INTRODUÇÃO: A doença pneumocócica invasiva (DPI) tem alta mortalidade sendo o pulmão órgão de intenso acometimento. Na DPI caracterizou-se localmente importante processo inflamatório agudo com expressivo aumento de macrófagos, polimorfonucleares e fenômenos exsudativos como edema e hemorragia intra-alveolar. Concretizou-se uma resposta inflamatória proeminente com redução dos fenômenos de apoptose que se traduziu por aumento significativo de citocinas pró-inflamatórias, exceto IL-6 e IL-8, aumento de Toll-2, ativação do complemento, aumento de expressão de ICAM- 1 e CD 14 que em conjunto favorecem o estabelecimento dos fenômenos inflamatórios. A diminuição significativa das células NK e das células de Langherhans, IL-6 e IL-8 reflete comprometimento da imunidade inata. Tal comprometimento poderia ser responsável pela diminuição dos linfócitos TCD4+ e TCD8+ com consequente baixa produção de IFN. Em resumo, as lesões teciduais graves na DPI seriam decorrentes do comprometimento parcial da imunidade inata, em especial das células NK e das células de Langherhans, do prejuízo da imunidade adaptativa e da redução da apoptose como possível estratégia defensiva do pneumococo / INTRODUCTION: Invasive pneumococcal disease (IPD) is a condition with high mortality rates, the lungs being intensely attacked. The in situ immune response was determined, in blocks recovered from 22 necropsies of adults who died from IPD in the lungs, by quantitative immune cell phenotype (CD57-NK, CD1a, CD68, antigen S-100, TCD4, TCD8, CD20), Complement-C3, ICAM-1, CD14, Caspase-3 and cytokine (interferon , TNF, TGF, interleukin - IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL- 10), Toll-2 and SP-A (surfactant). A locally important acute inflammation process was characterized in IPD, with significant rise in macrophages, neutrophils and exsudative phenomena such as edema and intra-alveolar hemorrhage. Compared with the lungs from age-matched controls, results from patients with IPD showed significant depletion of NK, CD1a,CD4+, CD8+, CD20+ cells, interferon , IL-4, IL- 6 , IL-8, TGF and Caspase-3 (apoptosis). On the other hand, S-100, Toll-2, IL-1, IL-2R, IL-10, ICAM-1, CD14 and SP-A were more frequently seen in the alveoli of patients with IPD than in controls. A pronounced inflammatory response was detected, with decrease in apoptosis phenomena that translated into significant increase of pro-inflammatory cytokines, except for IL-6 and IL-8, increase in Toll-2, complement activation, increased ICAM-1 and CD-14 expression, which altogether favored installation of the inflammatory processes. A significant decrease in NK and Langherhans cells, IL-6 and IL-8 reflect the harm to the innate immune system. This could respond for the decrease in TCD4+ and TCD8+ lymphocytes, with a consequent low IFNy output. Briefly, the severe tissue lesions in IPD could be a consequence of the partial damage to the innate immunity, particularly of NK and Langherhans cells, of adaptive immune dysfunction, and of apoptosis reduction possibly as a defense strategy of the pneumococcus

INTRODUÇÃO: Os receptores Toll-like 2 e 4 (TLR-2 e TLR-4) são capazes de ativar células imunes inatas em resposta a bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, respectivamente. Na artrite psoriásica (APs), doença articular inflamatória crônica, fatores genéticos, ambientais e infecciosos parecem estar envolvidos. OBJETIVO: Avaliar as expressões dos receptores: TLR-2; TLR-4; CD114 e do CD116 em monócitos e neutrófilos do sangue periférico de pacientes com APs e adicionalmente a prevalência do HLA-B27. MÉTODOS: Quarenta e cinco pacientes com diagnóstico de APs conforme os critérios CASPAR e 32 indivíduos saudáveis foram estudados. Dentre os 45 pacientes, 27 apresentavam APs ativa (DAS28 > 2,6) e 18 APs inativa (DAS28 < 2,5). A leitura das expressões do TLR-2, TLR-4, CD14, CD66, CD114, CD116 e do HLA-B27 foi realizada por citometria de fluxo no FACSCalibur da marca Becton-Dickson, utilizando anticorpos monoclonais da BD Biosciences, anti-humanos produzidos em murino. Os anticorpos monoclonais (AcMo) para marcar receptores de membrana empregados foram: CD14 conjugado com PerCP-Cy5.5 para marcar população de monócitos; CD66 conjugado com PE e FITC para população de neutrófilos; CD114 para marcar receptor de fator estimulatório de colônias de granulócitos e CD116 para marcar receptor de fator estimulatório de colônia de granulócitos-macrófagos. A análise estatística utilizou o teste U de Mann-Whitney e o teste exato de Fisher. Os valores obtidos em porcentagem foram expressos como média ± intervalo interquartil, de acordo com uma distribuição não-paramétrica, avaliados pelo teste de Shapiro-Wilk. RESULTADOS: Demonstramos aumento de expressão do TLR-2 em monócitos periféricos de pacientes com APs, APs ativa e APs inativa comparados aos controles (p < 0,002; p < 0,001 e p < 0,04, respectivamente). A expressão do TLR-4 foi similar nos pacientes com APs, APs ativa e APs inativa e controles (p < 0,23; p < 0,33 e p < 0,29, respectivamente). A expressão do receptor GCSF (CD114) e do receptor GM-CSF (CD116) foi similar nos pacientes e controles nas populações de monócitos e neutrófilos (p > 0,05). O HLA-B27 foi positivo em 1/3 dos pacientes com APs e 6% dos controles. Nos pacientes HLA-B27+ comparados aos controles HLA-B27+, a porcentagem de expressão do TLR-2 nos monócitos foi significantemente maior (p < 0,004). CONCLUSÃO: O aumento da expressão do TLR-2 em monócitos de pacientes com APs reforça o papel da imunidade inata e sugere que a exposição a bactérias Gram-positivas possa ter um papel na indução da resposta inflamatória nesta doença / INTRODUCTION: Toll-Like receptors 2 and 4 (TLR-2 and TLR-4) are able of activating innate immune cells in response to Gram-positive and Gram-negative bacteria, respectively. In Psoriatic Arthritis (APs), chronic inflammatory joint disease and genetic, environmental and infectious factors seems to be involved. OBJECTIVES: Evaluate expressions of TLR-2; TLR-4; CD114 and CD116 receptors in monocytes and neutrophils from peripheral blood patients with APs and additionally the prevalence of HLA-B27. METHODS: Forty five patients diagnosed with APs according with CASPAR criteria and 32 health individuals were studied. Among the 45 patients, 27 presented active APs (DAS28 > 2,6) and 18 inactive APs (DAS28 < 2,5). The evaluation of the TRL-2, TLR-4, CD14, CD66, CD114, CD116 and HLA-B27 expressions was held by flow cytometry in FACSCalibur from Becton-Dickson, utilizing BD Biosciences\' monoclonal antibodies, anti-human produced in mice. The monoclonal antibodies (AcMo) used to mark membrane receptors were: CD14 in conjunction with PerCP-Cy 5.5 to mark population of monocytes; CD66 in conjunction with PE and FITC for population of neutrophils; CD114 to mark stimulatory factor receptor for granulocyte colonies and CD116 to mark stimulatory factor receptor for granulocyte-macrophage colony. The statistical analysis utilized Mann-Whitney\'s U test and Fisher\'s exact test. The values obtained as percentages were expressed as median ± interquartile range, consistent with a non-parametrical distribution, assessed by Shapiro-Wilk\'s test. RESULTS: Increased expression of TLR-2 in peripheral monocytes of patients with APs, active APs and inactive APs compared to controls (p < 0.002; p < 0.001 and p < 0.04, respectively). TLR-4 expression was similar in patients with APs, active APs and inactive APs and controls (p < 0.23; p < 0.33 and p < 0.29 respectively). The expression of the G-CSF (CCD114) receptor and GM-CSF (CD116) receptor were similar in patients and controls in populations of monocytes and neutrophils (p > 0.05). HLA-B27 was positive in 1/3 of the patients with APs and 6% of the controls. The percentage of expression of TLR-2 in HLA-B27 + patients compared to HLA-B27 + controls was significantly higher (p < 0.004). CONCLUSION: Increased of TLR-2 receptors expression in patients with APs monocytes reinforces the role of innate immunity and suggests that the exposure to Gram-positive bacteria may have a role in the induction of the inflammatory response in this diseases

Evidências clínicas e experimentais mostram que a isquemia e reperfusão intestinal (I/R-intestinal) induz lesão pulmonar aguda (LPA) que, em casos mais graves, pode evoluir para a síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA). A LPA se caracteriza pela liberação de amplo espectro de mediadores inflamatórios, infiltração de neutrófilos e aumento de permeabilidade vascular. Sabe-se que mediadores inflamatórios gerados no local da I/R-intestinal são transportados pelo sistema linfático mesentérico e, ao atingirem o pulmão, contribuem para a LPA. A enzima heme oxigenase 1 (HO-1), exerce importante função na homeostasia celular, devido à sua ação catabólica sobre o grupo heme das hemoproteínas, gerando como subprodutos ferro, biliverdina e monóxido de carbono. Esses subprodutos possuem ação antiinflamatória, antioxidante e antiapoptótica. Todavia, o papel da HO-1 no controle da LPA causada pela I/R-intestinal ainda não está totalmente esclarecido. No presente estudo investigamos a expressão da HO-1 e o efeito de sua indução sobre as repercussões pulmonares decorrentes da I/R-intestinal. Para tanto, ratos machos Wistar (220-250 g) foram submetidos a 45 min de isquemia intestinal pela obstrução da artéria mesentérica superior e a 2 h de reperfusão. O grupo controle consistiu de animais falsamente operados (Sham). Ainda, a indução da HO-1 foi realizada pelo tratamento dos animais com o composto Hemin (10 mg/kg) 48 e 24 h antes da indução da I/R-intestinal. A I/R-intestinal aumentou a atividade pulmonar da mieloperoxidase (MPO) e o extravasamento do corante azul de Evans (AE) no pulmão. Os níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b elevaram no explante pulmonar (24 h) enquanto os de IL-10 foram reduzidos após a I/R-intestinal. Ainda, a I/R-intestinal diminui a expressão pulmonar da SOD-1 e promoveu aumento da expressão da iNOS. Os resultados obtidos revelam que a I/R-intestinal por si só não induziu a expressão gênica da enzima HO-1, porém o tratamento dos animais com Hemin elevou a sua expressão, a qual foi acompanhada pela redução da atividade pulmonar de MPO e do extravasamento do corante AE. Os elevados níveis pulmonares de IL-1<font face=\"Symbol\">b foram reduzidos pelo tratamento dos animais com o Hemin e houve elevação da IL-10 e VEGF no mesmo tecidos. A indução da HO-1 preveniu o aumento dos níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b e IL-10 e promoveu aumento dos níveis de VEGF na linfa dos animais. Com respeito ao sistema antioxidante, nossos dados indicaram que a indução da HO-1, parece estar relacionada com a elevação da expressão de SOD-1, SOD-2 e redução da expressão de iNOS. Concluindo, os dados obtidos permitem sugerir que a indução prévia da expressão de HO-1 controla a magnitude da lesão pulmonar causada pela I/R-intestinal por mecanismos envolvendo o aumento da atividade de parcela do sistema antioxidante e regulação do balanço entre a geração de citocinas antiinflamatórias e pró-inflamatórias no pulmão. / Clinical and experimental evidences have reported that intestinal ischemia and reperfusion (I/R-intestinal) induces acute lung injury (ALI), which in severe cases can progress to acute respiratory distress syndrome (ARDS). The ALI is characterized by the release of a broad spectrum of inflammatory mediators, neutrophil infiltration and increased vascular permeability. It is known that inflammatory mediators generated at the site of I/R-intestinal are transported by the mesenteric lymphatic system and, on reaching the lung, contribute to the ALI. The enzyme heme oxygenase 1 (HO-1) plays an important role in cellular homeostasis, due to its catabolic action on heme group of hemoproteins, forming as by-products such as iron, biliverdin and carbon monoxide. It is known that these by-products have anti-inflammatory, antioxidant and antiapoptotic actions. However, the role of HO-1 in the control of ALI caused by I/R-intestinal is not yet fully understood. In the present study we investigated the expression of HO-1 and the effects of its induction on pulmonary complications resulting from I/R-intestinal. So, male Wistar rats (220-250 g) were subjected to 45 min of intestinal ischemia by occlusion of the superior mesenteric artery and 2 h of reperfusion. The control group consisted of animals falsely operated (Sham). Still, the induction of HO-1 was performed by treating animals with the compound Hemin (10 mg/kg) 48 and 24 h before the induction of I/R-intestinal. The I/R-intestinal increased the pulmonary activity of the myeloperoxidase (MPO) and the extravasation of Evans blue dye (EB) in the lung. Levels of IL-1<font face=\"Symbol\">b increased in lung explant (24 h) while the IL-10 were reduced after I/R-intestinal. Further, the I/R-intestinal reduces pulmonary expression of SOD-1 and promoted the increase of iNOS expression. The results indicate that the I/R-intestinal alone did not induce gene expression of HO-1 enzyme, but the treatment of animals with Hemin increased its expression which was accompanied by reduction of pulmonary activity of MPO and extravasation of the dye EB. The high pulmonary levels of IL-1 were reduced by treatment of animals with Hemin and there was an increase of IL-10 and VEGF in the same tissue. The Induction of HO-1 prevented the increased levels of IL-<font face=\"Symbol\">b 1 and IL-10 and promoted increasing of the VEGF levels in the animals lymph. With respect to the antioxidant system, our data indicate that induction of HO-1, seems to be related to the elevation of expression of SOD-1, SOD-2 and reduction of iNOS expression. In conclusion, our data may suggest that prior induction of HO-1 expression controls the magnitude of lung injury caused by I/R-intestinal by mechanisms involving increased activity of a portion of the antioxidant system and regulation of the balance between generation anti-inflammatory cytokines and pro-inflammatory in the lung.

INTRODUÇÃO: Os receptores Toll-like 2 e 4 (TLR-2 e TLR-4) são capazes de ativar células imunes inatas em resposta a bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, respectivamente. Na artrite psoriásica (APs), doença articular inflamatória crônica, fatores genéticos, ambientais e infecciosos parecem estar envolvidos. OBJETIVO: Avaliar as expressões dos receptores: TLR-2; TLR-4; CD114 e do CD116 em monócitos e neutrófilos do sangue periférico de pacientes com APs e adicionalmente a prevalência do HLA-B27. MÉTODOS: Quarenta e cinco pacientes com diagnóstico de APs conforme os critérios CASPAR e 32 indivíduos saudáveis foram estudados. Dentre os 45 pacientes, 27 apresentavam APs ativa (DAS28 > 2,6) e 18 APs inativa (DAS28 < 2,5). A leitura das expressões do TLR-2, TLR-4, CD14, CD66, CD114, CD116 e do HLA-B27 foi realizada por citometria de fluxo no FACSCalibur da marca Becton-Dickson, utilizando anticorpos monoclonais da BD Biosciences, anti-humanos produzidos em murino. Os anticorpos monoclonais (AcMo) para marcar receptores de membrana empregados foram: CD14 conjugado com PerCP-Cy5.5 para marcar população de monócitos; CD66 conjugado com PE e FITC para população de neutrófilos; CD114 para marcar receptor de fator estimulatório de colônias de granulócitos e CD116 para marcar receptor de fator estimulatório de colônia de granulócitos-macrófagos. A análise estatística utilizou o teste U de Mann-Whitney e o teste exato de Fisher. Os valores obtidos em porcentagem foram expressos como média ± intervalo interquartil, de acordo com uma distribuição não-paramétrica, avaliados pelo teste de Shapiro-Wilk. RESULTADOS: Demonstramos aumento de expressão do TLR-2 em monócitos periféricos de pacientes com APs, APs ativa e APs inativa comparados aos controles (p < 0,002; p < 0,001 e p < 0,04, respectivamente). A expressão do TLR-4 foi similar nos pacientes com APs, APs ativa e APs inativa e controles (p < 0,23; p < 0,33 e p < 0,29, respectivamente). A expressão do receptor GCSF (CD114) e do receptor GM-CSF (CD116) foi similar nos pacientes e controles nas populações de monócitos e neutrófilos (p > 0,05). O HLA-B27 foi positivo em 1/3 dos pacientes com APs e 6% dos controles. Nos pacientes HLA-B27+ comparados aos controles HLA-B27+, a porcentagem de expressão do TLR-2 nos monócitos foi significantemente maior (p < 0,004). CONCLUSÃO: O aumento da expressão do TLR-2 em monócitos de pacientes com APs reforça o papel da imunidade inata e sugere que a exposição a bactérias Gram-positivas possa ter um papel na indução da resposta inflamatória nesta doença / INTRODUCTION: Toll-Like receptors 2 and 4 (TLR-2 and TLR-4) are able of activating innate immune cells in response to Gram-positive and Gram-negative bacteria, respectively. In Psoriatic Arthritis (APs), chronic inflammatory joint disease and genetic, environmental and infectious factors seems to be involved. OBJECTIVES: Evaluate expressions of TLR-2; TLR-4; CD114 and CD116 receptors in monocytes and neutrophils from peripheral blood patients with APs and additionally the prevalence of HLA-B27. METHODS: Forty five patients diagnosed with APs according with CASPAR criteria and 32 health individuals were studied. Among the 45 patients, 27 presented active APs (DAS28 > 2,6) and 18 inactive APs (DAS28 < 2,5). The evaluation of the TRL-2, TLR-4, CD14, CD66, CD114, CD116 and HLA-B27 expressions was held by flow cytometry in FACSCalibur from Becton-Dickson, utilizing BD Biosciences\' monoclonal antibodies, anti-human produced in mice. The monoclonal antibodies (AcMo) used to mark membrane receptors were: CD14 in conjunction with PerCP-Cy 5.5 to mark population of monocytes; CD66 in conjunction with PE and FITC for population of neutrophils; CD114 to mark stimulatory factor receptor for granulocyte colonies and CD116 to mark stimulatory factor receptor for granulocyte-macrophage colony. The statistical analysis utilized Mann-Whitney\'s U test and Fisher\'s exact test. The values obtained as percentages were expressed as median ± interquartile range, consistent with a non-parametrical distribution, assessed by Shapiro-Wilk\'s test. RESULTS: Increased expression of TLR-2 in peripheral monocytes of patients with APs, active APs and inactive APs compared to controls (p < 0.002; p < 0.001 and p < 0.04, respectively). TLR-4 expression was similar in patients with APs, active APs and inactive APs and controls (p < 0.23; p < 0.33 and p < 0.29 respectively). The expression of the G-CSF (CCD114) receptor and GM-CSF (CD116) receptor were similar in patients and controls in populations of monocytes and neutrophils (p > 0.05). HLA-B27 was positive in 1/3 of the patients with APs and 6% of the controls. The percentage of expression of TLR-2 in HLA-B27 + patients compared to HLA-B27 + controls was significantly higher (p < 0.004). CONCLUSION: Increased of TLR-2 receptors expression in patients with APs monocytes reinforces the role of innate immunity and suggests that the exposure to Gram-positive bacteria may have a role in the induction of the inflammatory response in this diseases

Os trabalhos na área de neuroimumomodulação vêm contribuindo de forma marcante para o entendimento da regulação/modulação das respostas adaptativas dos organismos frente ao estresse ou às doenças. Sabe-se que o ato de um animal conviver com outro doente leva a alterações imunes e comportamentais, assim como acontece em humanos, nos caregivers. Nos animais foi comprovado que o odor liberado pelo outro doente é a fonte de estresse para todas essas alterações neuroimunes. Estudos em camundongos fêmeas mostraram uma diminuição de imunidade inata, alteração de comportamento; redução da atividade de neutrófilos e menor resistência ao crescimento de tumores em companheiros de animais doentes. O presente estudo teve como objetivo avaliar alterações neuroimunes em camundos machos que conviveram por 11 dias com um companheiro doente portador de um tumor ascítico de Ehrlich, e avaliar a participação do eixo Hipotálamo-Pituitária-Adrenal (HPA) e do Sistema Nervoso Autônomo Simpático (SNAS) no fenômeno observado. Os resultados obtidos mostraram que esta convivência: 1) não alterou os níveis séricos de corticosterona; 2) não modificou o peso relativo da glândula adrenal; 3) aumentou os níveis plasmáticos de adrenalina e noradrenalina; 4) diminuiu o burst oxidativo de neutrófilos induzido por PMA e por S. aureus, porém não modificou a porcentagem e a intensidade de fagocitose; 5) diminuiu a resistência ao crescimento de um tumor ascítico de Ehrlich; 6) aumentou os níveis de TNF-&alpha;, INF-&gamma; e IL-6 após 24 horas e de TNF-&alpha; e IL-6 após 48 horas de incubação de esplenócitos com LPS; 7) não modificou o comportamento avaliado no campo aberto; 8) aumentou o turnover de noradrenalina no córtex frontal, diminuiu os níveis de noradrenalina no bulbo olfatório, diminuiu os níveis de HVA, um metabólito da dopamina, no hipotálamo e no bulbo e aumentou os níveis de serotonina e seu metabólito 5HIAA no córtex frontal; 9) não modificou a expressão IL-1, IL-6 e TNF-&alpha; no hipotálamo e no córtex frontal. Em seu conjunto, os presentes resultados mostram que a convivência de camundongos machos com portadores de um tumor ascítico de Ehrlich, o que representa aqui um estresse prolongado, embora não tenha alterado o comportamento dos machos e a atividade do eixo HPA, modificou nestes animais a atividade do SNAS, reduzindo a imunidade inata dos animais. Conclui-se então, estar o SNAS envolvido com as alterações de imunidade inata desencadeadas em camundongos machos pela convivência com um companheiro doente. / Studies in the neuroimmunomodulation area have markedly contributed to the understanding of the regulation / modulation of the organisms adaptive responses against stressors or diseases. Cohabitation with a sick cage mate leads to immune and behavioral changes, similar to those reported in humans, called caregivers. In animals, it was shown that the odor released by the tumor injected partner is pivotal for the stress response they presented and for all the neuroimmune changes reported that included: a decreased innate immunity, altered behavior such as increased levels of locomotion and decreased resistance to tumor growth. Following this line of research, the present study aimed to evaluate the possible neuroimmune changes presented by males mice that lived for 11 days with a sick cage mate, i.e., carrier of an Ehrlich ascitie tumor; a search for the pathways responsible for the observed effects was also an objective of the present work. Our results showed that cohabitation with a sick cage mate produced in male mice: 1) increased levels of plasmatic adrenaline and noradrenaline, 2) decreased neutrophil oxidative burst after PMA and S. aureus stimulatior, but no changes in the percentage and intensity of neutrophil phagocytosis, 3) decreased organic resistance to an Ehrlich tumor growth 4) increased levels of TNF-&alpha;, INF-&gamma; and IL-6 24 hours after and TNF-&alpha; and IL-6 48 hours after splenocytes stimulation with LPS, 5) increased turnover of norepinephrine in the frontal cortex, decreased levels of norepinephrine in the olfactory bulb, reduced levels of HVA in the bulb and hypothalamus and increased levels of serotonin and its metabolite 5HIAA in the frontal cortex. Further analysis, showed no changes in: 6) serum corticosterone; 7) the relative weight of adrenal glands; 8) behavior assessed by open field, 9) IL-1, IL-6 and TNF-&alpha; expression in both hypothalamus and frontal cortex. Taken together our results, showed that cohabitation with a male sick cage mate taken here as a source of a prolonged stress induced in male mice a decrease in their innate immunity, most probably thought SANS stimulation and peripheral cytokine changes. As reported for female mice, the HPA axis was also not changed in male companion of tumor injected mice. Furthermore and importantly, our data showed some neuroimmune differences between male and female responses to the condition imposed, being the males less sensible than females. Differences in hormonal status and/or in the ethological predisposition and response of male and female mice the stress of living with a sick cage mate were discussed and taken as the possible causes for the observed discrepancies.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-10-10T17:44:44Z No. of bitstreams: 1 TES_MARCELO_COMERLATO_SCOTTA_PARCIAL.pdf: 764551 bytes, checksum: c0c80d3ce62b46010267cea06e3e262c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T17:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_MARCELO_COMERLATO_SCOTTA_PARCIAL.pdf: 764551 bytes, checksum: c0c80d3ce62b46010267cea06e3e262c (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / Background/Aim: According to experimental data, interferon type I has a key role in innate immune response against influenza infection. Studies on humans are still scarce and the characterization of interferon response in children may help to identify patients at risk. Our aim is to compare respiratory levels of interferon-? and influenza disease severity in pediatric patients. Methods: Children aged less than five years of age with influenza-like illness seeking pediatric care within the first 72 hours of disease onset were prospectively included. Clinical and demographic data and respiratory secretions through nasal wash were obtained. Influenza infection was confirmed with Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction and respiratory levels of interferon-? were measured by ELISA. Enrolled individuals were followed until the end of disease. Patients whose influenza infection was excluded were used as control group. Results: Twenty four patients with confirmed influenza infection were included, five of them requiring hospitalization. Subtypes A(H3N2) and B were confirmed in ten and fourteen patients, respectively. Seventy-six patients without influenza, 39 of them hospitalized, were included as controls. Age younger than 6 months was significantly more frequent in individuals from both hospitalized groups compared to outpatients (59% vs 23.2%, p<0.01). All other clinical and demographical data were similar among groups. Median levels of interferon-? were significantly higher in outpatients with influenza than both inpatients with influenza and patient without influenza, hospitalized or not (p<0.001). Median in pg/ml (interquartile amplitude) were 263.2 (58.3-634), 0 (0-49), 0 (0-2.6) and 0 (0-19.4) in four groups above, respectively. Conclusion: Lower levels of interferon-? in patients with more severe influenza reinforce experimental evidence about its protective role in influenza infection severity. / Introdu??o/objetivo: Interferon tipo I exerce um papel central na resposta imune inata contra a infec??o por influenza de acordo com dados experimentais. Evid?ncias em humanos ainda s?o incipientes e a caracteriza??o da resposta do interferon pode auxiliar na estratifica??o de risco. Nosso objetivo ? comparar os n?veis de interferon-? em secre??es respirat?rias entre pacientes hospitalizados e ambulatoriais com infec??o por influenza confirmada laboratorialmente. M?todos: Foram inclu?dos prospectivamente pacientes com idade inferior a cinco anos com s?ndrome gripal atendidos no hospital com menos de 72 horas do in?cio do quadro cl?nico. Dados cl?nicos e demogr?ficos, al?m de secre??es respirat?rias atrav?s de lavado nasal foram coletados. A infec??o por influenza foi confirmada por Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction. N?veis respirat?rios de interferon-? foram aferidos por ELISA. Os pacientes inclu?dos, inclusive os n?o hospitalizados, foram seguidos at? o final do quadro cl?nico. Pacientes com infec??o por influenza descartada foram utilizados como grupo controle. Resultados: Vinte e quatro pacientes com infec??o por influenza confirmada foram inclu?dos, cinco destes hospitalizados. Os subtipos A(H3N2) e B foram confirmados em dez e quatorze pacientes, respectivamente. Setenta e seis pacientes sem influenza, 39 desses hospitalizados, foram utilizados como controles. A idade inferior a seis meses foi significativamente mais frequente nos pacientes hospitalizados, com ou sem influenza (59% vs 23.2%, p<0.01). Todas as outras vari?veis cl?nicas e demogr?ficas foram semelhantes entre os grupos. Os n?veis de interferon-? foram significativamente maiores em crian?as com influenza n?o hospitalizadas em compara??o com crian?as hospitalizadas com influenza e com os controles hospitalizados e n?o hospitalizados (p<0.001). A mediana em pg/ml (amplitude interquartil) foi 263.2 (58.3-634), 0 (0-49), 0 (0-2.6) e 0 (0-19.4) nos quatro grupos acima, respectivamente. Conclus?o: Os n?veis mais baixos de interferon-? nos pacientes com quadros mais graves de influenza refor?am evid?ncias experimentais sobre o papel protetor do interferon na infec??o por esse v?rus.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T16:12:26Z No. of bitstreams: 1 Bernardo Simões Franklin.pdf: 11748497 bytes, checksum: e1831598c734af4113b0028438c1b84f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T16:12:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bernardo Simões Franklin.pdf: 11748497 bytes, checksum: e1831598c734af4113b0028438c1b84f (MD5) Previous issue date: 2009 / Desde sua descoberta, os receptores do tipo Toll (TLRs) têm sido envolvidos em quase todas as doenças que afetam a saúde humana. Seu papel na proteção contra vários patógenos, incluindo protozoários está bem estabelecido. Entretanto, pouco se sabe sobre o papel dos TLRs na malária. No presente estudo, investigamos o papel dos TLRs durante a malária murina e humana. Nossos resultados mostraram que camundongos com deficiência para MyD88, um adaptador essencial para a sinalização dos TLRs, produzem níveis de citocinas pró-inflamatórias significativamente menores e apresentam sintomas mais amenos durante a infecção por Plasmodium chabaudi. Entretanto, estes animais retêm a capacidade de controlar a parasitemia sugerindo que os TLRs possuam um papel na patogênese e não na proteção contra a malária. Posteriormente, mostramos que ambas, a infecção natural humana por P. falciparum e a experimental murina por P. chabaudi, aumentam a expressão e a responsividade dos TLRs nas células do sistema imune inato. O estado hiper-responsivo das células durante a malária é derivado da ativação de TLR9 e a produção de IFN por células T, levando a uma alta susceptibilidade ao choque séptico durante a malária aguda. Finalmente, em colaboração com a EISAI Research Institute, desenvolvemos um antagonista de TLR9 e testamos seu efeito na Malária Cerebral (CM), uma das manifestações clínicas mais graves da malária. O tratamento oral com este composto inibiu os sintomas, tais como extravasamento vascular cerebral, protegendo camundongos da morte por CM. Em conjunto, nossos resultados mostram um importante papel dos TLRs, especialmente TLR9, na patogênese da malária e que a intervenção na função destes receptores é uma potencial quimioterapia anti-inflamatória contra essa doença. / Toll-like receptors (TLRs) have been involved in almost every know disease that afflict human health so far and their role in resistance to several pathogens, including protozoan parasites, has been well established. The role of TLRs in malaria, however, still remains to be elucidated. Here we studied the role of TLRs in experimental and naturally acquired malaria infection. We showed that mice with deficiency to MyD88, an essential adaptor to TLRs signaling, produce significant lower levels of proinflammatory cytokines and commensurate better clinical outcome upon infection with Plasmodium chabaudi. Nevertheless, these mice can still control parasite loads suggesting that TLRs are involved in pathogenesis rather than protection during malaria. We further studied cellular responsiveness of innate immune responses during human and murine malaria. We showed that both natural acquired P. falciparum infection in humans and experimental infection of mice with P. chabaudi increase TLR expression in innate immune cells causing pro-inflammatory priming of TLR responses. The cellular hyper-responsiveness during Malaria is caused by TLR9 activation and IFN production by T cells conferring high susceptibility to septic shock during the acute disease. Finally, in collaboration effort with EISAI Research Institute, we develop and tested an antagonist of TLR9, on Cerebral Malaria (CM), one of the most severe manifestations of malaria. Oral treatment of mice with this compound inhibited CM symptoms, such as vascular leakage, and prevented death from CM. All together our results show an important role of TLRs, especially TLR9, in malaria pathogenesis and that the therapeutic targeting of TLRs is a potential anti-inflammatory chemotherapy against malaria.

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-09-12T18:16:09Z No. of bitstreams: 1 TeseNSS.pdf: 3636561 bytes, checksum: af079696a221c11c574fe705355778f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-13T18:23:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseNSS.pdf: 3636561 bytes, checksum: af079696a221c11c574fe705355778f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-13T18:23:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseNSS.pdf: 3636561 bytes, checksum: af079696a221c11c574fe705355778f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T18:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseNSS.pdf: 3636561 bytes, checksum: af079696a221c11c574fe705355778f8 (MD5) Previous issue date: 2015-08-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The increase of fish production in intensive systems involves the use of antimicrobians in the treatment of diseases caused by bacteria. Therefore, the aim of this study was to evaluate acute toxicity (CL50; 48h) of the antimicrobial azithromycin (AZT) for fingerlings of tilapia (Oreochromis niloticus), the effects on young tilapia, after chronic exposure (14 days) via hematological analysis, morphology gills, liver and kidneys and antioxidant system responses in the liver, and to determine the efficacy of control of Aeromonas hydrophila via hematological analysis and innate immune response, in addition to the morphological effects gills, kidneys and liver and antioxidant system responses in the liver. The acute toxicity (LC50; 48h) of the AZT to tilapia was > 100 mg L-1 being th AZT classified as practically non-toxic. After chronic exposure, there was an increase in hematocrit (Hct), hemoglobin concentration (Hb) and in the mean corpuscular volume of erythrocytes (MCV) and no change in the other variables of the red series was observed. The leukocytes increased after exposure to 100 mg L-1 AZT. Histological changes in gills suggest defense response against irritant agent and indicate normal structure and function of the organ; in the kidney no changes was observed and in the liver changes were classified as moderate to severe. In the efficacy trial, the offering of medicated food with AZT (100 and 125 mg kg-1) to animals infected with A. hydrophila was efficient and all of the treated animals survived; of the untreated animals 22% came to death. The Hct decreased and the hematimetric indices mean corpuscular hemoglobin and mean corpuscular hemoglobin concentration increased, the percentage of lymphocytes decreased and the percentage of neutrophil increased in untreated infected animals, but were unchanged in animals treated with AZT. No change occurred in innate immunity assessed by the activity of lysozyme, complement system and leukocytes respiratory burst activity. Gills showed no changes that could interfere in the organ function, in the liver changes were classified from mild to moderate and didn´t occurred alterations in the kidneys. Animals treated with AZT showed no adverse effects related to defense cells and the innate immune activity. The drug also caused no changes in antioxidant defense enzymes in the animals' liver after chronic exposure and did not generate oxidative stress. After challenge with A. hydrophila occurred an increased in the activity of catalase, glutathione peroxidase, glutathione transferase and glutathione level in the liver of animals treated with AZT and the glutathione level decreased in the infected group and untreated. These responses suggest that infection caused by A. hydrophila can induce an increased production of ROS and, consequently, stimulated responses of the antioxidant defenses. These responses were effective to prevent the occurrence of oxidative stress. / O aumento da produção de peixes em sistema intensivo implica no uso de antimicrobianos em tratamento de doenças causadas por bactérias. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar toxicidade aguda (CL50;48h) do antimicrobiano azitromicina (AZT) para alevinos de tilápia (Oreochromis niloticus). Os seus efeitos em jovens de tilápia, após exposição crônica (14 dias), pela análise hematológica, morfologia de brânquias, fígado e rins e respostas do sistema antioxidante no fígado, assim como a determinação da eficácia sobre Aeromonas hydrophila, pela análise hematológica e resposta imune inata, além dos efeitos morfológicos em brânquias, fígado e rins e respostas do sistema antioxidante no fígado. A toxicidade aguda (CL50;48h) da AZT para tilápia foi > 100 mg L-1 sendo classificada como praticamente não tóxico. Após exposição crônica, ocorreu aumento do hematócrito (Hct), concentração de hemoglobina (Hb), e no volume corpuscular médio dos eritrócitos (VCM) sem alterações nas demais variáveis da série vermelha. Os leucócitos aumentaram após exposição a 100 mg L-1 de AZT. As alterações histológicas nas brânquias sugerem resposta de defesa contra agente irritante e indicou estrutura e função normal do órgão; nos rins não ocorreu alterações e no fígado foram classificadas como moderadas a severas. No ensaio de eficácia, com ração medicada com AZT (100 e 125 mg kg-1) aos animais infectados com A. hydrophila se mostrou eficiente, e todos os animais tratados sobreviveram. A mortalidade no grupo não tratado foi de 22 %. O hematócrito diminuiu e os índices hematimétricos, hemoglobina corpuscular média e a concentração de hemoglobina corpuscular média aumentaram. A porcentagem de linfócitos diminuiu e a de neutrófilos aumentou nos animais infectados não-tratados, mas sem alteração nos animais tratados. Não ocorreu alteração na imunidade inata, avaliada pela atividade da lisozima, sistema complemento e “burst” respiratório dos leucócitos. As brânquias não apresentaram alterações que interferissem na função do órgão. No fígado as alterações foram classificadas de leves a moderadas, sem alteração nos rins. Animais tratados com AZT não apresentaram efeitos adversos relacionados às células de defesa e atividade imune inata. O fármaco também não causou alterações nas enzimas de defesa antioxidantes no fígado dos animais após exposição crônica, sem estresse oxidativo. Após desafio com A. hydrophila ocorreu aumento da atividade da catalase, glutationa peroxidase, glutationa transferase e nível de glutationa no fígado dos animais tratados com AZT e o nível de glutationa diminuiu no grupo infectado e não tratado. Estas respostas sugerem que a infecção causada pela A. hydrophila pode induzir o aumento da produção de espécies reativas de oxigênio e, consequentemente, estimulou as respostas das defesas antioxidantes. Essas respostas foram eficientes para evitar a ocorrência de estresse oxidativo. / FAPESP: 2011/21552-6

Os mecanismos imunológicos que governam a interação entre o fungo Paracoccidioides brasiliensis e o hospedeiro têm sido pouco estudados. Tanto os componentes do fungo como os receptores dos fagócitos envolvidos nesta interação são pouco conhecidos. Baseados nestes fatos, nosso trabalho teve por objetivo caracterizar in vitro e in vivo o envolvimento do receptor Toll Like-2 (TLR-2) e da proteína adaptadora MyD88 (myeloid differentiation primary response gene 88) na infecção de camundongos pelo P. brasiliensis. O TLR-2 é um receptor da imunidade inata envolvido no reconhecimento de PAMPs (padrões moleculares associados aos patógenos), enquanto que MyD88 é uma molécula envolvida na sinalização celular induzida por muitos TLRs e que culmina com a ativação de vários fatores de transcrição, entre eles o NFB, envolvidos na ativação de genes ligados à resposta inflamatória. Para tanto, utilizamos camundongos C57Bl/6 deficientes e normais para TLR-2 e para MyD88. Demonstramos que, comparado ao grupo controle, animais TLR2-/- apresentavam uma infecção pulmonar menos grave associada com menor síntese de óxido nítrico (NO). Resultados equivalentes foram obtidos com macrófagos peritoneais e alveolares infectados in vitro. Inesperadamente, apesar das diferenças na carga fúngica, ambas as linhagens apresentavam tempo médio de sobrevida semelhante e lesões pulmonares de gravidade equivalente. Os estudos com leucócitos infiltrantes de pulmão revelaram um aumento de leucócitos polimorfonucleares neutrófilos (PMNs) nos animais TLR-2-/- associado com um menor número de linfócitos TCD4+ e TCD8+ ativados. Animais TLR-2-/- deficientes apresentaram uma discreta diferença quanto à síntese de citocinas pulmonares dos tipos Th1 e Th2, porém estes animais apresentaram maiores níveis de KC, uma quimiocina CXC envolvida na quimiotaxia de neutrófilos, assim com maiores níveis de citocinas Th17 (IL-6, IL-17, IL-23 e TGF-). Além disso, a resposta imune Th17 desenvolvida por animais TLR-2-/- esteve associada com menor expansão de células T regulatórias CD4+CD25+FoxP3+. Assim, o TLR-2 controla a imunidade inata e adaptativa frente ao P. brasiliensis e regula negativamente a resposta imune Th17 e a patologia pulmonar. Em relação aos estudos com animais deficientes para a proteína adaptadora MyD88 na paracoccidioimicose verificamos que sua ausência resultou numa produção deficiente in vitro e in vivo de NO, além de uma produção deficiente in vivo de citocinas do tipo Th1, Th2 e Th17. Animais MyD88-deficientes infectados desenvolveram uma resposta imune prejudicada, evidenciada pelo menor número de macrófagos ativados, assim como uma imunidade adaptativa menos eficiente, evidenciada pelo menor número de células T CD4 ativadas que afluíram aos pulmões. Este quadro culminou com uma carga fúngica maior nos pulmões dos animais MyD88- deficientes, como também permitiu uma exuberante disseminação do fungo para outros órgãos, como fígado e baço. Os pulmões e o fígado apresentaram graves lesões com a presença de granulomas coalescentes e ricos agregados fúngicos. Assim, camundongos MyD88-deficientes não foram capazes de controlar a doença e morreram em um tempo mais curto que os animais MyD88-competentes, como evidenciado em experimentos de sobrevida. Assim, nossos achados demonstram que a sinalização intracelular mediada pela proteína MyD88 é importante para a ativação dos mecanismos fungicidas, assim como para a ativação das respostas imunes inata e adaptativa contra o P. brasiliensis. Em conjunto, nosso trabalho demonstra que tanto o TLR-2 quanto a molécula adaptadora MyD88 desempenham um papel relevante no controle da infecção, assim como na indução da resposta imune contra este patógeno fúngico primário. / The immunological mechanisms that govern the interaction between hosts and the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis have been scarcely studied. Both, fungal and phagocyte receptors involved in this interaction are poorly understood. Based on these facts, the aim of our study was to characterize in vitro and in vivo the role played by Toll Like Receptor-2 (TLR-2) and the adaptor protein MyD88 (myeloid differentiation primary response gene 88) in murine pulmonary paracoccidioidomycosis. The TLR-2 is a receptor of innate immunity involved in the recognition of PAMPs (pathogen associated molecular patterns), whereas MyD88 is a molecule involved in cell signaling induced by many TLRs . TLR-mediated activation results in the production of several nuclear transcription factors, including NFB, which activate important genes of the inflammatory response. Wild-type (WT) besides TLR- 2- and MyD88-deficient C57Bl/6 mice were used in our investigation. We showed that, compared to control animals, TLR2-/- mice developed a less severe pulmonary infection associated with reduced synthesis of nitric oxide (NO). Equivalent results were obtained with in vitro infected peritoneal and alveolar macrophages. Unexpectedly, despite the differences in fungal loads, TLR-2-/- and WT mice showed equivalent survival times and pulmonary lesions. Studies with lung infiltrating leukocytes revealed an increase of polymorphonuclear neutrophil leukocytes (PMNs) in TLR-2-/- mice associated with a low number of activated T CD4 and T CD8+ lymphocytes. Compared with WT mice, the TLR-2-deficient mice showed slight differences in the production of pulmonary Th1 and Th2 cytokines, but presented higher levels of KC, a CXC chemokine involved in neutrophil chemotaxis, besides increased levels of Th17 cytokines ( IL-6, IL-17, IL-23 and TGF-). Furthermore, the prevalent Th17 immune response developed by TLR-2-/- mice was associated with lower expansion of regulatory T cells CD4+CD25+FoxP3+. Thus, TLR-2 controls the innate and adaptive immunity against the P. brasiliensis infection and negatively regulates Th17 immune response and pulmonary pathology. Studies with MyD88-deficient mice showed an impaired production of NO in vivo and in vitro, and a deficient in vivo production of Th1, Th2 and Th17 cytokines. In addition, infected MyD88-deficient mice developed an impaired immune response, evidenced by poorly activated macrophages, as well as by an inefficient adaptive immunity mediated by a diminished influx of activated CD4+ T cells to the lungs. These events led to increased fungal loads in the lungs of MyD88-deficient mice and allowed a marked dissemination of the fungus to other organs such as liver and spleen, which presented severe lesions composed by coalescent granulomas containing high numbers of fungal cells. As consequence, MyD88-deficient mice were unable to control fungal growth and presented a decreased survival time. Our findings demonstrate that MyD88 signaling is important to the activation of fungicidal mechanisms and to the induction of the innate and adaptive immunity against P. brasiliensis. Altogether, our work shows that both TLR-2 and the adapter molecule MyD88, play an important role in controlling of P. brasiliensis infection, as well as in the induction of immune responses against this primary fungal pathogen.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5620_1.pdf: 8916043 bytes, checksum: 669ed68c15dd8910790b9473691f2d57 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Na ausência de um sistema imune adaptativo propriamente dito, os cnidários se valem de uma série de mecanismos bioquímicos e celulares que coletivamente compreendem sistemas da imunidade inata e são utilizados para o reconhecimento de micro-organismos, tanto parasitas quanto simbiontes. O objetivo do presente trabalho foi investigar se precursores gênicos relacionados a três polipeptídios envolvidos na resposta inata (CTL: lectina do tipo C, MBL: lectina ligante de manose e C3: componente 3 do sistema complemento) seriam expressos em Palythoa caribaeorum. Tendo como base dados moleculares descritos na literatura para os cnidários Nematostella vectensis, Pocillopora damicornis, Acropora millepora e Swiftia exserta, foram utilizadas duas estratégias metodológicas distintas para responder tal proposição: (1) síntese direta de cDNA a partir do RNAm e amplificação dos homólogos por RT-PCR e (2) construção de uma biblioteca de cDNA para propagação e resgate dos precursores completos (full length cDNAs). Ao todo, foram obtidos 11 produtos de RT-PCR (cDNAs amplificados), dos quais um se refere a um segmento similar a um domínio do receptor de imunoglobulinas das células NK (KIR), encontrado em gorilas. A presença de um domínio semelhante a KIR em P. caribaeorum sugeriria a existência de formas alternativas de imunidade antecipatória em cnidários. Tão importante quanto esse achado foi a obtenção de amplicons de CTL. Dessa forma, os níveis de expressão de transcritos de CTL foram comparados entre colônias sadias e doentes (em processo de branqueamento) de P. caribaeorum. Os resultados para o ensaio de expressão diferencial mostraram que a CTL teve uma expressão aumentada entre 63,2 e 65,5% nas colônias branqueadas, o que sugere um possível papel na resposta ao branqueamento, uma vez que essas moléculas participam do processo de reconhecimento celular. Esse resultado pode ser interpretado de duas formas: o aumento na transcrição de CTL após o branqueamento seria uma tentativa de proteção imediata contra patógenos ou estaria envolvido no recrutamento de novos simbiontes. Como um todo, o estudo de moléculas polipeptídicas da imunidade de cnidários é de importância considerável. Não somente fornece dados sobre a ancestralidade e evolução das reações imunes, mas também serve de base para uma série de aplicações de caráter científico e biotecnológico, que vão desde o monitoramento e conservação de espécies marinhas até estudos voltados ao tratamento e cura de doenças que acometem vertebrados superiores