Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:50:20Z : No. of bitstreams: 1 ariede_jr_me_botfm.pdf: 465481 bytes, checksum: 176c1868eb3cbd83f7fadce9ed496bcc (MD5) / A detecção do RNA viral do VHC tem sido documentada em outros compartimentos biológicos além do soro e plasma de pacientes infectados pelo vírus, como nas plaquetas. No entanto, sua influência na terapia antiviral é desconhecida. Poucos estudos têm sido realizados na tentativa de avaliar a quantificação do RNA viral em outros compartimentos biológicos e a significância deste achado no resultado da terapia antiviral. Considerando que o VHC é carreado pelas plaquetas na circulação, a avaliação quantitativa do RNA viral neste compartimento biológico pode se mostrar distinta da observada no plasma.Realizar a avaliação comparativa in vitro do RNA do VHC plasmático e do RNA do VHC carreado à plaqueta e, realizar a avaliação comparativa da quantificação do RNA viral do VHC em plasma e plaquetas de pacientes com recidiva ao tratamento antiviral.Amostras de sangue periférico provenientes de pacientes infectados pelo VHC foram utilizadas para realização de dois experimentos. Experimento in vitro (repetido em triplicata) consistiu na separação de quatro alíquotas da mesma amostra, as quais foram submetidas a incubação a 37oC por 30xg por diferentes intervalos de tempo (0, 48, 96, 144h) e, posteriormente separadas para obtenção de plasma e pellet de plaquetas. A partir de cada uma destas frações foi extraído RNA viral, o qual foi utilizado como fonte para qPCR. Experimento in vivo: Foram acompanhados pacientes que iniciaram e finalizaram a terapêutica entre janeiro de 2011 a julho de 2012 e, dentre estes, os que apresentaram recidiva virológica ao tratamento antiviral estabelecido. Dos pacientes em recidiva virológica foram processadas amostras para a obtenção do plasma e pellet de plaquetas em dois momentos: no momento da recidiva virológica e, no momento imediatamente anterior (12 semanas anteriores... / Treatment for chronic hepatitis C is effective in about 50% of patients treated with exogenous interferon, which induces interferon-stimulated genes leading to endogenous interferon production. Integrins are involved in interferon production and structural modifications of them can be associated with altered function. Some integrins, expressed on the platelet membrane, show polymorphic antigenic determinants called human platelet antigens (HPA). The association between HCV infection and HPA-5b has already been demonstrated, in the same way the HPA profile could be associated with therapeutic response. This study aimed evaluates the association between the HPA-1, -3, -5 frequencies and therapy response in HCV-infected patients. HPA genotyping was performed in 168 HCV-infected patients by PCRSSP or PCR-RFLP. The patients were on interferon- (48.8%: 43.9% carriers of HCV genotype 1 and 56.1% non-1) or peginterferon (51.2%; 87.2% carriers of HCV genotype 1 and 12.8% non-1), both combined with ribavirin. Statistical analysis was performed using the proportional odds model. The genotypic frequency of HPA-1a/1b was significantly higher in the patients with therapeutic failure (odds ratio=3.58, 95% CI -1.18 – 10.82). The results suggest that the HPA-1a/1b genotype is associated with therapy failure... (Complete abstract click electronic access below)

Orientadora: Drª. Sonia Mara Raboni / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 11/06/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Doenças infecciosas / Resumo: A infecção pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) é um processo crônico caracterizado pela replicação viral contínua no hospedeiro. A alta taxa de replicação e elevado tamanho da população viral resulta subpopulações de vírus no mesmo indivíduo infectado denominado de quasispecies. O HIV-1, o vírus da hepatite B (HBV) e a hepatite C (HCV) podem ser diagnosticados em um mesmo paciente, pois compartilham rotas similares de transmissão, induzindo um pior prognóstico, e conduzindo a uma rápida evolução da infecção pelos vírus HBV e HCV. Apesar do seu impacto na qualidade de vida dos pacientes HIV positivo, informações sobre a coinfecção do HIV e hepatite virais no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná são escassas. Este estudo descreveu as características demográficas, o perfil clínico e caracterização do HIV-1 de pacientes coinfectados com HIV e hepatites B ou C. Realizou-se estudo transversal com 93 pacientes HIV positivos nos ambulatórios de referência do HC-UFPR no período de março de 2011 a março de 2013. Dados clínicos, demográficos e epidemiológicos foram pesquisados em revisão de registros médicos, questionário e entrevistas com pacientes, a avaliação dos subtipos do HIV-1 foi feita por caracterização genética das regiões gag e vpu-env do vírus analisado a partir de amostras de sangue periférico pela metodologia de sequenciamento e análise filogenética. Foi encontrada sorologia positiva tanto para o HBV quanto para o HCV em 6,6% dos pacientes monitorados, com predominância do sexo masculino (65%) sendo a média de idade entre os pacientes de 45 anos (IQR 40 a 52). O teste sorológico anti-HCV foi positivo em 79/93 (85%) indivíduos, e a infecção foi confirmada por Reação em cadeia da polimerase (PCR) em 72% dos casos, com uma maior frequência do genótipo 1a/b. Dezoito pacientes (19%) eram HIV/HBV (HBsAg +). A avaliação genotípica do HIV-1 revelou os seguintes subtipos: subtipo B (2), C (8) BC (7) e subtipo BF (1) para a região gag; subtipo B (4), C (7), BC (8) e subtipo BF (8) na região vpu. Entre o pacientes coinfectados, houve uma alta frequência de uso de drogas (50%) e as investigações para a detecção de coinfecção foram tardias com diferença de 4 anos entre o diagnóstico do HIV e das hepatites. Um baixo número de pacientes era elegível para o tratamento e, embora a resposta à terapia antirretroviral tenha sido boa, houve um resposta muito pobre ao tratamento das hepatites. Considerando o aumento da sobrevida de pacientes HIV positivos e da alta frequência de coinfecção com hepatite, estes resultados preliminares indicara a necessidade de protocolos destinados à investigação sistemática de pacientes portadores do HIV, buscando, assim, a detecção precoce e tratamento dos indivíduos coinfectados. Palavras-chave: Vírus da imunodeficiência humana, hepatite B, hepatite C, coinfecção. / Abstract: The human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection is a chronic process characterized by continuous viral replication in the host. The high replication level and the elevated viral population size results in subpopulation of virus in the infected person, called quasispecies. HIV-1, HBV and HCV coinfection can be diagnosed in the same patient, because these viruses share similar transmission routes, inducing a worst prognostic, leading to a rapid HBV and HCV infection evolution. Despites of its impact in life quality of HIV patients, information about HIV- HBV or HCV coinfection at HC-UFPR is scarce. This study describes the demographic characteristics, the clinical profile and the characterization of HIV-1 subtypes of HIV-HBC or HBV coinfected patients. It was carries out sectional study that icnluded 93 HIV positives out patients from HC-UFPR reference clinics from March 2011 to March 2013. Clinical, demographic and epidemiological data were evaluated by reviewing of medical registers, questionnaire and interviews with patients; HIV-1 subtype evaluation carried out by madenucleotide sequencing of gag and vpu-env viral regions. Positive serology for both HBV and HCVwas found in 6.6% of the patients monitored, with predominance of male (65%) and the average age of the patients was 45 (IQR 40-52). A anti-HCV test was positive in 79/93 (85%) of the individuals and the infection was confirmed by PCR in 72% of the cases, with a higher frequency of genotype 1a/b. Eighteen patients (19%) were HIV/HBV (HBsAg+). The HIV-1 genotypic evaluation revealed the followed subtypes: subtype B (2), C (8) BC (7) and subtype BF (1) for gag region; subtype B (4), C (7), BC (8) and subtype BF (8) for vpu region. Among coinfected patients, there was a high frequency of drug use (50%) and the investigations for detection of coinfection were conducted late with a difference of 4 years between HIV and hepatitis diagnostic. A low number of patients were eligible for the treatment, although the antiretroviral therapy response was adequate; there was a very poor response to hepatitis treatment. Considering the high survival of HIV patients and the high frequency of hepatitis coinfection, our preliminaries results indicate the need of protocols destined to systematic investigation of HIV patients, seeking of an earlier detection and treatment of coinfected patients. Keywords: Human immunodeficiency virus, hepatitis B, hepatitis C, coinfection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:56:29Z : No. of bitstreams: 1 souza_np_me_araca_parcial.pdf: 84559 bytes, checksum: a91c08079d17881af80d81ddcd410ea2 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-13T18:26:30Z: 000717296_20161201.pdf,Bitstream added on 2015-04-13T18:27:08Z : No. of bitstreams: 1 000717296_20161201.pdf: 106851 bytes, checksum: 12763ba93fc326e41a47c3b9825c8add (MD5) Bitstreams deleted on 2016-12-02T12:41:54Z: 000717296_20161201.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-02T12:42:34Z : No. of bitstreams: 1 000717296.pdf: 791335 bytes, checksum: 51138541e37fde8cbfc7d4fece13e8c1 (MD5) / Item merged in doublecheck by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-12-02T12:40:37Z Item was identical to item(s): 94531, 123590 at handle(s): http://hdl.handle.net/11449/95395, http://hdl.handle.net/11449/124512 / É crescente o número de pessoas acometidas por doenças crônicas, dentre elas, as doenças hepáticas, que são consideradas um problema de saúde pública mundial. A hepatite C é uma das principais causas de doenças hepáticas crônicas (DHC), acarretando impacto negativo sobre a qualidade de vida (QV). Por essas razões, o objetivo deste estudo foi realizar uma revisão bibliográfica dos principais aspectos relacionados com o vírus da hepatite C (VHC), e avaliar a qualidade de vida dos indivíduos portadores de DHC. A revisão de literatura foi realizada nas seguintes bases de dados: Medline, ISI - Web of Science, Lilacs, Pubmed e Scielo, sem restrições de data de publicação ou idioma. Para avaliar a qualidade de vida foi realizado um estudo transversal, com 133 pacientes com diagnóstico de DHC, de ambos os sexos, com idade superior a 18 anos. Após a obtenção do termo de consentimento livre e esclarecido foram aplicados três instrumentos de pesquisa. O primeiro referiu-se ao questionário através do qual os participantes foram entrevistados sobre as características sociodemográficas. O segundo instrumento utilizado foi o Chronic Liver Disease Questionnaire (CLDQ), instrumento recentemente traduzido e validado para a população brasileira o qual possui a finalidade de mensurar a qualidade de vida dos pacientes portadores de hepatopatias. O CLDQ é constituído por 29 questões distribuídas em 6 domínios que referem-se aos seguintes sintomas da doença: Sintomas Abdominais (SA); Fadiga (FA), Sintomas Sistêmicos (SS), Atividade (AT), Emoção (EM) e Preocupação (PR). A gravidade da doença hepática foi avaliada de acordo com o terceiro instrumento, o escore validado MELD (Model End-Stage Liver Disease). As variáveis... / Is increasing the number of people affected by chronic diseases, among them, liver diseases, that are considered as public health problem round the world. Hepatitis C is one of the most principal reasons for chronic liver diseases (CLD), causing negative impact on quality of life (QOL). Thus, the aim of this study was realize a review of the main aspects related to hepatitis C virus (HCV), and to evaluate the quality of life of individuals with CLD. The review was performed on the data bases: Medline, ISI – Web of Science, Lilacs, Pubmed and Scielo, without restrictions about data or idiom. To evaluate the quality of life it was realized a cross-sectional study with 133 patients with CLD, both genders, older than 18 years old. After have had the Free and Clear Consent Term assigned, it was applied three instruments. The first referred to social and demographic features. The second was the Chronic Liver Disease Questionnaire (CLDQ) that was recently translated and validated for the Brazilians, and its aim is to measure the quality of life of patients with liver diseases. The CLDQ contain 29 questions distributed in 6 domains about the follow diseases: Abdominal Symptoms (AS); Fatigue (FA), Systemic Symptoms (SY), Activity (AC), Emotion (EM) and Worry (WO). The severity of liver disease was evaluated according to the third instrument, the score validated MELD (Model End-Stage Liver Disease). The categorical variables were shown by frequency and percentages, and the continuous, average and standard deviation. To evaluate the difference between the score average of CLDQ between genders it was used Student Test... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-20Bitstream added on 2014-06-13T20:38:24Z : No. of bitstreams: 1 uliana_cv_me_araiq.pdf: 918548 bytes, checksum: 4ad442ea1851369c0a0d4d0151318282 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho relata o desenvolvimento de um biossensor amperométrico para detecção do vírus da Hepatite C (HCV) por meio da reação de hibridização do DNA imobilizado na superfície do eletrodo com o DNA complementar proveniente de amostras de soro de pacientes. Neste dispositivo, a reação da enzima peroxidase com o substrato peróxido de hidrogênio e com o mediador de elétrons ácido 5-aminossalicílico é utilizada como marcadora da reação de hibridização. Estudos eletroquímicos e espectrofotométricos foram empregados na investigação do produto da oxidação do mediador pela enzima, sugerindo-se que este seja um complexo formado entre o Fe4+ presente no grupo heme da peroxidase e o grupo NH2 do ácido 5-aminossalicílico. Este complexo sofre redução na superfície do eletrodo resultando na resposta analítica do sistema proposto. Na construção do biossensor, os eletrodos de ouro, obtidos a partir de CDs graváveis denominados CDtrodos, foram modificados com monocamadas auto-organizadas de ácido lipóico 1,0 x 10-3 mol L-1 por 120 minutos. Estudos quimiométricos, por meio do planejamento fatorial completo e fracionado, foram aplicados para obtenção das melhores condições de imobilização das biomoléculas, compreendendo a concentração e o tempo de incubação dos CDtrodos nas soluções da proteína estreptavidina, da sonda de DNA específica para o HCV genótipos 1 e 3, do DNA complementar e do conjugado avidina-peroxidase, marcador da reação de hibridização. O valor de cut-off foi determinado como sendo de –0,599 A e biossensor foi então aplicado em amostras positivas para HCV. Os resultados mostraram que o biossensor desenvolvido é adequado para aplicação em amostras dos genótipos 1 e 3, os quais prevalecem no Brasil. / This work presents the development of an amperometric biosensor for the detection of Hepatitis C virus (HCV) through the reaction of hybridization of DNA immobilized on the electrode surface with the complementary DNA (c-DNA) from serum samples of patients. In this device, the reaction of the enzyme peroxidase with the substrate hydrogen peroxide and with the electron mediator 5-aminossalicylic acid is used as hybridization label. Electrochemical and spectrophotometric studies were carried out to investigate the oxidation product of the mediator by the enzyme, suggesting that one is a complex formed between the Fe4+ of heme peroxidase group and NH2 group of 5-aminossalicylic acid. This complex undergoes reduction in the electrode surface resulting in the analytical response of the proposed system. For the construction of the biosensor, the gold electrodes, obtained from recordable CDs namely CDtrodes, were modified with self-assembled monolayers of lipoic acid 1.0 x 10-3 mol L-1 for 120 minutes. Chemometric studies, through the full and fractional factorial design, were applied to obtain the best conditions for the biomolecules immobilization, including the concentration and the incubation time of CDtrodes in the solutions of the protein streptavidin, the DNA probe specific for the HCV genotypes 1 and 3, c-DNA and the avidin-peroxidase conjugate, label of the reaction of hybridization. The cut-off value was determined as -0599 A and the biosensor was applied for HCV positive samples. The results showed that the developed biosensor is suitable for application in samples of genotypes 1 and 3, which are those that prevail in Brazil.

Orientador: Rejane Maria Tommasini Grotto / Coorientador: Maria de Moura Campos Pardini / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Ana Flavia Nacif Pinto coelho Pires / Resumo: A detecção do RNA viral do VHC tem sido documentada em outros compartimentos biológicos além do soro e plasma de pacientes infectados pelo vírus, como nas plaquetas. No entanto, sua influência na terapia antiviral é desconhecida. Poucos estudos têm sido realizados na tentativa de avaliar a quantificação do RNA viral em outros compartimentos biológicos e a significância deste achado no resultado da terapia antiviral. Considerando que o VHC é carreado pelas plaquetas na circulação, a avaliação quantitativa do RNA viral neste compartimento biológico pode se mostrar distinta da observada no plasma.Realizar a avaliação comparativa in vitro do RNA do VHC plasmático e do RNA do VHC carreado à plaqueta e, realizar a avaliação comparativa da quantificação do RNA viral do VHC em plasma e plaquetas de pacientes com recidiva ao tratamento antiviral.Amostras de sangue periférico provenientes de pacientes infectados pelo VHC foram utilizadas para realização de dois experimentos. Experimento in vitro (repetido em triplicata) consistiu na separação de quatro alíquotas da mesma amostra, as quais foram submetidas a incubação a 37oC por 30xg por diferentes intervalos de tempo (0, 48, 96, 144h) e, posteriormente separadas para obtenção de plasma e pellet de plaquetas. A partir de cada uma destas frações foi extraído RNA viral, o qual foi utilizado como fonte para qPCR. Experimento in vivo: Foram acompanhados pacientes que iniciaram e finalizaram a terapêutica entre janeiro de 2011 a julho de 2012 e, dentre estes, os que apresentaram recidiva virológica ao tratamento antiviral estabelecido. Dos pacientes em recidiva virológica foram processadas amostras para a obtenção do plasma e pellet de plaquetas em dois momentos: no momento da recidiva virológica e, no momento imediatamente anterior (12 semanas anteriores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Treatment for chronic hepatitis C is effective in about 50% of patients treated with exogenous interferon, which induces interferon-stimulated genes leading to endogenous interferon production. Integrins are involved in interferon production and structural modifications of them can be associated with altered function. Some integrins, expressed on the platelet membrane, show polymorphic antigenic determinants called human platelet antigens (HPA). The association between HCV infection and HPA-5b has already been demonstrated, in the same way the HPA profile could be associated with therapeutic response. This study aimed evaluates the association between the HPA-1, -3, -5 frequencies and therapy response in HCV-infected patients. HPA genotyping was performed in 168 HCV-infected patients by PCRSSP or PCR-RFLP. The patients were on interferon- (48.8%: 43.9% carriers of HCV genotype 1 and 56.1% non-1) or peginterferon (51.2%; 87.2% carriers of HCV genotype 1 and 12.8% non-1), both combined with ribavirin. Statistical analysis was performed using the proportional odds model. The genotypic frequency of HPA-1a/1b was significantly higher in the patients with therapeutic failure (odds ratio=3.58, 95% CI -1.18 - 10.82). The results suggest that the HPA-1a/1b genotype is associated with therapy failure... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : Paulo Inácio da Costa / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Marcelo Dias Baruffi / Banca: Amanda Martins Baviera / Resumo: Aproximadamente 170 milhões de pessoas no mundo estão cronicamente infectadas pelo vírus da Hepatite C (HCV). No Brasil, os números já chegam a 3 milhões. A persistência da infecção pelo HCV no fígado leva à cronificação da doença, cirrose e hepatocarcinoma. A proteína de envelope 2 (E2) do HCV é a responsável pelo seu acoplamento à célula hospedeira através da interação com receptores de superfície celular, como o R-LDL e o CD81, entre outros. Como as alterações na micro e macrovasculatura hepática, têm sido apontadas como elementos fundamentais na histogênese e prognóstico da doença, o objetivo deste estudo foi avaliar a interação da proteína E2 recombinante com os R-LDL presentes na superfície de células endoteliais (ECV304 e HUVEC) sob influência de LDL e da glicosilação protéica. Também avaliar a resposta inflamatória das células endoteliais à interação com estas proteínas. A proteína E2 foi expressa em dois sistemas heterólogos, E. coli e P. pastoris, para avaliação da glicosilação e da interação com LDL na ligação aos R-LDL das células através de citometria de fluxo. As proteínas também foram avaliadas em testes biológicos quanto à indução celular de produção de espécies reativas de oxigênio (EROs totais - QL e H2O2 - citometria de fluxo), NO (QL em fase gasosa e por método de Griess), arginase (espectrofotometria), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) e morte celular (MTT - espectrofotometria e por anexina V e PI - citometria de fluxo). Os resultados obtidos revelaram que as proteínas E2 recombinantes podem interagir com os R-LDL das células endoteliais após a ligação ao LDL e que esta ligação pode ser melhorada pela glicosilação (E2L) (p<0,01 em relação à E2B). O teste de NO indicou que as proteínas glicosiladas exibem maior potencial para o estímulo deste nas células HUVEC (p<0,01 em relação ao controle negativo). As concentrações de proteínas testadas não ... / Abstract: Approximately 170 million people worldwide are chronically infected with hepatitis C virus (HCV). In Brazil, the numbers have already reached 3 million. The persistence of HCV infection leads to chronic infection in liver disease, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The envelope protein 2 (E2) of HCV is responsible for its coupling to the host cell through interaction with cell surface receptors such as the R-LDL and CD81, among others. Because changes in micro and macrovasculature liver, have been identified as key elements in the histogenesis and prognosis of the disease, the aim of this study was to evaluate the interaction of the protein E2 recombinant with the R-LDL present on the surface of endothelial cells (HUVEC and ECV304) under the influence of LDL and protein glycosylation. And also evaluate the inflammatory response of endothelial cells to interact with these proteins. The E2 protein was expressed in two heterologous systems, E. coli and P. pastoris for evaluation of glycosylation and interaction with LDL binding to the R-LDL cells by flow cytometry. The proteins were also evaluated in biological tests for induction of cellular production of reactive oxygen species (EROs - QL and H2O2 - flow cytometry), NO (QL in doing gas and Griess Reagent), arginase (spectrophotometry), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) and cell death (MTT - spectrophotometry and Annexin V and PI - flow cytometry). The results obtained showed that the recombinant E2 protein can interact with R-LDL endothelial cell after binding to LDL and that this binding can be enhanced by glycosylation (E2L) (p <0.01 in relation to E2B). The NO test indicated that glycosylated proteins exhibit greater potential for the stimulation of the HUVEC cells (p <0.01 compared with negative control). Protein concentrations tested were not sufficient to stimulate an increase or decrease in the activity of arginase remarkable compared to the negative control. The recombinant protein ... / Doutor

Orientador: Paulo Inácio da Costa / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Fernanda de Freitas Aníbal / Resumo: O vírus da Hepatite C (VHC) é o principal agente etiológico das hepatites não-A e não-B, infectando aproximadamente 170 milhões de pessoas no mundo (3% da população mundial). O vírus da hepatite C (HCV; hepatitis C-virus) é envelopado tem de 50 a 70nm de diâmetro, possui uma única fita positiva de RNA e pertence ao gênero do Hepacivirus e à família Flaviridae. Seu genoma é constituído por cerca de 9.500 nucleotídeos com regiões curtas não codificadoras e hiperconservadas nas extremidades 5' e 3'UTR, flanqueando uma única ORF. A região estrutural do vírus é constituída por 3 genes: core, E1 e E2. As proteínas do envelope, E1 e E2 do VHC, são altamente glicosiladas e apresentam 30 e 70 kDa, respectivamente. Estudos demonstram que ambas apresentam funções específicas em diferentes etapas do ciclo de replicação do vírus, atuando de forma essencial para entrada, ligação ao receptor e fusão com a membrana da célula hospedeira. A glicoproteína E2 do VHC liga-se com alta afinidade a uma alça do receptor CD81, também denominado de TAPA-1, uma tetraespanina encontrada na superfície de muitas células, incluindo hepatócitos. No entanto, o CD81 isoladamente não é suficiente para mediar a entrada celular do vírus, e vários outros co-fatores podem atuar nessa interação. Os receptores de lipoproteína de baixa densidade (LDL-r) e receptor scavenger tipo B classe I apresentam grande importância nessa relação com o VHC. Estudos sobre as glicoproteínas E1 e E2 têm mostrado que estas se associam com os LDL-r, sugerindo que o VHC use estes receptores para invadir a célula hospedeira. Além disso, estudos anteriores relatam o fato de que, as lipoproteínas poderiam proporcionar acréscimos da infectividade ao VHC. Desta forma, neste trabalho foram desenvolvidas estratégias de clonagem e expressão heteróloga da proteína E2, e avaliou-se sua imunogenicidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatitis C is currently recognized as the primary cause of hepatitis " non A - non B " associated to the blood transfusion. The hepatitis C virus (HCV) is enveloped in about 50 to 70nm in diameter, presenting a positive single strand RNA and belongs to the genus Hepacivirus and the family Flaviridae. Its genome consists of 9,500 nucleotides with short non-coding regions and hiperconservadas ends 5' and 3'UTR flanking a single ORF. The virus structural region is based on three core genes, E1 and E2. HCV E1 and E2 are highly glycosylated and have 30 and 70 kDa, respectively. Studies show that both have key role in different stages of the cycle of virus replication, acting as essential for entry, receptor binding and fusion with host cell membrane. Glycoprotein E2 of HCV binds with high affinity to a loop of CD81, a tetraspanin, also named TAPA-1, found on the surface of many cells, including hepatocytes. However, the CD81 alone is not sufficient to mediate the cellular entry of the virus, and several other co-factors may be operating in this interaction. Recipients of low density lipoprotein (LDL-r) and scavenger receptor class B type I (SR-BI) would present great importance in relation to HCV. The LDL-r plays an important role in infection for virus of the hepatitis C. Studies on the glycoproteins E1 and E2 have shown that these are associated with the LDL-r suggesting that HCV uses the LDL-r to invade the host cell. Besides, previous studies showed that lipoprotein could improve HCV infectivity. Thus, in this work the capacity of recognition of the antibodies present anti-HCV was evaluated in the positive human serum for HCV of recognizing the protein E2 recombinant produced in bacteria of the lineage Rosetta and also the capacity of connection of the protein E2 of HCV in bind LDL-r present in the surface of human cells with characteristics endoteliais (ECV 304), and such capacity was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Cléa Adas Saliba Garbin / Coorientador: Lívia Melo Villar / Banca: Dóris Hissako Sumida / Banca: Patrícia Elaine Gonçalves / Resumo: É crescente o número de pessoas acometidas por doenças crônicas, dentre elas, as doenças hepáticas, que são consideradas um problema de saúde pública mundial. A hepatite C é uma das principais causas de doenças hepáticas crônicas (DHC), acarretando impacto negativo sobre a qualidade de vida (QV). Por essas razões, o objetivo deste estudo foi realizar uma revisão bibliográfica dos principais aspectos relacionados com o vírus da hepatite C (VHC), e avaliar a qualidade de vida dos indivíduos portadores de DHC. A revisão de literatura foi realizada nas seguintes bases de dados: Medline, ISI - Web of Science, Lilacs, Pubmed e Scielo, sem restrições de data de publicação ou idioma. Para avaliar a qualidade de vida foi realizado um estudo transversal, com 133 pacientes com diagnóstico de DHC, de ambos os sexos, com idade superior a 18 anos. Após a obtenção do termo de consentimento livre e esclarecido foram aplicados três instrumentos de pesquisa. O primeiro referiu-se ao questionário através do qual os participantes foram entrevistados sobre as características sociodemográficas. O segundo instrumento utilizado foi o Chronic Liver Disease Questionnaire (CLDQ), instrumento recentemente traduzido e validado para a população brasileira o qual possui a finalidade de mensurar a qualidade de vida dos pacientes portadores de hepatopatias. O CLDQ é constituído por 29 questões distribuídas em 6 domínios que referem-se aos seguintes sintomas da doença: Sintomas Abdominais (SA); Fadiga (FA), Sintomas Sistêmicos (SS), Atividade (AT), Emoção (EM) e Preocupação (PR). A gravidade da doença hepática foi avaliada de acordo com o terceiro instrumento, o escore validado MELD (Model End-Stage Liver Disease). As variáveis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Is increasing the number of people affected by chronic diseases, among them, liver diseases, that are considered as public health problem round the world. Hepatitis C is one of the most principal reasons for chronic liver diseases (CLD), causing negative impact on quality of life (QOL). Thus, the aim of this study was realize a review of the main aspects related to hepatitis C virus (HCV), and to evaluate the quality of life of individuals with CLD. The review was performed on the data bases: Medline, ISI - Web of Science, Lilacs, Pubmed and Scielo, without restrictions about data or idiom. To evaluate the quality of life it was realized a cross-sectional study with 133 patients with CLD, both genders, older than 18 years old. After have had the Free and Clear Consent Term assigned, it was applied three instruments. The first referred to social and demographic features. The second was the Chronic Liver Disease Questionnaire (CLDQ) that was recently translated and validated for the Brazilians, and its aim is to measure the quality of life of patients with liver diseases. The CLDQ contain 29 questions distributed in 6 domains about the follow diseases: Abdominal Symptoms (AS); Fatigue (FA), Systemic Symptoms (SY), Activity (AC), Emotion (EM) and Worry (WO). The severity of liver disease was evaluated according to the third instrument, the score validated MELD (Model End-Stage Liver Disease). The categorical variables were shown by frequency and percentages, and the continuous, average and standard deviation. To evaluate the difference between the score average of CLDQ between genders it was used Student Test... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Carolina Gomes Jardim / Banca: Monika Aparecida Coronado / Banca: Aripuanã Sakurada Aranha Watanabe / Resumo: A Hepatite C é uma doença causada pelo vírus da Hepatite C (HCV), que afeta milhares de pessoas em todo o mundo. Representa um problema de saúde pública, sendo uma das principais causas de doenças e transplantes relacionados ao fígado. Não há uma vacina contra o HCV e os tratamentos atuais não são eficazes para todos os pacientes tratados, apresentando muitos efeitos colaterais e alto custo de desenvolvimento. Desta forma, fica evidente a necessidade do desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas que produzam uma melhor resposta virológica sustentada, efeitos colaterais mais brandos e menor custo de produção. Neste contexto, compostos naturais podem fornecer uma fonte alternativa para a identificação de produtos com potencial terapêutico. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de compostos naturais, isolados do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus (complexo heterodimérico crotoxina e suas subunidades crotapotina e Fosfolipase A2), e do extrato das folhas de Pterogyne nitens (sorbifolina e pedalitina), no ciclo replicativo do HCV in vitro. Estes compostos foram testados quanto às suas atividades antivirais por meio de infecção e tratamento de células Huh-7.5, e realização de ensaios de luciferase, western-blotting e imunofluorescência. Os dados obtidos demonstraram que tanto os compostos isolados de C. durissus terrificus quanto de P. nitens possuem efeito anti-HCV, sendo que alguns compostos inibiram mais de uma etapa do ciclo replicativo viral. Portanto, os múltiplos efeitos anti-HCV apresentados pelo tratamento com esses compostos demonstraram o potencial terapêutico de fontes naturais no tratamento da Hepatite C / Abstract: Hepatitis C is a disease caused by Hepatitis C virus (HCV) that affects thousands of people worldwide. Represents a public health problem, being one of the main causes of liver disease and transplantation. There is no vaccine for HCV and the current therapy is not effective for all treated patients, presents many side effects and high cost of development. Thus, there is an evident need to develop new therapeutic approaches which result in a better sustained virologic response, milder side effects and lower production cost. In this context, natural compounds can provide an alternative source for the identification of products with therapeutic potential. This study aimed to evaluate the effects of natural compounds, isolated from Crotalus durissus terrificus venom (heterodimeric complex crotoxin and its subunits crotapotin and phospholipase A2), and from leaves extract of Pterogyne nitens (sorbifolin e pedalitin), on HCV life cycle in vitro. These compounds were screened for their antiviral activities by infecting and treating Huh-7.5 cells, and performing luciferase, western blotting and immunofluorescence assays. The data obtained demonstrated that both compounds isolated from Crotalus durissus terrificus and from P. nitens possess anti-, and some compounds inhibited more than one step of the virus life cycle. Therefore, the multiple anti-HCV effects presented by the treatment with these compounds demonstrated the therapeutic potential of natural sources in the treatment of Hepatitis C / Mestre

Orientador: Márjorie de Assis Golim / Coorientador: Paulo Eduardo de Abreu Machado / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Paulo Inácio da Costa / Resumo: O vírus da hepatite C crônica (VHC) é causa de doença hepática crônica afetando cerca de 3% da população mundial, aproximadamente 170 milhões de pessoas. Investigações sobre a resposta imune em indivíduos infectados com HCV é justificável pelo fato desta constituir doença infecciosa cujas alterações imunológicas têm relação direta com o desenvolvimento e a manutenção da infecção. Este projeto visou avaliar aspectos que compõem a resposta imune de pacientes com hepatite C crônica com diferentes graus de lesão hepática. Foram incluídos no estudo pacientes VHC+ (n=83), genótipo 1, pré-tratamento, os quais foram estratificados conforme o grau de fibrose hepática determinada por biópsia (classificação METAVIR), compondo: G1 (n = 15) pacientes nos estágios F0 (nenhuma fibrose) + F1 (fibrose em expansão dos espaços porta); G2 (n = 21) pacientes no estágio F2 (poucas fontes de fibrose nos espaços porta); G3 (n = 15) pacientes em estágio F3 (início da formação de nódulos); G4 (n = 32) pacientes em estágio F4 (fibrose severa); G5 (n = 16) doadores de sangue voluntários (grupo controle). Foram avaliadas características imunofenotípicas de subpopulações de leucócitos do sangue periférico (células NK totais, NKdim, NKbright, células dendríticas mielóides e plasmocitóides, monócitos clássicos e pro-inflamatórios, linfócitos T CD4+/CD8+), níveis de citocinas e quimiocinas plasmáticas (TGF-β, TNF-α, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL8, CXCL9, CXCL10), analisando a relação destes com a progressão da fibrose. Todas as frequências das subpopulações leucocitárias avaliadas estão alteradas em portadores de hepatite C crônica comparados com indivíduos saudáveis. Além disso, há correlação entre o grau de fibrose e a quantidade de linfócitos T CD4, T CD8, monócitos pro-inflamatórios e células NKbright circulantes. Níveis aumentados de TNF-α foram observados ... / Abstract: The chronic hepatitis C virus (HCV) is the cause of chronic liver disease affecting about 3% of world population, approximately 170 million people. Investigations of the immune response in individuals infected with HCV is justifiable because this form infectious disease whose immunological changes are directly related to the development and maintenance of infection. This project aimed to evaluate aspects that make up the immune chronic hepatitis C patients with different degrees of liver damage response. The study included patients HCV+ (n = 83), genotype 1, pretreatment, which were classified according to the rate of hepatic fibrosis determined by biopsy (METAVIR classification), composed of: G1 (n = 15) patients in stages F0 (no fibrosis) + F1 (fibrosis expansion of port spaces), G2 (n = 21) patients in the F2 stage (few sources of fibrosis in portal ), G3 ( n = 15 ) patients with stage F3 (early nodule formation), G4 (n = 32) patients with stage F4 (severe fibrosis), G5 (n = 16) volunteer blood donors (control group). Immunophenotypic characteristics of subpopulations of peripheral blood leukocytes (total NK cells, NKdim , NKbright , myeloid dendritic cells and plasmacytoid , classical monocytes, pro- inflammatory CD4 + / CD8 + cells), cytokine levels and plasma chemokines (were evaluated TGF- β , TNF - α , CCL2 , CCL3 , CCL4 , CCL5 , CXCL8 , CXCL9, CXCL10), analyzing their relationship with the progression of fibrosis. All frequencies of evaluated leukocyte subpopulations are altered in patients with chronic hepatitis C compared with healthy subjects. In addition, no correlation between the degree of fibrosis and the amount of CD4, CD8, pro-inflammatory monocytes and circulating NKbright cells. Increased levels of TNF-α were observed in cirrhotic patients (G4) and TGF - β in HCV + groups with moderate hepatic fibrosis (G2 and G3). Plasma chemokine CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL8/IL-8, CCL2/MPC-1, ... / Mestre