Resumo: Atualmente mais de um bilhão de pessoas apresentam sobrepeso, sendo que, mais de 30% desta população é obesa. Diversas alterações estruturais e funcionais do coração em humanos tem sido frequentemente associadas com a obesidade. Modelos experimentais, por dieta hiperlipídica, têm sido utilizados para estudar a relação obesidade e coração. O trânsito de cálcio miocárdico tem sido extensivamente estudado em diversos modelos experimentais e frequentemente relacionado com disfunção cardíaca. Entretanto, a literatura mostra escassez de estudos que avaliaram a relação entre o tempo de exposição à obesidade por dieta hiperlipídica, o RNAm e as proteínas envolvidas na homeostase de Ca+2 miocárdico. Além disso, pesquisas relatam a influência dos hormônios tireoidianos nestas proteínas, podendo acarretar alterações na contração e relaxamento cardíaco.O objetivo principal desse estudo foi testar a hipótese que o aumento no tempo de exposição à obesidade acarreta diminuição na expressão e/ou fosforilação das proteínas e dos respectivos níveis de RNAm relacionados com o trânsito de Ca+2 miocárdico. Este estudo teve como objetivo secundário constatar se a diminuição na expressão gênica foi acompanhada de redução dos níveis hormonais tireoidianos. Os períodos de dieta hiperlipídica, utilizados nesse estudo, foram eficientes em promover obesidade, desde que o índice de adiposidade utilizado para caracterizar os animais como obesos foi 79,5%, 82% e 69,5% maior do que os respectivos controles, após 15, 30 e 45 semanas. O tempo de exposição à dieta hiperlipídica não promoveu alterações na gordura corporal total entre os grupos obesos; este resultado indica que, neste trabalho, não houve aumento na intensidade da obesidade ao longo do tempo. Neste estudo foram visualizadas algumas comorbidades frequentemente associadas com a obesidade ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, greater than one billion people are overweight and 30% of the population is obese. Several structural and functional changes of the heart have often been associated with human obesity. Experimental models for high-fat diets have been used to study the relationship between obesity and the heart. Myocardial calcium (Ca2+) handling has been extensively studied in several experimental models and has often been shown to be related to cardiac dysfunction. However, few studies have evaluated the relationship between the duration of exposure to obesity and a high-fat diet, and mRNA and proteins involved in homeostasis of myocardial Ca2+. Some studies have reported the influence of thyroid hormones on these proteins, which may cause changes in cardiac contraction and relaxation. The main objective of the current study was to test the hypothesis that the increased duration of exposure to obesity leads to a reduction in the expression and/or phosphorylation of proteins and mRNA levels related to myocardial Ca2+ handling. This study had, as additional objective, to verify if the decrease in mRNA expression was accompanied by a reduction in thyroid hormone levels. The periods of exposure to a high-fat diet used in this study were effective in promoting obesity since the adiposity index used to characterize animals as obese was 79.5%, 82%, and 69.5% higher than controls after 15, 30, and 45 weeks, respectively. The duration of exposure to a high-fat diet did not change the total body fat between the obese groups. This result indicates that there was not an increase in the intensity of obesity over time. In this study, some co-morbidities often associated with experimental obesity existed, such as glucose intolerance, insulin resistance, hyperinsulinemia, hyperleptinemia, and dyslipidemia; however, the co-morbidities were not associated with changes in systolic blood pressure ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Antonio Carlos Cicogna / Coorientador: Patrícia Chakur Brum / Banca: Alessandra Medeiros / Banca: Carlos Eduardo Negrão / Banca: Célia Regina Nogueira / Banca: Maeli Dal Pai Silva / Doutor

Resumo não disponível

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Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-24T05:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 251623.pdf: 3842753 bytes, checksum: 675419ecff620ee00a69fd1fb9444d11 (MD5) / O hormônio da tireóide (T3) exerce uma importante influência no desenvolvimento e maturação do SNC de mamíferos. Os efeitos do T3 no desenvolvimento neuronal são mediados pelos astrócitos, que secretam fatores solúveis e outras moléculas, como proteínas de MEC, modulando o crescimento de neuritos, proliferação e migração neuronal. Os astrócitos também participam ativamente do metabolismo neuronal. Por exemplo, os transportadores de glutamato astrocitários, GLAST e GLT-1, têm papel essencial na retirada de glutamato do espaço extracellular e na manutenção deste neurotransmissor em níveis fisiológicos no cérebro. No presente estudo, demonstramos que o T3 aumentou significativamente a captação de glutamato por astrócitos cerebelares, quando comparados às culturas sem o tratamento. A adição de LPDC e DL-TBOA, inibidores da captação de glutamato, aboliu a captação de glutamato tanto nos astrócitos tratados com T3 como nos controles. Além disto, os níveis de RNA mensageiro e de proteína para GLAST e GLT-1 em astrócitos foram aumentados após o tratamento com T3, embora não tenhamos observado diferenças significativas na distribuição destes transportadores. O efeito gliotóxico do glutamato nas culturas de astrócitos cerebelares foi abolido pelo tratamento com T3. Além disto, neurônios cerebelares cultivados sobre monocamadas de astrócitos tratados com T3 permaneceram viáveis em uma maior proporção após a adição de glutamato do que os cultivados sobre monocamadas astrocitárias controle, demonstrando um efeito neuroprotetor do T3. A expressão de sindecanas (1-4) em culturas de astrócitos de cerebelo, córtex cerebral e hipocampo de ratos neonatos foi analisada por RT-PCR. Nossos resultados demonstraram que as sindecanas 1-4 são expressas em astrócitos de cerebelo e córtex cerebral, enquanto que astrócitos de hipocampo expressam apenas as sindecanas 2 e 4. A análise por RT-PCR semiquantitativa demonstrou que a expressão das sindecanas 1, 2 e 4 foi reduzida e a expressão da sindecana 3 foi aumentada em cerebelos de ratos hipotireoideos, comparados aos tecidos normais. Observamos também redução na expressão das sindecanas 2 e 3 em astrócitos cerebelares tratados com T3, quando comparados às culturas não tratadas. Este balanço de PGs pode estar envolvido na ação do T3, mediada pela sinalização por FGF2. Demonstramos também, neste trabalho, que astrócitos hipotireoideos apresentam alterações na expressão e organização de fibronectina e laminina. Monocamadas de astrócitos hipotireoideos corresponderam a um microambiente pobre para o desenvolvimento neuronal do que astrócitos normais. O tratamento de astrócitos hipotireoideos com T3, recuperou o microambiente hipotireoideo, aumentando a área de cobertura por fibronectina e laminina. Em co-culturas de neurônios hipotireoideos sobre astrócitos hipotireoideos tratados com T3 foi observado maior número de neurônios e estes apresentando maior neuritogênese do que quando cultivados sobre astrócitos hipotireoideos não tratados. O meio condicionado de astrócitos hipotireoideos tratados com T3 também promoveu sobrevivência e neuritogênese em neurônios hipotireoideos. Nossos resultados demonstram que os efeitos do T3 na morfogênese astrocitária podem modular o desenvolvimento neuronal por diferentes mecanismos, como regulação dos níveis extracelulares de glutamato, e modulando contatos diretos célula-célula e célula-MEC. Thyroid hormone (T3) has a significant influence on the development and maturation of the mammalian SNC. T3 modulates neuronal development in an astrocyte-mediated manner, secreting soluble factors and other molecules, as ECM proteins, and regulating neurite outgrowth, neuron proliferation and migration. Astrocytes also participate actively in the neuronal metabolism. For example, astrocytic glutamate transporters, GLAST and GLT-1, play an essential role in the clearance of the neuronal-released glutamate from the extracellular space and are essential for maintaining physiological extracellular glutamate levels in the brain. In the present study, we showed that T3 significantly increased glutamate uptake by cerebellar astrocytes when compared to control cultures. Inhibitors of glutamate uptake, such as L-PDC and DL-TBOA, abolished glutamate uptake on control or T3-treated astrocytes. T3-treatment of astrocytes increased both mRNA levels and protein expression of GLAST and GLT-1, although no significant changes on the distribution of these transporters were observed. The gliotoxic effect of glutamate on cultured cerebellar astrocytes was abolished by T3-treatment of astrocytes. In addition, the neuronal viability against glutamate challenge was enhanced on T3- treated astrocytes, showing a putative neuroprotective effect of T3. We also analyzed the modulation of sindecans expression by thyroid hormone via RT-PCR in astrocytes cultures from cerebellum, cortex and hippocampus of newborn rats. Our results showed that syndecans (1-4) are expressed in astrocytes of cerebellum and cortex, whereas in hippocampus only syndecans 2 and 4 were detected. Semi-quantitative RT-PCR analysis revealed reduced expression of syndecans 1, 2 and 4, and increased expression of syndecan 3 in hypothyroid cerebellum, when compared to the euthyroid tissue. Furthermore, we observed a reduced expression of syndecans 2 and 3 in T3-treated cerebellar astrocytes, when compared to non-treated culture. This balance of PGs may be involved in T3 action mediated by FGF2 signaling. Moreover, we demonstrated that hypothyroid astrocytes showed an altered expression and organization of fibronectin and laminin. As expected, astrocytes hypothyroid represented a poor microenvironment to neuronal development than the normal ones. The T3-treatment recovered the microenvironment hypothyroid, increasing the covered area by fibronectin and laminin. In addition, hypothyroid neurons cultivated on T3-treated hypothyroid astrocytes had an increase in the number of cells and presented longer neurites than the cells cultured on astrocytes monolayers without T3. The conditioned medium of T3-treated hypothyroid astrocytes also promoted survival and neuritogenesis in hypothyroid neurons. Taken together our results demonstrate that the T3 effects on astrocytic morphogenesis may influence neuronal development by different mechanisms as regulating the glutamate extracellular levels and secreting ECM proteins modulating direct cell to cell or cell to ECM contacts.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:55Z : No. of bitstreams: 1 000831510.pdf: 612514 bytes, checksum: dc6899b84194e33253d906ed14ea10eb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A incidência de câncer de mama (CM) tem aumentado de maneira alarmante nos últimos anos. Diversas pesquisas conduziram à descoberta de amphiregulin (AREG) como um oncogene, tendo sua expressão relacionada com diversos tipos de cânceres. Nosso grupo evidenciou a ação do T3 sobre diferentes genes em células de câncer de mama, por meio de microarray, porém nesse estudo não foi avaliado o mecanismo de ação pelo qual o T3 regula a expressão desses genes e o envolvimento de ER. A relação entre a expressão de AREG e a presença de HT permanece desconhecida, portanto, o objetivo do presente estudo foi verificar a ação nuclear e extra-nuclear do T3 na expressão gênica do oncogene AREG em linhagens celulares de adenocarcinoma de mama, MCF-7 e MDA-MB-231. As linhagens celulares foram submetidas ao tratamento com 10-8M de T3 nos tempos de 10', 30', 1h e 4h, na presença ou ausência de Fulvestrant (ICI 182,780), inibidor de ER, Actinomicina D (ACTD) - inibidor da expressão gênica, Ciclohexamida (CHX), inibidor da síntese protéica, e LY294002 - inibidor da via PI3K. O mRNA de AREG foi analisado pela técnica de RT-PCR. Para a análise dos dados foi utilizado ANOVA complementado com teste de Tukey e adotado significância mínima de 5%. O T3 elevou os níveis de expressão gênica de AREG, em relação ao grupo controle, nas duas linhagens celulares, independente dos tempos de incubação. Nosso trabalho confirma que a expressão gênica de AREG está aumentada na presença T3, em ambas as linhagens e em todos os tempos estudados. Os dados desse estudo indicam que T3 pode agir por meio de ER, diminuindo a expressão de AREG após 30' de tratamento nas células MCF-7 e não alterando a expressão desse gene nas células MDA-MB-231, as quais não possuem ER. Além disso, podemos sugerir que a ação de T3 sobre a expressão gênica de AREG ocorre de forma indireta. O T3 mantém a expressão de AREG mesmo após ... / The incidence of breast cancer (BC) has increased alarmingly in recent years. Several studies have been lead to the discovery of amphiregulin (AREG) as an oncogene, with its expression related to various cancer types. Our group showed the action of T3 on different genes in BC cells using microarray, but the mechanism which T3 regulates the expression of these genes and the involvement of ER have not been evaluated yet. The relationship between the expression of AREG and the presence of TH remains unknown, therefore, the aim of this study was to verify the nuclear and extra-nuclear action of T3 on AREG gene expression in breast adenocarcinoma cell lines, MCF-7 and MDA-MB-231. The cell lines were subjected to treatment with 10-8M T3 at the times 10', 30', 1h and 4h in the presence or the absence of Fulvestrant (ICI 182,780) - ER inhibitor, Actinomycin D (ACTD) - inhibitor of gene expression, cycloheximide (CHX) - inhibitor of protein synthesis, and LY294002 - inhibitor of PI3K pathway. The AREG mRNA levels were analyzed by RT-PCR. For data analysis we used ANOVA followed by the post hoc Tukey's test with a significance level of 5%. T3 increased AREG gene expression levels, compared to the control group in both cell lines, regardless of the incubation times. Our study confirms that AREG gene expression is increased in the presence of T3 in both cell lines and at all the times studied. The data from this study indicate that T3 might act through ER, decreasing AREG expression after 30' treatment in MCF-7 cells and did not alter the expression of this gene in MDA-MB-231 cells, which lack ER. Furthermore, we suggest that T3actionon AREG gene expression occurs indirectly. The T3 maintains AREG expression even after the inhibition of transcription. And, the PI3K pathway activation by T3 is required for the modulation of AREG in both cell lines studied / FAPESP: 2009/15607-2

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Coorientador: Maria Lucia Gomes Lourenço / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Eunice Oba / Resumo: Nas cadelas as distocias estão relacionadas a alterações hormonais, nutricionais, endócrinas e hormonais durante a gestação. Desta forma, este estudo irá apresentar os achados clínicos, eletrocardiográficos, bioquímicos (hematócrito, hemoglobina, ureía, creatinina, glicose), eletrolíticos (iCa, Na, K, Cl, TCO2), e hormonais (P4, T3, T4), nas cadelas em eutocia e distocia, dividido em dois momentos; M1 (uma hora antes do parto ou cesariana) e M2 (após o parto ou recuperação anestésica). Utilizou-se 28 cadelas, sendo 22 em distocia e seis em eutocia. A arritmia sinusal foi o ritmo cardíaco predominante no pós-parto das distocias. O momento influenciou na amplitude da onda P e na frequência cardíaca, sendo superiores no M1. Os parâmetros creatinina, hematócrito e a hemoglobina diferiram entre os partos, sendo superiores na eutocia e M1. A elevação das concentrações de P4 foram observadas nos partos distócicos. O T3 demonstrou alteração significativa frente ao momento, sendo superior no M1 em ambos os grupos. O T4 foi superior nas distocias e diferente no M2 entre os grupos. O dióxido de carbono total apresentou diferença significativa entre os momentos, sendo superior no M2. Podemos concluir, o estabelecimento do parto ocorre uma tendência a taquicardia sinusal, bem como o aumento da perfusão sanguínea e função renal. Nas distocias, devido a menor perfusão sanguínea, a intervenção pela cesariana predispõe a diminuição na oxigenação sanguínea no pós-parto. Na vigência dos partos, a elevação das concentrações de progesterona interferiu no estabelecimento das contrações uterinas predispondo a distocia / Abstract: In bitches the maternal of dystocia are related hormonal, endocrinal and nutritional changes during pregnancy. Therefore, this study will presentes clinical findings, eletrocardiographical, biochemical (hematocrit, hemoglobin, urea, creatine, glucose), eletrolytic (iCa, Na, K, Cl, TCO2) and hormonal (P4, T3, T4), in bitches during eutocia and dystocia, divided in two moments, M1 (one hour before parturition or caesarean) and M2 (after parturition or anesthetic recovery). We used 28 bitches, whose 22 in the dystocic and six in the eutocia. The sinus arrhythmia on the eletrocardiographic parameters was significant interval and heart rate. The moment influenced the P wave amplitude and in the heart rate being higher in M1. The parameters creatinine, hematocrit and hemoglobin differences between births, being higher in M1. Rising concentrations of P4 were observed in dystocia. T3 showed significant change across the time, being higher in M1 in both groups. The T4 was higher during dystocia and different in M2 among the groups. The total dioxide carbon showed a significant difference between times, being higher in M2. It follows, the establishment of delivery is a tendency sinus tachycardia, and increased blood perfusion and renal function. In dystocia due to lower blood perfusion, intervention by cesarean predisposes the decrease in blood oxygenation in the post-partum. In the presence of deliveries, the elevation of progesterone interfered with the establishment of uterine contractions predispose to dystocia / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-10Bitstream added on 2014-06-13T20:19:13Z : No. of bitstreams: 1 000735996.pdf: 837750 bytes, checksum: 86934181e3622aaf1ea4a9ec2d8615bf (MD5) / Nas cadelas as distocias estão relacionadas a alterações hormonais, nutricionais, endócrinas e hormonais durante a gestação. Desta forma, este estudo irá apresentar os achados clínicos, eletrocardiográficos, bioquímicos (hematócrito, hemoglobina, ureía, creatinina, glicose), eletrolíticos (iCa, Na, K, Cl, TCO2), e hormonais (P4, T3, T4), nas cadelas em eutocia e distocia, dividido em dois momentos; M1 (uma hora antes do parto ou cesariana) e M2 (após o parto ou recuperação anestésica). Utilizou-se 28 cadelas, sendo 22 em distocia e seis em eutocia. A arritmia sinusal foi o ritmo cardíaco predominante no pós-parto das distocias. O momento influenciou na amplitude da onda P e na frequência cardíaca, sendo superiores no M1. Os parâmetros creatinina, hematócrito e a hemoglobina diferiram entre os partos, sendo superiores na eutocia e M1. A elevação das concentrações de P4 foram observadas nos partos distócicos. O T3 demonstrou alteração significativa frente ao momento, sendo superior no M1 em ambos os grupos. O T4 foi superior nas distocias e diferente no M2 entre os grupos. O dióxido de carbono total apresentou diferença significativa entre os momentos, sendo superior no M2. Podemos concluir, o estabelecimento do parto ocorre uma tendência a taquicardia sinusal, bem como o aumento da perfusão sanguínea e função renal. Nas distocias, devido a menor perfusão sanguínea, a intervenção pela cesariana predispõe a diminuição na oxigenação sanguínea no pós-parto. Na vigência dos partos, a elevação das concentrações de progesterona interferiu no estabelecimento das contrações uterinas predispondo a distocia / In bitches the maternal of dystocia are related hormonal, endocrinal and nutritional changes during pregnancy. Therefore, this study will presentes clinical findings, eletrocardiographical, biochemical (hematocrit, hemoglobin, urea, creatine, glucose), eletrolytic (iCa, Na, K, Cl, TCO2) and hormonal (P4, T3, T4), in bitches during eutocia and dystocia, divided in two moments, M1 (one hour before parturition or caesarean) and M2 (after parturition or anesthetic recovery). We used 28 bitches, whose 22 in the dystocic and six in the eutocia. The sinus arrhythmia on the eletrocardiographic parameters was significant interval and heart rate. The moment influenced the P wave amplitude and in the heart rate being higher in M1. The parameters creatinine, hematocrit and hemoglobin differences between births, being higher in M1. Rising concentrations of P4 were observed in dystocia. T3 showed significant change across the time, being higher in M1 in both groups. The T4 was higher during dystocia and different in M2 among the groups. The total dioxide carbon showed a significant difference between times, being higher in M2. It follows, the establishment of delivery is a tendency sinus tachycardia, and increased blood perfusion and renal function. In dystocia due to lower blood perfusion, intervention by cesarean predisposes the decrease in blood oxygenation in the post-partum. In the presence of deliveries, the elevation of progesterone interfered with the establishment of uterine contractions predispose to dystocia

Orientador: Célia Regina Nogueira / Coorientador: Paula de Oliveira Montandon Hokama / Banca: Vânia dos Santos Nunes / Banca: Glaucia Maria F. da Silva Mazeto / Banca: Patrícia Pinto Saraiva / Banca: Maria Tereza Nunes / Resumo: A incidência de câncer de mama (CM) tem aumentado de maneira alarmante nos últimos anos. Diversas pesquisas conduziram à descoberta de amphiregulin (AREG) como um oncogene, tendo sua expressão relacionada com diversos tipos de cânceres. Nosso grupo evidenciou a ação do T3 sobre diferentes genes em células de câncer de mama, por meio de microarray, porém nesse estudo não foi avaliado o mecanismo de ação pelo qual o T3 regula a expressão desses genes e o envolvimento de ER. A relação entre a expressão de AREG e a presença de HT permanece desconhecida, portanto, o objetivo do presente estudo foi verificar a ação nuclear e extra-nuclear do T3 na expressão gênica do oncogene AREG em linhagens celulares de adenocarcinoma de mama, MCF-7 e MDA-MB-231. As linhagens celulares foram submetidas ao tratamento com 10-8M de T3 nos tempos de 10', 30', 1h e 4h, na presença ou ausência de Fulvestrant (ICI 182,780), inibidor de ER, Actinomicina D (ACTD) - inibidor da expressão gênica, Ciclohexamida (CHX), inibidor da síntese protéica, e LY294002 - inibidor da via PI3K. O mRNA de AREG foi analisado pela técnica de RT-PCR. Para a análise dos dados foi utilizado ANOVA complementado com teste de Tukey e adotado significância mínima de 5%. O T3 elevou os níveis de expressão gênica de AREG, em relação ao grupo controle, nas duas linhagens celulares, independente dos tempos de incubação. Nosso trabalho confirma que a expressão gênica de AREG está aumentada na presença T3, em ambas as linhagens e em todos os tempos estudados. Os dados desse estudo indicam que T3 pode agir por meio de ER, diminuindo a expressão de AREG após 30' de tratamento nas células MCF-7 e não alterando a expressão desse gene nas células MDA-MB-231, as quais não possuem ER. Além disso, podemos sugerir que a ação de T3 sobre a expressão gênica de AREG ocorre de forma indireta. O T3 mantém a expressão de AREG mesmo após... / Abstract: The incidence of breast cancer (BC) has increased alarmingly in recent years. Several studies have been lead to the discovery of amphiregulin (AREG) as an oncogene, with its expression related to various cancer types. Our group showed the action of T3 on different genes in BC cells using microarray, but the mechanism which T3 regulates the expression of these genes and the involvement of ER have not been evaluated yet. The relationship between the expression of AREG and the presence of TH remains unknown, therefore, the aim of this study was to verify the nuclear and extra-nuclear action of T3 on AREG gene expression in breast adenocarcinoma cell lines, MCF-7 and MDA-MB-231. The cell lines were subjected to treatment with 10-8M T3 at the times 10', 30', 1h and 4h in the presence or the absence of Fulvestrant (ICI 182,780) - ER inhibitor, Actinomycin D (ACTD) - inhibitor of gene expression, cycloheximide (CHX) - inhibitor of protein synthesis, and LY294002 - inhibitor of PI3K pathway. The AREG mRNA levels were analyzed by RT-PCR. For data analysis we used ANOVA followed by the post hoc Tukey's test with a significance level of 5%. T3 increased AREG gene expression levels, compared to the control group in both cell lines, regardless of the incubation times. Our study confirms that AREG gene expression is increased in the presence of T3 in both cell lines and at all the times studied. The data from this study indicate that T3 might act through ER, decreasing AREG expression after 30' treatment in MCF-7 cells and did not alter the expression of this gene in MDA-MB-231 cells, which lack ER. Furthermore, we suggest that T3actionon AREG gene expression occurs indirectly. The T3 maintains AREG expression even after the inhibition of transcription. And, the PI3K pathway activation by T3 is required for the modulation of AREG in both cell lines studied / Doutor