MicroRNAs (miRNAs) são RNA de fita simples (22 nucleotídeos) que atuam como reguladores da expressão gênica celular. Estudos recentes têm demonstrado o papel dos miRNAs como moduladores da resposta celular frente às infecções virais. O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) é um retrovírus que apresenta genes estruturais comuns aos demais, além dos genes tax e rex, os quais dão origem às proteínas regulatórias. Entre elas, destaca-se a oncoproteína Tax, que é capaz de modular a expressão de genes celulares e virais, além de estar associada ao desencadeamento de patologias. Destacam-se duas manifestações clínicas associadas: a leucemia/linfoma de células T do adulto (ATLL) e a mielopatia associada ao HTLV/paraparesia espástica tropical (HAM/TSP). Fatores relacionados ao hospedeiro também estão correlacionados ao aparecimento das patologias. No intuito de estabelecer se miRNAs humanos podem influenciar em processos celulares que se encontram desregulados pela Tax (diferenciação, transdução de sinais, apoptose, proliferação celular e tumorigênese), o objetivo deste projeto foi analisar a expressão de miRNAs em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de indivíduos infectados HTLV-1. Para tanto, realizamos análises in silico para mapear alvos de miRNAs humanos no gene tax do HTLV-1. Foram utilizados dois algoritmos (miRanda e RNAhybrid), com os seguintes parâmetros: score de 120 na região da semente; energia livre de até -15 kcal/mol. Assim, selecionou-se os hsa-miRNAs:149a, 648, 221, 222, 142-5p, 26a, 29a, 374 e 125b. Adicionalmente, foi observado que as regiões do gene tax, onde se ligam os miRNAs selecionados, são extremamente conservadas entre os diferentes subtipos de HTLV-1. Após estas análises in silico, realizou-se a validação dos miRNAs eleitos. Para tanto, foram isolados PBMC de 21 amostras de indivíduos-controle (CT), 10 portadores assintomáticos do HTLV-1 (HAC) e 12 com HAM/TSP (HAM). Do total de células, 1x106 tiveram seu DNA genômico extraído para quantificação da carga proviral (CPV) pela metodologia de PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR); 1x106 foram criopreservadas para quantificação de Tax por citometria de fluxo; 1x 107células foram utilizadas na extração de RNA para validação dos miRNAs por qRT-PCR. A fase orgânica do Trizol® foi utilizada para extração de proteínas totais e posterior análise da expressão de Tax por Western blot. A CPV apresentou-se significativamente aumentada (p= 0,0046) no grupo HAM, quando utilizado teste de Mann-Whitney. A expressão de Tax apresentou correlação significativa (p=0,0128) com a CPV, pelo teste de Spearmann e auxiliou na caracterização dos pacientes. O nível de expressão dos miRNAs foi avaliado nos grupos: CT vs Pacientes e CT vs HAC vs HAM por testes não-paramétricos de Mann-Whitney e Kruskal-wallis, respectivamente. Os miRNAs se mostraram desregulados no grupo de pacientes quando comparado ao grupo CT. Dentre estes, o hsa-miR-125b encontra-se aumentado significativamente no grupo de pacientes em relação ao controle (p=0,0285). Utilizou-se o teste de correlação de Spearmann, para associar a expressão de Tax com os miRNAs, porém os resultados encontrados não foram significativos. Apesar de não estar correlacionado com expressão de Tax, o hsa-miR-125b é responsável pela regulação de diversas proteínas, como TNF-, uma proteína inflamatória hiper-expressa em portadores do HTLV-1. Deste modo, acreditamos que este miRNA estaria aumentado proporcionalmente na tentativa de inibir a tradução desta proteína. Os resultados deste projeto sugerem a importância de esclarecer como os miRNAs humanos podem regular a infecção pelo HTLV-1 e gerar informações para o desenvolvimento de estratégias que possam interferir com a replicação e patogênese viral. / MicroRNAs (miRNAs) are simple strand RNA (22 nucleotides), which are regulators of cellular gene expression. Recent studies have been showed miRNAs role as modulators of cellular responses, when viral infection occurs. The human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) is a retrovirus that presents the same regular structural genes compared to the other retrovirus, besides tax and rex genes, which encode regulatory proteins. In regard to this, Tax oncoprotein is a major determinant of viral persistence and pathogenesis. Two major diseases are related to this virus adult T cell leukemia (ATLL) and HTLV-I-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). Host-related factors are also correlated with HAM/TSP development. To establish if human miRNAs could influence in the unregulated cellular process caused by Tax (differentiation, signal transduction, apoptosis, cellular proliferation and tumorigenesis), this study analyzed miRNA expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from HTLV-1 infected patients. For this purpose, we performed in silico analyses to find human miRNAs that could targeted HTLV-1 tax region. We performed two algorithms (miRanda e RNAhybrid) and we set up two distinct parameters: score more than 120 in the seed region and minimum free energy until -15 kcal/mol. So, we have selected these hsa-miRNAs:149a, 648, 221, 222, 142-5p, 26a, 29a, 374 e 125b. Besides this, we compared several HTLV-1 sub-types and we observed that regions, where miRNAs are regulating, are extremely conserved. After the in silico analysis, we validated miRNAs that we have been chosen. We isolated PBMC samples from 21 control-individuals (CT), 10 from asymptomatic carriers and 12 from HAM/TSP (HAM). After the procedure, genomic DNA were extracted from 1x106 cells, in order to quantify the proviral load (PL) performing quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR). Tax was measured by flow cytometry and for this procedure, we used 1x106 criopreserved cells. Amount 1x 107cells were used to total RNA extraction that was used to miRNAs validation by qRT-PCR. The organic phase from Trizol® was employed to extract total proteins, which were used to analyze Tax expression by Western blot. The PL was significantly higher in HAM group than HAC (p= 0,0046), when Mann-Whitney statistical test was employed. The Tax expression was significantly correlated to PL (p=0,0128) by Spearmann test and this finding provided us a better characterization of the patients. The miRNAs expression was detected in the following groups: CT vs Patients and CT vs HAC vs HAM by non-parametrical tests Mann-Whitney and Kruskal-wallis, respectively. The miRNAs presented unregulated themselves in the patient group, when we compared to CT group. We observed that hsa-miR-125b expression are significantly higher in patients group than controls (p=0,0285). We have tried to associate miRNAs with Tax expression, employing Spearmann test, but this analysis did not show significant values. Despite this, hsa-miR-125b is responsible for regulating several proteins, such as TNF-, which is an inflammatory protein overexpressed in HTLV-1 carriers. In conclusion, we propose that this miRNA could be increased as a way to inhibit TNF- translation. These results suggest the importance in understanding how human miRNAs could regulated the HTLV-1 infection. In addition to this, they could generate data to be used as therapeutic strategies for the control of viral replication and pathogenic processes.

MALTA, T.M. Análise do perfil de expressão gênica em linfócitos T CD8+ isolados de pacientes infectados pelo HTLV-1. 2009. 137f. Dissertação de Mestrado. Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. O vírus linfotrópico de células T humanas tipo 1 (HTLV-1) foi o primeiro retrovírus humano descrito e está etiologicamente associado a duas principais manifestações clínicas: a leucemia ou linfoma de células T do adulto (ATLL) e a mielopatia associada ao HTLV-1 ou paraparesia espástica tropical (HAM/TSP). É estimado que 3 a 5% das pessoas infectadas pelo HTLV-1 desenvolvem as doenças associadas, enquanto a maioria permanece assintomática. A HAM/TSP é uma manifestação inflamatória do sistema nervoso central e o mecanismo pelo qual o HTLV-1 induz o surgimento de HAM/TSP ainda é questão de debate. Os linfócitos T CD8+ citotóxicos (CTL) têm uma participação importante na resposta imunológica dirigida contra o HTLV-1 e a eficiência com que as CTLs eliminam as células infectadas pelo vírus está relacionada com a carga proviral (CPV) do indivíduo e consequentemente com o risco de desenvolvimento de HAM/TSP. No presente trabalho, foram avaliados os perfis de expressão gênica de linfócitos T CD8+ isolados de portadores assintomáticos (HAC), pacientes com HAM/TSP (HAM/TSP) e de indivíduos sadios (CT) por meio da metodologia de Serial Analysis of Gene Expression (SAGE). Os linfócitos T CD8+ utilizados foram isolados por meio de separação imunomagnética e um pool composto de quatro indivíduos infectados para cada grupo, HAC e HAM/TSP foi utilizado para a construção das bibliotecas. A análise do SAGE resultou num total de 51.017, 62.432 e 60.620 tags sequenciadas para as bibliotecas CT, HAC e HAM/TSP, respectivamente, o que permitiu a identificação de aproximadamente 12.000 transcritos diferentes em cada biblioteca. Foram identificados cerca de 900 genes diferencialmente expressos entre as bibliotecas CT e HAC ou HAM/TSP. A comparação dos grupos HAC e HAM/TSP revelou 290 genes. Um grande número destes genes diferencialmente expressos está envolvido com os processos de apoptose, adesão e migração celular. Os achados foram validados pela metodologia de PCR em tempo real em um total de 17 indivíduos assintomáticos, 14 com HAM/TSP e 24 indivíduos sadios. A validação evidenciou o aumento da expressão dos genes envolvidos na lise mediada por células PRF1, GZMB e GZMH, além do aumento de CCL5, ZAP70 e PXN nos indivíduos infectados pelo HTLV-1. Além disso, os resultados mostraram redução nos níveis de expressão de CXCR4 nesses pacientes. Adicionalmente, foi realizada a quantificação dos níveis protéicos de PRF1 e GZMB por citometria de fluxo e os resultados corroboraram com a PCR em tempo real. O perfil gênico dos linfócitos T CD8+ demonstrou a ocorrência de intensa ativação e migração celular durante a infecção pelo HTLV-1. Essas evidências indicam que as células CD8+ dos indivíduos infectados pelo HTLV-1 parecem contribuir mais para a proteção e controle da infecção pelo vírus, e menos para o desenvolvimento de HAM/TSP. Este foi o primeiro trabalho a analisar a expressão global de linfócitos T CD8+ nesta infecção por meio de SAGE e permitiu a geração de dados que serão empregados em diferentes abordagens na pesquisa com HTLV-1. / MALTA, T.M. Serial Analysis of Gene Expression in CD8+ T-cells isolated from HTLV-1 infected individuals. 2009. 137f. Dissertação de Mestrado. Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto - Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) was the first human retrovirus discovered and is related with two major diseases: adult T cell lymphoma/leukaemia (ATLL) and HTLV-I-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). About 3 to 5% of infected individuals will develop HTLV-1 related diseases, while the majority remains life-long asymptomatic carriers of the virus. HAM/TSP is an inflammatory manifestation of central nervous system and the mechanism involved in HAM/TSP development are not well elucidated. CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL) have an important function in the immune response against the HTLV-1 and is related with the individual proviral load and so in the risk of HAM/TSP. To identify genes differentially expressed among non-infected individuals, asymptomatic (HAC) and HAM/TSP (HAM/TSP) patients we performed a serial analysis of gene expression (SAGE) using CD8+ T cells isolated from these individuals. The CD8+ T lymphocytes were isolated by magnetic cell separation system and HAC and HAM/TSP SAGE libraries were composed by pooled of four samples. SAGE analysis of 51,017, 62,432 and 60,620 tags from control, HAC and HAM/TSP groups respectively, allowed identification of approximately 12,000 different transcripts in each library. The expression profile revealed around 900 genes differentially expressed between control group and HAC or HAM/TSP, and 290 genes were identified between HAC and HAM/TSP groups. The expression profile revealed the presence of highly frequent transcripts related to apoptosis, cell adhesion and cell migration. These results were validated by real time PCR in 17 HTLV-1 asymptomatic carriers, 14 patients with HAM/TSP and 24 healthy individuals. The validation revealed the increased levels of expression of the cytolysis genes PRF1, GZMB and GZMH, and the increases of CCL5, ZAP70 and PXN in the HTLV-1 infected individuals. Besides, the CXCR4 was suppressed in these patients. Additionally, we performed the protein quantification of PRF1 and GZMB by flow cytometry and the real time PCR results were confirmed. The CD8+ T cells profiles showed strong cell activation and cell migration in HTLV-1 infection. These data suggests that CD8+ T cells from HTLV-1 individuals seem to contribute more to the protection and virus infection control than to the HAM/TSP development. This study represents the first extensive serial analysis of gene expression of CD8+T cells in HTLV-1 infection and allowed to generate data that will be used in different approaches in HTLV-1 research.

Les leucémies/lymphomes à cellules T de l’adulte (Adult T-cell leukemia/Lymphoma, ATL) sont des hémopathies lymphoïdes T CD4+ malignes matures rares, induite par le rétrovirus HTLV-1 (Human T lymphotropic virus type 1). Nous avons étudié différents aspects moléculaires de la lymphomagenèse HTLV-1 induite sur une série rétrospective de patients pris en charge pour un ATL.Nous avons dans un premier temps étudié la marque épigénétique hydroxymethylation (5hmc) de l’ADN, ainsi que les enzymes la régulant sur des cellules primaires d’ATL. Nous avons observé une diminution du taux de 5hmc dans les formes agressives comparativement aux formes indolentes qui corrélait avec une diminution de l’expression de la dioxygénase TET2 et avec la survie des malades. Nous avons également mis en évidence la présence de mutations somatiques du gène TET2 chez moins de 10% des patients et identifié un polymorphisme surreprésenté dans le locus de TET2 chez les patients atteints ATL comparé à des patients chroniquement infectés sains ethniquement appariés.Dans un deuxième temps, nous avons exploité une technique de PCR « ligation médiée » suivie d’un séquençage à haut débit afin d’étudier l’architecture de l’intégration virale comme outil de maladie résiduelle. Nous avons retrouvé une meilleure sensibilité de cette technique pour définir la réponse au traitement par rapport aux critères de réponse actuels ouvrant la voie de son utilisation pour le suivi des patients.Enfin, nous avons étudié le paysage des altérations génomiques sur une cohorte de 60 patients par une approche globale. Nous avons observé des mutations sur 3 voies principales : TCR/NF-KB, trafic cellulaire T et échappement au système immunitaire corroborant les résultats d’une récente étude sur une population de patients japonais. L’analyse par RNAseq a révélé la perturbation systématique de l’expression génique cellulaire induite par l’intégration virale soit par le biais d’un transcrit chimérique partant du LTR 3’ viral soit par un arrêt de la transcription d’un gène cellulaireLe suivi de patients progressant d’une forme indolente à une forme agressive a révélé l’acquisition de mutations activatrices principalement sur la voie de signalisation TCR/NF-KB. Le suivi de patients ayant rechuté après une période de rémission a également révélé l’acquisition de nouvelles mutations.Ces résultats soulignent la spécificité de la lymphomagenèse HTLV-1, qui procède d’une part d’évènements secondaires à l’intégration virale au sein du génome cellulaire, induisant la perturbation de l’expression de gènes cellulaires (premier évènement oncogénique) et d’autre part à l’accumulation d’altérations génomiques secondaires, communs aux autres hémopathies lymphoïdes T et B matures, responsables de la transformation. / Adult T cell leukemia/lymphoma (ATL) is a rare and mature T cell malignancy induced by the retrovirus HTLV-1 (Human T-lymphotropic virus type 1) which bears a dismal prognosis. We have studied several molecular aspects of HTLV-1 induced lymphomagenesis on a retrospective cohort of ATL patients.First, we analyzed the global level of the DNA epigenetic mark hydroxymethylation (5hmc) as well as of enzymes implicated in its regulation in primary ATL cells. We observed a reduction of the 5hmc level in aggressive ATL compared to indolent forms with a positive correlation between the reduction of the 5hmc level, the decrease of the TET2 dioxygenase transcript and the patient overall survival. We found that somatic mutations in TET2 were present with a frequency of less than 10% but identified a SNP in TET2 locus whose frequency in ATL patients was higher compared to that of an ethnically matched control population.In a second part, we took advantage of a new technique of ligated mediated PCR followed with high throughput sequencing to analyze the viral integration architecture as a means of minimal residual disease detection. We demonstrate that this technique allows a better definition of the treatment response compared to actual consensus response criteria.Finally, we performed an integrated genomic analysis of a retrospective cohort of 60 ATL patients. We identified alterations targeting the TCR/NFKB signaling pathway, T cell trafficking and immune escape mechanisms, consistent with previous findings described in a Japanese ATL cohort. RNAseq analysis revealed the systematic perturbation of host gene expression secondary to viral integration and proceeding via the viral antisense leading to the production of a virus-host chimeric transcript production or the direct transcription termination of a host gene. Analysis of matched sequential samples of patients progressing from an indolent to an aggressive form revealed in most of the cases the acquisition of mutations affecting the TCR/NF-KB pathway. Analysis of sequential samples from patients who relapsed after a remission period also showed the acquisition of additional genetic alterations.These results underscore the specific nature of HTLV-1 induced lymphomagenesis, which proceeds on the one hand through mechanisms induced by the viral integration in the host genome, and consequent host-gene expression perturbation (viral first oncogenic hit) and on the other hand through secondary oncogenic mutations in various pathways, common to other mature B and T cell lymphoid malignancies.

Human T-lymfotropt virus (HTLV) är ett C-typ onkovirus som tillhör familjen Retroviridae som huvudsakligen angriper T-lymfocyter och orsakar leukemi och andra autoimmuna sjukdomar. I den nuvarande kliniska diagnostiken används Enzyme-linked immunosorbent assay och ibland vid screeningsmetoden uppträder ospecifika reaktioner. På senare tid har flera metoder baserade på real-tids PCR utvecklats för att bestämma halten av virala genom i patienter. Syftet med denna studie var att sätta upp och optimera en realtids-PCR för detektion av humant T-lymfotropt virus typ-1 och 2. Inför optimering av realtids-PCR extraherades DNA från MT-4 och MO-T cellinjer.  Under optimering av realtids-PCR användes SYBR Green och smältpunktsanalys där flera komponenter bl.a. templat-, primer-, magnesium- koncentrationer samt annealing/elongeringstemperaturen modifierades. Efter avslutad optimering utfördes probetitrering för att specifikt skilja ut HTLV-1 och HTLV-2. Amplifieringsprodukten verifierades med Sangersekvensering. För att hitta den lämpligaste metoden för extrahering av DNA från helblod testades olika extraheringsmetoder för DNA-preparering. Efter färdig optimering såg PCR-programmet ut enligt följande: 95ºC i 3 min följt av 45 cykler med 95ºC i 3s och 60ºC i 10s. De optimala koncentrationerna av de olika reagenserna var 0,5µM HTV-F5, 0,7µM HTV-R4, 0,2µM HTLV-P1 och 0,1µM HTLV-P2.  Den optimala extraktionsmetoden från helblod visades vara med MagNA Pure Compact med 500µL helblod. Den färdig optimerade PCR-metoden är en semi-kvanitativ metod som fungerar väl för detektion av HTLV 1 och 2, men vidareutveckling av metoden krävs innan den kan tas i bruk för klinisk diagnostik.

Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) infects about 20 million individuals worldwide. This retrovirus induces two major types of pathologies: adult T-cell leukemia (ATL) or a neurodegenerative disorder called HAM/TSP (HTLV-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis). The HTLV-1 transactivator protein (Tax) plays a central role in the development of these pathologies. We hypothesized that Tax activities are modulated through complexation with cellular proteins. Using the yeast two-hybrid method, we isolated two cellular Tax binding proteins, Gβ2 and MCM3, involved in cell signaling and DNA replication, respectively. We demonstrate that the interplay between Tax and Gβ2 modulates migration of infected T-lymphocytes toward chemokines. On the other hand, by interacting with MCM3, Tax accelerates DNA replication during the synthesis phase of the cell cycle and generates DNA damages responsible for cell transformation. We have thus identified two novel Tax partners potentially participating to the mechanisms by which the viral protein ensures viral persistence and leads to the development of HTLV-1 pathologies.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-07T18:26:27Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO MARIELE GUERRA(PPGIM).pdf: 2138129 bytes, checksum: 16fc71d570a0b0413b7ccbe7d4b343f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-02-08T16:13:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO MARIELE GUERRA(PPGIM).pdf: 2138129 bytes, checksum: 16fc71d570a0b0413b7ccbe7d4b343f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T16:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO MARIELE GUERRA(PPGIM).pdf: 2138129 bytes, checksum: 16fc71d570a0b0413b7ccbe7d4b343f7 (MD5) / Capes / O vírus linfotrópico de células T humana tipo 1 (HTLV-1) é encontrado no mundo todo. A infecção pelo HTLV-1 é caracterizada por uma resposta imune exacerbada, com produção espontânea de IFN- e TNF. Estas citocinas são responsáveis por aumentar a expressão de quimiocinas e moléculas de adesão e facilitar a entrada de linfócitos ativados para o sistema nervoso central (SNC). O objetivo deste estudo foi avaliar o papel de quimiocinas e moléculas de adesão na patogênese da infecção pelo HTLV-1. Quimiocinas pró-inflamatórias (CXCL9 e CXCL10) e moléculas de adesão solúveis (sICAM-1 e sVCAM-1) foram determinadas por ELISA, no soro e líquor de diferentes grupos de indivíduos infectados pelo HTLV-1 (portador assintomático, indivíduos com bexiga hiperativa e HAM/TSP). Frequência e mediana de intensidade de fluorescência (MIF) de linfócitos e de monócitos expressando ligantes das moléculas de adesão (CD11a e CD49d) e receptor de quimiocinas (CXCR3) foram analisadas por citometria de fluxo. CXCL9 e CXCL10 estavam mais elevados tanto no soro quanto no líquor dos pacientes com HAM/TSP (p>0,05). As moléculas de adesão não diferiram entre os grupos, apesar da tendência de maior produção de sVCAM-1 na HAM/TSP. sVCAM-1 correlacionou-se positivamente com quimiocinas no soro dos indivíduos infectados pelo HTLV-1 (p>0,05). De modo geral, a MIF de células CD4+, CD8+ e CD14+ expressando CD11a e CXCR3 foi menor na HAM/TSP. Estes achados confirmam a participação das quimiocinas na migração das células infectadas pelo HTLV-1 para o SNC e sugerem, porém não são suficientes para atestar a participação das moléculas de adesão na patogênese da HAM/TSP.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-03-24T13:57:25Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Rosana Cristina Pereira de Andrade.pdf: 3572928 bytes, checksum: 846840a74d4ccae0f9eefebbb3125c37 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T12:21:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Rosana Cristina Pereira de Andrade.pdf: 3572928 bytes, checksum: 846840a74d4ccae0f9eefebbb3125c37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T12:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Rosana Cristina Pereira de Andrade.pdf: 3572928 bytes, checksum: 846840a74d4ccae0f9eefebbb3125c37 (MD5) / CNPq / Embora o vírus linfotrópico das células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) seja considerada de baixa morbidade, um grande número de pacientes apresentam sintomas urinários isolados. As queixas urinárias normalmente apresentam-se precocemente indicando que a bexiga neurogênica antecede o desenvolvimento das demais alterações neurológicas do HTLV-1, e são consideradas um dos maiores fatores de morbidade da doença. O tratamento da bexiga neurogênica depende do quadro clínico e dos achados urodinâmicos. A fisioterapia urológica tem se mostrado uma boa opção de tratamento com resultados satisfatórios nas para sintomas urinários, através da terapia comportamental, eletroestimulação e cinesioterapia, em disfunções miccionais de origem idiopáticas e neurogênica de outras doenças de base. A necessidade do acompanhamento multidisciplinar se torna fundamental quando são analisadas as consequências e sequelas trazidas pelo HTLV-1, visto que, na maioria das vezes os danos são permanentes. Objetivo: Avaliar a eficácia da fisioterapia pélvica em pacientes com disfunção do trato urinário inferior associado ao HTLV-1. Métodos: ensaio clínico aberto foi realizado com 21 pacientes atendidos na clínica de fisioterapia do Hospital Universitário Professor Edgard Santos, em Salvador, Bahia, Brasil. Foram utilizadas combinações de terapia comportamental, exercícios perineais e eletroestimulação intra-vaginal/anal. Os instrumentos de avaliação foram estudo urodinâmico, escore para sintomas de bexiga hiperativa, escore Oxford/ esquema PERFECT e questionário King’s Health para medir a qualidade de vida (QV). Resultados: A idade média dos pacientes foi de 54 ± 12 anos; 14 (67%) eram do sexo feminino. Após o tratamento, houve melhora clínica dos sintomas de urgência miccional, frequência urinária, incontinência urinária de urgência, noctúria e na sensação de esvaziamento incompleto (p <0,001). Houve também uma redução no escore do OABSS de 10 ± 4 para 6 ± 3 (p <0,001) e aumento na função da musculatura perineal (p <0,001). Os parâmetros urodinâmicos apresentaram redução na frequência de pacientes com hiperatividade do detrusor de 57,9% para 42,1%; dissinergia vésico-esfincteriana de 31,6% para 5,3%; hipocontratibilidade do detrusor de 15,8% para 0% e arreflexia do detrusor de 10,5% para 0%. Houve repercussões positivas sobre a qualidade de vida, na maioria dos domínios avaliados. Após um ano de acompanhamento a mediana para o reaparecimento das manifestações foi de 270 dias, IC 95% (180-365 dias), no entanto, o retorno dos sintomas urinários não repercutiu na piora da qualidade de vida dos pacientes, exceto para o domínio medidas de gravidade. Conclusão: A fisioterapia pélvica foi eficaz em casos de bexiga neurogênica associada ao HTLV-1 por reduzir os sintomas clínicos, melhorar a função muscular perineal com repercussão positiva sobre a qualidade de vida por até um ano de acompanhamento.

Submitted by PMBqBM null (pmbqbm@ufba.br) on 2017-05-10T14:58:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Jessica Lais Almeida dos Santos _ PMBqBM-UFBA.pdf: 11654727 bytes, checksum: 40a04bbf070f4574fe0b83ce9f4ac22b (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-03T15:33:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Jessica Lais Almeida dos Santos _ PMBqBM-UFBA.pdf: 11654727 bytes, checksum: 40a04bbf070f4574fe0b83ce9f4ac22b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-03T15:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Jessica Lais Almeida dos Santos _ PMBqBM-UFBA.pdf: 11654727 bytes, checksum: 40a04bbf070f4574fe0b83ce9f4ac22b (MD5) / FAPESB / O HTLV-1 (Human T-Cell Lymphotropic Virus) foi o primeiro retrovírus humano a ser descrito. As principais complicações clínicas associadas ao HTLV-1 são: doenças malignas como a ATLL; síndromes inflamatórias, como a TSP/HAM; e complicações infecciosas, como a dermatite infecciosa. Estima-se que aproximadamente 15 a 20 milhões de pessoas estejam infectadas pelo HTLV em todo o mundo. Algumas áreas são, conhecidamente, endêmicas para esta infecção, sendo elas: sudoeste do Japão, África sub-Saara, regiões do Caribe, áreas localizadas no Irã e Melanésia. No Brasil, existem cerca de dois milhões de portadores do vírus. Na Bahia, estimativas indicam que a prevalência global da infecção pelo HTLV-1 na população geral de Salvador é de 1,8%. No entanto, ainda existe uma escassez de informações sobre a história evolutiva do HTLV-1 no Estado da Bahia, e a maioria dos dados sobre a epidemiologia molecular do HTLV-1 dizem respeito à isolados virais originados da cidade de Salvador, ou região metropolitana (RMS) e mais outras duas mesorregiões do estado, regiões Sul (S) e Vale do São Francisco (VSF). Em outras quatro mesorregiões nenhum outro isolado viral já foi identificado e caracterizado. Portanto, o principal objetivo deste trabalho foi investigar a origem e a disseminação do HTLV-1 na Bahia. Este estudo, de corte transversal, foi desenvolvido a partir de uma amostra de conveniência, composta por 50 amostras de indivíduos, de ambos os sexos, infectados pelo HTLV-1 que nasceram e residem no estado da Bahia, separadas por mesorregiões. Outras sequências LTR do vírus já disponíveis no GenBank foram utilizadas para, perfazer o maior número possível de mesorregiões a serem investigadas. Deste modo, 78 sequências LTR do HTLV-1 foram analisadas neste estudo. Inicialmente, o DNA genômico foi extraído utilizando kit de extração e submetido à nested-PCR para a região LTR. Os produtos da PCR foram purificados e sequenciados. Das 50 amostras selecionadas para a busca pelo HTLV-1, apenas foi possível gerar 11 sequências LTR do HTLV-1, e portanto, foi possível identificar a infecção em outras duas mesorregiões: nordeste (N) e centro-sul (CS). Os cálculos de diversidade genética foram feitos utilizando o modelo de distância Tamura Nei, com suporte estatístico. Três diferentes inferências filogenéticas foram realizadas: uma análise de subtipagem das novas sequências LTR do HTLV-1, uma análise filogenética apenas com sequências de isolados virais do Subtipo a, e uma última inferência filogenética, apenas com sequências de isolados virais do Subtipo a Subgrupo Transcontinental (A). Para essas inferências utilizamos de programas de bioinformática que possibilitaram alinhamento, edição e análise das sequências geradas, bem como inferir árvores filogenéticas e predizer a taxa evolutiva destes isolados. Foi possível identificar que a mesorregião que apresenta maior diversidade genética, entre suas sequências, foi a (CS), seguida da região N, enquanto as regiões S e RMS apesentaram resultados semelhantes. A análise filogenética, para subtipagem, das novas 11 sequências LTR do HTLV-1, geradas neste trabalho, demonstrou que todas elas pertencem ao subgrupo Transcontinental (A), do subtipo Cosmopolita (a). As sequências LTR do HTLV-1 originadas da mesorregião VSF apresentaram diferentes características filogenéticas, e as sequências originadas de casos de infecção RMS tiveram uma distribuição difusa no subgrupo Transcontinental, formando grupamentos com sequências originadas de diferentes regiões do país. No entanto, 32 (74,4%) sequências, se posicionaram em clados mais ancestrais do subgrupo. Fenômeno semelhante foi observado com a distribuição das sequências originadas de casos de infecção do Sul do estado. Também, a partir desta análise, é possível observar que houve a formação de cluster único com as sequências do N e CS (Boostrap entre 50% e 74%). Todas as sequências originadas do CS mostraram proximidade filogenética com sequências do Sul do estado. O valor encontrado para a taxa evolutiva foi de 1.0 x 10-4 substituição/sítio/ano (95% IC: 4.2752E-6, 2.7948E-4). Por isso, as principais conclusões são: identificação de 11 novos isolados virais, originados de casos de infecção pelo HTLV-1 em diferentes mesorregiões do Estado da Bahia; com a caracterização filogenética, percebemos que todos pertencem ao subtipo a, subgrupo A; sendo possível identificação da presença do Subtipo a/Subgrupo A nas mesorregiões N e CS; as sequências LTR do HTLV-1, originadas de casos de infecção na mesorregião RMS, revelam características de ancestralidade destas sequências em comparação com as de outras mesorregiões, sugerindo a introdução do HTLV-1 a partir dessa mesorregião; As sequências LTR do HTLV-1, originadas de casos de infecção na mesorregião S, apresentaram características semelhantes as sequências da RMS, o que pode sugerir origem dessas sequências na RMS, ou até introduções semelhantes nestas duas mesorregiões;- proximidade filogenética das sequências LTR do HTLV-1, originadas de casos de infecção das mesorregiões N, CS e S, sugere rotas migratórias populacionais entre elas.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T19:23:45Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Raquel Crisóstomo Lima Verde.pdf: 2317368 bytes, checksum: 9ec788fa9a7fd79189cbb5ee2ca7e2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-18T17:40:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Raquel Crisóstomo Lima Verde.pdf: 2317368 bytes, checksum: 9ec788fa9a7fd79189cbb5ee2ca7e2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-18T17:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Raquel Crisóstomo Lima Verde.pdf: 2317368 bytes, checksum: 9ec788fa9a7fd79189cbb5ee2ca7e2f5 (MD5) / National Institutes of Health (NIH); Bolsa de Estudo da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Introdução: A infecção pelo vírus linfotrópico humano de células T do tipo 1 é caracterizada por proliferação de linfócitos e elevada produção espontânea de citocinas do tipo Th1, como IFN- e TNF-α. A atopia é uma disfunção do sistema imunológico na qual há produção exacerbada de citocinas do tipo Th2, principalmente IL-4, IL-5 e IL-13, proliferação de linfócitos B, produção elevada de IgE e eosinofilia. Na literatura, a relação da influência do HTLV-1 na resposta imune do tipo Th2 e na prevalência de atopia não estão completamente esclarecidos. Objetivos: Avaliar se a atopia interfere no desenvolvimento e na gravidade das manifestações neurológicas associadas ao HTLV-1. Comparar a produção espontânea de citocinas em pacientes infectados com HTLV-1 com e sem atopia. Metodologia: Foram realizados um estudo de corte transversal e uma coorte retrospectiva. No primeiro foi determinada a prevalência de atopia em portadores de HTLV-1 e em pacientes com HAM/TSP. Adicionalmente foi comparada a produção espontânea de citocinas entre os indivíduos atópicos e não atópicos de cada grupo. Na coorte retrospectiva foi comparado o desenvolvimento de manifestações neurológicas em indivíduos atópicos e não atópicos. Resultados: Não houve diferença estatística na prevalência de atopia entre portadores de HTLV-1 e pacientes com HAM/TSP (p=0,884). Porém, pacientes com HAM/TSP atópicos tiveram uma maior produção espontânea de IL-5 do que os não atópicos (p=0,008), e apresentaram uma elevada produção de IFN-γ (1724±1201pg/ml). Não houve associação entre a presença de atopia e o desenvolvimento de manifestações neurológicas. Porém, houve associação estatísticamente significante entre a presença de rinite alérgica e o desenvolvimento de sinal de Babinsky (p=0,039) e bexiga hiperativa (p=0,007). Conclusões: Apesar de não haver diferença estatística entre a presença de atopia e o desenvolvimento de manifestações neurológicas ou de formas graves da infecção pelo HTLV-1, foi observado que, não só coexistem respostas Th1 e Th2 exacerbadas nos indivíduos infectados pelo HTLV-1, mas também, a doença alérgica pode interferir no curso clínico da infecção pelo HTLV-1. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T18:27:51Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Tiago de Morais Alves da Cunha.pdf: 2523166 bytes, checksum: 303dec88545fbebed3a6e8bae48043d8 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-18T17:44:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Tiago de Morais Alves da Cunha.pdf: 2523166 bytes, checksum: 303dec88545fbebed3a6e8bae48043d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-18T17:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Tiago de Morais Alves da Cunha.pdf: 2523166 bytes, checksum: 303dec88545fbebed3a6e8bae48043d8 (MD5) / Introdução. Alguns vírus têm sido implicados na patogênese da doença periodontal, potencializando o efeito da reação pró-inflamatória e determinando a gravidade da doença periodontal. Objetivos. Avaliar a influência da infecção pelo HTLV-I na gravidade da periodontite crônica e determinar a relação entre produção de citocinas e carga pró-viral e a gravidade da periodontite crônica associada ao HTLV-1 Material e Métodos. Participaram do estudo 71 indivíduos infectados pelo HTLV-I com doença periodontal e 72 pacientes com doença periodontal não infectados pelo HTLV-1. Foram comparadas as frequências dos níveis de gravidade da periodontite crônica nos diferentes grupos. A carga pró-viral e a produção espontânea de TNF-α, IFN-, IL-5 e IL-10 em culturas não estimuladas de células mononucleares de sangue periférico (CMSP) foram comparadas na periodontite leve, moderada e grave de indivíduos infectados pelo HTLV-1. Resultados. Não houve diferença estatística na frequência da periodontite leve, moderada e grave nos pacientes infectados pelo HTLV-1 com ou sem HAM/TSP (P=0,916). Em comparação ao grupo controle (19,4%), a frequência da forma grave da doença periodontal foi maior nos indivíduos infectados pelo HTLV-1 sendo encontrada em 46,8% e 41,7% respectivamente no grupo de indivíduos infectados pelo HTLV-1 sem doença neurológica e nos pacientes com HAM/TSP (P=0,004). A carga pró-viral nos indivíduos infectados não apresentou diferença e foi de 77.731 cópias/106 células (IQ 10.449 – 198.314 cópias/106 células) na periodontite grave, 182.701 cópias/106 células (IQ 79.059 – 279.369 cópias/106 células) na periodontite moderada e 144.457 cópias/106cels (IQ 40.512 – 201.714 cópias/106 células) na periodontite leve (P> 0,05). A produção espontânea de TNF-α, IFN- e IL-5 por CMSP de indivíduos infectados pelo HTLV-1 não revelou diferença estatística entre as formas leve, moderada e grave da periodontite crônica. Nos infectados pelo HTLV-1 observou-se uma tendência para diminuição da produção de IL-10 nos indivíduos com periodontite grave (P=0,05). Conclusões. A infecção pelo HTLV-1 parece influenciar na gravidade da periodontite crônica. No entanto, a produção espontânea de citocinas e a carga pró-viral não apresentou relação com o aumento da gravidade da periodontite crônica associada ao HTLV-1. / Salvador