Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Patrícia Matos Biselli Chicote / Banca: Marília de Freitas Calmon Saiki / Resumo: Introdução: A inflamação crônica desencadeada pela bactéria Helicobacter pylori (H. pylori), a qual é considerada o principal fator ambiental relacionado ao câncer gástrico, está associada ao desenvolvimento e progressão de lesões gástricas pré-cancerosas, desencadeando diversas modificações histológicas e moleculares que promovem a transformação maligna do estômago. Para isso, conta com fatores de virulência que promovem alterações superficiais e em vias de sinalização das células epiteliais gástricas. Consequentemente pode levar a alterações no padrão de expressão de genes supressores tumorais e da atividade de enzimas DNA metil transferases (DNMTs), responsáveis pela metilação do DNA e silenciamento gênico. Objetivos: O presente estudo avaliou se a infecção pela bactéria H. pylori, bem como sua erradicação, altera a expressão do RNAm dos genes supressores SOCS1, RPRM, RUNX3 e dos genes de DNMTs (DNMT1, DNMT3A e DNMT3B) em pacientes com gastrite crônica infectados (Hp+) em comparação com indivíduos com gastrite crônica sem infecção (Hp-). Além disso, investigou a ocorrência de correlação negativa entre a expressão do RNAm dos genes supressores tumorais com a dos genes das DNMTs, assim como a associação dos níveis de expressão gênica em relação aos fatores de risco idade, sexo, tabagismo, etilismo e genótipo bacteriano cagA. Material e Métodos: A quantificação relativa (RQ) do RNAm foi realizada por PCR (polymerase chain reaction) quantitativa em tempo real (qPCR) utilizando ensaios TaqMan® em 9 pacientes com gastrite crônica Hp- e 19 Hp+, sendo estes também avaliados três meses depois da terapia de erradicação bacteriana. O diagnóstico molecular e genotipagem do fator de virulência cagA foram realizados por PCR convencional. Resultados: Os resultados mostraram que a infecção pela H. pylori e sua erradicação... / Abstract: Introduction: Chronic inflammation caused by Helicobacter pylori (H. pylori), which is considered the main environmental factor related to gastric cancer, is associated with the development and progression of precancerous gastric lesions, triggering several histological and molecular changes that promote stomach malignant transformation. For this, it has virulence factors promoting superficial and signaling pathways of gastric epithelial cells changes. Consequently, it can lead to alterations in the expression of tumor suppressor genes and DNA enzyme activity methyl transferases (DNMTs), responsible for DNA methylation and gene silencing. Objectives: This study evaluated whether the infection by the bacterium H. pylori and its eradication change the mRNA expression of suppressor genes SOCS1, RPRM, RUNX3 and DNMTs (DNMT1, DNMT3A and DNMT3B) genes in patients with chronic gastritis infected (Hp+) compared to individuals with chronic gastritis without infection (Hp-). In addition, we investigated the occurrence of negative correlation between mRNA expression of tumor suppressor genes with the ones of DNMTs, as well as the association of gene expression levels in relation to the risk factors age, sex, smoking, drinking and bacterial genotype cagA. Methods: The relative quantification (RQ) mRNA was performed by PCR (polymerase chain reaction) quantitative real-time (qPCR) using TaqMan® assays in 9 patients with chronic gastritis Hp- and 19 Hp+, which are also evaluated three months after bacterial eradication therapy. The molecular diagnostics and genotyping of the virulence factors CagA were performed by standard PCR. Results: The results showed that the infection by H. pylori and eradication did not significantly alter the gene expression of SOCS1, RPRM, RUNX3 and DNMTs, which presented, in general, reduced expression (RQ <1.0); on the other hand, higher expression of SOCS1 and ... / Mestre

Orientador: Agnes Cristina Fett-Conte / Banca: Ana Elizabeth Silva / Banca: Paula Rahal / Banca: Ana Luiza Bossolani Martins / Banca: Flávio Naoum / Resumo: Síndromes Mielodisplásicas (SMDs) é a denominação de um grupo de doenças neoplásicas clonais das células hematopoéticas, mais frequentemente observadas em idosos, caracterizadas por citopenias, displasia, hematopoese ineficaz e risco elevado para leucemia mielóide aguda (LMA). Citopenia(s) persistente(s), por mais de seis meses, e ausência de critérios diagnósticos para SMD, caracteriza a Citopenia Idiopática de Significado Indeterminado (ICUS). ICUS foi definida recentemente e é pouco conhecida quanto aos fatores etiológicos. Já as SMDs são consideradas protótipos de doenças epigenéticas, uma vez que distúrbios na metilação de alguns genes que regulam proliferação e diferenciação celular têm sido considerados fatores causais. O gene SOX17, por exemplo, é um supressor de tumor expresso em vários tecidos e alterações no seu padrão de metilação já foram observadas em tumores sólidos e neoplasias hematológicas, entretanto, foram pouco estudadas nas SMDs e não há descrições de estudos em ICUS. Do mesmo modo, alguns microRNAs vem sendo utilizados como marcadores moleculares para diagnóstico e prognóstico para diversas anormalidades hematológicas, mas seu papel na etiologia e desenvolvimento das SMDs também é pouco conhecido. Neste contexto, este estudo propos investigar o padrão de metilação do gene SOX17 por MSP-PCR em células da medula óssea (MO) de pacientes com SMD e ICUS ao diagnóstico, e analisar alterações no padrão de expressão de microRNAs por RT-PCR em células da MO de... / Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDS) denominates a group of neoplastic diseases of the hematopoietic cells, most commonly observed in elderly patients, characterized by cytopenias, dysplasia, ineffective hematopoiesis and high risk of acute myeloid leukemia (AML). Persistent cytopenia (s), for more than six months, and absence of diagnostic criteria for MDS, characterizes Idiopathic Cytopenia of Undetermined Significance (ICUS). ICUS has been recently defined, and little is known about its etiological factors. The MDSs are considered as prototypes of epigenetic diseases, due to the fact that methylation disorders of some genes that regulate cell proliferation and differentiation have been considered as causal factors. The SOX17 gene, for example, is a tumor suppressor expressed in several tissues and changes in its methylation pattern have already been observed in solid tumors and hematological malignancy, however, these changes have been little studied in MDS and there are no descriptions of studies in ICUS. Similarly, some microRNAs are being used as molecular markers for diagnosis and prognosis for various hematological abnormalities, but its role in the etiology and development of MDS is also poorly understood. In this context, this study aimed to investigate the methylation pattern of the SOX17 gene by MSP-PCR in bone marrow (BM) cells of patients diagnosed with MDS and ICUS, and to analyze changes in the expression pattern of microRNAs by RT-PCR in cells of BM for adults and ... / Doutor

Orientador: Flávia Cristina Rodrigues-Lisoni / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Sandra Helena Poliselli Farsky / Banca: Wilson Araujo da Silva Júnior / Banca: Joice Matos Biselli Périco / Banca: Marilia de Freitas Calmon Saiki / Resumo: O câncer cervical é uma das principais neoplasias ginecológicas em todo o mundo. O microambiente tumoral influencia no processo tumorigênico. Nas diferentes fases da tumorigênese as inflamações crônicas estão envolvidas. Assim, a proteína anti-inflamatória anexina A1 (ANXA1), que é expressa pelas células tumorais, tem sido relacionada ao processo tumorigênico. Diante dessas considerações, o objetivo do presente trabalho foi investigar a ação do peptídeo mimético da proteína ANXA1 em células de carcinoma de colo de útero. As metodologias utilizadas foram Análise de proliferação, migração, viabilidade e apoptose celular, além da modulação da expressão de genes relacionados à inflamação por PCR quantitativa. No primeiro modelo, foi utilizado o Meio Condicionado da linhagem HUVEC (endotélio) (HMC) para realizar o cultivo celular junto as linhagens HaCat (normal) e HeLa (câncer). Nossos resultados mostram que as células de câncer cervical apresentam diminuição da proliferação, enquanto na morfologia, migração, viabilidade e apoptose celular não foram observadas mudanças. A análise dos genes, MMP2 e MMP9 mostrou aumento de expressão, enquanto os genes COX2, EP3 e EP4 diminuição, após estímulo com HMC. No segundo modelo, foi realizada comparação de duas linhagens tumorigênicas (HeLa e SiHa) com a linhagem HaCaT. A ANXA1 aumentou a expressão de EP4 e MMP9 e diminuiu a proliferação celular e a apoptose. Nesse contexto sugerimos que o peptídeo pode modular mecanismos celulares e... / Abstract: Cervical cancer is one of the main gynaecological cancers around the world. The tumor microenvironment influences in the tumor process. In the different tumour phases the chronic inflammations are associated. Thus, the anti-inflammatory protein annexin A1 (ANXA1), which is expressed by tumour cells, has been linked to the tumourigenesis. In view of this, the aim of the present work was to investigate the ANXA1 mimetic peptide action in the uterus carcinoma cells. The methodologies used were cellular proliferation, migration, viability and apoptosis assay, besides the gene expression modulation of genes related to inflammatory pathways by quantitative PCR. In the first model was used the conditioned medium of HUVEC cells (endothelium) (HMC) to performed the co-culture with HaCaT cell line (normal) and HeLa cell line (cancer). Our results showed that the cervical cancer cells had a decrease in proliferation, while changes in cellular morphology, migration, viability and apoptosis were not observed. The analysis of the MMP2 and MMP9 genes showed an upregulation, while the COX2, EP3 and EP4 presented a downregulation, after the HMC stimulus. In the second model was performed a comparison between two tumor cell lines (HeLa and SiHa) with the HaCaT cell line. The ANXA1 upregulated EP4 and MMP9 and decreased the cellular proliferation and apoptosis. That way, we suggest that the peptide may modulate cellular and molecular mechanisms in the cervical carcinogenesis, however its use as a possible therapeutic alternative should be better explored / Doutor

Orientador: Carlos Alexandre Costa Crusciol / Banca: João Domingos Rodrigues / Banca: Adriano Stephan Nascente / Banca: Orivaldo Arf / Banca: André Fróes de Borja Reis / Resumo: A aplicação da citocinina thidiazuron (TDZ) é uma técnica que promove aumentos na produtividade de arroz (Oryza sativa L.), no entanto, é necessário entender o funcionamento dessa substância em plantas de arroz. Objetivou-se com esse trabalho verificar a influência do TDZ nos aspectos fisiológicos, morfológicos, nutricionais e produtivos de um cultivar de arroz de terras altas. Foi realizado experimento com delineamento em blocos casualizados, aplicando doses de thidiazuron (0, 0,8, 1,6 e 2,4 g ha-1) no perfilhamento do cultivar Ana 8001, favorecido com irrigação por aspersão, durante duas safras (2015/2016 e 2016/2017). Foi avaliado o teor foliar das citocininas 6-benzilaminopurina (BAP) e trans-zeatina ribosídeo (TZR), absorção de N, P, K, Ca, Mg, S, Fe, Cu, Zn e Mn, crescimento da planta, componentes da produção e produtividade de grãos. Realizou-se também experimento em casa de vegetação com o objetivo de verificar a influência de citocininas na altura, componentes da produção, produtividade de grãos e expressão genica de cultivares mutantes de arroz, alterados na rota de sinalização celular desse hormônio. A aplicação de citocinina aumentou os teores foliares de 6-benzilaminopurina e trans-zeatina ribosídeo na primeira safra. O aumento no número de espiguetas por panícula e fertilidade das espiguetas, em função das doses de TDZ, resultaram em incrementos na produtividade na ordem de 24% e 13% na safra 2015/2016 e 2016/2017, respectivamente. Em 2016/2017, os teores de K n... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Application of the cytokinin thidiazuron (TDZ) is a technique which promotes increases in grain yield of rice (Oryza sativa L.), however, it is necessary to understand the action of this substance in rice plants. The objective of this work was to verify the influence of TDZ on the physiological, morphological, nutritional and productive aspects of an upland rice cultivar. A randomized block design experiment was carried out, applying doses of thidiazuron (0, 0.8, 1.6 and 2.4 g ha-1) on tillering stage of the cultivar ANa 8001, favored by sprinkler irrigation, during two crop seasons (2015/2016 and 2016/2017). It was evaluated the leaf content of cytokines 6-benzylaminopurine (BAP) and trans-zeatin riboside (TZR), the uptake of N, P, K, Ca, Mg, S, Fe, Cu, Zn and Mn, plant growing and grain yield. An experiment was also carried out to verify the influence of cytokinins on morphological aspects and genetic expression of mutant rice cultivars, altered in the cellular pathway signaling of this hormone. The application of cytokinin increased leaf contents of 6-benzylaminopurine and trans-zeatin riboside in the first crop season. The increase in the number of spikilets per panicle and spikelet fertility as a function of TDZ doses resulted in increases of 24% and 13% in 2015/2016 and 2016/2017, respectively. In 2016/2017, the leaf K contents increased by 2.0, 6.8, 3.1 and 0.9 g kg-1 with the application of TDZ doses on leaf differentiation, flowering, milky grain and harvest point. respectively. Panicle K content increased 1.91 g kg-1 at harvest point. Despite the climatic differences between the two-crop season, it was possible to observe that cytokinin increases the dry matter accumulation in the leaves and stalk of the plant, being after translocated to the reproductive structures, resulting in increases of grain yield. The OsPHP, OsRR type B and OsCKX rice mutant cultivars showed increases ... / Doutor

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Coorientador: Leandro Gustavo de Oliveira / Banca: Alessandra Pontillo / Banca: Francisco Lázaro Pereira de Souza / Resumo: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez, caracterizada por hipertensão arterial e proteinúria, identificadas após a 20a semana de gestação. Essa patologia está associada com hiperuricemia, valores séricos elevados de citocinas inflamatórias, ativação de leucócitos e estresse oxidativo. Cristais de ácido úrico podem ativar um complexo intracelular denominado inflamassoma, uma estrutura multi-proteica importante para o processamento e liberação das citocinas inflamatórias interleucina-1 beta (IL-1β) e IL-18. Este estudo investigou, em gestantes portadoras de PE, o estado de ativação de monócitos, tanto endógeno como estimulado por urato monossódico (MSU), por meio da expressão gênica dos inflamassomas NLRP1 e NLRP3, bem como a associação destes complexos com a expressão de citocinas inflamatórias por estas células. Monócitos foram obtidos do sangue periférico de 23 gestantes pré-eclâmpticas e 23 gestantes normotensas (GN) no terceiro trimestre de gestação e de 23 mulheres saudáveis, não grávidas (MNG) e cultivados na presença ou ausência de 50 μg/mL de MSU por 18 h. A presença do inflamassoma foi avaliada por meio da expressão gênica de NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β, IL-18 e TNF-α por RT-qPCR em células não estimuladas (expressão endógena) ou após estímulo com MSU (expressão estimulada). A concentração das citocinas foi avaliada pelo método de ELISA. Os resultados foram analisados por meio de testes não-paramétricos com nível de significância de 5%. Em gestantes pré-eclâmpticas, a expressão gênica de NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β e TNF-α em monócitos estimulados ou não com MSU, foi significativamente maior do que nos grupos GN e MNG. Além disso, observou-se maior expressão endógena de IL-18 em gestantes com PE em comparação às gestantes normotensas, enquanto a expressão estimulada da citocina foi maior no grupo PE em relação aos grupos GN e... / Abstract: Preeclampsia (PE) is a specific syndrome of pregnancy, characterized by hypertension and proteinuria, identified after the 20th week of pregnancy. This pathology is associated with hyperuricemia, elevated serum levels of inflammatory cytokines, leukocyte activation and oxidative stress. Uric acid crystals may activate an intracellular complex called inflammasome, a multi-protein structure which is important for processing and release of inflammatory cytokines such as interleukin-1 beta (IL-1β) and IL-18. This study investigated, in pregnant women with PE, the state of monocyte activation both endogenous and stimulated with monosodium urate (MSU), by gene expression of NLRP1 and NLRP3 inflammassomes as well as their association with inflammatory cytokines expression by these cells. Monocytes were obtained from peripheral blood of 23 preeclamptic pregnant women, 23 normotensive pregnant women (NT) in the third trimester of pregnancy and 23 healthy non-pregnant women (NP), and cultured in the presence or absence of 50 μg/mL of MSU for 18 h. Inflammasome activation was evaluated by the gene expression of NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β, IL-18 and TNF-α by RT-qPCR in unstimulated monocytes (endogenous expression), or after cell stimulation with MSU (stimulated expression). The concentration of cytokines was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results were analyzed using non-parametric tests at 5% significance level. In preeclamptic pregnant women, gene expression of NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1β and TNF-α by monocytes, stimulated or not with MSU, was significantly higher than in NT and NP groups. In addition, there was a higher endogenous expression of IL-18 in pregnant women with PE compared with NT pregnant women, while the stimulated cytokine expression was higher in the PE group than in the other two groups studied. Stimulation of monocytes from preeclamptic and non-pregnant women with MSU induced increased ... / Mestre

Orientador: Carmen Sílvia Fernandes Boaro / Resumo: Cálcio apresenta função estrutural, na parede celular, atua na manutenção da estabilidade da membrana plasmática e é mensageiro secundário, envolvido na regulação de processos fisiológicos do desenvolvimento e em respostas a estresses. No dano mecânico, espécies reativas de oxigênio (ERO) auxiliam no afrouxamento da parede celular e na abertura de canais de Ca2+ do reticulo endoplasmático e o aumento de Ca2+ no citoplasma gera uma cascata de sinais mediados por hormônios, ERO, peroxidases e cálcio-calmodulina. Além disso, o Ca2+ é de fundamental importância para o funcionamento do fotossistema II (PSII), uma vez que, sua variação pode interferir na cadeia transportadora de elétrons. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da variação de cálcio na sinalização de defesa de plantas de crescimento lento e rápido e submetidas a dano mecânico. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, com quatro repetições, em esquema fatorial, onde as plantas foram cultivadas com 0, 2 e 4 mM de Ca2+, com e sem dano mecânico e cinco épocas de avaliação, realizadas aos 0, 15, 30, 60 e 90 dias após o dano mecânico. Com a espécie de crescimento lento, Annona emarginata, foram estudados fotossíntese (fluorescência da clorofila a e trocas gasosas), massa seca total, crescimento quantitativo e peroxidação lipídica. No Solanum lycopersicum Micro-Tom, espécie de crescimento rápido, expressão de genes de estresses, enzimas antioxidantes, peroxido de hidrogênio, peroxidação lipídica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Calcium presents structural function in the cell wall, it acts in the maintenance of the stability of the plasma membrane and is secondary messenger, involved in the regulation of physiological processes of development and in responses to stresses. In mechanical damage, reactive oxygen species (ROS) assist in the loosening of the cell wall and in the opening of Ca2+ channels of the endoplasmic reticulum, and the increase of Ca2+ in the cytoplasm generates a cascade of signals mediated by hormones, ROS, peroxidases and calcium-calmodulin. In addition, Ca2+ is of fundamental importance for the functioning of photosystem II (PSII), since its variation can interfere with the electron transport chain. The objective of this study was to investigate the influence of calcium variation on defense signaling of slow and fast growing plants and submitted to mechanical damage. The experimental design was a randomized block, with four replications in a factorial design, where the plants were cultured with 0, 2 and 4 mM Ca2+ with and without mechanical damage five evaluation times were made at 0, 15, 30, 60 and 90 days after mechanical damage. With the slow-growing species, Annona emarginata, photosynthesis (chlorophyll a fluorescence and gas exchange), total dry mass, quantitative growth and lipid peroxidation were studied. The results allowed to conclude that the Annona emarginata plants presented greater resistance to the mechanical damage in the presence of calcium and were more sensiti... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo:Influências ambientais, como a nutrição, durante a fase inicial da gestação de fêmeas bovinas podem ter impacto no desenvolvimento fetal e consequentemente na vida adulta. O desenvolvimento dos ovários dos fetos é estabelecido durante o início da gestação. Testamos a hipótese de que a restrição e/ou excesso de nutrientes ingeridos por vacas durante os primeiros 60 dias da gestação interfere no desenvolvimento corporal e transcriptoma ovariano dos fetos. Vinte e uma vacas Nelore uníparas foram submetidas a inseminação artificial com sêmen sexado (fêmea) de um único touro e alocadas individualmente em diferentes dietas. A dieta do grupo controle atendeu as exigências de mantença para a categoria animal (100%), e a dos grupos de alta e baixa ingestão a 180% e 60% dos requerimentos de mantença, respectivamente. Amostras de sangue venoso foram colhidas para quantificação de progesterona, LH, insulina e leptina. Aos 60 dias de gestação oito fetos foram removidos por colpotomia (acesso via vaginal), pesados, os ovários dissecados e pesados. Os ovários (um de cada par) foram submetidos ao RNA-Seq. Observou-se que o status nutricional materno durante os primeiros 60 dias de gestação influenciou: o perfil hormonal de progesterona, insulina e leptina, que foi menor nos animais do grupo de baixa ingestão; a relação peso ovariano/peso corporal dos fetos do grupo de alta ingestão que foi maior comparada aos demais; o padrão de expressão gênica nos ovários entre os fetos dos grupos controle, alta e baixa ingestão. Concluímos que mudanças na nutrição materna durante os primeiros 60 dias de gestação podem alterar o desenvolvimento fetal e o perfil transcriptômico dos ovários fetais / Abstract:Environmental influences such as nutritional restriction during early gestation may impair fetal development and compromise functions in adulthood. Ovarian development occurs during early gestation. We hypothesized that restriction or excess of nutrients ingested by cows during the first 60 days of pregnancy affects fetal body weight and ovarian development. Fifty uniparous Nelore cows were subjected to Timed Artificial Insemination with sexed semen (female) of a single bull and individually allocated on different diets. The diet used for the control group met the maintenance requirements and the groups with high and low either 180% or 60% of maintenance, respectively. Venous blood samples were collected for plasma progesterone, LH, insulin and leptin quantification. At 60 days of gestation, eight fetuses were removed by colpotomy (accessed through the vagina), weighed, ovaries were dissected and weighed. One fetal ovary (of each pair) was used for transcriptional analysis by RNA-seq. It was observed that maternal nutritional status during the first 60 days of gestation: 1) progesterone, insulin and leptin levels which were lower in the group with low; 2) the relative ovarian weight / body weight of fetuses in the high intake group was higher compared to the others groups; 3) ovarian gene expression patterns differedbetween control, high and low groups. Thus, we conclude that changing maternal nutrition during the first 60 days of gestation affects the development and transcriptomic profile of fetal ovaries / Orientador:Guilherme De Paula Nogueira / Banca:Daniel de Jesus Cardoso de Oliveira / Banca:Flávia Lombardi Lopes / Banca:Alexandre Mendonça Pedroso / Banca:Juliana Regina Peiró / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-18Bitstream added on 2014-08-13T18:01:08Z : No. of bitstreams: 1 000738215.pdf: 2151140 bytes, checksum: 2b05dbf911b2b43a03712abe9d9a4c86 (MD5) / A citricultura é uma das principais atividades do agronegócio brasileiro, porém o aumento de doenças na última década tem causado grandes prejuízos a toda a cadeia produtiva. A doença cancro cítrico, causada pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é um grave problema para o setor, não havendo até o momento método eficaz para o seu controle. Nesse estudo, utilizando RNASeq, foram analisados os perfis transcricionais de dois genótipos hospedeiros contrastantes à doença: laranja doce Pêra-Rio (PR) moderadamente resistente, e Lima Ácida Galego (LG), altamente suscetível, 24, 48 e 72 horas após a infecção com Xac, no intuito de identificar genes das plantas envolvidos na interação patógeno-hospedeiro. Foram encontrados 6.330, 3.478 e 6.795 genes diferencialmente expressos (GDEs) na espécie moderadamente resistente PR, 24, 48 e 72 horas após a inoculação com Xac, respectivamente, quando comparados com seus controles. Na espécie altamente suscetível Limão Galego foram identificados 1.491, 5.621 e 2.145 GDEs após 24, 48 e 72 horas da inoculação com Xac, respectivamente. Através do programa Blast2GO, genes e vias metabólicas de fotossíntese, sinalização celular, síntese hormonais, fatores de transcrição, entre outros, foram encontrados. Esse estudo revelou diferenças associadas à resistência e desenvolvimento a nível molecular em PR e LG em resposta ao cancro cítrico, demonstrando que na espécie moderadamente resistente há uma maior ativação dos mecanismos de defesa. Tais estudos podem ser utilizados para o desenvolvimento de plantas de citros com adequado nível de resistência ao cancro cítrico / The citrus agribusiness is very important to the Brazilian economy, but the increase of diseases in the last decade has caused great economic losses to the sector. The citrus canker, caused by the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), is a serious disease that attacks all citrus species economically important worldwide and there is not an effective method for its control. In this study, RNASeq was used to analyze the transcriptional profiles of two contrasting citrus genotypes regarding citrus canker susceptibility: sweet orange Pêra Rio (PR), moderately resistant, and Mexican lime ‘Galego´ (ML), highly susceptible. Gene expression were performed in a HiScanSQ System (Illumina) using total RNA isolated from leaves collected 24, 48 and 72 hours after Xac inoculation, with leaves inoculated with water been used as control. It were found 6,330, 3,478 and 6,795 differentially expressed genes (DGEs) in moderately resistant PR specie at 24, 48 and 72 hours after Xac inoculation, respectively, when compared with their controls. In the specie highly susceptible ML, it was identified 1,491, 5,621 and 2,145 DGEs after 24, 48 and 72 hours after Xac inoculation, respectively. Through the program Blast2GO, genes and metabolic pathways related to photosynthesis, cell signaling, hormone synthesis, transcription factors, among others, were found as involved in plant defense. This study revealed differences at the molecular level between PR and ML in response to citrus canker, showing that in the specie moderately resistant there is a greater activation of host defense mechanisms. Such informations can be used for the development of citrus plants with an adequate level of resistance to citrus canker

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-12Bitstream added on 2014-08-13T18:01:36Z : No. of bitstreams: 1 000741724_20141201.pdf: 197926 bytes, checksum: ac91e5d8eb4d509b8ea2984eab3e732a (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-02T13:27:21Z: 000741724_20141201.pdf,Bitstream added on 2014-12-02T13:27:59Z : No. of bitstreams: 1 000741724.pdf: 972060 bytes, checksum: 9c1d21f7846078e519f3d9100e012d54 (MD5) / Nas últimas décadas, a incidência de indivíduos com sobrepeso ou obesos vem aumentando exponencialmente. Hoje, a obesidade é considerada pela Organização Mundial da Saúde como uma epidemia mundial, com graves consequências que podem levar à morte. A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve fatores hereditários, ambiente e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas estão principalmente relacionadas à presença de co-morbidades como a hipertensão arterial, diabetes tipo II, doenças cardiovasculares e vários tipos de câncer. Portanto, o controle da obesidade é um desafio para a manutenção da saúde humana, atraindo o interesse de inúmeros pesquisadores que buscam o entendimento dos mecanismos associados ao seu desenvolvimento, bem como novos métodos terapêuticos e de prevenção. Com base nessas premissas, o presente estudo objetivou avaliar a associação entre alterações genéticas e a obesidade, com especial foco para a presença de danos no DNA e para o perfil de expressão e polimorfismos gênicos. A casuística do estudo incluiu 300 mulheres cadastradas na lista de espera para a realização de cirurgia bariátrica e 300 mulheres saudáveis, eutróficas, pareadas por idade. O teste do cometa foi utilizado para avaliação de danos primários no DNA de células sanguíneas; os polimorfismos dos genes da grelina (GHRL)e leptina (LEP)e dos seus receptores (GHSR e LEPR), da interleucina 6(IL-6) e da serotonina (5-HT2C) foram analisados pela técnica de RT-PCR; o perfil de expressão gênica em linfócitos foi avaliado pela metodologia do DNA microarray e a expressão dos genes adiponectina (ADIPOQ) e leptina (LEP) em adipócitos foi avaliada pela técnica de qRT-PCR. Os resultados mostraram que a frequência dos polimorfismos dos genes GHRL(rs26802), GHRS(rs572169), LEP(rs7799039), LEPR(rs 1137101), IL-6 (rs1800796) e 5-HT2C ... / In the last decades, the incidence of overweight and obesity has increased worldwide. Nowadays, obesity is considered by the World Health Organization as a global epidemic with severe consequences that can lead to death. Obesity is a multifactorial disorder which involves different factors such as genetic, environment and life style, and its consequences are not only social or psychological, but are also related to the presence of comorbidities such as hyperthension, type 2 diabetes, heart diseases and many types of cancer. Therefore, obesity control has become a challenge for the human health maintenance, catching the attention of researchers that are trying to understand the mechanisms associated to its development, as well as therapeutical and preventive methods. Based on the information above, the present study aimed to evaluate the association between genetic alterations and obesity, with special focus on the presence of DNA damage, gene expression profiling and genetic polymorphisms. Our study included 300 morbid obese women registered for the bariatric surgery and 300 healthy eutrophic women, matched by age. The comet assay was used to assess primary DNA damage in blood cells; the genetic polymorphisms of ghrelin (GHRL), leptin (LEP) and their receptors (GHSR and LEPR), interleukin-6 (IL-6) and serotonin receptor (5-HT2C) were evaluated by the RT-PCR; gene expression profiling in lymphocytes was assessed by DNA microarrays; and adiponectin (ADIPOQ) and leptin (LEP) gene expression in adipocytes were evaluated by qRT-PCR. Our results showed that the frequencies of GHRL (rs26802), GHRS (rs572169), LEP (rs7799039), LEPR (rs 1137101), IL-6 (rs1800796) and 5-HT2C (rs 3813929) polymorphisms were not different between obese and control groups. However, obese presented higher levels of primary DNA damage (single and double strand breaks, alkali-labile sites and oxidative damage) than eutrophic women, indepedent on ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-19Bitstream added on 2014-08-13T18:01:35Z : No. of bitstreams: 1 000742882.pdf: 1109001 bytes, checksum: 8541a66a007dafecd4081452f2930cc6 (MD5) / O câncer gástrico é mundialmente a segunda causa de morte por câncer. No Brasil está entre os cinco neoplasias mais incidentes, mostrando-se como um grave problema de saúde pública. O conhecimento do padrão de expressão gênica de genes supressores tumorais e protooncogenes é fundamental para o esclarecimento dos mecanismos desta carcinogênese. O gene FOXE1 (forkhead box E1) pertence a uma grande família de fatores de transcrição envolvidos em processos de crescimento e diferenciação celular. Pesquisas recentes têm demonstrado o papel determinante de FOXE1 na gênese de certos tipos de neoplasias. Assim, a análise da expressão gênica de FOXE1 em amostras de tumores gástricos faz-se necessária para esclarecer seu possível envolvimento neste carcinogênese. O DNA foi extraído de 89 amostras de tumores gástricos, com seus respectivos tecidos normais adjacentes. Após o tratamento com bissulfito de sódio, o padrão de metilação foi determinado por PCR específica para metilação (MSP-PCR) com a visualização dos resultados em poliacrilamida 6% corado com nitrato de prata. 86,5% das amostras apresentaram metilação em FOXE1, sendo o mesmo padrão encontrado em tecidos normais adjacentes 74,2%. Não houve significância estatística quando os resultados foram agrupados de acordo com o sexo, tipo histológico e estadiamento. A expressão gênica foi avaliada através de qPCR para 13 dos 89 pacientes incluídos no estudo. Obteve-se para cada paciente a razão (T/N) comparando a expressão gênica da amostra de tecido tumoral (T) em relação à expressão do tecido normal adjacente ao tumor (N). 8 amostras (61,5%) apresentaram um aumento da expressão do FOXE1, com uma média de 1,6. Dentre as 5 (38,5%) amostras com QR abaixo de 1, isto é, com expressão do FOXE1 abaixo do tecido normal, a média foi de 0,7. Quanto à concordância entre o estado de metilação em FOXE1 e a sua expressão ...