A partir de extratos aquosos da esponja marinha Axinella corrugata, coletada na costa sul do Brasil (Santa Catarina), foram purificadas duas lectinas, ACL-I e ACL-II, por cromatografia em coluna de afinidade de matriz de estroma de coelhopoliacrilamida, seguida por gel filtração em Ultrogel AcA 44. Os trabalhos se concentraram, especialmente, no estudo da lectina com maior atividade hemaglutinante, ACL-I. Dentre os eritrócitos testados, ACL-I aglutinou, fortemente, eritrócitos de coelho, além de eritrócitos caprinos e caninos. A atividade hemaglutinante foi inibida por N-acetil-D-glicosamina, N-acetil-D-galactosamina e Nacetil- D-manosamina com igual intensidade, além de N, N’, N”-triacetilquitotriose, o melhor inibidor. Por outro lado, ACL-II aglutinou, preferencialmente, eritrócitos de coelho e caninos, tendo sua atividade hemaglutinante inibida por N-acetil-Dglicosamina, N-acetil-D-manosamina, quitina, N, N’, N”-triacetilquitotriose e fetuína, além de D-galactose, mas não por N-acetil-D-galactosamina. Ambas lectinas foram fracamente inibidas por N-acetil-D-lactosamina. A atividade hemaglutinante mostrouse independente de cátions divalentes e foi estável a uma ampla faixa de temperatura e de pH para ACL-I e para ACL-II. ACL-I foi estável frente à ação de enzimas proteolíticas, mas perdeu 50 % de sua atividade na presença de agentes redutores e desnaturantes. ACL-I é uma glicoproteína e sua massa molecular relativa foi estimada em 82.300 por SDS-PAGE em condições redutoras e não redutoras, e sem desnaturação pelo calor. Ainda, mostrou ser constituída por 6 subunidades monoméricas de 13.900, apresentando pontes de dissulfeto entre as mesmas. Por FPLC, a massa molecular estimada foi de 78.500. Da mesma forma como para ACL-I, ACL-II apresentou apenas uma banda em sistema SDS-PAGE, na ausência de agente redutor e sem desnaturação pelo calor, cuja massa molecular relativa foi estimada em 80.000, enquanto que por FPLC foi estimada em 78.000. O pI de ACL-I foi de 6,3, avaliado por focalização isoelétrica, e a sua composição centesimal de aminoácidos exibiu uma prevalência de glicina, seguida de ácido aspártico/asparagina, ácido glutâmico/glutamina e alanina. Dentre as atividades biológicas testadas, a ACL-I demonstrou atividade quimiotáxica, mitogênica e citotóxica, mas não antioxidante. Os ensaios imuno-histoquímicos mostraram que ACL-I se encontra intracelularmente em grânulos celulares, provavelmente no interior de células esferulosas da esponja marinha. A lectina também mostrou ser uma ferramenta útil na marcação de células transformadas de mama, cólon, pulmão, ovário e bexiga. / Two lectins, ACL-I and ACL-II, were purified from aqueous extracts of marine sponge Axinella corrugata, collected at Atlantic coastline of southern Brazil (Santa Catarina) by rabbit stroma-polyacrylamide gel affinity column, followed by size-exclusion chromatography on Ultrogel AcA 44. The analysis were performed, especially, on the study of lectin with greater hemagglutinating activity, ACL-I. Among the erythrocytes tested, ACL-I agglutinated, strongly, native rabbit, goat and dog erythrocytes, whose hemagglutinating activity was inhibited by N-acetyl-D-glucosamine, N-acetyl-Dmannosamine, N-acetyl-D-galactosamine and N, N’, N”- triacetylchitotriose. On the other hand, ACL-II agglutinated, preferentially, rabbit and dog erythrocytes, with its hemagglutinating activity inhibited by D-galactose, N-acetyl-D-glucosamine, N-acetyl- D-mannosamine, chitin, N, N’, N”- triacetylchitotriose and fetuin, but not by N-acetyl- D-galactosamine. Both lectins were weakly inhibited by N-acetyl-D-lactosamine. The hemagglutinating activity was independent of divalent cations and it was stable at large range of temperature and pH to ACL-I and ACL-II. ACL-I was resistent to enzymatic proteolysis, but lost 50 % of its activity in the presence of reducing or denaturant agents. This lectin presented a relative molecular mass of 82,300 estimated by SDS-PAGE in the presence or absence of 2-mercaptoethanol, without pre-heating, and it is constituted by six monomeric subunits of 13,900, showing disulphide bridges among them. By FPLC the relative molecular mass was 78,500. Similar to ACL-I, ACL-II showed one unique protein band by SDS-PAGE, in the absence of 2-mercaptoethanol and without pre-heating, whose relative molecular mass was estimated as 80,000 and by gel filtration as 78,000. The isoelectric focusing of ACL-I revealed the presence of one unique protein band with pI of 6.3 and the amino acid composition showed a prevalence of glycine, followed by aspartic acid/asparagine, glutamic acid/glutamine and alanine. Among the biological activities analysed, the ACL-I demonstrated chemotactic, mitogenic and cytotoxic activities, but not antioxidant. The immunohistochemical assays revealed that ACL-I is stored in vesicles, probably inside of spherulous cells of the marine sponge. The lectin showed to be a useful tool in the labelling of transformed cells of breast, colon, lung, ovary and bladder.

Introdução e Objetivos: O esôfago de Barrett (BE) desenvolve-se como conseqüência de uma agressão acentuada sobre a mucosa esofágica causada pelo refluxo gastresofágico crônico. É uma lesão precursora e exerce papel importante no desenvolvimento do adenocarcinoma esofágico (ACE). Inúmeras alterações genéticas estão presentes ao longo da transformação tumoral de uma célula, sendo o c-Myc um dos principais genes envolvidos na carcinogênese humana. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão do c-myc em pacientes com EB e com adenocarcinoma esofágico, e avaliar esta prevalência relacionada com a seqüência metaplasia-displasia-adenocarcinoma. Métodos: A expressão da proteína do C-myc foi determinada através da análise imunohistoquímica em quatro grupos diferentes: 31 pacientes com tecido normal, 43 pacientes com EB sem displasia, 11 pacientes com displasia em EB e 37 pacientes com o adenocarcinoma esofágico. O material foi obtido de peças de biópsias ou de ressecção cirúrgica de pacientes atendidos pelo Grupo de Cirurgia de Esôfago, Estômago e Intestino Delgado (GCEEID) do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) no período de janeiro 1998 a fevereiro 2004. Dados demográficos e endoscópicos (sexo, idade, raça, tamanho hiatal da hérnia e extensão do epitélio colunar esofágico), e as características morfológicas e histopatológicas tumorais (invasão tumoral, comprometimento linfonodal, e diferenciação histológica do tumor) foram analisados. A expressão de c-Myc foi avaliada usando o sistema de escore de imunorreatividade (Immunoreactive Scoring System – ISS). Resultados: Expressão aumentada do c-myc foi encontrada em apenas 9,7% das amostras de epitélio normal, em 37,2% dos pacientes com EB, em 45,5% dos pacientes com displasia e em 73% dos pacientes com adenocarcinoma, com diferença estatística significativa entre os grupos. Nenhuma associação foi identificada quando a expressão do c-Myc foi comparada as características morfológicas e histológicas do tumor ou aos dados endoscópicos. Entretanto, uma correlação linear da expressão do c-myc ao longo da seqüência metaplasia-displasia-adenocarcinoma foi observada. Conclusão: O estudo demonstrou um aumento significativo da expressão do c-Myc no EB, na displasia, e no adenocarcinoma em relação aos controles, bem como uma progressão linear da positividade deste gene ao longo desta seqüência. Estes resultados apontam para um papel importante deste marcador no desenvolvimento do ACE a partir do EB. Esta expressão aumentada do c-Myc em pacientes com EB poderá ajudar a identificar pacientes com risco elevado para o desenvolvimento de adenocarcinoma, contribuindo para um diagnóstico precoce desta doença. / Background & Aims: Barrett’s esophagus (BE) develops as a result of severe esophageal mucosa injury from gastroesophageal reflux. BE is premalignant lesion and plays important role in the development of esophageal adenocarcinoma. Several genetic alterations have been identified in the transforming process through a normal cell to tumor one, where the c-myc is one of the most important genes involved in the development of human tumors. The aim of the present study was to determine the expression of the c-myc in patients with BE and esophageal adenocarcinoma, and to evaluate this prevalence in relation to the metaplasia-displasia-adenocarcinoma sequence. Methods: The c-myc protein expression was determined by immunohistochemical analysis in four different groups: 31 patients with normal tissue, 43 patients with BE without dysplasia, 11 patients with dysplasia in BE and 37 patients with esophageal adenocarcinoma. The material was obtained from esophageal biopsy or dissection of esophagectomy specimens of patients from the Esophagus, Stomach and Small Bowel Surgery Group of the Hospital de Clínicas de Porto Alegre from January 1998 to February 2004. Demographic and endoscopic data (sex, age, race, hiatal hernia size and intestinal metaplasia extension), and morphologic and histopathologic tumor characteristics (deep tumor invasion, lymph node status, and tumor differentiation) were analyzed. The c-myc expression was assessed using the Imunoreactive Scoring System (IRS). Results: Overexpression of c-myc was found in only 9.6% of normal tissue specimens, 37,2% of Barrett’s esophagus, 45,5% of BE patients with displasia and 73% adenocarcinoma samples, with significant statistic difference among these groups. No association was identified when the c-myc expression was compared with morphologic and histologic tumor features or endoscopic data. However, linear correlation of c-myc overexpression along the metaplasia-displasia-adenocarcinoma sequence was observed. Conclusion: The study demonstrated a significant increase of the expression of c-myc in Barrett’s esophagus, dysplasia and adenocarcinoma in relation to the control group, as well as a linear progression of this gene expression in this sequence. These results put forward to an important role of this marker in the development of ACE from EB. The increased expression of the c-myc in patients with EB may help to identify patients with increased risk for adenocarcinoma development, contributing to an early diagnosis of this disease.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2017-11-27T15:54:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE_SIDCLEY_ARAUJO.pdf: 1399431 bytes, checksum: 122da0f972194a86c65f5d711727814c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-27T15:54:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE_SIDCLEY_ARAUJO.pdf: 1399431 bytes, checksum: 122da0f972194a86c65f5d711727814c (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / Investigar características do processo de integração e biocompatibilidade de um implante de gel celulósico nas cavidades anoftálmicas de coelhos. Analisar a proliferação celular em geral, a angiogênese, a proliferação de células multinucleadas gigantes e a fibrogênese, por técnicas de histomorfométria e imunohistoquímica. Estudo experimental de intervenção empregando 18 coelhos divididos em 6 grupos. O olho direito de todos os animais foi eviscerado e os esquedo não sofreu nenhum tipo de intervenção. Após a evisceração a bolsa escleral foi suturada e preenchida com gel celulósico gel. Diariamente, todos os animais foram examinados clinicamente, sob biomicroscopia, até o 7º dia do implante e uma vez por semana até o dia da eutanásia. Os animais foram submetidos a eutanásia e enucleações dos olhos no 7º, 30º, 60º, 90º, 120º e 240º dia após o implante. Os olhos, inclusive os esquerdos, foram avaliados macroscopicamente e processados para análises histopatológica, histomorfométricas, imunohistoquímicas e imunofluorescência. Clinicamente, todos os animais, não exibiram sinais de alergias, intoxicação, extrusão e infecção. Em todos os grupos ao exame macroscópico, histopatológico e histomordo olho esquerdo, não revelou alterações anatômicas. No entanto, nesta análise, olho direito exibiu redução de 8% no volume do bulbo. O corte do saco escleral mostrou um conteúdo sólido, compacto, elástico, resistente à tração, com superfície lisa e brancacenta.Não foram observados sinais de necrose, ou liquefação. O tecido epiescleral estava algo hipertrofiado. As preparações histológicas estudadas, nas diversas colorações, revelaram uma infiltração linfomonomorfonuclear inicial, substituída posteriormente por uma proliferação fibrocitária e histiocitária com formação de células multinucleadas gigantes. Foram também encontrados poucos polimorfonucleares neutrófilos e eosinófilos. A partir do 30o dia houve proliferação vascular e deposição de colágeno em todos os espécimes estudados, embora, no 240º dia do experimento, a resposta inflamatória crônica, a neovascularização e a deposição do colágeno não tinham ainda atingido o centro do implante. Neste modelo, o gel da celulose produzido pela Zoogleia sp, mostrou-se biocompatível e integrado às órbitas. Fica, portanto, comprovado que o gel celulósico, utilizadoneste experimento, além de biocompatível, se integrou às órbitas dos coelhos. / To evaluate histologically the integration process of cellulose gel produced by Zoogloea sp when implanted into rabbits’ eviscerated eyes. This experimental study employed 36 eyes of 18 rabbits subjected toEvisceration of their right eyes. The sclerocorneal bag was sutured and filled withbiopolymer from sugar cane in the gel state. All animals were clinically examinedby biomicroscopy until the day of their sacrifice which occurred on the 7º, 30º, 60º, 90º, 120º, or 240º day. The eyeballs obtained, including the left eyes considered controls were sent for histopathological study by optical macroscopyand microscopy. Tissue staining techniques used included hematoxylin-eosin, Masson trichrome (with aniline), Gomori trichrome, Van Gienson, Picrosirius red and periodic acid-Schiff (PAS). No clinical signs of infection, allergy, toxicity, or extrusion were observed throughout the experiment. The corneas were relatively preserved. Macroscopic examination revealed a decrease of ~ 8% in the volume of the bulbs implanted with the biopolymer. After cutting, the sclerocorneal bag was solid, compact, elastic, and resistant to traction, with a smooth and whitish surface, and showed no signs of necrosis or liquefaction. The episcleral tissues were somewhat hypertrophied. The histological preparations studied in different colors revealed an initial lymphoplasmacytic infiltration, replaced by a fibroblastic response and proliferation of histiocytes, along with formation of giant cells. Few polymorphonuclearneutrophils and eosinophils were also found. Neovascularization and collagen deposition were present in all animals starting from day 30; although on the 240º day of the experiment the chronic inflammatory response, neovascularization and collagen deposition had not yet reached the center of the implant. In this model, the cellulose gel produced by Zoogloea sp proved to be biocompatible and integrated into the orbits.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul.

Úlcera de perna é uma doença muito freqüente na população idosa. Inúmeros são os tipos de curativos atualmente usados para tratamento das úlceras de perna, com diferentes indicações, vantagens e desvantagens, cuja eficácia não está bem esclarecida devido à descontinuidade dos tratamentos e os custos envolvidos em algumas situações. Para avaliar a ação da biomembrana de látex (BML) no tratamento de úlceras de perna, que se comportou como eficiente indutora do tecido de cicatrização. Foram realizadas avaliações clínicas e imunohistopatológicas em 21 doentes, casualmente selecionados, submetidos à aplicação da biomembrana (14 pacientes), comparando com o tratamento clássico (07 pacientes) constituído de pomada com cloranfenicol e enzimas proteolíticas (Fibrase) com o objetivo de analisar e comparar as alterações histopatológicas e imunohistoquímicas relacionadas aos diferentes tratamentos. Foram coletadas biópsias da lesão antes e 30 dias após os tratamentos. As biópsias foram divididas em dois fragmentos, um deles para o estudo histopatológico e outro congelado a -70°C para análise imunohistoquímica. Os resultados mostram que o uso da biomembrana de látex facilitou os cuidados à lesão aliada ao baixo custo e praticidade de sua aplicação. Adicionalmente, foi observado que a BML induz a uma diferenciação clínica e histopatológica do tecido de cicatrização, com aumento da detecção de fatores de crescimento como VEGF (vascular endothelial growth factor) e TGF1(transforming growth factor 1), associada à redução da expressão da enzima iNOS (óxido nítrico-sintase induzida), quando comparado ao tratamento controle. A análise global dos dados sugere que o tratamento com a biomembrana conduz a organização do tecido cicatricial conseqüente à maior produção de fatores de crescimento celular. Dessa forma, a biomembrana se caracteriza como uma boa opção terapêutica para úlcera de perna, devido à praticidade de sua aplicação, baixo custo e alta potencialidade na indução da cicatrização. / The leg ulcer is a disease very frequent in elderly people. Nowadays, there are many kinds of dressing to treat its with different indications, advantage and disadvantage. Their efficacy is not clear yet because to the treatments discontinuous and the costs involved in same situations. The latex biomembrane from rubber tree Hevea brasiliensis (NLB) showed an improvement of the healing process to treat leg ulcer, observed by the clinical and the immune histopathological aspects. To verify whether the NLB could be associated with an increased healing we selected 21 leg ulcer patients to be submitted to the topical treatment. These patients were divided into two groups. In the first group 14 randomized patients were treated with latex biomembrane and in the other group 07 patients were treated with topical ointment of cloranfenicol and proteolitic enzymes with the objectives to analyze and to compare the histopathological and immunohistochemical alterations related to the different treatments. All the patients were submitted at least to two biopsies; before the treatment and the 30th day of the treatment. The biopsies specimens were divided into two parts; one of them for the histopathological study and the other was frozen for the immunohistochemical analysis. The results showed that the biomembrane is very easy, practical and cheap leg ulcer topical treatment. Additionally, the NLB induces to a clinical and hystopathological differentiation of the cicatrization tissue with increased detection of growth factors as VEGF (vascular endothelial growth factor) and TGF-1(transforming growth factor1), associated to a reduction of iNOS (induced oxide nitric sintase) expression when compared to the control treatment. The global analyze of the data suggest that the biomembrane of natural latex led to cicatricial tissue organization and a higher production of cellular growth factors. So, this treatment can characterize as a good therapeutic option for leg ulcers due the facility of the application, low costs and high potentiality to induce of the cicatrization.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-01-30T10:37:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Adriano Queiroz de Mesquita - 2014.pdf: 6614236 bytes, checksum: 0e7a5056a14cf2c542e7bae25c3f574b (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-30T12:35:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Adriano Queiroz de Mesquita - 2014.pdf: 6614236 bytes, checksum: 0e7a5056a14cf2c542e7bae25c3f574b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-30T12:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese - Adriano Queiroz de Mesquita - 2014.pdf: 6614236 bytes, checksum: 0e7a5056a14cf2c542e7bae25c3f574b (MD5) Previous issue date: 2014-05-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Frog farming is an expanding activity in South America. In Brazil it can be considered consolidated, especially in the state ofGoiás. In the last few years it turned into a superintensive activity and consequently favored the emergence of diseases that pose a threat to the technical and economic viability of farms of aquatic organisms. Several diseases with high morbidity and mortality have been observed in tadpoles and frogs. Especially in the state of Goiás, two diseases affect the production cycle in the frog farms. The first manifests itself in 30 days tadpoles leading to high mortality and has been associated to the presence of Ranavirus. The second affects frogs in all stages from post-molt to the point of slaughtering. In post-metamorphic phase the animals are cachectic and 10-50 % of the populationdevelops nervous signs such as incoordination and abnormal postures chronic condition. Despite the board's neurological symptoms, some frogs are able to feed and continue to grow slowly, with few recovering normal condition. This clinical manifestation may be attributed to the anatomy of the vestibular system and hearing. Afferent bilateral vestibular signals from semicircular canal and otolith organs are essential for the stabilization of gaze, the control of posture and locomotion as well as the cognitive aspects of balance, spatial orientation and vegetative homeostasis. Considering the relevance of the topic, the objective of this study is to contribute to the elucidation of Vestibular Syndrome in Rana catesbeiana focusing in the presence of Ranavirus through the use of methods of diagnosis and histopathological techniques , real-time PCR , immunohistochemistry and electron microscopy. In the first study, we developed a method of detecting Ranavirus by real-time PCR for diagnosis of clinically healthy and diseased frogs with nerve signals in order to monitor the spread of this agent for this and other species of animals that inhabit the frog farms around the state of Goiás 91 samples were collected randomly frog farms in the countryside of the stateof Goiás of these, 50 were from frogs without clinical symptoms and 41 box of frogs with nerve sequelae characterized by lack of coordination , posture with abnormal lordosis, scoliosis and various degrees of head tilt to the left or right side. Based on these results, it is concluded that the frequency of ranavirus frogs with neurological symptoms is higher than the frequency of ranavirus frogs without apparent clinical symptoms, indicating association of clinical findings with the presence of the virus. The detection of ranavirus in animals living near the frog farms in the state of Goiás indicates that the virus is spread in the sampled detection in fish and frog farms reveals need for monitoring thespread of the virus to prevent cases of mass mortality in other species. In the second study, samples were collected randomly from 60 bullfrogs from frog farms in the state of Goiás in order to identify the agent involved in chronic, vestibular syndrome similar to clinical problems through diagnostic techniques such as transmission electron microscopy, histopathology and immunohistochemistry. Of these, 30 bullfrogs had typical clinical picture and 30 bullfrogs had become asymptomatic. At histopathology, inflammatory type of lesions with necrosis and lymphocytic infiltration were seen in the posterior regions of the cerebrum and cerebellum, with meningoencephalitis and inclusion bodies, areas of gliosis, and necrotic foci with abundant macrophages and cellular debris associated with inflammatory infiltrates. The choroid plexus showed abundant inflammatory infiltrates and lesions similar to those described above. Theselesions were also observed in the region of the semicircular canals and the central and peripheral vestibular apparatus to the front and cross cuts. These specimens subjected to staining with specific anti - iridovirus revealed the presence of positive staining in the choroid plexus region. This finding associated with the lesions described in anatomohistopatologia confirms the presence of Ranavirus. When analyzing the images obtained by electron microscopy transmission of samples from kidney and liver of bullfrog it was possible to visualize viral particles with similar characteristics to that of ranavirus, with icosahedral symmetry and size ranging from 120 - 300nm . Thus, it is concluded that the lesions of inflammatory type, described in anatomohistopatologia in the posterior central nervous system bullfrogs region, extending to the middle and inner ear, nervous symptoms associated with vestibular character indicate the presence of Ranavirus. Regarding immunohistochemistry, the presence of positive staining with specific anti- Iridovirus in the affected cells of the choroid plexus of bullfrog, associated to lesions described in anatomohistopatologia region confirms the presence of ranavirus and the presence of viral particles in the liver and kidney bullfrog, associated with inflammatory lesions in the posterior type central nervous system region, extending to the middle and inner ear, described in the present study also confirms the presence of Ranavirusin frog farms of the state of Goiás. / A ranicultura é uma atividade em expansão na América do Sul podendo ser considerada consolidada no Brasil, particularmente no Estado de Goiás. Nos últimos anos, transformou-se em uma atividade superintensiva e como consequência favoreceu o aparecimento de doenças que constituem uma ameaça para a viabilidade técnica e econômica dos criatórios de organismos aquáticos. Diversas doenças com alta morbidade e mortalidade têm sido observadas emgirinos e rãs. Especialmente no estado de Goiás, duas patologias afetam o ciclo produtivo nos ranários. A primeira se manifesta em girinos de até 30 dias levando à alta taxa de mortalidade e já foi relacionada à presença de Iridovírusdo gênero Ranavirus. A segunda acomete rãs em todas as fases desde a pós-metamorfose até animais no ponto de abate. Na fase pósmetamórfica os animais apresentam-se caquéticos e de 10 a 50% da população desenvolve um quadro crônico caracterizado clinicamente por sinais nervosos como falta de coordenação e posturas anormais. Apesar do quadro com sintomatologia nervosa, algumas rãs conseguem se alimentar e continuam crescendo lentamente, sendo que poucas recuperam a condição normal. Essamanifestação clínica pode ser atribuída à própria anatomia do sistema vestibular e do aparelho auditivo. Sinais aferentes vestibulares bilaterais de canal semicircular e órgãos otolíticos são essenciais para a estabilização do olhar, o controle da postura e locomoção, bem como para os aspectos cognitivos de equilíbrio, orientação espacial e homeostase vegetativa. Considerando a relevância do tema, objetivou-se como presente estudo contribuir para elucidação da Síndrome Vestibular em Rana catesbeiana com foco na presença de Ranavirus por meio do emprego de métodos de diagnóstico como técnicas histopatológicas, PCR em tempo real, microscopia eletrônica e imunohistoquímica. No primeiro estudo, foi desenvolvido um método de detecção de Ranavirus por PCR em tempo real para diagnóstico em rãs clinicamente sadias e em rãs enfermas com sinais nervosos, com o objetivo de monitorar a disseminação desse agente para essa e outras espécies de animais que habitam o entorno dos ranários do estado de Goiás. Foram colhidas 91 amostras distribuídas aleatoriamente em ranários da zona rural do estado de Goiás. Dessas, 50 eram provenientes de rãs sem sintomatologia clínica e 41 de rãs com quadro de sequelas nervosas caracterizado por falta de coordenação, postura anormal com lordose, diversos graus de escoliose e desvio da cabeça para os lados esquerdo ou direito. Diante dos resultados obtidos, conclui-se que a frequência de Ranavirusem rãs com sintomatologia nervosa é superior à frequência de Ranavirus em rãs sem sintomatologia clínica aparente, indicando associação do quadro clínico com a presença do vírus. A detecção de Ranavirusem animais que habitam o entorno dos ranários do estado de Goiás indica que o vírus encontra-se disseminado nos ranários amostrados e a detecção em peixes revela necessidade de monitoramento da disseminação do vírus para evitar casos de mortalidade em massa em outras espécies. No segundo estudo, foram colhidas aleatoriamente amostras de 60 rãs da espécie Rana catesbeiana provenientes de ranários do estado de Goiás com o objetivo de identificar o agente envolvido nos quadros clínicos crônicos, similares à síndrome vestibular, por meio de técnicas de diagnóstico como microscopia eletrônica de transmissão, anatomohistopatologia e imunohistoquímica. Dessas, 30 apresentavam quadro clínico característico e 30 apresentavam-se assintomáticas. À anatomohistopatologia foram identificadas lesões do tipo inflamatória com necrose e infiltrado linfocitário nas regiões posteriores do encéfalo e cerebelo, com meningoencefalite e corpúsculos de inclusão, regiões de gliose, e focos necróticos com abundantes macrófagos e restos celulares associados a infiltrados inflamatórios. O plexo coroide apresentou infiltrado inflamatório abundante e lesões semelhantes às descritas anteriormente. Essas lesões também foram observadas na região dos canais semicirculares e no aparelho vestibular central e periférico aos cortes frontal e transversal. A leitura das lâminas submetidas à coloração com anticorpo específico anti-iridovírus revelou a presença de marcação positiva na região do plexo coroide. Essa constatação associada às lesões descritas na anatomohistopatologia confirma a presença de Ranavirus. Ao analisar as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão de amostras de rim e fígado foi possível visualizar partículas virais com características semelhantes à dos Ranavirus, ou seja, com simetria icosaédrica e tamanho variando de 120-300nm. Desse modo, conclui-se que as lesões do tipo inflamatórias, descritas na anatomohistopatologia, na região do sistema nervoso central posterior, com extensão para o ouvido interno e médio, associadas à sintomatologia nervosa de caráter vestibular indicam a presença de Ranavirus. Em relação à imunohistoquímica, a presença de marcação positiva com anticorpo específico antiiridovirus em células afetadas da região do plexo coroide, associada às lesões descritas na anatomohistopatologia confirma a presença de Ranavirus e a presença de partículas virais em fígado e rim, associada às lesões de tipo inflamatórias na região do sistema nervoso central posterior, com extensão para o ouvido interno e médio, descritas no presente estudo, também confirma a presença de Ranavirus em rãs de criação de ranários do estado de Goiás

INTRODUÇÃO: A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecciosa endêmica no Brasil, causada por protozoários do gênero Leishmania e possui duas formas clínicas principais, a leishmaniose cutânea (LC) e a leishmaniose mucocutânea (LMC). Os macrófagos têm papel crucial na patogênese da Leishmaniose como hospedeiros do parasita e atuam como células apresentadoras de antígenos, promovendo uma resposta imune de perfil Th1 contra a Leishmania. Os macrófagos polarizados M2, relacionados com resposta anti-inflamatória (Th2), são envolvidos no controle da inflamação e dano tecidual em várias doenças e estão associados à cronicidade nas doenças infecciosas. O objetivo deste trabalho foi verificar a participação dos macrófagos M2 nos sítios de lesão cutânea da LTA MÉTODOS: Sessenta e três biópsias de pele de lesões de LTA, obtidas de 48 doentes com LC e 15 de LMC, foram submetidas ao método imuno-histoquímico com os anticorpos anti-CD163 e anti-CD206, marcadores de macrófagos M2. Dez espécimes foram também submetidos à técnica imuno-histoquímica de dupla marcação com a utilização dos marcadores pSTAT-1 e CD68 para identificação de macrófagos M1 e CMAF e CD163 para identificação de macrófagos M2. RESULTADOS: Os espécimes de pele com reação inflamatória difusa (n = 26) exibiram maior número de células imunomarcadas com CD163, quando comparadas ao grupo com reação granulomatosa bem organizada (n = 37) (p= 0,01). Os macrófagos CD163+ também foram mais numerosos nas lesões de pele com a presença de formas amastigotas de Leishmania (n = 39) ao exame histopatológico (p=0,02), quando comparadas às lesões onde os parasitas não foram observados (n = 24). O mesmo ocorreu quando comparados somente os espécimes do grupo de doentes com LC com a presença de parasitas (n = 31) e ausência dos mesmos (n = 17) (p = 0,04). As lesões de pele de doentes com LMC mostraram maior número de células CD206+ (n = 15) que a de doentes com LC (n = 48) (p=0,008). Houve correlação positiva entre o número de células imunomarcadas com os anticorpos CD163 e CD206 (r de Spearman= 0,369). Os macrófagos +pSTAT1/CD68+ (M1) mostraram-se mais numerosos que os macrófagos CMAF+/CD163+ (M2) nos sítios de lesão cutânea da LTA. CONCLUSÕES: Os resultados obtidos sugerem que os macrófagos M2 têm um papel na resposta imune \"in situ\" da LTA. Essas células devem atuar como células alvo, facilitando a entrada dos parasitas, a progressão da doença e parecem estar envolvidos nos mecanismos de cronicidade e nos processos de remodelamento tecidual dessa doença. As moléculas CD163 e CD206 podem ser consideradas bons marcadores teciduais de macrófagos M2, uma vez que mostraram correlação positiva em sua expressão. A técnica de dupla marcação confirmou a presença dos macrófagos M2 nas lesões cutâneas da LTA. Embora ocorra a presença de macrófagos M2, os macrófagos M1 são a população macrofágica predominante da resposta imune \"in situ\" da LTA / INTRODUCTION: American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an endemic infectious disease in Brazil, caused by Leishmania parasites and it has two main clinical forms, cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). Macrophages play a key role in leishmaniasis pathogenesis. They are definite parasite host and act as antigen presenting cells, eliciting a Th1 pattern of immune response (M1) against Leishmania. M2 polarized macrophages, related to an anti-inflammatory response (Th2), are involved in controlling inflammation and tissue damage in several diseases and are related to chronicity in infectious diseases. The aim of this study was verifying M2 macrophages \"in situ\" participation in ATL. METHODS: Sixty-three skin biopsies from LTA lesions, obtained from patients with CL (n=48) and MCL (n=15), were subjected to imunohistochemical technique with M2 macrophages markers CD163 and CD206 antibodies. Ten samples were selected for double staining technique with pSTAT1 and CD68 markers for M1 identification, and CMAF and CD163 markers for M2 macrophages identification. RESULTS: Skin samples displaying diffuse inflammatory reaction (n = 26) exhibited higher number of CD163 immune stained macrophages when compared to the well-organized granulomatous reaction group (n = 37) (p=0.01). CD163+ macrophages were higher in samples displaying Leishmania parasites (n = 39) at histopathology exam than the samples without parasites (n = 24) (p=0.02). Same result was observed when comparing the lesions of CL lesions with (n = 31) and without (n = 17) parasites (p = 0.04). MCL skin lesions (n = 15) showed higher number of CD206+ cells (p = 0.008) in comparison with skin lesions taken from CL patients (n = 48). Spearman test demonstrated a positive correlation between the number of CD163+ and CD206+ immune stained cells (Spearman r = 0,369). M1 macrophages (pSTAT1+/CD68+) were present in higher number when compared to M2 macrophages (CMAF+/CD163+) in the samples studied. CONCLUSIONS: The results suggest that M2 macrophages play a role in the in situ immune response of ATL. M2 polarized macrophages may act as host target cells facilitating parasites entry and promoting disease progression, but also seem to be involved with chronicity and tissue remodeling of ATL lesions. CD163 and CD206 molecules may be considered as good markers for M2 macrophages. Double staining technique confirmed the presence of M2 macrophages, although M1 macrophages are the predominant macrophagic component in skin lesions of ATL

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For survival study, patients with a followup of up to 60 months were selected, with a recorded death. Of the 102 cases evaluated, 62.7% were female and 37.3% male; With mean age of 57.2 years and 63.1 years respectively (p= 0.0026). The most prevalent age at diagnosis of melanoma was between 51 and 70 years (44.1% p= 0.023). In this study, there was a predominance of lesions located in the trunk (32.3%). Histopathological examination of the type of tumor growth showed a predominance of the superficial extensive type in 52.9% of the cases. According to the Breslow index, lesions with ≤1.0 mm predominated in 39.2% of the individuals, followed by lesions> 4.0 mm in 23.5% of the cases. According to the Clark level 29.4% of the cases were classified in level IV; Followed by 25.5% cases with level V; Clark II in 23.5%; Clark III in 20.6%; And Clark I in only 1 case (1.0%). There were metastases in 47% of the cases and the main localization sites were: lymph nodes, brain, skin and lung. Regarding the clinical evolution of the patients, there were 26 cases of deaths due to melanoma (25.5%). The survival curve calculated at the 60-month follow-up was 73.0%. Univariate analysis revealed significant associations between nuclear overexpression of OCT4 and the following variables: Breslow index with thickness > 2.1 mm (p = 0.021, OR: 2.64, 95% CI: 1.15-6.05 ); Levels of Clark, IV and V (p = 0.001, OR: 4.11, 95% CI: 1.79-9.46); ulceration present (p≤0.0001; OR: 459.0; 95% CI: 51.67-4077.27); Presence of metastases (p <0.0001, OR: 40.25, 95% CI: 12.90- 125.62), and death from cutaneous melanoma (p <0.0001). The significant associations between cytoplasmic hyperexpression of OCT4 and the following variables were: present ulceration (p = 0.015, OR: 2.73, 95% CI: 1.21-6.16); Presence of metastases (p = 0.004, OR: 3.34, 95% CI: 1.47 - 7.62) and death from cutaneous melanoma (p = 0.039, OR 2.67, 95% CI 1.05 - 6,77). And the significant associations between the cytoplasmic hyperexpression of NANOG and the following variables were: present ulceration (p≤ 0.0001); Presence of metastases (p ≤ 0.0001) and death due to cutaneous melanoma (p = 0.030). Our study demonstrated a strong association of the OCT4 / O melanoma cutâneo é um tipo de câncer de pele que tem origem nos melanócitos, afetando predominantemente adultos jovens e de meia-idade. Diversas evidências sugerem a existência células-tronco tumorais para o melanoma. Os genes POU5F1/OCT4, NANOG vem sendo estudados como marcadores células-tronco tumorais. O OCT4 e o NANOG estão envolvidos na manutenção da pluripotência e autorrenovação das células-tronco embrionárias indiferenciadas. Este estudo tem por objetivo avaliar os fatores epidemiológicos, clínico-patológicos e expressão da proteína OCT4 e NANOG em amostras de melanoma cutâneo. Foram selecionados 102 casos para o estudo epidemiológico, clínico e patológico, diagnosticados entre os anos de 2004 a 2008. Para estudo de sobrevida foram selecionadas pacientes com seguimento de até 60 meses, com óbito registrado. Dos 102 casos avaliados foram observados 62,7% do gênero feminino e 37,3% masculino; com média de idade de 57,2 anos e 63,1 respectivamente (p= 0,0026). A idade de maior prevalência ao diagnóstico do melanoma foi entre 51 a 70 anos (44,1% p= 0,023). Nesse estudo, houve predomínio das lesões localizadas no tronco (32,3%). Ao exame histopatológico quanto ao tipo de crescimento do tumor, houve predomínio do tipo extensivo superficial em 52,9% dos casos. Segundo o índice de Breslow predominaram as lesões com ≤1,0mm em 39,2% dos indivíduos, seguidas pelas lesões >4,0mm em 23,5% dos casos. De acordo com o nível de Clark 29,4% dos casos foram classificados no nível IV; seguidas por 25,5% casos com nível V; Clark II em 23,5%; Clark III em 20,6%; e Clark I em apenas 1 caso (1,0%). Houve metástases em 47% dos casos e os principais sítios de localização foram: linfonodos, cérebro, pele e pulmão. Em relação à evolução clínica dos pacientes ocorreram 26 casos de óbitos por melanoma (25,5%). A curva de sobrevida calculada no seguimento de 60 meses foi de 73,0%. A análise univariada revelou associações significativas entre a hiperexpressão nuclear de OCT4 e as seguintes variáveis: índice de Breslow com espessura de > 2,1 mm (p= 0,021; OR: 2,64; IC 95%: 1,15 - 6,05); níveis de Clark, IV e V (p= 0,001; OR: 4,11; IC 95%: 1,79 - 9,46); ulceração presente (p≤ 0,0001; OR: 459,0; IC 95%: 51,67 - 4077,27); presença de metástases (p≤ 0,0001; OR: 40,25; IC 95%: 12,90 - 125,62) e óbito por melanoma cutâneo (p≤ 0,0001). As associações significativas entre a hiperexpressão citoplasmática de OCT4 e as seguintes variáveis foram: ulceração presente (p= 0,015; OR: 2,73; IC 95%: 1,21 - 6,16); presença de metástases (p= 0,004; OR: 3,34; IC 95%: 1,47 - 7,62) e óbito por melanoma cutâneo (p= 0,039; OR: 2,67; IC 95%: 1,05 - 6,77). E as associações significativas entre a hiperexpressão citoplasmática de NANOG e as seguintes variáveis foram: ulceração presente (p≤ 0,0001); presença de metástases (p≤ 0,0001) e óbito por melanoma cutâneo (p= 0,030). Nosso estudo demostraram uma forte associação dos genes OCT4 e NANOG como os piores fatores prognósticos do melanoma cutâneo.

Neste estudo foi verificado que a hipófise de S. brasiliensis era composta por dois tecidos, a neuro hipófise (NH) e a adeno-hipófise (AH). Nesta última, foram distinguidos sete tipos celulares. Na RPD foram detectadas as células adrenocorticotrópicas e prolactínicas, na PPD as células gonadotrópicas, somatotrópicas e tireotrópicas, e na PI, as células melanotrópicas e somatolactínicas. Foi evidenciada única célula gonadotrópica, produtora de LH e FSH. O primórdio da hipófise foi detectado 12 horas após a eclosão (hpe), a NH com 72 hpe e o início da formação do pedúnculo com 300 hpe. Nos juvenis (600 hpe), a hipófise apresentou uma morfologia semelhante àquela observada nos adultos. As células prolactínicas foram detectadas com 12 hpe, juntamente com as células adrenocorticotrópicas e melanotrópicas, seguidas das somatotrópicas e somatolactínicas, com 36 hpe. Por outro lado, nas larvas e juvenis foram detectadas duas populações distintas de células gonadotrópicas, as células produtoras de FSH foram detectadas com 600 hpe, enquanto as produtoras de LH com 120 hpe. / This study showed that the pituitary gland of S. brasiliensis was formed by two tissues, neurohypophysis and adenohypophysis. In the latter, seven cell types were distinguished. In RPD, prolactin and adrenocorticotropic cells were present. In PPD, gonadotropic, somatotrope and thyrotropic cells were detected, and in PI, somatolactin and melanotropic cells were found. Interestingly, was detected a single gonadotropic cell responsible for producing both gonadotropins. The primordium of the pituitary gland was detected 12 hours after hatching (hah), the neurohypophysis was detected 72 hah and formation of the stalk 300 hah. In juveniles, 600 hah, the pituitary showed a similar morphology to that observed in adults of this species. Prolactin cells were detected 12 hah together with adrenocorticotropic and melanotropic cells, followed by somatotropic and somatolactin cells 36 hah. Unlike adults, larvae and juveniles have shown two distinct populations of gonadotropic cells. FSH-producing cells were detected 600 hah, while LH-producing cells were detected 120 hah.

Made available in DSpace on 2016-08-16T18:18:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE SOFIA SOUSA SALES.pdf: 1314406 bytes, checksum: cf0a23c2cfdc8d768fd9d2a3edfd3773 (MD5) Previous issue date: 2012-08-11 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / The aim of this study was to evaluate the protective effect of the flagellar fraction of Leishmania (L) amazonensis and BCG in dogs from endemic area for canine visceral leishmaniasis (CVL). Initially a study was conducted on an epidemiological survey in order to determine the frequency of antibodies against Leishmania in dogs of both sexes, with aged above six months and their correlation with clinical variables such as : hypertrophy of popliteal lymph nodes, skin lesions , onychogryphosis, cachexia and ocular lesions. A total of 341 dogs were used in this study. The serum of these animals was submitted to ELISA/S7 ® test. The serological results shwoed that 173 (50.73%) were positive and 135 (39.59%) were negative for anti-Leishmania antibodies. Among Seropositive animals was observed that 79 (45.66%) presented lymph node hypertrophy, 25 (14.45%) skin lesions, 23 (13.29%) onychogryphosis, 22 (12.72%) cachexia and 11 (6.36%) with the presence of ocular lesions. To evaluate the protective effect of flagellar fraction and BCG were evaluated 90 seronegative animals divided in three groups of 30animals: Group I - animals immunized with flagellar fraction doses of BCG and Group II - animals immunized with BCG and Group III - control animals inoculated with PBS. After immunization the animals remained in the endemic area and they were followed up during 14 months. For immunohistochemical analysis just 06 dogs of each group were selected randomly. However, all dogs were negative for the presence of anti-Leishmania, the immunohistochemical analysis showed amastigotes of Leishmania in the skin of 2 animals, one belonging to the Group II (5 parasites / field) and another belonging to the Group III (18 parasites / field ). The animals of group I (immunized with BCG and flagellar fraction) did not present parasites in the skin. In conclusion this study reinforce the same results obtained in murine model that immunization with flagellar fraction of L. amazonensis in combination with BCG is able to protect dogs analyzed, and the immunohistochemistry was more efficient in the diagnosis of CVL in this study. / O propósito do presente estudo foi avaliar a capacidade protetora da fração flagelar de Leishmania (L) amazonensis sob imunomodulação do BCG em cães provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC) por meio da avaliação sorológica, histológica e imunohistoquímica. A priori foi realizado um estudo do tipo inquérito, sobre a ocorrência de anticorpos anti-Leishmania em cães macho e fêmea, com idade igual ou superior a seis meses e sua correlação com as variáveis clínicas: hipertrofia de linfonodos poplíteos, alterações cutâneas, onicogrifose, caquexia e lesões oculares. Os cães foram analisados sorologicamente, através do teste de ELISA/S7®, utilizando-se amostras de sangue periférico num total de 341 amostras analisadas. Desse total, 173 (50,73%) foram soropositivos e 135 (39,59%) foram soronegativos para anticorpos anti-Leishmania. Dos animais com sorologia positiva observou-se 79 (45,66%) com hipertrofia de linfonodos, 25 (14,45%) com alterações cutâneas, 23 (13,29%) com onicogrifose, 22 (12,72%) com caquexia e 11 (6,36%) com presença de lesões oculares. Para avaliar a capacidade protetora da fração flagelar imunomodulada pelo BCG, foram avaliados 90 animais com sorologia negativa para LVC, divididos em três grupos de 30 animais: Grupo I animais imunizados com doses de fração flagelar e BCG; Grupo II animais imunizados apenas com BCG e o Grupo III animais controles inoculados com PBS. Após a imunização os animais foram deixados em área endêmica e acompanhados por 14 meses. Na etapa seguinte, 06 cães de cada grupo, escolhidos aleatoriamente, tiveram sangue e fragmentos de pele da ponta da orelha coletados para posterior realização de sorologia anti-Leishmania, imunohistoquímica, imprinting e histologia. A avaliação dos resultados mostrou que todas as amostras coletadas foram negativas para a presença de anticorpos anti-Leishmania. Já a análise imunohistoquímica evidenciou formas amastigotas de Leishmania sp na pele de 2 animais, um pertencente ao Grupo II (5 parasitos/campo) e outro pertencente ao Grupo III (18 parasitos/campo). Os animais do grupo I (imunizados com fração flagelar e BCG) não apresentaram positividade em nenhuma das análises. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que a imunização com fração flagelar de L. amazonensis em associação com BCG foi capaz de proteger os cães analisados e que a técnica de imunohistoquímica mostrou-se mais eficiente no diagnóstico da LVC no presente estudo.