Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciano_Stefanello.pdf: 1381556 bytes, checksum: 6bd57829a5462b5319b07e3a1fb7ba7a (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cassava culture has great importance for agriculture and for populations mainly those in development, for being a culture with high rusticity and productivity, but diseases have been reducing the productivity and invalidating croplands, as in the case of root rot. Therefore the aim of this study was to investigate the potential of Trichoderma to control root rot in cassava caused by Fusarium and Phytophthora, and to investigate the ability of Trichoderma to promote the development of culture and the use of Trichoderma combined with different varieties in both systems. Initially in vitro tests were performed with 23 isolates of Trichoderma spp., the pair of test cultures, production of volatile and non-volatile antimicrobial compounds, against Phytophthora drechsleri development and Fusarium solani, under field conditions cassava planting was realized using the range Fécula Branca in conventional system where at planting was performed spraying spore suspension six of Trichoderma isolates on cuttings in the planting furrow. A second experiment was performed in two culture systems with two varieties with and without Trichoderma harzianum application. For nonvolatiles antimicrobial compounds the isolate studied presented a high ability to reduce mycelial growth of P. drechsleri and F. solani with inibiting up to 100%, to evaluate nonvolatiles antimicrobial compounds produced by Trichoderma the results were less expressive with the maximum inhibition value of 23,87%. for the first experiment under field conditions,the isolated TLB 14 promoted a better root development, consequently providing more productivity, for the incidence of disease the isolates TOD2A, TLB14 and TI2 presented lower incidence. for the second experiment under field conditions, about the plant stand it was lower in range Baianinha and using T. harzianum, the incidence of brown streak was lower in conventional tillage and the productivity was higher in convencional tillage and using T. harzianum / A cultura da mandioca possui grande importância para as populações principalmente aquelas em desenvolvimento, por ser uma cultura com alta rusticidade e produtividade. No entanto doenças vem reduzindo a produtividade e inviabilizando áreas de cultivo como é o caso das podridões radiculares. Portanto o objetivo deste trabalho foi verificar o potencial de Trichoderma em controlar podridão radicular na mandioca causada por Fusarium e Phytophthora, além de investigar a capacidade do Trichoderma em promover o desenvolvimento da cultura e o uso de Trichoderma combinado com diferentes variedades em dois sistemas de cultivo. Inicialmente testes in vitro foram realizados com 23 isolados de Trichoderma spp., pelos testes de pareamento de culturas, produção de compostos antimicrobianos voláteis e não voláteis, frente ao desenvolvimento de Phytophthora drechsleri e Fusarium solani. Em condições de campo o plantio de mandioca foi realizado utilizando a variedade Fécula Branca em sistema convencional efetuando-se pulverização de suspenção de esporos de seis isolados de Trichoderma sobre as manivas dentro do sulco de plantio. Um segundo experimento foi realizado em condições de campo em dois sistemas de cultivo com duas variedades (IAC 90 e Baianinha) com e sem a aplicação de Trichoderma harzianum. Para compostos antimicrobianos não voláteis os isolados estudados apresentaram uma alta capacidade em reduzir o crescimento micelial de P. drechsleri e F. solani com inibição de até 100 %. Para a avaliação de compostos antimicrobianos voláteis produzidos por Trichoderma os resultados foram menos expressivos com valor de inibição máximo de 23,87 %. Para o primeiro experimento em condição de campo o isolado TLB 14 promoveu um melhor desenvolvimento radicular, consequentemente proporcionando maior produtividade, para a incidência de doença os isolados TOD2A, TLB14 e TI2 foram os que reduziram a incidência em raízes de mandioca. Para o segundo experimento em condições de campo, quanto ao estande de plantas ele foi menor na variedade Baianinha e com o uso de T. harzianum. A incidência de podridão radicular foi menor em sistema de plantio convencional e a produtividade foi maior em sistema de plantio convencional e com o uso de T. harzianum

Após a descoberta do primeiro peptídeo hormonal em 1991, uma nova família de moléculas de origem proteica, com características hormonais e que atuam na comunicação intracelular regulando crescimento, desenvolvimento, defesa e reprodução, vem sendo estudada em plantas. Após a descoberta das sisteminas em tabaco, foi isolada uma proteína com 5kDa que induz uma rápida alcalinização no meio de cultivo de células em suspensão. Este peptídeo, denominado RALF (Rapid ALkalinization Factor), é ubíquo no reino vegetal e na planta modelo Arabidopsis forma uma família de 37 isoformas (AtRALFs). O peptídeo AtRALF1 regula, negativamente, a expansão celular, atuando de forma antagônica aos brassinosteróides (BRs). Durante a busca por proteínas que interagissem com o AtRALF1, foi identificada a proteína de ligação a esteróide de membrana MSBP1 (MEMBRANE STEROID BINDING PROTEIN-1). A MSBP1 também atua como reguladora negativa da expansão celular e da sinalização de BRs. Este trabalho teve como objetivo a elucidação do papel da MSBP1 nas respostas mediadas por AtRALF1. Para tanto, buscou-se através de ferramentas genéticas e bioquímicas, um melhor entendimento da relação entre estas proteínas. No sistema de duplo híbrido de levedura, MSBP1 interage com AtRALF1, BAK1 e CML38, enquanto que BAK1 interage com AtRALF1, mas não interage com CML38. No mesmo sistema o peptídeo AtRALF1 interage com todas as proteínas, podendo então ser um ligante chave dessas interações, sugerindo a formação de um complexo. Plantas com baixa expressão de MSBP1 (irmsbp1) são, parcialmente, insensíveis ao peptídeo AtRALF1 e exibem raízes mais longas e células da endoderme maiores que as de plantas selvagens (Wt). Plantas com alta expressão de MSBP1 (35S:MSBP1) exibem raízes curtas e células da endoderme menores que as de plantas Wt. Resultados de expressão gênica em mutantes mostram que MSBP1 é essencial para a indução de genes responsivos ao peptídeo, que AtRALF1 induz a expressão do gene MSBP1 e que BAK1 é essencial para a indução de MSBP1 por AtRALF1. Os mutantes irmsbp1 mostraram uma alcalinização do meio quando tratados com AtRALF1, sugerindo que MSBP1 não é necessária para esta atividade. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que a proteína MSBP1 interage com o peptídeo AtRALF1, está envolvida na percepção do peptídeo, é essencial para a inibição do crescimento da raiz primária causada pelo AtRALF1 e para a indução dos genes responsivos ao AtRALF1. / After the discovery of the first hormonal peptide in 1991, a new family of peptide with hormonal characteristics and that act in the intracellular communication regulating growth, development, defense and reproduction, has been studied in plants. After the discovery of the sistemins in tobacco, a protein with 5kDa was isolated that induces a quick alkalinization in the culture medium of cells in suspension. This peptide, called RALF (Rapid AL kalinization Factor), is ubiquitous in the plant kingdom and in the model plant arabidopsis forms a family of 37 isoforms (AtRALFs). The AtRALF1 peptide negatively regulates cell expansion, acting in an antagonistic way to the brassinosteroids (BRs). During the search for proteins that interacted with AtRALF1, the membrane steroid binding protein MSBP1 (MEMBRANE STEROID BINDING PROTEIN-1) was identified. MSBP1 also acts as a negative regulator of cellular expansion and BRs signaling. This work aimed to elucidate the role of MSBP1 in the responses mediated by AtRALF1. In order to do so, a better understanding of the relationship between these proteins was sought through genetic and biochemical tools. In two-hybrid system, MSBP1 interacts with AtRALF1, BAK1 and CML38, whereas BAK1 interacts with AtRALF1, but does not interact with CML38. In the same system the AtRALF1 peptide interacts with all the proteins, being able to be a key ligand of these interactions, suggesting the formation of a complex. Plants with low expression of MSBP1 (irmsbp1) are partially insensitive to the AtRALF1 peptide and exhibit longer roots and endodermal cells larger than those of wild-type plants. Plants with high expression of MSBP1 (35S:MSBP1) exhibit short roots and endodermal cells smaller than those of Wt plants. Results of gene expression in mutants show that MSBP1 is essential for the induction of peptide responsive genes, that AtRALF1 induces MSBP1 gene expression and that BAK1 is essential for the induction of MSBP1 by AtRALF1. The irmsbp1 mutants did show an alkalinization of the medium when treated with AtRALF1, suggesting that MSBP1 is not required for this activity. Based on the results obtained, it is concluded that the MSBP1 protein interacts with the peptide AtRALF1, is involved in the perception of the peptide, is essential for the inhibition of primary root growth caused by AtRALF1 and for the induction of genes responsive to AtRALF1.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-31Bitstream added on 2014-06-13T18:44:29Z : No. of bitstreams: 1 garcia_gr_dr_jabo.pdf: 313576 bytes, checksum: 3615e7690e51b47d22430c998944cfd2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho objetivou caracterizar um isolado de Bacillus subtilis para utilização como agente probiótico para bovinos. Foram determinadas “in vitro” a capacidade e o tipo de efeito inibitório do isolado de B. subtilis do produto comercial Biotop sobre Salmonella, Escherichia coli e Clostridium perfringens, além de sua estabilidade, viabilidade, resistência a antimicrobianos e potencial de ação em comparação com a Nisina e em combinação com EDTA. Foram avaliados os efeitos da adição do isolado na dieta de 32 bezerros da raça Holandesa, em quatro diferentes tratamentos (controle; 1 g/dia; 2 g/dia e 4 g/dia), sobre o consumo de matéria seca, perímetro torácico, ganho de peso, consistência fecal e incidência de doenças. Também foi realizado um desafio com E. coli e monitoramento do “score” de fezes, temperatura retal (oC) e parâmetros sanguíneos. O isolado de B. subtilis foi mais eficaz contra C. perfringens, principalmente quando associado com a Nisina e EDTA. A adição do probiótico na dieta de bezerros aumentou o consumo de matéria seca, ganho de peso e perímetro torácico. No desafio bacteriano não foram observadas diferenças significativas para presença de Bacillus spp. e E. coli nas fezes. A análise do “score” de fezes, temperatura retal e parâmetros sanguíneos não demonstraram diferenças significativas entre os tratamentos. O produto avaliado demonstrou resultados satisfatórios quanto aos parâmetros de produção animal, sendo recomendada sua utilização para bezerros lactantes, principalmente na dosagem de 4 g/animal/dia. / The present work aimed to characterize an isolated of Bacillus subtilis to be used as a probiotic for calves. Were determinate in vitro its inhibition capacity and the type of effect of the isolated, that is present in the commercial product Biotop against Salmonella, Escherichia coli and Clostridium perfringens. It also was tested its stability, viability, resistance to antibiotics and its potential action in comparison with Nisin and in combination with EDTA. They were appraised the effects of the addition of the isolated in the diet of 32 calves Holstein Frisian in four different treatments (control; 1 g/day; 2 g/day and 4 g/day), over the intake of dry matter, thoracic perimeter, gain of weight, faecal consistence and incidence of diarrhoea. Also a challenge was accomplished with E. coli and the score of faeces monitored, rectal temperature (oC) and sanguine parameters. The isolated of B. subtilis was more effective against C. perfringens, mainly when associated with Nisin and EDTA. The addition of the probiotic in the diet of calves increased the dry matter intake, weight enhance and thoracic perimeter. In the bacterial challenge significant differences were not observed in the counting of Bacillus spp. and E. coli in the faeces. The analysis of the score of faeces, rectal temperature and sanguine parameters didn't demonstrate significant differences between the treatments. The appraised product demonstrated satisfactory results as for the parameters of animal production, being recommended to be use for nursing calves, mainly in the dosage of 4 g/animal/day.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-12-22T15:43:12Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Lia Muniz Barretto Fernandes.pdf: 1185581 bytes, checksum: a574788d65eeda6abbf9b9ce1dcc5ee9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-22T15:43:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Lia Muniz Barretto Fernandes.pdf: 1185581 bytes, checksum: a574788d65eeda6abbf9b9ce1dcc5ee9 (MD5) / Doença de Newcastle é uma enfermidade viral aguda, altamente contagiosa, que acomete aves de várias espécies, considerada como uma das doenças mais importantes para a indústria avícola moderna. Ferramentas para diagnóstico e controle estão disponíveis para galinhas, porém ainda não foram desenvolvidos testes específicos para avestruzes. O presente trabalho visou padronizar testes sorológicos para a detecção de anticorpos contra a Doença de Newcastle em avestruzes e avaliar a situação soroepidemiológica de plantéis do estado da Bahia e de São Paulo. A padronização da técnica da Inibição da Hemaglutinação revelou interferência do tipo de eritrócito utilizado e demonstrou a necessidade do uso de hemácias da mesma espécie ou, alternativamente, de perus. Testes de ELISA indiretos foram desenvolvidos ou modificados para a utilização nesta espécie e, apesar de apresentarem alta correlação entre si, demonstraram baixa correlação com a HI. Foram desenvolvidos ainda os testes “western blot” e “dotblot”, que podem auxiliar na avaliação da resposta imune e facilitar a implantação de programas de controle. As amostras séricas analisadas revelaram a presença de anticorpos e, a ausência de vacinação dos animais avaliados, reforça a hipótese de que as avestruzes estão em contato com o vírus vacinal ou vírus de campo.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-04T12:27:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - Luiz Lázaro.pdf: 1338858 bytes, checksum: 269d38d39fa68af0cd603b45d636eb6a (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T14:32:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - Luiz Lázaro.pdf: 1338858 bytes, checksum: 269d38d39fa68af0cd603b45d636eb6a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T14:32:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - Luiz Lázaro.pdf: 1338858 bytes, checksum: 269d38d39fa68af0cd603b45d636eb6a (MD5) / As Bactérias redutoras de sulfato (BRS) são responsáveis pela corrosão de tubos de metal e estruturas de transporte de óleo em estações de petróleo (corrosão induzida por micro-organismos – CIM). Além da corrosão, a produção de sulfeto de hidrogênio por estas bactérias produz um fenômeno denominado de acidificação do óleo (souring). Para inibir a ação das BRS, o glutaraldeído tem sido utilizado em poços de petróleo como biocida, mas seu uso apresenta determinados inconvenientes, tais como contaminação das águas subterrâneas, bem como os efeitos adversos da exposição ocupacional. Como uma alternativa para a utilização de biocidas, a utilização de micro-organismos e/ou os seus bioprodutos para tentar inibir a ação das BRS mostrou-se como uma alternativa ambientalmente mais segura em vários processos industriais, por exemplo, na indústria do petróleo, na qual os micro-organismos e seus bioprodutos (biossurfactantes) podem ser usados na recuperação melhorada de petróleo e como agentes de inibição microbiana. A detecção e quantificação de bactérias redutoras de sulfato (BRS), em poços de petróleo, utilizando-se hibridação fluorescente in situ (FISH) e DAPI (4,6-dicloroamino fenol indol) são ferramentas muito úteis para o controle destas comunidades ao longo de um período de tempo, a fim de avaliar a sua distribuição temporal e espacial. O presente trabalho teve como finalidades: a detecção e quantificação de BRS em amostras de água produzida de petróleo, de modo a avaliar a influência de micro-organismos que produzem biossurfactantes na inibição do crescimento de BRS e, assim, inibir a produção de sulfeto de hidrogênio.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T00:30:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mestrado BP - Camila Mesquita Rodrigues.pdf: 2143075 bytes, checksum: ece36df5bf0e778217222b79d03c4bd8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T00:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Mestrado BP - Camila Mesquita Rodrigues.pdf: 2143075 bytes, checksum: ece36df5bf0e778217222b79d03c4bd8 (MD5) Previous issue date: 2011-12-08 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O ferro é um elemento essencial para a sobrevivência dos microorganismos in vitro e in vivo, atuando como cofator de diversas enzimas e desempenhando um papel crítico durante a interação parasito-hospedeiro. Somente os parasitos mais virulentos são dotados de mecanismos eficazes para adquirir ferro do hospedeiro sadio, conseguindo invadir, colonizar, se multiplicar e estabelecer a infecção. L. (V.) braziliensis é um parasito distribuído por todo o continente americano sendo considerado o principal agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). No presente estudo, o efeito do ferro sobre a proliferação, a ultraestrutura e a expressão protéica de L. (V.) braziliensis é analisado pelo uso do quelante 2,2-dipyridyl. A curva de crescimento de L. (V.) braziliensis foi afetada tanto pela concentração do quelante quanto pelo tempo de cultivo em meio depletado de ferro. Nos ensaios de citotoxicidade, a relação entre a intensidade da fluorescência e a concentração do quelante de ferro também foi dose dependente. As concentrações de 100, 140 e 180 µM de 2,2-dipyridyl afetaram significativamente a fluorescência emitida por ambos os isolados após 24 e 48 horas de incubação. Os valores da IC50 foram calculados após 24 e 48 horas e o isolado IOC-L 2483, relacionado à forma disseminada da LTA, foi escolhido para a realização de todos os ensaios subseqüentes. A análise ultraestrutural das formas promastigotas tratadas com 100 µM de 2,2-dipyridyl revelou grande dano a mitocôndria que sofreu perda da matriz e da crista e passou a apresentar estruturas membranares concêntricas em seu interior. A depleção de ferro também induziu a ruptura do complexo de Golgi e a intensa vacuolização citoplasmática. A análise de parasitos incubados com TMRE e PI por citometria de fluxo demonstrou que a depleção de ferro acarreta na dissipação do potencial de membrana mitocondrial embora não esteja associada permeabilização da membrana celular. A incubação dos parasitos com TUNEL demonstrou que a privação de ferro não acarreta em fragmentação do DNA nuclear. A análise dos extratos totais das formas promastigotas por eletroforese bidimensional e espectrometria de massas revelou que as proteínas que tiveram sua expressão aumentada ou diminuída após tratamento com o quelante estão relacionadas à manutenção da homeostase do ferro, ao metabolismo dos ácidos nucléicos e à indução de modificações pós traducionais. Nossos resultados demonstram que a depleção de ferro afeta a proliferação, a ultraestrutura e a expressão protéica de L. (V.) braziliensis, induzindo à disfunção mitocondrial e levando a morte do parasito. / Iron is an essential element for in vitro and in vivo survival of microorganisms, acting as a cofactor of several enzymes and playing a critical role in host-parasite relationship. Only the more virulent strains, endowed with effective mechanisms to acquire iron from healthy hosts can invade, colonize, multiply and establish infection. Leishmania (Viannia) braziliensis is a parasite widespread in the new world and considered to be the major etiological agent of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL). In the present study, the effect of iron on growth, ultrastructure and protein expression of L. (V.) braziliensis is analyzed by use of the chelator 2,2-dipyridyl. Growth curve of L. (V.) braziliensis was affected by both concentration of iron chelator and time of culture in depleted medium. In citotoxicity assays, the ratio between fluorescence intensity and concentration of iron chelator was also dose dependent. Concentrations of 100, 140 and 180 µM of 2,2-dipyridyl significantly affected the fluorescence emitted by both isolates after 24 and 48 hours of incubation. The IC50 values were calculated after 24 and 48 hours and IOC-L 2483, related to the disseminated clinical manifestation of the LTA, was chosen to perform all the subsequent assays. Ultrastructural analysis of treated promastigotes revealed a remarkable mitochondrial swelling with loss of cristae and matrix and presence of concentric membranar structures inside the organelle. Iron depletion also induced Golgi disruption and intense cytoplasmic vacuolization. Fluorescence- activated cell sorting analysis of tetramethylrhodamine stained parasites showed that 100 µM of 2,2-dipyridyl collapsed the mitochondrial membrane potential. Incubation of parasites with propidium iodide demonstrated that disruption of mitochondrial membrane potential was not associated with plasma membrane permeabilization. TUNEL labelling for DNA fragments was negative. Two dimensional electrophoresis and mass spectrometry analysis of whole extracts from promastigotes showed that proteins involved in homeostasis of iron, metabolism of nucleic acids and coordination of post-translational modifications suffered up- or down- regulation after treatment with the iron chelator. Our results show that iron depletion affects growth, ultrastructure and protein expression of L. (V.) braziliensis leading to mitochondrial dysfunction and cell death.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / No presente trabalho foram avaliados os efeitos cardiovasculares de quatro peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Os peptídeos foram selecionados de uma família de 19 oligopeptídeos encontrados no veneno e no precursor do peptídeo natriurético do tipo C do cérebro da serpente Bothrops jararaca. Estes peptídeos foram escolhidos por suas características distintas; relativos a inibição in vitro da enzima conversora de angiotensina I (ECA) e a potenciação ex vivo da bradicinina (BK). Os experimentos foram realizados em ratos hipertensos (SHR) e normotensos (WT) acordados, com implantação de cateteres de polietileno em artéria femoral para medida da pressão arterial média (PAM) e da freqüência cardíaca (FC) e veia femoral para administração da droga. A PAM e a FC foram monitorados durante 6 horas após a injeção intravenosa dos BPPs. Os quatro BPPs mostraram efeitos cardiovasculares potentes entre as doses de 0,47 nmol/Kg e 710 nmol/Kg. O efeito anti-hipertensivo dos BPPs foi bifásico, apresentando uma redução inicial da PAM nos primeiros 20 minutos após a injeção do peptídeo (período agudo), seguida por outra queda que iniciou em 60- 80 minutos após o BPP e se manteve por até de 6 horas. A alteração da PAM máxima foi observada com o BPP-10c na dose de 71 nmol/Kg (-53 ± 6 mmHg). O BPP-7a é um fraco inibidor in vitro da ECA somática [Ki(app) ≅ 50 μM] e mostrou-se incapaz de potenciar a BK, até mesmo, em concentrações 100 vezes maior que concentrações usadas para os outros peptídeos. Contudo, o BPP-7a na dose de 14,2 nmol/Kg provocou queda máxima da PAM de -45 ± 6 mmHg em SHR. Em contraste, foi mostrado que durante a ação antihipertensiva dos quatro BPPs em SHR não houve alteração das respostas hipotensora da BK e pressora da Ang I, tanto durante o período agudo como durante o período tardio. Esses resultados indicam a participação de mecanismos ainda não esclarecidos nos efeitos cardiovasculares desses peptídeos, não podendo ser descartada a ação mediada por receptor órfão. Essas características abrem novas perspectivas para utilização dos BPPs como anti-hipertensivos. / In the present study, were evaluated the cardiovascular effects of four Bradykinin Potentiating Peptides (BPPs) in spontaneously hypertensive rats (SHR). The peptides were selected from a family of 19 proline-rich oligopeptides found either in the venom of Bothrops jararaca or derived from the C-type natriuretic peptide precursor of the B. jararaca brain. These peptides were chosen for their distinct features concerning the in vitro and in vivo inhibition of the somatic angiotensin converting enzyme (ACE), and the ex-vivo and in vivo potentiation of bradykinin (BK). The experiments were performed in conscious adult male hypertensive rats (SHR) and normotensive rats (WT), with polyethylene catheters implanted into the femoral artery for the mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) measurements, and into the femoral vein for drug administration. The MAP and HR were monitored for 6 hours after the intravenous injection of BPPs. All four BPPs showed potent cardiovascular effects in the range between 0.47 nmol/Kg and 710 nmol/Kg. The anti-hypertensive effect of BPPs was biphasic, presenting an initial reduction of MAP in the first 20 minutes after the peptide injection (acute period), folowing by other fall in 60-80 minutes after BPP and maintained for even of 6 hours (late period). The maximal change on MAP was observed using the BPP-10c at a dose of 71 nmol/Kg (-53 ± 6 mmHg). Differently from the other three BPPs, the BPP-7a presented a weak in vitro inhibition of the somatic ACE [Ki(app) ≅ 50 μM], and was unable to potentiate the BK, even at concentrations 100-fold higher than the concentrations used for the other peptides. However, the BPP-7a at a dose of 14.2 nmol/Kg caused the maximum MAP fall of the -45 ± 6 mmHg in SHR. In contrast, was showed that during the BPP antihypertensive effect in SHR there were not alteration of the BK hypotensive and the Ang I pressure responses, during both acute and late periods. These results indicate the participation non elucidated of mechanisms in the cardiovascular effects caused by these peptides. The action mediated by an orphan receptor has not been discarded. These characteristics open new perspectives for the use of BPPs as anti-hypertensive drugs. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A candidíase nosocomial é grande preocupação em hospitais terciários em todo o mundo. A infecção ocorre geralmente em pacientes com doenças neoplásicas e degenerativas e é considerada a quarta causa mais freqüente de infecções sangüíneas. O diagnóstico da candidemia ou candidíase hematogênica tem sido problemático porque os sinais e sintomas clínicos são inespecíficos, o que conduz a atrasos no diagnóstico e, conseqüentemente, na terapia antifúngica apropriada. Desenvolvemos a técnica de ELISA de inibição para a detecção do antígeno de 65 kDa em modelo experimental de candidemia e para o diagnóstico de pacientes em UTI com suspeita de candidemia. Anticorpo monoclonal anti-65 kDa foi produzido e testado para a detecção do antígeno comum de 65 kDa produzido por C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis em modelos murinos candidemia. No modelo experimental o antígeno de 65 kDa foi detectado no soro do camundongos em concentrações variando de 0,012 a 3,25 μg / ml. Vinte pacientes com candidemia foram avaliados pelo teste de ELISA de inibição em soros seqüenciais. Dezesseis (80%) pacientes apresentavam o antígeno de 65 kDa em concentrações variando de 0,07 a 5,0 μg/ml. Os soros sequenciais de pacientes com candidemia apresentaram 3 diferentes padrões de antigenemia; 1 – clareamento total da antigenemia; 2-clareamento inicial e recidiva da antigenemia; e 3 – clareamento parcial da antigenemia. Nossos resultados indicam que a detecção da molécula de 65 kDa pode ser muito útil para o diagnóstico de candidemia por C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis. Avaliamos também um possível papel biológico da molécula de 65 kDa. Os ensaios demonstraram que a proteína de 65 kDa tem ligantes de fibronectina de matriz extracelular, tendo um possível papel da adesão do fungo no hospedeiro. / Nosocomial candidiasis is a major concern in tertiary care hospitals worldwide. This infection generally occurs in patients with degenerative and neoplastic diseases and is considered the fourth most frequent cause of bloodstream infections. Diagnosis of candidemia or hematogenous candidiasis has been problematic because clinical signs and symptoms are nonspecific, leading to delays in diagnosis and, consequently, in appropriate antifungal therapy. We developed an inhibition ELISA for detection of a 65 kDa-antigen in an experimental model of candidemia and for diagnosis of patients in ICUs with suspected candidemia. An anti-65 kDa monoclonal antibody was tested for detection of the 65 kDa antigen produced by C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis in murine candidemia models. The 65 kDa-antigen was detected in sera at concentrations ranging from 0.012 to 3.25 μg/ml. A total of 20 human patients with candidemia were then evaluated with the inhibition ELISA using sequential sera. Sixteen (80%) patients had the 65 kDa-antigen in concentrations ranging from 0.07 to 5.0 μg/ml. Sequential sera from patients with candidemia presented 3 different patterns of antigenemia of the 65 kDa molecule; 1- total clearance of antigenemia; 2-initial clearance and relapse of antigenemia; and 3- partial clearance of antigenemia. Our results indicate detection of the 65 kDa protein may be a valuable tool in the diagnosis of candidemia by C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis. We also evaluated a possible biological role of the molecule of 65 kDa from C. albicans. The tests showed that the protein of 65 kDa is bound to fibronectin from extracellular matrix, and a possible role of the adhesion of the fungus in the host. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-19T17:17:11Z No. of bitstreams: 1 Lorena Ana Pinto Efeito...pdf: 4813973 bytes, checksum: 919ea1532d5e21e5ccc608fc3405b3fd (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-19T17:17:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Lorena Ana Pinto Efeito...pdf: 4813973 bytes, checksum: 919ea1532d5e21e5ccc608fc3405b3fd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-19T17:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorena Ana Pinto Efeito...pdf: 4813973 bytes, checksum: 919ea1532d5e21e5ccc608fc3405b3fd (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A proliferação espontânea de linfócitos é um marcador da infecção pelo Vírus Linfotrópico de Célula T Humana do tipo 1 (HTL V -l)o Esta é mais elevada em pacientes com paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTL V (HAMJTSP) que em indivíduos assintomáticos. Embora o seu papel na patogênese da HAM/TSP ainda seja desconhecido, a identificação de drogas capazes de modular a proliferação espontânea pode ser relevante para o tratamento da HAM/TSP. Neste estudo nós avaliamos os efeitos dos derivados quinoIínicos BS373, Ql e Q2 e da fisalina F em culturas de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de indivíduos infectados pelo HTL V com HAM/TSP. Estes compostos inibiram, ex vivo, a proliferação espontânea em culturas de PBMC, conforme avaliado pela incorporação de 3H-timidina. Além disso, a produção espontânea, ex vivo, de citocinas inflamatórias foi significativamente inibida pelo composto BS373 (25 j.tM) e pela tlsahna F (10 j.tM). A expressão da proteína viral Tax foi reduzida cerca de 80% após incubação de PBMC com BS373 (25 uM). BS373 e fisalina F induziram um aumento na porcentagem de células em apoptose, como demonstrado por análise da marcação do PBMC com anexina V por citometri~ de fluxo. A análise ultraestrutural de células cultivadas na presença destes compostos mostrou vacúolos apresentando membranas de mielina, que se assemelham a compartimentos autofágicos. Em conclusão, as quinolinas e a fisalina F foram capaz de inibir a proliferação espontânea de células de indivíduos infectados pelo HTL V-I. Outros estudos são necessários para compreendermos os mecanismos pelos quais estes compostos agem no PBMC de indivíduos infectados pelo HTL V-I. / Spontaneous lymphocyte proliferation, a hallmark ofHuman- T Lymphocyte Virus Type 1 (HTL V -1) infection, is particular1y high in HTL V -associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) patients compared to asymptomatic carriers. Although its role in the pathogenesis of HAM/TSP is stiH unknown, the identification of drugs capable of modulating the spontaneous proliferation may be reievant for the treatment ofHAM/TSP. Here we evaluated the effects ofthe quinoline derivative BS373, Q1 and Q2 and physalin F in cultures of peripheral blood mononuclear ceHs (PBMC) obtained from HTL V-infected subjects with HAM/TSP. Compounds inhibited of spontaneous proliferation in PBMC cultures, as assessed by 3H-thymidine incorporation. Additionally, the spontaneous production of inflammatory cytokines by PBMC was significantly inhibited by BS373 (25 flM) and physalin F (10 flM). The expression of the viral transcription factor Tax was reduced about 80% after incubation of PBMC with 8S373 (25 I-tM). BS373 and physalin F induced an increase in the percentage of apoptotic cells, as shown by flow cytometry analysis of annexin V-stained PBMC. Ultrastructural analysis of cultured cells in the presence of compounds showed vacuoles presented with myelin-like membranes, resembling autophagic vacuole-like compartments. In conc1usion, quinolines and physalin F was able to inhibit the spontaneous proliferation of cells from HTL V -l-infected individuaIs. Further studies are required to understand the mechanisms by which the compounds affect HTL V -1 PBMC.

Orientador: Prof. Dr. Hugo Barbosa Suffredini / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2016. / O presente trabalho apresenta os estudos da determinacao de pesticidas organofosforados em um sistema interfacial do tipo agua/oleo de soja, a partir da inibicao enzimatica da Fosfatase acida co-imobilizada com Glicose Oxidase em eletrodo modificado com azul da Prussia. Testes inciais sobre a eficiencia da capacidade eletrocatalitica do filme de Azul da Prussia foram feitas a fim de se estabelecer o potencial de trabalho para as deteccoes de glicose 6-fosfato. As analises em fase aquosa retornaram limites de deteccao e quantificacao de 0,443 e 1,478 mol L-1, respectivamente. A sensibilidade do metodo foi calculada como sendo igual a 0,0445. Em relacao ao testes na interface oleo/agua, os limites de deteccao e quantificacao foram de 0,206 e 0,6872 mol L-1 e a sensibilidade do metodo foi encontrada como sendo igual a 0,035. A inibicao enzimatica foi observada a partir da exposicao do biossensor ao pesticida metil paration por 10, 20 e 30 minutos em fase aquosa e no sistema interfacial. Obervou-se nessas analises a eficiencia deste biossensor em detectar tal pesticida diretamente em oleo de soja a partir da aplicacao da tecnica eletroquimica de interface oleo/agua. / This work is related to the detection of organophosphorus pesticides in a water/oil interfacial system by determining the enzymatic inhibition of acid phosphatase co-immobilized with Glucose Oxidase in a modified electrode with Prussian blue. Initial efficiency tests concerning the electrocatalytic capacity of Prussian blue film were carried out, aiming to establish the working potential related to the detection of glucose 6-phosphate. The aqueous phase analyses returned limits of detection and quantification of 0.443 and 1.478 mol L-1, respectively. The sensitivity of the method was calculated as being equal to 0.0445. Concerning the tests in oil/water interface, limits of detection and quantification were calculated as 0.206 and 0.6872 mol L-1 and the sensitivity of the method was obtained as 0.0035. The enzymatic inhibition of the biosensor was observed after a methyl parathion pesticide exposure of 10, 20 and 30 minutes in the aqueous phase and the interfacial system. It was possible to observe that the efficiency of the biosensor on the detection of the pesticide directly into soybean usin the oil/water interface electrochemistry as the main tool.