Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-07T18:12:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Gerson 2016.pdf: 3140570 bytes, checksum: f563f94e781752cf57592ebd916b6bc8 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-02-08T16:09:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Gerson 2016.pdf: 3140570 bytes, checksum: f563f94e781752cf57592ebd916b6bc8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T16:09:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Gerson 2016.pdf: 3140570 bytes, checksum: f563f94e781752cf57592ebd916b6bc8 (MD5) / CAPES / Asma e atopia são condições determinadas por fatores ambientais e genéticos Vários estudos de associação do genoma têm sido realizados para tentar entender os componentes genéticos de tais condições. Os genes IL33 e IL1RL1 são os mais replicados em estudos do tipo GWAS em todo o mundo. A citocina IL-33 e o seu receptor ligado à membrana (ST2L) ou sua forma solúvel (sST2), em conjunto são potentes moduladores de inflamação do tipo Th2. Quando ligada ao ST2L, IL-33 produzida por múltiplas células da resposta inata e adaptativa, induz citocinas pró-inflamatórias, tais como IL-4, IL-5 e IL-13, aumentando a resposta e inflamação Th2, principal característica da asma e alergias. Por outro lado, quando a IL-33 se liga ao sST2, neutraliza o seu efeito, impedindo sua ligação ao ST2L. Vários polimorfismos nestes genes têm sido associados com a asma e atopia. Assim, os fatores genéticos que afetam IL33 e IL1RL1 podem influenciar a susceptibilidade para asma e atopia. Neste contexto, este estudo teve como objetivo avaliar a influência de polimorfismos em IL33 e IL1RL1 na asma e atopia em uma população Latina. Estratégias diferentes foram usadas para, um estudo de coorte de asma leve e um estudo caso-controle de asma grave. O alelo A para rs1041973 em IL1RL1 na coorte SCAALA foi positivamente associado com IL-5 produção (OR 1,36, IC 95% 1,09-1,84, P=0,044) IgE específica (OR 1,40, IC 95% 1,07-1,84, P=0,013) e SPT (OR 1,48, IC 95% 1,08-2,03, P=0,014), ambos contra o ácaro B. tropicalis. Além disso, indivíduos atópicos com o genótipo AA de rs1041973 mostraram uma diminuição da produção de sST2 comparado com indivíduos com os genótipos AC e CC (P <0,05). O alelo G do SNP IL33 rs12551256 foi negativamente associado com asma (OR 0,71, IC 95% 0,53-0,94, P=0,017). Em relação ao estudo caso controle do ProAR, o alelo A do rs1420101 em IL1RL1, foi positivamente associado com asma atópica (OR 1,29, IC 95% 1,05-1,66, P=0,046) e negativamente com FEV1 (BETA -2,37, IC 95% -4,67; -0,07, P=0,043). Além disso, este mesmo alelo mostrou uma diferença estatisticamente significate com uma menor produção de sST2 plasmático em indivíduos controle (P <0,001). O alelo C do rs2381416 foi positivamente associado com SPT para A. flavus. (OR 7,2, IC 95% 1,05-3,37, P=0,033), epitélio de cão (OR 1,52, IC 95% 1,19-3,47, P=0,009) e gato (OR 1,52, IC 95% 1,04-2,63, P=0,048). Estes dados sugerem que os SNPs nos genes IL33 e IL1RL1 podem ter um impacto sobre o desenvolvimento de asma e alergia na população brasileira. No entanto, mais estudos devem ser realizados para elucidar o impacto funcional de tais polimorfismos aqui descritos no desenvolvimento de asma e atopia. / QUEIROZ, Gerson de Almeida. STUDY OF INFLUENCE OF IL33 AND IL1RL1 POLYMORPHISMS IN SEVERE ASTHMA. 93f. 2016. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia. Asthma and atopy are conditions determined by environmental and genetic factors. Several genome-wide association studies have been conducted to try to understand the genetic components of such conditions. The IL33 and IL1RL1 are the most replicated genes in GWAS studies worldwide. The cytokine IL-33 and its receptor, membrane bound (ST2L) or its soluble form (sST2) together are potent Th2-type inflammation modulators. When bound to ST2L, IL-33 produced by multiple cells of the innate and adaptive response, induce proinflammatory cytokines such as IL-4, IL-5 and IL-13, increasing the response and Th2 inflammation main feature of asthma and allergies. On the other hand, when IL-33 binds to sST2, neutralizes their effect by preventing its binding to ST2L. Several polymorphisms in these genes have been associated with asthma and atopy. Thus, genetic factors that affect IL33 and IL1RL1 may influence susceptibility to asthma and atopy. In this context, this study aimed to evaluate the influence of polymorphisms in IL33 and IL1RL1 in asthma and atopy in a Latino population. To verify that he have used to different strategies, a cohort study for mild asthma and a case-control study for severe asthma. The A allele for rs1041973 in IL1RL1 in SCAALA cohort was positively associated with IL-5 production (1.36 OR, 95% CI 1.09-1.84, p=0.044) specific IgE (OR 1.40, 95% CI 1.07-1.84, p=0.013) and SPT (OR 1.48, 1.08-2.03 95% CI, p=0.014), both against B. tropicalis mite. Furthermore, atopic individuals with the AA genotype of rs1041973 showed a decreased production of sST2 as compared to individuals with the AC and CC genotypes (P<0.05). The G allele of IL33 SNP was negatively associated with asthma (OR 0.71, 95% CI 0.53-0.94, p=0.017). Regarding the ProAR case control study the A allele of rs1420101 in IL1RL1 was positively associated with atopic asthma (OR 1.29, 95% CI 1.05-1.66, P=0.046) and negatively associated with FEV1 (BETA -2.37, 95% CI -4.67 ; -0.07, P=0.043). In addition, this same allele showed a statistically significant difference with a lower production of plasma sST2 in control subjects (P<0.001). The C allele of rs2381416 was positively associated with SPT to A. flavus. (OR 7.2, 95% CI 1.05 to 3.37, P = 0.033), dog (OR 1:52, 1:19 to 3:47 95%, P = 0.009) and cat epithelium (OR 1:52, 95% CI 1.04-2.63, P = 0.048). These data suggest that SNPs in IL33 and IL1RL1 genes may have an impact on the development of asthma and allergy in Brazilian population. However, further studies should be conducted to further elucidate the functional impact of such polymorphisms described herein in the development of asthma and atopy.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-07T19:17:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_KM_final.pdf: 2714851 bytes, checksum: ae197797f7e0966b1ad54595314ce1fa (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-02-08T16:21:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_KM_final.pdf: 2714851 bytes, checksum: ae197797f7e0966b1ad54595314ce1fa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T16:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_KM_final.pdf: 2714851 bytes, checksum: ae197797f7e0966b1ad54595314ce1fa (MD5) / CAPES / O tratamento das leucemias agudas continua sendo um grande desafio clínico devido, principalmente à heterogeneidade e alta toxicidade da terapia padrão utilizada. Dessa forma, novos alvos terapêuticos são urgentemente necessários e os anticorpos monoclonais tem surgido como uma das opções terapêuticas mais promissoras. A endoglina, também conhecida como CD105, é um receptor da superfamília do TGF-β, expresso nas células-tronco hematopoiéticas (HSC) de todos os sítios hematopoiéticos, incluindo a medula óssea, onde é descrita como um marcador para HSC de longo prazo. Apesar da expressão de CD105 ter sido relacionada a diversos tipos de tumores sólidos, principalmente devido ao papel desse receptor na angiogênese, relativamente pouco é conhecido em relação a expressão de CD105 e a sua função em neoplasias hematopoiéticas. Este estudo revelou alta expressão de endoglin na maioria dos blastos de pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA) e leucemia linfoblástica aguda (LLA). Utilizando um modelo de xenotransplante, verificamos que as blastos CD105+ possuem uma actividade leucemogênica superior em comparação com a população de CD105-. Adicionalmente, investigamos se o bloqueio da endoglina, usando TRC105, poderia resultar em uma opção terapêutica para tratamento das leucemias agudas e descobrimos que na LMA, o TRC105 impediu o engraftment de blastos primários e inibiu a progressão da leucemia após o estabelecimento da doença, mas na LLA, o TRC105 sozinho foi ineficaz devido à uma maior secreção da forma soluvél da endoglina (sENG). No entanto, tanto na LLA quanto na LMA, TRC105 potencializou o efeito terapeutico da quimioterapia padrão e inibiu a progressão da doença, indicando que TRC105 pode representar uma nova opção terapêutica para LLA e LMA. / Successful treatment of acute leukemia remains a clinical challenge due to the toxicity and the relatively poor responses to the current standard therapy. Thus, treatments that address novel therapeutic targets are urgently needed and, for this purpose, monoclonal antibodies have been one of the most promising strategy once they are able to deliver their therapeutic effects with minimal toxicity. Endoglin, also known as CD105, is a receptor of the transforming growth factor-beta (TGF-β) superfamily that has been found expressed in hematopoietic stem cells (HSCs) from all hematopoietic sites, including the bone marrow, in which it is described as a marker for long-term HSC. CD105 is also found to be expressed in several cancers. However, because CD105 expression has been studied mostly in the context of solid tumors and angiogenesis, relatively little is known about CD105 expression and role in hematopoietic malignancies. We identified endoglin expression on the majority of blasts from patients with acute myeloid leukemia (AML) and acute B-lymphoblastic leukemia (B-ALL). Using a xenograft model, we find that CD105+ blasts are endowed with superior leukemogenic activity compared to the CD105- population. We test the effect of targeting this receptor using the monoclonal antibody TRC105, and find that in AML, TRC105 prevented the engraftment of primary AML blasts and inhibited leukemia progression following disease establishment, but in B-ALL, TRC105 alone was ineffective due to the shedding of soluble CD105. However, in both B-ALL and AML, TRC105 synergized with reduced intensity myeloablation to inhibit leukemogenesis, indicating that TRC105 may represent a novel therapeutic option for B-ALL and AML.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:18:14Z No. of bitstreams: 1 Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T12:58:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T12:58:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Capes / A doença de Parkinson (DP) é caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos no mesencéfalo. No entanto, mecanismos molecular responsável pelo processo degenerativo no sistema dopaminérgico nigroestriatal durante a doença de Parkinson permanecem desconhecidos. Atualmente, concorda-se que disfunção mitocondrial, agregação de α- sinucleína, estresse oxidativo, neuroinflamação e degradação protéica são causas envolvidas. Estudos farmacológicos têm focado no uso de metabolitos secundários de plantas e, entre estes, os flavonoides têm mostrado atividade biológica com efeitos neuroprotetores, antiinflamatórios e antioxidantes. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos neuroprotetores e imunomodulatórios de flavonoides bioativos usando modelos in vitro de DP. Foram usados diferentes modelos de culturas neuronais, avaliadas pelo testes de MTT e análises morfológicas para avaliar os efeitos citotóxicos ou neuroprotetores da rutina e quercetina. Em seguida, foram usados diferentes modelos de cultura primária de células gliais e neuronais e testes de MTT, exclusão ao azul de tripan, Fluoro-Jade B, Western Blot ou imunocitoquímica para β-III-Tubulina, Western Blot para tirosina hidroxilase ou para GFAP para investigar o efeito citotóxico induzido por aminocromo e/ou o efeito neuroprotetor induzido por rutina. Também investigamos a resposta imunoinflamatória ou imunomodulatória dosando citocinas (IL6, IL10, TNF-alpha) usando o método de ELISA. Nossos resultados demonstraram que rutina e quercetina (10-50μM) não induziram decréscimo no metabolismo mitocondrial em linhagens celulares SHSY-5Y ou co-cultura primária de neurônios/células gliais, contudo estes aumentaram o metabolismo mitocondrial nas concentrações de 50 e 100 μM em células da linhagem PC12. Além disso, rutina (10μM) induziu alterações morfológicas em células PC12. Também foi visto que aminocromo (250- 500μM) induziu uma redução na viabilidade celular em co-cultura de mesencéfalo e em cultura de microglia, cultura de células gliais e cultura de neurônios corticais. Ainda, a exposição ao aminocromo reduziu a expressão de β-III-tubulina, tirosina hidroxilase e GFAP em co-culturas de mesencéfalo e cultura de células gliais. Nossos resultados demonstram que a rutina protege células neurais frente a dano induzido por aminocromo, aumenta a expressão de β-III-tubulina e protege a rede de neuritos. Além do mais, aminocromo induziu redução de níveis de citocinas IL-6, IL-10 e TNF-alfa que foram reguladas a níveis basais quando a cocultura de mesencéfalo foi tratada com rutina. Concluímos então que a rutina protege células PC12 contra danos celulares induzidos por MPTP, co-culturas de mesencéfalo e células gliais contra danos induzidos por aminocromo. Podemos sugerir que a redução no nível de citocinas é conseqüência da perda de células gliais induzidas por aminocromo e que o retorno a níveis basais podem ser resultado de glioproteção e neuroproteção induzida pela rutina. / Parkinson's disease (PD) is characterized by the loss of dopaminergic neurons in the midbrain. The molecular mechanism responsible for degenerative process in the nigrostriatal dopaminergic system in PD remains unknown. Currently, there is a general agreement that mitochondrial dysfunction, α-synuclein aggregation, oxidative stress, neuroinflammation and impaired protein degradation are involved. Pharmacological studies have been focusing in using plant secondary metabolites and, among these, flavonoids have shown biological activity such neuroprotective, anti-inflammatory and antioxidant. In this sense, the objective of this work was to study the neuroprotective and immunomodulatory effects of a bioactive flavonoid using in vitro models of PD. We used different models of neuronal culture and MTT test and morphological analysis to make a screening of cytotoxic and/or neuroprotection by rutin and quercetin. After we used different models of primary culture of neuronal and glial cells and MTT test, Tripan Blue, Fluoro-Jade B, western blot or immunocytochemistry of β-III-Tubulin, tyrosine hydroxylase or GFAP in order to investigate the cytotoxic effect induced by aminochrome and/or neuroprotection induced by rutin. We also investigated immunoinflamatory response or immunomodulation by measuring cytokines (IL6, IL10, TNF-alpha) using ELISA. Our results demonstrated that rutin and quercetin (10-50μM) did not induce decrease in mitochondrial metabolism on SHSY-5Y cells line, or primary coculture of neuron/glial cells, however it increased the mitochondrial metabolism at concentrations 50 and 100μM on PC12 cells line. Moreover rutin (10μM) induce alterations on PC12 cells morphology. We also saw that aminocrhome (250-500μM) induced a decrease on cell viability at midbrain co-culture and microglia culture, glial cells culture, cortical neurons culture. In addition, the exposure to aminocrhome decreased expression of β-IIItubulin, tyrosine hydroxylase and GFAP on midbrain co-cultures and glial cells culture. Our results demonstrate that rutin protects neural cells from damage induced by aminocrhome, increases β-III-tubulin expression and protects neurite network. Furthermore, aminocrhome induced reduction of cytokines IL-6, IL-10 and TNF-alpha levels that were regulated to basal levels when the midbrain co-culture was treated with rutin. We concluded that rutin protects against PC12 cells cell against death induced by MPTP and neuronal and glial cells against death induced by aminocrhome. We can suggest that the reduction in cytokine levels are consequence of the loss of glial cells induced by aminocrhome and that the return to baseline levels may result from glioprotection and neuroprotection induced by rutin.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:43:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T13:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / capes / Introdução: As infecções pneumocócicas são as principais causas de mortalidade e morbidade infantil em todo o mundo. Ainda não há resultados conclusivos sobre a imunogenicidade da vacina pneumocócica 10-valente (PCV10), recomendada pelo Programa Nacional de Imunizações, em crianças com risco aumentado para doenças infecciosas. Objetivo: O principal objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune de anticorpos IgG contra os sorotipos presentes na PCV10. Materiais e Métodos: O estudo foi conduzido no Centro de Referência de Imunobiológicos Especiais (CRIE/UFBA) e no 16º Centro de Saúde. Foram incluídas, 13 crianças (Grupo 1) com diagnóstico de alguma patologia ou imunodeficiência (idade = 2,0 meses, IQR 2,0 - 2,5) e 30 crianças saudáveis (Grupo 2) (idade = 2,0 meses, IQR 2,0 - 2,0). Todas as crianças foram imunizadas com 4 doses da vacina e as amostras de sangue foram coletadas das mesmas, antes da 1ª e 4ª imunizações (T1 e T4) para medir a concentração de IgGs sorotipo-específicos. Foi realizado um ELISA indireto, utilizando a PCV10 como antígeno. Soros das crianças, controle de referência positivo (007sp) e controles negativos foram misturados com um absorvente contendo polissacarídeos capsulares C e 22F para remover os anticorpos não específicos contra antígenos bacterianos comuns. Resultados: Verificou-se que, no Grupo 1, 12/13 (92%) das crianças possuíam anticorpos IgG maiores que o ponto de corte de 1,022 ng/mL (mediana = 10,8 ng/mL, IQR = 3,0 - 18,5 ng/mL). Além disso, da 1ª para 4ª dose houve um aumento de 22 vezes na mediana (P= 0,0002). No Grupo 2, 29/30 (97%) tiveram uma resposta satisfatória acima do ponto de corte (mediana = 16,0 ng/mL, IQR = 7,3-35,6 ng/mL) e um aumento de 53 vezes na mediana (p<0,0001) da 1ª para 4ª dose. Com relação às imunoglobulinas, no Grupo 1, 38,5% (5/13) das crianças apresentaram IgM diminuída e 23% (3/13) tinham IgG inferior ao valor de referência. Todavia, no Grupo 2, 6,7% (2/30) das crianças apresentaram níveis de IgG abaixo do valor preconizado. Conclusões: Crianças portadoras de doenças crônicas e/ou imunodeficiências apresentam títulos de anticorpos contra os sorotipos vacinais favoráveis e equivalentes aos títulos de anticorpos anti-PCV10 em crianças imunocompetentes. / Introduction: Pneumococcal infections are the main causes of child mortality and morbidity worldwide. There is still no conclusive results on the immunogenicity of 10-valent pneumococcal vaccine (PCV10), recommended by the National Immunization Program, in children at increased risk for infectious diseases. Objective: The main aim of this study was to evaluate the immune response of IgG antibodies against serotypes in PCV10. Materials and Methods: The study was conducted with children enrolled in the Reference Center of Special Immunobiologicals (CRIE/UFBA) and at 16th Health Center. Were included, 13 children (Group 1) diagnosed with some disease or immunodeficiency (age = 2.0 months, IQR 2.0 - 2.5) and 30 healthy children (Group 2) (age = 2.0 months, IQR 2.0 - 2.0). All children were immunized with four doses of the vaccine and blood samples were collected from these children before the first and fourth immunization (T1 and T2) to measure serotype-specific IgG concentrations. An indirect ELISA was performed using the PCV10 as antigen. Child serum samples, positive serum (007sp) and negative reference sera were mixed before analysis with an absorbent containing C and 22F capsular polysaccharide to remove non-specific antibodies against bacterial common antigens. Results: It was found that, in Group 1, 12/13 (92%) children had higher IgG antibodies than the cutoff of 1,022 ng/mL (median = 10.8 ng/mL, IQR = 3.0 - 18.5 ng/ml). In addition, from the first to fourth dose there was an increase of 22 times in the median (p = 0.0002). In Group 2, 29/30 (97%) had a satisfactory response above the cutoff (median = 16.0 ng / mL, IQR = 7.3 - 35.6 ng/mL) and an increase of 53 times in the median (p = 0.0001) from the first to fourth dose. Regarding immunoglobulins, in Group 1, 38.5% (5/13) of the children had decreased IgM and 23% (3/13) had IgG below the reference value. However, in Group 2, 6.7% (2/30) of the children had IgG levels below the recommended value. Conclusions: Children with chronic diseases and/or immunodeficiency may have antibody titers against vaccine serotypes, favorable and equivalent to the titers of PCV10 anti-antibodies in immunocompetent children.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:58:18Z No. of bitstreams: 1 dissertação Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T13:08:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertação Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5) / CNPq / Nas infecções parasitárias alguns fatores estão associados com a susceptibilidade do hospedeiro, dentre eles o sexo, a idade, condição genética, fatores ambientais e o estado imunológico. Diferenças entre os sexos são observadas em diversas infecções. Acredita- se que isto ocorra devido a ações de hormônios sexuais, podendo afetar os diferentes tipos de resposta imune. A Leishmaniose é um grave problema de saúde pública apresentando aumento da prevalência e afetando grande parte da população mundial. No Brasil é endêmica e o Nordeste é a região mais afetada. A forma visceral é a mais grave podendo levar o indivíduo a óbito se não tratada. Objetivamos determinar se existe diferença entre sexos no modelo experimental de LV. Hamsters (Mesocricetus auratus) machos e fêmeas foram infectados com L. infantum/chagasi através da injeção intradérmica e comparados com animais controles, após 5 meses de infecção. Após eutanásia sangue, baço e fígado foram coletados para as análises de carga parasitária, histológicas e de parâmetros bioquímicos. As fêmeas infectadas apresentaram um maior tamanho de baço que os machos infectados. Porém, foram os machos que apresentaram maior carga parasitária. As alterações bioquímicas foram maiores nas fêmeas, podendo estar relacionadas às alterações histológicas observadas no fígado das mesmas. As fêmeas infectadas apresentaram concentrações séricas inferiores de estradiol quando comparadas com fêmeas não infectadas. Essa redução não foi detectada nos machos. Nossos resultados indicam que existem diferenças entre sexos na LV experimental. A determinação de diferenças entre os sexos nas respostas às infecções é de fundamental importância na escolha da melhor abordagem terapêutica para o tratamento das enfermidades, incluindo as leishmanioses. / In parasitic infections some factors are associated with the susceptibility of the host, including sex, age, genetic condition, environmental factors and immune status. Gender differences are observed in various infections. It is believed it occurs due to sex hormones, which may affect different types of immune responses. Leishmaniasis is a serious public health problem presenting increased prevalence and affecting much of the world population. In Brazil it is endemic and the Northeast is the most affected region. The visceral form is the most severe and may cause death if left untreated. We aimed to determine whether there is gender difference in the experimental model of LV. Hamsters (Mesocricetus auratus) males and females were infected with L. infantum / chagasi by intradermal injection and compared with control animals after 5 months of infection. After euthanasia, blood, spleen and liver were collected for parasite load, histological and biochemical parameters analysis. Infected females showed an increase in the size of spleen compared to infected males. However, males had higher parasite burden. Biochemical changes were higher in females, which may be related to the histological changes observed in their liver. Infected females had lower serum concentrations of estradiol compared to uninfected females. This reduction was not detected in males. Our results indicate that there are gender differences in experimental LV. The determination of sex differences in responses to infection is very important in choosing the best therapeutic approach for the treatment of diseases, including leishmaniasis.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-06-05T20:01:32Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado_Jamille Fernandes_versão PDF_completa (1).pdf: 1641289 bytes, checksum: 4b6203c0249095658c9990f2b42cc2af (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado_Jamille Fernandes_versão PDF_completa (1).pdf: 1641289 bytes, checksum: 4b6203c0249095658c9990f2b42cc2af (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado_Jamille Fernandes_versão PDF_completa (1).pdf: 1641289 bytes, checksum: 4b6203c0249095658c9990f2b42cc2af (MD5) / FAPESB / Estima-se que aproximadamente 334 milhões de pessoas sofrem de asma no mundo, e 5-10% dos indivíduos asmáticos tem asma grave caracterizada por uma resposta insatisfatória ao tratamento habitual. A imunopatogênese da asma está associada a um aumento da resposta do tipo 2, porém evidências também sugerem contribuições das citocinas Th1 e Th17 na gravidade da doença. Existem poucos estudos demonstrando o perfil imunológico de indivíduos com asma grave classificados de acordo com a sua resposta ao tratamento com doses elevadas de corticosteroides inalados. O objetivo deste estudo foi caracterizar os fenótipos dos linfócitos e monócitos de indivíduos com asma grave conforme sua resposta ao tratamento. Neste estudo foram avaliados 19 indivíduos com asma grave refratária ao tratamento (AGR), 21 com asma grave bem controlada/parcialmente controlada (AGC), em comparação a 23 com asma leve a moderada (ALM) e 10 controles sem asma (CSA). Os linfócitos e monócitos foram obtidos de CMSP e as frequências das diferentes moléculas foram realizadas utilizando a técnica de citometria de fluxo. A frequência de linfócitos T CD4 expressando CTLA-4 e TGF-β foi menor nos indivíduos com AGR em comparação aos indivíduos AGC e ALM. No grupo de indivíduos com AGR a frequência de células T CD4+CD25hi foi menor em relação aos indivíduos com AGC. Nos indivíduos com AGR, a frequência de células T CD4+CD25hiFoxP3+ e T CD4+IL-10+ foi menor quando comparada aos indivíduos com ALM. No entanto, a frequência das células T CD4 expressando IFN-γ e IL-17A foi maior nos grupos AGR e AGC em comparação ao grupo CSA. Quanto às subpopulações de monócitos, apesar de termos observado uma frequência maior dessas células expressando IL-10R e IL-10 nos grupos com asma grave (AGR e AGC), foi também observado que as subpopulações de monócitos de ambos os grupos expressavam mais as citocinas IL-13, IL-33 e TGF-β quando comparadas aos controles (ALM e CSA). Adicionalmente, a frequência das subpopulações de monócitos expressando os receptores IL-4Rα e IL-13Rα2 foi maior no grupo de AGR quando comparada aos grupos controles (ALM e CSA) e ao grupo AGC, respectivamente. A gravidade da asma está associada a um aumento das citocinas do perfil Th1 e Th17 pelos linfócitos e a refratariedade ao tratamento associada a uma diminuição de regulação por essas células. Entretanto, os monócitos de pacientes com AGR e AGC têm um papel importante na gravidade da doença por apresentarem perfis distintos associados com a produção de citocinas e expressão de receptores envolvidos na resposta imune Th2 e no remodelamento tecidual. / It is estimated that about 334 million people suffer from asthma in the world, and 5-10% of the asthmatic individuals have severe asthma characterized by unsatisfactory response to treatment. The immunopathogenesis of asthma is associated with increased type-2 response, but there is evidence of contributions of Th1 and Th17 cytokines to disease severity. There are few studies demonstrating the immunological profile of individuals with severe asthma categorised by their response to treatment with higher doses of inhaled corticosteroids. Thus, the objective of this study was to characterize the phenotypes of the lymphocyte and monocyte of indivduals with severe asthma classified according their response to treatment. In this study we evaluated 19 individuals with refractory severe asthma (RSA), 21 with severe asthma well controlled/partly controlled (CSA), 23 with mild to moderate asthma (MMA) and 10 controls with no asthma (CNA). Lymphocytes and monocytes were obtained from PBMC and the frequencies of the different molecules were performed using the technique of flow cytometry. The frequency of CD4+ T cells expressing CTLA-4 and TGF-β was lower in subjects with RSA in relation to individuals with CSA and MMA. In addition, in the group of individuals with RSA the frequency of CD4+CD25hi T cells was lower in individuals with CSA. We also observed that in individuals with RSA, the frequency of CD4+CD25hiFoxP3+ T and CD4+IL-10+ T cells was lower when compared to individuals with MMA. However, the frequency of CD4 T cells expressing IFN-γ and IL-17A was higher in the RSA and CSA groups in comparison to the CNA group. Concerning the monocyte subsets, although we observed a higher frequency of these cells expressing IL-10R and IL-10 in the severe asthma (RSA and CSA) groups, it was also observed that the monocyte subsets of both groups expressed more cytokines IL-13, IL-33 and TGF-β when compared to controls (MMA and CNA). In addition, the frequency of the monocyte subsets expressing the IL-4Rα and IL-13Rα2 was higher in the RSA group when compared to the control (MMA and CNA) and CSA groups, respectively. The severity of asthma is associated with an increase in Th1 and Th17 cytokines by lymphocytes and refractoriness to treatment associated with decreased regulation by these cells. However, monocytes from patients with RSA and CSA present differents profiles associated with cytokine production and expression of receptors involved in Th2 response and tissue remodeling.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-07-31T19:06:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-08-01T20:27:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / PAPES/CNPq, CAPES / O melanoma é um tipo de tumor de pele com altas taxas de incidências por todo mundo. Buscando formas de terapia auxiliar, destaca-se o Imiquimode (IMIQ), um creme de uso tópico que atua no receptor tipo toll-7 (TLR-7) estimulando o sistema imune inato a promover atividades tumoricidas. No presente estudo o tumor de linhagem B16F0 foi inoculado na orelha dos camundongos, seguidos do tratamento com o creme IMIQ. A mortalidade e o desenvolvimento tumoral foram acompanhados, nos diferentes grupos experimentais. Após 12 dias de tratamento, baços e linfonodos cervicais foram removidos em grupos de animais tratados e não tratados. As células foram colocadas em cultivo, plaqueadas e marcadas para análise em citômetro de fluxo. Grupos tratados com IMIQ apresentaram considerável eficácia no aumento da sobrevida e na contenção do tumor. Além disso, foi demonstrado que a atividade antitumoral é dependente da molécula de CD1, comprovando a importância das células NKT no combate ao melanoma. Ademais, nos grupos tratados, houve maior produção de IFN-γ por linfócitos TCD8 esplênicos, e TNF-α por células TCD4 e TCD8 de linfonodos drenantes. Pôde-se ainda notar o aumento de granzima B (GZB) produzida por células dendríticas (DCs) no baço de animais com melanoma. Já na estimulação de esplenócitos com o mitógeno Concanavalina A, foi evidenciada inibição na produção de GZB por células dendríticas. Conclui-se que NKT pode ser a principal responsável pela migração dessa população celular e que a produção de GZB por DCs pode ser inibida mediante a presença de antígenos tumorais. / Melanoma is a type of skin tumor with high incidence rates worldwide. Aiming for forms of auxiliary therapy, Imiquimode (IMIQ), a topical cream that acts on the toll-7 receptor (TLR-7), stimulates the innate immune system to promote tumoricidal activities. In the present study the B16F0 lineage tumor was inoculated into the ears of the mice, followed by treatment with the IMIQ cream. Mortality and tumor development were monitored in the different experimental groups. After 12 days of treatment, spleens and cervical lymph nodes were removed in groups of treated and untreated animals. Cells were plated, plated and labeled for flow cytometer analysis. Groups treated with IMIQ showed considerable efficacy in increasing survival and tumor containment. In addition, it has been demonstrated that the antitumor activity is dependent on the CD1 molecule, proving the importance of NKT cells in the fight against melanoma. In addition, in the treated groups, there was a greater production of IFN-γ by splenic TCD8 lymphocytes, and TNF-α by TCD4 and TCD8 cells from draining lymph nodes. It was also possible to note the increase of granzyme B (GZB) produced by dendritic cells (DCs) in the spleen of animals with melanoma. Already in the stimulation of splenocytes with the mitogen Concanavalin A, inhibition was demonstrated in the production of GZB by dendritic cells. It is concluded that NKT may be the main responsible for the migration of this cell population and that the production of GZB by DCs can be inhibited by the presence of tumor antigens.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-07-31T18:57:58Z No. of bitstreams: 1 ANAQUE DISSERTAÇÃO - Versão Final - 21.03.2017.pdf: 2518048 bytes, checksum: 7c8b38757c1fbbd07024d5cfe3bd76ad (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-08-01T20:30:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ANAQUE DISSERTAÇÃO - Versão Final - 21.03.2017.pdf: 2518048 bytes, checksum: 7c8b38757c1fbbd07024d5cfe3bd76ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANAQUE DISSERTAÇÃO - Versão Final - 21.03.2017.pdf: 2518048 bytes, checksum: 7c8b38757c1fbbd07024d5cfe3bd76ad (MD5) / CNPQ / A asma alérgica é uma morbidade de relevante impacto mundial que afeta milhões de indivíduos. É uma doença complexa que envolve a combinação de fatores ambientais e genéticos que são determinantes de seu desenvolvimento. Muitos genes têm sido reportados por estarem envolvidos com asma e atopia, dentre eles os genes DAD1 e OXA1L, presentes no cromossomo 14, que podem também estar envolvidos a essas condições. O gene DAD1 é considerado um regulador negativo da apoptose e OXA1L é reportado por seu envolvimento na biogênese e fosforilação oxidativa mitocondrial. Não existem dados na literatura que demonstrem variantes nesses genes associados com essas morbidades. Desta forma, sabendo-se da importância da apoptose e biogênese mitocondrial na reposta inflamatória da asma e alergia, polimorfismos nesses genes podem estar associados como fatores de risco ou proteção para seu desenvolvimento. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar se polimorfismos em DAD1 e OXA1L estão associados com asma e marcadores de atopia na população do SCAALA do inglês (Social Change Asthma and Allergy in Latin America) e qual o impacto funcional destas variantes, uma vez que estejam associadas com estes desfechos. O DNA de 1.307 indivíduos foram genotipados usando Illumina 2.5 Human Omni Bead chip. Foram realizadas análises de regressão logística a fim de avaliar a associação de variantes em DAD1 e OXA1L com asma e marcadores de alergia utilizando software PLINK 1.9 ajustados por sexo, idade, infecções helmínticas e marcadores de ancestralidade no modelo aditivo. O alelo G do SNP rs1681577 do DAD1 foi negativamente associado com asma (OR: 0.80; IC: 0.64 – 0.99; p: 0.039). Além disso, o alelo A do rs17119961 foi positivamente associado com teste cutâneo para P. americana (OR: 2.13; IC: 1.36 – 3.32; p: <0.001). O rs3811189 teve seu alelo C associado positivamente com produção espontânea de IL-13 (OR: 1.31; IC: 1.07 – 1.61; p: 0.008). Ademais, o SNP rs4981436 no OXA1L teve seu alelo C positivamente associado com asma (OR: 1.41; IC: 1.08 – 1.84; p: 0.012). Por outro lado o alelo G do SNP rs8572 foi positivamente associado com teste cutâneo para D. pteronyssinus (OR: 1.33; IC: 1.05 – 1.68; p: 0.017). O rs200470407 teve seu alelo C associado positivamente com produção espontânea de IL-13 (OR: 1.32; IC: 1.07 – 1.64; p: 0.012). Verificamos também um aumento da expressão do gene DAD1 em indivíduos asmáticos comparados aos controles. Assim sendo, polimorfismos em DAD1 e OXA1L podem influenciar a ocorrência de asma e atopia em uma população latina / Allergic asthma is a morbidity with significant worldwide impact that affects Millions of individuals. It is a complex disease that involves the combination of environmental and genetic factors both related to its occurrence. Many genes have been reported to be involved with asthma and atopy, and among them, DAD1 and OXA1L genes , located at chromosome 14 may also be involved in such conditions. The DAD1 gene is considered to be a negative regulator of apoptosis and OXA1L is reported for its involvement in mitochondrial biogenesis as well as its oxidative phosphorylation. There are no data in the literature that previously have already reported variants in such these genes with these morbidities. Thus, along with the importance of apoptosis and mitochondrial biogenesis in the inflammatory response of asthma and allergy, polymorphisms in these genes may be associated as risk or protective factors for their development. Therefore, the aim of this study was to evaluate whether polymorphisms in DAD1 and OXA1L are associated with asthma and markers of atopy in population SCAALA (Social Change Asthma and Allergy in Latin America) and what is the functional role of these variants once associated with such outcomes. The DNA of 1,307 individuals was genotyped using the Illumina 2.5 Human Omni Bead chip. Logistic regression analyzes were performed to evaluate the association of variants in DAD1 and OXA1L with asthma and allergy markers using PLINK 1.9 software adjusted for sex, age, helminth infections and ancestral markers in the additive model. The G allele of the SNP rs1681577 of DAD1 was negatively associated with asthma (OR: 0.80; CI: 0.64 - 0.99; p: 0.039). In addition, the A allele of rs17119961 was positively associated with skin prick test for P. americana (OR: 2.13; CI: 1.36 - 3.32; p: <0.001). The C allele for rs3811189 was positively associated with spontaneous IL-13 production (OR: 1.31; CI: 1.07 - 1.61, p: 0.008). In addition, the C allele of SNP rs4981436 in OXA1L was positively associated with asthma (OR: 1.41; CI: 1.08 - 1.84; p: 0.012). On the other hand, the G allele of the SNP rs8572 was positively associated with the skin prick test for D. pteronyssinus (OR: 1.33; CI: 1.05 - 1.68; p: 0.017). The C allele of rs200470407 was positively associated with spontaneous production of IL-13 (OR: 1.32; CI: 1.07 - 1.64; p: 0.012). In addition, DAD1 gene expression was up-regulated in asthmatic individuals compared to controls. Thus, polymorphisms in DAD1 and OXA1L may be related to allergy and asthma in Latin America

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T18:32:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RicardodeSouzaRibeiro.pdf: 1191496 bytes, checksum: cdb1da9294c409d1a1f2a403b87cf9c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T18:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RicardodeSouzaRibeiro.pdf: 1191496 bytes, checksum: cdb1da9294c409d1a1f2a403b87cf9c9 (MD5) Previous issue date: 2013 / A malária é uma doença que provoca um enorme impacto em todo mundo e muitos esforços tem sido feitos na tentativa de eliminar esta doença há séculos. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra esta doença se tornou prioridade para muitos grupos de pesquisa, entretanto apenas um antígeno apresentou resultados promissores em ensaios clínicos de fase III. O processo de identificação de candidatos promissores para comporem uma vacina é muito laborioso e demanda um tempo muito grande, principalmente devido à biologia complexa destes parasitos intracelulares. Identificar proteínas nesses tipos de patógenos intracelulares é um grande desafio e requer a análise de diferentes fatores ao mesmo tempo. Um bom candidato a antígeno deve possuir características que façam com que a proteína ou pelo menos parte dela, entre em contato com o sistema imune do hospedeiro em algum momento do ciclo de vida do parasito e que este contato seja capaz de gerar uma resposta imune capaz de neutralizar o parasito e acabar com a infecção. As proteínas secretadas/exportadas se encaixam perfeitamente nessas características e foi justamente com o objetivo de identificá-las que foi desenvolvida uma estratégia automática integrando diferentes programas para buscar estas proteínas. Dessa forma, o proteoma predito de 5 espécies diferentes do gênero Plasmodium foi submetidas à análise de três programas que procuram por características importantes para proteínas exportadas/secretadas nesse gênero. O peptídeo sinal foi investigado utilizando o SignalP, um script em Perl foi desenvolvido para buscar um motivo que é crucial para a exportação de algumas proteínas (PEXEL) e os domínios transmembrana foram buscados utilizando o TMHMM. Algumas proteínas selecionadas foram submetidas à predição de epitopos de células B. Com esta abordagem foi possível identificar algumas famílias de proteínas que já são conhecidas como proteínas exportadas, como Rifin e Stevor, o que mostra que esta abordagem pode ser uma ferramenta útil na identificação de novos prováveis alvos para o desenvolvimento de uma vacina eficaz. Utilizando esta metodologia, esperamos contribuir para aumentar o número de proteínas em testes para formulação de um antígeno que seja capaz de ajudar no controle e erradicação desta doença que causa tantos prejuízos para a humanidade. / Malaria is a disease that causes a huge impact around the world and many efforts have been made in an attempt to eliminate this disease for centuries. The development of an effective vaccine against this disease has become a priority for many research groups, however only one antigen showed promising results in phase III clinical trials. The process of identifying promising candidates to compose a vaccine is very laborious and requires a very long time, mainly due to the complex biology of these intracellular parasites. Identify proteins in these types ofintracellular pathogens is a major challenge and requires the analysis of different factors simultaneously. A good candidate antigen must possess characteristics that make the protein or at least part of it, contact the host immune system at some point in the life cycle of the parasite and that this contact is able to generate an immune response capable to neutralize the parasite and stop the infection. The proteins secreted / exported fit perfectly and it was precisely these characteristics in order to identify them we developed a strategy that automatically integrating different programs to find these proteins. Thus, the predicted proteome of 5 different species of the genus Plasmodium was subjected to analysis of three programs looking for important features for proteins exported/secreted in this genre. The signal peptide was investigated using SignalP, a Perl script was developed to find a subject that is crucial for the export of some proteins (PEXEL) and transmembrane domains using TMHMM were searched. Some selected proteins were subjected to prediction of B cell epitopes With this approach it was possible to identify some protein families that are already known as proteinsexported as Rifin and Stevor, showing that this approach can be a useful tool in identifying new likely targets for the development of an effective vaccine. Using this methodology, we hope to contribute to increasing the number of proteins in tests for formulation of an antigen that is able to help control and eradicate the disease that causes so much harm to humanity.

Made available in DSpace on 2014-03-18T17:15:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 isabella_gremiao_ipec_dout_2013pdf: 642531 bytes, checksum: d1ce60cd7ad78376af49580b95b10f9d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Na esporotricose felina, os protocolos terapêuticos atualmente preconizados para o tratamento apresentam uma efetividade baixa e casos de falha terapêutica com itraconazol têm sido descritos. O presente estudo foi realizado no Laboratório de Pesquisa Clínica em Dermatozoonoses em Animais Domésticos (LAPCLIN-DERMZOO) do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC)/FIOCRUZ com o objetivo de descrever a resposta terapêutica ao uso da anfotericina B intralesional associada ao itraconazol oral. A população do estudo foi constituída por gatos com lesões cutâneas localizadas residuais de esporotricose refratária ao itraconazol oral, acompanhados no LAPCLIN-DERMZOO no período de 2007 a 2009. Os animais foram submetidos a administrações intralesionais de anfotericina B semanalmente até a completa cicatrização da lesão, havendo um período de tolerância de duas semanas entre as aplicações. A terapia antifúngica oral (itraconazol 100 mg/dia) foi mantida durante o estudo e por um mês após a cicatrização da lesão Vinte e três (85,2%) dos 27 gatos incluídos no estudo apresentaram remissão das lesões, sendo que 17 (73,9%) obtiveram cura clínica e em 6 (26,1%) as lesões recidivaram no mesmo local. Em 1 (3,7%) animal houve estagnação do quadro clínico e em 3 casos (11,1%) houve abandono do tratamento. Os efeitos adversos clínicos observados foram a formação de abscesso estéril em 4 (14,8%) e edema local em 3 (11,1%), independente do volume de anfotericina B administrado. Não foram observados efeitos adversos laboratoriais relacionados à anfotericina B. De acordo com os resultados obtidos, a associação de anfotericina B intralesional e itraconazol oral em gatos com esporotricose refratária ao itraconazol isoladamente pode ser benéfica, aumentando os índices de cura / In feline sporotrichosis , the currently recomm ended treatment protocols for treatment have a low effectiveness and cases of treatment failure with itraconazole have been described. The present study was carried out at the Laboratory of Clinical Research on Dermatozoonosis in Domestic Animals (LAPCLIN - DERMZOO), Evandro Chagas Clinical Research Institute (IPEC)/FIOCRUZ in order to describe the therapeutic response to the use of intralesional amphotericin B associated with oral itraconazole. The study included cats with residual cutaneous localised lesion s of sporotrichosis refractory to oral itraconazole that had been followed up at LAPCLIN - DERMZOO, between 2007 and 2009. The animals received weekly administrations of intralesional amphotericin B until complete healing of the lesion. It was accepted the maximum range of up to two weeks between the applications. Oral antifungal therapy (itraconazole 100 mg/day) was maintained throughout the period of administration of intralesional amphotericin B and during one month after the clinical cure. Twenty - three (85.2%) of the 27 treated cats achieved clinical remission, 17 (73.9%) of which were cured and in 6 (26.1%) the lesions recurred in the same site. Lack of clinical response was observed in 1 (3.7%) animal and 3 (11.1%) animals abandoned treatment. The cli nical adverse effects observed in the animals during treatment were the formation of a sterile abscess in 4 (14.8%) and edema in 3 (11.1%), irrespective of the volume of amphotericin B administered.There were no laboratory adverse effects related to amphot ericin B. According to the results obtained in this study, the combination of intralesional amphotericin B and oral itraconazole in cats with sporotrichosis refractory to itraconazole alone can be beneficial, increasing cure rates