Submitted by LILIAN XAVIER DA SILVA null (lilianx1104@hotmail.com) on 2017-09-17T19:38:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Lilian Xavier da Silva.pdf: 2218738 bytes, checksum: f6d8686f0ced0c0a303a834195a00061 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-09-19T18:37:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_lx_me_araca.pdf: 2218738 bytes, checksum: f6d8686f0ced0c0a303a834195a00061 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T18:37:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_lx_me_araca.pdf: 2218738 bytes, checksum: f6d8686f0ced0c0a303a834195a00061 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / A doxorrubicina (DXO) é eficaz contra diferentes formas de câncer, em adultos e crianças, porém seu uso pode causar cardiotoxicidade aguda e crônica, associada ao aumento do estresse oxidativo. Alguns antioxidantes naturais demonstraram ser eficazes em minimizar esses efeitos da DXO, no entanto, o chá mate (CM), não foi avaliado neste contexto. Nossa hipótese é que o pré-tratamento com CM por 30 dias, reduz o dano oxidativo agudo no coração e assim preserva a função cardíaca. Para testar essa hipótese, foram investigados os efeitos do pré-tratamento diário de ratos Wistar machos com 40 mg/kg m.c. de CM, contra a cardiotoxicidade aguda induzida por DXO. Para a escolha da dose de CM ratos Wistar foram divididos em grupo tratados com doses diferentes de chá (10, 20 e 40 mg/m.c., gavagem) e DXO (grupos CM + DXO). Os grupos controle (C), tratados com DXO (DXO) receberam água (1,0 mL, gavagem). Os grupos receberam CM solúvel diluído em água (8 mg/mL). No 29° do tratamento com CM, administrou-se uma dose de DXO (15 mg/kg m.c. - IP) aos grupos DXO e CM + DXO. No 31° dia, após administração de tiopental (50 mg/kg m.c.) associado à lidocaína (4,0 mg/kg m.c.), foram submetidos ao eletrocardiograma (ECG) antes da punção cardíaca (Autorização CEUA FOA: 416/2015). Creatina quinase total (CK) e a fração MB (CK-MB), foram estimadas no plasma. No homogenato de coração (KCl 1,15% m/v) foram quantificadas as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), glutationa (GSH), atividade de superóxido dismutase total (SOD) e da isoforma SOD1, e expressões de SOD1, Akt total e p-Akt, por western blotting. O pré-tratamento com 40 mg/kg m.c. de CM preveniu o aumento da frequência cardíaca, o prolongamento do intervalo QTc e PR, o aumento de CK e CK-MB e de TBARS. Também preveniu a redução de GSH, SOD e SOD1. Além disso, o aumento da relação p-Akt/Akt. Concluímos que o pré-tratamento com 40 mg/kg m.c. CM previne o dano oxidativo cardíaco agudo induzido pelo DXO, preservando a função cardíaca. / Doxorubicin (DXO) is effective against different forms of cancer in adults and children, but its use may cause acute and chronic cardiotoxicity associated with increased oxidative stress. Some natural antioxidants have been shown to be effective in minimizing the effects of DXO; however, mate tea (CM), has not been evaluated in this context. Our hypothesis is that CM pretreatment for 30 days, reduces acute oxidative damage in the heart. To test this hypothesis, the effects of daily pretreatment of male Wistar rats at 40 mg / kg m.c. of CM, against acute cardiotoxicity induced by DXO were investigated. For the choice of CM dose, Wistar rats were divided into groups treated with different doses of tea (10, 20 and 40 mg / mc, gavage) (CM + DXO groups). Groups control (C), treated with DXO (DXO) received water (1.0 mL, gavage). The CM + DXO groups received soluble CM diluted in water (8 mg / mL) during the same period. At 29 ° of CM treatment, DXO and CM + DXO groups were given a dose of DXO (15 mg / m.c.-IP). On the 31st day, after administration of lidocaine (4.0 mg / kg mc) thiopental (50 mg / kg mc), all rats were submitted to electrocardiogram (ECG) prior to cardiac puncture (CEUA FOA Authorization: 416 / 2015). Total creatine kinase (CK) and MB fraction (CK-MB) were estimated in plasma. The thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), glutathione (GSH), total superoxide dismutase (SOD) activity and the cytoplasmic isoform SOD1, in addition to SOD1 expression, were quantified in the heart homogenate (KCl 1.15% m / v) , Total Akt and p-Akt, by western blotting. Pretreatment with 40 mg / kg m.c. of CM prevented a increased heart rate, prolongation of the QTc and PR interval, increase in plasma CK and CK-MB, and TBARS in the tissue. It also prevented the reduction of GSH, SOD and SOD1. In addition, the increase in the p-Akt / Akt ratio observed after DXO was not observed in rats pretreated at 40 mg / kg m.c. of CM. We conclude that pretreatment with 40 mg / kg m.c. CM prevents acute cardiac oxidative damage induced by DXO, preserving cardiac function.

Ilex paraguariensis A. St.-Hil., conhecida como erva-mate, é uma árvore nativa da América do Sul onde as folhas e pequenos ramos secos são usados para preparar o chimarrão. Possui uma composição química complexa, da qual pode-se vislumbrar muitas aplicações potenciais, que poderiam vir a ampliar o emprego da erva-mate e, conseqüentemente, do mercado para esta matériaprima. As folhas de I. paraguariensis contem xantinas, flavonóides, derivados do ácido cafeoilquínico e uma quantidade significativa de saponinas triterpenóides (cerca de 10%). Neste estudo foram investigados quimicamente extratos hidroetanólicos de I. paraguariensis, de suas frações, e de algumas substâncias de referência, como também os efeitos desses na atividade antioxidante, no acúmulo de gordura (TG) e na atividade lipolítica em cultura de células 3T3-L1. Neste sentido obtivemos extratos brutos hidroetanólicos de folhas verdes (EBV) e secas (EBS) maceradas, os quais foram fracionados originando 8 frações. Ácido ursólico, ácido clorogênico e rutina foram quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Também foi realizada a determinação de fenóis por catequinas e pela precipitação por proteínas. A fração fenólicos da folha verde apresentou atividade antioxidante superior às substâncias de referência rutina e ácido clorogênico, enquanto que o ácido ascórbico apresentou a melhor atividade. O ensaio com brometo de 3- (4,5-dimetil)difenil tetrazólio (MTT) demonstrou que os extratos e padrões testados entre 50 μg/mL e 1000 μg/mL não foram citotóxicos para as células 3T3-L1. Dentre as frações testadas para a atividade na adipogênese, a fração resíduo aquoso da folha verde (RAV) apresentou maior inibição (24%) no teor de TG na concentração de 100 μg/mL. Dentre as substâncias de referência testadas, os melhores resultados foram obtidos com o ácido caféico nas concentrações de 300 μg/mL e da rutina na concentração de 100 μg/mL. Em relação à ativividade na lipólise, a fração RAV apresentou o melhor resultado nas concentrações de 50 e 75 μg/mL. Entre as substâncias de referência, o ácido gálico apresentou resultado significativo em relação à atividade antilipolítica nas concentrações de 500 e 1000 μg/mL. Para elucidar em qual estágio da adipogênese e da lipólise os extratos, frações e padrões atuam, são necessários a investigação da avaliação da ação desses extratos e frações através de análise de expressão de genes ligados a adipogênese e a atividade lipolítica. / Ilex paraguariensis A. St.-Hil., known as maté, is a native tree from South América which leaves and twigs are used to prepare the traditional beverage “chimarrão”. It has a complex chemical composition that might have many potential applications in order to increase the use of maté and then, in consequence, increase the market demand of this raw material. Leaves from I. paraguariensis have xanthines, flavonoids, cafeoylquinic acid derivatives and triterpenoid saponins (ca. 10%). Herein, it was investigated, both chemically and biologically, the hydroethanolic extracts of leaves from I. paraguariensis, its fractions, and some reference substances, as the antioxidant activity, the adipogenesis (TG) and lipolytic activities in 3T3-L1 cell culture. So, it was prepared hydroethanolic extracts of fresh (EBV) and dried leaves (EBS) by maceration, which submitted to further fractionation furnished 8 fractions. Ursolic acid, chlorogenic acid and rutin were determined in these samples by liquid chromatography (HPLC) Also, phenolic constituents were determined using catequines and protein precipitation methods. The phenolic fraction from fresh leaves presented better antioxidant activity than the tested reference substances (rutin and chlorogenic acid), while ascorbic acid presented the best activity. The MTT assay showed that the tested extracts and fractions among 50 μg/mL and 1000 μg/mL did not present citotoxicity to 3T3-L1 cells. Among the tested fractions to adipogenesis, the aqueous residue fraction from fresh leaves (RAV) presented best inibition (24%) of TG at 100 μg/mL. Among tested reference substances, cafeic acid at 300 μg/mL, and rutin at 100 μg/mL presented the best results. In relation to the lipolytic activity, the RAV fraction presented best results at 50 e 75 μg/mL and, among the tested reference substances, galic acid presented best results at 500 e 1000 μg/mL. In order to understand the mechanim of action of these fractions and reference substances at the adipogenesis and lipolysis further studies will be performed specially those about the influence on the gene expression.

INTRODUÇÃO: A erva-mate (Ilex paraguarienis), uma planta nativa e consumida em grande parte da América do Sul, apresenta diversos compostos bioativos que já demonstraram importante atividade antioxidante in vitro e in vivo. O chá mate é um produto desta planta cujas propriedades antioxidantes ainda não foram avaliadas em ensaios com humanos. OBJETIVO: Este projeto visa avaliar o potencial antioxidante do chá mate in vivo e ex vivo sobre o plasma e LDL de humanos após a ingestão de chá-mate. MÉTODOS: Indivíduos em jejum (n=20) tiveram seu sangue coletado em três momentos: antes, após uma hora e depois de 1 semana (7 dias) da ingestão diária de chá-mate. O plasma e a LDL obtidos nos três momentos foram submetidos à oxidação por três mecanismos diferentes [Cobre (Cu+2), lipoxigenase e peroxinitrito (SIN-1)] e em seguida foram medidos os produtos de peroxidação lipídica formados: a concentração de TBARs (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) e a formação de dienos conjugados empregando-se métodos espectrofotométricos. Também foram determinados o perfil antioxidante total do plasma (TAS), avaliação da lipoperoxidação plasmática basal (TBARs), avaliação da fragmentação da Apolipoproteína B após oxidação da LDL, por eletroforese em gel com SDS-PAGE e os níveis de expressão, por meio de análise de PCR real time, de alguns genes relacionados à produção de enzimas antioxidantes. Teste t de Student pareado foi utilizado para verificar se houve diferença estatisticamente significante entre os resultados das diversas análises antes e após o consumo do chá. RESULTADOS: Os resultados obtidos pela maioria dos ensaios realizados demonstraram que o consumo de chá mate aumentou a resistência à oxidação, a capacidade antioxidante plasmática e a expressão de genes relacionados à produção de enzimas antioxidantes. CONCLUSÃO: Esses resultados sugerem que o consumo de chá mate por período curto pode atuar como antioxidante por múltiplos mecanismos e portanto pode contribuir para diminuição do risco de desenvolvimento de doenças crônicas relacionadas a processos oxidativo. / Yerba Mate (Ilex paraguariensis) is a native and widely consumed South American plant. It contains high concentrations of bioactive compounds that respond for its high antioxidant activity in vitro and in vivo. This activity has not been demonstrated yet in humans for the mate tea, a product derived from Yerba Mate. OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate the antioxidant activity of maté tea in vivo and ex vivo on plasma and LDL human after ingestion of mate tea infusion. METHODS: Fasting peripheral venous blood samples of twenty healthy women (n=20) were taken in three different times: before drinking the tea, one hour later and after one week of daily consumption (7 days) of mate tea. The plasma and isolated LDL were oxidated with 3 different systems [copper (CuSO4), lipoxygenase and peroxynitrite (SIN-1)]. Next, the peroxidation products evaluated were: concentration of malonaldeyde (TBA) and conjugated dienes (lag time), using spectrophotometric methods. We also measured the plasma total antioxidant status (TAS), serum levels of malondialdehyde (MDA) as thiobarbituric substances (TBARS), fragmentation of apo B using SDS-PAGE and the level of antioxidant enzyme gene expression by PCR real time. Paired t student test was used to analyze the results before and after ingestion of mate tea. RESULTS: The results obtained by most of the tests showed that mate tea ingestion increased the plasma and LDL resistance by ex vivo oxidation, the plasma antioxidant capacity and the level of antioxidant enzyme gene expression. CONCLUSION: This study suggests that regular consumption of mate tea can act as an antioxidant by multiple mechanisms and thus may contribute decrease the risk of developing chronic diseases related to oxidative processes.

RESUMO Introdução: Atualmente a obesidade tem atingido proporções epidêmicas, evidências científicas mostram uma forte associação entre a obesidade e o maior risco para o desenvolvimento de diversas doenças tais como: doenças cardíacas, diabetes tipo II (mellitus), hipertensão e resistência à insulina. Bebidas à base de erva-mate (Ilex paraguariensis) têm importantes atividades biológicas, principalmente pelo alto teor de compostos polifenólicos existentes, que são reconhecidos por sua atividade antioxidante. Além dos compostos polifenólicos como flavonóides (quercetina e rutina) e ácidos fenólicos (ácido clorogênico e ácido cefeico), a erva-mate também é rica em cafeína e saponinas. Estudos recentes, com modelos animais e humanos demonstram inúmeros benefícios após o consumo de erva-mate, dentre estes, destaca-se sua atividade antioxidante, proteção ao DNA contra o dano induzido, atividade quimioprotetora celular, efeito na redução do LDL-colesterol, efeitos na motilidade intestinal, efeito vasodilatador, inibição da glicação e efeito termogênico. Objetivo: Avaliar os efeitos anti-obesidade do consumo de chá-mate em camundongos submetidos a uma dieta hiperlipídica. Métodos: Foram utilizados camundongos Swiss (n=62), eutróficos, machos, divididos aleatoriamente em diferentes grupos de acordo com a dieta utilizada (padrão ou hiperlipídica) e a intervenção escolhida (água ou chá-mate), por dezesseis semanas. Após a intervenção, as análises bioquímicas foram determinadas empregando-se o sistema Cobas-Mira e o quadro glicêmico foi determinado utilizando-se um glicosímetro seguido do ITT (teste de tolerância à insulina), a ação quimioprotetora ao DNA foi realizado pelo ensaio cometa; a expressão gênica das enzimas antioxidantes foi avaliada por PCR em tempo real. Para a significância dos dados foi utilizado análise de variância (ANOVA), seguido por Bonferronis post hoc teste para comparações múltiplas. Resultados: A intervenção com chá-mate nos camundongos submetidos à dieta hiperlipídica foi capaz de melhorar os seguintes parâmetros avaliados: peso corpóreo, glicemia, resposta à insulina, colesterol, triacilglicerol e LDL-colesterol. O nível de danos ao DNA foi significativamente reduzido nos camundongos obesos tratados com chá-mate em todas as doses avaliadas, porém o consumo de chá-mate não modificou a expressão das enzimas antioxidantes avaliadas (SOD, GPx e Cat) independentemente da dose utilizada. Conclusão: O presente estudo demonstra que o consumo do chá-mate pode influenciar de maneira positiva alguns biomarcadores relacionados com a obesidade induzida por dieta hiperlipídica em camundongos. / Introduction: Obesity has reached epidemic proportions, and there is a lot of evidence supporting the association of obesity with health conditions such as cardiovascular disease, diabetes, hypertension, and insulin resistance. Yerba Maté (Ilex paraguariensis) beverages have been reported to present biological activities attributed, mainly, to the it high polyphenol content, long known as antioxidants. In addition to the polyphenols such as flavonoids (quercetin and rutin) and phenolic acids (chlorogenic and caffeic acids), yerba maté is also rich in caffeine and saponins. Recently published evidences with animals and humans, has shown some beneficial effects related to the consumption of yerba maté, which include antioxidant activity, protecting effect on DNA against induced damage, chemopreventive activities, choleretic and intestinal effects, vasodilatation effects, inhibition of glycation and atherosclerosis and thermogenic effects. Objective: We evaluated the anti-obesity effects of yerba maté in a high-fat diet in mice. Methods: Sixty-two Swiss mice, were randomly assigned in different groups according to the diet and the intervention (mate-tea or water), for sixteen weeks. After intervention, the biochemical analysis was performed with Cobas-Mira system, the insulin test tolerance was determined by means of KITT, antioxidant activity were tested using Comet Assay and gene expression of antioxidant enzymes were evaluated by PCR real time . Statistical analysis was done using one-way ANOVA followed by unpaired Bonferroni. Results: Mate-tea intervention decreased in obese animals the following biochemical parameters: weight, glucose blood level, response to insulin, cholesterol, triglycerides and LDL-cholesterol. The DNA damage levels were significantly lower in obese animals treated with mate tea in all doses, but mate tea didnt affect the gene expression of antioxidant enzymes (SOD, GPx e Cat). Conclusion: In conclusion, this study reports that mate-tea may beneficial influence some biochemical markers related to high-fat diet induced obesity in mice.

Introdução - Estudos mostram maior ocorrência de complicações cardiovasculares na população HIV/aids. Alguns estudos envolvendo animais e indivíduos saudáveis ou com outras doenças observaram benefícios no consumo de chocolate e erva mate na função endotelial e vasodilatação. Objetivo Avaliar o efeito da ingestão de chocolate e erva mate na elasticidade arterial de indivíduos com HIV/aids em terapia antirretroviral. Métodos Ensaio clínico cruzado, aleatorizado e duplo-cego, envolvendo 89 indivíduos com HIV/aids entre 19 e 59 anos, em tratamento regular com antirretrovirais por no mínimo 6 meses, e carga plasmática do HIV <500 cópias/ml. Os indivíduos receberam suplementação diária com aproximadamente 65g de chocolate amargo, 3g de erva mate ou respectivos placebos por 15 dias, com washout de igual tempo entre as intervenções. A aferição da elasticidade arterial foi realizada por análise do formato da onda de pulso com o equipamento HDI/PulseWaveTM CR-2000®. Também foram avaliados: composição corporal, glicemia, perfil lipídico, proteína C-reativa e concentração plasmática de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As respostas entre tratamentos foram avaliadas por ANOVA e por teste t de Student pelo Stata® 11.0, considerando-se p< 0,005. Resultados A população foi composta principalmente por homens (62,9 por cento) caucasianos (46,1 por cento) com idade média de 44,6 ± 7,1 anos. O tempo médio de diagnóstico de HIV/aids foi de 13,2 ± 4,8 anos com 10,6 ± 5,1 anos de terapia antirretroviral. Não foram encontradas diferenças significantes na elasticidade arterial dos pequenos e grandes vasos após as suplementações. Conclusão Este é o primeiro estudo a avaliar o efeito da ingestão de erva mate e chocolate na elasticidade arterial de indivíduos com HIV/aids. Apesar das evidências positivas desses alimentos na saúde cardiovascular de animais e indivíduos com outras doenças, os mesmos efeitos não foram observados neste estudo. Provavelmente o tempo de suplementação, a biodisponibilidade das substâncias bioativas e o metabolismo alterado desses indivíduos interferiram nos resultados obtidos, sugerindo a necessidade de melhor investigação desses fatores / Introduction There has been an increase on cardiovascular diseases occurrence in the HIV/aids population. Some studies involving animals and healthy individuals or individuals with other pathologies have shown benefits on endothelial function and vasodilation under use of chocolate and yerba maté. Objective To evaluate the effect of chocolate and yerba maté intake on HIV/aids patient´s arterial elasticity. Methods Double-blind crossover trial including 89 HIV/aids patients, 19 to 59 years of age, on antiretroviral therapy for at least six months, and with viral load <500copies/ml. The individuals consumed daily approximately 65g of dark chocolate, 3g of yerba maté or placebo during 15 days, followed by a 15-day washout period after each intervention. Arterial elasticity was measured using the HDI/PulseWaveTM CR-2000 CardioVascular Profiling System®, which provides a pulse wave contour analysis. Body composition, glicemic index, lipid profile, C-reactive protein and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were also assessed. The crossover analysis was performed using analysis of variance (ANOVA) on Stata®. The paired Students t-test was also applied. A p value <0.05 was considered significant. Results Most of the individuals were men (62.9 per cent), caucasian (46.1 per cent) aging 44.6 ± 7.1 years. The mean time of HIV/aids diagnosis was 13.2 ± 4.8 years, with 10.6 ± 5.1 years of antiretroviral therapy. There were no significant alterations on elasticity of either large or small arteries after chocolate and yerba maté intake. Conclusion This is the first research to evaluate the effect of chocolate and yerba maté intake on HIV/aids patient´s arterial elasticity. Despite of the positive evidence of these foods on cardiovascular health of animals and populations with other pathologies, the same effects were not observed in this study. Most probably the time of intervention, the bioavailability of the bioactive substances and the altered metabolism of this individuals interfered on the results, which indicates the need for further investigation

This study aimed to develop three computer systems, modeled to look for information that describes the current context of the production chain of Yerba Mate in the state of Rio Grande do Sul. Meetings were held with members of ervateiro sector to prospect all the information that pervade agricultural activities involved. So with this data, it was possible to organize the structure of the proposed systems to make the collection of data regarding the properties, superior trees, nurseries, ervateiras and factories. As a result they have developed the C7-Ilex, the GeoMate_RS and a web system. Both with the registering functions georeferenced data and viewing possibility on maps. But the GeoMate_RS will be responsible for assisting in information management through reporting, graphics and images. This proposal was presented at the Second Production Chain Sustainability State Congress of Yerba Mate, which occurred along the TURISMATE 2015. Due to the impact, on June 16, 2016 was signed SEAPI 154_2016 ordinance that officiated the Electronic Operating System for Register Ervateiro in the state of Rio Grande do Sul. Thus, it is expected that these systems specifically used to generate information, help the IBRAMATE in making strategic actions and policies for the development of the productive chain, and also contribute to a reduction many challenges faced on the economic environment in which it is the country. / Este trabalho objetivou desenvolver três sistemas informatizados, modelados para buscar informações que descrevam o contexto atual da cadeia produtiva da Erva-mate no estado do Rio Grande do Sul. Foram realizadas reuniões com integrantes do setor ervateiro para prospectar todas as informações que permeiam as atividades agrícolas envolvidas. Assim, com estes dados, foi possível organizar a estrutura dos sistemas propostos para realizar a coleta de dados referentes a propriedades, árvores superiores, viveiros, ervateiras e fábricas. Como resultado foram desenvolvidos o C7-Ilex, o GeoMate_RS e um sistema web. Ambos com as funções de cadastrar dados georreferenciados e a possibilidade de visualização em mapas. Porém, o GeoMate_RS será o responsável por auxiliar na gestão das informações por meio de geração de relatórios, gráficos e imagens. Esta proposta foi apresentada no II Congresso Estadual de Sustentabilidade da Cadeia Produtiva da Erva-mate, que ocorreu junto a TURISMATE 2015. Devido a repercussão, no dia 16 de junho de 2016 foi assinada a portaria SEAPI 154_2016 que oficializou o Sistema Operacional Eletrônico para o Cadastro Ervateiro no Estado do Rio Grande do Sul. Assim, espera-se que estes sistemas, utilizados especificamente para gerar informações, ajudem o IBRAMATE na tomada de ações estratégicas e políticas para o desenvolvimento da cadeia produtiva, e que também, contribuam para reduzir os diversos desafios enfrentados diante do cenário econômico em que se encontra o país.

Introdução: A incidencia e prevalencia do Diabetes Mellitus aumentam a cada ano, alcancando proporcoes epidemicas. A infusao aquosa de erva mate apresenta consideraveis teores de acidos clorogenicos, que alem de atuarem como antioxidantes, podem diminuir a producao e absorcao de glicose, conforme indicado na literatura. Objetivos: Avaliar a influencia da ingestao de infusao de erva mate sobre parametros bioquimicos relacionados ao diabetes mellitus e o metabolismo de glicose. Metodologia: Ratos Wistar (n=41) foram divididos em: nao diabeticos controle (NDC, n=10); nao diabeticos erva mate (NDE, n=10); diabeticos controle (DC, n=11) e diabeticos erva mate (DE, n=10). O diabetes foi induzido por aloxana. Os animais receberam extrato de erva mate (1 g/kg) ou solucao fisiologica por gavagem durante 28 dias, com agua e racao comercial ad libitum. Seus tecidos foram submetidos as analises (glicemia, insulinemia, colesterol total, atividade da enzima glicose-6-fosfatase hepatica e expressao genica do cotransportador intestinal de Na+/glicose SGLT1, sendo este responsavel pela maior parte da absorcao de glicose no lumen). Os dados foram analisados por analise de variancia com dois fatores (ANOVA 2-way) com ou sem medidas repetidas, de acordo com a variavel. O nivel de significancia adotado foi 5%. Resultados: Nao houve diferenca significativa entre os grupos controle (NDC e DC) e os grupos que ingeriram erva mate (NDE e DE) para a glicemia, insulinemia, colesterol total e atividade da glicose-6-fosfatase hepatica. No entanto, a expressao genica 7 dos transportadores de glicose SGLT1 foi significantemente menor nos animais que receberam erva mate, tanto no duodeno (p=0,007) quanto no jejuno (p<0,001) Conclusão: A ingestao da erva mate nao modificou significativamente os parametros bioquimicos estudados dos animais sob intervencao relativamente ao controle. No entanto, foi observada diferenca significativa quanto a expressao do transportador de glicose SGLT1, sugerindo que compostos bioativos da erva mate sao capazes de reduzir a absorcao da glicose. / Introduction: The incidence and prevalence of Diabetes Mellitus are increasing, reaching epidemic proportions. Yerba mate infusions are rich in polyphenols, especially chlorogenic acids, that are known to have antioxidant properties. Evidences suggest that dietary polyphenols could also play a role in glucose metabolism and absorption. Objective: The aim of this study was to evaluate if yerba mate extract could have antidiabetic properties in alloxaninduced diabetic Wistar rats. Research design and methods: Wistar rats (n=41) were divided in four groups: non diabetic control (NDC, n=10); non diabetic yerba mate (NDM, n=10); diabetic control (DC, n=11) and diabetic yerba mate (DM, n=10). Diabetes was induced by alloxan (38 mg/kg bw). The mate group animals received yerba mate extract diluted in saline solution in a 1g extract/kg bw dose for 28 days, controls received saline solution only. The following biochemical parameters were measured: serum glucose, insulin and total cholesterol; hepatic glucose-6-fosfatase activity and gene expression of the intestinal Na+/glucose cotransporter SGLT1. Results: There were no significant differences in serum glucose, insulin, total cholesterol and hepatic glucose-6-phosphatase activity between the groups that ingested yerba mate extract (NDM and DM) and the controls (NDC and DC). However, the intestinal SGLT1 gene expression was significantly lower in animals that received yerba mate both in upper (p=0.007) and middle small intestine (p<0,001). Conclusion: These results indicate that bioactive 9 compounds present in yerba mate might be capable to decrease intestinal glucose absorption, by decreasing SGLT1 expression.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-10-09T19:14:17Z No. of bitstreams: 1 MARIA EDUARDA DE LIMA.pdf: 3141919 bytes, checksum: f33f081cbf3931d572940d623c8c2074 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-10-09T19:14:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MARIA EDUARDA DE LIMA.pdf: 3141919 bytes, checksum: f33f081cbf3931d572940d623c8c2074 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T19:14:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIA EDUARDA DE LIMA.pdf: 3141919 bytes, checksum: f33f081cbf3931d572940d623c8c2074 (MD5) Previous issue date: 2017-08-04 / A erva mate é o produto do processamento de folhas secas e moídas de uma espécie arbórea, conhecida como Ilex paraguariensis. A apresentação comercial da erva-mate é utilizada no preparo de uma bebida tradicional, muito consumida na América do Sul. Dados da literatura tem comprovado uma diversidade de efeitos benéficos da erva-mate, principalmente o antioxidante. Sabe-se que uma grande quantidade de patologias apresenta o estresse oxidativo como um dos seus mecanismos nocivos, desta maneira, a busca por compostos naturais que possam balancear tais situações foi intensificada nos últimos anos. Considerando os aspectos mencionados, o objetivo principal do presente estudo foi avaliar os possíveis efeitos protetores do extrato de Ilex paraguariensis em diferentes perspectivas com ênfase no estresse oxidativo. Inicialmente, foi realizada a caraterização do extrato por HPLC, seguido por uma comparação in vitro em sinaptossomas, do extrato (200 mg/mL) com o seu composto majoritário, ácido clorogênico CGA (2 mg/mL), quanto a produção de ROS, peroxidação de lipídios, função mitocondrial por MTT e a razão GSH/GSSG. Por conseguinte, foi realizada a avaliação in vivo, onde ratos Wistar machos (300-330 g) foram submetidos a estresse por restrição de movimentos, associado a outros estímulos estressantes, por 21 dias, 6h por dia (crônico) e tratados, por via oral, concomitantemente com extrato (200 mg/mL) ou CGA (2 mg/mL) e foram analisados parâmetros comportamentais de atividade locomotora e ansiedade, bem como, aspectos de dano celular, em córtex, hipocampo e estriado. Por fim, em um modelo de camundongos diabéticos, induzido com estreptozotocina (100 mg/kg), foram verificados os efeitos do extrato de erva mate (850 mg/kg), por via oral, sobre os níveis de glicose, neuropatia diabética e marcadores de estresse oxidativo, em rim, fígado e cérebro. O extrato de erva mate mostrou-se mais efetivo que o ácido clorogênico na proteção do dano oxidativo em sinaptossomas, reduzindo a formação de ROS, peroxidação de lipídios e depleção de glutationa, fatos que podem explicar o efeito do extrato em prevenir a disfunção mitocondrial avaliada. Da mesma maneira, no modelo de estresse por restrição de movimentos, o extrato de erva mate foi mais efetivo que o ácido clorogênico em prevenir as alterações comportamentais dos animais. O grupo que recebeu o extrato como tratamento, apresentou atividade locomotora igual ou superior a do grupo controle. Os animais tratados com extrato também se mostraram menos ansiosos que os do grupo estressado que não recebeu tratamento. Além disso, o extrato exibiu efeito de proteção do dano celular de córtex, hipocampo e estriado, pois os animais tratados apresentaram um maior número de células viáveis nesses tecidos. Com relação aos efeitos do extrato no modelo induzido de diabetes, verificou-se que a erva mate possui atividade de proteção ao estresse oxidativo envolvido na patogênese dessa patologia, além de reduzir de maneira significativa o nível glicêmico dos animais e apresentar efeito protetor à neuropatia diabética. Com base nos resultados encontrados, é possível dizer que, de modo geral, a erva mate atua na proteção de diferentes aspectos do estresse oxidativo devido ao sinergismo dos seus componentes, tendo em vista que o ácido clorogênico isolado não apresentou efeito protetor igual ou superior ao do extrato. Através do seu efeito antioxidante, apresenta benefícios à redução dos danos causados pela hiperglicemia crônica no diabetes mellitus e também, na modulação de efeitos neuroprotetores e função mitocondrial. / Yerba mate is the product of the processing of dried and ground leaves of a tree species, known as Ilex paraguariensis. The commercial presentation of yerba mate is used in the preparation of a traditional drink, widely consumed in South America. Data from the literature has proven a variety of beneficial effects of yerba mate, especially the antioxidant. It is known that a great number of pathologies present oxidative stress as one of its harmful mechanisms, in this way, the search for natural compounds that can balance such situations has intensified in recent years. Considering the mentioned aspects, the main objective of the present study was evaluate the possible protective effects of Ilex paraguariensis extract in different perspectives with emphasis on oxidative stress. Initially, was made the characterization of HPLC extract, followed by an in vitro comparison in synaptosomes, of the extract (200 mg / mL) with its major compound, chlorogenic acid CGA (2 mg / mL) in ROS formation, lipid peroxidation, mitochondrial function by MTT and the GSH / GSSG ratio. Therefore, in vivo evaluation was performed, where male Wistar rats (300-330 g) underwent movement restriction stress associated with other stress stimuli for 21 days, 6 hours per day (chronic) and treated with extract (200 mg / mL) or CGA (2 mg / mL) and behavioral parameters of locomotor activity and anxiety were analyzed, as well as aspects of cellular damage in the cortex, hippocampus and striatum. Finally, in a model of diabetic mice, induced with streptozotocin (100 mg / kg), were verified the effects of yerba mate extract (850 mg / kg) on glucose levels, diabetic neuropathy and markers Of oxidative stress, in kidney, liver and brain. The yerba mate extract was shown to be more effective than chlorogenic acid in the protection of oxidative damage in synaptosomes, by reducing ROS formation, lipid peroxidation and glutathione depletion, which may explain the effect of the extract in preventing mitochondrial dysfunction evaluated. Likewise, in the model of stress by restriction of movement, the extract of mate grass was more effective than the chlorogenic acid in preventing the behavioral alterations of the animals. The group that received extract as treatment had locomotor activity equal to or greater than the control group. The animals treated with extracts were also less anxious than those of the stressed group that did not receive treatment. In addition, the extract exhibited a protective effect on cell damage in cortex, hippocampal and striatum, as treated animals had a higher number of viable cells in these tissues. Regarding the effects of the extract in the induced model of diabetes, it was verified that the yerba mate has activity of protection to the oxidative stress involved in the pathogenesis of this pathology, in addition to significantly reduce the glycemic level of the animals and present protective effect to diabetic neuropathy. Based on the results found, it is possible to say that, in general, yerba mate acts in the protection of different aspects of oxidative stress due to the synergism of its components, considering that the isolated chlorogenic acid did not present a protective effect equal or greater than of the extract. Through its antioxidant effect, present benefits in reducing the damage caused by chronic hyperglycemia in diabetes mellitus, in the modulation of neuroprotective effects and mitochondrial function.

Introdução: A erva mate (Ilex paraguariensis St. Hilaire) é uma espécie nativa do Brasil, Paraguai e Argentina e tem importante apelo social, econômico e cultural. É utilizada na preparação de vários tipos de bebidas, como chimarrão, tererê e chá-mate, consumidas em toda a América Latina. O chá mate, assim como o chimarrão, apresenta potencial protetor à saúde devido à atividade antioxidante, ente outras, conforme demonstrado em diversos estudos. A alta concentração de compostos bioativos, como as saponinas, os compostos fenólicos e as metilxantinas respondem, em conjunto, pela sua atividade biológica. Objetivos: a) validar metodologia para isolar e quantificar as principais classes de compostos bioativos do chá mate (compostos fenólicos, xantinas, sapogeninas e melaninas); b) avaliar se há diferenças nos teores desses compostos nas diferentes marcas deste produto comercializado em São Paulo; c) avaliar a atividade biológica de cada classe por diferentes métodos in vitro. Metodologia: Foram analisados três lotes das três marcas de chá mate 100 por cento presentes em hipermercados no município de São Paulo. A validação da metodologia para quantificação, empregando CLAE, consistiu no cálculo da exatidão (recuperação), repetibilidade e sensibilidade para os compostos: ácido caféico, ácido-5-cafeoilquínico, cafeína, teobromina, acido ursólico e ácido oleanólico. Foram determinados os teores de fenólicos totais por método espectrofotométrico com o reagente Folin-Ciocalteu. As frações de fenólicos e xantinas, sapogeninas e melaninas foram isoladas e testadas quanto à atividade antioxidante pelo: sistema de oxidação -caroteno e ácido linoléico, teste da capacidade de absorbância de oxigênio radical ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity), capacidade de seqüestrar o radical DPPH, e atividade ligante de ácidos biliares (ácidos glicocólico, cólico, deoxicólico e taurocólico). Resultados: Os coeficientes de determinação das curvas de calibração foram maiores que 0,99. A recuperação dos compostos variou de 84,2 a 115,88por cento e o coeficiente de variação médio foi 5 por cento. Uma xícara de chá mate (182 mL) apresentou, em média, 161,96 mg de fenólicos totais; 14,71 mg de ácido clorogênico (5CQA); 3,13 mg de ácido caféico ; 2,74 mg de teobromina e 15,16 mg de cafeína. Os teores de ácido ursólico e ácido oleanólico no chá mate (sachês), foram, em média 82,60 g/g e 54,08 g/g, respectivamente. As concentrações dos compostos variaram significativamente entre as marcas analisadas. A atividade antioxidante do chá mate (69,2 por cento de inibição da oxidação pelo sistema -caroteno e ácido linoléico; DPPH (IC50) = 0,014 mgSS/mL; ORAC = 9997molTrolox/xícara de chá), diferiu significativamente (p<0,05) entre as marcas apenas para o IC50. Para as frações houve diferença estatística apenas para a porcentagem de inibição da oxidação do ácido linoléico para o extrato melânico. Verificou-se correlação linear (p<0.05) positiva ou negativa entre a atividade antioxidante e a concentração de alguns compostos bioativos. A capacidade ligante de ácidos biliares foi semelhante ao controle positivo colestiramina para o chá mate, FS e FFX. O EM demonstrou baixa ou nenhuma capacidade de si ligar aos ácidos biliares. Conclusões: O chá mate é uma excelente fonte de compostos bioativos com atividade biológica. Ocorreu variação da concentração de compostos bioativos em função da marca analisada. Essa variação, no entanto, não influenciou na atividade antioxidante da bebida, conforme avaliada pelos métodos ora utilizados. / Introduction: Yerba maté (Ilex paraguariensis St. Hilaire) is a spontaneous species that grows in Brazil, Argentina and Paraguay and several beverages (chimarrão, terere, maté tea) are produced from its leaves. Maté tea, one of I. paraguariensis beverages present antioxidant activity and other biological effects. Compounds such as aponins, polyphenols and methylxanthines, which are present in considerable amounts, are responsible for the biological effects. Objectives: The aims of this work were: a) to validate analytical methodologies to evaluate the main bioactive compounds from maté tea (phenolic compounds, xanthines, sapogenins and melanins); b) to evaluate if there are differences on these compounds contents among maté tea brands commercialized in São Paulo; c) to evaluate biological activity of each class of compounds by different in vitro methodologies. Methods: Three lots from three commercial brands of maté tea present in 100 per cent of the main supermarkets in São Paulo city were analysed. HPLC methodology validation was assessed by determining accuracy (recovery), repeatability and sensibility (linearity, limits of detection and quantitation) for caffeic acid, 5- caffeoylquinic acid, caffeine, theobromine, ursolic and oleanolic acids. Total phenolic content was assessed with the Folin-Ciolcalteu´s reagent. Maté tea phenolic and methylxanthines (FFX), sapogenins (FS) and melanins (EM) fractions were isolated and tested for theirs in vitro antioxidantactivity by the following methods: -carotene and linoleic acid system, ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity), radical scavenging capacity (DPPH). The ability of binding bile acids (glycocholic, cholic, taurocholic and deoxycholic acids) was also assayed. Results: Calibration curves determination coefficient (r 2) were higher than 0,99 for all compounds. Recovery ranged from 84,2 to 115,88per cent and repeatability average was 5per cent. One maté tea cup (182 mL) contains in average 161,96 mg5CQA of total phenolic compounds, 14,71 mg of chlorogenic acid (5CQA), 3,13 mg of caffeic acid, 2,74 mg of theobromine and 15,16 mg of caffeine. The roasted leaves contains 82,60 and 54,08 g/g of ursolic and oleanolic acids in average, respectively. Compounds contents varied significantly (p<0,05) among brands. The antioxidant activity assays showed no significant difference (p>0,05) among brands to maté tea, except for DPPH (IC50), and the average results for the maté tea are the following: 69,2 per cent in -carotene and linoleic acid system, DPPH (IC50) = 0,014mgSS/mL; ORAC = 9997,7molTrolox/tea cup. Antioxidant activity of the isolated fractions showed significant difference only in -carotene and linoleic acid system to melanic extract. A positive or negative correlations between the antioxidant activity and the bioactive compounds contents was observed (p<0.05). Maté tea, FS and FFX bile acid binding capacity were similar to the positive control cholestyramine. EM showed very little or no bile acid binding capacity. Conclusions: Maté tea is a source of bioactive compounds. Although concentration can vary significantly from brand to brand, this fact did not affect maté tea antioxidant activity evaluated by the methods used in this study.

As saponinas são tensoativos naturais, caracterizadas principalmente por sua atividade espumógena. Ilex paraguariensis A. St. Hil, conhecida como "erva-mate", é uma espécie vegetal rica em saponinas e de importância econômica e cultural para este Estado. Estudos anteriores demonstraram que os frutos imaturos de I. paraguariensis, uma parte do vegetal sem valor comercial, apresenta teores mais elevados de saponinas que as folhas da erva-mate. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade das saponinas dos frutos imaturos de I. paraguariensis como adjuvante espumógeno, sob o ponto de vista físico-químico e tecnológico, bem como a avaliação do potencial de irritação dérmica. Para isso, foram empregados um extrato bruto liofilizado (EXL) obtido por turbólise na proporção de 1:10 droga-solvente em etanol:água (40:60 v/v) como líquido extrator e dois produtos purificados ricos em saponinas, denominados Fr.7090 e P6, obtidos por um processo de fracionamento em fase sólida e eluição com metanol-água (método I) e por um processo de complexação com polímero polivinílico por contato direto (método II), respectivamente. Para a caracterização do perfil das saponinas e monitoramento de processos, foi desenvolvida uma metodologia analítica por CLAE em fase reversa C18, em sistema gradiente acetonitrila: ácido fosfórico 0,5 % com detecção em 205 nm. A atividade de superfície das saponinas foi avaliada através do abaixamento da tensão superficial, CMC, excesso de superfície e área superficial. Os perfis de espumabilidade e estabilidade da espuma das saponinas do EXL e da Fr. 7090 foram avaliados através de medidas da espumabilidade, drenagem, tempo de permanência da espuma e resistência. Como tensoativos de comparação foram utilizados o laurilsulfato de sódio (LSS) e polissorbato 80 (Poli. 80), empregados nas mesmas condições e concentrações que as soluções de saponinas. A influência de eletrólitos sobre os perfis espumógenos foi avaliado utilizando NaCl, KBr, KNO3, MgCl2 e Na2HPO4, mantendo a força iônica constante em 0,024 M. Para a análise das propriedades espumógenas das saponinas, a espuma foi gerada em coluna de vidro por insuflação de ar durante 20 segundos, mantendo um fluxo de 2 L min-1. O perfil de drenagem das espumas das saponinas na concentração de 10 CMC foi avaliado e expresso como percentual de volume de líquido retido na espuma (VLE %), no tempo zero e ao longo de 60 minutos. A estabilidade da espuma das saponinas de Fr.7090 e P6 foi avaliada considerando a altura da coluna de espuma em função do tempo e pelo registro e análise fotográficos da espuma até 480 minutos. Para avaliar a influência do tamanho micelar sobre as propriedades espumógenas dos tensoativos, o diâmetro efetivo das micelas foi determinado por medidas de espalhamento de luz dinâmica. Dados adicionais sobre a sua estabilidade foram obtidos mediante a análise fotográfica bidimensional, em câmara geradora de espuma projetada para esta finalidade. A resistência da espuma foi caracterizada mediante a velocidade de queda de uma esfera através da coluna de espuma, sob condições experimentais padronizadas. A Fr. 7090 apresentou um elevado grau de espumabilidade semelhante ao LSS e superior ao Poli. 80. Quanto ao perfil de drenagem, as saponinas apresentaram um valor de VLE % em 60 minutos (T1h) de 12,0 % e 15,2 %, para o EXL e Fr. 7090, respectivamente, em relação a 7,15 % para ambos tensoativos sintéticos. As saponinas apresentaram um perfil de estabilidade diferenciado, com maior estabilização estrutural com o tempo. As espumas das saponinas apresentaram uma resistência superior aos tensoativos sintéticos, porém, somente a 25 CMC. A adição de eletrólitos às soluções de saponinas influenciou negativamente os perfis espumógeno e de estabilidade da espuma das saponinas. As análises por espalhamento da luz sugerem micelas de dimensões maiores em relação aos tensoativos não-iônicos ou a possível formação de estruturas supramicelares, mesmo baixas concentrações. Pela análise bidimensional, a espuma do EXL apresentou menor alteração da forma e número das bolhas de ar com o tempo, comparado à espuma de LSS. O potencial de irritação dérmica das saponinas foi avaliado pelo teste de irritação primária dérmica de Draize in vivo, em coelhos machos albinos. A avaliação biológica classificou as saponinas como produtos não-irritantes. Pelos resultados, concluiu-se que as saponinas dos frutos imaturos de Ilex paraguariensis apresentam um potencial emprego tecnológico, tanto pelas suas propriedades espumógenas, como pela ausência de irritação cutânea. / Saponins are natural surfactants, characterized mainly for its foaming properties. Ilex paraguariensis A. St. Hil, known as "erva-mate", is a rich vegetal specie in saponins and of economic and cultural importance for this State. Previous studies had demonstrated that the immature fruits of I. paraguariensis, one has left of the vegetable without commercial value, presents higher concentrations of saponins that the leaves of "erva-mate". The objective of this work was to evaluate the saponins potentiality of the immature fruits of I. paraguariensis as adjuvant foaming, under the technological and physical-chemical point of view, as well as the evaluation of the cutaneous irritation potential. For this, it had been used a rude extract (EXL) obtained by tubo-extraction using ethanol 40% (v/v) as extractor liquid and two rich purified products in saponins obtained by a process in solid phase and elution with methanolwater (method I) and a complexation process with polyvinyl polymer (method II), respectively. For the characterization of saponins profile was developed an analytical methodology using HPLC in C18 reversed phase, with a system gradient composed by acetonitrile:phosphoric acid 0,5 % with detection in 205 nm. The surface activity of saponins was evaluated through the lower of the superficial tension, CMC, surface density and superficial area. Foambility and stability profiles of the saponins foam of the EXL and Fr. 7090 had been evaluated through foamability mensuraments, draining, permanence time of the foam and resistance of the films. As surfactants of comparison it had been used sodium dodecylsulphate (LSS) and polyssorbate 80 (Poli. 80). These had been analyzed in the same conditions and concentrations of saponins solutions. The electrolytes influence on the foaming profiles was evaluated using NaCl, KBr, KNO3, MgCl2 and Na2HPO4, keeping the constant ionic strenght in 0,024 M. For the analysis of the foams properties of the saponins, the foam was generated in glass column by air insufflation during 20 seconds, with a constant flow of 2 L min-1. The draining profile of the saponins foams in the concentration of 10 CMC was evaluated and expressed as percentile of volume of restrained liquid in the foam (VLE %), in time zero and throughout 60 minutes. The stability of the saponins foam of Fr.7090 and P6 was evaluated considering the height of the foam column in function of the time and for the photographic register and analysis of the foam till 480 minutes. To evaluate the influence of the micellar size on the foaming properties of the surfactants, the effective diameter of micelles was determined by dynamic light scattering mensuraments. Additional data on its stability had been obtained by means of the bidimensional photographic analysis, in generating foam chamber projected for this purpose. The resistance of the foam was characterized by means of the speed of a sphere fall through the foam column, under standardized experimental conditions. Fr. 7090 presented one high degree of similar foambility to the LSS and superior to Poli. 80. As much as to the draining profile, the saponins had presented a value of VLE % in 60 minutes (T1h) of 12,0 % and 15,2 %, for the EXL and Fr. 7090, respectively, in relation to 7,15 % for both synthetic surfactants The saponins showed a differentiated profile of stability, with bigger structural stabilization with the time. The saponins foams had presented a superior resistance to the synthetic surfactants, however, only 25 CMC. The addition of electrolytes had a negative influence on saponins foams profile and stability. The analyses for dynamic light scattering suggest bigger dimensions micelles in relation to the nonionic surfactants or the possible formation of highest micelles, even at low concentrations. To the bidimensional analysis, the EXL foam presented minor alteration of the form and number of the air bubbles with the time, compared with the LSS foam. The potential of the cutaneous irritation of the saponins was evaluated by the test of dermic primary irritation of the Draize test in albinic male rabbits. The biological evaluation classified the saponins as not-irritating products. For the results, it was concluded that the saponins of I. paraguariensis immature fruits presented a technologycal potential use, as for its foaming properties as for the absence of cutaneous irritation.