INTRODUÇÃO: As infecções causadas por bactérias ou vírus são frequentes em pacientes com imunodeficiência comum variável (ICV) devido à deficiência de anticorpos e associação com alteração da função das células T. OBJETIVOS: Avaliar o efeito da ativação de receptores Toll-like (TLR) utilizando ligantes de TLRs em células T monofuncionais ou polifuncionais em pacientes com ICV. MÉTODOS: Foram selecionados 16 pacientes com ICV do Ambulatório de Manifestações Dermatológicas das Imunodeficiências Primárias ADEE3003 HC-FMUSP e 16 controles saudáveis. Os métodos utilizados de citometria de fluxo foram: a) análise em sangue periférico de linfócitos B, linfócitos T quanto ao perfil de ativação/maturação, linfócitos T foliculares (Tfh) e células T reguladoras (Treg); b) dosagem de citocinas e quimiocinas em amostras de soro e em sobrenadante de culturas de células mononucleares do sangue periférico (CMNs) estimuladas com agonistas de TLRs; c) avaliação das células TCD4+ mono e polifuncionais secretoras de IL-17a, IL-22, TNF, IFN- e IL-10, e expressão de marcador de ativação crônica de CD38 estimuladas por agonistas de TLR2, TLR3 e TLR7/8 e estímulos policlonais como enterotoxina B de Staphylococcus aureus (SEB) e acetato miristato de forbol e ionomicina (PMA/IONO); d) células Th22 e Tc22 estimuladas com TLR e SEB. RESULTADOS: Na ICV, os linfócitos B do sangue periférico mostram diminuída frequência, sendo em maior frequência de linfócitos B naïve (CD19+IgD+CD27-), e ausência de células B de memória. Além disto, um aumento na expressão do marcador de exaustão PD-1 foi observado nas células TCD4+ de memória efetora (CD45RA-CCR7-) e na expressão de CD38, em células TCD8+ terminalmente diferenciadas (CD45RA + CCR7-). Em contraste, houve diminuição na frequência de células T reguladoras naïve nos pacientes com ICV. Nos indivíduos com ICV foi observado aumento na frequência de células TCD4+ TNF+ sob estímulo TLR2 e TLR7/8 comparado ao grupo controle, enquanto que sob estímulo com PMA/IONO houve menor frequência de células TCD4+ e TCD8+ secretoras de IFN-y IL-17a, IL-22 ou TNF. Já em células TCD8+ houve importante redução na ativação via TLR3 na resposta de IL-22, IFN-y e IL-17a. Contudo, os estímulos com TLR7/8 e SEB foram capazes de aumentar a frequência de células Th22 e Tc22 nos pacientes com ICV. Em geral, as células TCD4+, que secretam simultaneamente 4 a 5 citocinas induzidas por TLR foram preservadas em ICV. Embora as células TCD4+ polifuncionais secretoras de 3 citocinas, foram capazes de responder a estímulos via TLR2 e TLR7/8, as células TCD8+ não responderam para qualquer estímulo via TLRs. Além disso, as células T que expressam CD38 mostraram menor polifuncionalidade aos estímulos via TLRs e PMA/IONO. O perfil inflamatório nos pacientes com ICV foi observado pela elevação sérica de IL-6, CCL-2, CCL-5, CXCL8, CXCL-9, CXCL-10. Alteração na resposta aos agonistas de TLRs em ICV pode ser observada com a ativação dos agonistas de TLRs em CMNs, que mostrou maior produção de TNF e diminuição de CCL2 e CXCL8 após ativação via TLR4. Em contraste, o agonista de TLR7/8, teve ação oposta induzindo CXCL10 e reduzindo os níveis de CXCL9. Chama atenção no ICV, à reduzida secreção de IFN-alfa induzida por TLR7/8, que não foi observada com a ativação via TLR9. CONCLUSÕES: Até o momento, os achados em ICV mostram alterações nas células T, seja quanto à baixa frequência de células T reguladoras naïve e a reduzida resposta efetora, em especial das células TCD8+. Contudo, enfatiza o potencial de adjuvante dos agonistas de TLR7/8 na ativação das células T / INTRODUCTION: Infections caused by bacteria or viruses are common in patients with Common Variable Immunodeficiency (CVID), due to antibody deficiency and association with altered function of T cells. OBJECTIVES: To evaluate the effect of Toll-like receptors (TLR) activation using TLR agonists on the monofunctional or polyfunctional T cells in patients with CVID. METHODS: We selected 16 patients with ICV from the Dermatologic Manifestations of Primary Immunodeficiencies Clinic ADEE3003 HC-FMUSP and 16 healthy controls. The methods used for flow cytometry were: a) analysis of peripheral blood B lymphocytes, T lymphocytes were assessed by the activation/maturation profile, follicular T cells (Tfh) and regulatory T cells (Treg); b)evaluation of cytokines and chemokines serum levels and in supernatants of mononuclear cell cultures from peripheral blood (PBMC) stimulated with TLR agonists; c) evaluation of mono and polyfunctional CD4+ T cells secreting IL-17a, IL-22, TNF, IFN-y and IL-10, and expression chronic activation marker of CD38 stimulated by agonists of TLR2, TLR3 and TLR7/8 and polyclonal stimuli such as Staphylococcus aureus enterotoxin B (SEB) and phorbol myristate acetate and ionomycin (PMA / IONO); d) analysis of Tc22 and Th22 cells stimulated with TLR and SEB. RESULTS: In the CVID, the peripheral blood B cells show decreased frequency, being higher frequency of naïve B cells (IgD+ CD19+ CD27-) and lack of memory B cells. Moreover, an increased expression of PD-1, an exhaustion marker, was detected in the CD4+ T cell effector memory (CD45RA- CCR7-) and expression of CD38 on CD8+ T terminally differentiated cells (CD45RA+ CCR7-). In contrast, a decreased frequency of naïve regulatory T cells was detected in the patients with CVID. In CVID patients it was observed increased frequency of T CD4+ TNF+ cells upon TLR2 and TLR7/8 agonists compared to the control group, while under stimulation with PMA /IONO there was a lower frequency of CD4+ and CD8+T cells secreting IFN-y, IL-17a, IL-22 or TNF. The CD8+T cells showed a significant reduction of in the IL-22 response, IFN-? and IL-17a induced by TLR3 activation. However, stimulation with TLR7/8 and SEB were able to increase the frequency of Th22 and TC22 cells in the patients with CVID. In CVID patients it was observed increased frequency of T CD4+ TNF+ cells upon TLR2 and TLR7/8 agonists compared to the control group, while under stimulation with PMA /IONO there was a lower frequency of CD4+ and CD8+ T cells secreting IFN-y, IL-17a, IL-22 or TNF. The CD8+ T cells showed a significant reduction of in the IL-22 response, IFN-y and IL-17a induced by TLR3 activation. However, stimulation with TLR7/8 and SEB were able to increase the frequency of Th22 and TC22 cells in the patients with CVID. In general, CD4+ T cells that secrete simultaneously 4 to 5 cytokines induced by TLR were preserved in CVID. Although polyfunctional CD4+ T cells secreting 3 cytokines were able to respond to TLR2 and TLR7/8 agonists, the CD8+ T cells did not respond to any stimuli. In addition, T cells expressing CD38, showed lower polyfunctionality to the stimuli via TLRs and PMA/IONO. Furthermore, the inflammatory status in the patients with CVID was observed by the increased serum levels of IL-6, CCL-2, CCL-5, CXCL8, CXCL-9, CXCL-10. In contrast, the agonist of TLR7/8 had opposite action inducing CXCL10 and reducing the CXCL9 levels. Noteworthy in CVID, that the reduced secretion of IFN-alfa induced by TLR7/8 was not observed with TLR9 activation. CONCLUSIONS: To date, the CVID findings shows alterations in the T cells, as the low frequency of naïve regulatory T cells and reduced effector response, mainly of CD8+ T cells. However, it emphasizes the adjuvant potential of the TLR7/8 agonist in the T cells activation

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica e endêmica na América Latina com maior prevalência no Brasil, Colômbia e Venezuela. A doença é causada pelos fungos P. brasiliensis e P. lutzii. As células dendríticas são eficientes apresentadoras de antígenos e quando utilizadas como adjuvante podem ser de 100 a 1000 vezes mais efetiva nesta função. O peptídeo P10 corresponde a um trecho específico de 15 aminoácidos derivado da gp43, principal antígeno diagnóstico, e é reconhecido pelos linfócitos T CD4+ capaz de induzir resposta preferencialmentedo tipo Th1 e conferindo proteção no modelo experimental. Células indiferenciadas foram obtidas a partir de medula óssea de camundongos machos BALB/c B10.A, cultivadas na presença de GM-CSF e IL-4 por 9 dias, para a diferenciação de células dendríticas (DC). As células foram incubadas na presença do P10 por 2 horas, em estufa com 5% de CO2 a 37°C, e foram utilizadas nas imunizações. A maturação das células foi observada por citometria de fluxo com os marcadores CD11c, MHC-II, CD80 e CD86. Camundongos da linhagem BALB/c e B10.A foram submetidos à imunossupressão com dexametasona, por 20 dias, seguido pela infecção intratraqueal com o isolado Pb18. Após 30 dias, os grupos foram tratados com DCs ou DCs pulsadas com P10 em associação ou não com sulfametoxazol/Trimetoprim, por um período de 15 dias. O sacrifício ocorreu 45 dias após a infecção e foram retirados os pulmões, baço e fígado para quantificação de carga fúngica, análise histológica e dosagem de citocinas. Observamos diminuição significativa da carga fúngica nos pulmões dos animais que receberam DCs pulsadas com P10 associada ou não ao tratamento medicamentoso. Não foi observado crescimento fúngico em outros órgãos como fígado e baço em ambos os grupos. A análise histológica revelou redução da carga fúngica e preservação do parênquima pulmonar nos grupos tratados com Dcs pulsadas com P10. As dosagens das citocinas indicaram uma resposta imune mista Th1/Th2. Inicialmente reportamos que as DCs pulsadas com P10 reduz a carga fúngica em camundongos infectados. Neste trabalho, reportamos que as DCs pulsadas com P10 podem também reduzir a carga fúngica em animais anérgicos, mimetizando pacientes com a forma aguda/subaguda da doença / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic and endemic mycosis in South America, with higher prevalence in Brazil, Colombia and Venezuela. This disease is caused by fungi P. brasiliensis and P. lutzii. The peptide P10 matches a specific path of 15 amonoacids which is derived from gp43, main diagnostic antigen. This peptide is recognized by the T CD4+ lymphocytes and induces a response type Th1, giving protection at an experimental mode. Some dendritic cells (DC) have an efficient antigen and, when used as adjuvant, they can be 100 to 1000 times more effective. Undifferentiated cells were obtained from bone marrow of male mice type BALB/c and B10.A and cultivated in the presence of GM-CSF and IL-4 for 9 days, so that DCs would be differentiated. The cells were incubated in the presence of P10 for 2 hours in incubator at 37°C with 5% of CO2, and later utilized in the immunizations. Maturation of the cells was observed by flow cytometry with CD11c, MHC-II, CD80 and CD86 markers. Mice types BALB/c and B10.A had been submitted to an immunosuppression with dexamethasone for 20 days, before being intratracheally infected with isolate Pb18. After 30 days, the group of animals received immunizations with DCs or DCs pulsed with P10 associated or not with the treatment by Sulfametoxazol/Trimetoprim, this for a period of 15 days. The sacrifice occurred 45 day after the animals had been infected, and their lungs, spleen and liver were taken out for quantification of fungal burden, histology and cytokine assay. We observed a significant decrease of fungal burden in the lungs of animal that received DC pulsed with P10, associated or not with the drug treatment. In both groups we didn\'t observe fungal growth in organs such as liver and spleen. The histological analyses showed reduced fungal burden and preservation of lung parenchyma. The dosages of cytokines showed an immune response mixed Th1/Th2 type. At first we reported that the DCs pulsed with P10 were responsible for reducing the fungal burden in infected mice. In this paper we report that the DCs pulsed with P10 may also be responsible for reducing fungal burden in anergic animals, mimicking patients with the acute/subacute form of the disease

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The aim of this study was to evaluate the PAF regulatory activity on TLR2-induced TNF production. Thus, Mycoplasma fermentans PG 18 lipoproteins (LAMPf), TLR2/TLR6 agonists and Pam3Cys, a synthetic lipopeptide agonist of TLR2/TLR1 were added to human whole blood cultures and TNF was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay. To evaluate the effects of endogenous PAF on TNF production, a PAF receptor antagonist, WEB2170 was used, and to evaluate the effect of exogenous PAF, PAF was added to the cultures. The blood cultures were also activated with Gram-positive or negative heat-killed bacteria (Staphylococcus aureus or Escherichia coli). The TLR2 expression on polymorphonuclear (PMN) and monocytes were evaluated by flow cytometry, analyzing total cellularity for PMN and CD14+ cells for monocytes. LAMPf, Pam3Cys or LPS induced TNF and the treatment with WEB2170 increased TNF production after TLR2 activation, but not after TLR4 activation. Priming of the blood cultures with PAF up regulated TLR2- induced TNF production. Addition of PAF did not alter TNF release induced by LPS. E. coli induced higher levels of TNF than S. aureus and the treatment with WEB2170 lead to a significant reduction of S. aureus-induced TNF release. However, addition of PAF did not significantly alter bacteria-induced TNF production. With E. coli neither treatment with WEB2170 nor with PAF modulated TNF release. Results indicate that PAF can increase or decrease TNF production induced by TLR2 depending on the time when PAF is combined with TLR2. The increase of the TNF production after extended priming with PAF it was not caused by an increase in TLR2 expression. Thus, it is suggested that interaction between PAFR and TLR2 signaling determines the levels of TNF release. TLR2/PAF/TNF signaling pathway can be relevant in innate immune responses against Gram positive bacteria as well as in inflammatory diseases. / Os microrganismos expressam moléculas conservadas que ativam as células do sistema imune inato. Estas são conhecidas como padrões moleculares associados aos patógenos (PAMPs), tais como o lipopolissacarídeo (LPS) e as lipoproteínas bacterianas. Estes PAMPs são reconhecidos por receptores da família dos Toll-like receptors (TLR). A ativação das células da imunidade natural via TLR induz a produção de citocinas e mediadores lipídicos pro-inflamatórios dentre eles, o fator de necrose tumoral (TNF) e o fator ativador de plaquetas (PAF), respectivamente. A modulação da produção de TNF induzida por agonista de TLR4 (o LPS), pelo PAF, é conhecida, no entanto, a interação entre PAF e outros TLR foi pouco investigada. O presente trabalho teve o objetivo de avaliar a atividade moduladora do PAF na produção de TNF induzida por agonistas de TLR2. Para isto, foram utilizados as lipoproteínas de Mycoplasma fermentans PG 18 (LAMPf), agonistas de TLR2/TLR6 e o Pam3Cys, um lipopeptídeo sintético agonista de TLR2/TLR1. Culturas de sangue total periférico humano foram ativadas com os agonistas de TLR2 ou TLR4 e o TNF foi avaliado nos sobrenadantes, por meio do ELISA. Para avaliar os efeitos do PAF endógeno na produção do TNF, foi utilizado o antagonista do receptor do PAF (PAFR), o WEB2170, e para avaliar o efeito do PAF exógeno, o PAF foi adicionado às hemoculturas. As hemoculturas também foram ativadas com bactérias inteiras (S. aureus ou E. coli) inativadas pelo calor. A expressão de TLR2 em polimorfonucleares (PMN) e monócitos foi avaliada por citometria de fluxo, analisando a celularidade total para os PMN e as células CD14+, para os monócitos. As LAMPf, Pam3Cys ou LPS induziram TNF nas hemoculturas. O tratamento com WEB2170 aumentou a produção de TNF nas hemoculturas estimuladas com agonistas de TLR2, mas não de TLR4. A pré-estimulação das hemoculturas com o PAF aumentou a produção de TNF induzida pelos agonistas de TLR2. A adição de PAF não causou alterações significantes na produção de TNF induzida pelo LPS. Nos ensaios com as bactérias inteiras, E. coli induziu maiores concentrações de TNF do que S. aureus. O tratamento com WEB2170 das hemoculturas estimuladas com S. aureus reduziu a produção de TNF, no entanto, a adição de PAF não alterou significantemente a produção de TNF nas hemoculturas estimuladas com as bactérias. Para E. coli, nem o tratamento com WEB2170, nem com o PAF alterou significantemente a produção de TNF. Os resultados indicam que o PAF pode aumentar ou diminuir a produção de TNF induzida por agonista de TLR2, dependendo do momento em que ele ativa o PAFR em relação à ativação do TLR2. O aumento da produção de TNF após prolongada pré-ativação das hemoculturas com o PAF não foi devido a um aumento na expressão de TLR2. Assim, é sugerido que a interação entre as vias bioquímicas de sinalização do PAFR e do TLR2 determina o nível de produção de TNF. A via de sinalização TLR2/PAF/TNF pode ser importante na imunidade inata contra infecções causadas por bactérias Gram positivas tão bem quanto em doenças inflamatórias.

A sobrecarga de proteínas nas células tubulares proximais pode levar a lesão intersticial por mecanismos não claros que podem envolver a ativação da imunidade inata. Nós investigamos a hipótese de que a exposição prolongada de células tubulares a altas concentrações de proteínas estimula a imunidade inata, desencadeando inflamação intersticial progressiva e lesão renal. Além disso, investigamos se a inibição específica da imunidade inata ou adaptativa proporcionaria renoproteção em um modelo estabelecido de proteinúria maciça, nefropatia por adriamicina (ADR). Os ratos adultos Munich-Wistar receberam uma dose única de ADR (5 mg / kg iv), sendo acompanhados por 2, 4 e 20 semanas. A albuminúria maciça foi associada à ativação precoce das vias da imunidade inata NF-?B e NLRP3, cuja intensidade correlacionou-se fortemente com a densidade da infiltração de linfócitos. Além disso, os ratos ADR exibiram sinais claros de estresse oxidativo renal. Vinte semanas após a administração de ADR, observaram-se fibrose intersticial intensa, glomerulosclerose e perda da função renal. A administração de micofenolato de mofetil (MMF), 10 mg / Kg / dia, impediu a ativação da imunidade inata e adaptativa, bem como do estresse oxidativo renal e fibrose renal. Além disso, o tratamento MMF foi associado com a mudança de MØ do tipo M1 para o fenótipo M2. Nas células cultivadas de NRK52-E, o excesso de albumina aumentou o teor de proteína de TLR4, NLRP3, Caspase-1, IL6, IL1-beta, MCP-1, alfa-SMA e COLL-1. O silenciamento do TLR4 e / ou NLRP3 mRNA atenuou esse comportamento proinflamatório / profibrótico. A ativação simultânea de imunidade inata e adaptativa podem ser fundamentais para o desenvolvimento de lesão renal em doenças altamente proteinúricas. A inibição da imunidade inata e/ou adaptativa podem constituir uma estratégia para prevenir a DRC nesse contexto / Protein overload of proximal tubular cells can promote interstitial injury by unclear mechanisms that may involve activation of innate immunity. We investigated the hypothesis that prolonged exposure of tubular cells to high protein concentrations stimulates innate immunity, triggering progressive interstitial inflammation and renal injury. In addition, we investigated whether specific inhibition of innate or adaptive immunity would provide renoprotection in an established model of massive proteinuria, adriamycin (ADR) nephropathy. Adult male Munich-Wistar rats received a single dose of ADR (5 mg/kg iv), being followed for 2, 4 or 20 weeks. Massive albuminuria was associated with early activation of both the NF-kB and NLRP3 innate immunity pathways, whose intensity correlated strongly with the density of lymphocyte infiltration. In addition, ADR rats exhibited clear signs of renal oxidative stress. Twenty weeks after ADR administration, marked interstitial fibrosis, glomerulosclerosis and renal functional loss were observed. Administration of mycophenolate mofetil (MMF), 10 mg/Kg/day, prevented activation of both innate and adaptive immunity, as well as renal oxidative stress and renal fibrosis. Moreover, MMF treatment was associated with shifting of M0 from the M1 to the M2 phenotype. In cultivated NRK52-E cells, excess albumin increased the protein content of TLR4, NLRP3, Caspase-1, IL6, IL- 1beta, MCP-1, alpha-actin and collagen-1. Silencing of TLR4 and/or NLRP3 mRNA abrogated this proinflammatory/profibrotic behavior. Simultaneous activation of innate and adaptive immunity may be key to the development of renal injury in heavily proteinuric disease. Inhibition of innate and/or adaptive immunity may constitute a strategy to prevent CKD in this setting

O excesso de adenina na dieta (ADE) promove precipitação intrabular de cristais, levando a uma nefrite intersticial progressiva com perda de função renal. Estudo recente demonstrou que esse processo requer ativação do sistema NF-kB. No presente estudo investigamos o possível envolvimento de outros componentes da imunidade inata, além do NF-kB. Verificamos também a hipótese de que a nefropatia associada aos cristais continua a progredir mesmo depois de cessada a sobrecarga de adenina. Foram estudados ratos Munich-Wistar machos e adultos sem tratamento (C) ou recebendo 0.5% de ADE na dieta. Após 1 semana, a ADE foi removida da dieta e os animais foram seguidos por 4 ou 24 semanas. A administração de ADE por 1 semana promoveu uma inflamação intersticial aguda, com perda de função renal, alteração da pressão caudal, sem alterações glomerulares. Os mediadores da imunidade inata, como TLR2, TLR4, inflamassoma NLRP3, IL1beta e IL-6, apresentaram-se ativados sem, no entanto, ativar o sistema NF-kB. Após cessada a sobrecarga de ADE, a inflamação persistiu, com infiltração por macrófagos, expressão elevada de AngII, deposição progressiva de colágeno e, na fase mais tardia, glomeruloesclerose, caracterizando um processo inflamatório crônico, autônomo, que não contou com a participação do eixo NLR/IL1beta. Em contraste, o sistema NF-kB foi ativado, sendo um dos possíveis estímulos a produção intra-renal de AngII. Dois mecanismos patogênicos podem ser identificados neste estudo: 1) agudo, associado à ativação do eixo NLR-IL1beta; 2) crônico, associado à produção de AngII renal e à ativação do sistema NF-kB / Excess adenine in the diet (ADE) promotes intratubular crystal precipitation, leading to progressive interstitial nephritis and loss of renal function. A recent study has shown that this process requires activation of the NF-kB system. In the present study we investigated the possible involvement of other components of innate immunity, in addition to NF-kB, as well as whether nephropathy associated with excess adenine continues to progress even after dietary cessation. Male Munich-Wistar rats without treatment (C) or receiving 0.5% of ADE in the diet were studied. After 1 week, ADE was removed from the diet and the animals were followed for 4 or 24 weeks. Administration of ADE for 1 week promote acute interstitial inflammation, with loss of renal function, alteration of caudal pressure, without glomerular changes. Mediators of innate immunity, such as TLR2, TLR4, NLRP3 inflamassome, IL1beta and IL-6 , were shown to be activated, with no apparent activation of the NF-kB system. In the late phases of the model, the inflammation persisted, with significant infiltration by macrophages, high expression of AngII, progressive collagen deposition and glomerulosclerosis, characterizing a chronic, autonomic inflammatory process that did not involve the participation of the NLR/IL1beta axis. By contrast, the NF-kB system was activated, with intra-renal AngII production as a possible stimulus. Two mechanisms operated this study: 1) an acute one, associated with activation of the NLR-IL1beta axis; 2) a chronic one, associated with intrarenal AngII production and NF-kB activation

Orientador: Morgana Rodrigues Guimarães Stabili / Resumo: Células dendríticas têm papel crucial na patogênese das doenças periodontais por orquestrarem a resposta imune adaptativa e por seu papel como precursoras de osteoclastos. A sinalização via Akt tem importante papel em processos como metabolismo, proliferação, apoptose e também na resposta imune. Evidências indicam que Akt1 tem papel de regulador endógeno negativo da resposta inflamatória; porém pode tanto estimular quanto inibir a osteoclastogênese. Considerando que as células dendríticas participam tanto da inflamação/resposta imune quanto do turnover do tecido ósseo como células precursoras de osteoclastos, propusemos avaliar através de um estudo in vivo o papel da atividade de Akt1 na inflamação associada a interações microbiota-hospedeiro, bem como investigar in vitro os efeitos desta via de sinalização sobre os diferentes eventos biológicos das células dendríticas. Para o estudo in vivo foi utilizado um modelo de doença periodontal experimental induzida por P. gingivalis e Fusobacterium nucleatum, em um modelo de animais transgênicos com deleção gênica condicional. Os desfechos avaliados foram: inflamação (morfometria), reabsorção óssea (μCT), osteoclastogênese (IHC), anticorpos específicos para P.gingivalis e Fusobacterium nucleatum (ELISA). No estudo in vitro foi avaliado o papel da via de sinalização Akt1 sobre as seguintes atividades das células dendríticas: proliferação, apoptose, atividade fagocitária, migração, apresentação de antígeno e osteoclastogênese. Resulta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dendritic cells play a crucial role in the pathogenesis of periodontal diseases by orchestrating the adaptive immune response and their role as osteoclasts precursors. Akt signaling plays an important role in processes such as metabolism, proliferation, apoptosis and also in the immune response. Evidence indicates that Akt1 plays a role of negative endogenous regulator of the inflammatory response; but can both stimulate and inhibit osteoclastogenesis. Considering that dendritic cells participate in both inflammation/immune response and turnover of bone tissue as osteoclast precursor cells, we have proposed to evaluate in a vivo study the role of Akt1 activity in inflammation associated with microbiota-host interactions, as well as to evaluate in vitro the role of the Akt1 signaling pathway in dendritic cell biology. In vivo study was employed a model of experimental periodontal disease induced by P. gingivalis and Fusobacterium nucleatum in transgenic animals model with conditional gene deletion. The outcomes evaluated were: inflammation (morphometry), bone resorption (μCT), osteoclastogenesis (IHC), antibodies specific for P.gingivalis and Fusobacterium nucleatum (ELISA). In vitro study was evaluated the role of Akt1 signaling pathway on the following outcomes related to dendritic cell biology: proliferation, apoptosis, phagocytic activity, migration, antigen presentation and osteoclastogenesis The results showed that signaling via Akt1 in dendritic cells seems to play an i... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A acidificação oceânica, resultante do aumento da concentração de CO2 atmosférico, vem alterando a química dos oceanos resultando na diminuição de seu pH. Diversos estudos avaliaram as consequências dessa diminuição no pH oceânico nas taxas de calcificação, reprodução e desenvolvimento em diversos modelos marinhos, entretanto estudos relacionados a outros processos fisiológicos, como a imunidade, e estudos com indivíduos adultos são escassos. Ouriços-do-mar são espécies aderidas ao substrato, importantes para a ciclagem de nutrientes no ambiente marinho, sendo também animais utilizados como bioindicadores para monitoramento ambiental; assim o estudo da resposta imune inata desses animais frente à acidificação dos oceanos é de extrema importância para prever possíveis alterações fisiológicas desses animais e sua capacidade de adaptação. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as alterações provocadas pela acidificação oceânica na resposta imune e no balanço ácido base de duas espécies de ouriço-do-mar tropicais: Lytechinus variegatus e Echinometra lucunter durante as estações de verão e inverno; para isso foram analisados os índices fagocíticos, a capacidade de adesão e espraiamento celular dos amebócitos fagociticos além do balanço acido base do liquido celomático após o período de 24 horas e cinco dias de exposição aos pHs 7,6 e 7,3. Foi também avaliada a capacidade de recuperação dessas espécies com o objetivo de verificar se os parâmetros alterados pela exposição conseguiam ser reestabelecidos. Os resultados mostraram que a redução no pH da água do mar alterou a proporção celular, reduziu a capacidade de fagocitose e espraiamento dos amebócitos fagocíticos assim como também afetou o balanço ácido-base do líquido celomático. Foram encontradas diferenças também entre as estações do ano sendo estas encontradas apenas na espécie Lytechinus variegatus. O teste de recuperação mostrou que os parâmetros alterados pela exposição tendem a retornar aos valores controles, mostrando que em curto prazo essas alterações podem não ser irreversíveis, entretanto, mais estudos são necessários principalmente avaliando períodos de exposição prolongados. Juntos nossos resultados mostram que a acidificação oceânica prejudica parâmetros imunes extremamente importantes para a eliminação de patógenos e consequentemente a sobrevivência desses animais em um futuro oceano acidificado. / Ocean acidification due to increased atmospheric CO2 concentration is altering ocean chemistry resulting in the decrease of its pH. Several studies evaluated the effects of this decrease in ocean pH on calcification rates, reproduction and development in different marine models, however studies related to other physiological processes such as immunity and studies with adult animals are scarce. Sea urchins are species adhered to the substrate, important for nutrient cycling in the marine environment, also being used as bioindicators for environmental monitoring. Thus the study of the innate immune response of these animals due to the acidification of the oceans is extremely important to predict possible physiological changes of these animals and their ability to adapt to this condition. This study aimed to evaluate the changes caused by ocean acidification in the immune response and in the acid-base balance of two sea urchin tropical species: Lytechinus variegatus and Echinometra lucunter during seasons of summer and winter; for this, indexes of phagocytosis, cell adhesion and spreading ability were analyzed in addition to the acid-base balance of the coelomic fluid after 24 hours and five days of exposure to pH 7.6 and 7.3The recover ability of these species were also evaluated in order to verify if the parameters altered by exposition could be reestablished. The results shows that a reduction in the seawater pH changed the cell proportion, reduced the ability of phagocytosis and phagocytic amoebocyte spreading as well as affected the acid-base balance of the coelomic fluid. Differences were also found between seasons, but only in the specie Lytechinus variegatus. The recovery test showed that the parameters altered by exposure tend to return to control values, showing that in the short term these changes may not be irreversible, however, further studies are necessary mainly those related to prolonged periods of exposure. Together our results show that ocean acidification impairs immune parameters extremely important for the elimination of pathogens and consequently the survival of these animals in a future acidified ocean.

Introdução: Os receptores Fc são proteínas de importância crucial no processo saúde-doença. São responsáveis pela ativação de mecanismos efetores e modulam a resposta imune e inflamatória. Têm papel central na patogênese de doenças autoimunes, sepse e doenças neoplásicas. O lúpus, protótipo das doenças autoimunes e a sepse, infecção grave que causa disfunção orgânica, são doenças inflamatórias nas quais o papel dos receptores Fc vêm sendo desvendados. Essas patologias têm alta morbidade e mortalidade, impondo enormes custos para sociedade. A descoberta que a E. coli se liga ao receptor CD16 (FcGamaRIII) para evadir-se do sistema imune, através da ligação com a proteína wzxe presente em sua membrana, torna esse receptor um alvo terapêutico interessante. O CD16 é um FcGamaR com ITAM que classicamente tem função ativadora e gera respostas inflamatórias ao se ligar a imunocomplexos. Porém, na sepse, a ligação direta com a E. coli induz uma ativação ITAMi, que bloqueia a produção de ROS e inibe a fagocitose e a morte desta bactéria. A manipulação dessa ativação inibitória (ITAMi), aparentemente anti-inflamatória, pode ser uma estratégia efetiva para o tratamento de doenças inflamatórias como a sepse e o lúpus. Inicialmente visamos avaliar a importância fisiológica e o papel terapêutico do peptídeo ligante do CD16, em modelo de sepse e em modelo de lúpus induzido por pristane, respectivamente. De maneira similar ao CD16, o CD89 (FcAlfaRI) é capaz de mediar uma sinalização dual, ativatória ou inibitória, que depende da forma como se dá sua ligação às imunoglobulinas e imunocomplexos. Por isso, num segundo momento, averiguamos se o FcAlfaRI (CD89) poderia se ligar à bactérias de maneira direta, na ausência de ligantes cognatos e mediar respostas pro ou anti-inflamatórias, protegendo ou não o hospedeiro. Metodologia: Camundongos C57Bl/6, WT e CD16KO com lúpus induzido por pristane, foram tratados com o peptídeo CYWGGTEGAC(IRG Bioscience,USA). A expressão gênica e protéica de diversas citocinas, assim como genes associados a assinaturas de interferon foram avaliados nos pulmões desses animais. Utilizamos também um modelo de sepse através da injeção intra-peritoneal de E. coli WT e E. coli mutante wzxe -/-, no qual avaliamos mortalidade e produção de citocinas. Realizamos experimentos in vitro com BMM e BMDC murinos, fagócitos humanos e bactérias. A expressão de CD89 e de receptores cognatos foi avaliada através de citometria de fluxo. Empregamos a citometria de fluxo com imagem para análise da fagocitose. Foram realizados também, experimentos in vivo com camundongos WT e transgênicos: CD89tg, CD89R209Ltg CD89tgCD16KO, CD16KO e PCRKO. Comparamos mortalidade, produção de citocinas, quantidade de bactérias e lesão tecidual em modelos de CLP e de pneumonia por administração nasal de S. pneumoniae. Produção de ROS pelos BMM foi avaliada por microscopia confocal e, nos PMN, por quimioluminescência. Imunoprecipitação e immunoblotting foram utilizados para avaliar recrutamento de syk e SHP-1. Utilizamos ELISA para ensaios de ligação de bactérias com CD89 e para quantificar TNF-Alfa, IL-1 e IL-6. Resultados: Camundongos injetados com a bactéria mutante wzxe-/- sobreviveram mais e produziram quantidade menor de citocinas reforçando o papel chave da proteína wzxe, no mecanismo de evasão imune da E. coli. Camundongos WT e CD16KO com lupus induzido por pristane, tratados ou não com peptídeo CYWGGTEGAC, não apresentaram diferenças na expressão gênica nem protéica de citocinas nem em genes associados a assinaturas de interferon em seus pulmões. O CD89 interage diretamente com bactérias gram-positivas e gram-negativas. A interação bactéria-CD89 em macrófagos murinos induz ativação celular, fagocitose e morte bacteriana, que são dependentes da cadeia FcRGama. Essa mesma interação protege contra a mortalidade em dois modelos de sepse (CLP e pneumonia) e é dependente da cadeia FcRGama e indepedente de PCR e IgA anti-bactéria. Conclusões: O CD16 e o CD89 são FcRs com ITAM que apresentam uma dualidade na forma de ativação através do ITAM, que em algumas situações pode ser inibitória (ITAMi). Nessa tese reforçamos o papel chave da proteína wzxe, ligante do CD16, como responsável pela evasão bacteriana da E. coli através de sinalização ITAMi. Por outro lado, falhamos em demostrar diferenças após o tratamento de camundongos com lúpus induzido por pristane usando o peptídeo CYWGGTEGAC. Acreditamos que isso tenha ocorrido devido a dose inadequada do peptídeo ou proteólise por enzimas endógenas do camundongo, assim que o peptídeo é injetado. Novas doses ou a manipulação da estrutura do peptídeo são perspectivas futuras para este projeto. Quanto ao CD89, provamos seu papel extremamente importante na imunidade inata. Esse receptor, à semelhança do CD16, foi capaz de ligar-se diretamente a bactérias, na ausência de opsoninas e ligantes cognatos. O CD89 foi protetor tanto para infecção por gram-positivo quanto por gram-negativo enquanto o CD16 foi protetor apenas em modelo de pneumonia por gram-positivo / Introduction: Fc receptors are proteins of crucial importance in the health-disease process. They are responsible for the activation of effector mechanisms and modulate the immune and inflammatory responses. They play a central role in the pathogenesis of autoimmune diseases, sepsis and neoplastic diseases. Lupus, a prototype of autoimmune diseases and sepsis, a serious infection that causes organ dysfunction, are inflammatory diseases in which the role of Fc receptors has been unraveled. These pathologies have high morbidity and mortality, imposing enormous costs for society. E. coli has been found to bind directly to the FcGammaRIII(CD16) receptor to evade the immune system. This is due to the binding to the wzxe protein present in its membrane, making this receptor an interesting therapeutic target. CD16 is an FcGammaR with ITAM that classically has an activating function and generates inflammatory responses when binding to immunocomplexes. However, in sepsis, direct binding with E. coli induces an ITAMi activation, which blocks ROS production and inhibits phagocytosis and death of this bacterium. The manipulation of this apparently anti-inflammatory inhibitory signaling (ITAMi) may be an effective strategy for the treatment of inflammatory diseases such as sepsis and lupus. Initially we aimed to evaluate the physiological importance and therapeutic role of the CD16 binding peptide, in a sepsis model and pristane-induced lupus model, respectively. Similarly to CD16, CD89 (FcAlphaRI) is capable of mediating dual, activating or inhibitory signaling, which depends on how it binds to immunoglobulins and immunocomplexes. Therefore, we assessed whether FcAlphaRI (CD89) could bind to bacteria directly, in the absence of cognate ligands and mediate pro or anti-inflammatory responses, protecting or not the host. Methods: C57Bl/6 mice, WT and CD16KO with pristane-induced lupus were treated with the peptide CYWGGTEGAC (IRG Bioscience, USA). Gene and protein expression of cytokines, as well as genes associated to interferon signatures were evaluated in the lungs of these animals. We also used a sepsis model through the intra-peritoneal injection of E. coli WT and E. coli mutant wzxe-/-, in which we evaluated mortality and production of cytokines. We performed in vitro experiments with murine BMM and BMDC, human phagocytes and bacteria. Expression of CD89 and cognate receptors was assessed by flow cytometry. Flow cytometry with imaging was employed for phagocytosis analysis. In vivo experiments were also performed on WT and transgenic mice: CD89tg, CD89R209Ltg CD89tgCD16KO, CD16KO and CRPKO. We compared the mortality, cytokine production, amount of bacteria and tissue injury in CLP and pneumonia by nasal administration of S. pneumoniae. ROS production by BMM was evaluated with confocal microscopy and, in PMN, by chemiluminescence. Immunoprecipitation and immunoblotting were used to evaluate recruitment of syk and SHP-1. We used ELISA for binding assays with CD89 and bacteria and quantification of TNF-Aphla, IL-1 and IL-6. Results: Mice injected with wzxe-/- mutant E. coli survived more and produced smaller amounts of cytokines, reinforcing the key role of the wzxe protein in the mechanism of immune evasion of E. coli. WT and CD16KO pristane induced lupus mice, treated or not with the peptide CYWGGTEGAC didn\'t show differences in gene or protein expression of cytokines nor in interferon signature genes in their lungs. The bacterial-CD89 interaction in murine macrophages induces cellular activation, phagocytosis and bacterial death, which are dependent on the FcRGamma chain. This same interaction protects against mortality in two models of sepsis (CLP and pneumonia) and is dependent on the FcRGamma chain and independent of PCR and IgA anti-bacterium. Conclusions: CD16 and CD89 are ITAM-bearing FcRs that present a duality in the form of activation through ITAM, which in some situations may be inhibitory (ITAMi). In this thesis we reinforce the key role of wzxe protein, a CD16 ligand, as responsible for the bacterial evasion of E. coli through ITAMi signaling. On the other hand, we failed to demonstrate differences after treatment of pristane-induced lupus mice using the CYWGGTEGAC peptide. We believe that this was due to inadequate dose of the peptide or proteolysis by endogenous mouse enzymes, so the peptide is injected. New doses or manipulation of the peptide structure are future prospects for this project. As to CD89, we proved the extremely important role of CD89 in innate immunity. That receptor, similarly to CD16, was able to bind directly to bacteria, in the absence of opsonins and cognate ligands. CD89 was protective for both gram-positive and gram-negative infection while the CD16 was protective only in a model of gram-positive pneumonia

A atividade do sistema nervoso central (SNC) afeta aquela do sistema imune e esta por sua vez, através de produtos originados em células imunes, como por exemplo, as citocinas modificam a atividade cerebral e, portanto, alguns comportamentos. O ato de conviver com pessoas portadoras de um tumor ou de patologias crônicas debilitantes tem sido estudado por vários pesquisadores, os quais têm relatado evidencias que mostram ser algumas condições psicológicas experimentadas por ?caregivers? associadas com variações de comportamento e de imunidade. Manifestações de estresse têm sido intensamente estudadas nestas pessoas. Neste sentido, e guardado os devidos cuidados com as extrapolações, não existe um modelo animal especificamente desenvolvido para analisar, em laboratório, as eventuais alterações imunes que possam ocorrer em animais que convivem com um outro doente. Este foi o objeto do presente trabalho. Mais especificamente, avaliou-se a existência de uma possível interação neuroimune em camundongas que coabitaram com outras portadoras de um tumor de Ehrlich, através da análise de parâmetros hematológicos, imunológicos, hormonais, comportamentais e neuroquímicos. Os resultados obtidos mostraram que a convivência por 11 dias com um animal portador do tumor de Ehrlich produziu em camundongas: 1) leucopenia; 2) diminuição do burst oxidativo induzido por PMA e por S. aureus e da porcentagem e, também da intensidade de fagocitose de neutrófilos sanguíneos; 3) aumento do burst oxidativo e redução da porcentagem, mas não alterou a intensidade de fagocitose de macrófagos ativados pelo ONCO-BCG; 4) diminuição da resistência ao crescimento de um tumor de Ehrlich, isto é, aumentou a concentração de células tumorais/ml de líquido ascítico e o número total de células tumorais; 5) redução do número de leucócitos circulantes em animais inoculados com o tumor de Ehrlich; 6) diminuição dos níveis hipotalâmicos de noradrenalina e aumento daqueles de dopamina e de MHPG; 7) aumento do ?turnover? de noradrenalina no hipotálamo e de dopamina no córtex frontal; 8) aumento dos efeitos da anfetamina sobre alguns parâmetros da atividade locomotora dos animais observados no campo aberto; 9) potenciou os efeitos de um tratamento com diazepam, reduzindo ainda mais o burst oxidativo induzido por PMA e por S. aureus assim como os efeitos do fármaco sobre a porcentagem e a intensidade de fagocitose de neutrófilos sanguíneos. No entanto, esta convivência não modificou a média do número de eritrócitos, a porcentagem do hematócrito e o volume corpuscular médio, assim como a atividade de macrófagos peritoneais residentes e, não interferiu com os níveis de corticosterona sérica dos animais. Em seu conjunto, os presentes resultados mostraram que a convivência com animais portadores de um tumor ascítico de Ehrlich produziu alterações comportamentais, neuroquímicas e imunológicas, que guardam grande similaridade com sinais e sintomas relatados em caregivers. Estas alterações foram interpretadas como decorrentes de uma situação de estresse psicológico prolongado vivenciado pelas camundongas companheiras de conspecíficas portadoras de um tumor. Mais especificamente, postulou-se, neste trabalho, sejam as alterações observadas decorrentes de um aumento de atividade catecolaminérgica no SNC e/ou de ativação do SNAS. A semelhança dos resultados obtidos em companheiras de animais doentes com aqueles de caregivers permitiu sugerir, tomados os devidos cuidados com extrapolações, seja o modelo experimental agora usado de alguma utilidade para a compreensão da situação vivenciada por estes caregivers / The activity of the central nervous system (CNS) affects the immune system, which by means of products molecules synthesized by its cells, modify the activity of the CNS, and, consequently, animal behavior. People that care for and support the needs of patients bearing tumors or with chronic, debilitating diseases, have been studied by many groups, with evidences pointing towards an association between some psychological conditions experienced by caregivers and changes in behavior and immunity. Stress-associated symptoms have been intensely studied in these people. Thus, taking into account the required grounds reasonable comparisons, there was no description of a suitable model for laboratory analysis of possible changes in immunity of animals cohabiting with a sick cage-mate. Therefore, the objective of this study was to establish a suitable model for this purpose. We particularly aimed on possible neuroimmune interaction in female mice that had cohabited with Ehrlich tumor-bearing mice, using for comparison hematological, immune, hormonal, behavioral, and neurochemical parameters. The results of this study show that cohabiting with a sick mate - mice bearing the Ehrlich tumor - for 11 days induced, in female mice: 1) leukopenia; 2) decrease in PMA- or S. aureus-induced oxidative burst, and also of the percentage and intensity of phagocytosis by circulating neutrophils; 3) increase in oxidative burst and reduction in the percentage, but did not influence intensity of phagocytosis by ONCO-BCG-activated macrophages; 4) decrease in the resistance to the progression of the Ehrlich tumor, shown by the enhanced concentration of tumor cells per ml of the ascitic fluid, and total number of tumor cells; 5) reduction in the number of circulating leukocytes in animals injected with the Ehrlich tumor; 6) diminished hypothalamic levels of noradrenaline and increased those of dopamine and MHPG in the same region; 7) increased the turnover of noradrenaline in the hypothalamus, and of dopamine in the frontal cortex; 8) enhanced the effects of amphetamine on several parameters of motor activity observed in the open field arena; 9) potentiated the effects of diazepam, reducing the PMA- or S. aureus-induced oxidative burst, and on the percentage and intensity of phagocytosis by circulating neutrophils even further. Nonetheless, cohabiting with the sick mate did not alter the red cell count, the hematocrit, or the mean cell volume, nor did it influence the activity of resident peritoneal macrophages or interfere with serum corticosterone levels. Altogether, these findings show that cohabiting with animals bearing the ascitic Ehrlich tumor caused behavioral, neurochemical, and immunological changes compatible with those presented and described by caregivers. These changes are interpreted as related to a sustained, long-term situation of psychological stress experienced by the conspecific female healthy mates of the tumor-bearing mice. In particular, we postulate in this study that the changes observed might be driven by the increased cathecolaminergic activity in the CNS and/or by the activation of the sympathetic branch of the autonomic nervous system (SANS). The resemblance of the results obtained here and those seen in human caregivers allows the careful suggestion that this model may be relevant to help understanding the situation experienced by caregivers

Introdução: Chlamydia trachomatis (CT) é causa da infecção sexualmente transmitida de origem bacteriana mais comum. Na mulher, a infecção genital pela CT pode causar cervicite, uretrite, endometrite, salpingite. Infecções persistentes ou recorrentes provavelmente representam um importante fator de risco para o desenvolvimento de sequelas associadas, como dor pélvica crônica, gravidez ectópica e infertilidade por fator tubário. A lectina ligadora de manose (MBL), componente doo sistema imune inato, tem importante papel na defesa antimicrobiana, reconhecendo vírus, fungos e patógenos bacterianos. O gene que codifica para a MBL é polimórfico, e a substituição de um único nucleotídeo resulta na produção de uma proteína instável, que é rapidamente degradada. Objetivo: Avaliar se mulheres brasileiras portadoras de um polimorfismo do gene da MBL apresentam diferentes susceptibilidades para a ocorrência de obstrução tubária, na presença ou ausência de uma infecção prévia por Chlamydia trachomatis. Métodos: Em estudo caso-controle, foram avaliadas 75 pacientes com obstrução tubária e 75 pacientes com tubas pérvias, atendidas na Divisão de Ginecologia do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo (HCFMUSP). Anticorpos IgG anti-CT foram mensurados através de um ensaio de imunoabsorção enzimática para investigar uma infecção prévia pela CT. Para o polimorfismo, realizou-se coleta de células bucais e o DNA extraído foi analisado através de reação em cadeia da polimerase (PCR), digestão de endonuclease e gel de eletroforese, utilizando pares de primers específicos para a região polimórfica. Todo material foi mantido a -80°C e enviado em gelo seco para a Division of Immunology and Infectious Diseases da Weill Cornell Medicine em Nova York. Associações entre genótipos de MBL ou alelos e permeabilidade tubária foram analisadas pelo teste de qui-quadrado de Pearson com ou sem correção de Yates. Resultados: Não houve diferença na detecção de anticorpos da CT entre os grupos. Mulheres com tubas obstruídas tiveram uma prevalência maior do genótipo AB (36%) versus (16%), resultado estatisticamente significativo (p < 0,01). De maneira semelhante, a distribuição do alelo A e do alelo variante B também apresentaram diferenças significantes entre os grupos (p < 0,01). Conclusão: Os achados sugerem, que embora a exposição à Chlamydia trachomatis tenha sido semelhante em ambos os grupos, a presença do alelo variante B do gene que codifica para a MBL aumenta o risco de desenvolvimento da obstrução tubária, subsequente à infecção pela CT ou outros agentes infecciosos. Nas mulheres brasileiras avaliadas a presença de tal polimorfismo genético aumentou a probabilidade de obstrução tubária em consequência de uma infecção do trato genital / Introduction: Chlamydia trachomatis (CT) is the cause of the most common bacterial sexually transmitted infection. In women, genital CT infection may cause cervicitis, urethritis, endometritis, salpingitis. Persistent or recurrent infections probably represent an important risk factor for the development of associated sequelae, such as chronic pelvic pain, ectopic pregnancy and tubal factor infertility. Mannose-binding lectin (MBL), a component of the innate immune system, has an important role in antimicrobial defense, recognizing viral, bacterial and fungal pathogens. The gene coding for MBL is polymorphic and a single nucleotide substitution results in production of an unstable protein, that is rapidly degraded. Objective: To evaluate whether Brazilian women with a polymorphism in the MBL gene present different susceptibilities to the occurrence of fallopian tube damage, in the presence or absence of a previous infection by CT. Method: In a case-control study, 75 patients with tubal obstruction and 75 patients with patent tubes were studied, all seen at the Gynecology Division of the Hospital das Clínicas of the University of São Paulo (HCFMUSP). IgG anti-CT antibodies were measured by enzyme-linked immunoassay to investigate a previous CT infection. For the polymorphism analysis, buccal cells were collected and the extracted DNA was analyzed by polymerase chain reaction (PCR), endonuclease digestion and gel electrophoresis using primer pairs specific for the polymorphic region. All material was maintained at -80 ° C and sent on dry ice to the Division of Immunology and Infectious Diseases at Weill Cornell Medicine in New York. Associations between MBL genotypes or alleles and tubal permeability were analyzed by the Pearson chi-square test with or without Yates correction. Results: There was no difference in CT antibody detection between the two groups. Women with obstructed tubes had a higher prevalence of being positive for the heterogenous genotype AB (36%) versus (16%) (p < 0.01). Similarly, the distribution of the normal A allele and variant B allele were also significant different between the two groups (p < 0,01). Conclusion: The findings suggest that while exposure to CT was similar in both groups of women the presence of the variant MBL B allele increases the risk for development of tubal obstruction, subsequent to a CT or other infection. In the Brazilian women evaluated possession of this genetic polymorphism increased the likelihood that blocked fallopian tubes will be a consequence of a genital tract infection