O objetivo deste trabalho foi desenhar primers, amplificar fragmentos de três loci que codificam antígenos de superfície de protozoários do gênero Sarcocystis spp. isolados do intestino de marsupiais do gênero Didelphis spp., sequenciar os fragmentos gênicos de todos isolados e compará-los entre si e com fragmentos de sequências homólogas disponíveis no GenBank. Trinta e duas amostras de Sarcocystis spp. de gambás do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, tiveram o DNA extraído e amplificado utilizando marcadores moleculares em genes codificadores de antígeno de superfície (SAG-2, SAG-3, e SAG-4). Entre essas amostras, 28 tiveram pelo menos um dos fragmentos gênicos sequenciados. Foi possível sequenciar os 3 fragmentos gênicos de 20 amostras. As análises das sequências dos genes renderam os seguintes resultados: SAG-2: 275 nucleotídeos e sete alelos para 26 amostras; SAG-3: 353 nucleotídeos e seis alelos para 21 amostras; SAG-4: 278 nucleotídeos e onze alelos para 25 amostras. Para cada marcador, análises filogenéticas foram realizadas empregando métodos de distância. As reconstruções filogenéticas permitiram verificar as relações de ancestralidade entre os diferentes alelos, que foram nomeados de acordo com o critério de evolução inferido na topologia das árvores. Para os três loci, diferentes alelos foram agrupados em três grupos ou genótipos, que foram nomeados com caracteres em números romanos I, II, III e IV. Diferenças intra-genótipo (sub-genótipos) foram representados por letras minúsculas (Ia, Ib, Ic, etc.). Cada alelo foi nomeado com numeração arábica (Ia1, Ia2, Ia3, etc.). Nas analises filogenéticas concatenadas baseada em dados de aminoácidos foi possível dividir as amostras dentro de três grupos. A filogenia baseada nas sequências de aminoácidos indica que três grupos de organismos devem existir dentro do complexo de indivíduos da população estudada (Sarcocystis-RS, Falcatula-like e Neurona-like). Embora o grupo designado como Sarcocystis-RS tenha um único alelo para o locus gênico SAG-3 (configuração do tipo III), táxons deste grupo compartilham alelos com indivíduos do grupo Falcatula-like. Assim, seria plausível assumir que exista uma troca gênica entre as duas populações. No que diz respeito ao grupo Neurona-like, nenhum dos indivíduos deste grupo compartilham alelos com indivíduos de outros grupos. No entanto, esta observação precisa ser confirmada, pois as análises foram baseadas em poucas sequências Neurona-like (duas sequências). Este relato revela uma notável diversidade genética entre os isolados de Sarcocystis spp de gambás do Brasil. / The present work aimed to design primers and amplify fragments of three loci that code for surface antigens of the protozoan genus Sarcocystis spp. isolated from intestine of marsupials of the genus Didelphis spp and to sequence the gene fragments of all isolates and compare them with each other and with fragments of homologous sequences available in GenBank. Thirty two samples of Sarcocystis spp. from opossums from the State of Rio Grande do Sul, had the nuclear DNA extracted and amplified using the molecular markers targeted to genes encoding surface antigens (SAG-2, SAG-3, and SAG-4). Among these samples, 28 had at least one of the gene fragments sequenced. It was possible to sequence the three gene fragments from 20 samples. The analysis of gene sequences yielded the following results: SAG-2: 275 nucleotides and seven alleles for 26 samples; SAG-3: 353 nucleotides and six alleles for 21 samples; SAG-4: 278 nucleotides and eleven alleles for 25 samples. For each marker phylogenetic analysis was performed employing distance methods. The phylogenetic reconstructions allowed us to verify the ancestry relationships between different alleles, which were named according to the criteria of evolution inferred from the tree topology. For the three loci, different alleles were grouped into three groups or genotypes, which were named with characters in Roman numerals I, II, III and IV. Intra-genotype differences (sub-genotypes) were represented by lowercase letters (Ia, Ib, Ic, etc.). Each allele was named with Arabic numerals (Ia1, Ia2, Ia3, etc.). With concatenated phylogenetic analysis based on amino acid dataset it was possible to divide the samples into three groups. The amino acid based phylogeny indicates that three groups of organisms must exist within the complex of individuals in the population studied (Sarcocystis-RS, Falcatula-like, and Neurona-like). Although the group designated as Sarcocystis-RS has a unique allele for the genetic locus SAG-3 (configuration type III), the taxa of this group share alleles with individuals in the Falcatula-like. Thus, it is plausible to assume that gene exchange occurs between these two populations. Regarding the Neurona-like group, none of the individuals in this group share alleles with individuals of the other groups. However, this observation remains to be confirmed, because this analysis was based on very few Neurona-like sequences (two sequences). This report reveals a striking genetic diversity among Sarcocystis spp isolated from opossums from Brazil.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese helio ciencia animal.pdf: 455708 bytes, checksum: 78cc58c19ba93b461c2e9c3fbc8b9a4a (MD5) Previous issue date: 2009-03-27 / The objective of this study was to evaluate the effects of high grain diets on performance, carcass characteristics, feeding behavior and fecal parameters of 20 Nelore bovines with 28 months of age. The diets DT + BIN (10% sugar cane bagasse, 54.52% cracked sorghum, 10.94% whole cotton seed hulls, 18% soybean hulls, 2.54% soybean meal and 4% powder vitamin/mineral supplement), MGI (10% soybean hulls, 75% whole corn grain and 15% pellet vitamin/mineral supplement) and DT (44.44% cracked sorghum, 16.7% whole cotton seed hulls, 28.89% soybean hulls and 10% powder vitamin/mineral supplement) were offered to the animals in tie stalls in a completely randomized experimental design. Intake was determined through subtraction of the feed minus orts. Diets were offered to the animals in two daily meals, at 8h (60%) and 17h (40%), aiming approximately 5% of orts. Animals were weighed in the beginning of the experiment and every 21 days, always in water fasting and 14 hours after the last meal. The pH and the lengths of the half-carcasses were measured in the cool store after the cooling process had been completely finished. The areas of AOL and EGSO were taken from the left half-carcass in the 12th rib. Registrations of time spent with feeding, rumination, rest and water intake were done by visual observations of the animals every five minutes during 24 hours. For determination of feces pH and fecal starch, samples of feces were taken from the rectum of each bovine. There was difference for final weight and metabolic weight (P<0.05). Animals fed the diet DT + BIN (498.43 kg final weight and 93.27 kg metabolic weight) and the diet MGI (481.67 kg final weight and 90.32 kg metabolic weight) were more efficient than the ones fed the diet DT (456.43 kg final weight and 88.52 kg metabolic weight). Dry matter intake was greatest for the animals fed the diet DT+BIN (9.24 kg/day) and MGI (7.34 kg/day) than animals fed the diet DT (6.92 kg/day). When intake was expressed as percentage of bodyweight, the treatment DT + BIN was 20.99% higher than MGI and 26.59% than DT. There was difference (P<0.05) in the weight of fresh carcass (PCQ) and thickness of subcutaneous fat (EGSS). PCQ in the treatment DT + BIN (281.81 kg) was higher than DT (238.2 kg), but did not differ from MGI (268.98 kg). Likewise, EGSS in the diet DT+BIN was 12.36% higher than the diet MGI and 50% higher than the diet DT. There was difference for time spent with mastication, rumination, rest and water intake among diets (P<0.05), except for the time spent with feeding. Times spent for rumination and mastication were higher in the treatment DT + BIN (181.2 and 278.4 min/day), however there was no difference (P>0.05) between the diets MGI (94.2 and 171 min/day) and DT (60 and 148.2 min/day). Times spent for rest and water intake differed among treatments, with means of 436.8 and 4.46 min/day in the diet DT+BIN, 546 and 2.81 min/day in the diet MGI and 568.8 and 4.02 in the diet DT. Means of percentage of fecal starch, fecal dry matter, pH in the site of starch fermentation and starch intake were not influenced by diets (P>0.05). Score of fecal consistency and feces NDF were affected (P<0.05) by treatments, with means of 3.12 and 46.29% in the diet DT+BIN, 2.92 and 35.65% in the diet MGI and 3.2 and 48.97% in the diet DT. The addition of 10% of BIN in high grain diet improves dry matter intake, weight gain and carcass quality. The MGI diet was greater than the DT diet in terms of daily weight gain at 84 days and fresh carcass weight. Times spent for rumination, mastication and feed efficiency (g NDF/h) and (g peNDF/h) were greatest in the diet DT+BIN. The fecal consistency evaluated in the animals belonged to the diet DT+BIN, scored as firm, suggests that these animals presented better ruminal fermentation / O objetivo deste trabalho foi de avaliar os efeitos de dietas de alta proporção de concentrado, sobre os desempenhos e características de carcaça, comportamento ingestivo e indicadores fecais de 20 bovinos Nelore, com idade de 28 meses. As dietas DT+BIN (10% de bagaço de cana in natura , 54,52% de sorgo moído, 10,94% de caroço de algodão, 18% de casca de soja, 2,54% de farelo de soja e 4% de núcleo farelado), MGI (10% de casca de soja, 75% de milho grão e 15% de núcleo peletizado) e DT (44,44% de sorgo moído, 16,70% de caroço de algodão, 28,89% de casca de soja e 10% de núcleo farelado) foram distribuídas aos animais em delineamento inteiramente casualizado em baias individuais. O consumo das dietas e dos nutrientes, foi determinado mediante diferenças entre o oferecido e as sobras. As dietas, depois de pesadas, foram distribuídas aos animais na forma de mistura total em duas refeições diárias, sendo 60% do total às 8h e 40% do total às 17h, permitindo-se sobras de aproximadamente 5% do ofertado. As pesagens dos animais foram realizadas no início do período experimental e a cada 21 dias, sempre em jejum hídrico e alimentar de 14 horas. Foram mensurados o pH e os comprimentos das meias-carcaças no momento da saída das câmaras, após o processo de resfriamento. Da meia-carcaça esquerda foram medidas AOL, EGSO à altura da 12a costela. No registro do tempo gasto em alimentação, ruminação, ócio e ingestão de água foram adotadas observações visuais dos animais a cada cinco minutos, por quatro períodos integrais de 24 horas. Para determinação do pH das fezes e do amido fecal, amostras de fezes foram coletadas do reto de cada bovino. Houve diferença significativa (P<0,05) para as características de ganho de peso final e peso metabólico, sendo que os animais do tratamento DT+BIN peso final (498,43 kg e peso metabólico de 93,27 kg) e os animais do tratamento MGI peso final (481,67 kg e peso metabólico de 90,32 kg) foram mais eficientes do que os animais do tratamento DT com peso final (456,43 kg e peso metabólico de 88,52 kg). No desempenho de características de consumo, os animais que ingeriram as dietas DT+BIN (9,24 kg/dia) e MGI (7,34 kg/dia) foram mais eficientes do que os que consumiram a dieta DT (6,92 kg/dia). O consumo em percentagem do peso vivo do tratamento DT+BIN foi maior em 20,99% em analogia ao tratamento MGI e 26,59% ao DT. Na avaliação da carcaça houve diferença significativa (P<0,05) somente para os atributos, peso de carcaça quente (PCQ) e espessura de gordura subcutânea subjetiva (EGSS). O PCQ do tratamento DT+BIN (281,81 kg) foi superior ao tratamento DT (238,20 kg), e não diferiu do tratamento MGI (268,98 kg). A característica EGSS foi superior para o tratamento DT+BIN em 12,36% quando confrontado ao tratamento MGI e 50% mais elevado quando cotejado ao tratamento DT. Houve diferenças nos tempos usados em mastigação, ruminação, ócio e ingestão de água entre os tratamentos (P<0,05), exceto para o tempo gasto em alimentação. Os tempos empregados em ruminação e mastigação foram maiores para o tratamento DT+BIN (181,20 e 278,40 min/dia), porém, quanto aos tratamentos MGI (94,20 e 171 min/dia) e DT (60 e 148,20 min/dia) não ocorreram diferenças (P>0,05). Os tempos de ócios e ingestões de água diferiram entre si, com valores de 436,80 e 4,46 min/dia para o tratamento DT+BIN, 546,0 e 2,81 min/dia para o tratamento MGI e 568,80 e 4,02 min/dia para o tratamento DT. Os valores médios em percentagem do amido fecal, matéria seca fecal, medida de pH para o local de fermentação do amido e consumo de amido/kg não foram influenciados (P>0,05) pelos tratamentos. O escore de consistência fecal e FDN das fezes foram influênciados (P<0,05) pelos tratamentos com valores de escore e FDN fecal de 3,12 e 46,29% para o tratamento DT+BIN, 2,92 e 35,65% para o tratamento MGI e 3,20 e 48,97% para o tratamento DT. A adição de 10% de BIN em dieta totalmente concentrada, promove melhoria no consumo de MS, g/kg de PV, % de MS em relação ao PV, maior peso e acabamento de carcaça. A dieta de alto grão (MGI) foi superior a dieta de alta proporção de concentrado (DT) para a característica de ganho de peso final aos 84 dias e peso de carcaça quente. O tempo gasto com ruminação, mastigação e a eficiência de alimentação (g FDN/h) e (g de FDNfe/h) foi mais alto para a dieta com adição de BIN. A consistência de fezes avaliada nos bovinos do tratamento DT+BIN com 90% de concentrado e 10% de BIN classificada como firme evidencia que estes animais tiveram uma melhor fermentação ruminal

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-11T14:59:51Z No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-11T15:00:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-11T15:00:15Z (GMT). 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The first step for paratransgenesis is to isolate culturable microrganisms naturally associated to the insect vector, and thus amenable to experimentation in laboratory. The objectives of this work were to isolate and to identify culturable bacteria and yeasts isolated from feces of Anopheles darlingi, the main vector of malaria in Brazil; to estimate the species richness and frequency distribution of the sampled bacteria and yeasts and to characterize and to select the sampled bacteria and yeasts isolated from feces of An. darlingi with potential for paratransgenesis. The female mosquitoes of An.darlingi were captured in two rural places of Porto Velho, Rondônia, Brasil. For improving the bacterial growth, mosquito feces were collected on LB agar medium and cultivated at 37 ºC for 24 hours, and for improving the yeast growth, mosquito feces were collected on YPD agar medium with Chloramphenicol and cultivated at 30 ºC for 48 hours. Sixty pure bacteria colonies and sixty pure yeast colonies were sampled. The isolates were preserved in -80 ºC freezer. PCR reactions with genomic DNA from each isolate were perfomed using the primers of 16S rRNA genes for bacteria and 26S and ITS for yeasts. From 60 bacterial isolates, 55 samples were identified. From 60 yeast isolates, 27 samples were identified. The fragments were sequenced with the Sanger method and the sequences with similarities above of 97% with sequences in reference database were deposited in Genbank (NCBI). For bacteria, MALDI-TOF, VITEK®2 and BBL Crystal were also used as a complementar protocols to identify the isolates. The identified bacteria fall into 8 genera, Enterobacter, Klebsiella, Cedecea, Pantoea, Serratia, Acinetobacter, Burkholderia and Staphylococcus. The identified yeast fall into 7 genera, Pseudozyma, Papiliotrema (Cryptococcus), Meyerozyma (=Pichia), Rhodotorula, Candida, Hanseniaspora and Metschnikowia. As candidates to paratransgenesis to control of malaria in An. darlingi are those bacteria belonging to the genera Pantoea and Serratia and the yeasts belonging to the genera Meyerozyma (=Pichia), Pseudozyma, Hanseniaspora and Metschnikowia. / Microrganismos contidos no trato digestório de insetos vem sendo isolados e identificados com o intuito de desenvolver ferramentas biotecnológicas para o controle de doenças transmitidas por insetos. Nesse contexto, mosquitos Anopheles de diferentes partes do globo têm sua microbiota investigada com foco em paratransgênese. No entanto, a informação sobre microrganismos associados aos anofelinos neotropicais é escassa. Tratando-se de Anopheles darlingi, o principal vetor de malária no Brasil, até o presente trabalho, não havia informações sobre microrganismos cultiváveis associados a esse vetor. Os objetivos deste trabalho foram isolar e identificar bactérias e leveduras cultiváveis isoladas das fezes de An. darlingi, o principal vetor da malária no Brasil; estimar riqueza e distribuição de frequência das bactérias e leveduras amostradas, e caracterizar e selecionar bactérias e leveduras isoladas das fezes de An. darlingi com potencial para paratransgênese. Os mosquitos An. darlingi fêmeas foram coletados em duas localidades rurais de Porto Velho, Rondônia, Brasil. Para favorecer o crescimento de bactérias, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio LB ágar e cultivadas à 37°C por 24 horas, e para propiciar o crescimento de leveduras, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio YPD ágar com cloranfenicol e cultivadas à 30°C por 48 horas. Sessenta colônias bacterianas e 60 colônias leveduriformes foram amostradas. Os isolados foram preservados em freezer -80 °C. Foram realizadas PCR utilizado DNA genômico dos isolados com iniciadores para a região do DNA ribossomal 16S para bactérias e 26S e ITS para leveduras. Todas as 60 bactérias isoladas foram identificadas. Das 60 leveduras isoladas, 27 foram identificadas. Os fragmentos foram sequenciados pelo método Sanger e as sequências com similaridades superiores a 97% frente a sequências disponíveis em bancos de dados foram depositadas no GenBank. Para bactérias, MALDI-TOF, VITEK®2 e BBL Crystal foram utilizados como métodos complementares para identificação dos isolados. As bactérias identificadas pertencem a 8 gêneros: Staphylococcus, Burkholderia, Cedecea, Enterobacter, Klebsiella, Pantoea, Serratia e Acinetobacter. As leveduras identificadas pertencem a 7 gêneros: Candida, Meyerozyma (=Pichia), Metschnikowia, Hanseniaspora, Rhodotorula, Papiliotrema (=Cryptococcus) e Pseudozyma. São candidatas à paratransgênese para o controle da malária em An. darlingi as bactérias do gênero Pantoea e Serratia e as leveduras dos gêneros Meyerozyma (Pichia), Metschkowia, Hanseniaspora e Pseudozyma.

Este estudo teve como objetivo avaliar a utilização da enzima fitase e de minerais orgânicos (Cu e Zn) na dieta de suínos visando a redução do poder poluente dos dejetos. Foram utilizados 16 suínos com idade média de 68 dias, alocados na câmara climática, em gaiolas de metabolismo para coleta de fezes e urina. Os animais foram mantidos em duas faixas de temperaturas ambientais: conforto térmico e estresse térmico, e submetidos aos tratamentos: controle (T1); suplementação com minerais orgânicos (T2); suplementação com fitase (T3); suplementação com minerais orgânicos e fitase (T4). As fezes e a urina foram analisadas quanto à concentração de P, N, Na, K, Cu, Zn, Ca. Mensurou-se também temperatura retal e superficial dos animais, volume de fezes e urina excretadas, assim como o consumo de água e ração. Observou-se que o estresse térmico afetou a temperatura retal e superficial, além do volume de fezes excretadas (P<=0,05). A excreção de Zn e Ca foram reduzidas com a utilização da enzima fitase, enquanto que o Cu e Zn orgânicos beneficiaram o Zn, Ca e P (P<=0,05). O estresse térmico aumentou significativamente a excreção de Cu, enquanto a de Na foi reduzida (P<=0,05). Embora não tenha ocorrido interação na atuação da enzima fitase e dos minerais orgânicos, estes aditivos contribuíram com a redução da excreção de minerais. / This study aimed to evaluate the use of phytase and organic minerals (Cu and Zn) in pig diets in order to reduce the power of polluting waste. Sixteen pigs at the age of 68 days, were allocated in metabolism studies cages for collection of feces and urine, in a climatic chamber. The animals were kept in two tracks of ambient temperatures: thermal comfort and heat stress, and subjected to the treatments: control (T1); organic minerals supplementation (T2); phytase supplementation (T3); organic minerals and phytase supplementation (T4). Feces and urine were analyzed for P, N, Na, K, Cu, Zn and Ca concentrations. It was also measured rectal temperature, body surface temperature, feces and urine volume and the food and water consumption. The results had shown that heat stress affected the rectal and superficial temperature, and excreted feces volume (P<=0,05). The Zn and Ca excretion were reduced with the phytase use, whereas organic Cu and Zn benefited Zn, Ca and P (P<=0,05). The heat stress significantly increased Cu excretion, while Na was reduced (P<=0,05). Although there was no interaction on the activity of phytase and organic minerals, these additives contributed to the excretion reduction of minerals.

Foi desenvolvido um experimento com 12 bezerros Hereford, machos, inteiros, pesando em média 95 kg para avaliar a inclusão de minerais na forma de carboaminofosfoquelatos no sal mineralizado num nível equivalente a 0,03% do peso vivo. Os animais foram alimentados com feno de coast-cross ad libitum e 0,75% do peso vivo com casca de soja. Os tratamentos foram a inclusão de 0, 10, 20 e 30% dos minerais na forma de carboaminofosfoquelatos no sal mineralizado, representando um consumo de minerais nesta forma de 0, 0,03, 0,06 e 0,09 g por kg de peso vivo, respectivamente. A utilização de minerais na forma de carboaminofosfoquelatos não afetou o consumo de hemicelulose, MS, MO, FDN e FDA (P>0,1). No entanto, houve uma melhora significativa na digestibilidade aparente da hemicelulose e da FDN (P<0,1) sem que a digestibilidade das demais frações fossem afetadas (P>0,1). De uma forma geral, a excreção fecal de nitrogênio, enxofre, cobre e zinco foi diminuída com o consumo de minerais na forma de carboaminofosfoquelatos entre 30 e 60 mg por kg de peso vivo. A excreção fecal de fósforo não foi afetada pela utilização de minerais nesta forma química. O consumo de matéria seca e matéria orgânica digestível aumentou significativamente de forma linear com os níveis de carboaminofosfoquelatos (P<0,1). Os dados dão indícios de que os carboaminofosfoquelatos podem melhorar o consumo de matéria orgânica digestível e a digestibilidade de algumas frações nutritivas, além de diminuir a excreção fecal de minerais.

O presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar os microrganismos aeróbicos e a frequência de isolamento de Escherichia coli patogênica ao homem em fezes de cães sem sintomas de colibacilose e assim averiguar a participação do cão como fonte de infeção de colibacilose humana. No período de setembro de 2002 a outubro de 2004, foram coletadas 220 amostras de fezes de animais capturados pelos CCZ de Guarulhos, Cotia e Barueri, cidades do Estado de São Paulo. O método de coleta foi através de swabs estéreis profundamente ao intestino dos animais anestesiados, mantidos sob refrigeração e em caldo BHI. As bactérias foram isoladas por semeadura em Mac Conkey, ágar sangue e Sabouraud. Houve crescimento de microrganismos em 100% delas. Foram isolados os seguintes microrganismos: 120 (54,54%) estirpes de E. coli em cultura pura e 76 (34,54%) estirpes em associação com outros agentes, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2,27%), dentre outros microrganismos. Deve-se ressaltar ainda o isolamento de leveduras (Candida albicans) em associação com outros agentes a partir de 05 (2,27%) amostras de swabs retais. Uma vez isoladas, seus genes de virulência foram detectados por PCR. De um total de 196 estirpes de E. coli isoladas, 123 (62,75%) apresentaram um ou mais dos fatores de virulência estudados. Dessas 196 estirpes, 16 (8,16%) foram positivas para afa, 54 (27,55%) foram positivas para sfa, 38 (19,38%) foram positivas para pap, 66 (33,67%) foram positivas para aer, 31 (15,81%) foram positivas para cnf, 13 (6,63%) foram positivas para hly, 01(0,51%) foi positiva para VT2 e nenhuma das linhagens foi positiva para LT, STa e STb. Os cães aparentemente sadios, sem sintomas de colibacilose, poderiam estar participando da cadeia epidemiológica como reservatórios de E. coli uropatogênica ao homem, pois os genes encontrados com maior número foram aer, sfa e pap presentes em infecções extraintestinais, mais especificamente infecções urinárias. Os cães podem participar como reservatório de estirpes de E. coli resistentes a antimicrobianos. Das amostras de E. coli testadas, 85,64% apresentaram resistência à Cefalotina e 0% de resistência à Norfloxacina. Há a necessidade de mais pesquisas sobre o modo de transmissão das E. coli patogênicas entre o cão e o homem e dos fatores de virulência uropatogênicos encontrados com maior frequência tais como aer, sfa e pap. / The objective of the present study was to isolate and identify aerobic microorganisms and the isolation frequency of E. coli pathogenic to man in faeces of dogs without colibacillosis symptoms and thus to verify the participation of dog as a source of human colibacillosis infection. In the period between September 2002 to October 2004, 220 samples of faeces were collected from animals captured by the CCZ of Guarulhos, Cotia and Barueri, cities in the São Paulo state. The collection method used was barren swabs deeply to the intestine of anesthetized animals, which were kept under refrigeration and in a BHI broth. The bacteria were isolated through sowing in Mac Conkey, agar blood and Sabouraud. In 100% of them there was microorganism growth. The following microorganisms were isolated: 120 (54.54%) E. coli lineages in pure culture and 76 (34.54% lineages in association with other agents, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2.27%,) amongst other microorganisms. The isolation of yeasts (Candida Albicans) in association with other agents from 05 (2.27%) rectal samples swabs must be emphasized. Once isolated virulence genes were detected by PCR. Of a total of 196 isolated lineages of E.coli, 123 (62.75%) presented one or more of the studied virulence factors. Of these 196 lineages, 16 (8.16%) were positive for afa, 54 (27.55%) positive for sfa, 38 (19.38%) positive for pap, 66 (33.67%) positive for aer, 31 (15.81%) positive for caf, 13 (6.63%) positive for hly, 01 (0.51%) positive for VT2 and none of the lineages were positive for LT, Sta and STb. Apparently healthy dogs, without colibacillosis symptoms could be participating in the epidemiological chain as an E. coli reservoir uropathogenic to man, as the genes found with high frequency were aer, sfa and pap present in extraintestinal infections, more specifically urinary infections. The dogs can participate as a reservior of E. coli lineages resistant to antimicrobials. Of the E. coli samples tested, 85,64% presented resistance to Cefalotina and 0% resistance to Norfloxacina. More research is needed on how the transmission of pathogenic E. coli between the dog and man happens and also on the uropathogenic virulence factors found more frequently, such as aer, sfa and pap.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-06-22T18:03:31Z No. of bitstreams: 1 2016 - Caroline Spitz dos Santos.pdf: 4739307 bytes, checksum: 0073345f08ba619e059be0cc4a39b481 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T18:03:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Caroline Spitz dos Santos.pdf: 4739307 bytes, checksum: 0073345f08ba619e059be0cc4a39b481 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CAPES / The study on parabasalids in companion animals is gaining more attention for its association with diarrhea. The flagellate Pentatrichomonas hominis has been reported in association with domestic cats since the early 20th century. As a eurixenic parasite has been described in several hosts, including humans, dogs, bovines, rats, and a variety of wild animals. Another parabasalid with great importance in livestock, Tritrichomonas foetus has been also described in cats, pigs, and humans. These observations raise questions about the zoonotic potential of both species and their host specificity. This study aimed to diagnose parabasalid species found in cats using morphological and molecular analysis. Therefore, this study was divided into two parts to assess two different cat populations. In the first part, 41 animals in a trial cattery were evaluated. Twenty-six percent of the animals (11) were positive for P. hominis, at both techniques as fresh examination and culture. The DNA was extracted from the samples in culture and rRNA genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) using universal primers (TFR1 and 2) and other two specific species for T. foetus (TFR3 and 4) and P. hominis (TH3 and 5). Morphological analysis of trophozoites revealed the presence of five previous plagues core round and axostyle tapering uniform, characteristic way of P. hominis. The results of morphology were confirmed by molecular study. The sequencing of the isolates revealed a sequence with 100% similarity to P. hominis isolated from cats and dogs deposited in Genbank. This is the first study in Brazil with pointed out the presence of Parabasalids in cats by using morphological and molecular data and it is the one in the literature where P. hominis was isolated. In the second part of this study, 77 samples of feces from cats from the clinical care of HVPA-UFRRJ were examined. Only four of 77 samples tested were positive. Morphological analysis showed predominantly pear-shaped protozoa with three previous scourges, elongated nucleus and ax?stilo abruptly ending in characteristic fillet in T. fetus. In scanning electron microscopy and transmission, were visualized the identifying characters were similar to those previously reported for T. foetus. Molecular analysis confirmed the morphological diagnosis in the organism from four samples showed a sequence with 99.7 to 100% of similarity. It was deposited in Genbank as T. foetus. Despite the morphological analysis have recognized only T. foetus in the four samples examined, three of them were also positive for P. hominis in molecular analysis used as a differential diagnosis using species-specific primers (TH3 and TH5). The molecular analysis was used as a confirmatory tool for the presence of only one species present in evaluated feces. This demonstrated that not only T. foetus was identified in this study, but a co-infection by P. hominis cats could be considered. This indication was only confirmed as a diagnostic techniques when the morphological analysis and molecular biology were used to confirm both species. / O estudo sobre parabasal?deos em animais de companhia vem ganhando cada vez mais aten??o por sua associa??o a quadros de diarreia. O flagelado Pentatrichomonas hominis foi relatado em associa??o com gatos dom?sticos desde o in?cio do s?culo 20. Por ser um parasito eurix?nico, j? foi descrito em diversos hospedeiros, incluindo os seres humanos, c?es, bovinos, ratos e uma variedade de animais selvagens. Assim tamb?m outra esp?cie de parabasal?deo com grande import?ncia na pecu?ria, Tritrichomonas foetus j? foi descrito em gatos, su?nos, e em humanos tamb?m. Tais observa??es levantam d?vidas sobre o potencial zoon?tico de ambas as esp?cies e sua inespecificidade hospedeira. Este estudo teve por objetivos diagnosticar esp?cies de parabasal?deos encontrados em gatos utilizando de an?lise morfol?gica e molecular. Para tanto, este estudo foi dividido em duas partes para avaliar duas popula??es felinas distintas. Na primeira parte, 41 animais de um gatil de experimenta??o foram avaliados. Vinte e seis por cento dos animais (11) foram positivos para P. hominis, tanto no exame a fresco quanto na cultura. O DNA foi extra?do das amostras em cultura e os genes de rRNA foram amplificados por rea??o em cadeia da polimerase (PCR), utilizando iniciadores universais (TFR1 e 2) e outros dois esp?cies espec?ficos para T. foetus (TFR3 e 4) e P. hominis (TH3 e 5). A an?lise morfol?gica dos trofozo?tos revelou a presen?a de cinco flagelos anteriores, n?cleo redondo e ax?stilo afunilando de maneira uniforme, caracter?stico de P. hominis. Os resultados da morfologia foram confirmados pelo estudo molecular. O sequenciamento dos isolados revelou 100% de similaridade de sequ?ncia com P. hominis isolado de gato e de c?o depositados no Genbank. Este ? o primeiro estudo realizado no Brasil sobre a presen?a de parabasal?deos em gatos utilizando dados morfol?gicos e moleculares e o ?nico na literatura onde somente P. hominis foi isolado. Na segunda parte deste estudo, 77 amostras de fezes de gatos provenientes do atendimento cl?nico do HVPA-UFRRJ foram examinadas. Somente quatro amostras apresentaram positivas. A an?lise morfol?gica demonstrou protozo?rios predominantemente piriformes com tres flagelos anteriores, n?cleo alongado e ax?stilo terminando bruscamente em filete caracter?stico de T. foetus. Na microscopia eletr?nica de varredura e de transmiss?o, foram visualizados caracteres de identifica??o semelhantes aos descritos na literatura para T. foetus. ? an?lise molecular, confirmou o diagn?stico morfol?gico nas quatro amostras, e no sequenciamento apresentaram 99,7-100% de similaridade com sequencias de T. foetus depositadas no Genbank. Apesar da an?lise morfol?gica ter reconhecido somente T. foetus nas quatro amostras, tr?s delas foram positivas tamb?m para P. hominis na an?lise molecular utilizada como diagn?stico diferencial utilizando iniciadores esp?cie-espec?fica (TH3 e TH5). O estudo molecular foi utilizado como ferramenta confirmat?ria da presen?a de somente uma esp?cie presente nas fezes avaliadas. Isso demonstra que n?o s? T. foetus foi identificado pelo presente estudo, como tamb?m a coinfec??o por P. hominis em felinos. Estas informa??es s? foram confirmadas quando se utilizou as t?cnicas de diagn?stico em conjunto como an?lise morfol?gica simples e biologia molecular.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:54:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao completa Silvia Cristina Lopes Fernandez.pdf: 309786 bytes, checksum: 0998ae4c9bd35208a4394152308f7622 (MD5) Previous issue date: 2006-11-24 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Intestinal parasitoses are diseases closely related to sanitary conditions and a serious problem of public health in underdeveloped countries Many studies have shown that children are more susceptible to parasitic infections due to poor hygienic habits and therefore the effects of parasitism are more significant in them In face of the growth of cities and a higher participation of women in the work market mothers have to take their small children to day-care centers where they are exposed to a potentially contaminated environment In Brazil more than half the population of pre-school and school children have parasitoses In the present study epidemiological variables were surveyed by means of a questionnaire applied to 200 children at their homes who were cared for in microareas of Basic Heathcare Units (Unidades Basics de Saudi) and Family Health Program (Programa de Saúde da Família) of the city of Poços de Caldas State of Minas Gerais Brazil Parasitologic examinations were conducted by the spontaneous sedimentation Technique Results showed that Entamoeba coli and E hystolitica were the most prevalent Parasites The socieconomical conditions of the city are indicative of the population s Good quality of life The most marked risk factors for parasitic infection were the permanent presence of vectors such pets flies mosquitoes cockroaches and/or rats in the house The preventive measures proposed to the Vigilância Sanitária e Epidemiológica (Service of Sanitary and Epidemiological Vigilance) are the implementation of basic sanitation and continuous programs of sanitary education routine follow-up of parasitic infections and checking the effectiveness of the treatment prescribed / Parasitoses intestinais são doenças que estão intimamente relacionadas às condições sanitárias e representam um importante problema de saúde pública nos países subdesenvolvidos Estudos mostram a criança como alvo da infecção parasitária devido a hábitos de higiene e saúde não suficientemente consolidados sendo que nela repercussões das parasitoses tornam-se mais significativas Em função da maior urbanização e maior participação feminina no mercado de trabalho as creches passaram a ser o primeiro ambiente externo ao doméstico que a criança freqüenta tornando-se potenciais ambientes de contaminação No Brasil mais da metade de pré-escolares e escolares encontram-se parasitadas No presente estudo analisaram-se variáveis epidemiológicas através de um inquérito domiciliar de 200 crianças assistidas por micro-áreas de Unidades Básicas de Saúde e Programa de Saúde da família (PSF) do município de Poços de Caldas-MG e exames parasitológicos através da técnica de Sedimentação Espontânea para possível diagnóstico de parasitoses intestinais Os resultados evidenciaram que no município de Poços de Caldas foi predominante o diagnóstico de protozooses intestinais entre crianças na faixa escolar destacando-se a Entamoeba coli e a E histolytica como as parasitoses mais prevalentes o quadro socioeconômico do município é favorável ou indicativo de uma boa qualidade de vida da população os fatores de risco para as infecções parasitárias com maiores destaques foram a presença permanente de possíveis vetores como animais domésticos e o aparecimento também freqüente de vetores como moscas mosquitos baratas e/ou ratos na casa as atividades preventivas propostas à vigilância sanitária e epidemiológica são a implementação de medidas de saneamento básico e programas contínuos concomitantemente visando a educação sanitária acompanhamento rotineiro das infecções parasitárias bem como participação e verificação da eficácia do tratamento preconizado

Orientador: José Paes de Ameida Nogueira Pinto / Coorientador: / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: Luciano dos Santos Bersot / Resumo: O vírus da hepatite E (HEV) é um importante problema para a saúde pública e uma das principais causas de hepatite entérica em todo o mundo, podendo ser transmitido pelo consumo de carne suína contaminada. O trabalho teve por objetivos avaliar a prevalência do HEV em suínos de criações intensivas e tecnificadas, abatidos em matadouro-frigorífico sob Inspeção Sanitária. Foram coletadas 140 amostras de fezes de suínos de 14 propriedades distintas dos estados de São Paulo e Santa Catarina. As técnicas de diagnósticos moleculares nas amostras de fezes foram Nested RT-PCR e sequenciamento de Sanger para identificação da presença do vírus da hepatite E e o genótipo para elucidar os dados epidemiológicos. Os suínos não apresentaram doenças ou sinais clínicos no exame ante mortem e no exame post mortem. Os fígados não apresentaram lesões macroscópicas e contaminações gastrointestinais visíveis, portanto, as vísceras e carcaças foram destinadas ao consumo humano. Foram identificados 1,4% de suínos infectados pelo HEV genótipo 3. O vírus da Hepatite E, genótipos 3 e 4 tem caráter zoonótico, podendo gerar grande impacto na Saúde Pública. Diante disso, deve-se haver cuidados na manipulação de produtos possivelmente contaminados pelo HEV, evitando assim a contaminação cruzada, e, também, tratando termicamente a carne e derivados de suínos, a fim de garantir a inocuidade alimentar. / Abstract: Hepatitis E virus (HEV) is a major public health problem and one of the leading causes of enteric hepatitis worldwide and can be transmitted through the consumption of contaminated pork. The objective of this study was to evaluate the prevalence of HEV in pigs from intensive and technified farms slaughtered at a slaughterhouse under Sanitary Inspection. A total of 140 swine feces samples were collected from 14 different properties in the states of São Paulo and Santa Catarina. Molecular diagnostic techniques in faecal samples were Nested RT-PCR and Sanger sequencing to identify the presence of hepatitis E virus and the genotype to elucidate epidemiological data. The pigs had no disease or clinical signs on antemortem and post-mortem examination. The livers did not present macroscopic lesions and visible gastrointestinal contaminations, therefore the viscera and carcasses were destined for human consumption. A total of 1.4% of HEV genotype 3 infected pigs were identified. The hepatitis E virus, genotypes 3 and 4, is zoonotic in nature and can have a great impact on public health. In view of this, care must be taken in the handling of products possibly contaminated by HEV, thus avoiding cross-contamination, and also by thermally treating meat and pork products in order to guarantee food safety. / Mestre

O desempenho de seis métodos de extração de DNA de oocistos de Cryptosporidium spp. em fezes foram avaliados pela nested PCR do gene SSU rRNA. Os métodos consistem na combinação com pequenas variações de duas técnicas para a liberação de esporozoítos (indução de excistamento/E ou choque térmico/C) e três técnicas de purificação de DNA (fenol-clorofórmio/F, GuSCN-sílica/S ou kit QIAmp DNA Stool Mini/K). Para a avaliação da sensibilidade analítica, os testes foram realizados a partir de diluições seriadas de oocistos purificados, na ausência e na presença de 100 &mu;l de fezes bovinas. A sensibilidade diagnóstica foi avaliada pela comparação com o método microscópico de centrífugo-flutuação em sacarose (padrão-ouro) em 15 amostras fecais de diferentes hospedeiros naturalmente infectados. Na ausência de fezes, foram avaliados apenas os métodos EF, ES, CF e CS, sendo que EF apresentou sensibilidade analítica superior, possibilitando a detecção de até 1 oocisto. Na presença de fezes, os métodos EF, EK e CK apresentaram desempenhos equivalentes, com sensibilidade de 104 oocistos. As maiores sensibilidades diagnósticas foram obtidas pelos métodos EK e CK, que possibilitaram a detecção de 13 (86,7%) das 15 amostras. Devido à alta sensibilidade analítica de EF em amostras purificadas, avaliou-se sua sensibilidade diagnóstica em amostras de oocistos purificados pelo método de centrífugo-flutuacão em sacarose, obtendo-se 100% de detecção. A presença de inibidores nas amostras fecais reduziu fortemente a sensibilidade das reações de PCR a partir de DNA extraído pelos métodos avaliados, sendo recomendável o emprego de técnicas de purificação de oocistos previamente à extração de DNA. Os resultados apontam para uma melhor eficiência dos métodos de indução de excistamento e kit QIAmp DNA Stool Mini. / The performance of six methods for DNA extraction from Cryptosporidium spp. oocysts in feces were evaluated by nested PCR of SSU rRNA gene. The methods are the combination with small variations of two techniques for the release of sporozoites (induction of excystation/E or thermal shock/C) and three techniques for DNA purification (phenol-chloroform/F, GuSCN-silica/S or QIAmp DNA Stool Mini kit/K). For the evaluation of analytical sensitivity, tests were made from serial dilutions of purified oocysts, in absence and in presence of 100 &mu;l of cattle feces. The diagnostic sensitivity was assessed by comparison with the microscopic method of centrifugalflotation in sucrose (gold standard) in 15 fecal samples from different naturally infected hosts. In the absence of feces, only methods EF, ES, FC, and CS were tested. EF had the highest analytical sensitivity, enabling the detection of up to 1 oocyst. In the presence of feces, methods EF, EK, and CK showed similar performance, with sensitivity of 104 oocysts. The highest sensitivities were obtained by methods EK and CK, which enabled the detection of 13 (86.7%) of 15 samples. Due to the high analytical sensitivity of EF in purified samples, its diagnostic sensitivity was evaluated in samples of purified oocysts by the method of centrifugal-flotation in sucrose, resulting in 100% detection. The presence of inhibitors in fecal samples greatly reduced the sensitivity of the PCR reactions from DNA extraction methods evaluated, and the use of techniques for purification of oocysts prior to DNA extraction is recommended. The results show a better performance of the methods of induction of excystation and QIAmp DNA Stool Mini kit.