Le cancer, qui représente la première cause de mortalité en France, a dans environ 25% des cas une origine virale. Dans ce contexte le virus HTLV-1 (Human T-cell Leukemia Virus Type 1) est l'agent étiologique d'une forme très agressive de leucémie et/ou de lymphome appelée ATL (Adult T-cell Leukemia), caractérisée par une grande instabilité génétique et chromosomique. Cette pathologie se développe après une phase asymptomatique de plusieurs décennies et ne connaît à se jour aucun traitement efficace. Parmi l'ensemble des protéines virale, La protéine Tax joue un rôle crucial dans la transformation cellulaire notamment en activant des facteurs de transcription impliqués dans la prolifération et la survie, mais aussi en contrôlant des étapes clefs de la régulation du cycle cellulaire et de la réparation des endommagements de l'ADN. Mon travail de thèse a consisté, dans un premier temps, à étudier le rôle de l'enzyme AID (Activationinduced cytidine deaminase) dans l'instabilité génomique des lymphocytes T. Nos résultats démontrent que AID est exprimée dans les lymphocytes T CD4+ infectés par HTLV-1, que son expression est induite par la protéine virale Tax et que l'enzyme est fonctionnelle. En utilisant différentes techniques nous avons pu démontrer que AID induit une désamination des deoxycytidines en deoxyuraciles in vitro et des endommagements de l'ADN, de type cassures de l'ADN, dans les cellules infectées par HTLV-1 ou transfectées par Tax. L'accumulation de ces endommagements pourrait participer à la transformation cellulaire au cours de l'infection par HTLV-1 suggérant ainsi un rôle de AID dans la leucémogenèse associée à HTLV-1. La longue période de latence avant le développement de l'ATL suggère la mise en place de mécanismes de survie dans les cellules infectées par HTLV-1. Nous avons donc en parallèle étudié les mécanismes de régulation de l'expression de la protéine anti-apoptotique Bfl-1 et son implication dans la survie des cellules infectées / Cancer, which is the leading cause of death in France, has a viral origin in about 25% of cases. In this context, HTLV-1 (Human T-cell Leukemia Virus Type 1) is the etiologic agent of a very aggressive form of leukemia/lymphoma called ATL (Adult T-cell Leukemia), characterized by genetic and chromosomal instability. ATL occurs after an asymptomatic period of several decades and to date there is no effective treatment. Among all the viral proteins, Tax protein plays a crucial role in cell transformation especially by activating transcription factors involved in proliferation and survival, but also by controlling the key steps of the cell cycle regulation and the DNA damage response. The aim of my PhD work was, firstly, to investigate the role of the enzyme AID (activation-induced cytidine deaminase) in the genomic instability of T cells. Our results demonstrate that AID is expressed in HTLV-1-infected CD4+ T cells, that its expression is induced by the viral protein Tax and that AID is functional. Using different techniques we have demonstrated that AID induces deamination of deoxycytidines into deoxyuracils in vitro and DNA damage, like DNA breaks, in HTLV- 1-infected or Tax-expressing cells. Accumulation of DNA damage could be involved in cellular transformation of HTLV-1-infected cells, suggesting a role of AID in leukemogenesis associated with HTLV-1. The long latency period before the development of ATL suggests establishment of survival mechanisms in HTLV-1-infected cells. Thus we studied the mechanisms regulating the expression of anti-apoptotic Bfl-1 protein and its involvement in the survival of infected cells. We have shown that Tax protein induces expression of Bfl-1 via the NF-B and AP-1 pathways, but also that a second viral protein, HBZ, is able to modulate Bfl-1 expression induced by Tax. In addition, the use of Bfl-1 specific shRNA allowed us to highlight the role of Bfl-1 in survival of infected cells as well as in chemoresistance of HTLV-1-infected T cell lines. Thus Bfl-1 appears as a potential therapeutic target in the treatment of ATL

L’activation constitutive de la voie NF-κB est une étape cruciale dans le processus de transformation des lymphocytes T par le virus humain T-lymphotrope de type 1 (HTLV-1). La protéine virale Tax y joue un rôle majeur en recrutant la protéine régulatrice IKKγ. De précédents travaux effectués par notre équipe ont montré que l’activation de la voie NF-κB parTax est promue par le recrutement des facteurs celluaires Optineurine (OPTN) et Tax1-binding protein 1 (TAX1BP1), deux protéines récemment décrites comme des membres de la famille de récepteurs autophagiques Sequestosome-Like Receptors (SLR), posant la question des liens fonctionnels entre la signalisation NF-κB et la machinerie autophagique.Notre étude décrit l’interaction de Tax avec le récepteur p62, autre membre de la famille des SLR. L’interaction est directe et indépendante de l’ubiquitination de Tax. Les facteurs Tax, p62 et IKKγ forment des complexes localisés au niveau de membranes autophagiques. Le facteur p62 promeut spécifiquement l’activation de la voie NF-κB médiée par Tax. Étonnamment, la sur-expression de p62 limite la capacité de Tax à activer la voie NF-κB, en induisant la déplétion cytosolique de Tax. Ces résultats indiquent que p62 peut exercer des effets antagonistes sur Tax selon son taux d’expression. Des données préliminaires suggèrent que Tax lie également d’autres membres de la famille des SLR, avec des conséquences variables sur l’activation de la voie NF-κB.Ce travail apporte des connaissances nouvelles concernant les relations entre Tax, la signalisation NF-κB et la machinerie autophagique, suggérant l’utilisation des membranes autophagiques comme plateformes de signalisation virale. / NF-κB constitutive activation is a key step in the HTLV-1-mediated T lymphocytes transformation process. This activation is mainly driven by the viral protein Tax, which recruits the IKKγ regulator factor. Previous work performed in our lab showed that Tax-induced NF-κB activation is promoted by the interaction with several cellular factors such as Optineurin (OPTN) and Tax1-binding protein 1 (TAX1BP1), two members of the Sequestosome-Like Receptors (SLR) family, rising the hypothesis of functional interplay vetween NFκB signaling and the autophagic pathway.Our study demonstrates that Tax interacts with the p62 receptor, which is another SLR member, in a direct, ubiquitin independent manner. Tax and p62 form complexes located at autophagic membranes, together with IKKγ. P62 potentiates the Tax-mediated NF-κB activation. Unexpectedly, p62 over-expression inhibits Tax-mediated NF-κB activation by inducing Tax cytoplasmic depletion. These results show that p62 plays a dual role on Tax in a dose-dependent manner. Preliminary data suggest that Tax is also able to interact with other SLR, with various consequences on activation of the NF-κB pathway.This work contributes to the further caracterization of the complex interplay between Tax, NF-κB signaling and the autophagic pathway, suggesting the use of autophagic membranes as viral signaling platforms.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T16:12:54Z No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T16:25:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T16:28:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T16:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A dermatite infecciosa associada ao vírus linfotrópico de células T humanas tipo 1 (HTLV-1), DIH, é uma forma de eczema grave e recidivante que incide principalmente em crianças que em geral foram verticalmente infectadas pelo HTLV-1, ocorrendo lesões eritematosas, escamativas e crostosas, sendo geralmente localizadas nas regiões do couro cabeludo e retroauriculares, assim como pescoço, virilha, região paranasal, axilas, ouvido externo e narinas. Inicia-se após os 18 meses de vida e raramente persiste até a vida adulta. No Brasil, muitos casos têm sido diagnosticados na Bahia, estado brasileiro que atualmente conta com a maior casuística da literatura depois da Jamaica. Acompanhando uma coorte de 31 pacientes da faixa etária infanto-juvenil com DIH em Salvador, observou-se em esfregaço do sangue periférico, em 11 dos indivíduos, o aparecimento de linfócitos atípicos (LA) e/ou células em flor (CF), que não são comumente observados em pacientes com DIH, mas ocorrem com frequência em pacientes com leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL). Submetemos amostras dos 31 pacientes a reações em cadeia da polimerase (PCR) para verificar se havia um clone majoritário através do padrão de clonalidade do TCR-gama. Para este ensaio, todos os 31 pacientes apresentaram padrão oligoclonal ou policlonal típico para DIH, onde não ocorre um clone predominante. A fim de verificar se o aparecimento dos linfócitos atipicos estava relacionado ao possível desenvolvimento da ATL, para os 11 indivíduos que apresentaram os LA e/ou CF em esfregaço do sangue periférico, realizamos ensaios de ILPCR para verificar a clonalidade dos linfócitos infectados pelo vírus e posteriormente sequenciamos as amostras a fim de identificar o local de integração do provírus ao genoma do portador hospedeiro. Em 7 dos 11 indivíduos identificou-se um único clone predominante nos produtos de PCR em pelo menos uma das coletas avaliadas. Nesses casos, o DNA proviral não interrompeu regiões codificadoras para genes humanos. Para um paciente, o provírus se integrou na região do gene da MAP2K1 (proteína quinase 1 ativadora de mitose), localizado no cromossomo 15. Observou-se que na presença de LA e/ou CF podem existir clones majoritários circulantes em portadores do HTLV-1 com DIH. / Infective dermatitis associated with human T lymphotropic cells virus type 1 (HTLV-1), IDH, is a form of severe and recurrent dermatitis that occurs mostly in children who were mainly vertically infected with HTLV-1, occurring erythematous, desquamative and crusty, being generally located in regions of the scalp and retroauricular, neck, groin, paranasal region, armpits, outer ear and nostrils. It begins after 18 months of life and rarely persists into adulthood. In Brazil, several cases have been diagnosed in Bahia, the Brazilian state that currently has the highest incidence after Jamaica. Tracking a cohort of 31 patients in the juvenile age group with IDH in Salvador, we observed the appearance of atypical lymphocytes (AL) and/or flower cells (FC), which are not commonly observed in patients with IDH, but occur frequently in patients with adult T cell leukemia/lymphoma (ATL), in peripheral blood smear in 11 of the subjects. Samples of 31 patients underwent tests of PCR assays to verify if there was a major clone by the clonality patterns of gamma-TCR. For this test, all 31 patients had oligoclonal pattern or typical polyclonal of IDH, where there isn’t a predominant clone. In order to verify if the appearance of the atypical cells was related to the future ATL we submitted the 11 subjects who had the AL and/or FC in peripheral blood smear to ILPCR tests conducted to analyze clonality of lymphocytes infected by the virus and subsequently these samples were sequenced to identify the integrations sites of the provirus in the host-carrier genome. A single dominant clone was observed in the PCR products from at least one of the tested samples in 7 of 11 individuals. In such cases, the proviral DNA did not interrupt coding regions for human gene. For a patient, the provirus was integrated in the region of the MAP2K1 gene (mitosis protein kinase activator 1), located on chromosome 15. We observed that in the presence of AL and/or FC may be majority clones circulating in HTLV- 1 carries with IDH.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-15T14:17:14Z No. of bitstreams: 1 Jaqueline Goes de Jesus. Estudo...2014.pdf: 4655999 bytes, checksum: 99ee2ef801cc69dd80d0a344e8f01be2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-15T14:18:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Jaqueline Goes de Jesus. Estudo...2014.pdf: 4655999 bytes, checksum: 99ee2ef801cc69dd80d0a344e8f01be2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-15T14:18:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jaqueline Goes de Jesus. Estudo...2014.pdf: 4655999 bytes, checksum: 99ee2ef801cc69dd80d0a344e8f01be2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / As ORFs I e IV do genoma do HTLV-1 codificam, respectivamente, as proteínas p12/p8 (acessória) e Tax (regulatória). p12/p8, de 99 aminoácidos, pode ser clivada em sua extremidade amino terminal gerando a proteína p8. A primeira clivagem proteolítica de p12 remove o sinal de retenção ao RE, enquanto a segunda clivagem, gera o produto de 8kDa, referido como p8. p12 localiza-se no sistema de endomembranes, residindo em RE e aparato de Golgi, enquanto p8 dirige-se para a membrana plasmática, onde é recrutada para a sinapse imunológica, através da ligação com o receptor de células T (TCR), além de participar da sinapse virológica e da formação de conduítes. A proteína Tax, por outro lado, atua como transativador transcricional do HTLV-1, sendo referida também na indução da expressão de diversos genes celulares, aumentando a proliferação e a migração das células infectadas. Na via de transporte de vesículas secretórias, vesículas produzidas como pós-Golgi são transportadas ao longo do citoesqueleto por motores celulares. A Miosina-Va, um motor não convencional, transporta diversos cargos, incluindo vesículas secretórias, vesículas sinápticas e de retículo endoplasmático. Outra proteína relacionada ao citoesqueleto é a Paxilina, que atua como molécula adaptadora nas adesões focais e cuja expressão está aumentada em indivíduos TSP-HAM. Na tentativa de compreender se Tax influencia no aumento da expressão de Paxilina e, paralelamente, se p8 trafega a partir de Golgi em direção à membrana, de maneira dependente de Miosina-Va, células de linhagem foram transfectadas, com o plasmídeo que expressa Tax ou com plasmídeos que expressam variantes da proteína p12 (pMEp12) fusionada a um tag de HA (hemaglutinina de influenza) e que expressam porções da Miosina-Va, incluindo a cauda completa neuronal conjugada com GFP (MyoVa FTNeu-eGFP), que funciona como dominante negativo e compete com a Miosina-Va constitutiva pelos seus ligantes intracelulares. A localização intracelular das proteínas foi realizada por ensaio de imunofluorescência indireta utilizando anticorpos contra a Paxilina ou contra o tag de HA e a cauda medial da Miosina-Va. Técnicas de microscopia confocal e obtenção de imagens foram realizadas utilizando o microscópio Zeiss LSM 780 (Carl Zeiss Optical, Chester, Va.) e o software Adobe Photoshop CC. Surpreendentemente, nas células que expressavam Tax, a expressão de Paxilina, avaliada por imunofluorescência, foi menor, necessitando de novos ensaios para confirmação dos resultados. Em relação à p12/p8, foi observada a sua sub-localização celular como já descrito na literatura, apresentando-se na região perinuclear (RE e aparato de Golgi), e co-localização entre p12/p8 e Miosina-Va, embora apenas quando o dominante negativo MyoVa FTNeu-eGFP foi expresso simultaneamente com as variantes de p12, a localização de p12/p8 mostrou-se alterada, de pontos dispersos por todo o citoplasma e superfície celular para apresentar-se em forma de grumos agregados independentemente da variante de p12 expressa, sugerindo que a Miosina-Va desempenha um importante papel no tráfego de p8 partindo de Golgi até a superfície celular. / HTLV-1 ORFs I and IV encode respectively p12/p8 (accessory protein) and Tax (regulatory protein). The 99 amino acid p12 protein can be proteolytically cleaved at the amino terminus to generate the p8 protein. The first proteolytic cleavage removes the ER retention/retrieval signal at the amino terminus of p12, while the second cleavage generates the p8 protein. The p12 protein localizes to cellular endomembranes, within the ER and Golgi apparatus, while p8 traffics to lipid rafts at the cell surface and is recruited to the immunological synapse upon T-cell receptor (TCR) ligation, virological synapse and conduits. Tax on the other hand acts as viral transactivator and induces expression of many cellular genes, increasing proliferation and migration of infected cells. In secretory vesicle transport, vesicles produced as post-Golgi are moved along the cytoskeleton by motor proteins. The unconventional myosin motor, Myosin-Va, moves several cargoes including secretory vesicles, synaptic vesicles, and the endoplasmic reticulum. Another cytoskeleton associated protein is Paxillin, an adapter on focal adhesions which expression is increased in TSP-HAM patients. To understand if Tax play a role on increased expression of Paxillin and parallel if p8 traffics from Golgi apparatus to cell surface on a myosin-Va dependent manner, lineage cells were transfected with Tax plasmids or pMEp12 plasmids which express variants (p12WT, p12Δ29 and p12G29S) of the fusion protein of HTLV-1 p12 tagged with the influenza hemagglutinin (HA1) tag and with the Myo-Va plasmids including full-tail neuronal-eGFP conjugated (MyoVa FTNeu-eGFP) plasmid which expresses a negative dominant of myosin Va and competes for intracellular ligands with cellular putative myosin. Proteins intracellular localization were analyzed by indirect immunofluorescence assay using antibodies against Paxillin or the HA-tag and the Myo-Va protein. Confocal microscopy and image collection was performed by using a Zeiss LSM 780 microscope (Carl Zeiss Optical, Chester, Va.) with Adobe Photoshop CC software. Surprisingly in Tax-expressing cells Paxillin fluorescence was decreased requiring another assay to confirm this find. It was reported that p12 expression in Jurkat T, as previous described, was shown in perinuclear region which might be RE and Golgi apparatus and that p12/p8 and MyoVa proteins colocalizes in lineage cells, however only when MyoVa FTNeu-eGFP was simultaneously expressed with pMEp12 plasmids, p12/p8 localization showed to be altered from dots dispersed all over cytoplasm and cell surface to form cytoplasmic aggregates independently on variant of p12 expressed, suggesting that myosin Va plays an important role on traffics of p8 from Golgi to cell surface.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria do Perpetuo Socorro Vendramini Orletti.pdf: 2872312 bytes, checksum: c043f9bf551219d5304da6f385e748f0 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Introdução: Existem poucos estudos realizados em amostras populacionais sobre a soroprevalência da infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas tipo 1 e 2 (HTLV-1/2) e não se conhece a soroprevalência dessa infecção no Município de Vitória-ES. Objetivos: a) Determinar a prevalência sorológica da infecção por HTLV-1/2 em uma amostra de adultos, que procuram atendimento nos serviços de saúde do Município de Vitória-ES; b) Discriminar os tipos de HTLV encontrados; c) Investigar possíveis formas de transmissão dos tipos virais encontrados e fatores associados; d) Georeferenciar a população da amostra e os casos positivos. Métodos: Estudo transversal, de setembro de 2010 a dezembro de 2011, em indivíduos de ambos os sexos, com 18 anos ou mais, residentes no município de Vitória-ES. Amostras de sangue venoso foram coletadas e submetidas à pesquisa de anticorpos anti-HTLV-1/2 por meio de imunoensaio quimioluminescente (CMIA). Indivíduos com resultado CMIA reativo foram submetidos a nova coleta de sangue para repetição do CMIA, seguida por PCR em tempo real para confirmar e discriminar a infecção pelos tipos virais. Resultados: Foram testadas 1502 amostras, sendo 52,7% (791/1502) do sexo feminino e 47,3% (711/1502) do sexo masculino, distribuídas nas seis regiões de saúde, de acordo com a estimativa populacional do ano de 2009, no Município de Vitória-ES. A soroprevalência geral para HTLV-1/2 na amostra foi de 0,53% (8/1502; IC 95%; 0,2 - 0,9%). A taxa de infecção foi de 0,7% em homens (5/711; IC 95%; 0,1 - 1,3%), e 0,4% em mulheres (3/791; IC 95%; 0 - 0,8%). Sete amostras foram positivas para HTLV-1, uma amostra positiva para HTLV-2. Conclusões: A prevalência de HTLV-1/2 encontrada (0,53%) é considerada intermediária. Os dois tipos virais (HTLV-1 e HTLV-2) estão presentes na população estudada, com maior ocorrência do HTLV-1 (7:1). Nenhuma das variáveis testadas permaneceu associada ao HTLV-1/2 no modelo final de regressão logística, mas foi importante a infecção via transfusão de sangue, ocorrida antes de 1993, em dois indivíduos. O georeferenciamento mostrou uma maior proporção de casos positivos nos naturais do Espírito Santo, originados de município do Norte do Estado, próximo à Bahia / Introduction: There are few studies in samples of the general population on the seroprevalence of infection by human T cell lymphotropic virus type 1 and 2 (HTLV-1/2) and the seroprevalence of this infection in the municipality of Vitoria-ES is not known. Objectives: a) To determine the prevalence of serological infection by HTLV-1/2 in a sample of adults who seek care in the health services of the municipality of Vitoria -ES, b) To discriminate the types of HTLV found c) To investigate possible ways of transmission and associated factors; d) To establish the location by geo-reference of the positive cases in the sample of the population. Methods: a cross sectional study performed from September 2010 to December 2011, in individuals of both sexes, aged 18 or older residing in Vitória-ES. Venous blood samples were collected and submitted to search for anti-HTLV-1/2 antibodies by chemiluminescent immunoassay (CMIA). Individuals with CMIA reactive results were submitted to new blood collection for retesting of the CMIA, followed by PCR in real time to confirm and discriminate the infection by viral types. Results: From the 1502 samples tested, 52,7% (791/1502) were female and 47,3% (711/1502) male, distributed in six health zones, according to the estimated population of the year 2009, in Vitória-ES. The general seroprevalence for HTLV-1/2 in the sample was 0,53% (8/1502; 95% CI; 0,2 0,9%). The infection rate was 0,7% in men (5/711; 95% CI; 0,1 1,3%), and 0,4% in women (3/791; 95% CI; 0 0,8 %). Seven samples were positive for HTLV-1, a positive sample for HTLV-2. Conclusions: The prevalence found (0,53%) is considered intermediate. The two viral types (HTLV-1 and HTLV-2) are present, with greater occurrence of HTLV-1(7:1). None of the tested variables remained associated with HTLV-1/2 in the final logistic regression model, but it was important the infection via blood transfusion, that occurred prior to 1993, in two individuals. The geo-reference location showed a higher proportion of positive cases in individuals born in Espirito Santo state originated from northern towns close to Bahia state

Submitted by Carla Santos (biblioteca.cp2.carla@bahiana.edu.br) on 2018-11-12T17:15:36Z No. of bitstreams: 1 Adenilda Lopes Martins.pdf: 4438150 bytes, checksum: 19b5db198be60cf56e04df208034b075 (MD5) / Approved for entry into archive by JOELMA MAIA (ebmsp-bibliotecacp2@bahiana.edu.br) on 2018-11-12T19:42:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Adenilda Lopes Martins.pdf: 4438150 bytes, checksum: 19b5db198be60cf56e04df208034b075 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-12T19:42:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adenilda Lopes Martins.pdf: 4438150 bytes, checksum: 19b5db198be60cf56e04df208034b075 (MD5) Previous issue date: 2018-04-23 / O V??rus Linfotr??pico Humano de C??lulas T do tipo 1 (HTLV-1) infecta cerca de cinco a dez milh??es de pessoas em todo o mundo e em Salvador afeta cerca de 9% das mulheres acima de 50 anos. Existem relatos de uma associa????o entre S??ndrome de Sj??gren, ceratoconjuntivite seca e xerose com a infec????o pelo HTLV-1. Al??m disso, maior preval??ncia de Disfun????o Er??til (DE) est?? relatada em homens com HTLV-1. Contudo, em mulheres infectadas pelo HTLV-1, n??o existem estudos sobre disfun????o sexual (DS), ou a preval??ncia de vagina seca. Objetivo: Investigar se existe associa????o entre a infec????o pelo HTLV-1 em mulheres e a presen??a de disfun????o sexual (DS), bem como avaliar a presen??a de vagina seca nestas mulheres. M??todos: Corte transversal em que foram estudadas 72 mulheres infectadas pelo HTLV-1 (15 com e 57 sem Mielopatia Associada ao HTLV-1/Paraparesia Esp??stica Tropical - HAM/TSP), atendidas no Centro de Neuroci??ncias do Ambulat??rio Docente Assistencial da Escola Bahiana de Medicina e Sa??de P??blica (EBMSP) selecionadas sequencialmente no momento da consulta. Foram crit??rios de inclus??o: diagn??stico de infec????o pelo HTLV-1 (ELISA e Western blot positivos), idade entre 20 e 50 anos, vida sexual ativa nas ??ltimas quatro semanas. O grupo n??o infectado pelo HTLV-1 (n=49), foi selecionado entre familiares, relacionados ou acompanhantes dos pacientes atendidos no mesmo servi??o e obedecendo os mesmos crit??rios, diferindo apenas em que o ELISA e Western blot tinham resultado negativo. Ap??s assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE), as mulheres responderam um question??rio com dados s??cio-demogr??ficos e o Female Sexual Function Index (FSFI), para avaliar a DS. A seguir, foram submetidas a exame ginecol??gico para coleta de secre????o c??rvico-vaginal objetivando realiza????o do Papanicolaou, ??ndice de Matura????o Vaginal (MV) e medida da lubrifica????o vaginal com uso da fita de Schirmmer. FSFI < 26,5 foi considerado como presen??a de DS. Raz??es de Preval??ncia brutas (RP) e ajustadas (RPaj) foram obtidas com a regress??o de Poisson com erro robusto. Resultados: A preval??ncia geral de DS foi de 53,70% (65/121), significativamente maior entre as mulheres com HAM/TSP (80,00%; RP: 1,78; IC 95%: 1,19-2,66) quando comparadas as n??o infectadas (44,90%). N??o foi observada maior frequ??ncia de DS entre as mulheres HTLV-1 assintom??ticas em rela????o ??s n??o-infectadas (54,40%; RP: 1,21; IC 95%: 0,82-1,79). Ap??s ajuste para idade, n??mero de filhos e renda o diagn??stico de HAM/TSP se manteve como um fator independente associado ?? presen??a de DS (RPaj:1,89; IC 95%:1,23- 2,90). A mediana (p25-p75), no dom??nio de lubrifica????o do FSFI foi semelhante nas mulheres assintom??ticas [4,8 (3,6-5,4)] e no grupo n??o infectado [4,8 (4,2-5,7)], mas reduzido nas mulheres com HAM/TSP [(4.2 (2.7-5.1); p = 0.032]. O teste de umidade vaginal mostrou uma m??dia (DP), de 13.21(4.71); 13.16(5.04) e 9.53(4.87) mm no filtro de papel, respectivamente (p = 0,027) para HTLV-1 assintom??ticos, n??o infectados e HAM/TSP mulheres. Nessa mesma ordem, as medianas (p25-p75) da MV foram de 70,00 (63,00-85,00) %; 78,00 (69,00-84,00) % e 62,50 (51,00-75,00) %, respectivamente (p=0,039). Conclus??es: Foi encontrada associa????o entre DS e a presen??a de HAM/TSP em mulheres infectadas pelo HTLV-1, bem como indicadores de maior secura vaginal nestas mulheres.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacaol Laura Branquinho.pdf: 1728619 bytes, checksum: c7a60f32f56cf06df86def6d009af5eb (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Human T-lymphotropic virus 1 (HTLV-1) has infected human beings for thousands of years, but knowledge about the infection is only recently emerging. The virus can be transmitted from mother to child, through sexual contact, and contaminated blood products. There are endemic areas for this infection in sub-Saharan Africa and South America. African individuals were introduced in Brazil by slave trade. Some of them escaped to remote valleys and stayed in communities, called quilombos. Nowadays, their history and tradition allows them to be identified as remnants of quilombos. The epidemiological status of HTLV infection of these communities remains unknown. The aim of this study was to investigate the epidemiological and molecular profile of HTLV infection among remnant communities in Central Brazil. This study included 1,837 individuals from 13 quilombo remnant communities in the States of Goiás and Mato Grosso do Sul. They were interviewed about demographic and risk characteristics known to be associated with HTLV transmission. Blood samples were collected from all individuals and screened by ELISA for the presence of antibodies to HTLV 1/2. Positive samples were tested for confirmation by western blot and/or PCR. Also, they were submitted to sequencing and phylogenetic analyses. Of the 1,837 individuals, nine were found to be positive by ELISA. All of them were confirmed as being positive for HTLV-1, resulting in an anti-HTLV prevalence of 0.5% (CI 95%: 0.2-1.0). The HTLV-1 infected individuals ranged in age from 11 to 82 years. Seven were females and two were male. Regarding risk characteristics, history of breastfeeding (9/9), blood transfusion (2/9), multiple sexual partners (2/9) and history of sexually transmitted diseases (1/9) were reported by the infected individuals. The virus isolates were classified as Transcontinental subgroup of the HTLV-1 Cosmopolitan subtype. The association of phylogenetic analysis and epidemiological data suggests the intrafamilial transmission of the HTLV-1 among three generations of one family in Boa Sorte Mato Grosso do Sul community. These findings show a low endemicity for HTLV-1 infection and the circulation of the Transcontinental subgroup of the HTLV-1 Cosmopolitan subtype in quilombo remnant communities in Central Brazil. / O vírus linfotrópico de células T humanas 1 (HTLV-1) infecta humanos há milhares de anos, entretanto o conhecimento acerca da infecção emergiu recentemente. O vírus pode ser transmitido de mães para filhos, pelo contato sexual e por produtos sanguíneos contaminados. A África Sub-Saariana e a América do Sul apresentam áreas endêmicas para a infecção. Os africanos chegaram ao Brasil como escravos. Alguns deles fugiram para locais de difícil acesso e fundaram os quilombos. Até os dias atuais, sua história e tradições são mantidas por remanescentes de quilombos. O status sorológico da infecção pelo HTLV nessas comunidades permanece desconhecido. O presente estudo teve como objetivo investigar o perfil epidemiológico e molecular da infecção pelo HTLV em remanescentes de quilombos no Brasil Central. Este estudo incluiu 1.837 indivíduos de 13 comunidades remanescentes de quilombos dos Estados de Goiás e Mato Grosso do Sul. Os indivíduos foram entrevistados sobre dados sócio-demográficos e características associadas à transmissão do HTLV. Amostras sanguíneas foram coletadas de todos os indivíduos e triadas por ELISA para a presença de anticorpos para HTLV-1/2. As amostras positivas foram testadas para confirmação por western blot e/ou PCR, sendo caracterizadas por sequenciamento e análise filogenética. Dos 1.837 indivíduos, nove foram reativos pelo ELISA. Desses, todos foram confirmados como sendo positivos para HTLV- 1, resultando em uma prevalência de 0,5% (IC 95%: 0,2 1,0). A idade dos indivíduos infectados variou de 11 a 82 anos. Sete eram mulheres e dois homens. Quanto às características de risco, história de aleitamento materno (9/9), transfusão de sangue (2/9), múltiplos parceiros sexuais (2/9) e antecedente de doenças sexualmente transmissíveis (1/9) foram relatadas pelos indivíduos infectados. Os isolados virais foram classificados como do subtipo Cosmopolita (HTLV-1a), subgrupo Transcontinental (A). A análise filogenética associada aos dados epidemiológicos sugere a transmissão intrafamiliar do HTLV-1 por três gerações de uma família na comunidade de Boa Sorte Mato Grosso do Sul. Os achados deste estudo mostram uma baixa endemicidade para o HTLV-1 e a circulação do subtipo Cosmopolita, subgrupo Transcontinental nas comunidades remanescentes de quilombos no Brasil Central.

Na cidade de São Paulo, cerca de 50 mil pessoas são portadoras do HTLV-1. O HTLV-1 é o agente causador da paraparesia espástica tropical/mielopatia associada com o HTLV-1 (TSP/HAM) e os mecanismos desta patogênese são obscuros. A TSP/HAM é considerada uma doença imuno-mediada e algumas citocinas, podem estar associadas, com a desmielinização da membrana de mielina da coluna espinhal, provavelmente, estimuladas pela presença de antígenos virais. A PCR em tempo real é uma técnica utilizada para a detecção de citocinas e apresenta maior sensibilidade na expressão de mRNA e carga proviral do HTLV-1. Objetivos: Detecção de citocinas pelas técnicas sorológicas e de biologia molecular (PCR em tempo real) que auxiliaram no aconselhamento e avaliação de pacientes infectados pelo HTLV-1, além de uma avaliação da carga proviral dos pacientes com infecção pelo HTLV-1. Casuística: Grupo I: indivíduos soronegativos para HCV, HIV-1 e HTLV-1 (Controle); Grupo II: pacientes HTLV-1 assintomáticos; Grupo III: pacientes com TSP/HAM. Observamos que o INF-<font face=\"symbol\">g apresenta-se alterado na infecção HTLV-1, sendo um dos fatores mais importantes da evolução para TSP/HAM, ambos os ensaios apresentaram o mesmo resultado. A carga proviral pode ser um marcador de progressão para a TSP/HAM. A interação complexa existente entre o HTLV-1 e as células responsáveis pela liberação de citocinas e <font face=\"symbol\">b-quimiocinas pró-inflamatórias, assim como elementos de ativação celular, resultam na ativação imunológica. Isto, lentamente, pode levar ao processo inflamatório crônico que atua diretamente no micro ambiente neuronal e/ou membrana de mielina da coluna espinhal, em alguns portadores de HTLV-1. Com a persistente ativação do sistema imunológico, este processo provocará destruição das células gliais e dos neurônios, dando início ao processo de desmielinização. / In São Paulo, about 50 thousand people are HTLV-1 carriers. HTLV-1 is the agent that causes tropical spastic paraparesis and HTLV-1 associated myelopathy (TSP/HAM) despite the mechanisms of this disease are still unclear. TSP/HAM is considered an immune mediated illness and some cytokines might be involved with axonal damage and demyelination, most pronounced in the midthoracic spinal cord, probably stimulated by the presence of viral antigens. Real Time PCR is a used technique to cytokine detection and shows higher sensitivity on mRNA expression and HTLV-1 proviral load. Objectives: cytokine detection through molecular biology (Real time PCR) and serologic techniques that helped on advising and assessment of HTLV-1 infected patients and also on their proviral load. Casuistic: Group I: seronegative individuals for HCV, HIV-1 and HTLV-1 (control); Group II: asymptomatic HTLV-1 infected patients; Group III: TSP/HAM patients. We\'ve been observed that <font face=\"symbol\">g-interferon presents changing on the HTLV-1 infection, being one of the most important factors to TSP/HAM progression, both essays showed the same results. The proviral load may be an important marker for TSP/HAM development.

INTRODUÇÃO: O virus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) é endêmico em várias partes do mundo e transmitido primariamente através de relações sexuais ou da mãe para o filho. MÉTODOS: Estes modos de transmissão foram investigados na coorte de pacientes com HTLV-1 acompanhados no Instituto de Infectologia Emílio Ribas de São Paulo comparando-se casais soroconcordantes e sorodiscordantes, para estudo da transmissão sexual, e binômios mãe-filho soroconcordantes e com filho soronegativo para estudo da transmissão vertical. Os dados foram consolidados e depois analisados utilizando o sistema RedCap (Research Electronic Data Capture) e o programa computacional estatístico Stata/IC 13.1. Resultados com valor de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Variáveis com p < 0,2 na análise bivariada foram incluídos na análise multivariada. RESULTADOS: Entre janeiro de 2013 e maio de 2015, de 178 pacientes com HTLV-1 que se declararam casados, 107 (46 homens e 61 mulheres) tinham parceiro testado, resultando em 81 casais (26 homens e 26 mulheres já formavam pares entre si). Foram excluídos aqueles com HIV ou HTLV-2. A taxa de soroconcordância entre casais foi 46,9%. A carga proviral (PVL) de HTLV-1 foi comparada entre 19 casais soroconcordantes e 37 sorodiscordantes, e os casais soroconcordantes apresentaram cargas provirais mais elevadas (p = 0,03). Não houve diferença entre os grupos de acordo com idade, tempo de relacionamento, ter mãe ou irmão com HTLV-1, raça, local de nascimento, escolaridade, história de hemotransfusão, HAM/TSP, ATL ou soropositividade para hepatite C. Na análise multivariada, no entanto, o tempo de relacionamento (> 20 anos) manteve-se independentemente associado com a ocorrência de soroconcordância entre casais (p = 0,031). Por sua vez, no período de junho de 2006 a agosto de 2016 havia 192 mães com infecção pelo HTLV-1, resultando em 499 filhos expostos. Destes, 288 (57,7%) foram testados para HTLV-1, constituindo-se na amostra final para o estudo, juntamente com respectivas 134 mães. Entre os filhos testados, 41 foram positivos para HTLV-1, indicando taxa de transmissão vertical de 14,2%. Sete dos 134 núcleos familiares concentraram 20 (48,8%) do total de 41 filhos soropositivos e cinco apresentavam prole com três ou mais filhos soropositivos para HTLV-1. Estiveram associadas à soropositividade do filho: duração da amamentação >= 12 meses, PVL materna >= 100 cópias/104 PBMC, idade da mãe no parto > 26 anos, raça/etnia asiática, estado civil divorciada, filho com avó soropositiva para HTLV-1, ter irmão com HTLV-1. Na análise multivariada, amamentação >= 12 meses, PVL materna elevada e ter irmão com HTLV-1 mantiveram-se independentemente associados ao desfecho. CONCLUSÕES: Os resultados indicam que o HLTV-1 vem sendo transmitido ativamente na coorte, tanto por via sexual como materno infantil, com agregação familiar de casos e que o risco de transmissão entre casais persiste após décadas (mais de 20 anos) de sorodiscordância. Foi observada associação entre PVL e transmissão do vírus, tanto por via sexual como materno-infantil, mesmo depois de anos após o desfecho. PVL materna elevada e amamentação prolongada estiveram independentemente associados à transmissão vertical, sendo necessários outros estudos avaliando a influência de fatores genéticos. / INTRODUCTION: Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) is transmitted primarily either through sexual intercourse or from mother to child. METHODS: The current study investigated sexual and vertical transmission among individuals diagnosed as HTLV-1-positive who have been followed up at the Institute of Infectious Diseases \"Emilio Ribas\". In order to study the sexual transmission and mother-to-child transmission, the selected individuals with their respective pairs (couples or mother and son, repectively) were classified into seroconcordant or serodiscordant groups according to serological findings. Data were collected and managed using Research Electronic Data Capture (REDCap) and Stata/IC 13.1 for Windows. p values < 0.05 were considered statistically significant. Variables with p < 0.2 in bivariate analysis were included in multivariate analysis. RESULTS: Between January 2013 and May 2015, 178 HTLV-1-positive patients had spouses, 107 of which (46 men and 61 women) had tested partners, thus forming the initial sample (81 couples). Individuals co-infected with HTLV-2 or human immunodeficiency virus were not included in the analysis. The rate of seroconcordance was 59.8%. The HTLV-1 proviral load was compared between 19 and 37 seroconcordant and serodiscondant couples, respectively, and the concordant couples showed higher proviral loads (p = 0.03). There were no differences between the groups according to age, relationship length, having a mother or sibling with HTLV-1, race, ethnicity, nationality, education, history of blood transfusion, HAM/TSP, ALT, or hepatitis C virus status. In multivariate analysis, relationship time (over 20 years) was shown associated with ocurrence of seroconcordance status (p = 0.031). In turn, between June 2006 and August 2016 there were 192 mothers with HTLV-1 infection, resulting in 499 exposed children. Of these, 288 (57.7%) were tested for HTLV-1, forming the final sample for the study with 134 respective mothers. Among the tested soons, 41 were positive for HTLV-1, indicating vertical transmission rate of 14.2%. Of 41 positive sons for HTLV-1, 40 (48.8%) were clustered in seven of 134 households, and five households had their offspring with three or more sons seropositive for HTLV-1. The following variables were associated with positive son for HTLV-1: breastfeeding duration >= 12 months, maternal PVL >= 100 copies/104 PBMC, mother\'s age at delivery > 26 years, asian race/ethnicity, divorced marital status, child with grandmother seropositive for HTLV-1, have brother with HTLV-1. In multivariate analysis, breastfeeding >= 12 months, higher maternal proviral load and have brother with HTLV-1 remained independently associated with the outcome. CONCLUSIONS: The results indicate that the HLTV-1 is actively transmitted in the cohort both sexually and vertically, with ocurrence of familial clustering. The sexual transmission risk persists among couples even after decades (over 20 years) of serodiscordance. PVL remained associated with the outcome even several years after the occurrence of the transmission both sexually and vertically. High maternal provirus load and breastfeeding beyond 12 months were independently associated with positive son for HTLV-1, but it is necessary further studies to evaluating the influence of genetic factors on the mother-to-child transmission.

Le virus T lymphotrope humain de type 1 (HTLV-1, Human T cell Leukemia Virus type 1) est l'agent responsable de la leucémie à cellules T de l'adulte, une prolifération maligne de lymphocytes T CD4+. L'activation constitutive de la voie NF-kB dans les lymphocytes T exprimant la protéine virale Tax s'est révélée primordiale pour la prolifération et la transformation induites par HTLV-1. Selon le modèle classique, Tax agit à deux niveaux de la voie NF-kB. Dans le cytoplasme, Tax active constitutivement le complexe IKK (IKB Kinase) en se liant à sa sous-unité régulatrice NEMO/IKKy. Dans le noyau, Tax interagit directement avec les dimères NF-kB dans des corps nucléaires Tax. L'ubiquitinylation et la SUMOylation de Tax ont été initialement décrites comme nécessaires pour l'activation de la phase cytoplasmique et de la phase nucléaire respectivement. Cependant, les mécanismes régulateurs des modifications post-traductionnelles de Tax restent difficiles à identifier car il n'a pas été possible d'étudier séparément l'ubiquitinylation et la SUMOylation de Tax.Au laboratoire, nous avons généré et caractérisé fonctionnellement un nouveau mutant de Tax qui nous a permis de découpler les rôles de l'ubiquitinylation et de la SUMOylation de Tax. Tax- P79AQ81A est ubiquitinylé de façon quantitativement similaire à Tax mais présente une forte réduction (80%) de SUMOylation. De plus, Tax-P79AQ81A ne forme pas de corps nucléaires. Néanmoins, ces deux défauts ne semblent pas préjudiciables pour la capacité du mutant à activer la voie NF-KB non seulement dans des lignées cellulaires mais également dans des lymphocytes T CD4+ primaires. En parallèle, nous avons montré que les corps nucléaires Tax sont rarement présents dans des lymphocytes T chroniquement infectés par HTLV-1, renforçant l'idée que ces structures ne sont pas requises pour l'activation de la voie NF-KB et probablement pas pour les autres fonctions de Tax. Enfin, nous avons démontré que les capacités d'activation de la voie NF-KB de différents mutants de Tax sont fortement corrélées à leur niveau d'ubiquitinylation mais pas de SUMOylation, confirmant que l'ubiquitinylation de Tax est la modification essentielle pour l'activation de la voie NF-KB.Le virus HTLV-2 ne possède pas les propriétés transformantes du virus HTLV-1 et les propriétés de la protéine Tax2 comparées à celles de Tax1 pourraient être à l'origine des différences de pathogénicité entre les deux virus. Notre étude a révélé que, de façon surprenante, l'activation de la voie NF-KB par la protéine Tax2 est non seulement indépendante de la SUMOylation et de la formation des corps nucléaires comme pour Tax1, mais également indépendante d'une quelconque ubiquitinylation, suggérant des mécanismes différents d'activation du complexe IKK parTax1 et Tax2.Nos études, aussi bien de la protéine Tax1 que de la protéine Tax2, nous ont donc permis de revisiter le modèle actuel d'activation de la voie NF-kB en démontrant l'impact mineur de la SUMOylation et en révélant une différence majeure en ce qui concerne le rôle de l'ubiquitinylation, distinguant les virus HTLV-1 et HTLV-2 / Human T cell Leukemia Virus type 1 (HTLV-1) is the etiological agent of adult T-cell leukemia (ATL), a CD4+ T-cell malignancy, Constitutive activation of the NF-KB pathway plays a crucial role in cell proliferation and transformation induced by HTLV-1, According to the classical model, Tax acts at two levels on the NF-KB pathway, In the cytoplasm, Tax activates the IKB kinase (IKK) complex by directly interacting with the regulatory subunit NEMO/IKKy, In the nucleus, Tax directly interacts with the NF-KB dimers in particular structures named Tax nuclear bodies, Both ubiquitinylation and SUMOylation were initially considered as critical for activation of the cytoplasmic or nuclear phase, respectively, However, the individual role of each modification was difficult to assess because of the lack of molecular tools allowing to study Tax ubiquitination and SUMOylation separately,In the laboratory, we functionally characterized a new Tax mutant, Tax-P 7 9AQ81A, which gave us the opportunity to uncouple Tax ubiquitination and SUMOylation, Indeed, Tax-P79AQ81A is ubiquitinated similarly to wild-type Tax but is severely reduced in SUMOylation, In addition, Tax- P 7 9AQ81A does not form nuclear bodies, However, despite these two severe defects, we found that the mutant is fully able to activate the NF-KB pathway not only in cells lines but also in CD4+ primary T cells, Moreover we showed that Tax nuclear bodies are hardly present in HTLV-1 chronically infected T cell lines, confirming the idea that these structures are not required for Tax-induced NF-KB activation and probably for other Tax functions, Finally, we demonstrated that ability of different Tax mutant to activate the NF-KB pathway is strongly correlated with their ubiquitination but not SUMOylation level, confirming that ubiquitination is the key Tax modification required for activation of the NF-KB pathway,In contrast to HTLV-1, the related HTLV-2 virus is not a transforming virus and therefore, the properties of the Tax2 protein compared to that of Tax1 could be responsible for the different pathogenicity of HTLV-2 and HTLV-1, We studied the post-translational modifications of Tax2 and surprisingly, found that Tax2-induced NF-KB activation is not only independent of SUMOylation and nuclear body formation but also of ubiquitination, suggesting different mechanisms of activation of the IKK complex by Tax1 and Tax2,In conclusion, our results led us to propose a new model for both Tax1- and Tax2-induced NF- KB activation in which SUMOylation has a minor role and in which the requirement of Tax ubiquitination distinguishes between HTLV-1 and HTLV-2