Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-22T12:52:26Z No. of bitstreams: 1 TESE COMPLETA Guilherme P P Zolini.pdf: 5332439 bytes, checksum: 59494ecd480af09a4c7fc97891dfd358 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-22T12:52:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE COMPLETA Guilherme P P Zolini.pdf: 5332439 bytes, checksum: 59494ecd480af09a4c7fc97891dfd358 (MD5) / FIOCRUZ - Fundação Oswaldo Cruz (PAPES IV / PAPES V) CPqRR – Centro de Pesquisa René Rachou CNPq – Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG – Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais INCTV – Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Vacinas / Este trabalho foi realizado no laboratório de Imunopatologia do Centro de Pesquisa René Rachou (CPqRR) e no Laboratório de Vírus (Labvirus) da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG). Os herpesvirus possuem genoma DNA e são envelopados. Aproximadamente 70% dos adultos já tiveram contato com Herpes Simplex tipo 1 (HSV-1). O HSV-1 causa úlceras ou até mesmo lesões mais graves como encefalite, e após a infecção, o vírus comumente fica latente e pode ser ou não reativado. Células do sistema immune inato, através dos “Receptores do Tipo Toll” (TLRs), reconhecem “padrões moleculares associados a patógenos” (PAMPs) orquestrando a resposta imune contra o vírus. Quando ativados, TLRs iniciam uma cascata de sinalização que culmina na ativação de genes relacionados à defesa imune inata (óxido nítrico-NO, citocinas e quimiocinas). Outros estudos do grupo mostraram que animais nocautes (KO) para TLR9 ou TLR2/9 apresentam alta mortalidade na infecção por HSV-1, ao contrário dos C57BL/6 selvagens (WT) e TLR2KO, que são capazes de controlar o vírus. Objetivamos pesquisar a interrelação na expressão dos TLRs 1, 2, 3, 6, 7 e 9 em animais TLR2 KO, TLR9 KO e TLR2/9 KO infectados por HSV-1 e principais citocinas, células e mecanismos imune celulares contra infecção por HSV-1. No presente trabalho camundongos WT, TLR2KO, TLR9KO e TLR2/9KO foram infectados via intranasal com 106 u.f.p. de HSV-1, e seus controles receberam PBS. A eutanásia dos animais foi realizada no 5º dia após infecção (dpi), que previamente já foi demonstrado ser o pico da infecção neste modelo, e então gânglios trigêmeos (TG) e cérebros foram coletados. A expressão de TLRs 1, 2, 3, 6, 7 e 9 foi avaliada por PCR em Tempo Real. Camundongos WT infectados apresentaram diferença significativa na expressão destes TLRs comparados com seus respectivos controles no TG, mas não no cérebro. Nos KOs, houve aumento da expressão dos TLRs tanto nos TGs (mas com níveis mais moderados comparado aos WT) quanto nos cérebros. Também foi avaliada a expressão de gp91phox, p22phox e iNOS. A expressão de iNOS em C57BL/6 WT infectados foi maior que nos outros grupos, mas o mesmo não ocorreu para gp91phox, p22phox. Adicionalmente, foi mensurada a produção de NO por macrófagos intraperitoneais, através da reação de Griess, que demonstrou maior produção por macrófagos WT, comparados aos grupos TLR KOs. Ensaios de histopatologia e imunofluorescência demonstraram maior celularidade nos TGs infectados, além de confirmar a presença de CD8, macrófagos, e aumento da produção de iNOS nos C57BL/6 WT infectados, o que não ocorreu com os camundongos TLRs KO. Em ensaio de sobrevivência com C57BL/6 WT, CCL3 KO, CD8 KO, RAG KO e iNOS KO a importância das células T e do iNOS foi confirmada, uma vez que CD8 KO, RAG KO e iNOS KO tiveram 0% de sobrevida. Camundongos C57BL/6 WT, RAG KO, CCL3 KO e iNOS KO tiveram seus TGs analisados por PCR em tempo real para verificar a expressão do gene viral VP-16 e MCP-1, iNOS, IP-10, Rantes e TNF-_ no 5º dpi. Estes dados indicaram a relevância de iNOS e das célúlas T na resposta inata contra o HSV-1, uma vez que os RAG KO foram irresponsivos à expressão das citocinas, enquanto os iNOS KO apresentaram uma resposta exacerbada das mesmas. Ensaio de citometria indicou que IFN_ produzido pelas células T CD8, nos TGs, e produzido pelas células T CD4 e Natural Killer (NK), nos linfonodos regionais, são um possível mecanismo de controle contra a infecção de HSV-1 dos animais WT infectados. Hipotetizamos que a expressão coordenada de TLRs reflete na orquestração eficiente do sistema imune inato, através da produção equilibrada de quimiocinas e citocinas e da atividade imune celular adequada, com produção de NO por macrófagos e ação de células T CD8, T CD4 e NK controlando a infecção por HSV-1. / This work was carried out in the Immunopathology laboratory of the Centro de Pesquisa René Rachou (CPqRR) and Virus laboratory (Labvirus) of the Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG). Herpes viruses have DNA genome and are enveloped. Approximately 70% of adult people have had contact with the Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1). After infection, HSV-1 cause cold sores, or more serious injuries such as encephalitis, and after infection, the virus usually become latent and may be reactivated or not. Cells of innate immune system recognize the “pathogen associated molecular patterns” (PAMPs) through “Toll Like Receptors” (TLRs), orchestrating the immune response against the virus. When activated, TLRs start a signalization cascade that culminates in the activation of genes related to the innate immune defense (NO, cytokines and chemokines). Previous research from our group demonstrated that knockout (KO) mice to TLR9 and TLR2/9 showed high mortality after HSV-1 infection, unlike C57BL/6 wild type (WT) and TLR2KO, which were able to control the virus. Research aimed in interrelation of the expression of TLRs 1, 2, 3, 6, 7 and 9 in TLR2 KO, TLR9 KO and TLR2 / 9 KO mice infected with HSV-1 and the main cytokines, cells and cellular immune mechanisms against infection by HSV-1. In this work, TLR2KO, TLR9KO, TLR2/9KO and C57BL/6 WT mice were intranasally infected with 106 p.f.u. of HSV-1, and their respective controls received PBS. Mice euthanasia was at the 5th day post infection (dpi), previously showed to be the viral multiplication peak in our model, and then trigeminal ganglia (TG) and brain were collected. The expression of TLRs 1, 2, 3, 6, 7 and 9 were measured by Real Time PCR. Infected WT mice showed significant increase in the expression of these TLRs compared to respective controls in TG, but not in brain.KOs mice had increased expression of TLRs in TG (but in more moderated levels compared to WT) and in the brains. The expression of gp91phox, p22phox and iNOS were also measured. iNOS expression in infected C57BL/6 WT was higher than in other groups, that not occurs to gp91phox, p22phox. In addition, NO production by intraperitoneal macrophages was measured through Griess reaction, that demonstrated a more pronounced production by WT macrophages, compared to TLR KOs groups. Histopathology and immunofluorescence assays demonstrated higher cellularity in infected TG, and besides confirmed the CD8 and macrophages presence and increase of iNOS production in infected C57BL/6 WT, what did not occurred with TLR KO mice. In survival assay with C57BL/6 WT, CCL3 KO, CD8 KO, RAG KO and iNOS KO, we showed the importance of the T cells and iNOS, because CD8 KO, RAG KO and iNOS KO had 0% of survival. C57BL/6 WT, RAG KO, CCL3 KO and iNOS KO mice had their TG analyzed by Real Time PCR, to verify the expression of viral gene VP-16 and MCP-1, iNOS, IP-10, Rantes and TNF-_ in 5th dpi. These data show us that iNOS and T cells are important in innate responses against HSV-1, once RAG KO were irresponsive to cytokines expression, while iNOS KO showed an excessive response to cytokines expression. The cytometry assay indicated that IFN_ produced by T CD8 cells, in the TG, and by T CD4 and Natural Killer cells (NK), in region lymph nodes, are a possible mechanism to control HSV-1 infection of WT infected mice. We hypothesize that coordinated expression of TLRs leads to an efficient orchestration of the innate immunity system, through cytokines and chemokines stable production and proper cellular immune activity, with NO production by macrophages and T CD8, T CD4 e NK cells action controlling HSV-1 infection.

Os invertebrados impedem o estabelecimento de uma infecção através de uma resposta imune eficiente. Esta resposta envolve reações celulares e humorais. Existem poucos trabalhos sobre a imunidade das aranhas. O principal objetivo deste estudo foi verificar o papel dos hemócitos e dos peptídeos antimicrobianos na resposta imune da aranha Acanthoscurria gomesiana. Inicialmente, a localização relativa da gomesina e da acanthoscurrina foi determinada, mostrando que 58% dos hemócitos armazenam os dois peptídeos antimicrobianos. Além disso, foi verificado que a gomesina é direcionada aos grânulos dos hemócitos da forma de pró-peptídeo. Observou-se ainda, que após um desafio, os hemócitos migram para o sítio de infecção, onde deve secretar componentes da cascata de coagulação e peptídeos antimicrobianos. Além disso, os resultados mostraram que a fagocitose não é o principal mecanismo ativado após uma infecção. Assim sendo, as principais respostas imunes da aranha são através da coagulação e secreção dos peptídeos antimicrobianos. / Invertebrates avoid the infection establishment through an efficient immune response. This response consists in cellular and humoral reactions. Few data are available concerning the spider\'s immunity. The main aim of this study was to determine the role of hemocytes and antimicrobial peptides on the immunity of the spider Acanthoscurria gomesiana. Initially, the localization of gomesin and acanthoscurrin was determined, showing that 58% of hemocytes store both antimicrobial peptides. Moreover, our results show that gomesin is addressed to the hemocyte granules as a pro-peptide. We also demonstrate, by in vivo and in vitro experiments, that hemocytes migrate to the site of microbial infection. Once at the site of infection, hemocytes might secrete components of coagulation cascade and antimicrobial peptides. Besides, our results suggest that phagocytosis is not the major defense mechanism activated after microbial challenge. Therefore the main reactions involved in the spider defense might be through the coagulation and antimicrobial peptides secretion.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-22T20:13:29Z No. of bitstreams: 1 JaneteCunhaLima_DISSERT.pdf: 3013582 bytes, checksum: d401198755cf83fbccff88970e69f861 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-08T21:51:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JaneteCunhaLima_DISSERT.pdf: 3013582 bytes, checksum: d401198755cf83fbccff88970e69f861 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-08T21:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JaneteCunhaLima_DISSERT.pdf: 3013582 bytes, checksum: d401198755cf83fbccff88970e69f861 (MD5) Previous issue date: 2016-01-29 / O presente estudo objetivou avaliar a express?o dos receptores da imunidade inata em linhagens de camundongos suscet?veis e resistentes ? infec??o pelo Schistosoma mansoni. Cerca de 30 cerc?rias da cepa LE do S. mansoni foram inoculadas por via subcut?nea em camundongos machos das linhagens Balb/c, C57BL/6 e Swiss. Duas, sete, 12 e 16 semanas ap?s a infec??o (SAI) os camundongos foram mortos e quando poss?vel foram avaliados os seguintes par?metros: parasitismo (por meio de perfus?o hep?tica), oograma, presen?a de granulomas hep?ticos, e express?o do RNA mensageiro (RNAm) de citocinas da imunidade inata (IL-1?, IL-6, IL-10, IL-12p35, IL-18 e TNF-?), dos receptores do tipo Toll (TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9), dos receptores do tipo Nod (NALP1 e NALP3) e mol?culas adaptadoras (Myd88, ASC, Caspase-1) em tecido hep?tico, por meio de PCR em tempo real. Camundongos Balb/c e C57BL/6 apresentaram sobreviv?ncia de 70%, enquanto camundongos Swiss apresentaram sobreviv?ncia de 100%, quando avaliados at? 16 SAI. Em duas SAI os camundongos Swiss apresentaram maior express?o do RNAm de NLRP1, NLRP3, Caspase-1, IL-1? e IL-18, quando comparados aos Balb/c e C57BL/6. Os animais das linhagens Balb/c e C57BL/6 apresentaram maior express?o do RNAm de TLR2, TLR3, TLR5, NLRP3 e ASC em sete SAI, quando comparados aos Swiss. Em adi??o, a linhagem Balb/c apresentou express?o aumentada do RNAm de TLR6, TLR7, TLR9, Myd88, NLRP1 e TNF-?. Ademais, camundongos Swiss apresentam menor quantidade de parasitos adultos no sistema porta hep?tico e menor quantidade de ovos no fragmento ?leo distal, em sete e 12 SAI, quando comparados aos C57BL/6 e Balb/c. Em conclus?o, os camundongos C57BL/6 e Balb/c apresentam express?o elevada dos receptores TLRs e NLRs em sete SAI (in?cio da oviposi??o), sugerindo maior suscetibilidade a infec??o, com consequente aumento na taxa de mortalidade nestes animais. Outrossim, camundongos Swiss apresentam acentuado perfil inflamat?rio inicial (em duas SAI), o que poderia auxiliar no controle do parasitismo. E a supress?o da ativa??o dos receptores e citocinas da imunidade inata, em sete SAI, poderiam ocasionar menor mortalidade e maior resist?ncia ? infec??o neste per?odo. / This study aimed to evaluate innate immune receptors expression in susceptible and resistant mouse strains to infection with Schistosoma mansoni. About 30 S. mansoni cercariae, LE strain, were inoculated subcutaneously into Balb/c, C57BL/6 and Swiss male mice. Two, seven, 12 and 16 weeks after infection (WAI) mice were euthanized and when possible evaluated the following parameters: parasitism by hepatic portal system perfusion, oogram, presence of hepatic granulomas, and cytokines of innate immunity (IL-1?, IL-6, IL-10, IL-12p35, IL-18 and TNF-?) mRNA expression, innate immunity Toll-like receptor (TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9) mRNA expression, Nod-like receptor (NALP1 and NALP3), and adapter molecules (Myd88, ASC, and Caspase-1) mRNA expression in liver tissue, by Real-time PCR. Balb/c and C57BL/6 mice showed survival of 70%, while Swiss mice showed 100% survival when evaluated by 16 WAI. In two WAI Swiss mice showed higher NLRP1, NLRP3, caspase-1, IL-1? and IL-18 mRNA expression when compared to Balb/c and C57BL/6. Balb/c and C57BL/6 mice showed higher TLR2, TLR3, TLR5, NLRP3 and ASC mRNA expression in seven WAI when compared to the Swiss. In addition, Balb/c mice showed increased TLR6, TLR7, TLR9, MyD88, NLRP1 and TNF-? mRNA expression. Moreover, Swiss mice have a lower number of adult parasites in the hepatic portal system and fewer eggs in the distal ileum fragment in seven and 12 WAI when compared to Balb/c and C57BL/6. In conclusion, C57BL/6 and Balb/c mice showed high TLRs and NLRs receptors mRNA expression in seven WAI (oviposition beginning), suggesting intensify susceptibility to infection, with consequent increase in the mortality rate in these animals. Furthermore, Swiss mice exhibited increase initial inflammatory profile (in two WAI), which could assist in the control of parasitism. And the mRNA activation suppression of cytokines and receptors of innate immunity, in seven WAI, could cause lower mortality and greater resistance to infection during this period.

Defensinas são peptídeos antimicrobianos produzidos na mucosa intestinal e fazem parte da imunidade inata, agindo sobre vários microrganismos luminais. Deficiência na expressão de defensinas tem sido relatada em doenças inflamatórias intestinais (DII), no entanto a contribuição de cada tipo de defensina, num cenário de polimorfismo genético, mantém alguma controversa. Βeta-defensinas humanas (HBDs) têm atividade antimicrobiana contra uma ampla variedade de fungos, bactérias e vírus e têm também, um papel na ligação entre a imunidade inata e adaptativa atuando como quimiotáticos. O gene DEFB1 (8p23), codificando a beta-defensina humana 1 (HBD-1), é expresso normalmente por células epiteliais de uma série de tecidos, mas sua expressão pode variar entre indivíduos e pode ser modificada durante processo inflamatório. Produção deficiente de defensinas parece contribuir para a patogênese de DII, e uma diminuição na expressão de HBD-1 tem sido relatada na mucosa de pacientes com doença de Crohn (DC) e retocolite ulcerativa (RCU). Nós avaliamos a possível associação de três polimorfismos do gene DEFB1 com a suscetibilidade a DII, RCU e DC, em 149 pacientes, 79 com DC e 70 com RCU; e 200 controles saudáveis do sul do Brasil. No nosso estudo não se observou diferença estatisticamente significativa entre a distribuição das frequências alélicas para DEFB1 SNPs -52G>A. -44C>G e -20G>A entre o total de pacientes com DII e controles. Porém, quando pacientes com DC foram estratificados de acordo com a localização anatômica, o alelo -20G>A foi mais frequente em pacientes com DC colônica do que em controles (65 % VS 44 %, p=0,048). De forma similar, o genótipo A/A foi mais frequente em pacientes com DC colônica do que em controles (36 % VS 16 %), mas neste caso, a diferença não foi estatisticamente significativa (p=0,07). Embora não se achou uma clara e forte associação entre os SNPs 5’-UTR DEFB1 e suscetibilidade/proteção à doença inflamatória intestinal, nossos resultados sugerem possível envolvimento do gene DEFB1 nestas enfermidades, especialmente com a localização colônica da doença de Crohn. Estudos com amostras maiores e populações diversas serão úteis para avaliar a tendência observada no nosso grupo. / Defensins are antimicrobial peptides produced by the intestinal mucosa and are part of the innate immune system, playing a protective role against various intestinal microorganisms. Deficiency in the expression of defensins has been reported in inflammatory bowel diseases (IBD), however there is some controversy over the contribution of each type of defensine, in a setting of great genetic polymorphism. Beta-defensins (HBDs) have an antimicrobial activity against a great variety of fungi, bacteria and viruses, and also have a role in connecting the innate and the adaptive immunity, acting as a chemostatic agent. Deficient production of defensins appears to contribute to the pathogenesis of IBD, and the lower expression of HBD-1 has been reported on the mucosa of Ulcerative colitis (UC) and Crohn’s disease (CD) patients. We evaluated a possible association of three polymorphisms of gene DEFB1 with susceptibility to develop IBD, UC and CD in 149 patients, 79 with CD and 70 with UC; and 200 healthy controls from the south of Brazil. The gene DEFB1 (8p23), which codifies human beta-defensin 1 (HBD-1), is constitutivelly expressed by epithelial cells of several tissues, but its expression may vary among different individuals and may be modified by inflammation. In our study we did not find a statistically significant difference between the distribution of the allelic frequencies for DEFB1 SNPs -52G>A, -44C.G and -20G>A between the total number of patients and controls. However, when patients were stratified according to the anatomic location, the allele -20G>A was more frequent in patients with colonic CD than in contros (65% VS 44%, p=0,048). Similarly, the genotype A/A was more frequent in patients with colonic CD than in controls (36% vs 16%), however, in this case, the difference wasn’t statistically significant (p=0,07). Although we did not find a clear and strong association between the 5’-UTR DEFB1 SNP and susceptibility to IBD, our results suggest a possible involvement of the DEFB1 gene and these diseases, particularlly colonic CD. Further studies with larger samples and diverse populations will be usefull to evaluate the trend observed by our group.

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos na microbiota intestinal, resposta imune e ocorrência de diarreias em bezerras recém-nascidas. Foram selecionadas 26 bezerras Holandesas distribuídas de acordo com a aplicação (ATB+) ou não (ATB-) de tulatromicina (2,5 mg/Kg - SC) até 12h de vida. Capítulo 1 Este capítulo avaliou a influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade de bezerras holandesas recém-nascidas, por meio do exame clínico geral. As diarreias foram detectadas por sistema de escore e matéria seca (%) nas fezes, além do escore respiratório e palpação externa da região umbilical. O desempenho das bezerras foi determinado pela estimativa do ganho de peso. As bezerras ATB- apresentaram maior frequência de mucosas esbranquiçadas (P=0,066) e inflamações umbilicais no ATB- em D3-5 (P=0,063) e D13-15 (P= 0,066). A frequência de escore fecal 2 e 3 foi semelhante entre os grupos, observando-se pico no D13-15. Os valores médios para matéria seca (%) foram menores no ATB+ no D7-9 (P=0,063) e D27-30 (P=0,084). O agente etiológico das diarreias foi o Cryptosporidium e/ou rotavírus. O ganho de peso diário (GPD) foi igual entre grupos, observando-se intensa redução no GPD em D13-15. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos na colonização bacteriana intestinal, por meio da detecção de material genético dos principais grupos bacterianos por meio do PCR em tempo real. Não foram observadas diferenças entre os grupos para bactérias totais e C. perfringens. As bezerras ATB- apresentaram maior quantidade de Bifidobacterium, nas fezes no D3-5 (P=0,002) e D7-9 (P=0,018). A população de Lactobacillus também apresentou tendência (P=0,097) para maior número de cópias de DNA no grupo ATB-. Ao contrário, a Escherichia coli apresentou tendência para maiores valores no grupo ATB+ no D20-23 (P=0,052) e D27-30 (P=0,072). Capítulo 3 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos no perfil inflamatório de bezerras holandesas recém-nascidas por meio de provas hematológicas, imunológicas, bioquímicas e eletroforéticas. Observou-se tendência para menores valores de hemoglobina (P=0,071), CHCM (P=0,057) e ferro sérico (P=0,051) no D3-5 no ATB-. Neste momento, a frequência de anemias também foi maior no ATB- (P=0,016). O número de neutrófilos (P=0,051) e a produção espontânea de EROs foi maior no ATB-, enquanto o número de linfócitos foi maior no ATB+ (P=0,061) no D7-9. Estes dados são condizentes com as análises imunes, no qual a proporção de populações de mononucleares 1 e 2 expressando o CD62L+ apresentou tendência para maior valor no ATB+ em D3-5 (P=0,098) e D7-9 (P=0,083). Após as diarreias (D13-15), os granulócitos (P=0,043) e mononucleares (P=0,089) das bezerras ATB+ apresentaram maior intensidade de fluorescência para expressão CD62L no D20-23. O grupo ATB+ também apresentou maiores teores de beta-globulina (P=0,057), gama-globulina (P=0,069) e haptoglobina (P=0,032) no D13-15. O uso precoce de tulatromicina influenciou na microbiota intestinal, imunidade inata e ocorrência de doenças no período neonatal. / The general goal of this research was to evaluate the influence of early antimicrobial use in the gut microbiota, immune response and occurrence of diarrhea in neonate heifers. It was screened 26 neonate Holstein heifers distributed according to the application (ATB+) or not (ATB-) of tulathromycin (2.5mg/Kg - SC) from birth until 12 hours of life. Chapter 1 This chapter evaluated the influence of early use of antimicrobial in the health of neonate Holstein heifer by general clinical examination. Diarrheas were detected using score system and fecal dry matter (%), besides of respiratory score and external palpation of navel region. The performance of calves was evaluated by daily weight gain. Heifers ATB- had high frequency of paleness mucous (P=0.066) and umbilical inflammation in ATB- group on D3-5 (P=0.063) and D13-15 (P= 0.066). The frequency of fecal score 2 and 3 was similar between groups, observing peak of diarrhea on D13-15. The mean values of fecal dry matter were low in ATB+ group on D7-9 (P=0.063) and D27-30 (P=0.084). The main etiologic agent of diarrheas was Cryptosporidium and/or rotavírus. The daily weight gain (DWG) was similar between groups, observing intense decrease of DWG on D13-15. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of early use of antimicrobial in the microbial gut colonization by detection of genetic bacterial material using real time PCR. It was not found difference between groups for total bacteria and C. perfringens. The calves from ATB- group had high quantity of Bifidobacterium in the fecal material on D3-5 (P=0.002) and D7-9 (P=0.018). The Lactobacillus population had a tendency (P=0.097) to have high number of DNA copies in the ATB- group. On the other hand, Escherichia coli had tendency to high values in ATB+ group on D20-23 (P=0.052) and D27-30 (P=0.072). Chapter 3 The aim of this chapter was to evaluate the influence of early use of antimicrobial in the inflammatory profile of neonate Holstein heifers by hematological, immunological and biochemical tests, besides electrophoresis. It was possible to observe lower values of hemoglobin (P=0.071), CHCM (P=0.057) and serum iron (P=0.051) in ATB- group on D3-5. In this moment, the frequency of anemia also was high in ATB- group (P=0.016). The number of neutrophils (P=0.051) and spontaneous ROSs was high in ATB- group, while the number of lymphocytes was high in ATB+ group (P=0.061) on D7-9. These data were according to immune analysis, where the proportion of mononuclear population 1 and 2 expressing CD62L+ had a tendency for high values in ATB+ group on D3-5 (P=0.098) and D7-9 (P=0.083). After diarrhea (D13-15), granulocytes (P=0.043) and mononuclear cells (P=0.089) showed high fluorescence intensity of CD62L in ATB+ heifers on D20-23. ATB+ group also had high rate of beta globulin (P=0.057), gamma globulin (P=0.069) and haptoglobin (P=0.032) on D13-15. The early use of tulathromycin had influence on gut microbiota, innate immunity and occurrence of disease in the neonatal period.

O objetivo deste estudo foi avaliar os aspectos clínicos, a eficiência produtiva, reprodutiva, a resposta imune inata e humoral em fêmeas da raça Holandesa persistentemente infectadas (PI) com BVDV. Para tanto, foram selecionadas 25 PI´s por meio do ELISA antígeno, das quais oito eram bezerras ≤ 12 meses; seis novilhas entre 13 e 24 meses; e onze animais de 25 a 36 meses de idade. O grupo não infectado (NI) foi composto por fêmeas negativas com faixas etárias pareadas às PIs. Em geral, as fêmeas PIs apresentaram maior frequência de diarreia (P=0,012) e Doença Respiratória Bovina (DRB) (P=0,004), especialmente àquelas entre 25 a 36 meses de idade. As PIs apresentaram maior concentração sérica de haptoglobina (P=0,017). As vacas NI´s produziram mais leite (8-12 litros) do que as PIs (P≤0.011). A contagem de células somáticas (CCS) foi maior para as vacas PI´s em relação NI´s durante a lactação (P≤0,066). A média de CCS observada foi de 0,2-0,5 x 105 (células/mL) e 2,0-10,5 x 105 (células/mL) nos grupos PI e NI, respectivamente. A idade na primeira inseminação (P=0,001) e o número de inseminação necessário para a primeira prenhez foi maior para PI do que nas novilhas NI´s (P=0,051). Na avaliação hematológica, as PI´s apresentaram menores valores de hemoglobina (P=0,098), hematócrito (P=0,084), hemoglobina corpuscular média (P=0,092), plaquetas (P=0,040), plaquetócrito (P=0,059) e linfócitos (número absoluto P=0,075; relativo P=0,092) em relação às NI´s. Em contraste, a porcentagem de monócitos foi maior em PI do que animais NI (P=0,014). Em geral, a proporção (%) e a intensidade da fagocitose (MFI) para Staphylococcus aureus e Escherichia coli foram maiores nas PIs do que animais NI (P<0,079). A porcentagem de células que produziram espécies reativas de oxigênio (EROs) endógeno foi menor em PI do que animais de NI (P=0,005). Padrão semelhante foi observado na porcentagem de células que produziram EROs após estímulo com Staphylococcus aureus (P=0,000) ou Escherichia coli (P=0,000). Em contraste, a intensidade da produção de EROS basal foi maior nas PI´s do que nas NI´s (P=0,011). Um padrão semelhante foi observado para a intensidade da produção de EROs quando as células foram estimuladas com Staphylococcus aureus (P=0,011) ou Escherichia coli (P= 0,013). Por meio da soroneutralização, observou-se que os títulos médios dos anticorpos neutralizantes para as BVDV, BRSV e BoHV foram menor no grupo PI (P=0,000). No entanto, os títulos de anticorpos para BPIV-3 foram semelhantes entre os grupos (P=0,146). A proteína sérica total (PT) foi menor nas PI em relação as NI´s (P=0,021). As fêmeas PIs apresentaram maior frequência de diarreia e DRB, além da menor produção leiteira, diminuição da qualidade do leite e menor fertilidade. O leucograma demonstrou diminuição dos tipos celulares, exceto monócitos. No geral, houve resposta imune inata foi exacerbada nas fêmeas PIs, provavelmente pela menor eficiência na produção de EROs. Em relação ao sistema imune específico observou-se linfopenia e títulos nulos ou baixos de anticorpos neutralizantes contra as viroses respiratórias. / The aim of this study was to evaluate the clinical problems, the efficiency of production, reproduction, the innate and humoral immune response of Holstein heifers and cows persistently infected (PI) with BVDV. Therefore, 25 PI animals were selected using ELISA antigen of which, eight were heifers ≤ 12 months; six were heifers between 13 to 24 months; and eleven were animals from 25 to 36 months old. An uninfected group (NI) composed by negative females with same age of PI´s. We observed that PI´s presented more frequency of diarrhea (P=0.012) and Bovine Respiratory Disease (BRD) score (P=0.004), especially the animals from 25 to 36 months old. The PI´s showed higher concentration of haptoglobin (P=0.017). During the lactations the milk production from NI cows was higher (8 to 18,2 litters) than PI (P≤0.011). Somatic cells count (SCC) were higher for PI than NI cows across milk production (P≤0.066). The mean of SCC observed was 0,2-0,5 x105 (cells/mL) in NI group and 2,0-10,5 x105 (cells/mL) for PI cows. The age at first insemination (P=0.001) and number of insemination required for the first pregnancy was higher for PI than NI heifers (P=0.051). For hematological evaluation, PI´s showed lower hemoglobin (P=0,098), hematocrit (P=0,084), mean corpuscular hemoglobin (P=0,092), platelet (P=0,040), plateletcrit (P=0,059) and lymphocytes (absolute number P=0.092; relative P=0,075) than NI. In contrast, the percentage of monocytes was higher in PI than NI animals (P=0.014). In aggregate, the percent of phagocytic cells and the average phagocytic avidity (expressed as mean fluorescence intensity, MFI) for Staphylococcus aureus and Escherichia coli were higher in PI than NI animals (P≤ 0.079). The percentage of cells producing endogenous reactive oxygen species (ROS) activity was lower in PI than NI animals (P=0.005). A similar pattern was observed in the percentage of cells producing ROS after exposure to Staphylococcus aureus (P= 0.000) or Escherichia coli (P=0.000). In contrast, the value for endogenous ROS per cell activity (MFI) was higher in PI than NI animals (P=0.011). A similar pattern was observed for ROS MFI after stimulating with Staphylococcus aureus (P=0.011) or Escherichia coli stimulation (P=0.013). The median conventional SN titers for specific antibody recognizing BVDV, BRSV and BoHV-1 in serum were lower in PI than NI animals (P=0.000). The antibody titers for BPIV3 were similar between the groups animals (P=0,146). In aggregate, the total serum protein (TP) was lower in PI than NI cattle (P=0.021). In summary, PI heifers had more diarrhea, BRD, produced less milk, worst milk quality and poorer reproductive performance than NI cattle. Leukogram showed decreased cell types except monocytes. Overall, there was a higher endogenous level innate cell reactivity in PI heifers and cows than NI animals, probably because of the lower efficiency in ROS production. In relation to the specific immune system it appear that the PI animals were less efficient in clearance of antigens due to lower numbers of lymphocytes and related lower titers of specific antibody against respiratory viruses.

As bactérias são reconhecidas pelos macrófagos através dos receptores do tipo Toll (TLR), que ativam as vias do NF-κB e das MAPKs, resultando em respostas como a fagocitose e a produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio (ROS/RNS), que causam a morte do microrganismo. P. aeruginosa, uma causa comum de pneumonia associada à ventilação mecânica, é uma bactéria que utiliza diversas estratégias de virulência e defesa, incluindo mecanismos antioxidantes. O objetivo deste trabalho foi verificar a relação entre o papel da 1-Cys peroxirredoxina LsfA está envolvida na virulência de P. aeruginosa. Linhagens mutantes com deleção em lsfA ou com uma mutação pontual neste gene (troca da Cys45 por Ala, RB302) foram construídas, sendo mais sensíveis a peróxido de hidrogênio que a linhagem selvagem PA14, como verificado pelo halo de inibição de crescimento. A atividade peroxidásica de LsfA foi medida in vitro pelo ensaio de tiocianato férrico e apenas a proteína com a sequência selvagem foi ativa, enquanto uma mutação na Cys45 aboliu completamente a sua atividade. Infecção de macrófagos J774 com as linhagens ΔlsfA ou C45A resultaram em uma diminuição da morte dos macrófagos, aumento do clearance bacteriano e aumento da secreção de TNF-α em comparação aos macrófagos infectados com a linhagem PA14, sugerindo uma maior ativação das vias do NF-κB e das MAPKs nos macrófagos infectados com as linhagens mutantes. Para verificar se LsfA poderia alterar o estado oxidativo dos macrófagos, eles foram infectados com as linhagens PA14 ou RB302 (C45A) e incubadas com carbóxi-H2DCFDA, um indicador que se torna fluorescente quando oxidado. Macrófagos infectados com a linhagem mutante demonstraram um maior estado oxidativo em comparação aos macrófagos infectados com a linhagem selvagem, confirmando que LsfA limita a ativação dos macrófagos, resultando numa menor produção de TNF-α e diminuição da citotoxicidade. A via das MAPKs e do NF-κB são requeridos para a produção máxima de TNF-α nos macrófagos infectados com a linhagem RB302, o que foi demonstrado utilizando-se de inibidores farmacológicos para essas vias. Como esperado, quando os macrófagos foram infectados com a linhagem RB302 na presença do antioxidante N-acetil-cisteína, houve uma redução da produção de TNF-α a níveis semelhantes dos macrófagos infectados com a linhagem selvagem. Em modelo de pneumonia aguda, todos os camundongos infectados com a linhagem PA14 morreram 48h pós-infecção, enquanto os camundongos infectados com a linhagem RB302 sobreviveram por mais de 60 dias após a infecção. Houve uma redução do número de bactérias nos pulmões, baço e fígado nos camundongos infectados com a linhagem RB302 em comparação aos camundongos infectados com a linhagem PA14. Também foi observado um aumento na produção de citocinas pró-inflamatórias nos camundongos infectados com a linhagem RB302 em comparação aos camundongos infectados com PA14. Com isso, foi demonstrado pela primeira vez o envolvimento de uma 1-Cys peroxirredoxina de bactérias na virulência, com a modulação da resposta imune do hospedeiro in vitro e in vivo. / Bacteria are recognized by macrophages via Toll-Like Receptors (TLR), leading to a signaling pathway that activates NF-κB and MAPKs. Killing in phagossomes is achieved by reactive oxygen and nitrogen species (ROS/RNS) generation. P. aeruginosa is a common cause of ventilator associated pneumonia and it uses several strategies for virulence and defense, including antioxidant mechanisms. In this work, we show for the first time that the 1-Cys peroxiredoxin LsfA is implicated in P. aeruginosa virulence. Mutant strains with a deletion in lsfA or with a mutation (Cys45 to Ala, RB302) were constructed and they were more sensitive to H2O2 than the wild type strain PA14, as verified by a growth inhibition assay. In vitro peroxidasic activity of LsfA was measured by ferric-thiocyanate assay, and while the wild-type protein was active, the mutation in Cys45 abolished its activity. Infection of J774 macrophages with ΔlsfA or C45A strains resulted in lower cell death, increased bacterial clearance and higher TNF-α production in comparison to PA14-infected macrophages, suggesting a higher level of MAPKs and NF-κB activation due to the mutant strains. To verify whether LsfA could modify the oxidative state of infected macrophages, they were infected with PA14 or RB302 strains and incubated with carboxy-H2DCFDA, an indicator that emits fluorescence when oxidized. Macrophages infected with mutant strains showed a higher oxidative state in comparison to PA14-infected cells, thus confirming that LsfA limits macrophages activation that leads to TNF-α production and cytotoxic activity. MAPKs and NF-κB pathways are required to full production of TNF-α in macrophages infected with RB302, as shown using pharmacological inhibitors for those pathways. When macrophages were infected with RB302 in the presence of the antioxidant N-acetyl-cysteine, there was a reduction in TNF-α production as compared to PA14, as expected. In an acute pneumonia model, all PA14-infected mice died at 48h post-infection, while C45A-infected mice survived as long as 60 days. There was also reduction in bacterial counts in the lungs, spleen and liver of mice infected with RB302, in comparison to PA14-infected mice. A greater pro-inflammatory cytokine production was observed in mice infected with mutant strain in comparison to mice infected with PA14. Altogether, this work shows for the first time the role of a bacterial 1-Cys Prx that modulates host immune response in vitro and in vivo.

As influências etárias do sistema imune de bezerros são descritas na primeira fase de vida desses animais e a hipótese de também ocorrerem ariações nos principais mecanismos de resposta inata do pulmão pode identificar períodos de maior suscetibilidade às principais doenças respiratórias que acometem os bezerros nesse período. Com a finalidade de minimizar os prejuízos econômicos associados às doenças respiratórias em bezerros, este estudo objetivou avaliar a dinâmica imunológica inata do sistema respiratório de bezerros sadios nos três primeiros meses de vida, no qual nove bezerros sadios foram acompanhados por três meses e submetidos a oito avaliações imunológicas. O material recuperado do lavado broncoalveolar colhido por broncoscopia foi submetido à avaliação funcional dos macrófagos alveolares utilizando as provas de fagocitose (SaPI e E.coli), burst oxidativo, quantificação de imunoglobulinas e expressão de CD14. Os dados foram avaliados pelo teste ANOVA oneway (unstacked) (paramétricos) e pelo teste Mann-Whitney (não paramétricos). Verificaramse alterações funcionais de fagócitos CD14+, que apesar de se manterem constantes em seus valores relativos durante todo o período, apresentou intensidade de fagocitose elevada pontual na terceira semana de vida e um aumento da fagocitose por mononucleares CD14+ aos 45 dias de idade com diminuição da intensidade da fagocitose por essas mesmas células a partir dessa idade. Conclui-se que a partir de 45 dias de vida os animais começam a montar uma resposta imune própria, porém pontual e que até os 90 dias não atingem a estabilidade necessária para atestar a conclusão do processo de maturação da resposta inata local. / The influences of age in calves\' immune system are described in their first phase of life. The hypothesis that variations occur in the main mechanisms of lung innate response can help to identify periods of greater susceptibility to the respiratory diseases that affect calves in the first stage of their life. With the purpose of minimizing the economic losses associated with respiratory disease in calves, this study aimed to evaluate the innate immune dynamics of the respiratory system of healthy calves in the first three months of life. Nine healthy calves were monitored for three months and eight immunologic evaluations were performed. Bronchoalveolar lavage samples were recovered by bronchoscopy. Then, the alveolar macrophages in samples were identified by protein expression of CD14 and undergone functional evaluation of phagocytosis (SAPI and E.coli) and oxidative burst. Immunoglobulin were also quantified in samples. Data was assessed by one-way ANOVA (unstacked) (parametric) and the Mann-Whitney test nonparametric). Functional alterations in phagocytes CD14 + were observed, and although their relative values were kept throughout the period, higher intensity of phagocytosis in the third week and increased phagocytosis by macrophages CD14 + at 45 days of life was observed. Decreased intensity of phagocytosis was observed after this age. It is concluded that from 45 days of life on, calves began to maintain their immune response, but until 90 days of life they did not achieve the stability to conclude the maturation of local innate response.

Novilhas Holandesas (n=35) foram vacinadas e distribuídas em grupos de acordo com os adjuvantes presentes nas vacinas comerciais contra BVDV e BoHV-1: Halum (hidróxido de alumínio, n=9), Oleosa (emulsão oleosa, n=10), Prezent A (composto saponina, n=10) e Salina (controle, n=6). As reações locais e sistêmicas foram avaliadas às zero horas (h), seis, 24, 48, 72 e 168h pós-vacinal. A produção de anticorpos (ACs) foi mensurada nos dias da vacinação (D0), D21 e D42. Capítulo 1 O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta inflamatória sistêmica em novilhas vacinadas contendo diferentes tipos de adjuvantes. O número de hemácias (P=0,009) e hemoglobina (P=0,028) foram maiores no grupo Prezent A após a 2a dose. Os teores de ferro foram maiores no grupo controle após 1ª e 2ª dose (P=0,000; 0,000). Em geral, no leucograma os grupos vacinados apresentaram decréscimo nos números de leucócitos (P=0,001) em 2ª dose, neutrófilos (%) (P=0,000; 0,000) em ambas aplicações e monócitos (%) (P=0,010) após 1ª dose. Os linfócitos (%) apresentaram aumento gradual após as duas doses (P=0,031; 0,000), observando-se menores proporções nos grupos Prezent A e Oleosa. Basófilos (%) após 2ª dose (P=0,012) e eosinófilos (%) (P=0,000; 0,000) foram mais reativos nos grupos Prezent A e Halum entre 24 e 72h. As novilhas Prezent A apresentaram maiores valores (P=0,000; 0,000) haptoglobina às 24 e 48h em relação aos demais grupos após a 1ª e 2ª dose. Em geral, a produção de EROs foi suprimida nas novilhas vacinadas em relação ao controle após 1a dose (P=0,018) e entre 24 à 168h após a 2a dose (P=0,002). Capítulo 2 O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos adversos associados às reações locais e sistêmicas, assim como verificar a reposta imune humoral induzida pelas vacinas. A reatividade local foi mais intensa no grupo Oleosa após a 1a dose (P=0,000), em contrapartida o grupo Prezent A após a 2a dose foi mais reativo (P=0,000). A temperatura retal foi elevada em Prezent A entre 0 a 24h em 1a dose (P=0,000). O escore de Doença Respiratória Bovina foi mais intensa no grupo Prezent A e Oleosa às 48 horas (P=0,0024). Os ACs contra BVDV foram detectados apenas em D42, observando-se médias semelhantes entre Prezent A (log2=5) e Halum (log2=5). A soroconversão foi maior em Halum (78%) em comparação ao Prezent A (40%) e oleosa (10%). Em relação ao BoHV-1, observou-se títulos e soroconversão em D21 nos grupos Halum (log2=3; 67%) e Prezent A (log2=1; 80%). No D42 verificou-se uma maior intensidade de resposta para Prezent A (log2= 6; 100%), seguido de Halum (log2=4; 100%) e Oleosa (log2=3,0; 60%). Os dados permitem concluir que a vacina contendo o adjuvante oleoso e Prezent A ocasionaram maior reatividade local, porém a Prezent A induziu maior resposta inflamatória sistêmica. A produção de ACs contra o BVDV e BoHV-1 foi mais intensa na vacina com hidróxido de alumínio e Prezent A. Estudos futuros são necessários para demonstrar os efeitos benéficos da resposta inflamatória sistêmica do Prezent A sobre a resposta imune adquirida mediada por células do tipo Th1. / Dairy heifers (n=35) were vaccinated and distributed according to adjuvants present in commercial vaccines against BVDV and BoHV-1: Halum (n=9), Oil (n=10), Prezent A (n=10) and Saline (n=6). The local and systemic reactions were evaluated at zero hours (h), 6, 24, 48, 72 and 168h post-vaccination. The production of antibodies (ABs) was measured at vaccination days (D0), D21 and D42. Chapter 1 The objective of this study was to evaluate the inflammatory systemic response in vaccinated heifers with products that contained different types of adjuvants. The numbers of red blood cells (P=0.009) and hemoglobin (P=0,028) were higher in Prezent A after the 2nd dose. The iron were higher in saline group after 1st and 2nd dose (P=0.000; 0.000). In leukogram, vaccinated groups showed a decrease in total leukocytes (P = 0.001) at 2nd dose, neutrophils (%) (P = 0.000; 0.000) in both applications and monocytes (%) (P = 0.010) . Lymphocytes (%) presented gradual increase after received two doses (P = 0.031; 0.000), showing smaller proportions in Prezent A and Oil groups. Basophils (%) after 2nd dose (P = 0.012) and eosinophils (%) (P = 0.000; 0.000) were more reactive in Prezent A and Halum groups between 24 and 72h. Prezent A group presented higher values (P = 0.000; 0.000) of haptoglobin at 24 and 48h compared to the other groups after the 1st and 2nd doses. In general, ROS production was suppressed in vaccinated heifers relative to control after the 1st dose (P = 0.018) and 24 to 168h after the 2nd dose (P = 0.002). Chapter 2 The objective of this research was to evaluate the adverse effects associated with local and systemic reactions as well measure humoral immune response induced by reproductive vaccines containing different adjuvants. Local reactivity was more intense in Oil group after the 1st dose (P = 0.000), in contrast, Prezent A group presented higher reactivity after the 2nd dose. Rectal temperature was higher in Prezent A between 0 and 48 hours in the 1st dose. Bovine Respiratory Disease score was higher in Prezent A and Oil groups at 48h (P=0.002). ABs against BVDV were detected only at D42, observing the similar averages between Prezent A (log2=5) and Halum (log2=5). The seroconversion was higher in Halum (78%) compared to Prezent A (40%) and oil (10%). The titers and seroconversion against BoHV-1 at D21 were observed in Halum (log2 = 3; 67%) and Prezent A (log2 = 1; 80%) groups. At D42 a higher response was observed for Prezent A (log2 = 6, 100%), followed by Halum (log2 = 4, 100%) and Oil (log2 = 3.0, 60%). The data allow to conclude that the vaccine containing oil adjuvant and Prezent A caused greater local reactivity, but Prezent A induced a greater systemic inflammatory response. The production of ABs against BVDV and BoHV-1 was more intense in Halum vaccine and Prezent A. Future studies are needed to demonstrate the beneficial effects of the systemic inflammatory response of Prezent A on the acquired Th1 cell-mediated immune response.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-06T19:27:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-JeanSauvé.pdf: 1000481 bytes, checksum: ba9527b7ead65c4a43be6a94ad0aa462 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T19:27:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-JeanSauvé.pdf: 1000481 bytes, checksum: ba9527b7ead65c4a43be6a94ad0aa462 (MD5) Previous issue date: 2012 / O papilomavírus humano (HPV) é o principal agente etiológico de lesões malignas, a exemplo do câncer cervical e de suas lesões precursoras, as Neoplasias Intraepiteliais Cervicais (NICs). Investigamos se os polimorfismos de base única (SNPs) no gene da Beta-Defensina Humana 1 (DEFB1) poderiam estar associados à susceptibilidade à infecção e à progressão da lesão cervical provocadas por HPV de alto risco. Polimorfismos neste gene têm sido alvo de diversos estudos e revelaram ser de suma importância na susceptibilidade a diversas infecções. Neste estudo, os SNPs -52G/A, -44C/G e -20 G/A na região 5' UTR do gene DEFB1 foram analisados através de sequenciamento, em um grupo de 160 pacientes do sexo feminino HPV positivas e 71 indivíduos sadios. As análises estatísticas foram feitas utilizando o Teste exato de Fisher e o Teste do Qui-quadrado. Os resultados indicam que o alelo -44G e o haplótipo ACA podem estar relacionados com a susceptibilidade à infecção pelo HPV de alto risco. Os resultados não apontam diferenças significativas nas frequências alélicas e genotípicas dos outros polimorfismos entre pacientes infectados com HPV de alto risco e indivíduos sadios. Também não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas nas frequências alélicas e genotípicas nos pacientes HPV positivos quanto ao grau de lesão cervical. / Human papillomavirus (HPV) is the main etiological agent for development of cervical cancer and its precursor lesions, the cervical intraepithelial neoplasia (CINs). We investigated whether single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in the human Beta-Defensin 1 gene (DEFB1) could be associated with susceptibility to infection and progression of cervical lesions caused by high-risk HPV. Polymorphisms in this gene have been the subject of several studies and proved to be extremely important in susceptibility to various infections. In this study, SNPs -52 G/A, -44 C/G and -20 G/A in the 5 'UTR of DEFB1 were analyzed by direct sequencing in a group of 160 HPV-positive female patients and 71 healthy individuals. Statistical analysis was performed using Fisher's exact Test and Chisquare. The results indicate that the -44G allele and haplotype ACA may be associated with susceptibility to infection caused by high-risk HPV. The results show no significant differences in allelic and genotypic frequencies of the other polymorphisms in patients infected with high-risk HPV and healthy individuals. We also found no statistically significant differences in allelic and genotypic frequencies in HPV-positive patients related to the progression of cervical lesion.