Orientador: Márcia Regina Brochetto Braga / Coorientador: Mário Sergio Palma / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Ricardo de Lima Zollner / Banca: Rogilene Aparecida Prado / Resumo: A fosfolipase A1 é um dos principais alérgenos identificados no veneno do Polybia paulista (Hymenoptera: Vespidae), uma vespa social de elevada importância clínica no sudeste do Brasil. A produção recombinante deste alérgeno contribuirá com o desenvolvimento do diagnóstico molecular de alergia. Neste trabalho é descrita a produção recombinante da fosfolipase A1 de P. paulista (rPoly p 1) no sistema celular Escherichia coli. Elevados níveis da rPoly p 1 na forma insolúvel foram obtidos após expressão na bactéria. A otimização das condições de solubilização permitiu incrementar os níveis de recuperação do alérgeno recombinante. A rPoly p 1 foi purificada (99%) até homogeneidade mediante cromatografia de afinidade em coluna de Ni2+, mostrando valores de rendimento finais de 1.5 g/L de meio de cultura. A forma nativa do alérgeno (nPoly p 1) foi purificada mediante cromatografia de troca catiônica. A rPoly p 1 foi reconhecida pela IgE específica de soros de pacientes sensibilizados ao veneno de P. paulista. O uso da rPoly p 1 permite diferenciar a ocorrência de real dupla sensibilização ao veneno de vespa e formiga ou vespa e abelha da incidência de reatividade cruzada. Soros de pacientes com IgE específica ao veneno de abelha e formiga não reagiram com a rPoly p 1, enquanto que soros de camundongos sensibilizados com rPoly p 1 apresentaram reatividade cruzada exclusivamente com fosfolipases A1 (PLA1) de vespas Neotropicais ou de climas temperados. O alinhamento múltiplo do modelo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Phospholipase A1 (PLA1) is one of the major allergens identified in the venom Polybia paulista (Hymenoptera: Vespidae), a clinically relevant social wasp from Brazil Southeast. The recombinant production of this allergen could result in the development of molecular diagnosis of allergy thus improving the outcomes of venom immunotherapy (IT). Here, we describe the heterologous production of the PLA1 from P. paulista venom in Escherichia coli. High levels of the insoluble recombinant allergen (rPoly p 1) were obtained after expression in the prokaryotic system. The downstream optimization of the solubilization process resulted in high levels of protein recovery. The rPoly p 1 was purified to homogeneity (99%) using an immobilized Ni2+ metal affinity chromatography while a single-step cation-exchange chromatography allowed the purification of native Poly p 1 (nPoly p 1) from the venom glands. Immunoblotting analyses showed the IgE-mediated recognition of the rPoly p 1 by sera from patients sensitized to P. paulista venom. The rPoly p 1 could allow the differentiation of true double sensitization to wasp/bee and wasp/ant venoms from cross-reactivity. The sera from patients with monosensitization to honey bee or fire ant venoms do not cross-reacted with the recombinant allergen. Meanwhile, the sera from rPoly p 1-sensitized mice cross-reacted with venoms of other clinically relevant wasps from Neotropical and temperate regions. The alignment of the 3-D model from rPoly p 1 with the PLA1s from some of these wasps suggested the presence of homologues epitopes as the molecular basis for the cross-reactivity. The presence of cross-reactive carbohydrates determinants (CCDs) in the venom of several Brazilian wasps, which is a major issue for understanding the incidence of cross-reactivity during diagnosis, was also analyzed. Overall, the results described .. (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A importância de se estudar os efeitos de substâncias potencialmente deletérias para o nosso organismo, em locais fechados, tem recebido maior atenção nos últimos anos. O ser humano contemporâneo passa grande parte do dia em ambientes fechados e a qualidade do ar repercute no seu bem-estar e também poderá influenciar sua saúde. A Síndrome do Prédio Doente (SPD) é definida como uma condição médica em que indivíduos apresentam uma série de sintomas físicos relacionados ao ambiente de trabalho. A SPD resulta em perda substancial do desempenho no trabalho e relações pessoais, além de considerável perda de produtividade. Como o nariz representa a primeira área exposta aos contaminantes ambientais e a histologia da mucosa nasal é similar à da mucosa das vias aéreas inferiores, processos inflamatórios nas cavidades nasais podem refletir ou afetar àqueles nas vias aéreas inferiores. Estudou-se a exposição nasal aguda ao TXIB (2,2,4- trimetil-1,3-pentanediol diisobutirato), comumente utilizado como um plastificante, em 19 voluntários normais e avaliou-se as alterações na função nasal (resitência nasal, transporte mucociliar e celularidade nasal), tendo como controles a exposição ao placebo e etanol. A exposição nasal ao TXIB e etanol resultou em aumento significativo da resistência nasal total (p< 0,05). Entretanto, também verificou-se aumento na resistência no grupo placebo (p<0,05). O tempo de transporte mucociliar aumentou nos grupos placebo e TXIB, não significativamente (p>0,05). No grupo etanol houve diminuição (p>0,05). O número de células totais e neutrófilos aumentou nos três grupos estudados, porém sem diferença estatisticamente significativa (p>0,05). O número de células epiteliais aumentou nos indivíduos expostos ao TXIB e etanol, e diminuiu no grupo placebo, não significativamente. Porém, no grupo TXIB demonstrou-se aumento do número de células epiteliais com forte tendência estatística (p=0,065). A análise dos resultados deste estudo nos permite concluir que a celularidade nasal apresenta-se como uma medida da função nasal com maior sensibilidade para demonstrar alterações em indivíduos expostos agudamente ao TXIB, sendo que o número de células epiteliais altera-se imediatamente após a exposição.

Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Coorientador: José Belasque Júnior / Banca: Francisco André Ossamu Tanaka / Banca: Roberto Hirochi Herai / Banca: Helen Alves Penha / Banca: Henrique Ferreira / Resumo: Os citros são um grupo de espécies vegetais, com alto potencial produtivo, porém, acometido por várias doenças. Do gênero de bactérias Xanthomonas, três espécies são patogênicas a citros: Xanthomonas citri subsp. citri, agente causal do cancro cítrico, uma das doenças de maior preocupação da citricultura; X. fuscans subsp. aurantifolii tipos B e C, que causam a cancrose; e X. alfalfae subsp. citrumelonis, responsável por causar a mancha bacteriana dos citros. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi a análise e descrição, em nível anatômico e ultraestrutural, dos processos de infecção de bactérias do gênero Xanthomonas, causadoras de doenças em citros, a correlação do fenótipo da interação XfaC-citros com o transcriptoma e a análise dos fatores de virulência das estirpes estudadas. O processo de infecção das estirpes Xac306, Xac636, Xac828, Xacm1510, XfaC1632 e XfaC1630 em lima ácida 'Galego' e/ou laranja doce 'Hamlin', foi avaliado em diferentes períodos de infecção, pelas técnicas de microscopia de luz e eletrônicas de varredura e transmissão. As seguintes características relacionadas a virulência das estirpes foram avaliadas: formação in vitro de biofilme, produção de goma, motilidade "swimming" e auto agregação celular. Os resultados mostraram que Xac306 é a estirpe mais agressiva dentre as demais, visto pelos sintomas e pela intensidade das alterações anatômicas no tecido de 'Hamlin' e 'Galego'. O processo de infecção em lima ácida 'Galego' foi semelhante em todas as ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citrus are a diverse group of plant species, with high yield potential, but affected by several diseases. The bacteria genus Xanthomonas has three species pathogenic to citrus: Xanthomonas citri subsp. citri, causal agent of citrus canker, one of the most important diseases of citrus crop; X. fuscans subsp. aurantifolii types B and C, causing citrus cancrosis; and X. alfalfae subsp. citrumelonis, which causes citrus bacterial spot. Therefore, the goal of this work was to analyze and describe, at the anatomical and ultrastructural level the infectious processes of Xanthomonas causing diseases in citrus, the correlation of the XfaC-citrus interaction phenotype with the transcriptome and the comparative analysis of virulence related factors, in order to elucidate morphophysiological traits of host-pathogen interaction. The infection process of Xac306, Xac636, Xac828, Xacm1510, XfaC1632 and XfaC1630 strains in 'Galego' Mexican lime and 'Hamlin' sweet orange were evaluated at different points of infection by light microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The following virulence related characteristics of the strains were evaluated: in vitro biofilm formation, gum production, swimming motility and cellular auto aggregation. The results showed that Xac306 is the most aggressive strain among the others, due to the intensity of the symptoms and anatomical alterations in 'Hamlin' and 'Galego' tissue. The infection process in the susceptible host ('Galego' Mexican l... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A importância de se estudar os efeitos de substâncias potencialmente deletérias para o nosso organismo, em locais fechados, tem recebido maior atenção nos últimos anos. O ser humano contemporâneo passa grande parte do dia em ambientes fechados e a qualidade do ar repercute no seu bem-estar e também poderá influenciar sua saúde. A Síndrome do Prédio Doente (SPD) é definida como uma condição médica em que indivíduos apresentam uma série de sintomas físicos relacionados ao ambiente de trabalho. A SPD resulta em perda substancial do desempenho no trabalho e relações pessoais, além de considerável perda de produtividade. Como o nariz representa a primeira área exposta aos contaminantes ambientais e a histologia da mucosa nasal é similar à da mucosa das vias aéreas inferiores, processos inflamatórios nas cavidades nasais podem refletir ou afetar àqueles nas vias aéreas inferiores. Estudou-se a exposição nasal aguda ao TXIB (2,2,4- trimetil-1,3-pentanediol diisobutirato), comumente utilizado como um plastificante, em 19 voluntários normais e avaliou-se as alterações na função nasal (resitência nasal, transporte mucociliar e celularidade nasal), tendo como controles a exposição ao placebo e etanol. A exposição nasal ao TXIB e etanol resultou em aumento significativo da resistência nasal total (p< 0,05). Entretanto, também verificou-se aumento na resistência no grupo placebo (p<0,05). O tempo de transporte mucociliar aumentou nos grupos placebo e TXIB, não significativamente (p>0,05). No grupo etanol houve diminuição (p>0,05). O número de células totais e neutrófilos aumentou nos três grupos estudados, porém sem diferença estatisticamente significativa (p>0,05). O número de células epiteliais aumentou nos indivíduos expostos ao TXIB e etanol, e diminuiu no grupo placebo, não significativamente. Porém, no grupo TXIB demonstrou-se aumento do número de células epiteliais com forte tendência estatística (p=0,065). A análise dos resultados deste estudo nos permite concluir que a celularidade nasal apresenta-se como uma medida da função nasal com maior sensibilidade para demonstrar alterações em indivíduos expostos agudamente ao TXIB, sendo que o número de células epiteliais altera-se imediatamente após a exposição.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-01T21:48:23Z No. of bitstreams: 1 Fausto Klabund Ferraris.pdf: 38480448 bytes, checksum: a28eecf79e0cd57527404faee9aba556 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-01T21:48:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fausto Klabund Ferraris.pdf: 38480448 bytes, checksum: a28eecf79e0cd57527404faee9aba556 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Carapa guianensis Aublet é u um membro da família das Meliaceae amplamen nte utilizada na medicina popular no Brasil e em outro os países que abrangem a floresta Amazônica. Nosso grupo descreveu previamente a atividade ant ti-inflamatória e antialérgica de um conjunto dde tetranortriterpenoides (TNTPs) contendo: 6a-acetooxigedunina, 7-deacetoxi-7-oxogedunina, andir robina, angolensato de metila e gedunina, isolados ddas sementes de C. guianensis. No presente e estudo, foram realizados estudos in vitro e in vivo na te entativa de elucidar os mecanismos pelo quais oss TNTPs apresentam os efeitos anti-inflamatório e anti ialérgico, identificando assim as substâncias bioa ativas presentes no óleo. Nós mostramos que a incuba ação in vitro de esplenócitos com o conjunto de TNTPs, bem como com cada um dos TNTPs isolados s foi capaz de inibir a ativação, proliferação e a p produção in vitro de IL-2, CCL11/Eotaxina e CCL5/RAN NTES em linfócitos T através do bloqueio da tran nslocação do fator NF.B. Além disso, a incubação in v vitro de eosinófilos com o conjunto de TNTPs, b bem como com cada um dos cinco TNTPs isolados, inibiu a adesão e quimiotaxia destas células. Consistente com estes dados, nós demonstramos qque a gedunina apresenta uma importante at ividade antialérgica em modelos in vivo de inflamaçãão alérgica (pleurisia alérgica e inflamação aguuda pulmonar alérgica). Descobrimos que a pleuris sia alérgica induzida por ovalbumina (OVA) eem camundongos pré- sensibilizados foi significativa amente reduzida com o pré-tratamento com geddunina; esta inibição foi principalmente devido ao blo oqueio do influxo de eosinófilos e de linfócitos T T. O pré-tratamento com gedunina diminuiu os níveis d de CCL2, CCL3, CCL5, CCL11, IL-5 e LTB4 na ccavidade pleural. O pré- tratamento in vivo com gedun nina reduziu o número de linfócitos T ativados n na pleura e no linfonodo torácico após 24 h do desafioo com OVA. O tratamento in vitro de linfócitos T T com gedunina inibiu a ativação, proliferação, produç ção de IL-2 e translocação de NF.B e de NFAT in nduzido por a-CD3 mAb. Notavelmente, o pós-tratme ento com gedunina reverteu a inflamação ag guda pulmonar alérgica induzida por OVA, diminuind do as contagens de linfócitos T e eosinófilos; e e níveis de mediadores eosinofilotáticos no lavado brroncoalveolar. Nosso grupo previamente demon nstrou que a endotelina (ET)-1 desempenha importan nte papel pró-inflamatório na resposta inflamatóri ia articular aguda. Desta forma, nós avaliamos os efeiittos anti-inflamatório e –nociceptivos da geduninaa na artrite induzida por zymosan e seu efeito biológic co na expressão de ET-1. A injeção intra-articula ar com zymosan induz a expressão de RNAm para ppreproET-1, levando a produção de TNF-a, LTBB4 e IL-6 resultando no influxo de neutrófilos, forma ação de edema e hiperalgesia. Pré-e pós-tra atamento com gedunina diminuiram o acúmulo de ne eutrófilos, inchaço na articulação do joelho, exp pressão de RNAm para preproET-1 e produção de mediadores inflamatórios. Além disso, o pré-ttratamento in vitro com gedunina inibiu a ativação e quimiotaxia de neutrófilos induzida por ET-1. Em m conclusão, o presente estudo mostrou que os TNTP Ps apresentam notável atividade anti-inflamatória e antialérgica inibindo a ativação e migração de leucóccitos; e bloqueando diferentes mediadores pró-in nflamatórios. / Carapa guianensis Aublet is aa member of the Meliaceae family widely used i n folk medicine in Brazil and other countries encompa assing the Amazon rainforest. Our group has p previously described the anti-inflammatory and anti-alllergic activities of a pooled fraction of tetran nortriterpenoids (TNTPs) containing: 6a-acetoxygedun nin, 7-deacetoxy-7-oxogedunin, andirobin, me ethyl angolensate and gedunin, isolated from the se eeds of C. guianensis. In the present study, we p performed in vitro and in vivo studies in order to elucidaate the mechanisms by which TNTPs present the eir anti-inflammatory and anti-allergic effects and to ide entify the bioactive compound(s) present in such fraction. Here, we show that in vitro incubation of espllenocytes with the pooled TNTP fraction, as well as with each one of the five isolated TNTPs were able e to inhibit T lymphocyte activation, proliferation a and in vitro production of IL-2, CCL11/Eotaxin and CCLL5/RANTES by impaired NF.B nuclear transloc ation. Moreover, in vitro incubation of eosinophils with h the pooled TNTP fraction, as well as with each h one of the five isolated TNTPs, inhibited the adhesio on and chemotaxis of eosinophils. In accordan nce with these data, we demonstrate that gedunin pr resents an important anti-allergic activity in in vivo models of allergic inflammation (allergic pleurisyy and acute lung allergic inflammation). We fou und that allergic pleurisy induced by ovalbumin (OVA) in presensitized mice was significantly diminish hed by the pre-treatment with gedunin; this inhibition w was primarily due to the impairment of eosinophil aand T lymphocyte influx. Pre-treatment with gedunin diiminished the levels of CCL2, CCL3, CCL5, CCL L11, IL-5 and LTB4 at the pleural cavity. In vivo pre-trea atment with gedunin reduced the numbers of act tivated T lymphocytes in the pleura and in the thorac cic lymph nodes 24 h after OVA -challenge. In vitro treatment of T lymphocytes with gedunin inh hibited a-CD3 mAb-induced activation, proliferatiion, IL-2 production and nuclear translocation of NF.BB and NFAT. Notably, post-treatment of mice with h gedunin reverted OVA- induced lung allergic inflamm mation by decreasing the T lymphocyte and eos sinophil counts; and the levels of eosinophilotactic mmediators in bronchoalveolar lavage fluid. Our group have previously demonstrated that endothellin (ET)-1 plays a pivotal pro-inflammatory role in acute articular inflammatory response. Thus,, we evaluated the anti-inflammatory and –nocice eptive effects of gedunin in zymosan-induced arthritis aand its effects on ET-1 expression and biologica al function. Intra-articular zymosan stimulation induced d preproET-1 mRNA expression, production of TNF-a, LTB4 and IL-6 resulting in neutrophil influx, , oedema formation and hyperalgesia. Gedunin n pre-or post-treatment decreased zymosan-induced d neutrophil accumulation, knee joint swellin ng, preproET-1 mRNA expression and production of inflammatory mediators. Moreover, in vitro gedunin pre-treatment inhibited neutrophil activation and chemotaxis ET-1-induced. In conclusion, thhe current results reveal that TNTPs presents remark kable anti-inflammatory and anti-allergic activity y by inhibiting leukocyte activation and migratio on; and blocking different pro-infla ammatory mediators.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000386562-Texto+Completo-0.pdf: 417347 bytes, checksum: aa471604ab35b9f25791df43d8599fca (MD5) Previous issue date: 2006 / Objective: Verify the association between breastfeeding and the development of asthma and allergies to the 4 years of age Method: Study carried through in children participants of birth cohort in São Leopoldo – RS, beginning on 2002. A group of children (intervention) received, during the first year of life, diet orientations based on “Ten Steps of Healthy Alimentation to Children Younger than 2 Years Old”, of Brazil Healthy Ministry, with emphasis on exclusive breastfeeding, and another group (control) was accompanied during the first year of life. Children that completed the first phases of study, at present with 4 years old, were revisited by trained interviewed for the attainment of data connected to breathing problems (based on ISSAC – International Study of Asthma and Allergy in Childhood), answered by their parents or relatives. Children also realized skin-prick test to common ambient allergens. Results: From total of 397 visited children on their first year of life on the original project, 347 were revisited on their forth year (87,4%) of São Leopoldo cohort. Group that suffered the intervention consisted of 163 children on the first year, and 146 (89,5%) answered to the questionnaire about breathing problems at 4 years old. Control group of the first year were formed by 234 children and on 4 years old, 201 children (85,9%) answered to the questionnaire. The middle age of children was of 3,97 (±0,27). From total of 347 children revisited, 328 realized skin-prick test (94,5%) and 94 (28,7%) presented at least one positive test. Did not have evidence of statistics difference between the groups in relation to positive skin-prick test, maternal history of asthma, weezing on last 12 months, active asthma, bronchiolitis some time of the life, hospitalizations by bronchiolitis and hospitalizations by pneumonia. The average in months of exclusive brestfeeding on intervention group was 3,3 months (±2,3), while on control group the average was 2,47 months (±2,1, p`0,01). Exclusive breastfeeding didn’t show significative association with asthma development, weezing or allergy. Breastfeeding, with water and tea addition was more prolonged and had showed itself conversely associated to positive skin-prick test (p`0,05). Conclusions: The duration of the breastfeeding showed protective effect in the atopia development. / Objetivo: Verificar a associação entre aleitamento materno e o desenvolvimento de asma e alergias aos 4 anos de idade. Método: Estudo realizado em crianças participantes de uma coorte de nascimento na cidade de São Leopoldo-RS, iniciada em 2002. Um grupo de crianças (intervenção) recebeu, durante o primeiro ano de vida, orientações dietéticas baseada nos “Dez Passos da Alimentação Saudável para Crianças Menores de Dois Anos”, do Ministério da Saúde do Brasil, com ênfase na amamentação exclusiva, e outro grupo (controle) foi acompanhado durante o primeiro ano de vida. As crianças que completaram a primeira fase do estudo, atualmente com 4 anos de idade, foram revisitadas por entrevistadores treinados para a obtenção dos dados relacionados a problemas respiratórios (baseado no questionário ISSAC- International Study of Asthma and Allergy in Childhood), respondido por seus pais ou familiares. As crianças também realizaram testes cutâneos para alergenos ambientais comuns. Resultados: Do total de 397 crianças visitadas no primeiro ano de vida no projeto original, 347 foram revisitadas aos 4 anos (87,4%) da coorte de São Leopoldo. O grupo que sofreu a intervenção constava 163 crianças no primeiro ano, e 146 (89,5%) responderam ao questionário sobre problemas respiratórios aos 4 anos de idade. O grupo controle do primeiro ano era formado por 234 crianças e aos 4 anos, 201 crianças (85,9%) responderam ao questionário. A idade média das crianças foi de 3,97 (±0,27). Do total das 347 crianças revisitadas, 328 realizaram os testes cutâneos (94,5%), e 94 (28,7%) apresentaram ao menos um teste positivo. Não houve evidência de diferença estatística entre os grupos com relação à teste cutâneo positivo, história materna de asma, sibilância nos últimos 12 meses, asma ativa, bronquiolite alguma vez na vida, hospitalizações por bronquiolite e hospitalizações por pneumonia.A média em meses do aleitamento materno exclusivo do grupo intervenção foi de 3,3 meses (±2,3), enquanto que no grupo controle a média foi de 2,47 meses (±2,1, p£ 0,01). Aleitamento materno exclusivo não mostrou associação significativa com o desenvolvimento de asma, sibilância ou alergia. Aleitamento materno, com acréscimo de água e chá foi mais prolongado e se mostrou inversamente associado à teste cutâneo positivo (p£ 0,05). Conclusões: A duração do aleitamento materno mostrou efeito protetor no desenvolvimento de atopia.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434098-Texto+Completo-0.pdf: 2377536 bytes, checksum: d543049346103c6373ccd32e8c137ceb (MD5) Previous issue date: 2011 / Introduction: Animal models studies of asthma have been criticized because of some limitations. Protocols with features and remote results of human asthma are widely used, mainly because of the need to use adjuvant and intraperitoneal administration of allergens for sensitization. Aims: We have tested alternative protocols using animal models of acute and chronic asthma, with features closer to human disease, using OVA without adjuvant. Methods: Adult female BALB/c mice were used and divided into groups according to sensitization with OVA. The acute model used two doses of OVA subcutaneously (s. c. ) without adjuvant, on days 0 and 7, and after intranasal (i. n. ) challenge for consecutives three days, compared with a standard protocol using three doses of OVA for sensitization. The chronic model also used OVA s. c. for sensitization, adjuvant-free, on days 0 and 14, and after i. n. challenge, 3 times a week, for consecutives eight weeks. Total (TCC) and differential cell counts from bronchoalveolar lavage (BAL) and histopathology of the lungs were performed 24 hours after the last OVA challenge. Results: In the two models of protocols studied, acute and chronic, we have observed similar allergic pulmonary response between the groups. Cell counts and histological analysis of lung tissue showed no significant difference between groups. Conclusion: the use of sensitization with OVA s. c., with no adjuvant, resulted in an expected allergic pulmonary response, with predominant eosinophils. These protocols may be a future option to animal models of asthma closer to the human disease, both in the acute and chronic patterns. / Introdução: estudos em modelos animais de asma têm sido criticados devido a algumas limitações. Protocolos com características e resultados distantes da asma em humanos são muito utilizados, principalmente devido à necessidade do uso de adjuvante e administração intraperitoneal do alergeno para sensibilização. Objetivo: testar alternativas de protocolos com modelos animais de asma aguda e crônica que apresentem características mais próximas da doença em humanos, utilizando OVA livre de adjuvante.Métodos: foram utilizadas fêmeas adultas de camundongos BALB/c, divididas em grupos de acordo com as sensibilizações com OVA. O modelo agudo utilizou duas doses de OVA subcutânea (s. c. ), sem adjuvante, com intervalo de 7 dias, com posterior desafio intranasal (i. n. ) durante 3 dias, comparado ao protocolo padrão que utiliza 3 doses de OVA intraperitoneal (i. p. ), no período de sensibilização. O modelo crônico também utilizou OVA s. c. livre de adjuvante para sensibilização, com intervalo de 14 dias e posterior desafio i. n., 3 vezes por semana, durante 8 semanas. Contagem total (CTC) e diferencial de células no lavado broncoalveolar (LBA) e análise histológica dos pulmões foram realizadas 24 horas após o último desafio com OVA. Resultados: nos dois modelos estudados, agudo e crônico, observamos uma resposta eosinofilica pulmonar semelhante entre os grupos. Contagem de células e análise histológica do tecido pulmonar não apresentaram diferença significativa entre os grupos estudados. Conclusão: o uso de sensibilização s. c. com OVA, sem adjuvante, resulta em uma significativa resposta inflamatória pulmonar alérgica, com predomínio de eosinófilos, podendo ser uma opção futura para experimentos mais próximos ao modelo humano, tanto na fase aguda, como na fase crônica da doença.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412451-Texto+Completo-0.pdf: 927067 bytes, checksum: ec73648f4eb167d149ba89190dcd21c2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Background: Results from epidemiological studies are controversial regarding the effect of helminth exposition on the development of asthma. It is not currently clear whether different parasites have distinct effects on the immune response in asthma. Aims: To analyze the effect of different parasite extracts on pulmonary allergic response in a murine model. Methods: Extracts of three different helminths (Angiostrongylus costaricensis, Angiostrongylus cantonensis and Ascaris lumbricoides) were injected intraperitoneally (i. p. ) in female adult BALB/c mice. Ovalbumin (OVA) sensitization and pulmonary challenge was performed 7 days after helminth extract. Mice with no extract parasite exposition was used as the control group. Total and differential cell counts, IL-5, INF-U and IL-10 levels were measured in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid. Results: Airway cellular influx (cell counts, eosinophils and lymphocytes) induced by OVA was significantly suppressed by extracts of A. cantonensis and A. lumbricoides, when compared to the control group (p=0. 001, p=0. 001 and p<0. 001, respectively). Extracts of A. costaricensis and A. lumbricoides also led to a marked reduction of IL-5 in BAL (p<0. 001). INF- U levels in BAL samples were not different from the studied groups. Exposition to A. lumbricoides led to increased production of IL-10 in the lungs (p<0. 001). Conclusions: Distinct helminths present different immune responses in mice with OVA pulmonary sensitization. Our findings suggest that controversies on epidemiological data may be explained by different immune responses triggered by distinct parasites in human populations. / Introdução: Resultados de estudos epidemiológicos são controversos em relação ao desenvolvimento de asma após a exposição por helmintos. Ainda não está claro se diferentes parasitas têm efeitos distintos na resposta imune em asma. Objetivo: Analisar o efeito de diferentes extratos parasitários na resposta pulmonar alérgica em um modelo animal murino. Métodos: Extrato de três diferentes parasitas (Angiostrongylus costaricensis, Angiostrongylus cantonensis e Ascaris lumbricoides) foram injetados intraperitonealmente em camundongos fêmeas adultas BALB/c. A sensibilização com ovalbumina intraperitoneal e pulmonar foi realizada sete dias após a sensibilização com extrato parasitário. BALB/c sem extrato parasitário fizeram parte do grupo controle. No lavado broncoalveolar (LBA) foram analisados: número total de células, células diferenciais, IL-5, IL-10 e INF-U. Resultados: O número total de células, eosinófilos e linfócitos foram suprimidos pelos extratos dos parasitas Angiostrongylus cantonensis e Ascaris lumbricoides quando comparado ao grupo controle (p=0. 001, p=0. 001 e p<0. 001, respectivamente) no LBA. Extratos de A. lumbricoides e Angiostrongylus costaricensis também induziram uma marcada redução de IL-5 no lavado broncoalveolar (p<0. 001). Níveis de INF- U no lavado broncoalveolar não foram diferentes nos grupos estudados. Exposição à A. lumbricoides levou a um aumento dos níveis de IL-10 no pulmão de camundongos (p<0. 001). Conclusão: Diferentes helmintos apresentam respostas imunes distintas em camundongos sensibilizados com OVA intrapulmonar. Nossos achados sugerem que controvérsias publicadas em estudos epidemiológicos podem ser explicadas pelas diferenças nas respostas imunes induzidas pelos diferentes parasitas na população humana.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411566-Texto+Completo-0.pdf: 815285 bytes, checksum: c64bbebe317abb2c27c3554a42b45242 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Asthma is characterized by chronic inflammation of the airway wall and reversible airway limitation. Some patients may present structural changes in the airway wall, with an irreversible loss of lung function (LF) parameters. The aim of this study was to describe the phenotype and LF characteristics of children with persistent asthma. Methods: information was collected from 96 children (5-17 years) using ISAAC questionnaire, spirometry and skin prick test (SPT) for aeroallergens. Irreversible loss of LF was defined as FEV1/FVC that persists < 0. 85. Atopy was characterized according to standard ISAAC protocol. Atopic index was used to define non/mild-reactive (response to < 4 allergens) or multi-reactive patients (response to b 4 allergens). Results: Among the 96 children analyzed, 92. 7% were atopic and 8. 3% presented persistently reduced lung function, irreversible even after treatment with steroids. Among asthma severity groups, it was observed significant differences in FEV1 between moderate and severe asthma (p=0. 006). Regarding atopy, multi-reactive asthmatics presented lower LF than non/mild-reactive patients (FEV1/FVC, p=0. 032 and FEF25-75%, p=0. 026). Conclusions: Most of the children with persistent asthma presented normal or reversible LF. About 8% of the patients demonstrated persistently reduced LF parameters, suggesting that this small group has structural changes compatible with airway remodeling. The atopic index of b 4 allergens and severity of the disease are predictors to reduced LF parameters. / Introdução: A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas caracterizada pela limitação reversível ao fluxo aéreo. Alguns pacientes podem apresentar modificações estruturais nas vias aéreas, com uma perda irreversível dos índices de função pulmonar (FP). O objetivo deste estudo foi descrever as características fenotípicas e de FP de crianças com asma persistente. Métodos: Foram coletadas informações de 96 crianças (5-17 anos), através do questionário ISAAC, e realizada espirometria e teste cutâneo para aeroalergenos. Perda irreversível de FP foi definida como VEF1/CVF persistentemente < 0,85. Atopia foi caracterizada conforme o protocolo ISAAC. O índice de atopia foi utilizado para definir pacientes pouco-reatores (resposta para < 4 alérgenos) e multi-reatores (resposta para b 4 alérgenos). Resultados: Dentre as 96 crianças estudadas, 92,7% eram atópicas e 8,3% apresentaram FP persistentemente reduzida, sendo irreversível mesmo após ciclo de tratamento com corticosteróide. Entre os grupos de gravidade da doença, observou-se diferença significativa entre moderados e graves no parâmetro de VEF1 (p=0,006). Com relação à atopia, pacientes multi-reatores apresentaram índices de FP inferiores aos pouco-reatores (VEF1/CVF, p=0,032 e FEF25-75%, p=0,026). Conclusões: A maioria das crianças com asma persistente apresenta FP normal ou reversível. Cerca de 8% dos pacientes demonstraram índices de FP persistentemente reduzidos, sugerindo que este pequeno grupo já possui alterações compatíveis com remodelamento pulmonar. O índice de atopia b 4 alérgenos e gravidade da doença foram preditores para redução dos níveis de FP.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-28T20:15:14Z No. of bitstreams: 1 2006_Ana Cristina Meneses Mendes Gomes.pdf: 1279166 bytes, checksum: c2f231484d30a61a36863f7226b35f87 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-16T19:26:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Ana Cristina Meneses Mendes Gomes.pdf: 1279166 bytes, checksum: c2f231484d30a61a36863f7226b35f87 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-16T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Ana Cristina Meneses Mendes Gomes.pdf: 1279166 bytes, checksum: c2f231484d30a61a36863f7226b35f87 (MD5) Previous issue date: 2006-04 / Pfaffia glomerata, comumente denominada “ginseng brasileiro”, é uma planta da família Amaranthaceae que ocorre nas Américas e África, sendo que o Brasil é o mais importante centro de coleta dessa espécie para fins medicinais, alimentícios e cosméticos. Existem vários problemas fitossanitários que podem prejudicar essa planta, entre eles, os nematóides de galhas, Meloidogyne spp, que ocorrem causando sérios danos ao sistema radicular, onde estão armazenados os princípios ativos. Acessos de P. glomerata foram selecionados, quanto à resistência a Meloidogyne incognita raça 1, de coleções de plantas mantidas na Universidade de Brasília (UNB) e Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (Cenargen). Plântulas foram obtidas por mini estaquia a partir da planta mãe e inoculadas com 5000 ovos quando tinham aproximadamente 15 cm de comprimento. Noventa dias após a inoculação foram avaliados os sistemas radiculares quanto aos índices de galhas, de massas de ovos e os fatores de reprodução (FR). Os acessos São Luís (MA), UFV (MG), Cenargen 1 (DF), Pedra de Guaratiba (RJ), Itabaiana (SE) e Cenargen 2213-6 foram considerados altamente resistentes (FR<1); IAPAR (PR), Cenargen 2216-10 e Cenargen 2216-16, medianamente resistentes (FR= de 1,9 a 2,3); Cenargen 2217-10 e UFC (CE), suscetíveis (FR=10,0) e os demais acessos (Farmacotécnica, DF e Cenargen 2217-9) altamente suscetíveis (FR >80,0). A partir desses resultados, a utilização de acessos resistentes é uma medida bastante promissora para o controle de M. incognita, em cultivos comerciais de P. glomerata. O presente estudo também comparou as respostas histológicas através de secções de radicelas quanto à infestação por M. incognita de um acesso resistente (UFV) com um acesso suscetível (Farmacotécnica), com o objetivo de estudar o mecanismo da resistência. Primeiramente, a resistência do (UFV) esteve associada a um fator não identificado que limitou a penetração do nematóide e a uma resposta bioquímica que se manifestou após a penetração. Algumas células apresentaram características particulares como citoplasma colorido em azul escuro ou apresentando autofluorescência azul esbranquiçada (luz UV). Organelas alteradas foram observadas, indicando a presença de uma resposta de xii hipersensibilidade (RH) nas células parasitadas do hospedeiro resistente e/ou entre elas. Células gigantes deformadas foram também observadas muitas vezes associadas a nematóides com autofluorescência azul esbranquiçada, indicando uma degeneração citoplasmática, devido à presença de compostos fenólicos no seu interior. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pfaffia glomerata, commonly denominated “Brazilian ginseng”, is a plant of Amaranthaceae family that occurs in Americas and Africa. Brazil is the most important center of assessment of this species for usage as medicinal, nutritious and cosmetics aims. Some disease problems can damage that plant, among them, the root-knot nematodes, Meloidogyne spp., cause serious gall symptoms on the roots, where the phyto-chemical compounds are stored. Accessions of P. glomerata were selected from a collection maintained in the University of Brasília (UNB) and Embrapa Genetic Resources and Biotecnology (Cenargen). Plants were obtained by cuttings from the plant mother and inoculated with 5.000 eggs when they were15 cm of length approximately. Ninety days after the eggs inoculation the roots were evaluated, using galls index and the reproduction factor (RF). The accessions São Luís (MA), UFV (MG), Cenargen 1 (DF), Pedra de Guaratiba (RJ), Itabaiana (SE) and Cenargen 2213-6 were considered highly resistant (RF<1); IAPAR (PR), Cenargen 2216-10 and Cenargen 2216-16, moderately resistant (RF= from 1.9 to 2.3); Cenargen 2217-10 and UFC (CE), susceptible (FR=10) and the other accessions (Farmacotécnica, DF e Cenargen 2217-9) highly susceptible (RF >80). The current study also compared the histological response of section an accession resistant (UFV) and one susceptible (Farmacotécnica) to M. incognita infection with the aim to clarify the resistance mechanism. Resistance of ‘UFV’ was associated with unidentified factor that limited nematode penetration and with a post-penetration biochemical response. Several cells features including dark-stained or blue-white autofluorescence (UV xiv light) cytoplasm and altered organelle structure were observed in the resistant accession, indicating a hypersensitive response (HR) of the infested host cells. Features of giant cells were sometimes associated with nematodes with blue autofluorescence showing the degeneration of its cytoplasm and the presence of phenolic compounds.