Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2018-02-15T14:23:39Z No. of bitstreams: 1 marinagobbemoschetta_tese.pdf: 3429562 bytes, checksum: 62a703a94d8ded4bd80d7a77a4476e3d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-15T14:23:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marinagobbemoschetta_tese.pdf: 3429562 bytes, checksum: 62a703a94d8ded4bd80d7a77a4476e3d (MD5) Previous issue date: 2016-11-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: Hypoxia is a known adverse factor to cancer treatment, able to activate the signaling pathways PI3K and AMPK/Akt/mTOR, the two major pathways involved in the angiogenesis process. This process is regulated by many factors, being the most important factors the Hypoxia-Inducible Factor-1α (HIF-1α) and Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). Metformin has demonstrated its ability to reduce the incidence of cancer in diabetic patients with positive results especially in breast cancer, inhibiting cell growth by AMPK/Akt/mTOR signaling pathway. Likewise, LY294002 is the major inhibitor of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway that has anti-angiogenic properties, capable to reduce the release of growth factors such as VEGF. The treatment with metformin in addition to the inhibitor LY294002 in both normal oxygen and hypoxia conditions, as well as the action in the process of angiogenesis in canine mammary tumors is unprecedented. Objectives: To evaluate the influence of metformin and LY294002 inhibitor treatment in tumor angiogenesis as a therapeutic strategy in mammary tumors in a in vitro and in vivo study. Material and Methods: In the in vitro study, we analyzed the cell viability of canine mammary tumor cell lines CMT-U229 (benign mixed tumor) and CF41 (metastatic carcinoma) before and after treatment with metformin and/or LY294002 by MTT assay. The cell cycle distribution was analyzed by flow cytometry flow, protein and gene expression of VEGF and HIF-1α by immunohistochemistry and RT-PCR, respectively. All experiments were performed in normal oxygen conditions and under hypoxia by the addition of cobalt chloride (CoCl2). For the in vivo study, CF41 cells were implanted in 20 female mice BALB / c nude nude. After 28 days of treatment with metformin and LY294002, it was analyzed micro vessel density by CD31 expression by immunohistochemistry as well as gene and protein expression of HIF-1α and VEGF in the tumor tissue. Results: The treatment with metformin and LY294002 was able to reduce the cellular viability after 24 hours. The protein and gene expression of HIF-1α and VEGF decreased after treatment with metformin and LY294002, both in normal oxygen conditions and hypoxia. In the in vivo study, there was a decrease in tumor size, protein and gene expression of HIF-1α and VEGFA, in addition to the decreasing of CD31 expression after all treatments. Conclusions: Our results demonstrated the effective action of metformin and LY294002 inhibitor in controlling the angiogenesis process in mammary tumors by the angiogenic factors VEGF and HIF-1α. / Introdução: A hipóxia é um conhecido fator adverso ao tratamento do câncer, capaz de ativar as vias de sinalização PI3K e MAPK/Akt/mTOR, as duas principais vias envolvidas no processo de angiogênese. Esse processo é regulado por inúmeros fatores, sendo os mais importantes o Fator Induzido por Hipóxia-1α (HIF-1α) e o Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF). A metformina tem demonstrado sua capacidade de diminuir a incidência de neoplasias em pacientes diabéticos com resultados positivos especialmente no câncer de mama, inibindo o crescimento celular através da via de sinalização MAPK/Akt/mTOR. Da mesma forma, o LY294002 é um importante inibidor da via de sinalização PI3K/AKT/mTOR que possui propriedades anti-angiogênicas, capaz de diminuir a liberação de fatores de crescimento como o VEGF. A combinação do tratamento com metformina e com o inibidor LY294002 tanto em condições normais de oxigênio quanto em hipóxia, bem como a ação no processo de angiogênese em tumores mamários caninos é inédita. Objetivos: Avaliar a influência do tratamento com metformina e com o inibidor LY294002 na angiogênese tumoral como estratégia terapêutica nas neoplasias mamárias, em um estudo in vitro e in vivo. Material e Métodos: No estudo in vitro, foi analisada a viabilidade das células das linhagens tumorais mamárias caninas CMT-U229 (tumor misto benigno) e CF41 (carcinoma metastático) antes e após o tratamento com metformina e/ou LY294002 por ensaio MTT. A distribuição das células nas fases do ciclo celular foi avaliada por citometria de fluxo, a expressão proteica e gênica do VEGF e do HIF-1α por imuno-histoquímica e PCR em Tempo Real, respectivamente. Todos os experimentos foram realizados em condições normais de oxigênio e sob hipóxia pela adição de cloreto de cobalto (CoCl2). Para o estudo in vivo, células da linhagem tumoral mamária canina CF41 foram implantadas em 20 camundongos fêmeas Balb/c nude atímicos. Após 28 dias de tratamento com metformina e LY294002, foi analisada a microdensidade vascular pela expressão do CD31 por imunohistoquímica, bem como a expressão proteica e gênica do VEGF e HIF-1α no tecido tumoral. Resultados: O tratamento com metformina e com LY294002 foi capaz de diminuir significativamente a viabilidade celular, após 24 horas. A expressão proteica e gênica do HIF-1α e do VEGF diminuiu após o tratamento com metformina e LY294002 tanto em hipóxia quanto em condições normais de oxigênio. No estudo in vivo, houve diminuição do tamanho tumoral e da expressão proteica e gênica do VEGFA e HIF-1α, além da diminuição da expressão do CD31, após os tratamentos. Conclusões: Nossos resultados demonstram a efetiva ação da metformina e do inibidor LY294002 no controle do processo de angiogênese em câncer de mama, por meio dos marcadores angiogênicos VEGF e HIF-1α.

Hipertensos têm rarefação capilar e disfunção endotelial microcirculatória, tornando-se mais vulneráveis a lesões em órgãos-alvo. O estudo buscou avaliar o efeito de seis meses de tratamento farmacológico sobre densidade capilar e reatividade microvascular a estímulos fisiológicos e farmacológicos em hipertensos de baixo risco cardiovascular. Secundariamente testou-se a existência de diversidade nas respostas a diferentes estratégias anti-hipertensivas. Foram recrutados 44 pacientes, com 46,71,3 anos e 20 normotensos com 48,01,6 anos. Avaliaram-se dados antropométricos e laboratoriais e dosaram-se no soro o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF), receptor Flt-1 para VEGF e óxido nítrico (NO). A contagem capilar foi por microscopia intravital, captando-se imagens da microcirculação no dorso da falange do dedo médio e contando os capilares com programa específico. Repetia-se o procedimento após hiperemia reativa pós-oclusiva (HRPO) para avaliar o recrutamento capilar. A reatividade vascular foi testada por fluxometria Laser Doppler, iontoforese de acetilcolina (Ach), HRPO e hiperemia térmica local (HTL). Os pacientes foram distribuídos aleatoriamente para dois grupos de tratamento: succinato de metoprolol titulado a 100 mg diários ou olmesartana medoxomila titulada a 40 mg diários, empregando-se, se necessário, a hidroclorotiazida. Os controles seguiram o mesmo protocolo inicial e após seis meses todos os testes foram repetidos nos hipertensos. As variáveis clínicas e laboratoriais basais eram semelhantes em comparação aos controles e entre os dois grupos de tratamento. Após seis meses, havia pequenas diferenças entre os grupos na relação cintura-quadril e HDL. A densidade capilar antes do tratamento era significativamente menor que no grupo controle (71,31,5 vs 80,61,8 cap/mm2 p<0,001 e HRPO 71,71,5 vs 79,52,6 cap/mm2 p<0,05) e, com o tratamento, aumentou para 75,41,1 cap/mm2 (p<0,01) no estado basal e para 76,81,1 cap/mm2 à HRPO (p<0,05). À reatividade vascular, a condutância vascular cutânea (CVC) em unidades de perfusão (UP)/mmHg era similar à HTL nos controles e hipertensos e aumentou com o tratamento nos dois subgrupos (metoprolol:1,730,2 a 1,900,2 p<0,001 e olmesartana:1,490,1 a 1,870,1 p<0,001). A CVC máxima à HRPO era menor nos hipertensos: 0,30(0,22-0,39) que nos controles: 0,39(0,31-0,49) com p<0,001. Após tratamento, aumentou para 0,41(0,29-0,51) com p<0,001. O aumento foi significativo apenas no grupo olmesartana (0,290,02 a 0,420,04 p<0,001). A diferença entre o tempo para atingir o fluxo máximo à HRPO aumentou no grupo metoprolol após tratamento 3,0 (-0,3 a 8,8) segundos versus olmesartana 0,4 (-2,1 a 2,4) segundos p<0,001. À iontoforese, a área sob a curva de fluxo (AUC) era similar nos grupos e aumentou com o tratamento, de 6087(3857-9137) para 7296(5577-10921) UP/s p=0,04. O VEGF e receptor não diferiam dos controles nem sofreram variações. A concentração de NO era maior nos hipertensos que nos controles: 64,9 (46,8-117,6) vs 50,7 (42-57,5) M/dl p=0,02 e não variou com tratamento. Em conclusão, hipertensos de baixo risco têm menor densidade e menor recrutamento capilar e ambos aumentam com tratamento. Apresentam também disfunção endotelial microcirculatória que melhora com a terapia. / Capillary rarefaction and microcirculatory endothelial dysfunction are hallmarks of hypertension, rendering patients vulnerable to target organ lesions. The study aimed at assessing the effect of a six-month treatment period upon capillary density and microvascular reactivity to physiological and pharmacological stimuli. In addition, two different treatment strategies were tested for possible differences between effects upon those variables. A total of 44 patients were recruited, mean age 46.71.3 years and 20 normotensive individuals served as controls, mean age 48.01.6 years. Anthropometrical and laboratory data were collected, as well as plasma levels of vascular endothelial growth factor (VEGF), its receptor Flt-1 and nitric oxide (NO). Capillary density was obtained by intra-vital microscopy of the dorsum of the middle phalanx before and after post-occlusive reactive hyperemia (PORH). Capillary loops were counted by a semi-automated software. Microvascular reactivity was tested by laser Doppler flowmetry (LDF), and the challenges consisted of acetylcholine iontophoresis, local thermal hyperemia (LTH) and PORH. Patients were randomly allocated to either one of two treatment arms: metoprolol succinate uptitrated to 100 mg daily or olmesartan medoxomil uptitrated to 40 mg daily, with addition of hydrochlorothiazide if necessary. Controls underwent the same initial protocol and all tests were repeated in patients after six months. Baseline clinical and laboratory parameters were similar between patients and controls and between the two treatment groups. After six months there were slight, although significant, differences between the two groups in waist/hip ratio and HDL-cholesterol. In the whole cohort, pretreatment capillary density was significantly reduced compared to controls (71.31.5 vs 80.61.8 cap/mm2 p<0.001 and PORH 71.71.5 vs 79.52.6 cap/mm2 p<0.05). After treatment it increased to 75.41.1 cap/mm2 (p<0.01) at rest and 76.81,1 cap/mm2 during PORH. During LTH, cutaneous vascular conductance (CVC) in perfusion units (PU)/ mmHg was similar in patients and controls and increased significantly in both subgroups (metoprolol: from 1.730.2 to 1.900.2 p<0,001 and olmesartan: from 1.490.1 to 1.870.1 p<0.001). Maximal CVC during PORH was reduced in hypertensive patients: 0.30 (0.22-0.39) compared to controls: 0.39(0.31-0.49) with p<0.001. After therapy it increased to 0.41(0.29-0.51) with p<0.001. The change was significant only for the olmesartan subgroup (from 0.290.02 to 0.420.04 p<0.001). After treatment, the difference in time spent to reach peak flow during PORH inreased significantly in patients taking metoprolol but not in those taking olmesartan: -3.0 (-8.8 to 0.2) and 0.4 (-2.1 to 2.4) seconds after vs before, respectively p<0,001. Area under the Ach iontophoresis flow curve (AUC) was similar in controls and hypertensive patients, and increased after treatment, from 6087 (3857-9137) to 7296 (5577-10921) PU/s p=0.04. VEGF and Flt-1 receptor were similar among all groups and did not change with treatment. NO levels were higher in hypertensive individuals than in controls: 64.9 (46.8-117.6) vs 50.7 (42.0-57.5) M/dl p=0.02 and did not change with treatment. In conclusion, low-risk hypertensive patients show reduced capillary density/recruitment, and endothelial microvascular dysfunction. Both improve with treatment

A terapia com laser em baixa intensidade, conhecida como Low-intensity laser therapy (LILT), tem sido alvo de pesquisas que buscam esclarecer os mecanismos pelos quais o laser age na cicatrização de feridas. Este processo é dependente da transmissão de sinais entre epitélio e conjuntivo, os quais influenciam a proliferação e a migração celular, onde participam fatores de crescimento. O objetivo desta pesquisa foi verificar os efeitos da radiação com lasers vermelho e infravermelho em baixa intensidade na produção de fatores de crescimento por fibroblastos in vitro. Foi obtida uma cultura primária de fibroblastos gengivais humanos (linhagem FGH). As células foram cultivadas em placas de 96 poços (5 x 103 células /poço), em estado de quiescência (meio de cultura suplementado com 1% de soro fetal bovino) e irradiadas com lasers de diodo (AlGaAs - 660nm, e AlGaInP - 780nm). O laser em modo contínuo, foi aplicado em contato e na forma pontual. A potência utilizada foi de 40mW numa área de 0,042cm2 e com densidades de energia de 2, 3, 4, 5 e 6J/cm² com respectivos tempos de aplicação de 2, 3, 4, 5 e 6s. As culturas foram irradiadas duas vezes com 6h de intervalo. Os grupos controle positivo e negativo foram cultivados com 10% e 1% de soro fetal bovino, respectivamente e não receberam irradiação. A produção do fator de crescimento de queratinócitos (KGF) e do fator de crescimento de fibroblastos básico (bFGF) foi analisada e quantificada por ensaio imunoenzimático (método ELISA) no meio condicionado pelas células. Os dados foram comparados estatisticamente pela análise de variância e teste de Kruskal-Wallis complementados pelos testes de Tukey e Dunn, respectivamente (p<0,05). Culturas de todos os grupos produziram KGF e bFGF. Controles positivos produziram maior quantidade de KGF e bFGF que controles negativos. A produção de KGF foi similar em todos os grupos experimentais. A produção de bFGF foi significativamente maior nos grupos tratados com o laser infravermelho nas densidades de energia de 3J/cm2 e 5J/cm2 quando comparados com os controles. Baseados nas condições deste estudo, concluiu-se que a LILT não influencia a produção de KGF, porém, influencia positivamente a produção de bFGF de maneira dependente do comprimento de onda e da densidade de energia empregados. O infravermelho, nas densidades de energia de 3J/cm2 e 5J/cm2, é capaz de aumentar a produção deste fator de crescimento. Portanto, a utilização da LILT nestes parâmetros poderá constituir papel relevante na cicatrização de feridas. / Low-intensity laser therapy (LILT) has been the subject of researches to understand the mechanisms by which the laser acts stimulating wound healing. This process is dependent of a signaling transfer between epithelium and connective tissue and it influences cellular proliferation and migration. Growth factors are directly involved in these mechanisms. The aim of this study was to analyze the effects of red and infrared low-level laser on production of fibroblast growth factors by human gingival fibroblasts in vitro. The cells were obtained by primary culture (FGH cell line). They were grown in 96 wells plates (5x10³ cells / well) in a quiescence environment (1% fetal bovine serum) and then they were irradiated with a diode laser (GaAlAs - 660nm, and InGaAlP - 780nm). The continuous laser was applied in contact and in a punctual mode. The power was 40mW, the area of irradiation was 0,042cm2, the energy densities were 2, 3, 4, 5 and 6J/cm² with 2, 3, 4, 5 and 6s of time application, respectively. The cultures were irradiated twice with 6 h-interval. The positive and negative control groups were grown in 10% and 1% of bovine fetal serum, respectively and didn?t receive any irradiation. The production of keratinocyte growth factor (KGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) was analyzed and quantified by immunoenzymatic test (ELISA) in the conditioned medium. The data were compared statistically by analysis of variance and Kruskal-Wallis, complemented by Tukey?s and Dunn?s tests, respectively (p<0,05). Positive controls produced more KGF and bFGF than negative controls. The KGF production was similar in all experimental groups. The bFGF production was significantly higher in groups treated with infrared laser with energy densities of 3J/cm² and 5J/cm² when compared to controls. Based on these study conditions, authors concluded that LILT doesn?t influence KGF production although it positively influences bFGF production in a dependent manner from wavelength and energy density. Infrared laser with energy densities of 3J/cm² and 5J/cm² is capable of improving the production of this growth factor. Therefore the LILT in these parameters can constitute a relevant role on wound healing.

Objetivo: Avaliar a correlação entre a concentração sérica e a expressão tecidual do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) na interface materno embrionária e avaliar a associação entre a profundidade da invasão trofoblástica e a expressão tecidual do VEGF em gestações ectópicas ampulares. Métodos: Estudo prospectivo com 34 mulheres com o diagnóstico de gestação ectópica ampular espontaneamente concebidas, submetidas à salpingectomia no período de 11 de julho de 2012 a 19 de agosto de 2013. Os critérios de exclusão foram: diagnóstico de gestação tubária não ampular, impossibilidade de coleta de sangue para a dosagem do VEGF sérico, da análise anatomopatológica ou da dosagem do VEGF na peça cirúrgica. Após a confirmação diagnóstica de gestação tubária e antes da realização da salpingectomia foram dosadas as concentrações séricas maternas de VEGF pela técnica de luminex. Após o procedimento cirúrgico foi analisada a expressão tecidual de VEGF por imuno-histoquímica e pela técnica de point-counting. Histologicamente, a invasão trofoblástica na parede tubária foi classificada em grau I: limitada à mucosa da tuba uterina; grau II: até a camada muscular; grau III: invasão de toda a espessura da tuba uterina. Resultados: 8 pacientes apresentaram invasão grau I, 7 pacientes com grau II e 19 com invasão grau III. Não se observou diferença estatisticamente significativa na associação entre o VEGF tecidual e os diferentes graus de invasão trofoblástica (p= 0,621) e a correlação do VEGF tecidual com a sua dosagem sérica pelo coeficiente de Spearman (Rho = -0,057) foi fraca (p= 0,748). Foi realizado modelo de regressão logística para comparar o desempenho do VEGF tecidual como fator de predição da profundidade da invasão do trofoblasto na parede tubária, comparando o grau I vs II e III e o grau III vs I e II e não houve diferença estatisticamente significativa. Conclusões: em gestações ectópicas ampulares, a profundidade da invasão do tecido trofoblástico na parede tubária não está associada com a concentração tecidual do VEGF e não há correlação entre as suas dosagens sérica e tecidual / Objetive: To evaluate the correlation between serum concentration and tissue expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) at the feto-maternal interface and to associate the depth of trophoblastic invasion into the tubal wall with tissue VEGF in ampullary pregnancies. Methods: A prospective study was conducted on 34 spontaneously conceived ampullary ectopic pregnancies that were submitted to salpingectomy between July 11th, 2012 and August 19th, 2013. Exclusion criteria were: diagnosis of not ampullary pregnancy, impossibility of collecting blood sample for serum VEGF determination, impossibility of either anatomopathological or tissue VEGF analysis. Maternal serum VEGF concentrations were measured after the diagnosis confirmation and before salpingectomy. After surgery, tissue VEGF expression was measured by immunohistocemistry and point counting technique. Histologically, trophoblastic invasion into the tubal wall was classified as grade I when limited to the tubal mucosa, grade II when reaching the muscle layer and grade III when comprising the full thickness of the tubal wall. Results: 8 patients had tubal infiltration grade I, 7 had grade II and 19 had grade III infiltration. Depth of trophoblastic invasion was not associated with tissue VEGF expression (p= 0.621). The correlation between tissue expression and serum VEGF concentration was not present (Spearman\'s coefficient, Rho = -0.057) (p= 0.748). Logistic regression showed that tissue VEGF expression was not predictor of trophoblastic invasion and there was not statistically significant difference when comparing grade I vs II and III and grade III vs I and II. Conclusions: in ampullary pregnancies, the depth of trophoblastic penetration into the tubal wall is not associated with tissue VEGF expression. Serum VEGF do not show any correlation with tissue expression

INTRODUÇÃO: A definição de fatores preditivos de lesão morfológica e funcional da tuba uterina poderia colaborar na escolha do tratamento de pacientes com gestação ectópica. O objetivo deste estudo foi relacionar a penetração do tecido trofoblástico na parede tubária acometida por gestação ampular com a concentração sérica materna de VEGF, avaliar a possibilidade do VEGF predizer a profundidade da invasão do tecido trofoblástico, comparando o desempenho do VEGF com o desempenho das concentrações séricas de beta-hCG na predição da profundidade da invasão do trofoblasto. MÉTODOS: realizou-se estudo prospectivo, entre 21 de dezembro de 2006 a 30 de setembro de 2007, com 30 pacientes com gestação tubária ampular submetidas à salpingectomia. Foram dosadas as concentrações séricas maternas de VEGF após confirmação do diagnóstico de gestação tubária e antes da realização da salpingectomia. Histologicamente a invasão trofoblástica na parede tubária foi classificada em grau I: quando limitada à mucosa da tuba uterina; grau II: até a camada muscular; grau III: invasão de toda a espessura da tuba uterina. RESULTADOS: 10 pacientes tiveram infiltração tubária grau I, 9 pacientes infiltração grau II e 11 pacientes infiltração grau III. Os diferentes graus de invasão trofoblástica apresentaram diferença significativa das concentrações séricas de VEGF (p< 0,001). O título sérico de VEGF de 305 pg/mL apresentou sensibilidade de 100,0%, especificidade de 85,0%, valor preditivo positivo de 76,9% e valor preditivo negativo de 100,0% para determinar invasão trofoblástica grau I. Título sérico de 425,9 pg/mL foi o melhor ponto de corte para predição de invasão trofoblástica grau III: sensibilidade de 81,8%, especificidade de 94,7%, valor preditivo positivo de 90,0% e valor preditivo negativo de 90,0%. Regressão logística selecionou a concentração sérica de VEGF como fator de melhor desempenho na predição da invasão trofoblástica quando comparado com título sérico de beta-hCG. CONCLUSÕES: em gestações ampulares, a profundidade da penetração do tecido trofoblástico na parede tubária acometida por gestação ectópica se relaciona com a concentração sérica de VEGF, a concentração sérica de VEGF é preditora da profundidade da invasão do tecido trofoblasto na parede tubária acometida por GE e a concentração sérica de VEGF apresenta melhor desempenho que a concentração sérica de beta-hCG como preditora da profundidade da invasão do trofoblasto na parede da tuba uterina acometida por gestação ampular / INTRODUCTION: The definition of predictive factors of morphologic and functional damage to the Fallopian tube may help in the choice of treatment for patients with ectopic pregnancy. The objective of the present study was to correlate the depth of penetration of trophoblastic tissue into the tubal wall with maternal serum VEGF concentrations, to evaluate the prediction of this invasion based on these concentrations and to compare the performances of VEGF and beta-hCG as predictors of trophoblastic invasion. METHODS: A prospective study was conducted on 30 patients with ampular pregnancy submitted to salpingectomy between December 21st, 2006 and September 30th, 2007. Maternal serum VEGF concentrations were measured after the diagnosis confirmation and before salpingectomy was performed. Histologically, trophoblastic invasion into the tubal wall was classified as grade I when limited to the tubal mucosa, grade II when reaching the muscle layer, and grade III when comprising the full thickness of the Fallopian tube. RESULTS: ten patients had tubal infiltration grade I, nine had grade II and eleven had grade III. The different levels of trophoblastic invasion were significantly associated with VEGF concentrations (p< 0.001). VEGF levels of 305.0 pg/mL showed 100.0% sensitivity, 85.0% specificity, a positive predictive value of 76.9% and a negative predictive value of 100.0% for the diagnosis of grade I trophoblastic invasion. A VEGF titer of 425.9 pg/mL was the best cut-off for the prediction of grade III trophoblastic invasion: 81.8% sensitivity, 94.7% specificity, positive predictive value of 90.0% and negative predictive value of 90.0%. Logistic regression showed that VEGF presented higher performance as a predictor of trophoblastic invasion than beta-hCG. CONCLUSIONS: in ampullary pregnancies, the depth of penetration of trophoblastic tissue into the tubal wall is correlated with serum VEGF concentrations, serum VEGF titer is predictor of the depth of penetration into tubal wall and VEGF concentrations present higher performance than beta-hCG as predictor of the trophoblastic invasion

Álcool e cigarro sãodrogas de abuso que causam inúmeros malefícios a saúde humana e estão associados a milhões de mortes por ano. No entanto, poucos estudos avaliam o efeito de seu uso combinado. Nosso objetivo foiavaliar o efeito da sua associação sobre parâmetros neurotróficos, neuroinflamatórios, oxidativos e comportamentais de ratos. Ratos Wistar, machos, adultos, foram administrados com veículo ou 2g/kg de álcool, via oral (gavagem). Imediatamente após a administração do álcool, eram colocados em câmaras para exposição ao ar ambiental ou fumaça de 6 cigarros, 2 vezes/dia, por 28 dias.No 26º dia foi realizado o teste de memória (esquiva inibitória)para avaliação da memória decurta duração. No 28º dia, após eutanásia, hipocampo, córtex frontal e estriado foram dissecados para avaliação dos parâmetros neurotróficos e neurotransmissoresatravés do fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) e glutationa sintetase (GS), neuroinflamatórios pela quantificação das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina 1 beta (IL-1) e oxidativos pela determinação de glutationa (GSH) e diclorofluoresceína diacetato (DCFH-DA). Sangue troncular foi coletado para determinação de espécies reativas. Comportamento alimentar e hídrico, bem como variação de peso também foram monitorados. Nossos resultados mostramque os parâmetros neurotróficos, inflamatório e oxidativo variam de acordo com a área encefálica e tipo de tratamento. O uso combinado de álcool e fumaça de cigarro diminuiu BDNF e aumentou IL-1 nas três áreas encefálicas, enquanto TNF-α aumentou no estriado e córtex frontal. Aumento das espécies reativas foi detectado apenas no hipocampo. Memória de curta duração não foi afetada. Os animais expostos à fumaça de cigarro ganharam menos peso e reduziram a ingestão de ração. Portanto, a associação entre álcool e cigarro potencializa mecanismos neurodegenerativos no encéfalo de ratos, representando maior risco para a saúde humana do que seu uso isolado. / Alcohol and cigarettes are drugs of abuse that cause innumerable human health hazards and are associated with millions of deaths each year. However, few studies evaluate the effect of their combined use. Our objective was to evaluate the effect of its association on neurotrophic, neuroinflammatory, oxidative and behavioral parameters of rats. Adult male Wistar rats were given either vehicle or 2 g/kg alcohol via oral (gavage). Immediately after administration of the alcohol, they were placed in chambers for exposure to ambient air or 6 cigarette smoke, twice a day, for 28 days. On the 26th day, the memory test (inhibitory avoidance) was performed to evaluate short-term memory. On the 28th day, after euthanasia, hippocampus, frontal cortex and striatum were dissected to evaluate the neurotrophic parameters and neurotransmitters through brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and glutathione synthetase (GS), neuroinflammatory by the quantification of cytokines tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 1 beta (IL-1β) and oxidative by determination of glutathione (GSH) and dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA). Trunk blood was collected for determination of free radicals. Food and water behavior, as well as weight variation were also monitored. Our results show that the neurotrophic, inflammatory and oxidative parameters vary according to the encephalic area and type of treatment. The combined use of alcohol and cigarette smoke decreased BDNF and increased IL-1β in the three encephalic areas, while TNF-α increased in the striatum and frontal cortex. Increased reactive species was detected only in the hippocampus. Short-term memory was not affected. The animals exposed to cigarette smoke gained less weight and reduced feed intake. Therefore, the association between alcohol and cigarette smoking potentiates neurodegenerative mechanisms in the brain of rats, representing a greater risk for human health than its isolated use.

INTRODUÇÃO: A definição de fatores preditivos de lesão morfológica e funcional da tuba uterina poderia colaborar na escolha do tratamento de pacientes com gestação ectópica. O objetivo deste estudo foi relacionar a penetração do tecido trofoblástico na parede tubária acometida por gestação ampular com a concentração sérica materna de VEGF, avaliar a possibilidade do VEGF predizer a profundidade da invasão do tecido trofoblástico, comparando o desempenho do VEGF com o desempenho das concentrações séricas de beta-hCG na predição da profundidade da invasão do trofoblasto. MÉTODOS: realizou-se estudo prospectivo, entre 21 de dezembro de 2006 a 30 de setembro de 2007, com 30 pacientes com gestação tubária ampular submetidas à salpingectomia. Foram dosadas as concentrações séricas maternas de VEGF após confirmação do diagnóstico de gestação tubária e antes da realização da salpingectomia. Histologicamente a invasão trofoblástica na parede tubária foi classificada em grau I: quando limitada à mucosa da tuba uterina; grau II: até a camada muscular; grau III: invasão de toda a espessura da tuba uterina. RESULTADOS: 10 pacientes tiveram infiltração tubária grau I, 9 pacientes infiltração grau II e 11 pacientes infiltração grau III. Os diferentes graus de invasão trofoblástica apresentaram diferença significativa das concentrações séricas de VEGF (p< 0,001). O título sérico de VEGF de 305 pg/mL apresentou sensibilidade de 100,0%, especificidade de 85,0%, valor preditivo positivo de 76,9% e valor preditivo negativo de 100,0% para determinar invasão trofoblástica grau I. Título sérico de 425,9 pg/mL foi o melhor ponto de corte para predição de invasão trofoblástica grau III: sensibilidade de 81,8%, especificidade de 94,7%, valor preditivo positivo de 90,0% e valor preditivo negativo de 90,0%. Regressão logística selecionou a concentração sérica de VEGF como fator de melhor desempenho na predição da invasão trofoblástica quando comparado com título sérico de beta-hCG. CONCLUSÕES: em gestações ampulares, a profundidade da penetração do tecido trofoblástico na parede tubária acometida por gestação ectópica se relaciona com a concentração sérica de VEGF, a concentração sérica de VEGF é preditora da profundidade da invasão do tecido trofoblasto na parede tubária acometida por GE e a concentração sérica de VEGF apresenta melhor desempenho que a concentração sérica de beta-hCG como preditora da profundidade da invasão do trofoblasto na parede da tuba uterina acometida por gestação ampular / INTRODUCTION: The definition of predictive factors of morphologic and functional damage to the Fallopian tube may help in the choice of treatment for patients with ectopic pregnancy. The objective of the present study was to correlate the depth of penetration of trophoblastic tissue into the tubal wall with maternal serum VEGF concentrations, to evaluate the prediction of this invasion based on these concentrations and to compare the performances of VEGF and beta-hCG as predictors of trophoblastic invasion. METHODS: A prospective study was conducted on 30 patients with ampular pregnancy submitted to salpingectomy between December 21st, 2006 and September 30th, 2007. Maternal serum VEGF concentrations were measured after the diagnosis confirmation and before salpingectomy was performed. Histologically, trophoblastic invasion into the tubal wall was classified as grade I when limited to the tubal mucosa, grade II when reaching the muscle layer, and grade III when comprising the full thickness of the Fallopian tube. RESULTS: ten patients had tubal infiltration grade I, nine had grade II and eleven had grade III. The different levels of trophoblastic invasion were significantly associated with VEGF concentrations (p< 0.001). VEGF levels of 305.0 pg/mL showed 100.0% sensitivity, 85.0% specificity, a positive predictive value of 76.9% and a negative predictive value of 100.0% for the diagnosis of grade I trophoblastic invasion. A VEGF titer of 425.9 pg/mL was the best cut-off for the prediction of grade III trophoblastic invasion: 81.8% sensitivity, 94.7% specificity, positive predictive value of 90.0% and negative predictive value of 90.0%. Logistic regression showed that VEGF presented higher performance as a predictor of trophoblastic invasion than beta-hCG. CONCLUSIONS: in ampullary pregnancies, the depth of penetration of trophoblastic tissue into the tubal wall is correlated with serum VEGF concentrations, serum VEGF titer is predictor of the depth of penetration into tubal wall and VEGF concentrations present higher performance than beta-hCG as predictor of the trophoblastic invasion

Objetivo: Avaliar a correlação entre a concentração sérica e a expressão tecidual do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) na interface materno embrionária e avaliar a associação entre a profundidade da invasão trofoblástica e a expressão tecidual do VEGF em gestações ectópicas ampulares. Métodos: Estudo prospectivo com 34 mulheres com o diagnóstico de gestação ectópica ampular espontaneamente concebidas, submetidas à salpingectomia no período de 11 de julho de 2012 a 19 de agosto de 2013. Os critérios de exclusão foram: diagnóstico de gestação tubária não ampular, impossibilidade de coleta de sangue para a dosagem do VEGF sérico, da análise anatomopatológica ou da dosagem do VEGF na peça cirúrgica. Após a confirmação diagnóstica de gestação tubária e antes da realização da salpingectomia foram dosadas as concentrações séricas maternas de VEGF pela técnica de luminex. Após o procedimento cirúrgico foi analisada a expressão tecidual de VEGF por imuno-histoquímica e pela técnica de point-counting. Histologicamente, a invasão trofoblástica na parede tubária foi classificada em grau I: limitada à mucosa da tuba uterina; grau II: até a camada muscular; grau III: invasão de toda a espessura da tuba uterina. Resultados: 8 pacientes apresentaram invasão grau I, 7 pacientes com grau II e 19 com invasão grau III. Não se observou diferença estatisticamente significativa na associação entre o VEGF tecidual e os diferentes graus de invasão trofoblástica (p= 0,621) e a correlação do VEGF tecidual com a sua dosagem sérica pelo coeficiente de Spearman (Rho = -0,057) foi fraca (p= 0,748). Foi realizado modelo de regressão logística para comparar o desempenho do VEGF tecidual como fator de predição da profundidade da invasão do trofoblasto na parede tubária, comparando o grau I vs II e III e o grau III vs I e II e não houve diferença estatisticamente significativa. Conclusões: em gestações ectópicas ampulares, a profundidade da invasão do tecido trofoblástico na parede tubária não está associada com a concentração tecidual do VEGF e não há correlação entre as suas dosagens sérica e tecidual / Objetive: To evaluate the correlation between serum concentration and tissue expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) at the feto-maternal interface and to associate the depth of trophoblastic invasion into the tubal wall with tissue VEGF in ampullary pregnancies. Methods: A prospective study was conducted on 34 spontaneously conceived ampullary ectopic pregnancies that were submitted to salpingectomy between July 11th, 2012 and August 19th, 2013. Exclusion criteria were: diagnosis of not ampullary pregnancy, impossibility of collecting blood sample for serum VEGF determination, impossibility of either anatomopathological or tissue VEGF analysis. Maternal serum VEGF concentrations were measured after the diagnosis confirmation and before salpingectomy. After surgery, tissue VEGF expression was measured by immunohistocemistry and point counting technique. Histologically, trophoblastic invasion into the tubal wall was classified as grade I when limited to the tubal mucosa, grade II when reaching the muscle layer and grade III when comprising the full thickness of the tubal wall. Results: 8 patients had tubal infiltration grade I, 7 had grade II and 19 had grade III infiltration. Depth of trophoblastic invasion was not associated with tissue VEGF expression (p= 0.621). The correlation between tissue expression and serum VEGF concentration was not present (Spearman\'s coefficient, Rho = -0.057) (p= 0.748). Logistic regression showed that tissue VEGF expression was not predictor of trophoblastic invasion and there was not statistically significant difference when comparing grade I vs II and III and grade III vs I and II. Conclusions: in ampullary pregnancies, the depth of trophoblastic penetration into the tubal wall is not associated with tissue VEGF expression. Serum VEGF do not show any correlation with tissue expression

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-19Bitstream added on 2014-06-13T18:44:30Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_er_dr_jabo.pdf: 228976 bytes, checksum: ca70e1512974c2bad475cf6b0242c931 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O uso de agentes biológicos para controle de nematóides é considerado uma das várias medidas a serem empregadas em um manejo integrado de pragas, sendo uma preocupação de caráter mundial. Contudo, foram estudados os fatores determinantes da freqüência de fungos totais e nematófagos, da atividade enzimática e da distribuição de nematóides de solos não rizosféricos e rizosféricos sob alface (Lactuca sativa L.); banana (Musa cavendishii L.); grama batatais (Paspalum notatum) e Impatiens (Impatiens valleriana). A atividade predadora dos fungos nematófagos foi avaliada contra o nematóide Panagrellus redivivus. O número de fungos totais variou de 6,9 x 105 a 31,2 x 105 UFC g-1 solo seco no solo não-rizosférico e de 6,9 x 105 a 25,6 x 105 UFC g-1 solo seco no solo rizosférico. As contagens dos fungos nematófagos corresponderam a 23-41 % e 23-34 % dos fungos totais encontrados no solo rizosférico e não-rizosférico, respectivamente. Enquanto as contagens dos fungos totais do solo rizosférico se distribuíram na seguinte seqüência: alface > banana > grama-batatais > Impatiens, os nematófagos diminuíram na seguinte ordem: alface > Impatiens > banana > grama-batatais. A matéria orgânica e a umidade do solo influenciaram a distribuição tanto dos fungos totais como dos nematófagos do solo não-rizosférico. A distribuição dos nematóides nas amostras de solo e raiz foram Rotylenchulus sp., Helicotylenchus sp. e Tylenchus sp. para alface, Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp., Pratylenchus sp. e Rotylenchulus sp. para banana, Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp., Pratylenchus sp. e Rotylenchulus sp. para grama-batatais, Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp., Pratylenchus sp., Rotylenchulus sp. e Tylenchus sp. para Impatiens. Em termos gerais, as atividades da desidrogenases, amilases, celulases e endoglucanases distribuíram-se no solo não-rizosférico de acordo... / Biological control of nematodes is considered one of the many practices that can be used in integrated pest management. We investigated the factors affecting the frequency of the total and the nematophagous fungi, soil enzymatic activity as well as the distribution of the nematodes in rhizospheric and bulk soil of lettuce (Lactuca sativa L.); Impatiens (Impatiens valleriana); banana (Musa cavendishii L.) and Bahiagrass (Paspalum otatum). The effect of the nematophagous fungi were evaluated against the nematode Panagrellus redivivus. The total fungal number ranged from 6,9 x 105 to 31,2 x 105 UFC g-1 dry soil in the bulk soil and from 6,9 x 105 to 25,6 x 105 UFC g-1 dry soil in the rhizosphere. Nematofagous fungi counts were to 23-41 % and 23-34 % of the total fungi found in the rhizosphere and bulk soil, respectively. While the total fungi counts of the rizosphere were distributed in the following sequence: lettuce > banana > Bahiagrass > Impatiens, the nematophagous fungi decreased in the following order: lettuce> Impatiens >banana > Bahiagrass. Moisture and organic matter contents of the bulk soil influenced the distribution of the total and nematophagous fungi of the soil. The following phytonematodes found in the samples of soil and roots were Rotylenchulus sp., Helicotylenchus sp. and Tylenchus sp (lettuce), Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp., Pratylenchus sp. and Rotylenchulus sp (banana), Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp., Pratylenchus sp. and Rotylenchulus sp. (Bahiagrass), Meloidogyne sp., Helicotylenchus sp., Pratylenchus sp., Rotylenchulus sp. and Tylenchus sp. (Impatiens). In general, the activities of the enzymes desidrogenase, amylase, celulase and endoglucanase followed the distribution of the frequency of the soil total and nematophagous fungi ...(Complete abstract, click electronic access below)

Álcool e cigarro sãodrogas de abuso que causam inúmeros malefícios a saúde humana e estão associados a milhões de mortes por ano. No entanto, poucos estudos avaliam o efeito de seu uso combinado. Nosso objetivo foiavaliar o efeito da sua associação sobre parâmetros neurotróficos, neuroinflamatórios, oxidativos e comportamentais de ratos. Ratos Wistar, machos, adultos, foram administrados com veículo ou 2g/kg de álcool, via oral (gavagem). Imediatamente após a administração do álcool, eram colocados em câmaras para exposição ao ar ambiental ou fumaça de 6 cigarros, 2 vezes/dia, por 28 dias.No 26º dia foi realizado o teste de memória (esquiva inibitória)para avaliação da memória decurta duração. No 28º dia, após eutanásia, hipocampo, córtex frontal e estriado foram dissecados para avaliação dos parâmetros neurotróficos e neurotransmissoresatravés do fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) e glutationa sintetase (GS), neuroinflamatórios pela quantificação das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e interleucina 1 beta (IL-1) e oxidativos pela determinação de glutationa (GSH) e diclorofluoresceína diacetato (DCFH-DA). Sangue troncular foi coletado para determinação de espécies reativas. Comportamento alimentar e hídrico, bem como variação de peso também foram monitorados. Nossos resultados mostramque os parâmetros neurotróficos, inflamatório e oxidativo variam de acordo com a área encefálica e tipo de tratamento. O uso combinado de álcool e fumaça de cigarro diminuiu BDNF e aumentou IL-1 nas três áreas encefálicas, enquanto TNF-α aumentou no estriado e córtex frontal. Aumento das espécies reativas foi detectado apenas no hipocampo. Memória de curta duração não foi afetada. Os animais expostos à fumaça de cigarro ganharam menos peso e reduziram a ingestão de ração. Portanto, a associação entre álcool e cigarro potencializa mecanismos neurodegenerativos no encéfalo de ratos, representando maior risco para a saúde humana do que seu uso isolado. / Alcohol and cigarettes are drugs of abuse that cause innumerable human health hazards and are associated with millions of deaths each year. However, few studies evaluate the effect of their combined use. Our objective was to evaluate the effect of its association on neurotrophic, neuroinflammatory, oxidative and behavioral parameters of rats. Adult male Wistar rats were given either vehicle or 2 g/kg alcohol via oral (gavage). Immediately after administration of the alcohol, they were placed in chambers for exposure to ambient air or 6 cigarette smoke, twice a day, for 28 days. On the 26th day, the memory test (inhibitory avoidance) was performed to evaluate short-term memory. On the 28th day, after euthanasia, hippocampus, frontal cortex and striatum were dissected to evaluate the neurotrophic parameters and neurotransmitters through brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and glutathione synthetase (GS), neuroinflammatory by the quantification of cytokines tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 1 beta (IL-1β) and oxidative by determination of glutathione (GSH) and dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA). Trunk blood was collected for determination of free radicals. Food and water behavior, as well as weight variation were also monitored. Our results show that the neurotrophic, inflammatory and oxidative parameters vary according to the encephalic area and type of treatment. The combined use of alcohol and cigarette smoke decreased BDNF and increased IL-1β in the three encephalic areas, while TNF-α increased in the striatum and frontal cortex. Increased reactive species was detected only in the hippocampus. Short-term memory was not affected. The animals exposed to cigarette smoke gained less weight and reduced feed intake. Therefore, the association between alcohol and cigarette smoking potentiates neurodegenerative mechanisms in the brain of rats, representing a greater risk for human health than its isolated use.