Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-05Bitstream added on 2014-06-13T20:04:05Z : No. of bitstreams: 1 nascimento_mpp_dr_botfm.pdf: 257230 bytes, checksum: 279e4c7577f3c5e9014f50d0a8e75ddc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Células gigantes multinucleadas (CGM) são células características, presentes em lesões granulomatosas, induzidas por agentes infecciosos e, sua formação pode ser modulada por citocinas produzidas por células da resposta imune. No presente trabalho avaliou-se o efeito modulador de citocinas pró-inflamatórias (IFN-γ e TNF-α) e anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-β1) na formação de CGM in vitro, a partir de monócitos humanos, estimulados com antígenos de Paracoccidioides brasiliensis (AgPb) e sobre a atividade fungicida dessas células desafiadas com a cepa Pb18 de P.brasiliensis. Monócitos do sangue periférico de indivíduos saudáveis foram cultivados na ausência de estímulo (controle), com AgPb (100ug/mL) ou com associações de AgPb e GM-CSF (100 U/ml) com as citocinas: IFN-γ (300UI/mL), IL-10 (50U/mL), TGF- β1 (250pg/mL) ou TNF-α (50U/mL). A formação de CGM foi avaliada após três dias de cultivo, estabelecendo-se o índice de fusão (IF) e a percentagem de CGM após fixação e coloração das células com May-Grunwald-Giemsa. Além disso, a atividade fungicida dessas células foi avaliada após 4 h de co-cultivo das CGM com 4 x 104 células leveduriformes viáveis da cepa Pb18 de P. brasiliensis, por plaqueamento das co-culturas em meio BHI-ágar e determinação da recuperação de fungos viáveis. O método estatístico empregado para comparação dos resultados foi análise de variância, com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a incubação de monócitos com AgPb+GM-CSF+IFN-γ induziu IF significativamente mais elevados em relação a todas as demais culturas: controle, apenas estimulados com AgPb ou AgPb adicionado das demais citocinas. A adição de TNF- α+AgPb+GM-CSF não resultou em IF maiores do que os obtidos na cultura estimulada apenas com o AgPb, enquanto as citocinas IL-10 e TGF-β1 apresentaram efeito supressor... / Multinucleated giant cells (MGC) are characteristics cells present in granulomatous lesions induced by infectious agents and also may be modulated by cytokines produced by cells of the immune response. The present study evaluated the modulatory effect of interferon-gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) pro-inflammatory cytokines, and interleukin-10 (IL-10) and transforming growth factor beta (TGF-β1) anti-inflammatory cytokines on in vitro formation of MGC derived from human monocytes, stimulated with Paracoccidioides brasiliensis antigen (PbAg) and on fungicidal activity of these cells challenged with the Pb18 strain of P.brasiliensis. Peripheral blood monocytes obtained from healthy individuals were cultured for three days without stimulus (control) or with PbAg (100 ug/mL) or with association of PbAg and granulocyte macrophage colony stimulator factor (GMCSF (100 U/mL) with the following cytokines: IFN-γ (300 UI/mL), IL-10 (50 UI/mL), TGF-β1 (250 pg/mL) or TNF-α (50 UI/mL). The generation of MGC was evaluated by fusion index (FI) and the percentage of MGC formation after cell fixing and May-Grumwald-Giensa staining. Fungicidal activity of monocytederived MGC was evaluated 4h after co-culture of MGC with 4 x 104 viable yeast cells of Pb18 strain, by plating the cultures in BHI-agar and determination of viable fungi recovery. The statistical method employed for the comparison of the results was analysis of variance with the significance set at p< 0.05. The results showed that the incubation of monocytes with PbAg+GM-CSF+IFN-γ induced FI significantly higher than those observed in all the other cultures, such as control cultures, cultures stimulated with PbAg only or cultures stimulated with PbAg associated with the other cytokines. Stimulation with PbAg+TNF+GM-CSF did not result in FI higher than those obtained in the culture stimulated with PbAg only... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O leite de colostro bovino se destaca por suas propriedades nutricionais, terapêuticas e apresenta alta quantidade de imunoglobulinas, sendo uma fonte potencial de anticorpos aos humanos. O uso da carbonatação tem o intuito de inibir o crescimento microbiano do meio, com a possibilidade de aumentar o tempo útil do produto cru durante o armazenamento refrigerado. Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da acidificação com CO? sobre as características físico-químicas como, pH, acidez titulável, densidade, gordura, proteínas, EST, ESD, cinzas, cálcio, viabilidade das imunoglobulinas IgG e contagem microbiológica de mesófilos, psicrotróficos, coliformes totais e E.coli do leite de colostro bovino após 48 horas do processo da carbonatação. O CO2 foi adicionado ao leite de colostro bovino, em sistema aberto, sob pressão ambiente, à temperatura de 5ºC até atingir os valores médios de pH 6,30 e 6,06. As análises foram realizadas em triplicata, exceto a imunodifusão radial simples e análises microbiológicas que foram realizadas em duplicata. Inicialmente os resultados foram checados quanto a Normalidade pelo teste de Kolmogorov-Smirnov e a homogeneidade de variâncias entre as três amostras de leite de colostro bovino foi estudada pelo teste de Hartley. Diferenças estatisticamente significativas foram avaliadas pela análise de variância (ANOVA) unifatorial e o teste de Fisher foi utilizado para comparar as médias entre os tratamentos. Imunoglobulinas da classe IgG, gordura, proteína, extrato seco total, extrato seco desengordurado, cinzas e cálcio não apresentaram diferenças estatisticamente significativas após o processo de acidificação utilizado no trabalho. Os valores de pH se mostraram diferentes (p<0,05) entre si, mostrando que a carbonatação foi eficiente na diminuição do pH do leite de colostro bovino. Acidez titulável teve seus valores iniciais aumentados nas amostras carbonatadas até pH extremo. Os micro-organismos mesófilos e E.coli, não foram afetados pelo processo da acidificação, 48 horas após o processo. Para os micro-organismos psicrotróficos e coliformes totais pesquisados as diferenças médias das contagens microbianas não foram estatisticamente significativas, porém analisando alíquotas isoladas nota-se redução na carga microbiana em diversas amostras carbonatadas até o pH extremo em comparação com as amostras in natura de leite de colostro.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-28Bitstream added on 2014-06-13T20:17:32Z : No. of bitstreams: 1 leite_spf_me_sjc.pdf: 278238 bytes, checksum: 6f4d38167f92aff0fda74b9fd99f4f11 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente projeto de pesquisa objetiva avaliar a marcação de mastócito (MCs)s, linfócitos T CD4+ e, linfócitos T CD8+ na queilite actínica (QA), carcinoma epidermóide (CE) de lábio e CE de língua. Investigamos se há diferença na proporção dos MCs, T CD4+ e T CD8+, levando em consideração os graus de displasia epitelial da QA bem como os graus de diferenciação celular do CE de lábio e CE de língua. Estudamos ainda alterações arquiteturais e citológicas da QA e os graus de diferenciação celular CE de lábio e CE de língua. A amostra foi composta de 30 casos de QA em lábio inferior (grupo 1), 30 de CE primário em lábio inferior (grupo 2), 30 de CE primário em língua (grupo 3) com diagnóstico clínico e histopatológico e 10 casos de grupo controle. As peças foram coradas histoquimicamente com hematoxicilina e eosina H&E, anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e triptase. Todos os casos foram avaliados em toda sua extensão, em microscópico de luz em 100x, 200x e 400x. A marcação de T CD4+ na QA e grupo controle subepitelial foi de 9,2 ± 4,64 e 5,2 ± 3,25 respectivamente; CL e CB intraepitelial foi de 11,40 ± 7,06 e 18,33 ± 17,36, e CL e CB estroma foi 9,70 ± 5,59 e 15,80 ± 15,11 respectivamente. A marcação de T CD8+ na QA e grupo controle subepitelial foi de 8,00 ± 4,64 e 4,50 ± 3,25 respectivamente; CL e CB intraepitelial foi de 21,20 ± 35,51 e 17,67 ± 17,17, e CL e CB estroma foi 17,17 ± 22,91 e 17,63 ± 12,50 respectivamente. A marcação de MCs na QA e grupo controle subepitelial foi de 10,37 ± 4,67 e 7,80 ± 4,07 respectivamente; CL e CB intraepitelial foi de 11,40 ± 7,06 e 10,43 ± 5,26, e CL e CB estroma foi 9,70 ± 5,59 e 12,17 ± 5,93 respectivamente. O tratamento estatístico foi realizado pelos testes de... / The aim of the present research was to evaluate the expression of mast cells (MCs)s, CD4+ T lymphocytes and CD8+ T lymphocytes in actinic cheilitis (AQ), squamous cell carcinoma (SCC) of lip and SCC of tongue. We investigated eventual differences in the proportion of the MCs, CD4+ T and CD8+ T cells taking into consideration the degrees of the AQ epithelial dysplasia as well as the degrees of cellular differentiation of SCC of lip and SCC of tongue. We also examined the AQ architectural and cytological changes and the cellular differentiation of SCC of lip and SCC of tongue. Sampling consisted of 30 cases of AQ in lower lip (group 1), 30 cases of primary SCC in lower lip (group 2), 30 primary SCC in tongue (group 3) with clinical and histopathological diagnosis and 10 cases of control group. The specimens were histochemically stained with hematoxicilina and H & E eosin, anti-CD4, and anti-CD8 antibodies and tryptase. All cases were fully evaluated, under a light microscope at 100x, 200x and 400x. The CD4+ T expression in AQ and sub epithelial control group were 9,2 ± 4,64 and 5,2 ± 3,25, respectively; intraepithelial SCC of lower lip and SCC of tongue were 11,40 ± 7,06 and 18,33 ± 17,36, and stroma of SCC of lower lip and stroma of SCC of tongue were 9,70 ± 5,59 and 15,80 ± 15,11 respectively. Expression of CD8+ T in AQ and sub epithelial control group were 8,00 ± 4,64 and 4,50 ± 3,25 respectively; intraepithelial SCC of lower lip and SCC of tongue were 21,20 ± 35,51 e 17,67 ± 17,17, and stroma of SCC of lower lip and stroma of SCC of tongue were 17,17 ± 22,91 and 17,63 ± 12,50 respectively. MCs expression in AQ and sub epithelial control group were 10,37 ± 4,67 and 7,80 ± 4,07 respectively; intraepithelial... (Complete abstract click electronic acess below)

Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Lúcia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Helder Louvandini / Banca: Stevam Guilherme Lux Hoppe / Banca: José Maurício Sforcin / Resumo: A variação sazonal e a intensidade de infestação por larvas de Oestrus ovis em ovinos criados em Botucatu-SP foi avaliada de abril de 2008 a março de 2011. Dois cordeiros traçadores foram colocados, mensalmente, junto com um rebanho ovino, onde permaneceram por 28 dias. Após esse período, os traçadores foram sacrificados e as larvas de O. ovis recuperadas, identificadas e quantificadas de acordo com o estádio de desenvolvimento. Dos 72 cordeiros traçadores, 50% estavam infestados por larvas O. ovis com intensidade média de 16,8 larvas/cabeça com média de 7,8 larvas de primeiro estádio (L1), 5,3 de segundo (L2) e 3,7 de terceiro (L3). Sinais clínicos de oestrose foram mensalmente avaliados em todas as ovelhas do rebanho e a prevalência média de animais com sinais clínicos de oestrose foi de 13,4% (máxima de 31,4% em janeiro de 2009 e mínimo de 1% em setembro de 2010). Além disso, a prevalência do parasitismo por O. ovis e a intensidade de infestação foram avaliados em cabeças de ovinos obtidas de um abatedouro localizado em Itápolis - SP. Das 139 cabeças examinadas, 13,7% estavam parasitadas pelas larvas O. ovis e a intensidade de infestação média mensal variou de 1 até 10,2 larvas/cabeça com intensidade média geral de 4,5 larvas/cabeça. Do total de 85 larvas, 21,2% eram L1, 37,6% L2 e 41,2% L3. Os resultados demonstraram que as condições climáticas do Estado de São Paulo são favoráveis para a atividade da mosca e desenvolvimento dos estágios larvais praticamente durante todo o ano. Em outro estudo, foi avaliada, comparativamente, a resistência de cordeiros de duas raças ovinas, Ile de France (IF) e Santa Inês (SI) contra infestações naturais por O. ovis, bem como a associação entre a ocorrência deste parasita com as infecções naturais por nematódeos gastrintestinais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The seasonal factors which influence Oestrus ovis infestation in sheep in Botucatu-SP were determined from April 2008 until March 2011. Two tracer lambs were exposed monthly to natural infestation by O. ovis larvae for 28 consecutive days, by grazing with a sheep flock. Tracer animals were then euthanized and the larvae of O. ovis recovered from nasal and sinus cavities. Of the 72 tracer lambs, 50% were infested with O. ovis larvae and the mean intensity of infestation per head infested was 16.8 larvae with an average of 7.8 first instar (L1), 5.3 second instar (L2) and 3.7 third instar (L3). Clinic signs of oestrosis were evaluated in all sheep of the flock monthly and the average prevalence of animals with clinical signs of oestrosis was 13.4% (maximum of 31.4% in January 2009 and minimum of 1% in September 2010). Additionally, the O. ovis prevalence and infestation intensity were evaluated in heads from slaughtered sheep from Itápolis-SP. Of the 139 head examined 13.7% were parasitized by O. ovis larvae with monthly mean of intensity of infestation ranging from 1 until 10.2 larvae/infested head with general mean intensity of 4.5 larvae/infested head. Of the total of 85 larvae, 21.2% were L1, 37.6% L2 and 41.2% L3. The results suggest that the climatic conditions in São Paulo State are favorable to fly activity and larval development during the whole year. In other study, were evaluated comparatively, the resistance in lambs of two sheep breeds, Ile de France (IF) and Santa Ines (SI) against O. ovis infestation, well as the association between the occurrence of this parasite with natural infections by gastrointestinal nematodes (GIN). SI (n=12) and IF (n=12) young male lambs weaned at two months of age were kept together in a paddock from September to early December 2009, when were sacrificed. All animals were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: A técnica de ELISA foi utilizada para avaliar e comparar a resposta imune humoral de ovinos jovens para a produção de soro anticrotálico. Durante o processo de soroprodução, foi realizada a avaliação clínica e ponderal dos animais. Os parâmetros utilizados foram hemograma completo, dosagem de uréia, creatinina, aspartato aminotransferase, proteínas totais, albumina, globulina. O peso dos animais foi aferido quinzenalmente durante o experimento. A capacidade de neutralização do soro produzido a partir de veneno de serpente Crotalus durissus terrificus, nativo (VN) e irradiado (VIr) com Cobalto-60 foi verificada por meio de desafios in vitro. Um grupo de seis animais recebeu veneno nativo, o segundo grupo recebeu veneno irradiado e o terceiro grupo foi o controle. Os animais receberam seis imunizações durante 84 dias com intervalo de 14 dias. Houve diferença significativa (p<5%) no teste de ELISA do perfil de anticorpos produzidos pelos grupos experimentais (VN<VIr). Não houve diferença significativa (p<5%) para os testes bioquímicos, hemograma e peso dos animais entre os três grupos testados. O grupo imunizado com veneno irradiado apresentou perfil de anticorpos maior que o grupo imunizado com veneno nativo. A capacidade de neutralização do soro produzido a partir do VIr foi cinco vezes maior quando comparado ao soro produzido com VN. A avaliação clínica e ponderal, mostrou que ovinos em fase pós-desmame, não tiveram alterado seus perfis fisiológicos e apresentaram um excelente ganho de peso durante o período experimental. Estes resultados demonstram uma nova perspectiva para a utilização de ovinos visando a produção comercial de soro anticrotálico, que poderá ser aplicado no tratamento do envenenamento de seres humanos e animais. O custo para sua produção poderá ser reduzido pela posterior utilização dos ovinos hiperimunizados na alimentação humana. / Abstract: The ELISA technique was used to evaluate and compare the humoral immune response of young ovines to anticrotalic serum production. During serum production, the clinical and weight evaluation of the animals was performed. The parameters utilized were complete blood count, and dosage of urea, creatinine, aspartate aminotransferase, total proteins, albumin and globulin. The animals weight was verified fortnightly during the experiment. The neutralization capacity of the serum produced from the snake Crotalus durissus terrificus natural (NV) and Cobalt-60-irradiated venom (IrV) was evaluated by in vitro challenges. One group of six animals received natural venom, the second group received irradiated venom, and the third was the control group. The animals received six immunizations during 84 days with an interval of 14 days. There was a significant difference (p<5%) in the ELISA test for the profile of the antibodies produced by the experimental groups (NV<IrV). There was no significant difference (p<5%) for biochemical tests, complete blood count, and animals weight between the three groups tested. The group immunized with irradiated venom showed antibodies profile higher than the group immunized with natural venom. The neutralization capacity of the serum produced from the IrV was fivefold higher when compared to the serum produced with NV. The clinical and weight evaluation showed that the ovines in post-weaning phase did not have their physiological profiles altered, and showed an excellent increase in weight during the experimental period. These results indicate a new perspective for the utilization of ovines, aiming the commercial production of anticrotalic serum, which may be applied in the treatment of human and animal envenomation. The cost for its production may be reduced by the posterior utilization of hyperimmunized ovines in human feeding. / Orientador: Domingos Alves Meira / Coorientador: Benedito Barraviera / Doutor

Orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Yasmin Rodarte Carvalho / Resumo: O presente projeto de pesquisa objetiva avaliar a marcação de mastócito (MCs)s, linfócitos T CD4+ e, linfócitos T CD8+ na queilite actínica (QA), carcinoma epidermóide (CE) de lábio e CE de língua. Investigamos se há diferença na proporção dos MCs, T CD4+ e T CD8+, levando em consideração os graus de displasia epitelial da QA bem como os graus de diferenciação celular do CE de lábio e CE de língua. Estudamos ainda alterações arquiteturais e citológicas da QA e os graus de diferenciação celular CE de lábio e CE de língua. A amostra foi composta de 30 casos de QA em lábio inferior (grupo 1), 30 de CE primário em lábio inferior (grupo 2), 30 de CE primário em língua (grupo 3) com diagnóstico clínico e histopatológico e 10 casos de grupo controle. As peças foram coradas histoquimicamente com hematoxicilina e eosina H&E, anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e triptase. Todos os casos foram avaliados em toda sua extensão, em microscópico de luz em 100x, 200x e 400x. A marcação de T CD4+ na QA e grupo controle subepitelial foi de 9,2 ± 4,64 e 5,2 ± 3,25 respectivamente; CL e CB intraepitelial foi de 11,40 ± 7,06 e 18,33 ± 17,36, e CL e CB estroma foi 9,70 ± 5,59 e 15,80 ± 15,11 respectivamente. A marcação de T CD8+ na QA e grupo controle subepitelial foi de 8,00 ± 4,64 e 4,50 ± 3,25 respectivamente; CL e CB intraepitelial foi de 21,20 ± 35,51 e 17,67 ± 17,17, e CL e CB estroma foi 17,17 ± 22,91 e 17,63 ± 12,50 respectivamente. A marcação de MCs na QA e grupo controle subepitelial foi de 10,37 ± 4,67 e 7,80 ± 4,07 respectivamente; CL e CB intraepitelial foi de 11,40 ± 7,06 e 10,43 ± 5,26, e CL e CB estroma foi 9,70 ± 5,59 e 12,17 ± 5,93 respectivamente. O tratamento estatístico foi realizado pelos testes de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present research was to evaluate the expression of mast cells (MCs)s, CD4+ T lymphocytes and CD8+ T lymphocytes in actinic cheilitis (AQ), squamous cell carcinoma (SCC) of lip and SCC of tongue. We investigated eventual differences in the proportion of the MCs, CD4+ T and CD8+ T cells taking into consideration the degrees of the AQ epithelial dysplasia as well as the degrees of cellular differentiation of SCC of lip and SCC of tongue. We also examined the AQ architectural and cytological changes and the cellular differentiation of SCC of lip and SCC of tongue. Sampling consisted of 30 cases of AQ in lower lip (group 1), 30 cases of primary SCC in lower lip (group 2), 30 primary SCC in tongue (group 3) with clinical and histopathological diagnosis and 10 cases of control group. The specimens were histochemically stained with hematoxicilina and H & E eosin, anti-CD4, and anti-CD8 antibodies and tryptase. All cases were fully evaluated, under a light microscope at 100x, 200x and 400x. The CD4+ T expression in AQ and sub epithelial control group were 9,2 ± 4,64 and 5,2 ± 3,25, respectively; intraepithelial SCC of lower lip and SCC of tongue were 11,40 ± 7,06 and 18,33 ± 17,36, and stroma of SCC of lower lip and stroma of SCC of tongue were 9,70 ± 5,59 and 15,80 ± 15,11 respectively. Expression of CD8+ T in AQ and sub epithelial control group were 8,00 ± 4,64 and 4,50 ± 3,25 respectively; intraepithelial SCC of lower lip and SCC of tongue were 21,20 ± 35,51 e 17,67 ± 17,17, and stroma of SCC of lower lip and stroma of SCC of tongue were 17,17 ± 22,91 and 17,63 ± 12,50 respectively. MCs expression in AQ and sub epithelial control group were 10,37 ± 4,67 and 7,80 ± 4,07 respectively; intraepithelial... (Complete abstract click electronic acess below) / Mestre

Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Resumo: A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença crônica, invariavelmente progressiva, de alta variabilidade clínica, incluindo desordens neurológicas. Para investigar as alterações neurológicas desencadeadas pela LVC, a expressão de genes envolvidos na resposta imune inata e adaptativa em cérebros de cães naturalmente infectados para Leishmania infantum foi realizada. Cães machos/fêmeas, 1 a 5 anos de idade, sem raça definida, com prévia avaliação clínica e laboratorial, avaliação histopatológica cerebral, e ausência das principais co-infecções foram organizados em dois grupos, grupo (Infectados) com 11 cães e grupo (Controle) com 04 cães. A avaliação da expressão gênica foi realizada por PCR Profiler com kit comercial RT² Profiler™ PCR Array Dog Innate & Adaptive Immune Responses (Qiagen®). O p-valor estipulado foi em ≤ 0,05 por Teste-t de Student. Infiltrados inflamatórios, de variação discreta a moderada, foram verificados nos cães infectados. Houve o aumento da expressão de 24 genes de diferentes subclasses comparados ao grupo controle (IRF6, CD4, CD40LG, TLR6, CCR4, TLR5, CCR8, CCL3, IFNG, IFNB1, TNF, IL13, IRF3, CD14, CD209, CD80, TLR4, CD86, CCR6, TRAF6, TLR7, RORC, NOD1, STAT3). Esta informação indica a participação da resposta imune inata e adaptativa no cérebro de cães com LVC, e a alta expressão destes pode ser considerada fator chave para o início, manutenção e persistência da inflamação. / Abstract: Visceral canine leishmaniasis (LVC) is a chronic, invariably progressive disease of high clinical variability including neurological disorders. To investigate the neurological changes triggered by LVC, the expression of genes involved in the innate and adaptive immune response in brains of naturally infected dogs to Leishmania infantum was performed. Male and female dogs, 1 to 5 years of age, with no previous breed, previous clinical and laboratory evaluation, histopathological evaluation, and absence of major coinfections were organized into two groups (Infected) with 11 dogs and group Control) with 04 dogs. The evaluation of gene expression was performed by PCR Profiler with commercial Kit RT² Profiler ™ PCR Array Dog Innate & Adaptive Immune Responses (Qiagen®). The p-value stipulated was ≤ 0.05 per Student's t-Test. Inflammatory infiltrates, mild to moderate, were found in infected dogs. There was an increase in expression of 24 genes of different subclasses compared to the control group (IRF6, CD4, CD40LG, TLR6, CCR4, TLR5, CCR8, CCL3, IFNG, IFNB1, TNF, IL13, IRF3, CD14, CD209, CD80, TLR4, CD86, CCR6, TRAF6, TLR7, RORC, NOD1, STAT3). This information indicates the involvement of the innate and adaptive immune response in the brain of dogs with LVC, and the high expression of these can be considered a key factor for the onset, maintenance and persistence of inflammation. / Doutor

A hepatite B é uma doença viral infectocontagiosa mundialmente disseminada. É caracterizada por ser uma inflamação hepática que possui risco de cronicidade em 10 a 20% dos casos ocorridos em adultos. Atualmente, acredita-se que aproximadamente 240 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas. A prevalência da doença varia em todo o mundo. Embora o Brasil seja considerado um país de endemicidade baixa, existem regiões onde a prevalência da doença é acentuadamente superior à média nacional, como a região Amazônica, e a região oeste catarinense. A imunopatogênese da infecção por sua vez, é influenciada tanto por fatores relacionados ao vírus da hepatite B (HBV), como genótipo, carga viral e mutações genéticas, quanto a características do hospedeiro infectado, como idade, sexo e polimorfismos genéticos. O presente trabalho buscou determinar fatores virais e do hospedeiro que estejam influenciando no curso natural da hepatite B, através da análise do perfil molecular viral e de polimorfismos de base única (SNPs) de genes de citocinas de pacientes infectados, estabelecendo possíveis marcadores moleculares de progressão da doença. Neste estudo, foram coletadas 363 amostras de indivíduos infectados com HBV em Chapecó, SC. Em relação aos fatores virais analisados, encontramos uma baixa proporção de indivíduos (15,3%, 31/202) com carga viral acima de 2000UI/mL e uma frequência de 5,6% (9/161) de hepatite oculta. A genotipagem viral foi realizada em 91 amostras e destas, 88 (97%) apresentaram HBV/D e 3 (3%) HBV/A, contrastando com a realidade de outras regiões brasileira, onde há um predomínio de HBV/A (64,3-44,7%), seguidos de HBV/D (47,6-16,6%) e HBV/F (29,2-7,7%). A análise de subtipos virais revelou uma alta frequência do subtipo ayw2. Para justificar a frequência elevada de HBV/D subtipo ayw 2 na região sul, foi realizada uma busca pela origem genealógica e geográfica dos pacientes infectados e uma análise filogenética foi executada. Os resultados mostraram que o HBV/D encontrado no sul do Brasil é filogeneticamente muito próximo ao HBV/D3 amplamente disseminado na Itália, assim como para o subtipo ayw2, e sua alta frequência teria poderia ser justificada pelo processo de imigração italiana ocorrido durante o final no século XIX e início do século XX. Entre os fatores do hospedeiro, foi realizada uma análise comparativa entre pacientes cronicamente infectados e com infecção resolvida, avaliando variáveis epidemiológicas e genéticas. A análise epidemiológica mostrou que sexo masculino, via de transmissão sexual e baixo nível educacional estão associados a cronicidade da doença. Os genótipos dos SNPs foram analisados através de regressão logística e os resultados mostraram que o alelo A (genótipos AA e GA) do SNP -308 do fator de necrose tumoral-α (TNF-α) está associado à cronicidade da hepatite B em indivíduos do sul do Brasil e pode ser considerado um potencial marcador molecular de progressão à cronicidade da hepatite B nesta população. / Hepatitis B is a viral infectious disease spread worldwide. It is a liver inflammation with a chronicity risk about 10 to 20% of adulthood cases. Currently, approximately 240 million people are chronically infected. The disease prevalence varies worldwide. Although Brazil is considered a low endemic country, there are regions where the prevalence is markedly higher than the national average, such as the Amazon region (Northern Brazil) and the west region of Santa Catarina, in southern Brazil. The immunopathogenesis of infection is influenced by factors relating to hepatitis B virus (HBV), such as genotype, gene mutations and viral load, and by characteristics of the infected host, such as age, sex and genetic polymorphisms. This study aimed to determine viral and host factors that are influencing on the natural course of the hepatitis B, through the viral molecular profile analysis and single nucleotide polymorphisms (SNPs) genotyping of cytokines genes from patients infected in an attempt to suggest molecular markers of disease progression. In this study, were collected 363 samples from individuals infected with HBV in Chapecó, SC. Regarding viral factors analyzed, we found a low proportion of individuals (15.3%, 31/202) with viral load above 2000 IU/mL and a frequency of 5.6% (9/161) of occult hepatitis infection (OBI). Viral genotyping was performed on 91 samples. Of these, 88 (97%) had HBV/D and three (3%) had HBV/A, in contrast with the reality of other Brazilian regions where there is a predominance of HBV/A (64.3 to 44.7%), followed by HBV/D (47.6 to 16.6%) and HBV/F (29.2 to 7.7%). The viral subtypes analysis has revealed a high frequency of subtype ayw2. To justify the high frequency of HBV/D and subtype ayw2 in the Brazilian southern region, a search for genealogical and geographical origin of the patients was performed and a phylogenetic analysis was conducted. The results showed that HBV/D in southern Brazil is phylogenetically close to HBV/D3 widespread in Italy as well as the ayw2 subtype and its high frequency would could be justified by the Italian immigration process occurred during late nineteenth and early twentieth century. Among the host factors, were conducted a comparative analysis of chronically infected patients and HBV resolved subjects, evaluating epidemiological and genetic variables. Epidemiological analysis showed that male sex, vertical transmission and low educational level have an association with chronic disease. The genotypes of the SNPs were analyzed by logistic regression and the results showed that the A allele (AA and GA genotypes) of tumor necrosis factor-α (TNF-α) -308 SNP is associated with chronic hepatitis B in individuals of southern Brazil and can be considered a potential molecular marker of progression to chronic hepatitis B in this population.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-04-27T20:17:10Z No. of bitstreams: 1 2009_MaryaniAndressaGBezerra.pdf: 7729100 bytes, checksum: 7d54aa00068c38faeeb56a4769c97ce8 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-27T22:07:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_MaryaniAndressaGBezerra.pdf: 7729100 bytes, checksum: 7d54aa00068c38faeeb56a4769c97ce8 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-27T22:07:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_MaryaniAndressaGBezerra.pdf: 7729100 bytes, checksum: 7d54aa00068c38faeeb56a4769c97ce8 (MD5) Previous issue date: 2009 / O desenvolvimento de novos anticorpos recombinantes teve impacto significativo no tratamento de diversas doenças. Contudo, devido a complexidade estrutural da molécula de imunoglobulina, a produção desta em células de mamífero ainda é um desafio. Uma das dificuldades é obter uma produção equimolar das cadeias pesada e leve para a prevenção do acúmulo de cadeias não-montadas, seguido de apoptose por estresse. Em nosso grupo, vimos trabalhando com um anticorpo com potencial imunoregulatório específico para o antígeno CD3 humano. Anticorpos anti-CD3 têm sido utilizados como imunoterápicos na prevenção da rejeição aguda de órgãos transplantados e é considerado um fármaco promissor para o tratamento de doenças auto-imunes. A produção desse anticorpo em cultura de células animais tem se mostrado limitante devido ao baixo rendimento de anticorpo recombinante. Na tentativa de desenvolver estratégias alternativas para aprodução de anticorpo recombinante, foram construídos vetores de expressão, onde o anticorpo inteiro é produzido a partir de construções monocistrônicas, bicistrônicas e tricistrônica em células de mamíferos. As versões monocistrônicas possuem uma seqüência codificadora de um sítio clivável por furina entre as duas cadeias do anticorpo. A versão bicistrônica possui um elemento IRES sintético entre as duas cadeias. Além disso, foi introduzida uma marca seletiva para o antibiótico Geneticina associada ao mesmo cassete de expressão como um cístron extra guiado por outro elemento IRES. Para produção do anticorpo anti-CD3 foram utilizadas as linhagens celulares HEK293 e BHK-21, de forma transiente e estável. Os anticorpos produzidos foram purificados por cromatografia de afinidade e analisados para a produção de imunoglobulina intacta. Os resultados indicam que a construção bicistrônica pMACIA HIL e monocistrônica pMACIA HL são capazes de garantir a expressão de ambas as cadeias de anticorpo. Já as construções monocistrônica pMACIA LH e bicistrônica pMACIA HL IRES neo não foram capazes de produzir o anticorpo recombinante. A construção tricistrônica pMACIA HIL IRES neo foi a construção que se mostrou mais promissora, apresentando estabilidade de produção do anticorpo em transfectomas estáveis. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The development of new pharmaceuticals derived from recombinant antibodies had a significant impact in the treatment of various illnesses. However, due to the structural complexity of the immunoglobulin molecule, the production of these molecules in mammal cells is still challenging. One of the difficulties is the equimolar production of heavy and light chains and the prevention of the stress induced by the accumulation of unassembled protein. We are working with a potentially immunoregulatory recombinant humanized antibody specific for the human CD3 antigen. Anti-CD3 antibodioes have been used in the prevention of the acute graft rejection and are considered as a promising pharmaceutical for the treatment of autoimmune diseases. The production of this antibody in culture of animal cells has shown to be problematic due to the low yield of recombinant antibody recovery. In the attempt to create alternative strategies for recombinant production of antibody, monocistronic, bicistronic and tricistronic expression vectors were constructed to coordinate the expression of a complete antibody in mammal cells. The monocistronic versions possess a furin cleavage coding sequence between the both antibody chains. The bicistronic version possesses a synthetic IRES element between the two chains. A selective mark for the Geneticin antibiotic was introduced in the expression cassette as an extra cistron driven by another IRES element. The cell lines HEK293 and BHK-21 were used for transient or stable production of the anti- CD3 antibody. Recombinant antibodies were purified by affinity chromatography and analyzed for the production of intact immuglobulin. The results indicate that the bicistronic construction pMACIA HIL and the monocistronic construction pMACIA HL are capable to express both antibody chains. On the other hand, the monocistronic construction pMACIA LH or the bicistronic construction pMACIA HL IRES neo were not able to produce the recombinant antibody. The tricistronic vector pMACIA HIL IRES neo was shown to be the most promising construction to obtain the whole antibody production in stable transfectomes.

A hepatite B é uma doença viral infectocontagiosa mundialmente disseminada. É caracterizada por ser uma inflamação hepática que possui risco de cronicidade em 10 a 20% dos casos ocorridos em adultos. Atualmente, acredita-se que aproximadamente 240 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas. A prevalência da doença varia em todo o mundo. Embora o Brasil seja considerado um país de endemicidade baixa, existem regiões onde a prevalência da doença é acentuadamente superior à média nacional, como a região Amazônica, e a região oeste catarinense. A imunopatogênese da infecção por sua vez, é influenciada tanto por fatores relacionados ao vírus da hepatite B (HBV), como genótipo, carga viral e mutações genéticas, quanto a características do hospedeiro infectado, como idade, sexo e polimorfismos genéticos. O presente trabalho buscou determinar fatores virais e do hospedeiro que estejam influenciando no curso natural da hepatite B, através da análise do perfil molecular viral e de polimorfismos de base única (SNPs) de genes de citocinas de pacientes infectados, estabelecendo possíveis marcadores moleculares de progressão da doença. Neste estudo, foram coletadas 363 amostras de indivíduos infectados com HBV em Chapecó, SC. Em relação aos fatores virais analisados, encontramos uma baixa proporção de indivíduos (15,3%, 31/202) com carga viral acima de 2000UI/mL e uma frequência de 5,6% (9/161) de hepatite oculta. A genotipagem viral foi realizada em 91 amostras e destas, 88 (97%) apresentaram HBV/D e 3 (3%) HBV/A, contrastando com a realidade de outras regiões brasileira, onde há um predomínio de HBV/A (64,3-44,7%), seguidos de HBV/D (47,6-16,6%) e HBV/F (29,2-7,7%). A análise de subtipos virais revelou uma alta frequência do subtipo ayw2. Para justificar a frequência elevada de HBV/D subtipo ayw 2 na região sul, foi realizada uma busca pela origem genealógica e geográfica dos pacientes infectados e uma análise filogenética foi executada. Os resultados mostraram que o HBV/D encontrado no sul do Brasil é filogeneticamente muito próximo ao HBV/D3 amplamente disseminado na Itália, assim como para o subtipo ayw2, e sua alta frequência teria poderia ser justificada pelo processo de imigração italiana ocorrido durante o final no século XIX e início do século XX. Entre os fatores do hospedeiro, foi realizada uma análise comparativa entre pacientes cronicamente infectados e com infecção resolvida, avaliando variáveis epidemiológicas e genéticas. A análise epidemiológica mostrou que sexo masculino, via de transmissão sexual e baixo nível educacional estão associados a cronicidade da doença. Os genótipos dos SNPs foram analisados através de regressão logística e os resultados mostraram que o alelo A (genótipos AA e GA) do SNP -308 do fator de necrose tumoral-α (TNF-α) está associado à cronicidade da hepatite B em indivíduos do sul do Brasil e pode ser considerado um potencial marcador molecular de progressão à cronicidade da hepatite B nesta população. / Hepatitis B is a viral infectious disease spread worldwide. It is a liver inflammation with a chronicity risk about 10 to 20% of adulthood cases. Currently, approximately 240 million people are chronically infected. The disease prevalence varies worldwide. Although Brazil is considered a low endemic country, there are regions where the prevalence is markedly higher than the national average, such as the Amazon region (Northern Brazil) and the west region of Santa Catarina, in southern Brazil. The immunopathogenesis of infection is influenced by factors relating to hepatitis B virus (HBV), such as genotype, gene mutations and viral load, and by characteristics of the infected host, such as age, sex and genetic polymorphisms. This study aimed to determine viral and host factors that are influencing on the natural course of the hepatitis B, through the viral molecular profile analysis and single nucleotide polymorphisms (SNPs) genotyping of cytokines genes from patients infected in an attempt to suggest molecular markers of disease progression. In this study, were collected 363 samples from individuals infected with HBV in Chapecó, SC. Regarding viral factors analyzed, we found a low proportion of individuals (15.3%, 31/202) with viral load above 2000 IU/mL and a frequency of 5.6% (9/161) of occult hepatitis infection (OBI). Viral genotyping was performed on 91 samples. Of these, 88 (97%) had HBV/D and three (3%) had HBV/A, in contrast with the reality of other Brazilian regions where there is a predominance of HBV/A (64.3 to 44.7%), followed by HBV/D (47.6 to 16.6%) and HBV/F (29.2 to 7.7%). The viral subtypes analysis has revealed a high frequency of subtype ayw2. To justify the high frequency of HBV/D and subtype ayw2 in the Brazilian southern region, a search for genealogical and geographical origin of the patients was performed and a phylogenetic analysis was conducted. The results showed that HBV/D in southern Brazil is phylogenetically close to HBV/D3 widespread in Italy as well as the ayw2 subtype and its high frequency would could be justified by the Italian immigration process occurred during late nineteenth and early twentieth century. Among the host factors, were conducted a comparative analysis of chronically infected patients and HBV resolved subjects, evaluating epidemiological and genetic variables. Epidemiological analysis showed that male sex, vertical transmission and low educational level have an association with chronic disease. The genotypes of the SNPs were analyzed by logistic regression and the results showed that the A allele (AA and GA genotypes) of tumor necrosis factor-α (TNF-α) -308 SNP is associated with chronic hepatitis B in individuals of southern Brazil and can be considered a potential molecular marker of progression to chronic hepatitis B in this population.