and 57 controls matched for sex, age and body mass index. We used Burdick/Spacelab?s carts, at a paper speed of 25mm/s and at 1 mV/cm. All EKG were manually assessed by a cardiologist, member of the SBC, according to the AHA/ACCF/HRS Recommendations for Standardization and Interpretation of the EKG. Results: PWE with symptomatic focal epilepsy represented 90,3% (N = 56), 56.4% (N = 35) had temporal lobe epilepsy. Patients had a mean duration of 22,02 ± 14,96 years of epilepsy. We observed longer P wave (p < 0,001) and PR interval (p = 0,02) in patients than in controls. Additionally, we observed longer QT interval (average and corrected) (p < 0,01), longer PR interval (p = 0,02) among patients than in controls. Also we observed pathologic QT dispersion (p = 0,001) and left atrial enlargement (p = 0,002) occurred predominantly among PWE. Conclusion: The electrocardiographic profile of PWE is not the same as the general population. Findings such as pathologic QT dispersion, longer corrected QT interval and PR interval could be a substrate for SUDEP.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:14:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 320697.pdf: 4138053 bytes, checksum: 396dba9bf591ba65b301e00464ca9436 (MD5) Previous issue date: 2013 / Objetivos: A influência de crises epilépticas nas respostas emocionais observadas em humanos e animais tem sido extensivamente investigada, mas poucos trabalhos têm evidenciado o perfil comportamental de animais que não convulsionam apesar de terem sido tratados com agentes convulsivantes. Com intuito de melhor caracterizar os mecanismos envolvidos nos efeitos induzidos pela pilocarpina (PILO) ? um agonista não seletivo dos receptores muscarínicos -, ratos Wistar adultos machos foram tratados (20 a 350 mg/kg, i.p.) e aqueles que não desenvolveram status epilepticus ou crises recorrentes espontâneas foram avaliados 24 h ou 1 mês após o tratamento no teste do labirinto em cruz elevado (LCE). Além disso, o envolvimento dos receptores GABA-A (diazepam, DZP, i.p., 1 mg/kg; pentilenotetrazol, PTZ, i.p., 15 mg/kg) e NMDA (memantina, i.p., 4 mg/kg) foram investigados para tentar esclarecer os mecanismos neurais implicados nos efeitos da PILO. Registros de eletroencefalograma (EEG) hipocampal, dosagens bioquímicas de corticosterona plasmática (CORT), ACTH e expressão de receptores NMDA foram realizados 24 h ou 1 mês após o tratamento.Resultados: A injeção de PILO (150 ou 350 mg/kg) promoveu efeitos ansiogênicos em ratos avaliados no teste do LCE, com uma diminuição do tempo gasto e número de entradas nos braços abertos do labirinto em comparação aos ratos controle. A injeção de DZP bloqueou os efeitos ansiogênicos observados em ratos tratados com PILO e avaliados 24 h ou 1 mês após o tratamento, aumentou o tempo e número de entradas nos braços abertos do labirinto e a incidência de comportamentos relacionados à avaliação de risco. Por outro lado, a injeção de PTZ não alterou o perfil comportamental de ratos tratados com PILO e avaliados no labirinto, sugerindo a promoção de uma resposta ansiogênica máxima observada nesse grupo. O tratamento com pilocarpina (150 e 350 mg/kg) aumentou o ritmo teta hipocampal embora apenas a dose mais elevada de PILO (350 mg/kg) tenha promovido descargas do tipo ponta-onda durante registros de EEG, mostrando que os efeitos tipo-ansiogênicos observados com a dose de 150 mg/kg não são dependentes de atividade ictal. Além disso, tanto os níveis plasmáticos de CORT quanto ACTH aumentaram 24 h após a injeção de PILO embora apenas os níveis de CORT permaneceram elevados 1 mês após o tratamento, o que pode sugerir o envolvimento de fatores epigenéticos (e.g. alterações na expressão de receptores de glicocorticoides em estruturas límbicas relacionadas à função do eixo HPA). O pré-tratamento com memantina bloqueou os efeitos ansiogênicos observados em ratos tratados com PILO e avaliados 24 h ou 1 mês após o tratamento, havendo aumento do tempo e número de entradas nos braços abertos do labirinto. Os níveis de expressão dos receptores NMDAR1 e R2B no hipocampo foram diminuídos 24 h ou 1 mês (mas não a subunidade R2B) após a injeção de PILO.Conclusões: Nossos dados sugerem que a estimulação central de receptores colinérgicos muscarínicos, através de uma única injeção sistêmica de pilocarpina (em doses subconvulsivas), é capaz de induzir comportamentos defensivos relacionados à ansiedade durante um longo período em ratos, efeitos estes não dependentes de atividades epilépticas no hipocampo. Os efeitos ansiogênicos parecem estar associados a um aumento da atividade teta hipocampal, que pode desempenhar um papel codificador na regulação do sistema septo-hipocampal sobre o eixo HPA, que está ativado (conforme indicado pela maior liberação de glicocorticoides). Além disso, observamos uma diminuição da expressão de receptores do tipo NMDA no hipocampo de ratos tratados com pilocarpina, sugerindo que alterações na atividade neuronal hipocampal inibitória sobre o eixo HPA podem ser responsáveis por mediar as respostas ansiogênicas observadas após o tratamento com pilocarpina. Nossos achados são compatíveis com os preceitos da teoria de Gray e McNaughton (1983), que enfatiza o importante papel modulatório da circuitaria septo-hipocampal na regulação dos estados de medo e ansiedade através da ativação de aferências colinérgicas sobre estruturas límbicas. Levando em consideração as limitações no campo translacional de doenças psiquiátricas para modelos animais, os resultados aqui expostos podem auxiliar no refinamento de pesquisas pré-clínicas relacionadas aos transtornos de ansiedade, proporcionando um melhor entendimento dos mecanismos envolvidos nas respostas de ansiedade e estresse em roedores. <br>

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Cuidados Intensivos e Paliativos, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T12:47:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015Bitstream added on 2017-11-07T03:09:03Z : No. of bitstreams: 1 337772.pdf: 1601839 bytes, checksum: d8fabd2b8e3979f7614e6d523bff3d93 (MD5) / Introdução: morte súbita e inesperada em epilepsia (sudden unexpected death in epilepsy - SUDEP) é a principal causa de óbitos em pacientes jovens com epilepsia. Seus mecanismos ainda não estão completamente compreendidos, porém parecem relacionar-se com disfunção cardíaca e/ou respiratória durante a crise. O objetivo deste trabalho é traçar o perfil eletrocardiográfico de pacientes com epilepsia (PCE) e compará-lo com indivíduos saudáveis. Métodos: estudo observacional do tipo caso-controle em que foram obtidos registros de eletrocardiogramas (ECGs) convencionais com 12 derivações, com velocidade de papel de 25 mm/s e sensibilidade de 1 mV/cm. Incluiu-se 62 PCE com diagnóstico de acordo com critérios da International League Against Epilepsy (ILAE), acompanhados no Ambulatório de Epilepsia do HU-UFSC e 57 controles saudáveis pareados por sexo, idade e índice de massa corporal (IMC). Parâmetros de ECG foram analisados por cardiologista membro da Sociedade Brasileira de Cardiologia (SBC) de acordo com as recomendações para padronização e interpretação de ECGs da AHA/ACCF/HRS. Resultados: dentre os 62 pacientes avaliados, 56 (90,3%) apresentavam epilepsia focal sintomática, sendo 35 (56,4%) epilepsia do lobo temporal. Os pacientes tinham média de 22,02 ± 14,96 anos de duração de epilepsia (crises epilépticas regulares). Dentre os parâmetros de ECG analisados, observou-se onda P (p < 0,001) e intervalo PR (p = 0,02) mais prolongados em pacientes do que em controles. Adicionalmente, o intervalo QT corrigido (tanto pelo método de Bazett, quanto Framingham) foram mais prolongados em pacientes que em controles (p < 0,01). Dispersão patológica do intervalo QT foi predominante no grupo de pacientes que controles (p = 0,001), bem como sobrecarga do átrio esquerdo (p = 0,002).Conclusão: o perfil eletrocardiográfico de PCE é diferente de indivíduos saudáveis. Parâmetros como dispersão patológica do intervalo QT, intervalo PR e QT corrigido mais longos podem participar da patogênese de SUDEP.<br> / Abstract : Background: sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP) is a major cause of mortality in young patients with epilepsy (PWE). Although their mechanisms are still poorly understood, they may be related to respiratory and / or cardiac dysfunction. We investigated interictal 12-lead electrocardiogram (EKG) abnormalities in PWE, in comparison with healthy controls. Methods: standard 12-leads EKGs were obtained from all participants: 62 PWE diagnosed according to ILAE's criteria, followed in epilepsy?s outpatient clinics in HU-UFSC, without seizures in the date of EKG, and 57 controls matched for sex, age and body mass index. We used Burdick/Spacelab?s carts, at a paper speed of 25mm/s and at 1 mV/cm. All EKG were manually assessed by a cardiologist, member of the SBC, according to the AHA/ACCF/HRS Recommendations for Standardization and Interpretation of the EKG. Results: PWE with symptomatic focal epilepsy represented 90,3% (N = 56), 56.4% (N = 35) had temporal lobe epilepsy. Patients had a mean duration of 22,02 ± 14,96 years of epilepsy. We observed longer P wave (p < 0,001) and PR interval (p = 0,02) in patients than in controls. Additionally, we observed longer QT interval (average and corrected) (p < 0,01), longer PR interval (p = 0,02) among patients than in controls. Also we observed pathologic QT dispersion (p = 0,001) and left atrial enlargement (p = 0,002) occurred predominantly among PWE. Conclusion: The electrocardiographic profile of PWE is not the same as the general population. Findings such as pathologic QT dispersion, longer corrected QT interval and PR interval could be a substrate for SUDEP.

A potenciação longa duração (do inglês: long-term potentiation, ou LTP) na região de CA1 do hipocampo é considerada como um dos exemplos de plasticidade cerebral mais estudados, e provável base celular do aprendizado e da memória. Mecanismos morfofisiológicos em comum, entretanto, parecem ser compartilhados pela LTP e pela epilepsia experimental. Estes referem-se, basicamente, à necessidade de uma estimulação de alta freqüência, ao envolvimento de uma transmissão sináptica glutamatérgica, ao aumento do íon Ca2+ no meio intracelular, à expressão gênica, à síntese de proteínas, e à ativação de receptores metabotrópicos glutamatérgicos. Desse modo, alguns autores sugerem que a LTP tem um importante papel no desenvolvimento das crises epilépticas, havendo uma continuidade entre os fenômenos plásticos e patologia. O presente estudo buscou investigar, num modelo experimental de Epilepsia de Lobo Temporal (ELT) induzido pela pilocarpina (um agonista colinérgico muscarínico), em ratos, a existência de plasticidade neuronal em distintos tempos de epilepsia (30 dias, 60 dias e 90 dias), utilizando como medida a potenciação de longa duração (LTP) nas sinapses entre os axônios da via colateral de Schaffer e as células piramidais de CA1, em fatias hipocampais. Além disso, verificou-se a presença de brotamento neuronal (“sprouting”), um correlato de plasticidade cerebral estrutural concomitante à cronicidade da ELT, em um campo próximo de CA1, o giro denteado hipocampal. A análise da amplitude dos potenciais pós-sinápticos excitatórios (PEPS) de campo mostrou que somente a presença de epilepsia, nesse modelo, interferiu negativamente com a indução da LTP, o que foi atribuído a efeitos de excitotoxicidade, à condição permanente de epileptogênese, à perda neuronal progressiva, a anormalidades dendríticas do corpo neuronal e de axônios decorrentes da injeção de pilocarpina. As chances de ocorrência da LTP para os animais controles foi de 4 a 10 vezes maior do que a dos animais epilépticos. A inclinação do PEPS, uma medida correspondente à eficiência sináptica, demonstrou sofrer influência do tempo de epilepsia. Um decaimento nessa medida ocorreu no grupo de animais que permaneceu durante mais tempo com o quadro de crises recorrentes, ou seja, com 90 dias de ELT. Além disso, observou-se também um comprometimento desta nos animais controle de 90 dias, após o período de 60 minutos da estimulação. Assim, animais saudáveis com mais idade também não mantiveram uma eficiência sináptica aumentada e estável por mais de 30 minutos após a estimulação. Mecanismos moleculares tais com excitabilidade neuronal e aumento na eficiência da transmissão sináptica encontram-se mais preservadas em animais saudáveis e de menos idade. A presença de brotamento neuronal, por sua vez, foi identificada em quase 100% das amostras de tecido hipocampal de animais epilépticos, não sendo observado em nenhum animal controle, o que nos serviu como um indicador do comprometimento hipocampal associado a crises epilépticas recorrentes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-07-14T12:35:49Z No. of bitstreams: 1 2016_FlaviaMariaMedeirosGomes.pdf: 5082726 bytes, checksum: b4f9330a9dd76115f33d108006b4b10e (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-07-30T12:43:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_FlaviaMariaMedeirosGomes.pdf: 5082726 bytes, checksum: b4f9330a9dd76115f33d108006b4b10e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-30T12:43:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_FlaviaMariaMedeirosGomes.pdf: 5082726 bytes, checksum: b4f9330a9dd76115f33d108006b4b10e (MD5) / A Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) é o subtipo mais prevalente de Epilepsia em adultos e sua relevância clínica deve-se à sua gravidade e alta porcentagem de pacientes resistentes aos fármacos antiepilépticos disponíveis atualmente. Há, portanto, uma necessidade pela busca de novas terapias farmacológicas capazes de controlar essa condição patológica de forma eficiente, assim como de compreender melhor as alterações causadas pelo funcionamento anormal das estruturas neuronais durante a Epilepsia. Nesse aspecto, os artrópodes peçonhentos representam uma fonte alternativa de compostos neuroativos selecionados pela evolução dessas espécies. A potencialidade farmacológica dessas moléculas reforça o interesse em compreender sua ação no sistema nervoso central, foco desse trabalho. O Laboratório de Neurofarmacologia isolou o peptídeo Neuropolybina a partir da peçonha da vespa Polybia paulista, e ele apresentou uma interessante atividade antiepiléptica em modelos agudos de crises epilépticas. Além disso, não apresentou efeitos adversos na exploração espontânea e na coordenação motora dos animais testados. Portanto, o objetivo foi avaliar a efetividade antiepiléptica da Neuropolybina em camundongos submetidos ao modelo crônico de Status Epilepticus (SE) induzido por pilocarpina. Esse modelo é amplamente utilizado na literatura e apresenta similaridades com achados histopatológicos e comportamentais observados em pacientes epilépticos em apenas algumas semanas, enquanto as mesmas alterações levam anos para se manifestar nos pacientes. A Comissão de Ética no Uso Animal (CEUA/UnB) aprovou todos os experimentos. Camundongos Swiss receberam a administração i.p. de pilocarpina e após 10 minutos, manifestaram sinais do SE, que durou três horas (período agudo do modelo). No período de 15 dias após o SE (período latente), foi realizado um procedimento estereotáxico para implantar uma cânula-guia no ventrículo lateral e oito eletrodos profundos e corticais. Após os 15 dias, durante o período das crises recorrentes e espontâneas (CRE), os camundongos foram tratados por cinco dias consecutivos com administração i.c.v. de veículo, Neuropolybina (0,5 e 2,5 nmol) e Diazepam (4 mg.kg-1). Durante esse período, o comportamento, as CRE e a atividade epileptiforme foram monitoradas por filmagem e eletroencefalografia. Após o período de tratamento, os camundongos foram eutanasiados e as alterações morfológicas foram avaliadas por técnicas histológicas (Coloração de Nissl para neurônios) e Imunohistoquímica/imunofluorescência (GFAP para astrócitos e DAPI para núcleos celulares). Foi observada uma redução da duração das CRE após o tratamento com Neuropolybina. O número de neurônios viáveis nas regiões CA1 e CA3 da formação hipocampal dos tratados foi significativamente diferente dos doentes, e a presença de astrócitos não foi diferente quando comparada aos sadios, sugerindo que o peptídeo evitou a perda neuronal induzida pelo SE. O peptídeo produziu um efeito antiepiléptico e possui um potencial terapêutico no modelo de ELT. Ademais, ele pode ser usado como uma ferramenta na pesquisa em neurociência e no desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento da Epilepsia. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Temporal Lobe Epilepsy (TLE) is the most prevalent subtype of Epilepsy in adults and its clinical relevance is due to the gravity and the high percentage of patients resistant to antiepileptic drugs currently available. Thus, there is a need to seek new pharmacological therapies able to efficiently control this disease, as well as a better understanding of the changes caused by the abnormal functioning of neuronal structures during Epilepsy. In this aspect, venomous arthropods represent an alternative source of evolutionary selected neuroactive compounds. The pharmacological potentiality of these molecules reinforce the interest on its action on the central nervous system, focused by this work. The Neuropharmacology Laboratory previous isolated Neuropolybin from the Polybia paulista wasp venom and this peptide has demonstrated an interesting antiepileptic activity on acute models of seizures. Furthermore, Neuropolybin has not presented side effects on spontaneous exploration and motor coordination of the animals tested. Therefore, the aim was to evaluate the antiepileptic effectiveness of the peptide Neuropolybin in mice submitted to a chronic model of status epilepticus (SE) induced by pilocarpine. This model has been used frequently and presents similarities with histopathological and behavioral findings in epileptic patients in just a few weeks, while the same changes take years to manifest in patients. The Ethical Committee on Use of Animals (CEUA/UnB) approved all procedures. Swiss mice received an i.p. injection of pilocarpine and after 10 minutes, they manifested signs of SE for three hours (acute period of the model). Fifteen days after SE (latent period), a stereotaxic procedure was perfomed to implant a guide cannula in the lateral ventricle and eight deep and cortical electrodes. After 15 days, already during the spontaneous recurrent seizures (SRS), treatment was carried out during five consecutive days by i.c.v. injections with vehicle solution, Neuropolybin (0.5 and 2.5 nmol) or Diazepam (4 mg.kg-1). During this period, behavioral, SRS and epileptiform activity were monitored by video recording and electroencephalography. After the period of treatment, the animals were euthanized and morphological changes were evaluated by histological (Nissl stain for neurons) and immunohistochemistry and immunofluorescence (GFAP stain for astrocytes and DAPI stain for cells nuclei) techniques. There was a reduction in SRS duration with Neuropolybin treatment. The number of viable neurons in CA1 and CA3 regions of the hippocampus formation of treated mice was significantly different from that of epileptic mice after the treatment. The presence of astrocytes did not increase when compared to healthy animals, suggesting that the peptide minimized neuronal loss induced by SE. Neuropolybin thus exerts a promising antiepileptic effect and provides a therapeutic potential on this model of TLE. Nevertheless, the peptide may also be used as a tool in neuroscience research and as a framework in the design of novel drug agents for epilepsy treatment.