Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Ferreira / Banca: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Wanderson Adriano Biscola Pereira / Resumo: Tendo em conta a importância do sangue do cordão umbilical (SCU) como fonte de células-tronco objetivou-se este estudo, visando quantificar células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias; e determinar os valores eritroleucométricos bem como a contagem de reticulócitos no sangue do cordão umbilical (SCU) e sangue periférico de suínos imediatamente ao nascimento (SPI) e quarenta e oito horas depois (SP48), utilizando-se de 48 amostras de SCU e periférico de neonatos. Comparando-se os grupos, a um nível de significância de 5% na quantificação de células CD117+ a marcação foi muito baixa presumivelmente porque o CD117 marca células em estágio de diferenciação. Pelo que se recomenda que mais estudos sejam feitos, combinando-o com o marcador da verdadeira célula- tronco. As contagens de células CD5+ , CD4+ e CD8+ por citometria de fluxo, no SCU e SPI foram inferiores àquelas reportadas para o sangue periférico de adultos, indicando um componente imunológico imaturo. A proporção CD4:CD8, tanto para o SCU quanto para SPI, assim como SP48, demonstrou dominância das células TCD4+. Relativamente ao eritrograma, houve diferença significativa entre as variáveis nos grupos estudados, excetuando-se o volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM) que não variaram entre os grupos, SCU e SPI; a contagem de reticulócitos no grupo SP48 foi superior ao dos grupos SCU e SPI. No leucograma, todas as variáveis mostraram diferença significativa, excetuando-se a contagem de monócitos, que não variou entre os grupos, SCU e SPI. Já nos grupos SPI e SP48 foi observada diferença significativa na contagem de neutrófilos segmentados e monócitos, enquanto o total de leucócitos, neutrófilos bastonetes e linfócitos não diferiram / Abstract: Given the importance of Umbilical cord blood (UCB) as a source of stem cell, this study was aimed to quantify CD117+, CD45+ and lymphocyte subsets and determine the eritroleucometric values and the recticulocyte count in umbilical cord blood (UCB) and peripheral blood of piglets immediately at birth (PBI) and forty-eight hours late (PB48), using 48 samples of umbilical cord and peripheral blood of neonates. Comparing the groups at a significance level of 5 %, in the quantification of CD117+ cells, marking was very low presumably because CD117 mark cells in differentiation stage. It is recommended that more studies be done combining it with the marker of true stem cell marker. The lymphocyte subsets counts CD5+, CD4+ even CD8+ of UCB and PBI performed by flow citometry, were lower than those reported for peripheral blood of adult pigs, indicating an immature immunologic component. The ratio CD4:CD8 obtained in this trial, both UCB, PBI and PB48 showed dominance of CD4+ T cells lymphocytes. Regarding the erythrogram there was a significant difference between variables of groups with exception for mean corpuscular volume (MCV) mean corpuscular hemoglobin (MHC) and mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC) that did not vary between UCB and PBI groups; the reticulocyte count in PB48 group was higher than that of UCB and PBI groups. In the WBC, all variables showed significant differences, except for the number of monocytes, which vary between UCB and PBI groups. In PBI and PB48 groups there was no significant difference in the mature neutrophils and monocyte count, while the total leukocyte, band neutrophils and lymphocytes did not differ / Doutor

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Gil Benard / Banca: Andréa de Faria Fernandes Belone / Resumo: Células gigantes multinucleadas (CGM) são células características, presentes em lesões granulomatosas, induzidas por agentes infecciosos e, sua formação pode ser modulada por citocinas produzidas por células da resposta imune. No presente trabalho avaliou-se o efeito modulador de citocinas pró-inflamatórias (IFN-γ e TNF-α) e anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-β1) na formação de CGM in vitro, a partir de monócitos humanos, estimulados com antígenos de Paracoccidioides brasiliensis (AgPb) e sobre a atividade fungicida dessas células desafiadas com a cepa Pb18 de P.brasiliensis. Monócitos do sangue periférico de indivíduos saudáveis foram cultivados na ausência de estímulo (controle), com AgPb (100ug/mL) ou com associações de AgPb e GM-CSF (100 U/ml) com as citocinas: IFN-γ (300UI/mL), IL-10 (50U/mL), TGF- β1 (250pg/mL) ou TNF-α (50U/mL). A formação de CGM foi avaliada após três dias de cultivo, estabelecendo-se o índice de fusão (IF) e a percentagem de CGM após fixação e coloração das células com May-Grunwald-Giemsa. Além disso, a atividade fungicida dessas células foi avaliada após 4 h de co-cultivo das CGM com 4 x 104 células leveduriformes viáveis da cepa Pb18 de P. brasiliensis, por plaqueamento das co-culturas em meio BHI-ágar e determinação da recuperação de fungos viáveis. O método estatístico empregado para comparação dos resultados foi análise de variância, com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a incubação de monócitos com AgPb+GM-CSF+IFN-γ induziu IF significativamente mais elevados em relação a todas as demais culturas: controle, apenas estimulados com AgPb ou AgPb adicionado das demais citocinas. A adição de TNF- α+AgPb+GM-CSF não resultou em IF maiores do que os obtidos na cultura estimulada apenas com o AgPb, enquanto as citocinas IL-10 e TGF-β1 apresentaram efeito supressor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Multinucleated giant cells (MGC) are characteristics cells present in granulomatous lesions induced by infectious agents and also may be modulated by cytokines produced by cells of the immune response. The present study evaluated the modulatory effect of interferon-gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) pro-inflammatory cytokines, and interleukin-10 (IL-10) and transforming growth factor beta (TGF-β1) anti-inflammatory cytokines on in vitro formation of MGC derived from human monocytes, stimulated with Paracoccidioides brasiliensis antigen (PbAg) and on fungicidal activity of these cells challenged with the Pb18 strain of P.brasiliensis. Peripheral blood monocytes obtained from healthy individuals were cultured for three days without stimulus (control) or with PbAg (100 ug/mL) or with association of PbAg and granulocyte macrophage colony stimulator factor (GMCSF (100 U/mL) with the following cytokines: IFN-γ (300 UI/mL), IL-10 (50 UI/mL), TGF-β1 (250 pg/mL) or TNF-α (50 UI/mL). The generation of MGC was evaluated by fusion index (FI) and the percentage of MGC formation after cell fixing and May-Grumwald-Giensa staining. Fungicidal activity of monocytederived MGC was evaluated 4h after co-culture of MGC with 4 x 104 viable yeast cells of Pb18 strain, by plating the cultures in BHI-agar and determination of viable fungi recovery. The statistical method employed for the comparison of the results was analysis of variance with the significance set at p< 0.05. The results showed that the incubation of monocytes with PbAg+GM-CSF+IFN-γ induced FI significantly higher than those observed in all the other cultures, such as control cultures, cultures stimulated with PbAg only or cultures stimulated with PbAg associated with the other cytokines. Stimulation with PbAg+TNF+GM-CSF did not result in FI higher than those obtained in the culture stimulated with PbAg only... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria José Tavares Ranzani de Paiva / Coorientador: Fabiana Pilarski / Banca: Antenor Aguiar Santos / Banca: Marco Antonio de Andrade Belo / Resumo: Dentre as espécies nativas criadas no Brasil, o pacu, Piaractus mesopotomicus, tem apresentado aumento em produção, impulsionado pela sua rusticidade, rápido crescimento e carne de boa qualidade. Neste contexto, os estudos sobre a aplicação de probióticos na aqüicultura intensificaram-se, visando à diminuição dos problemas sanitários encontrados nas pisciculturas e a substituição do uso de antibióticos, que têm se tornado uma barreira ao comércio internacional. A eficácia dos probíóticos na aqüicultura pode ser afetada por fatores como o tipo de probiótico e níveis de inclusão na dieta, espécie do hospedeiro e manejo. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de diferentes níveis de inclusão do probiótico B.subtilis e B.cereus em dietas experimentais para pacu. Neste experimento foram utilizados 660 juvenis de pacus, com peso médio inicial de 67,0 ± 7,0 g, distribuídos em 20 tanques (500 L) e alimentados com probiótico durante 60 dias com quatro níveis de inclusão de Bacillus subtilis e Bacillus cereus (2,0; 4,0; 8,0 e 16,0 g) na ração experimental. Estes foram adicionados à ração experimental por meio de veículo oleoso. Foram avaliados: taxa de sobrevivência (TS), ganho em peso (GP), consumo alimentar diário (CAD), conversão alimentar aparente (CAA), taxa de crescimento específico (TCE), índices hepatossomático (IH), contagem e quantificação do número de probióticos na ração e no intestino dos peixes, número de eritrócitos, taxa de hemoglobina, hematócrito, índices hematimétricos, contagem total e diferencial de leucócitos, contagem de trombócitos, migração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the native farming species in Brazil, pacu Piaractus mesopotomicus, has showed increase in the production, because your rusticity, growing fast and good quality meat. In this context, studies about the application of probiotics in the aquaculture have increase, with the aim of decrease of the sanitary problems found in the fish farms and the replacement of the antibiotics use that has become a barrier to international trade. The probiotics effectiveness in the aquaculture can be affected by factors how the kind of the probiotic and levels inclusion in the diet, host specie and management. At this, the aim of the research was to evaluate the influence of different levels of inclusion of the probiotic B.subtillis and B.cereus in assay diets for pacu. In this experiment was used 660 juvenile pacu, with average initial weight 67,0 ± 7 g, distributed in 20 tanks (500 L) and fed with probiotic during 60 days with four inclusion levels (2.0 g, 4.0 g, 8.0 g e 16.0 g) in the assay ration. The probiotic were added at ration por by oil vehicle. It were evaluated: survival rate (ST), weight gain (WG), daily food intake (DFI), feed conversion (FC), specific growing rate (SGR), hepatossomatic indices (HI), counting and quantification of the bacteria number in the ration and in gut the of the fish, erythrocytes number, hemoglobin rate, hematocrit, RBC indice, total count and differential of leucocytes, count of trombocytes, in vivo phagocytes migration, respiratory activity of the leucocytes (burst), plasmatic analyses of cortisol, glucose and total proteins. The animals didn't show improve in the production parameters and there wasn't difference in the hematological parameters evaluated in the animals fed with probiotic, too. In the evaluation of burst oxidative there wasn't difference between the treatments, but the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Luis Carlos Spolidorio / Banca: Ricardo Della Coletta / Banca: Roseanas Almeida Freitas / Resumo: Carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (HNSCC, squamous cell carcinoma of the head and neck) é uma neoplasia caracterizada mais comumente por invasão local/regional de prognóstico sombrio quando diagnosticada em estágios avançados e uma característica imunossupressão local ou sistêmica associada. A taxa de sobrevivência em casos avançados é inferior à de câncer de mama ou próstata, e seu tratamento usualmente causa morbidade severa. A resposta ao tratamento é altamente variável mesmo entre pacientes em estágios iniciais da doença e apesar do tratamento implementado seguir o padrão de cuidados vigente. Assim, há grande necessidade de identificar biomarcadores que indiquem um fenótipo agressivo e possa proporcionar informações de utilidade no desenvolvimento de novas terapias específicas. Nossa hipótese foi de que produtos secretados por células de HNSCC ou o contato direto das mesmas com células imunológicas podem induzir uma modulação no sentido de causar a evasão do tumor da resposta imune. Observamos que a literatura mostra diversos trabalhos onde células tumorais exercem efeito imunossupressor em diversos tipos celulares da resposta imune. O estímulo de PBMC com meio condicionado (CM) de células de HNSCC induziu uma diminuição na proliferação, bem como modulou a polarização para fenótipos anti-inflamatórios e em co-cultura de HNSCC e PBMC, o tratamento prévio com CM das PBMC conferiu vantagem às células tumorais. Por último avaliamos um possível biomarcador, a galanin... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Squamous cell carcinoma of head and neck (HNSCC) is a cancer characterized commonly by local/regional invasion of poor prognosis when diagnosed in advanced stages and are associated with local or systemic immunosuppression. The survival rate for advanced cases is below the breast or prostate cancer, and treatment usually causes severe morbidity. The response to the treatment is highly variable among patients even in the early stages of the disease, despite the treatment implemented following the current standard care. Thus, there is great need to identify biomarkers that indicate an aggressive phenotype and can provide useful information on the development of new target therapies. Our hypothesis was that secreted products by HNSCC cells or direct contact with immune cells can induce a modulation in order to cause tumor evasion of the immune response. We note that the literature shows several studies where tumor cells exert immunosuppressive effect in different cell types of the immune response. The stimulation of PBMC with conditioned medium (CM) of HNSCC cells induced a decrease in proliferation, and modulates a polarization toward anti-inflammatory phenotypes and in co-culture of HNSCC and PBMC pre-treatead with CM caused advantage to tumor cells. Finally we evaluate a possible biomarker, galanin, in modulating the immune response. The absence of galanin induced higher levels of proliferation as well a more bias towards proinflammatory phenotypes. Increase of galanin expres... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença granulomatosa sistêmica, causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo imperfeito e termodimórfico. Embora o contágio ocorra principalmente pela via aérea, as vias transcutânea e mucosa não devem ser desconsideradas, devido à possibilidade de invasão através de pele ou mucosas. No presente estudo, a detecção molecular de P. brasiliensis por Nested- PCR foi realizada em fragmentos de biópsias de lesões cutâneo-mucosas de pacientes com PCM ativa e comparada a outras técnicas utilizadas como rotina no diagnóstico dessa micose. Para tanto, amostras de 29 pacientes atendidos no Serviço de Dermatologia, da Faculdade de Medicina de Botucatu/UNESP, foram coletadas no período de abril/2004 a abril/2007. Na análise histopatológica observou-se granulomas compactos bem organizados, algumas vezes ao lado de áreas contendo granulomas frouxos mal definidos. Tal técnica foi positiva em todas as amostras avaliadas, com presença de grande quantidade de células fúngicas em 65,5% dos casos, algumas com multi-brotamentos. Para as análises sorológicas, na técnica de ELISA, 74,1% dos casos apresentaram títulos de 1/12800, 11,1% apresentaram 1/3200, 3,7% apresentaram 1/800 e 11,1% foram negativos. Já para imunodifusão (ID), 3,5% apresentaram título de 1/512, 55,1% apresentaram títulos de 1/32, 3,5% apresentaram 1/16, 3,5% apresentaram 1/8, 10,3% apresentaram 1/4, 6,9% apresentaram 1/2 e 17,2% foram negativos. Foi observado um aumento nos níveis de TNF- , nos pacientes na forma grave, produzido por monócitos não estimulados, em comparação à forma leve e moderada, e ao controle. A produção desta citocina por monócitos estimulados com LPS também se mostrou gradativamente maior quanto maior a gravidade dos pacientes. Além disso, na análise do seguimento dos pacientes nota-se uma diminuição significativa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença granulomatosa sistêmica, causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, fungo imperfeito e termodimórfico (Franco et al., 1987, 1989). Com distribuição endêmica no Brasil e outros países da América Latina (Restrepo et al., 1973; Restrepo, 1985; Wanke & Londero, 1994), esse agente etiológico apresenta-se sob a forma de levedura em tecidos do hospedeiro ou quando cultivado à temperatura de 35-37°C, e sob a forma de micélio à temperatura ambiente (4-28°C) (Restrepo, 1985; San- Blas & San-Blas, 1985), As lesões primárias da PCM ocorrem com mais freqüência nos pulmões, dando origem a infecção subclínica, que pode evoluir para cura ou tornar-se latente na presença de resposta imune eficiente, ou ainda, disseminar para outros órgãos, por via hematogênica ou linfática, causando doença grave (Giraldo et al., 1976; Londero & Severo, 1981; Restrepo, 1988; Montenegro & Franco, 1994; Bethlem et al., 1999). A PCM tem como apresentações clínicas as formas aguda-subaguda e crônica (Franco et al., 1987). A primeira, também chamada juvenil, ocorre predominantemente em crianças, adolescentes e adultos jovens. Geralmente se desenvolve a partir de lesão primária não detectada, que se dissemina rapidamente pelas vias linfática e hematogênica para órgãos linfóides e hematopoiéticos, constituindo quadro infeccioso grave (Mendes et al., 1988). A forma crônica da doença é mais freqüente e se desenvolve a partir do complexo primário ou do foco quiescente (reinfecção endógena). Esta geralmente afeta adultos do sexo masculino, com idade superior a 30 anos. Apresenta quadro clínico de duração prolongada, normalmente acima de seis meses, onde se pode dizer que o comprometimento pulmonar é constantemente observado e o tegumentar (cutâneo e/ou mucoso) é freqüente (Marques et al., 1994)... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Silvio Alencar Marques / Coorientador: Eduardo Bagagli / Banca: Gil Benard / Banca: Flávia Villaça Morais / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Doutor

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Ramon Kaneno / Banca: Vanessa Lara / Banca: Iracilda Z. Carlos / Banca: Sueli Calvi / Não disponível / Abstract: Silibinin is the major active component of silymarin (Silybum marianum), a polyphenolic plant flavonoid that has anti-inflammatory, cytoprotective and anticarcinogenic effects. The modulatory effect of silibinin on monocyte function against Paracoccidioides brasiliensis (Pb18) has not yet been demonstrated. The present study investigated whether the effect of silibinin on NF-kB pathways may affects the production of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), interleukin-10 (IL-10), Transforming growth factor beta (TGF-β1), prostaglandin E2 (PGE2) and nitric oxide (NO), as well as the fungicidal activity of human monocytes challenged in vitro with Pb18. Peripheral blood monocytes from healthy individuals were treated with or without 5 uM and 50 uM silibinin and challenged with Pb18 or were stimulated with lipopolissaccharide (LPS). After 18 h of culture TNF-α, IL-10, TGF-β1 and PGE2 were determined by ELISA, while NO release was quantified by the accumulation of nitrite in the supernatants using the standard Griess assay. Fungicidal activity of monocytes against Pb18 was assessed after cell incubation with interferon-gamma, culture with or without silibinin for 18 h and challenge with Pb18 for 4h. NF-kB activation in the cultures was evaluated by flow cytometry and ELISA after monocyte stimulation with Pb18 or LPS for 30 min. Silibinin at 50uM concentration partially inhibited p65NF-kB activation as observed by reduction in the number of cells expressing this factor, that was confirmed by low concentration detection of p65NF-kB in the nucleus. This silibinin effects resulted in suppression of TNF-α, IL-10, TGF-β1 and PGE2 and NO production, but did not affect fungicidal activity of monocytes against Pb18. The modulatory effect of silibinin on the monocytes inflammatory response against P. brasiliensis might be important to establish an efficient and beneficial immune response of the host against the fungus / Doutor

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Coorientador: Ana Carla Pereira / Coorientador: Edward A. Gravis / Banca: Lenice do Rosário Souza / Banca: Ida Maria Foschiani Dias Baptista / Banca: Fátima Regina Vilani Moreno / Banca: Ana Cláudia Pelizon / Resumo: Não disponível / Abstract: It is estimated that one-third of the total world population is latently infected with M. tuberculosis and only 5-10% of the infected individuals will develop active TB disease during their life-time. The reason why some infected individuals develop active disease, while others do not is not yet entirely understood. Given the central role of TLR-2 in the incitement of inflammation, polymorphisms in its gene might be involved in both infectious and inflammatory diseases. The aim of this study was to evaluate the influence of TLR2 - 16934A/T and GT repeat polymorphisms on the immune response of PTB patients undergoing anti-TB treatment at different time points of anti-tuberculosis treatment: T1 (beginning), T2 (3 months) and T3 (end). For this we genotyped TLR2 -16934 and (GT)n repeats polymorphisms and evaluated the immune response of pulmonary tuberculosis patients during the time of anti-tuberculosis treatment. The present study suggests that TLR2 - 16934A/T and GT repeats polymorphisms can influence differential TLR-2, NF-κB and cytokine levels during anti-TB treatment. We also suggest that PTB patients with TLR2 - 16934 AA genotype may have a worst outcome of the disease, since they have a lower IFN-γ, cytokine essential to initiate the protective immunity to active TB. This association could not be made in our study due to the low number of patients evaluated. Since TLR-2 play a major role in initiating immune response against M. tuberculosis other polymorphisms in TLR2 would be crucial to better understand protective immune responses and may serve as biomarkers of protection or susceptibility to TB / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000446716-Texto+Completo-0.pdf: 2485126 bytes, checksum: d0edbbefdafd57b69ebba83d7dfd395f (MD5) Previous issue date: 2013 / Background : Lactoferrin (LF) is a glycoprotein present in human milk with known antimicrobial effects. In vitro, LF has shown to impair the growth of respiratory syncytial virus (RSV). We sought to assess the effect of bovine (b)LF in RSV replication and different aspects of RSV disease in an in vivo murine model. Methods : BALB/C mice were inoculated with 107 PFU RSV A2 or 10% EMEM. bLF or placebo (DPBS) were administered once or twice daily by oral gavage or intraperitoneal (IP) injection at doses ranging from 2 to 10mg/animal/day, from 48h before until day 4 post-RSV inoculation. Bronchoalveolar lavage, whole lung specimens and serum samples were harvested on day 5 post inoculation to asses RSV loads, lung inflammation and cytokine concentrations. Weight loss, airway obstruction and disease severity were assessed daily in all groups. Results : On day 5 post-inoculation RSV loads, lung inflammation and serum innate, Th1, Th2 and Th17 cytokine concentrations showed no differences between RSV infected mice treated with bLF and RSV untreated mice independent of bLF dosing and administration route (p>0. 05). In addition, all bLF groups showed similar weight loss, degree of airway obstruction, and disease severity scores on days 1 to 5 post-inoculation which was comparable to infected untreated mice (p>0. 05), but higher than uninfected controls. Conclusions : Administration of oral or IP bLF at different doses did not demonstrate antiviral activity or significant effects on disease severity in the RSV mouse model. Whether these observations could be extrapolated to infants at risk of RSV infection needs to be further explored. / Introdução : Lactoferrina (LF) é uma glicoproteína presente no leite humano que possui efeitos antimicrobianos bem estabelecidos. Estudos in vitro, demonstram que a LF é capaz de desestabilizar o crescimento do vírus sincicial respiratório (VSR). Neste estudo procuramos avaliar o efeito da LF bovina (bLF) na replicação do VSR, além de avaliar diferentes aspectos da doença causada por VSR in vivo em um modelo murino.Métodos : camundongos BALB/c foram inoculados com 107 UFP de VSR A2 ou EMEM 10%. bLF ou placebo foram administrados uma ou duas vezes ao dia por gavagem ou injeção intraperitoneal (IP) em doses entre 2 e 10 mg/animal/dia, dois dias antes a 4 dias após a inoculação com VSR. Amostras de lavado broncoalveolar, pulmões e sangue foram coletadas no dia 5 após a inoculação com o objetivo de avaliar a carga viral, inflamação pulmonar e concentração de citocinas. Peso, obstrução de via aérea e gravidade da doença foram avaliados diariamente em todos os grupos do estudo. Resultados : No dia 5 após a inoculação do vírus, a carga viral, inflamação pulmonar e concentração de citocinas relacionadas a imunidade inata, respostas Th1, Th2 e Th17 no soro não demonstraram diferença, quando comparamos os animais infectados com RSV tratados com bLF e os animais infectados com RSV tratados com placebo, independente da dose ou via de administração (p>0. 05). Além disso, a perda de peso, obstrução de via aérea e gravidade da doença foi similar entre os grupos tratados com bLF nos dias 1 a 5 após a inoculação do vírus. Estes valores são comparáveis com os valores obtidos no grupo placebo, porém significativamente aumentados quando comparados aos animais não-infectados. Conclusão : a administração de bLF por via oral ou injeção IP, em diferentes doses, não demonstrou atividade antiviral ou efeitos significativos na severidade da doença em um modelo murino de VSR. Se essas observações podem ser extrapoladas para crianças em risco de desenvolver infecções por VSR, essas questões necessitam ser melhor exploradas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424923-Texto+Completo-0.pdf: 645382 bytes, checksum: 25070e3ec621e54c54f5013c978ddf8d (MD5) Previous issue date: 2010 / Schistosomiasis mansoni is an endemic chronic parasitic infection that occurs in countries in Africa, South America, the Caribbean and the eastern Mediterranean. The main pathology is the granuloma, an immune response against the antigens secreted by the parasite eggs primarily in the liver and intestines. Those antigens are crucially involved in the modulation of the humoral and cellular immunological responses of the host and may be involved in the strategy of the egg passage through intestinal mucosal. This work had its origin in the results of an experiment realized by Candida Fagundes Teixeira of the PUCRS Biomedical Parasitology Group, which the attempts to obtain egg antibodies that could make interaction with paramagnetic particles revealed some difficulty in obtaining high levels of antibodies against the egg surface. The main goal of the present work was to verify the production of antibodies against the egg surface of Schistosoma mansoni. S. mansoni, Esteio isolated, was maintained in laboratory through passages in Biomphalaria glabrata and Swiss strain mice. The worms were recovered, washed in buffer and used for production of adults worm soluble membrane antigens. The eggs were collected from human infected feces and used for mice immunization and production of secreted egg antigens (SEA). The experimental groups were separated in 4 groups with 6 mice each, as follow: group 1 immunized with saline solution 0,9%; group 2 immunized with sonicated eggs and adjuvant; group 3 immunized with sonicated eggs without adjuvant and group 4 immunized with whole intact eggs. Through the ELISA and immunofluorescence techniques it was verified reactivity in immunization with sonicated eggs and it was not verified reactivity in immunization with whole intact eggs.The systemic and complex approach of the parasite-host interaction is an interesting study proposal and remains open for future investigations which may assist in the comprehension and treatment of the pathogenesis. / A esquistossomose mansônica é uma infecção parasitária crônica endêmica que ocorre em países na África, América do Sul, no Caribe e no Mediterrâneo Oriental. A principal patologia é o granuloma, uma resposta imune contra os antígenos secretados pelos ovos do parasito principalmente no fígado e intestinos. Estes antígenos estão crucialmente envolvidos na modulação das respostas imunológica celular e humoral do hospedeiro e podem estar envolvidos na estratégia de passagem do ovo através da mucosa intestinal. Este trabalho teve origem nos resultados de um experimento realizado por Candida Fagundes Teixeira do Grupo de Parasitologia Biomédica da PUCRS, cujas tentativas de se obter anticorpos do ovo que interagissem com partículas paramagnéticas, revelaram alguma dificuldade em obter níveis elevados de anticorpos contra a superfície do ovo. O objetivo principal do presente trabalho foi verificar a produção de anticorpos contra a superfície do ovo de Schistosoma mansoni. O S. mansoni, isolado Esteio, foi mantido em laboratório através de passagens em Biomphalaria glabrata e camundongos da cepa Swiss. Os vermes foram recuperados, lavados com tampão e utilizados para a produção de antígeno solúvel de membrana de vermes adultos. Os ovos foram coletados de fezes humanas infectadas e utilizados para a imunização de camundongos e produção de antígenos secretados pelo ovo (SEA). Os grupos experimentais foram divididos em 4 grupos com 6 camundongos cada, da seguinte forma: grupo 1 imunizado com solução salina 0,9%; grupo 2 imunizado com ovos sonicados e adjuvante; grupo 3 imunizado com ovos sonicados sem adjuvante e grupo 4 imunizado com ovos inteiros. Através da técnica de ELISA e imunofluorescência indireta foi verificada reatividade na imunização com ovos sonicados, e não foi verificada reatividade na imunização com ovos inteiros.A abordagem sistêmica e complexa da interação parasito-hospedeiro é uma proposta interessante de estudo e permanece aberta para futuras investigações que poderão auxiliar na compreensão e tratamento da patogenia.

Made available in DSpace on 2014-05-13T02:00:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000457790-Texto+Completo-0.pdf: 3390024 bytes, checksum: 41c896c778956a74d409b1c1d99f687a (MD5) Previous issue date: 2014 / Introduction: The present work included two originals articles about asthma, which is an airway chronic disease characterized by bronchial hiperresponssivenes and variable airway limitation. House dust mites are a major aeroallergen, responsible to trigger chronic inflammation in humans. In recent years there has been a substantial increase in the prevalence of allergic diseases around the world, with regional differences, which has raised many questions about the environmental factors that are involved in the development of allergic response, and especially protective factors in this response, particularly in relation to the effect of infections. Some authors suggest that helminth infections act as a protective factor to allergic diseases. Murine models are widely used, but there is still a need for approaches with protocols more similar to the disease in humans. Objectives: The aim of the first article was develop a experimental model of pulmonary allergic disease using a house dust mite extract produced in a research laboratory with a more simple and economic way and to evaluate their capacity to induce an inflammatory response similar to the ones of established protocols. Methods: In the first article, female adult BALB/C mice were used, exposed acutely and chronically to house dust mite extract (HDM), with group controls. In the second article, C57BL/6 e C57BL/6 TRL4-/- female mice were exposed in early life to Angiostrongylus cantonensis extract, with control groups. At the adult age, animals were submitted to asthma ovalbumin protocol. Results: In the first article, animals exposed to HDM (acute and chronic) had a significant increase in the absolute counts of eosinophils in bronchoalveolar lavage fluid when compared to the negative control (p<0. 001 and p=0. 002), and showed histological changes consistent with the disease, with increased peribronchovascular infiltrate and mucus secretion, and collagen deposition around the airway. In the second article, animals that received worm extract had a significant increase in total and eosinophil cell counts in both strains, presenting histological changes compatible with these findings, with increased cellular infiltration, goblet cell hyperplasia and increased collagen deposition in the airway. Conclusion: The non-commercial mite extract in the article 1 has shown to be effective to induce an acute and chronic allergic inflammatory response in a murine model. In the second article, the Angiostrongylus cantonensis extract when administered subcutaneously did not inhibit ovalbumin-induced pulmonary allergic disease. / Esta dissertação de Mestrado contemplou dois artigos originais sobre asma, que é uma doença crônica das vias aéreas, caracterizada por hiperresponsividade brônquica e limitação variável do fluxo aéreo. Os ácaros da poeira doméstica são um dos principais aeroalergenos responsáveis por desencadear esta doença em humanos. Nos últimos anos observou-se um crescimento substancial da prevalência de doenças alérgicas ao redor do mundo, com diferenças regionais, que tem levantado diversos questionamentos a respeito dos fatores ambientais que estão envolvidos no desenvolvimento da resposta alérgica, e principalmente nos fatores protetores dessa resposta, particularmente em relação ao efeito de infecções. Alguns autores sugerem que as infecções helmínticas funcionam como um fator de proteção a doenças alérgicas. Modelos murinos são amplamente utilizados, porém ainda existe a necessidade de aproximá-los ainda mais da realidade em humanos. O objetivo do primeiro artigo foi desenvolver um modelo experimental de doença pulmonar alérgica utilizando um extrato de ácaro da poeira doméstica produzido em laboratório de pesquisa de maneira mais simples e econômica e avaliar a sua capacidade de induzir uma resposta inflamatória semelhante à encontrada em protocolos já estabelecidos. O segundo artigo teve como objetivo avaliar o efeito protetor do extrato de Angiostrongylus cantonensis administrado por via subcutânea em animais recém desmamados num modelo de doença pulmonar alérgica induzida por ovalbumina. No primeiro artigo foram utilizadas fêmeas adultas da linhagem BALB/C, com grupos expostos agudamente e cronicamente a extrato de ácaro (HDM) e grupos controles. No segundo artigo, foram utilizados camundongos fêmeas das linhagens C57BL/6 e C57BL/6 TLR4-/-, expostos precocemente a extrato de Angiostrongylus cantonensis, com grupos controles. Na idade adulta, os animais foram submetidos ao protocolo de indução de asma pela ovalbumina. No artigo 1, os animais expostos ao extrato de ácaro (agudo e crônico) apresentaram aumento significativo na contagem de eosinófilos no lavado broncoalveolar em relação ao controle negativo (p<0,001 e p=0,002), bem como apresentaram histologia compatível à doença, com aumento de infiltrado peribroncovascular, na secreção de muco e no depósito de colágeno ao redor da via aérea. No artigo 2, os animais que receberam o extrato de verme tiveram um aumento significativo nas contagens total e de eosinófilos em ambas as linhagens, além de apresentar histologia compatível com esses achados, com aumento de infiltrado celular, hiperplasia de células caliciformes e aumento na deposição de colágeno na via aérea.O extrato de ácaro não comercial produzido no artigo 1 demonstrou ser eficaz em induzir uma resposta inflamatória alérgica aguda e crônica em modelo murino. No artigo 2, o extrato de Angiostrongylus cantonensis, quando administrado por via subcutânea, não inibiu o desenvolvimento de doença pulmonar alérgica induzida por ovalbumina.