A atresia biliar (AB) é uma doença da infância caracterizada por uma colangiopatia esclerosante progressiva que leva à obstrução biliar. O tratamento de escolha é a portoenterostomia, cujo prognóstico é relacionado à idade do paciente na época da cirurgia e a variáveis histológicas como a extensão da fibrose e da reação ductular. O espessamento da túnica média (TM) sugere uma arteriopatia na patogenia da AB. Nós avaliamos a expressão do sistema angiopoietinas (ANGPT)/receptor tirosinaquinase com domínios imunoglobulina e EGF(endotelial growth fator) like (Tie2) no fígado de pacientes com AB e com colestase intra-hepática (CIH), correlacionando com espessamento da TM, com variáveis associadas a gravidade da doença e com o prognóstico pós operatório. Métodos - A expressão da ANGPT1, ANGPT2 e Tie2 foi feita com o método de PCR quantitativo em amostras de fígado obtidas de pacientes com AB (n23) na ocasião da portoenterostomia e de crianças de idade semelhante com CIH (n7). As variáveis histológicas foram analisadas por método morfométrico. Resultados - A ANGPT1 e a ANGPT2 apresentaram expressão aumentada no grupo com AB em comparação com o grupo com CIH (P=0,024 e P=0,029, respectivamente). No grupo com AB, a expressão das ANPTs correlacionouse positivamente com a espessura da TM (ANGPT1: rs=0,59, P=0,013; ANGPT2: rs=0,52, P=0,032) e não teve correlação com variáveis associadas a gravidade da doença. O Tie2 e as ANGPTs correlacionaram-se negativamente (ANGPT1: rs=-0,73, P<0,001; ANGPT2: rs=-0,54, P=0,007). Conclusão - Na AB há uma expressão aumentada da ANGPT1 e da ANGPT2 e uma correlação positiva desta expressão com a espessura da TM, mas, não com a idade na ocasião da portoenterostomia ou com variáveis histológicas associadas com a gravidade da doença na época do procedimento. / Background- Biliary atresia (BA) is an infantile disorder characterized by progressive sclerosing cholangiopathy leading to biliary obstruction. First line treatment of BA is hepatoporto-enterostomy, whose prognosis is related to age at surgery and to histologic variables such as extent of fibrosis and ductular reaction. Hepatic arterial medial thickening (MT) suggests an arteriopathy in BA pathogenesis. We evaluated the expression of angiopoietin (ANGPT)/tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2 (Tie2) system in livers from patients with BA, correlating with MT, variables associated with disease severity and postoperative prognosis. Methods- ANGPT1, ANGPT2 and Tie2 expressions were assessed by qPCR in liver samples obtained from BA patients (n=23) at portoenterostomy and age-matched infants with intrahepatic cholestasis (IHC, n=7). Histologic variables were morphometrically assessed. Results- ANGPT1 and ANGPT2 were overexpressed in BA in comparison with IHC (respectively, P=0.024 and P=0.029). In BA, ANGPTs′ expression was positively correlated with MT (ANGPT1:rs=0.59, P=0.013; ANGPT2:rs=0.52, P=0.032), not with variables associated with disease severity. Tie2 and ANGPTs′ expressions were negatively correlated (ANGPT1: rs=-0.73, P<0.001; ANGPT2: rs=- 0.54, P=0.007). Conclusion- In BA there is overexpression of both ANGPT1 and ANGPT2 correlated with MT but not with age at portoenterostomy or with the histological variables associated with disease severity at the procedure.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:27:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8488_1.pdf: 2670534 bytes, checksum: d94f38cd7b3933a4afb88c678a996cd8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / As ressecções hepáticas são consideradas o único tratamento potencialmente curativo para tumores hepáticos primários e metastáticos, o que gerou um aumento no número de indicações de ressecções hepáticas. Assim, há a necessidade de técnicas que propiciem uma maior preservação de parênquima hepático, bem como maior segurança na realização dessas cirurgias. O acesso glissoniano intra-hepático destaca-se como uma técnica de abordagem aos pedículos intra-hepáticos que cumpre tais objetivos. A realização bem sucedida da técnica glissoniana intrahepática, demanda uma compreensão tridimensional da anatomia hepática, aliada a um nível de destreza motora cuja obtenção só é conseguida através de treinamento. O treinamento de cirurgiões está ligado à melhoria de resultados em vários procedimentos cirúrgicos, incluindo as ressecções hepáticas. Programas de treinamento habituais são insuficientes para a formação do cirurgião hepático. Assim, a melhor saída para atingir o volume de procedimentos necessário, bem como desenvolver as habilidades motoras específicas, é a utilização de modelos experimentais em laboratórios de cirurgias. O presente estudo visa desenvolver um modelo animal de treinamento de ressecções hepáticas com acesso glissoniano intra-hepático. Foi inicialmente realizada dissecção de fígados separados de porco para revisão da anatomia segmentar. Após o conhecimento anatômico procedeu-se ao isolamento dos segmentos hepáticos pelo acesso glissoniano intra-hepático em oito animais anestesiados, associado à ressecção segmentar. O isolamento dos segmentos 2, 3, 4, 5 e 6 foi possível em todos os animais. O segmento 1 não foi isolado em nenhum animal. Houve impossibilidade do isolamento individual do segmento 8. Houve ainda falha no isolamento do segmento 7 em dois animais.Conclui-se que o acesso glissoniano intra-hepático em porcos é técnica simples e reprodutível, o que o torna um modelo animal viável para treinamento de ressecções hepáticas com esse acesso

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-06-21T20:00:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aiany Cibelle Simões Alves.pdf: 3172261 bytes, checksum: dc76039f3a1b706df1a8bc91b57f56af (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-21T20:00:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aiany Cibelle Simões Alves.pdf: 3172261 bytes, checksum: dc76039f3a1b706df1a8bc91b57f56af (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / CAPES / Inibidores seletivos de recaptação de serotonina (ISRS) são uma classe de antidepressivos como a fluoxetina, citalopram, sertralina entre outros, que são prescritos para mulheres grávidas e lactantes para o tratamento de depressão, expondo fetos e crianças a droga durante períodos críticos de desenvolvimento. Estudos recentes demonstraram que a exposição ao tratamento com fluoxetina induz a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio (EROs) e altera as defesas antioxidantes em vários tecidos, principalmente no fígado. Quando a fluoxetina é administrada por via intraperitoneal, o fármaco atinge rapidamente concentrações elevadas no fígado, que pode ter múltiplos efeitos potencialmente tóxicos no metabolismo energético mitocondrial hepático. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento farmacológico com fluoxetina durante a lactação na bioenergética mitocondrial e estresse oxidativo no fígado de ratos adultos. Para realizar este estudo, filhotes de ratos do 1º ao 21º dia pós-natal foram tratados com fluoxetina (grupo Fx) ou veículo (grupo controle, Ct). Foi avaliado o consumo de oxigênio mitocondrial, o controle respiratório, a produção mitocondrial de espécies reativas, integridade de membrana mitocondrial, biomarcadores de estresse oxidativo (malondealdeido-MDA, carbonilas e níveis de grupamentos sulfidrilas-SH), atividade de enzimas antioxidantes (atividade da superóxido dismutase-SOD, catalase-CAT e glutationa S-transferase-GST) e níveis de glutationa reduzida (GSH) no fígado de ratos machos aos 60 dias de idade. Nossos resultados mostraram, que o tratamento com Fx durante o período crítico do desenvolvimento resultou em peso corporal reduzido, melhora da capacidade respiratória mitocondrial, menor inchamento mitocondrial, diminuição de biomarcadores de estresse oxidativo (305% MDA, *p<0,05), aumento nos níveis de grupamentos sulfidrilas-SH (14% nos níveis de SH, *p<0,05) e aumento de defesas antioxidantes enzimáticas (115% SOD, *p<0,05; 94% CAT, **p<0,01 e 13% GST, *p<0,05), no fígado de ratos adultos. Nossos resultados sugerem que o tratamento farmacológico com fluoxetina durante um período crítico do desenvolvimento pode melhorar a capacidade respiratória mitocondrial e o metabolismo oxidativo do fígado de ratos na vida adulta. / Selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs) are a class of antidepressants such as fluoxetine, citalopram, sertraline among others, which are often prescribed for treated and lactating women for the treatment of depression. Recent studies have shown that treatment with fluoxetine induces excessive production of reactive oxygen species (ROS) and changes as antioxidant defenses in various tissues, especially in the liver. When a fluoxetine is administered intraperitoneally, the drug rapidly elevates concentrations in the liver, which may have multiple potentially toxic effects not hepatic mitochondrial energy metabolism. The aim this study was to evaluate the effects of the pharmacological treatment with fluoxetine during lactation on the mitochondrial bioenergetics and oxidative stress in liver of adult rats. To perform this study, pups of rats from the 1st day to the 21st postnatal day treated with fluoxetine (Fx group) or vehicle (control group, Ct). We evaluated the mitochondrial oxygen consumption, a respiratory control ratio, a mitochondrial production of reactive species, mitochondrial membrane integrity, oxidative stress biomarkers (Malondialdehyde-MDA, carbonyls and SH-sulfhydryl group levels) and activity of antioxidant enzymes (superoxide dismutase-SOD, catalase-CAT and glutathione Stransferase-GST activity) and reduced glutathione levels (GSH) no liver of rats at 60 days of age. Our results showed that Fx treatment during the critical period of development resulted in reduced body weight, improved mitochondrial respiratory capacity, integrated and resistant mitochondrial membrane, decreased biomarkers of oxidative stress (305% MDA, *p<0,05), increased levels of sulfhydryl-SH groups (14% in SH levels, *p<0,05) and increased enzymatic antioxidant (115% SOD, *p<0,05; 94% CAT, **p<0,01 e 13% GST, ;*p<0,05) in the liver of adult rats. Our results suggest that pharmacological treatment with fluoxetine during critical periods of development may improve mitochondrial respiratory capacity and result in persistent changes in liver energy metabolism during later life.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-06-06T14:50:40Z No. of bitstreams: 1 Suellen Maria Costa da Silva.pdf: 2010153 bytes, checksum: 606dd503d5c00cbed78428c8fe3a43da (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T14:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suellen Maria Costa da Silva.pdf: 2010153 bytes, checksum: 606dd503d5c00cbed78428c8fe3a43da (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this study is to evaluate the liver of sheep fed with forage palm varieties through histological and morphometric evaluations. The experiment was carried out in the Goats and Sheep Sector of the Department of Zootechny of the Federal Rural University of Pernambuco. It was used 40 male sheep with no defined racial pattern, mean body weight of 21.01 ± 2.01 kg and average age of 6 months. The use of the animals was approved by the Committee for Ethics in Animal Experiments (CEUA) (license number: 053/2015). They were distributed in a completely randomized design with 4 treatments and 10 replications, housed in individual stalls equipped with individual feeders and drinking fountains. The experimental treatments were a base diet, composed of elephant grass hay in a partial replacement by small spineless cactus, Orelha of elefante mexicana and IPA-Sertânia. For light microscopy studies, the fragments were processed for inclusion in paraffin, 5 μm thick histological sections were stained in standard staining (HE) and two special stains, PAS and Gomori trichrome. For the hepatic parenchyma morphometry, the relative density (%) was calculated by a total of 4000 points on the histological preparations, per animal. Two palm genotypes had hydrocyanic acid in their composition. Consumption of DM, OM, PB, NDF, NDT, liver weight, body weight at slaughter, alkaline phosphatase enzyme, glucose and cholesterol were higher in animals fed on forage palm. All treatments showed coagulation necrosis and portal triad congestion, and OEM and IPA were different for bile duct. It can be concluded that the use of forage palm in the feed of sheep up to 70 days of confinement does not cause apparent damages to the liver of the animals, the presence of HCN causes coagulation necrosis of lobular pericenter and congestion of the hepatic portal triad. / Objetivou-se avaliar através de estudos histológicos e morfométricos, o fígado de ovinos alimentados com variedades de palma forrageira. O experimento foi realizado no setor de caprinos e ovinos do departamento de Zootecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco, foram utilizados 40 ovinos, machos, sem padrão racial definido, inteiros, com peso corporal médio de 21,01 ± 2,01 kg e média de idade de 6 meses. O uso dos animais foi aprovado pelo comitê de ética para utilização de animas com a Licença de n° 053/2015. Foram distribuídos em Delineamento Inteiramente Casualizado com 4 tratamentos e 10 repetições, foram alojados em baias individuais, providas de comedouros e bebedouros individuais. Os tratamentos experimentais consistiram de uma dieta base, composta por Feno de Capim Elefante em substituição parcial por palma forrageira Miúda, Orelha de Elefante Mexicana e IPA-Sertânia. Para os estudos ao microscópio de luz, os fragmentos foram processados para inclusão em parafina, os cortes histológicos de 5 μm de espessura foram corados em método de coloração padrão (HE) e dois corantes especiais, PAS e Tricrômico de Gomori. Para a morfometria do parênquima hepático, foi contabilizado um total de 4000 pontos por animal e transformados em densidade relativa (%). Dois genótipos de palma apresentaram ácido cianídrico em sua composição. Os consumos de MS, MO, PB, FDN, NDT, o peso do fígado, o peso corporal ao abate, a enzima fosfatase alcalina, a glicose e o colesterol foram maiores nos animais que receberam palma forrageira. Todos os tratamentos apresentaram necrose de coagulação e congestão da tríade portal, e OEM e IPA foram diferentes para ducto biliar. Conclui-se que o uso de palma forrageira na alimentação de ovinos até 70 dias de confinamento não causa danos aparentes ao fígado dos animais, a presença de HCN causa necrose de coagulação pericentro lobular e congestão da tríade portal hepática.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-27T13:38:00Z No. of bitstreams: 1 Nathalia Ianatoni Camargo Rodrigues Magalhães.pdf: 1372162 bytes, checksum: c50d2ba054279db5b9f4a4852797ac43 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-27T13:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nathalia Ianatoni Camargo Rodrigues Magalhães.pdf: 1372162 bytes, checksum: c50d2ba054279db5b9f4a4852797ac43 (MD5) Previous issue date: 2016-02-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Despite the beneficial effects of prednisolone little literature addresses the side effects of steroid therapy in cats. Computed tomography (CT) is a radiological method that has applicability in the diagnosis of changes in attenuation of hepatic parenchyma in Hounsfield units (HU). In humans it is considered important to the attenuation values in HU for the diagnosis and monitoring of patients with diseases that alter the density of the hepatic parenchyma, such as steatosis and glycogen storage. However, the lack and the divergence of previous studies limit their clinical application in cats. The objective of this study was to establish normal values of liver x-ray attenuation in healthy cats and verify possible changes in the liver by CT cats submitted to prednisolone. Therefore a study was initially performed to obtain average values of attenuation of the liver and spleen of adult-20 young healthy cats, and also establish a relationship between these organs of the radiodensity (L / S), as described in humans. The average attenuation value of the hepatic parenchyma in the experimental group was 52.81 ± 3.37 Hu, being discretely hyperattenuating liver compared to spleen. The ratio F / B was 1.03 ± 0.04 HU. Then a clinical trial was performed in four healthy cats which received prednisolone per orally at a dose of 3mg / kg for 60 consecutive days. In addition to CT, laboratory tests and histopathology were performed before starting prednisolone and end of the experiment. Laboratory tests found a statistically significant difference (p <0.05) between days 0 and 60 for alanine aminotransferase variables (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and glucose. Histopathological findings of the final phase of the experiment was observed vacuolar degeneration, disarrangement of cords of hepatocytes, and hepatocytes necrosis signals. The CT data show increasing degree of attenuation of hepatic parenchyma from the thirtieth day of the corticosteroid prednisolone, a fact which persisted until the end of the experiment. This emphasizes the importance of monitoring cats that make use of prednisolone, even for a short period of time because it was possible to verify the existence of liver disease steroid in cats treated with corticosteroids in therapeutic dose lasting 60 days, observing increased liver x-ray attenuation, increased serum activity of ALT and AST, hyperglycemia, and histopathological changes as vacuolar degeneration and necrosis of hepatocytes. / Apesar dos efeitos benéficos da prednisolona a literatura pouco aborda os efeitos colaterais da corticoterapia em gatos. A tomografia computadorizada (TC) é um método radiológico que apresenta aplicabilidade no diagnóstico de alterações da atenuação do parênquima hepático em unidades Hounsfield (HU). Em humanos é considerado importante os valores da atenuação em HU para o diagnóstico e monitoramento de pacientes com enfermidades que alteram a densidade do parênquima hepático, tais como esteatose e glicogenose. No entanto, a carência e a divergência de estudos prévios limitam sua aplicação clínica em gatos. O objetivo deste estudo foi estabelecer valores de normalidade da atenuação radiográfica hepática em gatos hígidos e verificar possíveis alterações do fígado através da TC de gatos submetidos à prednisolona. Para isso foi realizado inicialmente um estudo para obter valores médios de atenuação do fígado e baço de 20 gatos adultos-jovens saudáveis, e também estabelecer uma relação da radiodensidade entre esses órgãos (F/B), como descrito em humanos. O valor médio de atenuação do parênquima hepático no grupo experimental foi 52,81 ± 3,37 HU, estando o fígado discretamente hiperatenuante quando comparado com o baço. A relação F/B foi de 1,03 ± 0,04 HU. Em seguida um ensaio clínico foi realizado em quatro gatos hígidos, os quais receberam prednisolona por via oral na dose de 3mg/kg pelo período de 60 dias consecutivos. Além da TC, foram realizados exames laboratoriais e histopatológico antes de iniciar a prednisolona e no final do experimento. Nos exames laboratoriais verificou-se diferença estatística significativa (p < 0,05) entre os dias 0 e 60 para as variáveis alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e glicose. Nos achados histopatológicos da fase final do experimento, observou-se degeneração vacuolar, desorganização dos cordões de hepatócitos, além de sinais de necrose de hepatócitos. Os dados da TC demonstram aumento do grau de atenuação do parênquima hepático a partir do trigésimo dia da corticoterapia com prednisolona, fato que persistiu até o final do experimento. Ressalta-se a importância do monitoramento de gatos que fazem uso da prednisolona, mesmo por curto período de tempo, pois foi possível constatar a existência de hepatopatia esteroidal em gatos tratados com corticoide em dose terapêutica com duração de 60 dias, observando-se aumento da atenuação radiográfica hepática, aumento da atividade sérica da ALT e AST, hiperglicemia, além de alterações histopatológicas como degeneração vacuolar e necrose de hepatócitos.

Orientadores: Elza Cotrim Soares, Maria Aparecida Mesquita / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T02:56:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wyszomirska_RozangelaMariadeAlmeidaFernandes_D.pdf: 7125375 bytes, checksum: 3ee76f7cc2429d7c6443f7b1d20a9199 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A fibrose hepática resulta de um desequilíbrio entre deposição e remoção de componentes da matriz extracelular, sendo sua degradação mediada por metaloproteinases, e estas são reguladas por inibidores fisiológicos (TIMPs). Alterações no baço de indivíduos portadores de esquistossomose mansoni poderiam contribuir para a acentuação da fibrose hepática bem como da ativação de TIMPs, não estando esses aspectos totalmente esclarecidos. O objetivo desse estudo foi avaliar o comportamento de marcadores séricos de fibrose hepática, o TIMP-l e o colágeno tipo IV em pacientes portadores da forma hepatoesplênica da Esquistossomose mansoni submetidos à esplenectomia. Foram incluídos 24 pacientes com idade que variou de 14 a 61 anos (36,92i:13,59 anos), sendo 17 do sexo masculino e sete do sexo feminino. Os níveis séricos de TIMP-I e colágeno IV foram determinados por método imunoenzimático sanduíche (EIA), no pré-operatório (PRÉ), e nos 2° (POl) e 600 (P02) dias após esplenectomia. Antes da esplenectomia, os níveis séricos do colágeno tipo IV e do TMP-I estavam elevados (175,04i:1l2,84ng/ml e 8I2,56i:861,31ng/ml, respectivamente). Após esplenectomia, a média dos valores de colágeno tipo IV revelou uma diminuição significante da média dos valores, em relação ao PO1 (113,98i:73,38ng/ml; p= 0,039) e em relação ao P02 {l09,53i:36.1ng/ml; p= 0,015). Níveis séricos de TIMP-I também mostraram uma significante diminuição em relação ao POI (245,08i:363,08ng/ml; p=0,008) e P02 (108,77i:1l2,05ng/ml; p= 0,001). Em adição, não foi encontrada diferença significante entre níveis séricos de PO 1 e P02, tanto para colágeno tipo IV (p= 0,061) como para TIMP-I (p= 0,145). Os nossos resultados mostram que após esplenectomia, ocorreu diminuição do TIMP-l e do colágeno tipo IV, que persistiu até o 60° dia. Estes resultados sugerem que o baço parece desempenhar um papel na regulação da fibrose hepática / Abstract: Hepatic fibrosis is a dynamic process that results in a net accumulation of extracellular matrix proteins and altered matrix degradation regulated by a family of enzymes called the matrix metalloproteinases and their inhibitors (TIMPs). The role of the spleen in the process of liver fibrosis in schistosomiasis still needs c1arification. The aim of this study was to assess the effect of splenectomy on serum levels of two markers of fibrosis, type IV collagen and TIMP-l, in patients with schistosomiasis mansom. Twenty-four patients with hepatosplenic schistosomiasis mansoni participated in the study. Type IV collagen and TIMP-l serum levels were measured preoperatively, and after two (POl) and 60 days (PO2) of spleen removal. Before splenectomy, both type IV collagen and TIMP-l serum levels were elevated (175,04j:112,84ng/ml e 812,56j:861,31ng/ml, respectively). After splenectomy, the levels of type IV collagen showed a significant decrease in relation to the preoperative values both in POl (113,98j:73,38ng/m1; p= 0,039) and PO2 (l09,53j:36.1ng/m1; p= 0,015). Serum levels ofTIMP-l also showed a significant decrease in relation to the preoperative values both in POl (245,08j:363,08ng/m1; p=0,008)and PO2 (l08,77j:112,05ng/ml; p= 0,001). There was no difference between POland PO2 values for each serum marker. In conc1usion, splenectomy in schistosomotic patients was associated to a decrease in serum markers of fibrosis levels, which persisted for at least 60 days. These results suggest that the spleen may play a role in the extracellular matrix production, and therefore may contribute to liver fibrosis in schistosomiasis mansoni / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Jorg Kobarg / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rui_Edmilson_D.pdf: 2734113 bytes, checksum: fe1cd8f79cba161393315108c9b5eef8 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A hepatite B constitui um grave problema de saúde pública. Dados epidemiológicos estimam que aproximadamente 350 milhões de pessoas são portadores do vírus da hepatite B (HBV). Admite-se que a infecção evolui para a cura em média 95% dos casos, entretanto nos portadores crônicos a infecção pode evoluir para cirrose e carcinoma hepatocelular (HCC). Há um crescente acúmulo de evidências que relaciona a proteína HBx do HBV ao desenvolvimento do HCC. A maioria dos estudos sobre a função da proteína HBx sugere que ela é uma proteína reguladora de funções pleiotrópicas com a capacidade de induzir o crescimento tumoral. Isso é possivelmente devido à sua capacidade de interagir com uma vasta gama de proteínas celulares. No presente estudo investigamos os aspectos moleculares da estrutura e função da proteína HBx e os resultados foram contextualizados no processo de transformação celular. Observamos pela primeira vez a capacidade da proteína HBx em se ligar ao RNA contendo seqüências ricas em adenina e uracila (AU), que são presentes em alguns proto-oncogenes como c-myc e c-fos. A geração de proteínas truncadas permitiu mapear a região de interação entre HBx e RNA. Realizamos ensaios de mutação sítio-dirigida em HBx e substituímos todas as cisteínas por serinas. Nossos resultados sugerem que as cisteínas na proteína HBx são de menor importância para a sua interação com o RNA e com as proteínas humanas p53 e RXR. Descobrimos ainda uma nova proteína humana que interage com HBx: E4F. Este fator de transcrição humano está relacionado com o controle do ciclo celular, com a segregação cromossômica e com a embriogênese. Ensaios em leveduras e in vitro mostraram que HBx selvagem, bem como as suas formas mutadas, foram capazes de interagir e regular a função de E4F, indicando um possível novo mecanismo para a transformação celular e a regulação da transcrição viral, uma vez que E4F exibiu uma capacidade de interagir com a região ¿enhancer II¿ do genoma do HBV / Abstract: Viral hepatitis is an important global public health problem. Epidemiological data show that worldwide 350 million people are chronically infected with the hepatitis B virus. About 95% of the infections cure spontaneously, but the chronically infected patients may develop liver cirrhosis or even hepatocellular carcinoma (HCC). A large body of evidence points to the viral onco-protein HBx as the principal cause for the cellular transformation. The majority of studies on HBx function suggest that it is a regulatory protein with pleiotropic functions and its capacity to induce tumor growth may be due to its ability to interact with a diverse array of cellular proteins. In the present study we investigated molecular and structural aspects of the function of the HBx protein in order to be able to shed light on the process of cellular transformation. We were able to demonstrate that HBx protein has the ability to bind to an AU-rich RNA sequences present in the mRNAs of certain proto-oncogenes such as c-myc and c-fos. The generation of truncated proteins allowed to map the region of interaction of HBx with the RNA. Furthermore, we performed site directed mutagenesis studies of HBx protein and substituted all of its cysteine residues with serines. Our data suggest that the cysteine residues in the HBx protein are of minor importance for its interaction with RNA, p53 and RXR proteins. Finally, we discovered in E4F a new human interacting protein partner for the HBx protein. The transcription factor E4F has been functionally implicated in the control of the cell cycle, the chromosomal segregation and embriogenesis. In studies using the yeast we further showed that wild-type HBx, as well as its mutated forms, can physically interact with the E4F protein and regulate its function. This indicates a possible new mechanism of cellular transformation and the regulation of the viral transcription, since the human protein E4F demonstrated the capacity to bind to the enhancer II region of the HBV genome / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-29T00:49:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fioravanti_JoseBenedito_M.pdf: 23192069 bytes, checksum: 1f1004f4d2f790dd03713a6d4bda22b4 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: o Citomegalovirus Humano (HCMV) é um dos mais importantes patógenos que acometem pacientes submetidos a transplante hepático, estando associado à alta morbidade e mortalidade. Atualmente faz-se necessário o emprego de técnicas laboratoriais que sejam rápidas, sensíveis e específicas,no diagnóstico do HCMV, a fim de ser instituído um tratamento antiviral o mais precoce possível. Neste estudo, foram feitas comparações entre duas técnicas laboratoriais distintas: a "Nested-PCR" e a antigenemia, avaliando a eficácia das mesmas na monitorização de infecção ativa e doença por HCMV, neste grupo de pacientes. Dessa maneira, foram pesquisados pacientes submetidos a transplante hepático no Hospital de Clínicas da FCM/UNICAMP, desde antes do transplante até seis meses após o ato cirúrgico, tanto em ambiente hospitalar, quanto ambulatorial. Posteriormente, foi feita uma análise das duas metodologias diagnósticas utilizadas, comparando-as quanto à sua eficácia. Foram avaliados 27 pacientes, de setembro de 1998 a janeiro de 2.001, acompanhando o doador no pré-transplante, e o receptor até, no mínimo, 180 dias após a cirurgia. Realizaram-se 12 coletas de sangue de cada paciente receptor, sendo essas coletas: semanais durante o primeiro mês; quinzenais, nos segundo e terceiro mês, e mensais posteriores até o sexto mês. Conforme dados anteriores na literatura confirmados por este trabalho, a cirrose hepática provocada pelo vírus C foi o principal fator etiológico (55,55%) do transplante hepático, sendo que a cirrose alcoólica aparece como segundo maior (29,63%). Foi observado no pré transplante que, dos 27 pacientes, 92% dos transplantados já haviam tido contato anterior com o HCMV (Sorologia IgG positiva), 15% dos receptores apresentaram "Nested-PCR" positiva e 5% Antigenemia positiva. Segundo os critérios de infecção ativa, 25/27 (92%) dos pacientes apresentaram infecção ativa, sendo que em 12/27 (44%) destes, foram acompanhadas manifestações clínicas compatíveis com HCMV doença, sendo a febre (72%), e a mialgia (43%) as mais comuns, tendo também alterações das enzimas hepáticas (57%) e leucopenia (11%). o trabalho demonstra que a "Nested-PCR" se positiva, em média, com 47 dias pós-transplante, precedendo em 20 dias as manifestações clínicas, enquanto que a Antigenemia, se positiva, em média, após 85 dias do transplante. Dos pacientes estudados, cinco evoluiu a óbito, e destes, três com manifestações clínicas de doença pelo HCMV. Em conformidade com estudos anteriores, a doença pelo HCMV, nos pacientes transplantados hepáticos estudados ocorreu nos três primeiros meses pós-transplante. Deste modo, releva-se a importância clínica da detecção precoce do HCMV em pacientes transplantados hepáticos, e que as técnicas da "Nested-PCR" e da Antigenemia, empregadas neste trabalho, se mostraram adequadas para a monitorização destes pacientes em relação à infecção pelo HCMV / Abstract: The human cytomegalovirus (HCMV) is one of the most important pathogens that undertakes hepatic transplantation patients, with a high mortality and morbidity, being its early diagnosis by means laboratorial tests such as PCR and Antigenemia, a primary issue. In our study we assisted 27 patients ftom September 1988 to January 2001, performing serological techniques (ELISA), PCR and Antigenemia in the pretransplantation patients and two Iast tests in the follow up at least, 150 days in the post-transplantation. It was observed that among the 27 patients, 92% had a already had a previous contact with HCMV (IgG positive in the pre-transplantation). Also 15% presented a positive PCR, and only 5% presented a positive Antigenemia before transplantation. According to previous data, and confirmed by this research, the hepatic cirroshis caused by the virus C was the main cause (59%) for hepatic transplantation, from which 40% appears as an isotaded form, including that the alcoholic cirrhosis appearing as the second highest incidence (33%), 14% as an isolated form. Our research shows that PCR test becomes positive it takes around 47 days after transplant, as the Antigenemiatest takes nearly 85 days. In accordance with active infection standards, 92% (25/27) of the patients presented an active infection course, by of which 44% (12/27) were followed by clinical manifestations consistent with the HCMV disease. The most common clinical symptoms were fever (72%) and myalgia (43%), followed by hepatic enzymes alterations (57%) and leukopenia (11%). Among the analysed patients, 05 decreased and wich, 03 of them (60%) had clinical manifestation of the HCMV disease. In conformity with previous data, the HCMV disease in hepatic transplantation patients occurred in the first 3 months after transplantation. Thus we have demonstrated the clinical importance of the early detection of HCMV in hepatic transplantation patients and that HCMV infection is a frequent problem in hepatic transplant patients in Brazil, with significant clinical complications / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Licio Augusto Velloso / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morari_Joseane_M.pdf: 1671782 bytes, checksum: ebca1c2f8d19c88433316cd9134da3a3 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Insuficiência hepática causada por cirrose decorrente da progressão da esteato-hepatite não alcoólica é hoje uma das principais indicações para transplante hepático no mundo. A ingestão de dietas ricas em lípides é uma das principais causas de esteato-hepatite não alcoólica, e, uma vez estabelecida, poderá ou não evoluir para cirrose, dependendo da ativação de uma resposta inflamatória local. Nem todos os indivíduos que desenvolvem esteatose progridem para a esteato-hepatite. Acredita-se que, dentre os fatores que desempenham papel protetor na progressão para a esteato-hepatite e, por conseguinte, para a cirrose, encontra-se o equilíbrio entre a expressão de citocinas pró- e anti-inflamatórias no fígado. Níveis locais elevados da citocina anti-inflamatória IL-10 reduzem a resistência hepática à insulina e diminuem o risco de desenvolvimento de esteato-hepatite. Em estudos recentes observamos que a inibição da atividade da IL-10 em um modelo animal de esteato-hepatite induzida por dieta contribui para a piora da disfunção hepática. Por outro lado, a redução da expressão do co-ativador de transcrição gênica PGC-1a reverte a esteatose hepática induzida por dieta. Tal reversão é acompanhada pela modulação da expressão de IL-10 e de seu receptor, IL-10R. No presente estudo avaliamos se o PGC-1a?interage com dois fatores de transcrição que participam do controle da expressão de IL-10, c-Maf e NF?Bp50. Para tal utilizamos as técnicas de imunoblot, imunoprecipitação, imunocitoquímica, histologia convencional e imunoprecipitação de cromatina. Os nossos resultados revelam que o PGC-1a?se associa a ambos, c-Maf e p50, após estímulo por ácidos graxos saturados e insaturados. Tal associação ocorre em paralelo ao aumento da expressão de IL-10 e se acompanha da migração de todas as três proteínas de uma localização preferencialmente citosólica para o interior do núcleo de hepatócitos. Além disso, sob estímulo por ácidos graxos, as três proteínas se ligam ao DNA do promotor do gene da IL-10, numa região localizada entre as bases -493 e -254, antes do códon iniciador do gene. Pelo menos a associação de PGC-1a?com p-50 e a indução da expressão de IL-10 por ácidos graxos pode ser inibida pela pré-exposição de hepatócitos ao ácido acetil salicílico, um inibidor da enzima ativadora do NF?B. Portanto, PGC-1a?interage com dois fatores de transcrição e com o DNA da região promotora do gene da IL-10 e emerge como potencial regulador da expressão de IL-10 no fígado. / Abstract: Interleukin-10 (IL-10) is an endogenous factor that restrains hepatic insulin resistance in diet-induced steatosis. Reducing IL-10 expression increases pro-inflammatory activity in the steatotic liver and worsens insulin resistance. Because in diet-induced steatosis the transcriptional co-activator PGC-1a plays a central role in the dysfunctional hepatocytic activity, we hypothesized that at least part of PGC-1a activity could be mediated by its effect on the transcriptional control of IL-10 expression. Here, we used immunoblot, real-time PCR, immunocytochemistry and ChIP assay to investigate the role of PGC-1a in the control of IL-10 expression in hepatic cells. First, we show that in the intact steatotic liver, the expressions of IL-10 and PGC-1a are increased. Inhibiting PGC-1a expression by antisense oligonucleotide increases IL-10 expression and reduces the steatotic phenotype. In cultured hepatocytes the treatment with saturated and unsaturated fatty acids, increase IL-10 expression. This is accompanied by increased association of PGC-1a with c-Maf and p50-NF?B, two transcription factors known to modulate IL-10 expression. In addition, following fatty acid treatment PGC-1a, c-Maf and p50- NF?B migrate from the cytosol to the nuclei of hepatocytes and bind to the IL-10 promoter region. Inhibiting NF?B activation with salicylate reduces IL-10 expression and PGC-1a association with p50-NF?B. Thus, PGC-1a emerges as a potential transcriptional regulator of the inflammatory phenomenon taking place in the steatotic liver. / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador:Ilka de Fatima Santana Ferreira Boin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:40:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_GlauceRejanedos_M.pdf: 926499 bytes, checksum: 98d684dac0b6d5609362eba3ed34a90a (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A ansiedade pode ser considerada um estado emocional que não se apresenta na mesma intensidade em todos os pacientes, sendo classificada em: mínimo, leve, moderada e grave. Em casos específicos de hepatopatias, esse transtorno pode ser ainda maior, devido à necessidade do transplante na maioria dos casos. O paciente ao entrar na fila de espera para o transplante é acompanhado de reflexões sobre a decisão tomada, deixando-o constantemente ansioso com a possível idéia de morte. Este trabalho teve como objetivo avaliar o nível de ansiedade observado nos pacientes candidatos a transplante hepático e verificar se houve correlação entre a ansiedade e o diagnóstico etiológico apresentado. Duzentos e quinze pacientes adultos, com indicação para transplante de fígado e inseridos em lista de espera pela Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo, foram submetidos à avaliação psicológica, através do Inventário de Ansiedade de Beck. A presença de ansiedade foi definida como: sim (presença de ansiedade), se houve variação de oito a 63 pontos, como não (ausência de ansiedade), se houve variação de zero a sete. Alem disso, adicionou-se quatro pontos ao total da soma de escores obtidos quando o sujeito era mulher. O escore total foi o resultado da soma das pontuações dos itens individuais. Os níveis de ansiedade observados foram mínimos: de zero a sete; leve: de oito a 15; moderado: de 16 a 25; grave: de 26 a 63. O grupo estudado foi caracterizado por 165 pacientes do sexo masculino e 50 feminino, com uma idade média de 49,49 anos ±10,89 de idade e o valor médio do escore MELD (Model for End-stage Liver Disease) foi de 16,78 ±4,28. Dos pacientes estudados, 50,7% tinham ensino fundamental; 30,7% ensino médio e 18,6% ensino superior. Em relação ao nível de ansiedade, 54% dos pacientes eram mínimo, 27% leve, 12% moderado e 7% grave. Dentre as etiologias encontradas neste grupo, 37% dos pacientes tinham cirrose hepática por hepatite C, 7% hepatite B, 26% de origem alcoólica, 9% câncer no fígado, 7% hepatite auto-imune, e 14% tinham outras doenças do fígado. Na correlação entre nível de ansiedade e o diagnóstico etiológico observou-se que, 71% dos pacientes com cirrose alcoólica e 60% daqueles com câncer no fígado, apresentaram nível mínimo de ansiedade e 27% dos pacientes com hepatite autoimune apresentaram nível grave ansiedade. Observou-se que em pacientes com hepatite auto-imune houve tendência à ansiedade. Acreditamos que a ausência de sintomas físicos, o fato de serem relativamente jovens e a maior incidência do sexo feminino, foram fatores importantes na observação do nível de ansiedade nesta doença / Abstract: Anxiety can be considered an emotional state that does not occur at the same intensity in all patients and is classified as: minimal, mild, moderate and severe. In specific cases of liver disease, this disorder may be even higher due to the need for transplantation in most cases. Upon being included on the waiting list for transplantation, the patient reflects on the decision, leaving him constantly anxious about death ideation. The aim of this study was to evaluate the level of anxiety observed in candidate patient for liver transplantation and whether there was any correlation between anxiety and the etiologic diagnosis. Two-hundred and fifteen adult candidates for liver transplantation were studied. All of them were on the Sao Paulo State Health Secretary waiting list. They underwent psychological evaluation by Beck Anxiety Inventory. There was presence of anxiety in the range of eight to 63 points, and no presence of anxiety, in the range of zero to seven. In addition, four points to the total sum of scores obtained were added when the subject was a woman. Anxiety levels were observed, minimum: from zero to seven, mild: eight to 15, moderate from 16 to 25, severe: from 26 to 63. The study group was characterized by 165 males and 50 females with a mean age 49.49 years of age with the value of the MELD score (Model for End-stage Liver Disease) of 16.78. Of the patients studied, 50.7% had primary education, 30.7% high school and 18.6% college. Regarding the level of anxiety, 54% of patients were minimal, 27% mild, 12% moderate and 7% severe. Among etiologies of the group, 37% of patients had liver cirrhosis with hepatitis C, hepatitis B 7%, 26% alcohol by origin, 9% for liver cancer, 7% for autoimmune hepatitis, and 14% had other liver diseases. In the correlation between level of anxiety and etiologic diagnosis, 71% of patients with alcoholic cirrhosis and 60% of those with liver cancer showed minimal level of anxiety and 27% of patients with autoimmune hepatitis had severe anxiety. It was observed that in patients with autoimmune hepatitis, there was a tendency to anxiety. We believe that the absence of physical symptoms, a relatively young age and a higher incidence of females, were important factors when reviewing the level of anxiety in this disease / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia