Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-05-03T11:53:29Z No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:03:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:04:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T16:04:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) Previous issue date: 2016-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The morphological knowledge and data about the composition of glycosaminoglycans (GAGs) in the female reproductive system and placental of agouti are essential to the understanding of reproductive events. In addition to these, the knowledge of embryonic and fetal development in the specie, provides as the basis for application of ultrasound examination and reproductive biotech, contributing directly to conservation of the specie and commercial exploitation. Therefore, the objective describe the anatomohistological characteristics of the reproductive tract of agoutis females, as well as identify the profile of glycosaminoglycans in reproductive organs and placenta during the pregnancy. Were utilized agoutis 25 adult females at different stages of the estrous cycle and pregnancy, obtained in Centre of Multiplication of Wild Animals of the Universidade Federal Rural do Semi-Árido. After eutanasiados, abdominal and pelvic cavities were opened, the reproductive organs and fetuses when gifts were photographed in situ and ex situ and analysed to morphometric. Each body fragments were fixed in 4% paraformaldehyde solution and 2.5% glutaraldehyde and submitted to histological technique of light and scanning electron microscopy. Fragments of organs were also placed in acetone to remove the lipids and then the sample subjected to agarose gel electrophoresis. Blades for light microscopy, were stained with hematoxylin-eosin, Gomori stain, Alcian-Mallory and Periodic Acid Schiff (PAS). It was observed that he ovary of the Dasyprocta leporina is coated by simple cubic to squamous epithelium that rests on the tunica albuginea, showing a cortical and medular zone. The uterine tube is organized in three layers, a mucous membrane (simple ciliated columnar epithelium), the lamina propria (loose connective) and serosa. The villus height and muscle layer thickness varying between the areas of infundibulum, isthmus and ampulla. In pregnancy this organ has profile variable, with predominance of dermatan sulfate (DS) and heparan sulfate (HS) in early gestation and DS and chondrotin sulfate (CS) in the middle and final thirds with sharp reduction at term. The uterus is classified as partial double, consisting of two horns and a cervix with two distinct ostia that communicate with the body and a single ostium that opens into the vagina. The uterine horn presented throughout pregnancy a predominance of CS and DS, with small amount of HS. The vagina has three layers, the outer adventitia (connective tissue), muscular and mucous membrane composed of epithelium that varies from little pavimentoso storied without keratinization (luteal phase) the storied pavimentoso keratinized and cornified (follicular phase) enough frilled and with leukocytes cells. In the vagina, the main GAG found was the DS, with small concentration of HS analyzed throughout of the pregnancy. The vulva is located between the anus (dorsal) and the ostium and the vestibule urethral absent in the species. The clitoris is external to vagina, in which in its peak protrude sideways two spicules corneas and the urethra centered, in the absence of a common part between the urinary and genital tracts. Embryos at 30 days after copulation had form of "C" with limb buds paddle-shaped, Crown-Rump (CR) of 10.75 ± 0.11 mm and weight of 0.17 ± 0.03 g; 40 days the skin was smooth and transparent and liver boss and curvature of reduced body, CR 19.5 ± 0,007 mm and weight 1.34 ± 0.01 g; after 65 days, the genital tubercle was already differentiated and CR was 83 ± 0.08 mm and weight of 29.22 ± 0.46 g; 85 days, presence of stubble throughout the body, eyes partly open, CR of 127.7 ±0.6 mm and weight of 96.56 ± 7.37 g; 100 days, mature fetus with long hair and the whole body, fully formed tooth and nail and open auditory meatus, CR was 164.3 ± 10.4 mm and weight of 166.5 ± 7.79 g; the infants had the open eyes and bristling at birth, with CR 179.1 ± 0.5 and weight of 201.88 ± 1.89 g. Concluded that the profile and concentration of GAGs varies as to the organ and gestation period and that the age of the embryo/fetus can be evaluated during pregnancy, allowing to estimate gestational age and the data can be used as parameters to ultrasound examinations, helping in the identification of diseases throughout development / O conhecimento morfológico e os dados sobre a composição dos glicosaminoglicanos (GAGs) no sistema reprodutor feminino e tecido placentário de cutia são essenciais para a compreensão dos eventos reprodutivos. Soma-se a estes, o conhecimento sobre o desenvolvimento embrionário/fetal na espécie, que serve como base para aplicação do exame ultrassonográfico e biotécnicas reprodutivas, contribuindo diretamente para conservação da espécie e exploração comercial. Portanto, objetivou-se descrever as características anatomohistológicas do sistema reprodutor de cutias fêmeas, bem como identificar o perfil dos GAGs presentes nos órgãos reprodutivos e placenta ao longo da gestação. Para tanto, foram utilizadas 25 cutias, adultas em diferentes fases do ciclo estral e gestação, obtidas no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (CEMAS/UFERSA). Após eutanasiados, as cavidades abdominal e pélvica foram abertas, os órgãos do sistema reprodutor e fetos quando presentes foram fotografados in situ e ex situ e realizado a análise morfométrica. Fragmentos de cada órgão foram fixados em solução de paraformaldeído 4% e glutaraldeído 2,5% e destinados à microscopia de luz e eletrônica de varredura. Fragmentos dos órgãos também foram colocados em acetona para realização do processo de delipidação e em seguida a amostra submetida à eletroforese em gel de agarose. Observou-se que o ovário da cutia é revestido por epitélio simples cúbico a pavimentoso que repousa sobre a túnica albugínea, evidenciando-se uma zona cortical e uma medular. A tuba uterina está organizada em três camadas, uma mucosa (epitélio colunar simples, ciliado e viloso), uma lâmina própria (conjuntivo frouxo) e uma camada serosa, estando o tamanho das vilosidades e a espessura da camada muscular variando entre as áreas de infundíbulo, ampola e istmo. Na gestação, este órgão teve perfil variável, com predomínio de DS e HS no início da gestação e DS e CS nos terços médio e final e redução acentuada a termo. O útero é classificado como duplo parcial, formado por dois cornos e uma cérvix com dois óstios distintos que se comunicam com o corpo e um único óstio que se abre na vagina. O corno uterino apresentou ao longo da gestação uma predominância de CS e DS, com pequena quantidade de HS. A vagina possui três camadas, adventícia externa (tecido conjuntivo), muscular e a mucosa composta por epitélio que varia de pavimentoso pouco estratificado sem queratinização (fase lútea) a estratificado pavimentoso queratinizado e cornificado (fase folicular) bastante pregueado e com presença de células leucocitárias. Na vagina, o principal GAG encontrado foi o DS, com pequena concentração de HS analisados ao longo da gestação. A vulva localiza-se entre o ânus (dorsal) e o óstio uretral, estando o vestíbulo ausente na espécie. O clitóris encontra-se externo a vagina, no qual em seu ápice projetam-se lateralmente duas espículas córneas e uma uretra centralizada, não existindo uma parte comum entre os tratos urinário e genital. Os embriões aos 30 dias pós cópula possuíam forma de “C”, com brotos dos membros em forma de remo, Crown-Rump de 10,75 ± 0,11 mm e peso de 0,17 ± 0,03; aos 40 dias a pele foi lisa e transparente e saliência hepática e curvatura do corpo reduzidas, CR de 19,5 ± 0,007 mm e peso 1,34 ± 0,01 g; aos 65 dias, o tubérculo genital já estava diferenciado e CR observado foi de 83 ± 0,08 mm e peso de 29,22 ± 0,46 g; aos 85 dias, presença de pelos curtos distribuídos pelo corpo, olhos parcialmente abertos, CR de 127,7 ± 0,6 mm e peso de 96,56 ± 7,37 g; aos 100 dias, feto maduro com pêlos longos e em todo o corpo, unhas e dentes completamente formados e conduto auditivo aberto, CR foi de 164,3 ± 10,4 mm e peso de 166,5 ± 7,79 g; os neonatos apresentaram pêlos eriçados e olhos abertos ao nascer, com CR de 179,1 ± 0,5 e peso de 201,88 ± 1,89 g. Conclui-se que o perfil e a concentração dos GAGs varia quanto ao órgão e período de gestação e que a idade do embrião/feto pode ser avaliada durante gestação, permitindo estimar idades gestacionais, e os dados podendo ser usados como parâmetros para exames ultrassonográficos, ajudando na identificação de patologias ao longo do desenvolvimento / 2017-04-25

Descrevem-se os achados epidemiológicos, clínico-patológicos, ultra-estruturais e lectino-histoquímicos de herbívoros intoxicados naturalmente por Sida carpinifolia no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Este estudo incluiu a elaboração de três artigos. Foi realizado um estudo retrospectivo de intoxicação natural por Sida carpinifolia em bovinos no Rio Grande do Sul, outro relata pela primeira vez uma intoxicação natural por esta planta em um animal silvestre e o terceiro artigo relata os achados patológicos observados em fetos de fêmeas caprina e bovina que foram intoxicadas experimentalmente e naturalmente respectivamente por Sida carpinifolia. No primeiro artigo foram afetados cinco bovinos entre os anos de 2001 a 2008. O quadro clínico foi caracterizado por emagrecimento, incoordenação, dificuldade de locomoção, tremores generalizados, quedas frequentes e morte. Microscopicamente as principais alterações foram vacuolização dos neurônios de Purkinje do cerebelo, vacuolização das células acinares do pâncreas e das células foliculares da tireoide. No segundo artigo, o cervídeo desenvolveu uma síndrome neurológica caracterizada por fraqueza muscular, tremores de intensão, déficit visual, quedas, postura e comportamento anormal. Os principais achados microscópicos foram vacuolização citoplasmática nos neurônios de Purkinje do cerebelo. No terceiro artigo duas cabras prenhes foram intoxicadas experimentalmente com Sida carpinifolia nas doses de 10 e 13 g/kg respectivamente durante 30 dias e foram acompanhados durante 15 dias após o consumo da planta. Após este período foram eutanasiadas e necropsiadas. Adicionalmente foi incluído um feto bovino no qual a mãe havia sido intoxicada naturalmente por S. carpinifolia. As principais alterações microscópicas observadas nos fetos foram vacuolização do epitélio dos túbulos renais, das células foliculares da tireoide e cerebelo com discreta vacuolização dos neurônios de Purkinje. Na microscopia eletrônica de todos os casos foi observado vacúolos contendo material finamente granulado e delimitado por membrana. Na lectinahistoquímica dos bovinos, do cervídeo e dos fetos observou-se marcação em neurônios com as lectinas Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA) e Succinyl WGA (sWGA). / Describes the epidemiological, clinical, pathological, ultrastructural and lectinhistochemical herbivore naturally poisoned by Sida carpinifolia in Rio Grande do Sul, Brazil. This study included the preparation of three articles. We conducted a retrospective study of natural poisoning by Sida carpinifolia in cattle in Rio Grande do Sul and the other reports for the first time a natural poisoning by this plant in a wild animal. The third article reports the pathologic findings observed in fetuses of female goats and cattle that were naturally and experimentally poisoned by Sida carpinifolia respectively. In the first paper were affected five cattle between the years 2001 to 2008. The clinical picture was characterized by weight loss, incoordination, difficulty walking, generalized tremors, frequent falls and death. Microscopically the main changes were vacuolation of the Purkinje neurons of cerebellum, vacuolization of acinar cells of the pancreas and thyroid follicular cells. In the second paper, the deer developed a neurological syndrome characterized by muscular weakness, intention tremors, visual and standing-up deficits, falls, and abnormal behavior and posture. The main microscopic findings were vacuolation in Purkinje neurons of cerebellum. In the third paper were two pregnant goats experimentally poisoned with Sida carpinifolia in doses of 10 and 13 g / kg for 30 days and were followed for 15 days after consumption of the plant. Additionally included a bovine fetus where the mother had been poisoned by S. carpinifolia. The main microscopic changes observed in the fetuses were vacuolation of the epithelium of renal tubules, thyroid follicular cells in the cerebellum and mild vacuolation of Purkinje neurons. On electron microscopy all cases was observed vacuoles containing finely granular material and bordered by membrane. In lectin-histochemistry of cattle, the deer and fetuses was observed in neurons marking to lectins Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA) e Succinyl WGA (sWGA).

Descrevem-se os achados epidemiológicos, clínico-patológicos, ultra-estruturais e lectino-histoquímicos de herbívoros intoxicados naturalmente por Sida carpinifolia no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Este estudo incluiu a elaboração de três artigos. Foi realizado um estudo retrospectivo de intoxicação natural por Sida carpinifolia em bovinos no Rio Grande do Sul, outro relata pela primeira vez uma intoxicação natural por esta planta em um animal silvestre e o terceiro artigo relata os achados patológicos observados em fetos de fêmeas caprina e bovina que foram intoxicadas experimentalmente e naturalmente respectivamente por Sida carpinifolia. No primeiro artigo foram afetados cinco bovinos entre os anos de 2001 a 2008. O quadro clínico foi caracterizado por emagrecimento, incoordenação, dificuldade de locomoção, tremores generalizados, quedas frequentes e morte. Microscopicamente as principais alterações foram vacuolização dos neurônios de Purkinje do cerebelo, vacuolização das células acinares do pâncreas e das células foliculares da tireoide. No segundo artigo, o cervídeo desenvolveu uma síndrome neurológica caracterizada por fraqueza muscular, tremores de intensão, déficit visual, quedas, postura e comportamento anormal. Os principais achados microscópicos foram vacuolização citoplasmática nos neurônios de Purkinje do cerebelo. No terceiro artigo duas cabras prenhes foram intoxicadas experimentalmente com Sida carpinifolia nas doses de 10 e 13 g/kg respectivamente durante 30 dias e foram acompanhados durante 15 dias após o consumo da planta. Após este período foram eutanasiadas e necropsiadas. Adicionalmente foi incluído um feto bovino no qual a mãe havia sido intoxicada naturalmente por S. carpinifolia. As principais alterações microscópicas observadas nos fetos foram vacuolização do epitélio dos túbulos renais, das células foliculares da tireoide e cerebelo com discreta vacuolização dos neurônios de Purkinje. Na microscopia eletrônica de todos os casos foi observado vacúolos contendo material finamente granulado e delimitado por membrana. Na lectinahistoquímica dos bovinos, do cervídeo e dos fetos observou-se marcação em neurônios com as lectinas Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA) e Succinyl WGA (sWGA). / Describes the epidemiological, clinical, pathological, ultrastructural and lectinhistochemical herbivore naturally poisoned by Sida carpinifolia in Rio Grande do Sul, Brazil. This study included the preparation of three articles. We conducted a retrospective study of natural poisoning by Sida carpinifolia in cattle in Rio Grande do Sul and the other reports for the first time a natural poisoning by this plant in a wild animal. The third article reports the pathologic findings observed in fetuses of female goats and cattle that were naturally and experimentally poisoned by Sida carpinifolia respectively. In the first paper were affected five cattle between the years 2001 to 2008. The clinical picture was characterized by weight loss, incoordination, difficulty walking, generalized tremors, frequent falls and death. Microscopically the main changes were vacuolation of the Purkinje neurons of cerebellum, vacuolization of acinar cells of the pancreas and thyroid follicular cells. In the second paper, the deer developed a neurological syndrome characterized by muscular weakness, intention tremors, visual and standing-up deficits, falls, and abnormal behavior and posture. The main microscopic findings were vacuolation in Purkinje neurons of cerebellum. In the third paper were two pregnant goats experimentally poisoned with Sida carpinifolia in doses of 10 and 13 g / kg for 30 days and were followed for 15 days after consumption of the plant. Additionally included a bovine fetus where the mother had been poisoned by S. carpinifolia. The main microscopic changes observed in the fetuses were vacuolation of the epithelium of renal tubules, thyroid follicular cells in the cerebellum and mild vacuolation of Purkinje neurons. On electron microscopy all cases was observed vacuoles containing finely granular material and bordered by membrane. In lectin-histochemistry of cattle, the deer and fetuses was observed in neurons marking to lectins Concanavalia ensiformis (Con-A), Triticum vulgaris (WGA) e Succinyl WGA (sWGA).

Os poluentes orgânicos persistentes (POPs) são acumulados em tecidos gordurosos dos organismos vivos em concentrações relativamente altas em animais do topo da cadeia alimentar, como os golfinhos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a distribuição e acumulação de POPs em tecidos (gordura, fígado, rim e músculo) de toninhas (Pontoporia blainvillei) do litoral sul de São Paulo, bem como as diferenças/similaridades entre gênero e maturidade sexual e a transferência via placenta. Os valores de concentração mediana (ng g-1; peso úmido) para as 16 amostras de gordura, fígado, rim e músculo, respectivamente, foram: PCBs (987; 19,2; 5,08; 4,41); DDTs (550; 10,3; 2,67; 1,89); PBDEs (32,7; 0,230; 0,095; 0,050); Mirex (21,5; 0,457; 0,168; 0,083); HCB (15,4; <0,360; <0,360; <0,144); HCHs (<0,870; 2,20; <0,218; <0,087); Clordanas (<1,45; <0,362; <0,362; <0,145). Os machos jovens apresentaram as maiores concentrações dos POPs, seguidos pelos machos adultos, fêmeas jovens, fêmeas adultas e fetos. Foi observada transferência dos contaminantes das fêmeas gestantes para seus fetos entre 14 a 28% para PCBs e 19 a 45% para DDTs. A gordura apresentou correlação significativa com os demais tecidos estudados para acumulação dos PCBs, DDTs e PBDEs sugerindo a sua representatividade para estudos desses POPs em toninhas. / Persistent organic pollutants (POPs) are accumulated in fatty tissues of organisms in relatively high concentrations in animals in high position of the food chain such as dolphins. The aims of this study were to evaluate the distribution and accumulation of POPs in tissues (blubber, liver, kidney and muscle) of franciscana dolphin (Pontoporia blainvillei) collected on the southern coast of São Paulo as well as differences/similarities between genre and sexual maturity and the transplacental transfer. The values of median concentration (ng g-1; wet weight) for 16 samples of blubber, liver, kidney and muscle, respectively, were: PCBs (987; 19,2; 5,08; 4,41); DDTs (550; 10,3; 2,67; 1,89); PBDEs (32,7; 0,230; 0,095; 0,050); Mirex (21,5; 0,457; 0,168; 0,083); HCB (15,4; <0,360; <0,360; <0,144); HCHs (<0,870; 2,20; <0,218; <0,087); Chlordanes (<1,45; <0,362; <0,362; <0,145). POPs concentrations were higher in young males followed by adult males, young females, adult females and fetuses. Maternal transfer of POPs to the fetuses was between 14 to 28% for PCBs and 19 to 45% for DDTs. Blubber showed a significant correlation with the other tissues studied for PCBs, DDTs and PBDEs suggesting its representativeness for evaluation of these POPs in franciscana dolphin.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA046.pdf: 2836538 bytes, checksum: df03fbb548e05bbfeb41e5f0f1ba5a4f (MD5) Previous issue date: 2010-05-13 / Porcine parvovirosis is a disease that causes reproductive failure and its causative agent is the Porcine Parvovirus Type 1 (PPV1). This disease, with high prevalence and worldwide distribution, affects mostly non-immune nulliparous sows. Clinically, it is observed return to estrus, delayed parturition date, birth of unviable piglets, weak, stillborn and particularly mummified fetuses in different sizes. These reproductive problems lead economic losses demonstrated by low productivity. This study aimed to implement and validate techniques for laboratory diagnosis PPV1 in natural infections in pig herds with reproductive problems and perform the characterization of these isolates. More specifically, it aimed to diagnose through nested-PCR, and characterize, through phylogenetic analysis, PPV1 isolates from tissue samples and stomach fluid from fetuses and reproductive tract from culled sows. The objectives were to further evaluate histologically the tissues that were positive by nested-PCR; to standardize an internal amplification control (IAC) for PVS1 nested-PCR; to standardize immunohistochemistry technique (IHC) in fetal tissues and to standardize PCR for Porcine Parvovirus Type 4 (PPV4). A total of 27 pig herds were studied, where 230 fetuses stillborn, mummified, aborted and unviable piglets were necropsied to harvest organs and stomach fluid. PPPV1 viral DNA was detected by nested-PCR in organs of six (2.61%) out of 230 fetuses analyzed, the cerebellum and spinal cord were the organs where the virus was detected more frequently (50%). Stomach fluids of three (2.75%) fetuses were positive by nested-PCR, out of 109 examined. In addition, samples of reproductive organs from 83 culled sows were collected also ovarian follicular fluid from 71 of them. The genetic material of PPV1 was diagnosed in six organs from sows (7.23%) and follicular fluid of three (4.22%) of them. Histological lesions were observed in four of 19 PPV1 positive organs of fetuses. Also, six ovaries and six uteri of six culled sows were PPV1 positive by nested-PCR. Exams showed that five of those ovaries were cycling, one was in anestrous and four uterus had some degree of endometritis. The IAC developed for nested-PCR was amplified in all reactions, as expected. In the IHC test the virus presence was confirmed in fetal tissue. The PCR for PPV4 was standardized and tested in fetal organs and reproductive organs from culled sows. Some samples from sow s reproductive organs were positive for this new porcine parvovirus. The results from this study show a low detection of PPV1 in herds analyzed, as well as from the reproductive organs of culled sows, considering the reduced PPV1 involvement in reproductive failure. Moreover, standardized techniques can be incorporated into routine diagnostic of PPV1 and PPV4 / A parvovirose suína é uma doença causadora de falhas reprodutivas e seu agente etiológico é o Parvovírus Suíno Tipo 1 (PVS1). Essa enfermidade, de alta prevalência e distribuição mundial, afeta principalmente porcas nulíparas não imunes. Clinicamente observa-se retorno ao cio, atraso na data de parição, nascimento de leitões inviáveis, fracos, natimortos e, principalmente, mumificados em diferentes tamanhos. Estes problemas reprodutivos acarretam prejuízos econômicos demonstrados pelos baixos índices produtivos. O presente trabalho objetivou implantar e validar técnicas de diagnóstico laboratorial para detecção de PVS1 em infecções naturais em rebanhos suínos que apresentam problemas reprodutivos e realizar caracterização desses isolados. Mais especificamente, objetivou-se diagnosticar, através de nested-PCR, e caracterizar, através de análise filogenética, isolados de PVS1 em amostras de tecidos e líquido estomacal de fetos e em aparelho reprodutivo de porcas descartadas. Objetivou-se ainda avaliar histologicamente os tecidos que resultaram positivos na nested-PCR; padronizar um controle interno de amplificação (CIA) para a nested-PCR de PVS1; padronizar técnica de imunohistoquímica (IHQ) em tecidos fetais e padronizar PCR para Parvovírus Suíno Tipo 4 (PVS4). De 27 rebanhos de suínos, foram colhidos 230 fetos entre natimortos, mumificados e abortados, os quais foram necropsiados para colheita de órgãos e líquido estomacal. O DNA viral foi detectado por nested-PCR em órgãos de seis (2,61%) fetos dos 230 analisados, sendo o cerebelo e a medula os órgãos onde o vírus foi detectado com maior frequência (50%). Líquido estomacal de três (2,75%) fetos foram positivos por nested-PCR, de 109 analisados. Além disso, amostras de órgãos reprodutivos de 83 porcas descartadas foram colhidas e também fluido folicular ovariano de 71 delas. O material genético do PVS1 foi diagnosticado em órgãos de seis porcas (7,23%) e em fluido folicular de três (4,22%) delas. De 19 órgãos positivos de fetos na nested-PCR, quatro tiveram lesão histológica. De seis ovários e seis úteros das seis fêmeas suínas descartadas positivas na nested-PCR, cinco ovários estavam ciclando, um estava em anestro e quatro úteros tinham algum grau de endometrite. O CIA desenvolvido para a nested-PCR foi amplificado em todas as reações, conforme o esperado. Nos testes de IHQ a presença do vírus foi confirmada em tecido fetal. A PCR para o PVS4 foi padronizada e testada em órgãos fetais e de porcas descartadas. Algumas amostras de porcas foram positivas para este novo parvovírus suíno. Os resultados obtidos no estudo evidenciam baixa freqüência do PVS1 nos rebanhos analisados, bem como nos órgãos reprodutivos de porcas descartadas, considerando baixo o envolvimento do PVS1 nas falhas reprodutivas. Além disso, as técnicas padronizadas podem ser incorporadas na rotina de diagnóstico de PVS1 e PVS4

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA09MA052.pdf: 726948 bytes, checksum: 2a141d4d92b1c5ac552655f7c9ad3c1a (MD5) Previous issue date: 2009-11-06 / Many infectious agents have been associated with reproductive failure in swine, representing significantly economic losses for production. Recently, Porcine Circovirus Type 2 (PCV2), etiologic agent of PCVAD or PCV2 associated diseases, was associated with reproductive failure in swine around the world. To confirm the pathogenic potential of PCV2 inducing reproductive failure in sows, it s necessary the viral isolation and antigen and nucleic acid demonstration in fetuses. Other viral agent, Torque Teno Vírus (TTV), also have been recently associated with infections caused by PCV2. TTV alone has not showed pathogenic signals in swine, but, its role in co-infections with other pathogens has been investigated. The present study aimed the diagnostic of PCV2 in natural infections where there was reproductive failure, as well as to establish and apply the Polimerase Chain Reaction (PCR) technique for TTV from organs. Samples from field cases, as aborted fetuses, mummified, stillborn, fragile piglets and material from abattoir sows were collected and processed to diagnostic infection in order to detect PCV2 by PCR and immunohistochemistry (IHC). Samples were collected from 21 farms; and a total of 169 fetuses were necropsied. Moreover, reproductive samples from 83 abattoir sows were collected in 4 slaughterhouses of Santa Catarina State. In the present study was possible detect viral DNA by PCR in 29 (17,1%) of 169 analyzed fetuses, where heart and lymphoid tissues showed virus DNA more frequently, 41,4% and 37,8%, respectively. Viral presence was confirmed by IHC in tissues, which detected viral antigens in 17 PCV2 positives fetuses by PCR. Samples of reproductive tissues from sows also were tested by PCR and PCV2 was identified in 4 sows (4,8%). PCR technique aimed to detect TTV was established for viral DNA from organs. Samples of reproductive tissues from sows were tested, and were found both genogroups of TTV (TTV1 and TTV2), in 25 (30,1%) and 41 (49,3%) sows, respectively. Fetuses samples that resulted positive to PCV2 by PCR were also tested to TTV, and it was observed the occurrence of co-infection between these agents. The results obtained here suggest the involvement of PCV2 in reproductive failure in sows, besides show that TTV was present in analyzed samples, corroboring the association with PCV2 / Muitos agentes infecciosos têm sido associados às falhas reprodutivas na produção de suínos, representando significativas perdas econômicas para os suinocultores. Recentemente o Circovirus Suíno tipo 2 (PCV2), agente etiológico da circovirose suína, foi associado a falhas reprodutivas em suínos em diversas partes do mundo. Para confirmar o potencial patogênico do PCV2 causando falhas reprodutivas em porcas, é necessário o isolamento do vírus e demonstração de antígeno e ácido nucléico viral em fetos. Outro agente viral, o Torque Teno Vírus (TTV), também foi recentemente associado às infecções causadas pelo PCV2. O TTV sozinho ainda não tem se mostrado patogênico em suínos, porém, seu papel em co-infecções com outros patógenos vem sendo investigado. O presente trabalho teve por objetivos diagnosticar o PCV2 em infecções naturais onde existiam falhas reprodutivas, assim como padronizar e aplicar a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para TTV a partir de órgãos. Amostras provenientes de casos clínicos de campo, como fetos abortados, mumificados, natimortos, leitões inviáveis e material de fêmeas descartadas foram coletadas e processadas para diagnóstico da infecção pelo PCV2 através de PCR e imunoistoquímica (IHQ). Foram colhidas amostras de 21 granjas produtoras de suínos, totalizando 169 fetos, que foram necropsiados para coleta de órgãos. Além disso, amostras de órgãos reprodutivos de 83 fêmeas descartadas foram colhidas em 4 abatedouros da região oeste catarinense. No presente estudo foi possível detectar DNA viral por PCR em 29 (17,1%) dos 169 fetos analisados, sendo coração e tecidos linfóides os órgãos onde o vírus foi identificado com maior freqüência, 41,4% e 37,8%, respectivamente. A presença do vírus foi confirmada por teste de IHQ dos tecidos, sendo encontrado antígeno viral em 17 fetos positivos para PCV2 por PCR. As amostras de tecido reprodutivo das fêmeas também foram testadas por PCR e o PCV2 foi identificado em 4 porcas (4,8%). Visando a detecção de TTV foram testadas por PCR amostras de órgãos reprodutivos de fêmeas suínas, sendo diagnosticados os dois genogrupos de TTV, TTV1 e TTV2 em 25 (30,1%) e 41 (49,3%) fêmeas, respectivamente. As amostras de fetos que resultaram positivas para PCV2 pela técnica de PCR também foram testadas para TTV, observando-se a ocorrência de coinfecção entre estes agentes. Os resultados obtidos evidenciam o provável envolvimento do PCV2 em falhas reprodutivas em fêmeas suínas, bem como mostram que o TTV está presente nas amostras analisadas, confirmando a associação com o PCV2

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neosporosis is a parasitic disease of wide distribution and great importance to the cattle industry, mainly due to its associated reproductive losses. The life cycle of Neospora caninum typified by the tree know infectious stages: tachyzoites, tissue cysts with bradyzoites, and oocysts. Transmission routes can be horizontal and/or vertical. The vertical transmission or transplacentally is the most frequent form of infection, and an important form of maintain the agent in herds. With aim of to determine the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in serum samples of 260 bovine fetuses, collected in a slaughter in the municipality of Santa Maria, in Rio Grande do Sul, Brazil. For detection antibodies anti-N. caninum indirect fluorescent antibody test was used and immunoglobulin G and M were detected, using a cut-off 1:25. Of the 260 serum samples tested, 15% (39/260) were positive for the presence of anti-N. caninum. Of these, in 38 the presence of IgG where detected (97.4%) and in six IgM were present (10.3%). Five samples (15.4%) tested were positive for both IgG and IgM. The results reaffirming the ability of N. caninum in determine fetal infection. The results presented on the first chapter indicated that the search of IgM anti-N. caninum is of very limited help in the detection of the transplacental infection in cattle. In second chapter, was evaluated the susceptibility to infection by N. caninum in different cell cultures, for the purpose of observe the ability in vitro multiplication this agent. For this, eight cell cultures were tested, among the cell cultures tested, four presented good susceptibility to agent: cell lines VERO (yield of 21.2 tachyzoites/cell) and MA-104 (17.1); primary bovine testicle (16.3) and lung cells (13.6). Primary bovine kidney (8.2 tachyzoites/cell), MDBK (5.1) and RK-13 cell lines (0.4) presented moderate to low sensitivity. No viable tachyzoites were detected in the culture of MDCK cells. These results demonstrate that MA-104 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to VERO cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Due to the easy manipulation, quick multiplication and relatively low nutritional equirements, these results indicate that MA-104 cells are adequate for multiplication of N. caninum in vitro. / A neosporose é uma doença parasitária de ampla distribuição e com grande importância para a bovinocultura, principalmente pelas perdas reprodutivas que determina. O ciclo do Neospora caninum caracteriza-se por apresentar três estágios infecciosos: os taquizoítos, os cistos teciduais contendo bradizoítos e os oocistos. Suas rotas de transmissão podem ser horizontal e/ou vertical. A infecção vertical ou transplacentária é a forma mais freqüente de infecção, sendo uma importante forma de manutenção do agente nos rebanhos. Com o objetivo de determinar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em fetos bovinos, foram coletadas 260 amostras de soro em abatedouro localizado no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Para detecção de anticorpos anti-N. caninum, utilizou-se a técnica de imunofluorescência indireta com a presença de imunoglobulinas G e M (IgG e IgM), sendo analisada com ponto de corte de 1:25. Do número total de amostras testadas, 15% (39/260) foram positivas para anticorpos anti-N. caninum. Destas, em 38 (97,4%) foi detectada a presença de IgG anti-N. caninum e em seis (15,4%) de IgM. Em cinco amostras (12,8%) detectaram-se ambos, IgG e IgM. Os resultados reafirmam a capacidade do N. caninum determinar infecção fetal. Os resultados obtidos no primeiro capítulo desta dissertação permitiram demonstrar que a pesquisa de IgM foi de limitada importância na detecção da infecção via transplacentária em soro fetal bovino. No segundo capítulo, foi avaliada a susceptibilidade à infecção pelo N. caninum em diferentes cultivos celulares, com a finalidade de observar a capacidade de multiplicação deste agente in vitro. Para isto, foram testados oito cultivos, sendo que quatro apresentaram boa susceptibilidade a multiplicação pelo N. caninum: células VERO (produção de 21,2 taquizoítos/célula), MA-104 (17,1), cultivo primário de testículo (16,3) e pulmão bovino (13,6). O cultivo primário de rim bovino (8,2), células MDBK (5,1) e RK-13 (0,4) apresentaram baixa sensibilidade, enquanto células MDCK não produziram taquizoítos viáveis. Os resultados obtidos demonstram que as células MA-104 apresentaram susceptibilidade semelhante a das células VERO linhagem tradicionalmente utilizada para o cultivo deste protozoário. Pela facilidade de cultivo e rápida multiplicação, menor exigência nutricional e produção de taquizoítos em níveis semelhantes às células VERO, as células MA-104 demonstraram ser adequadas para a manutenção e multiplicação do N. caninum in vitro.

No presente estudo realizou-se a avaliação da eficácia do exame de imagem por ressonância magnética (IRM) e de reconstruções digitais bi e tridimensionais da ATM, em diferentes estágios de desenvolvimento. Foi criado um protocolo próprio de exame de IRM, o qual foi aplicado em embriões e fetos humanos, entre 22 a 160mm de comprimento céfalo-caudal (CRL), correspondendo da 7 a a 18 a semana de vida intra-uterina (IU). Em cada amostra foram realizadas duas seqüências de imagens sagitais da cabeça inteira, com distância de 1,0mm entre os cortes. Em seguida, as imagens foram intercaladas digitalmente, gerando uma seqüência de cortes de 0,5mm distância. Estas imagens foram importadas para um programa específico que realizou a reconstrução digital, criando modelos bi e tridimensionais. Para avaliar a formação e desenvolvimento das estruturas articulares de cada uma das amostras, foram realizados cortes histológicos da ATM. O exame histológico determinou o grau de maturação da ATM e a qualidade da matriz colágena presente. Os resultados demonstraram que o protocolo desenvolvido foi capaz de capturar e processar as imagens de IRM, principalmente após a 13 a semana de vida IU, em seu estágio de maturação articular. Os cortes histológicos comprovaram que, a partir desta fase, pode-se identificar melhor as estruturas articulares no exame de IRM devido a uma maior diferenciação celular e da matriz colágena, que passa de uma composição predominante de fibras colágenas tipo III para fibras do tipo I. A criação de modelos bi e tridimensionais mostrou ser uma ferramenta eficiente no diagnóstico do desenvolvimento facial, além de facilitar sua compreensão e aprendizado, embora ainda sejam necessários maiores avanços tecnológicos para a sua aplicação na formação das estruturas da ATM. / The present study was carried out to evaluate the effectiveness of Magnetic Resonance Imaging (MRI) and bi and three-dimensional digital reconstructions of the TMJ in different stages of development, by the comparison with histological sections. A proper protocol of IRM examination was developed, which was applied in formalin-preserved human embryos and fetuses, ranging from 22 to 160mm of crown-rump length (CRL), between 7 and 18 weeks of intrauterine life (IU). Two sequences of sagital images of the entire head of each specimen were performed, with interslice gap of 1,0mm. Consequently, images were digitally intercalated, creating a slice sequence of 0,5mm of interslice gap. These images were imported to the MRIcro Ò program for bi and three-dimensional digital reconstruction. In order to evaluate the development of the articular structures of each one of the specimens, histological sections of the TMJ were obtained. The maturation’s degree and the quality of the collagen matrix of the TMJ were determined by the histological sections . The results showed that the developed protocol was capable of capture and process MR images, mainly in the articular maturation stage, after the 13 th week of IU. Histological findings also showed that articular structures are better identified in this stage by RMI examination. This can be explained due to an increase of cellular and collagen matrix differentiation, which undergoes conversion from collagen type III to type I. Bi and three-dimensional models seem to be an efficient tool for the diagnosis of facial development, facilitating its understanding and learning. Further studies and technological advances may be necessary for its application in TMJ’s structures in intrauterine period.

No presente estudo realizou-se a avaliação da eficácia do exame de imagem por ressonância magnética (IRM) e de reconstruções digitais bi e tridimensionais da ATM, em diferentes estágios de desenvolvimento. Foi criado um protocolo próprio de exame de IRM, o qual foi aplicado em embriões e fetos humanos, entre 22 a 160mm de comprimento céfalo-caudal (CRL), correspondendo da 7 a a 18 a semana de vida intra-uterina (IU). Em cada amostra foram realizadas duas seqüências de imagens sagitais da cabeça inteira, com distância de 1,0mm entre os cortes. Em seguida, as imagens foram intercaladas digitalmente, gerando uma seqüência de cortes de 0,5mm distância. Estas imagens foram importadas para um programa específico que realizou a reconstrução digital, criando modelos bi e tridimensionais. Para avaliar a formação e desenvolvimento das estruturas articulares de cada uma das amostras, foram realizados cortes histológicos da ATM. O exame histológico determinou o grau de maturação da ATM e a qualidade da matriz colágena presente. Os resultados demonstraram que o protocolo desenvolvido foi capaz de capturar e processar as imagens de IRM, principalmente após a 13 a semana de vida IU, em seu estágio de maturação articular. Os cortes histológicos comprovaram que, a partir desta fase, pode-se identificar melhor as estruturas articulares no exame de IRM devido a uma maior diferenciação celular e da matriz colágena, que passa de uma composição predominante de fibras colágenas tipo III para fibras do tipo I. A criação de modelos bi e tridimensionais mostrou ser uma ferramenta eficiente no diagnóstico do desenvolvimento facial, além de facilitar sua compreensão e aprendizado, embora ainda sejam necessários maiores avanços tecnológicos para a sua aplicação na formação das estruturas da ATM. / The present study was carried out to evaluate the effectiveness of Magnetic Resonance Imaging (MRI) and bi and three-dimensional digital reconstructions of the TMJ in different stages of development, by the comparison with histological sections. A proper protocol of IRM examination was developed, which was applied in formalin-preserved human embryos and fetuses, ranging from 22 to 160mm of crown-rump length (CRL), between 7 and 18 weeks of intrauterine life (IU). Two sequences of sagital images of the entire head of each specimen were performed, with interslice gap of 1,0mm. Consequently, images were digitally intercalated, creating a slice sequence of 0,5mm of interslice gap. These images were imported to the MRIcro Ò program for bi and three-dimensional digital reconstruction. In order to evaluate the development of the articular structures of each one of the specimens, histological sections of the TMJ were obtained. The maturation’s degree and the quality of the collagen matrix of the TMJ were determined by the histological sections . The results showed that the developed protocol was capable of capture and process MR images, mainly in the articular maturation stage, after the 13 th week of IU. Histological findings also showed that articular structures are better identified in this stage by RMI examination. This can be explained due to an increase of cellular and collagen matrix differentiation, which undergoes conversion from collagen type III to type I. Bi and three-dimensional models seem to be an efficient tool for the diagnosis of facial development, facilitating its understanding and learning. Further studies and technological advances may be necessary for its application in TMJ’s structures in intrauterine period.