Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / There are complex relationships between GH system and hypothalamic-pituitarythyroid axis. Thyroid hormones play a fundamental role in the initiation and maintenance of somatic growth and are important in the regulation of several growth factors. The relationship between goiter and acromegaly is well known, but the unique study of thyroid volume in the growth hormone deficiency has shown reduced thyroid volume in hypopituity patients. The aim of this study was to asses the morphology and thyroid function in adults patients with isolated growth homone deficiency (IGHD) due to a mutation in the receptor of growth hormone releasing hormone (GHRH) of Itabaianinha. MATERIAL AND METHODS: 3 groups were studied: Group 1 - 24 individuals with IGHD ( MT/MT; 9M/15F, 43,7±15,8anos); Group 2 18 individuals heterozygous (WT/MT; 8M/10F, 51,1±16,5anos); Group 3 18 normal homozygous (WT/WT; 7M/11F, 41,8±15anos). The subjects have done thyroid ultrassonography, avaliation of body composition, thyroid hormones (T3, T4, free T4, TSH), AAM and IGF-I. Statical analysis was made using ANOVA and spearmam correlation index. RESULTS: The group 1 (IGHD) had reduced weight, height, sds h/a, body surface, IGF-I and fat free mass with higher fat mass percent than groups 2 and 3. Group 1 (IGHD) had smaller T3 than group 3 (1,12 ± 0,23 x 1,43 ± 0,2; p < 0,05) (normal control) and higher free T4 than groups 2 (1,2 ± 0,25 x 0,94 ± 0,18; p<0,05) and 3 (1,2 ± 0,25 x 1,01 ± 0,22; p< 0,05) with tendency of higher TSH than group 3. The group 2 had smaller sds h/a (-2,44 ± 1,19 x -1,51 ± 1,2, p<0,05) and IGF-I than group 3 (138,2 ng/ml ± 122,3 x 290,2 ± 160,7; p <0,05). The thyroid volume was smaller in the group 1 (3,59 mL ± 2,09) than group 2 (5,9 mL ± 2,3; p<0,003 ) and 3 (9,24 mL ± 3,12; p<0,0001). The group 2 (heterozygous) had smaller thyroid volume than group 3 (normal homozygous) (p<0,003). When thyroid volume was corrected for body surface, the difference between thyroid volume in groups 1 (3,16 ml ± 1,69) and 2 (3,97 ml ± 1,68) dissapeared. The thyroid volume had positive correlation with IGF-I (r=677; p<0,0001), weight (r= 0,688; p<0,0001), body surface (r=0,678; p=0,000), fat free mass (r=0,717; p<0,0001) e height (r=0,748; p<0,0001) and negative correlation with free T4 (r = -0,278; p < 0,04 )and fat mass percentual (r = -0,631; p < 0,0001) when analysed the total of 46 individuals. When analysed only the IGHD individuals the positive correlation had persisted with fat free mass (r=0,432; p<0,05), height (r=0,489;p<0,02) and body surface (r=0,625; p=<0,02). CONCLUSION: The finding of smaller thyroid volume in GHD and in heterozygous subjects, and its correlation with height and serum IGF-1 indicate a critical role of GH in the determination of the volume of the thyroid gland. / Há complexas relações entre o sistema GH-IGF-I e o eixo hipotalâmico-pituitáriotireoideano. Os hormônios tireoideanos são importantes na iniciação e manutenção do crescimento somático e na regulação de vários fatores de crescimento. A relação entre bócio e acromegalia é bem conhecida, mas o único estudo de volume tireoideano na deficiência de hormônio do crescimento mostrou volume tireoideano reduzido em pacientes com hipopituitarismo. O objetivo deste estudo é avaliar a morfologia e função tireoideanas em adultos afetados com DIGH devido a mutação no receptor do GHRH de Itabaianinha e em heterozigotos para a mesma mutação. Casuística e Métodos: Foram estudados 3 grupos: Grupo 1 - 24 indivíduos com DIGH (MT/MT; 9M/15F, 43,7±15,8anos); Grupo 2 18 indivíduos heterozigotos (WT/MT; 8M/10F,51,1 ±16,5anos); Grupo 3 18 homozigotos normais (WT/WT; 7M/11F, 41,8±15anos). Os indivíduos realizaram ultrassonografia da tireóide, avaliação da composição corporal, hormônios tireoideanos (T3, T4, T4 livre), TSH, AAM e IGF-I. comparação entre os grupos foi feita através de Anova e correlações através do coeficiente de correlação de Spearman. Resultados: O grupo 1 (DIGH) apresentaram menor peso, altura, edp a/i, superfície corpórea, IGF-I e massa magra, além de maior porcentagem de massa gorda em comparação com os grupos 2 e 3. O Grupo 1 apresentou também menores níveis de T3 que o grupo 3 (1,12 ± 0,23 x 1,43 ± 0,2; p < 0,05) e maiores níveis de T4 livre que os grupos 2 (1,2 ± 0,25 x 0,94 ± 0,18; p<0,05) e 3 (1,2 ± 0,25 x 1,01 ± 0,22; p< 0,05), com tendência a maiores concentrações de TSH em relação ao grupo 3. O grupo 2 apresentou menor edp a/i (-2,44 ± 1,19 x -1,51 ± 1,2, p<0,05) e IGF-I em relação ao grupo 3 (138,2 ng/ml ± 122,3 x 290,2 ± 160,7; p <0,05). O volume tireoideano foi menor no grupo 1 (3,59 mL ± 2,09) em comparação ao grupo 2 (5,9 mL ± 2,3; p<0,003) e 3 (9,24 mL ± 3,12; p<0,0001). O gropo 2 (heterozigotos) apresentou menor volume tireoideano que o grupo 3 (homozigotos normais) (p<0,003). Quando o volume tireoideano foi corrigido por superfície corpórea, a diferença do volume tireoideano entre os homozigotos afetados (3,16 ml ± 1,69) e heterozigotos (3,97 ml ± 1,68) desapareceu. O volume tireoideano apresentou correlação positiva com o IGF-I 1 3 (r=677; p<0,0001), peso (r= 0,688; p<0,0001), superfície corpórea (r=0,678; p<0,0001), massa magra (r=0,717; p<0,0001) e altura (r=0,748; p<0,0001) e correlação negativa com percentual de massa gorda (r = -0,631; p < 0,0001) e T4 livre (r = -0,278; p < 0,04 ) quando analisados o total de 46 indivíduos. Quando analisados apenas o grupo 1, persiste as correlações positivas com massa magra (r=0,432; p<0,05), altura (r=0,489;p<0,02) e superfície corpórea (r=0,625; p=<0,02). CONCLUSÃO: O achado de menor volume tireoideano nos indivíduos com DIGH e heterozigotos e suas correlações com altura e IGF-I indicam um papel crítico do GH na determinação do volume da glândula tireoideana.

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Foi realizada análise histológica para contagem de folículos ovarianos e diâmetros oócitários, nucleares e foliculares e análise de imunohistoquímica para avaliar a presença de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a. Os grupos de animais df/df apresentaram uma quantidade de folículos primordiais, em transição e totais maiores que os animais normais (p<0,0001, p=0,0002 e p<0,0001, respectivamente). Os grupos que receberam o tratamento com GH apresentaram menor quantidade de folículos primordiais e totais (p=0,009 e p=0,018, respectivamente). O grupo de animais bGH apresentou uma quantidade de folículos primordiais, em transição, primários e totais menores que o grupo controle (p=0,0001, p=0,0037, p=0,0006 e p=0,0009, respectivamente). Na imunohistoquímica foi observado que em folículos primordiais dos grupos de animais normais a quantidade de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a foi menor comparado aos grupos de animais df/df (p=0,009 e p=0,01, respectivamente). Os grupos com tratamento com GH apresentaram uma quantidade de proteína FOXO3a menor (p=0,03) e p-FOXO3a maior (p=0,01), em folículos primordiais, comparado com seus grupos controles. O grupo de animais bGH apresentou em folículos primários uma maior quantidade de p-FOXO3a comparada ao grupo controle (p=0,006). Os animais df/df apresentam uma maior reserva ovariana e o tratamento com GH na vida adulta foi capaz de ativar a reserva tanto em animais normais quanto em df/df. O contrário foi observado em animais bGH, que apresentaram uma reserva ovariana menor que animais normais. Ainda, a presença de p-FOXO3a parece estar diretamente relacionada a ativação do crescimento folicular e estar sobre o controle do GH. / The objective of this study was to evaluate the number of primordial, primary, secondary and tertiary follicles, as well as the diameter of the nucleus, oocyte and follicle, and the levels of proteins Forkhead Box O3a (FOXO3a) Forkhead Box O3A phosphorylated (p-FOXO3a) in ovaries of Ames Dwarf mice (df/df), with deficient secretion of endogenous growth hormone (GH), receiving or not treatment with exogenous GH; and mice that over express the endogenous GH (bGH). The groups that received exogenous GH were subjected to a treatment with the hormone by subcutaneous injection, given twice a day, starting at the age of fourteen months, during six weeks. After the euthanasia ovaries were removed. Histological analysis was performed to count ovarian follicles and oocyte, nuclear and follicular diameters, and immunohistochemical analysis to evaluate the presence of proteins FOXO3a and p-FOXO3a. The groups of df/df mice had higher number of primordial, in transition and total follicles than normal mice (p<0.0001, p=0.0002 and p<0.0001, respectively). The groups that received the treatment with GH had lower numbers of primordial and total follicles (p=0.009 and p=0.018, respectively). The group of bGH mice had lower numbers of of primordial, in transition, primary and total follicles than the control group (p=0.0001, p=0.0037, p=0.0006 and p=0.0009, respectively). In the immunohistochemistry was observed that in the primordial follicles of normal groups animals the quantity of proteins FOXO3a and p-FOXO3a was lower compared to groups of df/df mice (p=0.009 and p=0.01, respectively). The groups treated with GH had lower quantity of protein FOXO3a (p=0.03) and higher quantity of FOXO3a (p=0.01), in primordial follicles, compared with their control groups. The group of bGH mice presented a higher quantity of p-FOXO3a in primary follicles compared to control group (p=0.006). df/df mice had a larger ovarian primordial follicle reserve than normal mice and the treatment with GH in adult life was able to activate reserve both normal and df/df animals. The opposite was observed in bGH, which presented a smaller ovarian reserve. In addition, the presence of the p-FOXO3a seems to be direct related to activation of primordial follicle growth and under the control of GH.

Voice is produced by vibration of the vocal folds, whose number of cycles per second corresponds to the fundamental frequency (f0) of the laryngeal signal. Formants (F) are multipleof (f0), indicatingtheresonance frequency of the vowels in the vocal tract. The first formant (F1), relates to sound amplification in posterior oral cavity and vertical position of the tongue; and the second formant (F2) relates to the anterior oral cavity and to the horizontal position of the tongue. The third formant (F3) is related to the position front and behind of the apex of the tongue, the fourth formant (F4) relates to the shapeof larynx and pharynx at the same height. We identified a cohort of individuals with isolated growth hormone (GH) deficiency (IGHD) caused by the homozygous c.57 +1 G> A mutation in the GH releasing hormone receptor gene, with severe short stature, accentuated reduction of maxillaries, and laryngeal constriction. The voice of IGHD individuals presents high f0, regardless of age and gender. Our objective was to analyze F1, F2, F3 and F4 of the seven oral vowels in Brazilian Portuguese, [a, ε, e, i, o, u]. A cross-sectional study was conducted with 33IGHD individuals, 44.48 (17.60) years, 16 women, and 29 controls, 51.10 (17.65) years, 15 women by a computed acoustics analyze. In addition, it was analyzed a subgroup of 13 men (5 with IGHD) and 20 women (9 IGHD), above 50 years of age. Values were expressed as mean (standard deviation) or median (interquartile range). The comparison between groups was made by Student s t and Mann-Whitney tests and of the vowel in the same formant, by the paired t test. Compared to controls, IGHD men show higher values of F3 [i, e and ε], p=0.006, p=0.022 and, p=0.006, respectively, and F4[i], p=0.001 and lower values of F2 [u] p=0.034. IGHD women, higher values of F1[i and e] p=0.029 and p=0.036; and F2[ ] p = 0.006; F4[ ], p= 0.031; and lower values of F2[i] p=0.004. Men and women IGHD have similar values of formant frequencies, except for F1 [a, ó and ε] p< 0.0001, p=0.004 and p= 0.001, respectively. Men and women IGHD did not present distinction in the pair vowel high and medium high in F1 [u-o]. In both groups were observed the distinction in F2 vowel anterior-posterior. Over 50 years of age, IGHD men have lower values of F1 [i, o] p=0.042, p=0.040; and IGHD women, higher values of F1 [ε] p=0.018. In conclusion, IGHD subjects exhibit higher values of formants frequencies, suggesting shortening of vocal tract. IGHD reduces the effect of aging and gender on the formant structure. / A voz é produzida pela vibração das pregas vocais, cujo número de ciclos por segundo corresponde à frequência fundamental (f0) do sinal laríngeo. Formantes (F) são múltiplos da f0, indicam zonas de ressonância das vogais no trato vocal. O primeiro formante (F1), relaciona-se à amplificação sonora na cavidade oral posterior e à posição da língua no plano vertical; o segundo formante (F2) à cavidade oral anterior e à posição da língua no plano horizontal. O terceiro formante (F3) relaciona-se às cavidades à frente e atrás do ápice da língua; o quarto formante (F4), ao formato da laringe e da faringe na mesma altura. Em Itabaianinha, nordeste do Brasil, uma coorte de indivíduos com deficiência isolada do hormônio de crescimento (DIGH), foi identificada uma mutação homozigótica c.57 +1 G>A no gene do receptor do hormônio liberador do GH, com baixa estatura acentuada, redução acentuada do comprimento da maxila e mandíbula e constrição laríngea. A voz dos indivíduos DIGH apresenta f0 elevada, independentemente da idade e gênero. OBJETIVO: Analisar os formantes F1, F2, F3, F4 das sete vogais orais do português brasileiro [a, ó, é, ô, ê, u, i]. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Estudo transversal com 33 indivíduos com DIGH, 44,48 (17,60) anos de idade, 16 mulheres; e 29 controles, 51,10 (17,65) anos, 15 mulheres. Adicionalmente, foi analisado um subgrupo de 13 homens (cinco DIGH) e 20 mulheres (nove DIGH) acima de 50 anos de idade. Foi utilizada a análise acústica computadorizada para extração das medidas dos formantes (Hertz); os valores foram expressos em média (desvio padrão) ou em mediana (distância interquartílica). A comparação entre grupos foi realizada pelos testes t de Student e Mann-Whitney, teste t pareadopara a comparação de vogais no mesmo formante. RESULTADOS: Comparados aos controles, homens com DIGH apresentaram valores maiores de F3[i, ê, é], p=0,006; p=0,022; p=0,006, respectivamente; F4[i] p=0,001; valor menor de F2 [u], p= 0,034. Mulheres com DIGH apresentaram valores maiores de F1[i, ê], p=0,029; p=0,036; F2[ó] p=0,006; F4[ó] p=0,031; valor menor de F2[i] p=0,004. A DIGH apresentou valores dos formantes similares em ambos os gêneros, exceto F1[a, é, ó] p<0,0001 p=0004; p<0,0001, respectivamente, menor em homens que em mulheres com DIGH; ambos também não apresentaram distinção do par das vogais alta e média alta em F1[u-ô]. Em controles e DIGH, de ambos os gêneros, observou-se a distinção em F2 de vogais anteriores e posteriores. Em comparação aos controles, homens DIGH acima de 50 anos apresentam valores menores de F1[i, ô] p=0,042; p=0,040; e as mulheres DIGH na mesma faixa etária têm valores maiores de F1[é] p=0,018. CONCLUSÃO: Indivíduos com DIGH apresentaram um estrutura de formantes elevada, sugerindo encurtamento do trato vocal. A DIGH reduz o efeito da idade e do gênero sobre a estrutura de formantes.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Growth hormone (GH) and prolactin share similarities in structure and function. We have previously shown that women with congenital isolated GH deficiency (IGHD) caused by a homozygous mutation in the GHRH receptor gene (GHRHR) (MUT/MUT) have a short reproductive life, with anticipated climacteric. At climacteric, they have lower prolactin levels than normal controls (N/N). Because they are able to breast feed, we hypothesized that this prolactin reduction is limited to climacteric, as result of lower estradiol exposure of the lactotrophs. The purposes of this work were to assess prolactin levels in broader age adults homozygous and heterozygous (MUT/N) for the mutation and in normal controls (N/N), and correlate them with determinants factors and insulin sensitivity. We enrolled 24 GH-naıve MUT/MUT (12 female), 25 MUT/N (14 female), and 25 N/N (11 female) subjects, aged 25 65 years. Anthropometric data and serum prolactin, estradiol, total testosterone, and sex hormone binding globulin (SHBG) were measured. Free testosterone was calculated. Prolactin levels were similar in the threeg groups. In males, testosterone and SHBG levels were higher in MUT/MUT in comparison to N/N. There was no difference in free testosterone among groups. In all 74 individuals, prolactin correlated inversely with age (p.0001) and directly with serum estradiol (p = 0.018). Prolactin levels in subjects with IGHD due to a homozygous GHRHR mutation are similar to heterozygous and normal homozygous, but total testosterone and SHBG are higher in male MUT/MUT, with no difference in free testosterone. The reduced prolactin level is limited to climacteric period, possibly due to reduced estrogen exposure. / O hormônio do crescimento (GH) e a prolactina possuem fortes semelhanças em estrutura e função. Nós demonstramos que as mulheres com nanismo grave devido a deficiência isolada de GH (DIGH), causada por uma mutação homozigótica (c.57 + 1G > A) no gene do receptor de GHRH (MUT/MUT), apresentam uma vida reprodutiva curta, e no momento do climatério têm níveis mais baixos de prolactina do que os contrôles normais (N / N). O fato delas serem capazes de amamentar no menacne, sugeriu a hipótese de que esta redução da prolactina seria limitada a climatério como resultado da redução da menor exposição do estradiol aos lactotrofos. Os objetivos deste trabalho foi avaliar os níveis de prolactina em uma faixa etária mais ampla em indivíduos adultos homozigóticos afetados e heterozigoticos (MUT/N), e correlacioná-los com fatores determinantes e a sensibilidade a insulina. Para tal, um estudo transversal analítico incluiu 74 individuos de ambos os sexos, 24 MUT/MUT (12 mulheres), 25 MUT/N (14 mulheres) e 25 N/N (11 mulheres), com idades entre 25 e 62 anos. Foram obtidos os dados antropoméricos (peso, altura e IMC), os exames hormonais (prolactina sérica, estradiol, testosterona total e SHBG) dosados, sendo a a testosterona livre calculada. Os níveis de prolactina foram semelhantes entre os três grupos. Os níveis de testosterona total e SHBG em individuos do sexo masculino foram maiores no MUT/MUT em comparação com N/N e MUT/N (p < 0,0001 e p < 0,05), respectivamente. Não houve diferença nos níveis de testosterona livre entre os grupos e gêneros. Em todos os 74 indivíduos, a prolactina sérica correlacionou-se inversamente com a idade (p < 0,0001) e diretamente com estradiol (p = 0,018). Conclusões: Os níveis de prolactina nos individuos com DIGH devido a uma mutação homzigotica no GHRHR são semelhantes aos indivíduos heterozigóticos e homozigóticos normais, mas a testosterona total e SHBG são mais elevados nos individuos do sexo masculino no grupo MUT/MUT, sem diferença nos níveis de testosterona livre. O nível reduzido de prolactina é limitado ao periodo do climatério, possivelmente devido a menor exposicção estrogênica.

O ATP é a moeda corrente de energia no organismo, sendo indispensável para a manutenção da homeostase celular. A fosfocreatina é a fonte mais rápida de regeneração do ATP, através da ação da enzima creatina quinase (CK). O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da suplementação de curto prazo com creatina (Cr) sobre parâmetros da função muscular em ratos, além de alterações celulares e moleculares que auxiliem na compreensão de tais efeitos. A suplementação com Cr promoveu uma atenuação da fadiga em todos os músculos analisados. A expressão proteica do GH na hipófise dos animais suplementados encontrou-se reduzida, assim como a expressão gênica do IGF-I hepático. No músculo, O IGF-I teve sua expressão aumentada. Houve hipertrofia das fibras musculares tipo I e aumento na proporção de fibras tipo II no sóleo. O conteúdo muscular de espécies reativas de oxigênio mostrou-se reduzido no grupo Cr. Ensaios cell free apontam para uma ação direta da molécula de Cr sobre o radical superóxido. Assim, os efeitos observados podem se dever a uma ação antioxidante da Cr, que muito se assemelha à resposta observada quando animais são tratados com N-acetil-cisteína, um potente antioxidante. / The ATP is the energy unit of currency in the body and is indispensable for the maintenance of cellular homeostasis. Phosphocreatine is the fastest source for ATP regeneration, catalyzed by creatine kinase (CK). This study aims to evaluate the effects of short-term creatine (Cr) supplementation upon muscular functional parameters and cellular and molecular alterations that could explain such effects. Cr supplementation promoted an attenuation of muscle fatigue. GH protein expression was reduced in supplemented animals, as well as IGF-I mRNA in the liver, but not in muscle, where its expression was stimulated by Cr. Muscle fibers of soleus were hypertrophied and the type II fiber content was augmented. The muscular content of oxygen reactive species was lower in Cr group. Cell free experiments show a direct scavenger action of Cr on superoxide anion. Thus, the effects could result from a antioxidant properties of Cr. These effects was similar to that observed when N-Acetyl-Cysteine (a potent antioxidant) was administered to adult rats prior to intense contractile activity.

O beta hidroxi beta metilbutirato (HMB), metabólito do aminoácido leucina, é utilizado para reduzir a degradação e/ou aumentar a síntese proteica. Nosso grupo demonstrou que ratos submetidos à suplementação crônica de HMB apresentaram hiperinsulinemia e normoglicemia, sugerindo um quadro de resistência à ação da insulina (RI). Em paralelo, observamos um aumento da síntese e secreção de GH e da concentração plasmática de IGF-I, sugerindo um possível envolvimento do eixo somatotrófico na RI, considerando seus efeitos diabetogênicos. No presente estudo, após sobrecarga de glicose (0,75g/kg), observamos uma redução da taxa de decaimento de glicose, com uma hiperinsulinemia (Teste de tolerância à glicose - GTT); bem como redução da ação da insulina, em resposta e este hormônio (10 U), no fígado e músculos esqueléticos, detectados por western blotting, confirmando uma RI. Não encontramos evidências do envolvimento do GH neste quadro, uma vez que, no fígado, não detectamos alterações na expressão de pSTAT5 e SOCS3. No tecido adiposo branco, observamos aumento na expressão de mRNA e proteína da lipase hormônio sensível (LHS), bem como aumento da concentração de ácidos graxos livres (AGL) plasmáticos, podendo este ser um mecanismo de RI promovido pelo GH, nesta situação. / HMB is a metabolite of leucine able to increase protein synthesis and/or reduce protein degradation. Studies carried out in our laboratory have shown that HMB-supplemented rats although normoglycemic, exhibited hyperinsulinemia, suggesting an insulin resistance status. In parallel, it was observed an increased activity of the GH-IGF-I axis, reinforcing the possibility of alterations on glucose sensitivity, since GH is recognized as being diabetogenic effects. The results demonstrate that HMB-supplemented rats, after glucose overload (0,75g/kg) present reduced glucose decay rate and increased plasma insulin levels (glucose tolerance test GTT), confirming the insulin resistance status. By western blotting, was detected reduced insulin action (liver and skeletal muscle), after insulin stimulus. No alterations were detected in retroperitoneal white adipose tissue. No significant alterations were detected on pSTAT5 and SOCS3 after HMB supplementation indicating that GH could act by another mechanism to induce insulin resistance. Additionally, was detected increased on mRNA and protein expression of hormone sensitive lipase (HSL), and plasma concentrations of non-esterified fat acids (NEFA) in HMB-supplemented rats, which could be a mechanism mediated by GH, contributing to insulin resistance.

As distrofias musculares (DM) se caracterizam por degeneração progressiva e irreversível da musculatura esquelética. Dentre estas, a Distrofia Muscular de Duchenne (DMD), constitui doença letal ligada ao cromossomo X, caracterizada pela ausência de distrofina na membrana das fibras musculares, afetando um em cada 3.000 meninos nascidos vivos, sendo que a maioria será confinada à cadeira de rodas a partir dos 6 anos de idade e com sobrevida, sem cuidados especiais, em torno dos 25. Apesar do uso de técnicas modernas de diagnóstico, ainda não existe tratamento eficaz para essas doenças. Alguns trabalhos das décadas de 70 e 80 sugeriram que a inibição do hormônio do crescimento (GH) poderia retardar a evolução do processo distrófico de pacientes com DMD. Entretanto, como essas observações não foram comprovadas cientificamente até a presente data, neste trabalho estudamos os efeitos do excesso e da inibição do GH na evolução do quadro distrófico em modelo murino de distrofia muscular: i) administrou-se GH (10&#956;g/ camundongo/dia, i.p., por 10 dias) em camundongos: a) distróficos dy/dy (B6.Wk-Lama2dy-2J/J) com fenótipo, resultando na aceleração dos sintomas da doença, traduzida pela piora das performances de 17% no teste de deambulação (TD), 64% no teste de sustentação (TS), 28% no teste da esteira (TE) e 55% no teste de força máxima (TFM), em relação aos distróficos que não tomaram GH; apenas no teste de resistência à inclinação (TRI) não houve diferença significativa; entretanto, cortes histológicos do músculo gastrocnêmico desses camundongos, não mostraram alterações significativas em relação aos distróficos que não tomaram a droga; quanto aos marcadores de degeneração e regeneração (MDR) na musculatura desses animais, o GH não alterou os níveis de Pax7, MyoD, Laminina e Desmina, mas aumentou de 90% os níveis de TGF&#946;-1, uma citocina inflamatória que induz fibrose; b) já nos camundongos normais, o GH, ao contrário dos resultados acima, aumentou as performances de 13% no TD e de 28% TS, e ligeiramente, de forma não significativa, em outros dois testes; cortes histológicos revelaram que o GH aumentou de 16,5% a área de secção transversal dos músculos desses animais, o que poderia explicar os resultados descritos acima; já os níveis dos MDR, incluindo o de TGF&#946;-1, estavam semelhantes aos dos animais controles; ii) desenvolveu-se um novo modelo experimental resultante de cruzamentos de camundongos geneticamente deficientes em GH (Ghrhrlit) com os distróficos dy/dy (B6.Wk-Lama2dy-2J/J), mostrando um retardo na evolução da doença: as performances dos anões distróficos em relação aos anões normais foram melhores que aquelas dos distróficos em relação aos animais normais, ou sejam, 14% maior TD, 71% maior no TS, 18% maior no TE, 5,5% maior no TRI e 102% maior no TFM; cortes histológicos mostraram que a área do interstício nos músculos dos anões distróficos foi 29% menor que a dos distróficos não anões; os níveis de TGF&#946;-1 nestes animais, foram os únicos entre aqueles dos MDR estudados, que encontravam-se diminuidos de 36% em relação àqueles dos distróficos não anões; iii) a inibição da liberação do GH pela octreatida, análogo da somatostatina, mostrou também uma relativa melhora ou uma estabilização na evolução do quadro distrófico, traduzido pelo aumento, após 60 dias de tratamento, das performances nos testes funcionais da musculatura em relação àquelas dos animais distróficos sem tratamento: foi 12% maior no TD enquanto os distróficos controles diminuíram em 14%; foi 27% maior no teste de Rota Rod, enquanto os distróficos controles diminuíram em 32%; mantiveram a mesma performance no TE, enquanto os distróficos controles pioraram em 23%, e foram 29% maiores no TS, e 43% no teste de força de preensão, enquanto os distróficos controles não melhoram as suas performances nestes testes. Esses resultados sugerem um efeito patológico do GH na musculatura distrófica, com seu excesso levando a uma piora da doença, possivelmente através do aumento dos níveis de TGF&#946;-1. A diminuição do GH, consequentemente, poderia levar a um retardo da evolução da doença. Estes estudos experimentais abrem perspectivas bastante promissoras para se testar inibição dos efeitos do GH na evolução das doenças distróficas humanas. / Muscular dystrophies (DM) are characterized by progressive and irrevertible degeneration of the skeleton muscles. Among them, Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) consitutes lethal disease linked to chromossome X, distinguished by the absence of dystrophyn in the muscular fibers membrane, affecting one in each 3,000 boys born alive, who, most of them, will be confined to wheel chairs since the age of 6 and with life expectance, without special care, of 25 years. Despite modern diagnosis techniques, there is not an efficient treatment for these diseases. Some works from the 1970´s and 1980´s suggested that the inhibition of the growth hormone (GH) could retard the dystrophy process evolution in DMD patients. Nevertheless since this observation has not been proven scientifically, in the present work, the GH excess and inhibition effects on a murino model of muscular dystrophy, were studied: i) GH (10&#956;g/mouse/day, i.p., for 10 days) was given to mice: a) dystrophic dy/dy (B6.Wk-Lama2dy-2J/J), with phenotype , resulting in the acceleration of the disease symptoms, confirmed by the performance worsening by 17% in the deambulation test (DT), 64% in the sustaining test (S), 28% in the mat test and 55% in the maximum strength test (MST), in relation to dystrophic mice which had not taken GH; only in the inclination resistance test (IRT) there was no significant difference; however, histological cuts of the gastrocnemius muscle of these mice did not show significant alterations, comparing to dystrophic mice which had not taken the drug: as to degeneration and regeneration markers (DRM) in these animals muscles, the GH did not alter Pax7, MyoD. Laminin and Desmin levels, although it increased by 90% the TGF&#946;-1 levels, an inflammatory cytokine, that induces fibrosis b) in normal mice, the GH, opposite to the results above, increased the performances by 13% in the DT and by 28% in the ST, and slightly, not significantly, in other two tests; histological cuts revealed that the GH increased by 16.5% the transversal section area of these animals muscles, what could explain the results described above; as to the MDR levels, including those of the TGF&#946;-1, they were similar to the control animals; ii) a new experimental model, resulting from the crossing of GH genetically deficient mice (Ghrthlit) with dystrophic dy/dy (B6.Wk-Lama2dy-2J/J), showing retardation in the disease evolution; the performances of the dystrophic dwarfs, compared to the normal dwarfs, were better than those of the dystrophic compared to normal animals, namely, 14% larger DT, 71% superior in the ST, 18% larger in the MT, 5.5% larger in the IRT and 102% superior in the MST; histological cuts showed that the interstice area in the dystrophic dwarfs muscles was 29% smaller than that of non-dwarfs dystrophic; the TGF&#946;-1 levels in these animals were the only MDR studied, which were found to be diminished by 36%, compared to those of the non-dwarfs dystrophic; the GH release inhibition by octreotide, somatostatin analogous, also showed a relative improvement or stabilization in the dystrophy evolution, demonstrated by the increase, ater 60 days treatment, of the performances in the muscle functional tests, compared to those of the dystrophic animals, without treatment: it was 12% larger in the DT, while the control dystrophic animals worsened by 32%; they maintained the same performance in the ST, and 43% in the seizing strength test, while the control dystrophic did not improve their performances in these tests. These results suggest a GH pathologic effect, possibly through the TGF&#946;-1 levels increase. The GH diminishing, consequently, could lead to the retardation in the disease evolution. These experimental studies open promissing perspectives to test the GH effects inhibition in human dystrophic diseases evolution.

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença recessiva ligada ao cromossomo ?X?, causada pela ausência da proteína distrofina que ocorre em vários tecidos, sendo caracterizada por uma severa disfunção da musculatura esquelética ocasionando morte prematura do paciente. Embora controverso, alguns autores reportaram que o GH (hormônio do crescimento) estaria implicado no desenvolvimento da doença e poderia ser utilizado no tratamento da mesma. Desta forma, neste estudo a dosagem sérica de IGF-I (Fator I de crescimento Similar à insulina) um peptídeo GH-dependente que regula as ações do hormônio do crescimento, foi realizada no intuito de verificar se existe correlação ou não entre o desenvolvimento da doença e a concentração sérica de IGF-I. As variações nos níveis deste hormônio foram demonstradas com o decorrer da idade sendo que, nos três primeiros meses todos os animais apresentaram comportamento semelhante com aumento dos níveis de IGF-I, porém no quarto mês os animais Distróficos benignos apresentaram redução média de 34% deste hormônio, enquanto ocorreu aumento de 1% no animal não Distrófico. Ainda, as células granulares adenohipofisárias relacionadas à produção do hormônio de crescimento em cães Golden Retriever com Distrofia Muscular apresentam-se maiores do que nos cães Golden Retriever não distróficos quanto aos seguintes parâmetros (eixo longo, área seccional e volume celular). À microscopia eletrônica de transmissão observamos que as células estudadas apresentam grânulos elétron-densos de parede dupla e distribuídos por todo o citosol. Estes grânulos apresentaram-se maiores nos animais Distróficos quando comparados aos animais não Distróficos. / The Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is a X linked recessive disease, caused by the absence of dystrophin which is found in a variety of tissues and characterized by a severe disfunction of the skeletal musculature that results in a premature death of the patient. Theoretically, the growth hormone (GH) is considered to be associated to the development of Muscular Dystrophy and that could be used in its treatment. Hence in this study, a IGF-I (Insulin like growth factor-I) seric dosage was performed to verify whether or not there might be a between the evolution of the disease and IGF´s seric concentration. IGF-I is a GH-peptide dependent that regulates the GH actions during the growth. Changes in IGF-I levels were recorded during the dog?s post-natal development. On the first trimester, all animals presented similar IGF-I levels, although in the fourth month, a stark 34% decrease was observed in the dystrophic animals whereas a 1% increase was seen in the healthy dog. Furthermore, the GRMD´s granule-containing cells were larger when compared to the healthy animals. The following parameters in this comparison: long axis, cross-sectional area and cell volume. The ultrastructural study showed electron-dense granules composed by a double membrane and homogeneously distributed through the cell. These granules were larger in the dystrophic animals then in healthy dogs.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiana_Dandolini_Saccon.pdf: 561115 bytes, checksum: 1e800e96cadd3c19210339564cbb538f (MD5) Previous issue date: 2016-04-01 / Sem bolsa / O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de folículos primordiais, primários, secundários e terciários, bem como o diâmetro de núcleo, oócito e folículo, e os níveis das proteínas Forkhead Box O3a (FOXO3a) e Forkhead Box O3a Fosforilada (p-FOXO3a) em ovários de animais Ames Dwarf (df/df), com deficiência na secreção de hormônio do crescimento (GH), com e sem tratamento de GH exógeno e animais que superexpressam o GH endógeno (bGH). Os grupos que receberam GH exógeno foram submetidos a um tratamento com o hormônio suíno por injeção via subcutânea, dado duas vezes ao dia, começando na idade de quatorze meses, durante seis semanas. Após a eutanásia os ovários foram retirados. Foi realizada análise histológica para contagem de folículos ovarianos e diâmetros oócitários, nucleares e foliculares e análise de imunohistoquímica para avaliar a presença de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a. Os grupos de animais df/df apresentaram uma quantidade de folículos primordiais, em transição e totais maiores que os animais normais (p<0,0001, p=0,0002 e p<0,0001, respectivamente). Os grupos que receberam o tratamento com GH apresentaram menor quantidade de folículos primordiais e totais (p=0,009 e p=0,018, respectivamente). O grupo de animais bGH apresentou uma quantidade de folículos primordiais, em transição, primários e totais menores que o grupo controle (p=0,0001, p=0,0037, p=0,0006 e p=0,0009, respectivamente). Na imunohistoquímica foi observado que em folículos primordiais dos grupos de animais normais a quantidade de proteínas FOXO3a e p-FOXO3a foi menor comparado aos grupos de animais df/df (p=0,009 e p=0,01, respectivamente). Os grupos com tratamento com GH apresentaram uma quantidade de proteína FOXO3a menor (p=0,03) e p-FOXO3a maior (p=0,01), em folículos primordiais, comparado com seus grupos controles. O grupo de animais bGH apresentou em folículos primários uma maior quantidade de p-FOXO3a comparada ao grupo controle (p=0,006). Os animais df/df apresentam uma maior reserva ovariana e o tratamento com GH na vida adulta foi capaz de ativar a reserva tanto em animais normais quanto em df/df. O contrário foi observado em animais bGH, que apresentaram uma reserva ovariana menor que animais normais. Ainda, a presença de p-FOXO3a parece estar diretamente relacionada a ativação do crescimento folicular e estar sobre o controle do GH. / The objective of this study was to evaluate the number of primordial, primary, secondary and tertiary follicles, as well as the diameter of the nucleus, oocyte and follicle, and the levels of proteins Forkhead Box O3a (FOXO3a) Forkhead Box O3A phosphorylated (p-FOXO3a) in ovaries of Ames Dwarf mice (df/df), with deficient secretion of endogenous growth hormone (GH), receiving or not treatment with exogenous GH; and mice that over express the endogenous GH (bGH). The groups that received exogenous GH were subjected to a treatment with the hormone by subcutaneous injection, given twice a day, starting at the age of fourteen months, during six weeks. After the euthanasia ovaries were removed. Histological analysis was performed to count ovarian follicles and oocyte, nuclear and follicular diameters, and immunohistochemical analysis to evaluate the presence of proteins FOXO3a and p-FOXO3a. The groups of df/df mice had higher number of primordial, in transition and total follicles than normal mice (p<0.0001, p=0.0002 and p<0.0001, respectively). The groups that received the treatment with GH had lower numbers of primordial and total follicles (p=0.009 and p=0.018, respectively). The group of bGH mice had lower numbers of of primordial, in transition, primary and total follicles than the control group (p=0.0001, p=0.0037, p=0.0006 and p=0.0009, respectively). In the immunohistochemistry was observed that in the primordial follicles of normal groups animals the quantity of proteins FOXO3a and p-FOXO3a was lower compared to groups of df/df mice (p=0.009 and p=0.01, respectively). The groups treated with GH had lower quantity of protein FOXO3a (p=0.03) and higher quantity of FOXO3a (p=0.01), in primordial follicles, compared with their control groups. The group of bGH mice presented a higher quantity of p-FOXO3a in primary follicles compared to control group (p=0.006). df/df mice had a larger ovarian primordial follicle reserve than normal mice and the treatment with GH in adult life was able to activate reserve both normal and df/df animals. The opposite was observed in bGH, which presented a smaller ovarian reserve. In addition, the presence of the p-FOXO3a seems to be direct related to activation of primordial follicle growth and under the control of GH.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Angelo Ricardo Garcia.pdf: 292851 bytes, checksum: bd990692005f6a27dc090e15cee9347f (MD5) Previous issue date: 2013-08-28 / The growth hormone (GH) is the hormone secreted by the anterior hypophysis. It is necessary for the longitudinal growth and for certain aspects of the global metabolism, promoting the growth and expansion of all body tissues until their maturation. The goal of this project was to verify the effect of the administration of GH associated or not associated to physical activity in the serum biochemistry, body weight and in the weight of Wistar rats organs. In the present research, 40 rats were used, divided in four groups (n=10): CT (group without physical activity and without administration of GH), GH (group without physical activity and with administration of GH), Ex (group with physical activity and without administration of GH), and ExGH (group with physical activity and with administration of GH). The rats that received 0.2 IU/Kg of GH subcutaneous, they received this hormone each two days for 30 days (Monday, Wednesday and Friday). The other rats from groups without treatment with GH received the same volume of saline solution. After 30 days, the serum biochemistry, the weight of animals, the organs weight, and the length and abdominal circumference were measured. The data were submitted to the analysis of variance (ANOVA), followed by the Tukey test (p<0.05). It was observed a significant decrease in the weight of retroabdominal fat in the group of animals with hormone and physical activity. / O hormônio de crescimento (GH) é um hormônio secretado pela hipófise anterior, é requerido para o crescimento longitudinal e certos aspectos do metabolismo global, promovendo o crescimento e o aumento de todos os tecidos do corpo até a maturação. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da administração do GH associado ou não à atividade física na bioquímica sérica, peso corporal e no peso dos órgãos de ratos Wistar. Na presente pesquisa foram utilizadas 40 ratos divididos em quatro grupos (n=10): CT (grupo controle sem exercício físico e sem administrar GH); GH (grupo sem exercício físico e com administração de GH); Ex (grupo com exercício físico e sem administração de GH); e ExGH (grupo com exercício físico e com administração de GH). Os ratos submetidos ao uso de 0,2 UI/Kg de GH subcutâneo receberam o medicamento a cada dois dias por 30 dias (segunda-feira, quarta-feira e sexta-feira), e nos outros grupos em que não foi administrado hormônio, foi administrado o mesmo volume de solução fisiológica. Após 30 dias, a bioquímica sérica, o peso dos animais, peso dos órgãos e comprimento e circunferência abdominal foram mensurados. As variáveis foram submetidas ao teste análise de variância (ANOVA), seguida do teste de Tukey (p<0,05). Foi observada uma diminuição significativa no peso de gordura retroabdominal nos animais que recebiam hormônio e praticavam atividade física.