Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412832-Texto+Completo-0.pdf: 399603 bytes, checksum: 31eb2515ec0e5f58e8fa88f141783a51 (MD5) Previous issue date: 2009 / Lymphocytes of human T-lymphotropic virus type-I (HTLV-I) infected patients could be tolerant to mitogenic stimuli as well as glucocorticoid-induced immunomodulation. These data suggest that common signaling events are impaired during this infection. The mitogenactivated protein kinases (MAPKs), lymphocyte subsets and cytokines are potential candidates for these effects. We investigated the role of (i) p38 and ERK MAPKs, (ii) lymphocyte subpopulations, (iii) and cytokines implicated in antigen or glucocorticoidinduced immunomodulation. Twenty-one asymptomatic carriers (AC), 19 patients with HTLV-I-associated myelophathy / tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and 21 healthy subjects took part in this study. Peripheral blood mononuclear cells were isolated and cultured in vitro to assess lymphocyte proliferation and sensitivity to dexamethasone. The expression of phospho-MAPKs, lymphocyte subsets and cytokines were assessed by flow cytometry. Patients with HAM/TSP had a higher p38/ERK ratio associated with a reduced response to mitogens and higher sensitivity to dexamethasone. HAM/TSP patients presented higher levels of activated T cells and CD8+CD28- regulatory T cells, being negatively related to the mitogenic response. These results suggest that multiple underlying mechanisms could be involved with HTLV-related immunomodulation and altered cellular sensitivity to GCs. / Linfócitos de pacientes infectados com o vírus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) podem apresentar anergia a estimulação e simultaneamente resistência relativa ao efeito imunossupressor dos glicocorticóides (GCs). Isto sugere que estas variáveis são influenciadas por vias de sinalização em comum. As quinases ativadas por mitógenos (MAPKs), subtipos de linfócitos e citocinas são candidatos potenciais para estes efeitos. Portanto, neste trabalho nós avaliamos o envolvimento das (i) MAPKs p38 e ERK, (ii) subpopulações de linfócitos (iii) e citocinas na anergia e na imunomodulação induzida por GCs. Vinte e um portadores assintomáticos (AC), dezenove pacientes com mielopatia associada ao HTLV-I / paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e vinte e um indivíduos controles não infectados fizeram parte deste estudo. As células mononucleares do sangue periférico destes indivíduos foram isoladas e mantidas em cultura para a avaliação da proliferação e da sensibilidade a dexametasona.A expressão das fosfo-MAPKs, dos marcadores extracelulares e das citocinas foi avaliada por citometria de fluxo. Pacientes HAM/TSP apresentaram uma razão p38/ERK elevada que influenciou na baixa resposta aos mitógenos e na alta sensibilidade aos GCs nestes indivíduos. Eles também apresentaram proporções elevadas de células T ativadas e reguladoras CD8+CD28- que correlacionaram-se negativamente com as respostas aos mitógenos. Esses resultados sugerem que muitos mecanismos podem estar envolvidos na imunomodulação relacionada a infecção pelo HTLVI e na alteração da sensibilidade aos GCs.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431855-Texto+Completo-0.pdf: 3947634 bytes, checksum: 7beba45e84b6a9adcafc79eb9a9e0deb (MD5) Previous issue date: 2011 / The HLA (Human Leukocyte Antigen) molecules are proteins encoded by genes highly polymorphic located in the MHC (Major Histocompatibility Complex) region on the short arm of Human chromosome 6. They are involved in immune response processes, being responsible for presenting antigens to T lymphocytes. The HLA system is highly informative in studies of population genetics because of its high polymorphism and strong linkage disequilibrium between loci. Among different populations we can observe differences in both frequency and in the presence of alleles and haplotypes in certain groups. Therefore, knowledge of HLA is an important tool for studies of the origin of populations. Moreover, its determination is important for understanding mechanisms associated with susceptibility or resistance to certain diseases and in processes of allocation of organs for transplantation. The investigation of the HLA compatibility between donor and recipient is crucial for the success of transplantation. In Brazil, the high rate of miscegenation of the population complicates the search for a compatible donor. Information about the diversity of these alleles in our population offer us the ability to estimate the chance of a patient in list to find a donor with a better immunological compatibility. In Brazil, there are previous studies of HLA frequency, however, in Rio Grande do Sul, this information is very scarce. In this study the HLA A, B and DRB1 allelic, phenotypic and haplotypic distribution was determined using a sample of 5000 volunteer bone marrow donors registered in REDOME (Brazilian Registry of Bone Marrow Donors Volunteers).The study subjects reside in the state of Rio Grande do Sul and were classified according to ethnic group (4428 caucasians, 324 mestizos and 248 blacks). The HLA typing was performed by PCR-SSO and Luminex technology. In the total sample, we identified 21 allelic groups HLA-A, 33 HLA-B and 13 HLA-DRB1. The most frequent allelic groups for each locus were A*02, B*35 and DRB1*13. The most frequent haplotypes were A*01 B*08 DRB1*03 in caucasians and mestizos, and A*02 B*15 DRB1*04 in blacks. Allele frequencies were compared with samples from different regions. Most of the comparisons were not statistically different. The most significant differences were observed in the comparison of the groups of our sample, showing the HLA contribution from different ethnic groups. These data provide information on the knowledge of HLA diversity in the population of Rio Grande do Sul and in the search for a better match for transplantation. / As moléculas HLA (Human Leucocyte Antigens) são proteínas codificadas por genes altamente polimórficos localizados na região do MHC (Major Histocompatibility Complex) no braço curto do cromossomo 6 humano. Elas estão envolvidas em processos de resposta imunológica, sendo responsáveis pela apresentação de antígenos aos linfócitos T. O sistema HLA é altamente informativo em estudos de genética de populações, devido ao seu elevado polimorfismo e ao forte desequilíbrio de ligação entre loci próximos. Entre diferentes populações podemos observar variação tanto na freqüência, como na presença de alelos e haplótipos em determinados grupos. Portanto, o conhecimento de alelos HLA é uma ferramenta importante para os estudos da origem das populações. Além disso, sua determinação contribui para a compreensão de mecanismos associados à suscetibilidade ou resistência a determinadas doenças e em processos de alocação de órgãos para transplante. A investigação da compatibilidade HLA entre doador e receptor é determinante no sucesso do transplante. No Brasil a elevada taxa de miscigenação dificulta a busca por um doador compatível. Informações sobre a diversidade desses alelos na nossa população nos permitem estimar a chance de um paciente em lista encontrar um doador com uma melhor compatibilidade imunológica. No Brasil, existem estudos prévios de freqüência HLA, porém, no Rio Grande do Sul, essa informação é muito escassa. Nesse trabalho a distribuição das freqüências alélicas, fenotípicas e haplotípicas de HLA A, B e DRB1 foi determinada utilizando uma amostra de 5000 doadores voluntários de medula óssea cadastrados no REDOME (Registro Brasileiro de Doadores Voluntários de Medula Óssea).Os indivíduos estudados residem no estado do Rio Grande do Sul e foram classificados com base no grupo étnico (4428 caucasianos, 324 mestiços e 248 negros). A tipagem HLA foi realizada pelo método de PCR-SSO aliado à tecnologia Luminex. Na amostra total foram identificados 21 grupos alélicos HLA-A, 33 HLA-B and 13 HLA-DRB1. Os grupos alélicos mais freqüentes para cada locus foram: A*02, B*35 e DRB1*13. Os haplótipos mais freqüentes foram: A*01 B*08 DRB1*03 nos caucasianos e mestiços, e A*02 B*15 DRB1*04 nos negros. As freqüências alélicas foram comparadas com amostras de diferentes regiões brasileiras. Na maioria das comparações não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas. Foram observadas maiores diferenças na comparação entre os grupos da nossa amostra, mostrando a contribuição HLA dos diferentes grupos étnicos. Esses dados oferecem informações para o conhecimento da diversidade HLA na população do Rio Grande do Sul e na busca por um doador mais compatível para transplante.

Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Fernando de Almeida Borges / Banca: Renato de Oliveira Orsi / Resumo: Neste estudo avaliou-se a eficácia de uma vacina constituída de glicoproteínas obtidas da membrana do intestino de Haemonchus contortus em bezerros desafiados com H. contortus ou H. placei. Bezerros holandeses machos, criados livres de infecções por helmintos, foram distribuídos em quatro grupos com nove animais cada. Dois grupos foram vacinados com 50 μg do imunógeno diluído no adjuvante QuilA, enquanto os outros dois grupos foram os controles, receberam apenas adjuvante. A vacina foi administrada três vezes com intervalo de 21 dias entre as aplicações. Os bezerros foram artificialmente infectados sete dias após a última imunização e sacrificados para contagem dos vermes 43 dias depois. Os bezerros de um dos grupos vacinados receberam 8000 larvas infectantes (L3) de H. contortus enquanto os do outro grupo foram infectados com o mesmo número de L3 de H. placei. Os controles foram infectados na mesma ocasião com o mesmo número de L3 de H. contortus ou H. placei. A vacinação reduziu significativamente a contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e a carga parasitária (P<0,01). A titulação de anticorpos nos animais controle permaneceu perto de zero enquanto nos animais vacinados verificou-se elevada titulação de anticorpos no soro. Os bezerros vacinados e desafiados com H. contortus não eliminaram ovos nas amostras de fezes, enquanto os controles apresentaram média máxima (± erro padrão) de 61,1 (±42,3) OPG 31 dias após a infecção. A partir deste dia, a contagem de OPG diminuiu progressivamente neste grupo controle com apenas um animal eliminando ovos nas fezes 42 dias após a infecção. Nos controles de H. placei, o ápice na contagem de OPG ocorreu 35 dias após a infecção (61,1 ± 21,7) e permaneceu relativamente constante até o final do estudo, enquanto no grupo vacinado apenas dois animais eliminaram ovos nas fezes, na última coleta. Os animais controle... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated the efficacy of a vaccine containing integral membrane glycoproteins from the intestine of Haemonchus contortus in calves challenged with H. contortus or Haemonchus placei. Males Holstein calves, raised worm free, were distributed into four groups with nine animals each. Two groups were vaccinated with 50 μg of antigen diluted on QuilA adjuvant, while the others two groups were the controls and received only adjuvant. The vaccine was administered three times 21 days apart. Either vaccinated or not and challenged with either 8,000 H. contortus or H. placei infective larvae. The calves were challenged 7 days after the last immunization and killed for worm counts 43 days later. Vaccination significantly reduced faecal egg counts (FEC) and worm burdens (P< 0.01). Antibody titres in the calves control stayed close to zero meanwhile in the calves vaccinated was observed high antibody titres in the serum. Calves vaccinated and challenged with H. contortus did not shed eggs in faecal samples, while the controls showed a maximum mean (± standard error) FEC of 61.1 (±42.3) at 31 days post infection. Then, FEC progressively declined in this group with only one animal shedding eggs in faeces 42 days post infection. With H. placei the controls FEC peaked at 35 days post infection (61.1 ±21.7) and remained relatively constant until the end of the study, while in the vaccinated group only two animals shed eggs and only on the last collection date. With H. placei the controls contained a mean of 551.1 (±93.7) parasites, while the vaccinates had 174.4 (±56.3) worms. The establishment rate of H. contortus was lower than that of H. placei (P< 0.01) with an average of 163.9 (±39.4) and 74.4 (±20.4) specimens in the control and vaccinated groups, respectively. It was concluded that vaccination of calves with antigens obtained from H. contortus conferred protection against both H. placei and H. contortus / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-09T16:34:51Z No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-10T18:20:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-10T18:20:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Os anticorpos monoclonais são glicoproteínas especializadas com capacidade de reconhecer outras moléculas (antígenos). Eles são ferramentas importantes na clínica e biotecnologia e têm sido úteis no diagnóstico e tratamento de doenças infecciosas, inflamatórias, imunológicas e neoplásicas, assim como no estudo da interação patógeno/ hospedeiro, e na detecção e quantificação de diversas moléculas. Os anticorpos monoclonais murinos (mAb) apresentam aplicações terapêuticas limitadas devido à sua natureza heteróloga, que pode gerar respostas imunogênicas e consequente a perda de atividade. A incorporação de técnicas de biologia molecular, e engenharia genética e proteomica tem aumentado a produção e utilização de anticorpos monoclonais, desenvolvendo técnicas como hibridoma, quimerização, e humanização de anticorpos monoclonais totalmente humanos. Ao longo dos últimos anos, novas gerações de anticorpos monoclonais (mAbs) anti-CD20 têm sido desenvolvidas para potenciais vantagens sobre a clássica e primeira geração do mAb rituximabe, Apesar de seus sucessos, nem todos os pacientes respondem ao tratamento com rituximabe e quase todos tem um recaída em seu tratamento. Assim, melhorar as propriedades deste anticorpo para melhorar a sua eficácia é muito desejável. Comparado com o rituximabe, novos mAbs têm atividade anti-tumor melhorada, resultante do aumento da citotoxicidade dependente do complemento (CDC) e / ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Neste aspecto, cultivos de células animais são os sistemas de expressão para essas proteínas preferenciais, que requerem modificações póstradução. É assim que o grupo de Imunologia Molecular da Universidade de Brasília tem se interessado pela produção de proteínas heterólogas de interesse clínico em células de mamíferos desde 2001. Este trabalho teve como objetivo a produção de novos anticorpos anti CD-20 na forma de fragmento recombinante FvFc em sistema de expressão heteróloga em células de ovário hamster chinês (CHO-K1) e em células de rim embrionário humano (HEK-293). A eficiência de transfecção para ambas as linhagens celulares foi avaliada comparativamente, bem como a expressão transiente. Os resultados indicam as células de mamífero como um sistema ótimo para a produção de proteínas heterólogas, Os segmentos dos genes correspondentes a três versões recombinantes humanizadas homologas ao anticorpo monoclonal quimérico rituximabe obtidas por CDR graffting (Zaparolli 2015) A, O, e L) e uma versão híbrida elecionada por VL shuffling (H), foram amplificados e clonados num vetor de expressão para células de mamífero. Os resultados mostraram uma eficiência de transfecção e produção de anticorpos menor na linhagem de células CHO-K1 em comparação com HEK-293, embora estas fossem estáveis para a produção de anticorpo em transfectomas estáveis. Os anticorpos recombinantes produzidos foram purificados por cromatografia de afinidade, quantificados por ELISA, e analisados em relação a sua qualidade por SDS-PAGE, eletroforese capilar (Bioanalyzer) e Western Blotting. Os resultados deste projeto têm demostrado que fomos bem sucedidos na expressão e produção das construções humanizadas do anticorpo anti-CD20. / Monoclonal antibodies are specialized which have the ability to recognize other molecules (antigens). They are important tools in clinical practice and biotechnology and have been useful in the diagnosis and treatment of infectious, inflammatory, immunological and neoplasic diseases, as well as in the study of the host/pathogen interaction, and in the detection and quantification of diverse molecules. Murine monoclonal antibodies (mAb) present limited therapeutic applications because of their heterologous nature, which can generate immunogenic responses and consequent loss of activity. The incorporation of molecular biology, proteic and genetic engineering have extended the production and uses of monoclonal antibodies, finding techniques like hybridoma, chimerization, humanization and fully human monoclonal antibodies. Over the last few years, new generations of anti-CD20 monoclonal antibodies (mAbs) have been developed for potential benefits over the classical, first-generation mAb rituximabe. Despite its successes, not all patients respond to rituximabe therapy and virtually all relapse. Improving the properties of rituximabe to enhance its efficacy further is therefore highly desirable. Compared with rituximabe, new mAbs have enhanced antitumor activity resulting from increased complement-dependent cytotoxicity (CDC) and/or antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In this aspect animal cell, cultures are the preferential expression systems for those proteins, which require extensive posttranslational modifications. Our research group has been interested in the production of heterologous proteins in mammalian cells since 2001. This work aimed the production of new antibodies anti CD-20 as a recombinant FvFc fragment, in heterologous expression system Chinese hamster ovary cells (CHO-K1) and Human Embryonic Kidney cells (HEK-293) the transfection efficiency for both cell lines was comparatively evaluated, as well as the transient expression. The results indicate mammalian cells as an optimal system for the production of heterologous proteins, Were amplified and cloned into an expression vector for mammalian cells the corresponding gene segments the three recombinant versions humanized homologous to monoclonal quimeric Rituximabe antibody obtained by CDR graffting (Zaparolli 2015) A,O and L) and a hybrid version selected by VL shuffling (H) . The results showed a lower transfection efficiency and production of antibodies in the CHO-K1 cell lineage compared to HEK- 293 cells, although these were stable for the production of antibody in stable transfectomas. The antibodies were purified by affinity chromatography were analyzed by ELISA, SDS-PAGE, capillary electrophoresis (bioanalyzer) and Western Blotting, for the production and quality of intact immunoglobulin. The results of this project have shown that we have succeeded in the expression and production of humanized constructs anti-CD20 antibody.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T02:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 244520.pdf: 540334 bytes, checksum: db7a21776a96a6d14966374af4f37a60 (MD5) / O objetivo deste estudo foi observar a presença de sub-populações de linfócitos T marcados em teste imuno-histoquímico com anticorpos anti-CD3, anti-CD4 e anti-CD8 em lesões perirradiculares de 10 molares decíduos. As células foram quantificadas através da análise dos cortes histológicos. Os resultados revelaram que a média de células positivas foi de 6,6% para CD3, 2,2% para CD8 e 0,05% para CD4. As amostras estavam relacionadas com lesões crônicas com o predomínio de LT CD8. Conclui-se que em lesão periapical de dentes decíduos há a presença de células da imunidade específica, caracterizando a necessidade de viabilizar precocemente uma conduta mais adequada para minimizar danos para saúde do paciente infantil.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura. / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:36:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 240104.pdf: 1536505 bytes, checksum: 37d4c13ad4dde56334f6c9fd9e0d6656 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo básico do sistema imune da vieira Nodipecten nodosus e avaliar a modulação de alguns parâmetros hemato-imunológicos ao longo de seu ciclo reprodutivo e em relação a uma dieta rica no carotenóide astaxantina, como um suplemento anti-estresse. As vieiras foram agrupadas em: juvenis (J), adultos (A), sexualmente maduros (M) e recém desovados (D). Os dois últimos grupos foram também tratados com uma dieta rica em astaxantina (Ma e Da). Vários parâmetros hemato-imunológicos foram selecionados para avaliação dos diferentes grupos: hemogramas, produção de espécies reativas de oxigênio, atividades aglutinante, antimicrobiana e da enzima fenoloxidase (PO) e concentração de proteínas totais. Além do mais, foram caracterizados os hemócitos circulantes das vieiras, encontrando-se hemócitos hialinos e granulares, sendo estes últimos ricos em peptídeos antimicrobianos (defensinas e mitilinas). A atividade aglutinante do plasma também foi caracterizada e esta, mostrou-se específica para galactose e sialo-conjugados e parcialmente dependente de cálcio. De modo geral, os vários parâmetros avaliados mostraram um comportamento semelhante ao longo do ciclo reprodutivo das vieiras, havendo um amadurecimento do sistema imune dos juvenis (J) para adultos (A), e uma acentuada depleção deste sistema por ocasião da maturação gonádica (M), que tendeu a se recuperar após a desova (D). A dieta rica em astaxantina influenciou as reações imuno-oxidativas, reduzindo parcialmente o estresse reprodutivo sofrido pelas vieiras (Ma e Da).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura / Made available in DSpace on 2012-10-24T01:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 251554.pdf: 746920 bytes, checksum: 54e0a681ee69d3d314a965422c51f830 (MD5)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2009-08-06T14:04:46Z No. of bitstreams: 1 Tese_JulianaFariaFraconRomao.pdf: 2133295 bytes, checksum: a735f539bee10ae60e6294651f6f1af6 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-08-06T14:18:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_JulianaFariaFraconRomao.pdf: 2133295 bytes, checksum: a735f539bee10ae60e6294651f6f1af6 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-08-06T14:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_JulianaFariaFraconRomao.pdf: 2133295 bytes, checksum: a735f539bee10ae60e6294651f6f1af6 (MD5) Previous issue date: 2007 / No presente trabalho, camundongos BALB/c foram infectados por via endovenosa com leveduras viáveis do P. brasiliensis e foram analisadas a morfologia e a mecânica pulmonares no curso da infecção experimental causada pelo fungo, em diferentes ocasiões (15, 30, 45 e 60 dias após a infecção). Os animais foram sedados, anestesiados e ventilados mecanicamente e foram mensuradas as elastâncias estática (Est), dinâmica (Edyn) e a diferença entre elas ( E), bem como as pressões resistivas ( P1), viscoelásticas/inomogêneas ( P2) e a variação total das pressões ( Ptot) dos pulmões, obtidas pelo método de oclusão ao final da inspiração. Foram coletadas amostras de sangue arterial para análise através da gasometria arterial dos parâmetros: potencial hidrogeniônico (pH), pressão parcial do oxigênio arterial (PaO2), pressão parcial do gás carbônico arterial (PaCO2), percentagem de hemoglobina saturada pelo oxigênio (SaO2), excesso de base (BE) e íon bicarbonato (HCO3). Após as coletas os animais foram sacrificados e os pulmões foram retirados e enviados para a análise histopatológica e para a dosagem de quimiocinas. A análise histopatológica revelou resposta inflamatória progressiva, de padrão granulomatoso, com aumento na quantidade de fungos e formação de tecido fibroso, graduais ao desenvolvimento da infecção, comprometendo o tecido pulmonar. A dosagem de quimiocinas detectou a presença de MIP-1?, RANTES, MIG e KC, com aumento significativo diretamente proporcional ao tempo de infecção. A presença de acidose mista seguida de acidose metabólica, com alterações mais acentuadas na fase aguda, foram observadas no sangue arterial. Na avaliação da mecânica respiratória evidenciou-se aumento das elastâncias estática e dinâmica, da pressão viscoelástica/inomogênea e da variação total das pressões pulmonares. Os resultados indicam que o comprometimento pulmonar é progressivo, com o estabelecimento de fibrose tecidual, determinando um padrão pulmonar provavelmente do tipo restritivo como conseqüência da redução da distensibilidade tecidual. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In the present work, mice BALB/c were infected intravenously with variable yeast cells of P. brasiliensis and were analyzed the morphology and pulmonary mechanics in the course of the experimental infection caused by the fungus, at different occasions (15, 30, 45 and 60 days after infection).Mice were sedated, anesthetized and mechanically ventilated and static (Est) and dynamic (Edyn) elastances, their differences (~E) and resistive (~P1) and viscoelastic/inhomogeneous (~P2) pressures and the total variation of pressures (~Ptot) of the lungs, were obtained by end-inflation occlusion method. Arterial blood samples were collected for arterial blood gas analysis of the parameters: hidrogenionic potential (pH), partial pressures of oxygen (Pa02), and carbon dioxide (PaC02), oxygen saturation (Sa02), base excess (BE) and bicarbonate (HC03). After the collecting data the animais were sacrificed and the lungs were removed and sent for histopathology and for the analysis of the concentration of chemokines.Histopathology revealed progressive inflammatory response, leading to granuloma formation, with increase in the fungus counts and formation of fibrosis, gradual to the development of infection, compromising the pulmonary tissue. The dosage of chemokines detected the presence of: MIP-1 a, RANTES, MIG and KC, demonstrating significant increase Directly proportional to the time of infection. The presence of mist acidosis followed by metabolic acidosis, indicating alterations more pronounced in the acute phase, were observed in the arterial blood. In the avaliation of pulmonary mechanics showed increases in static and dynamic elastances and increases in viscoelastic/inhomogeneous pressure and in the total variation of pressures of the lungs. Results indicate that the lung injury is progressive, with the establishment of tissue fibrosis, robably determining a restrictive functional pattern as a result of lower distensibility of lung tissue.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-03T16:01:21Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Marcus.pdf: 4994142 bytes, checksum: b25f311dc2b967f1d606e9486703e4e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-09-04T12:49:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Marcus.pdf: 4994142 bytes, checksum: b25f311dc2b967f1d606e9486703e4e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-04T12:49:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Marcus.pdf: 4994142 bytes, checksum: b25f311dc2b967f1d606e9486703e4e4 (MD5) Previous issue date: 2007-03-08 / A plaquetopenia é uma reconhecida complicação hematológica da infecção malárica, porém, sua patogênese ainda é incerta. Os objetivos deste trabalho foram estimar a freqüência e as manifestações clínicas da plaquetopenia na malária, e avaliar o papel dos imunocomplexos circulantes (ICC) e da agregação plaquetária in vitro. O estudo foi realizado em Manaus (Amazonas), entre 2004 e 2006, com seleção aleatória de pacientes com diagnóstico microscópico e molecular de malária vivax (n=142) e malária falciparum (n=26), após exclusão de pacientes com outras doenças. Foram analisadas as características dos pacientes, além da parasitemia, hemograma, exames bioquímicos do sangue e testes de coagulação. Os ICC foram dosados (n=48) e após a eluição da IgG dos ICC, em pacientes com plaquetopenia grave, verificou-se sua capacidade de ligação in vitro a plaquetas normais (n=2), e sua capacidade de destruição plaquetária in vivo, após injeção intraperitoneal em camundongo C57BL/6 sadio (n=1). Plaquetas incubadas com ICC de pacientes com malária e plaquetopenia foram submetidas à fagocitose por células THP-1 (n=3). Avaliou-se também a agregação de plaquetas normais, na presença de lisado de hemácias parasitadas por P. vivax e por P. falciparum, e de esporozoítos lisados de P. vivax. Nos pacientes com malária vivax complicada, realizou-se o seqüenciamento das subfamílias dos genes vir. Observou-se plaquetopenia (plaquetas<150.000/μL) em 70,8% dos pacientes (IC95% 66,7-74,9%). A plaquetopenia grave (plaquetas<50.000/μL) foi encontrada em 8,9% (IC95% 4,6-13,2%), sendo que em 26,6% desses pacientes se observaram sangramentos leves. Todos os pacientes com formas complicadas de malária falciparum (n=3) ou malária vivax (n=2) apresentavam plaquetopenia grave. Não se detectou diferença entre média ou freqüência de plaquetopenia entre os pacientes com malária vivax (119,8 x 1000/μL; 71,8%) ou com malária falciparum (122,6 x 1000/μL; 65,4%). As variáveis que estiveram associadas à plaquetopenia, de forma independente, foram o gênero masculino, a primoinfecção e a alta parasitemia. O sangramento esteve associado à malária grave. Identificou-se correlação inversa entre plaquetimetria e o volume plaquetário médio, na malária vivax (r=-0,527; p<0,01), entretanto, não houve associação entre plaquetimetria e ICC (r=-0,148; p=0,355). Não se detectou a ligação in vitro de IgG (ICC) a plaquetas normais, e não houve queda na contagem de plaquetas do camundongo, após injeção de IgG (ICC). A incubação de plaquetas normais com ICC inibiu sua fagocitose in vitro. Verificou-se intensa agregação de plaquetas normais, na presença de lisado de P. vivax e de P. falciparum . Não se identificou qualquer polimorfismo dos genes vir nos parasitos isolados das formas complicadas de malária vivax. Conclui-se que a plaquetopenia é uma complicação freqüente na malária, com pouca repercussão clínica, mesmo entre pacientes com plaquetopenia grave, o que pode ser explicado pela liberação de megaplaquetas compensatórias, pelos megacariócitos, e pela maior ativação das plaquetas por formas sangüíneas de Plasmodium spp. A associação de alta parasitemia e de primoinfecção com a plaquetopenia sugere que a patogênese desta complicação é multifatorial. Os ICC parecem não contribuir para a queda da contagem de plaquetas na malária, e não se demonstrou a presença de auto-anticorpos plaquetários nos casos estudados. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Thrombocytopenia is a well-known hematological complication of malaria, although its pathogenesis is still unclear. The objectives of the present work were to estimate the frequency and the clinical manifestations of thrombocytopenia in malaria, and to investigate a possible role for the circulating immune complexes (CIC) and of platelet aggregation in vitro in the generation of thrombocytopenia. The work was carried out in Manaus (Amazonas) from 2004 to 2006, by randomly selecting patients with a microscopic and molecular diagnosis of P. vivax malaria (n=142) and P. falciparum malaria (n=26), after excluding patients with other diseases. Individual and clinical features of the patients were studied, including the degree of parasitemia, blood cell counts, biochemical parameters, and coagulation indices. The CIC were quantified (n=48), and after IgG was eluted from the CIC of patients with severe thrombocytopenia. The in vitro effects of IgG binding to normal platelets in vitro (n=2), as well as in vivo, following intraperitoneal injection in a C57BL/6 healthy mouse (n=1) were assessed. Platelets incubated with CIC from patients with malaria and thrombocytopenia were examined for phagocytosis by THP-1 cells (n=3). Aggregation of normal platelets in the presence of lysates of blood stages of P. vivax and P. falciparum , and P. vivax sporozoite lysates was also noted. In the patients with complicated vivax malaria, subfamilies of vir genes were sequenced. Thrombocytopenia (platelets<150,000/μL) was found in 70.8% of the patients (IC95% 66.7-74.9%). Severe thrombocytopenia (platelets<50,000/μL) was found in 8.9% (IC95% 4.6-13.2%), and in 26.6% of these patients mild bleeding was seen. All of the patients with complicated falciparum malaria (n=3) or vivax malaria (n=2) presented severe thrombocytopenia. There was no difference between the median platelet count or frequency of thrombocytopenia in the patients with vivax (119.8 x 1000/μL; 71.8%) or falciparum malaria (122.6 x 1000/μL; 65.4%). Independent variables which were associated with thrombocytopenia included male gender, primary infection, and high parasitemia. The bleeding was associated with severe malaria. An inverse relationship between platelet count and median platelet volume for vivax malaria was identified (r= -0.527, p<0.01). Overall, there was no association between platelet count and CIC (r= -0.148; p=0.355). In vitro binding of IgG (CIC) to normal platelets was not detected, and there was no platelet destruction in the mouse after injection of IgG (CIC). Incubation of normal platelets with CIC inhibited their phagocytosis. Intense aggregation of normal platelets in the presence of lysates of P. vivax and P. falciparum was seen. No polymorphisms of the vir genes were identified in the parasites isolated from patients with severe vivax malaria. Taken together, data reported here show that thrombocytopenia is a frequent complication of malaria, with few clinical consequences, even in patients with severe thrombocytopenia. This could be explained by the release of large platelets from megakaryocytes, and the prominent activation of platelets by blood forms of Plasmodium spp. The association of high parasitemia and primary infection with thrombocytopenia suggests a multifactorial pathogenesis for this complication. The CIC do not appear to contribute to the decreased platelet counts seen in malaria, and auto-antibodies against platelets were not detected in the cases studied. __________________________________________________________________________________ RESUMEN / La plaquetopenia es una complicación hematológica reconocida en malaria aunque su patogénesis es todavía incierta. Los objetivos de este trabajo fueron estimar la frecuencia y las manifestaciones clínicas de la plaquetopenia en malaria, así como el de evaluar el papel de los inmunocomplejos circulantes (ICC) y de La agregación plaquetária in vitro. El estudio fue realizado en Manaus (Amazonas), entre 2004 y 2006, a través de la selección aleatoria de pacientes diagnosticados por microscopia y PCR de malaria vivax (n=142), malaria falciparum (n=26), y excluyendo los pacientes con otras enfermedades. Fueron analizados los aspectos individuales y clínicos de los pacientes además de la parasitemia, hemograma, examen bioquímico de sangre y pruebas de coagulación. Los ICC fueron dosificados (n=48) y después de la elución de IgG de los ICC de pacientes con plaquetopenia grave se verificó su capacidad de ligación in vitro a plaquetas normales (n=2), y de su capacidad de destrucción plaquetária in vivo después de la inyección intraperitoneal en ratón C57BL/6 sano (n=1). Las plaquetas incubadas con ICC de pacientes con malaria y plaquetopenia fueron sometidas a fagocitosis por células THP-1 (n=3). Se evaluó también la agregación de plaquetas normales en La presencia de un lisado de glóbulos rojos parasitados por P. vivax y P. falciparum , así como de esporozoitos lisados de P. vivax. En los pacientes con malaria vivax complicada, se realizó el secuenciamiento de las subfamilias de los genes variantes, vir. Se observó plaquetopenia (plaquetas<150.000/μL) en 70,8% de los pacientes (IC95% 66,7-74,9%). La plaquetopenia grave (plaquetas<50.000/μL) fue detectada em 8.9% (IC95% 4,6-13,2%), siendo que en 26.6% de esos pacientes se observaron sangramientos leves. Todos los pacientes con formas complicadas de malaria falciparum (n=3) o malaria vivax (n=2) presentaron plaquetopenia grave. No se detectó diferencia entre media o frecuencia de plaquetopenia en los pacientes com malaria vivax (119,8 x 1000/μL; 71,8%) y malaria falciparum (122,6 x 1000/μL; 65,4%). Las variables que estuvieron asociadas a plaquetopenia, de forma independiente, fueron el género masculino, la primo-infección y la alta parasitemia. El sangrado estuvo asociado a malaria severa. Se identificó correlación inversa entre plaquetimetria y el volumen plaquetário medio, en la malaria vivax (r=-0,527; p<0,01); sin embargo, no hubo asociación entre plaquetimetria y ICC (r=-0,148; p=0,355). No se detectó la ligación in vitro de IgG (ICC) a plaquetas normales y no hubo queda en el conteo de plaquetas del ratón después de la inyección de IgG (ICC). La incubación de plaquetas normales con ICC inhibió su fagocitosis in vitro . Se verificó intensa agregación de plaquetas normales en la presencia de lisados de P. vivax y P. falciparum. No se identificaron secuencias vir subfamilia-especifica de parásitos obtenidos de pacientes con malaria vivax complicada. Se concluye que La plaquetopenia es una complicación frecuente en malaria, con poca repercusión clínica, incluso entre pacientes con plaquetopenia grave, lo que puede ser explicado por la liberación de megaplaquetas, por los megacariocitos y por la mayor activación de plaquetas por formas sanguíneas de Plasmodium spp. La asociación de la alta parasitemia y de la primo-infección con la plaquetopenia sugiere que la patogénesis de esta complicación es multifactorial. No parece que los ICC contribuyan para La disminución de plaquetas en malaria y no se demostró la presencia de autoanticuerpos plaquetários en los casos estudiados.

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