Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neurocysticercosis (NC) caused by the Taenia solium metacestodes usually affects the central nervous system and can be confused with other brain pathologies, which present similar clinical and image findings. This parasitose is endemic in Brazil and the serological diagnosis of NC is of great importance in routine clinical management of patients. The search for alternative antigens for NC immunodiagnosis is importance because of the difficulty of obtaining parasites from naturally infected pigs for the preparation of metacestodes T. solium homologous antigen. Once that purified antigen is more sensitive and specific than crude saline extracts, the objective of this study was to evaluate the performance of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Immunoblotting (IB) for the serological diagnosis of human NC, using the crude saline extract (Crude) obtained from T. saginata metacestodes and two fractions of this extract, hydrophobic or detergent fraction (D) and hydrophilic or aqueous fraction (A), purified by extraction with Triton X-114 as alternative purified antigens for the diagnosis of human NC. Serum samples were obtained from 115 individuals: 40 patients with a definitive diagnosis of NC, 45 patients with Taenia sp. and with other parasitic diseases and 30 apparently healthy individuals. The serum samples were diluted 1:200 for ELISA but only the samples positives were diluted 1:100 and evaluated in IB. ELISA sensitivity and specificity were 95% and 73.3% when using Crude, 95% and 82.6% for D phase and 65% and 61.3% for A phase, respectively. The diagnostic efficiency and Youden index were: 83.9% and 0.74 (Crude), 88.5% and 0.80 (D phase) and 72.8 % and 0.46 (A phase), respectively. IB of the antigens confirmed the results obtained by ELISA, and the D phase antigen proved to be more specific than other extracts, showing only one immunodominant protein of 70-64 kDa that was the most frequent (92.5%) among patients with NC. Our results suggest that the D phase obtained with Triton X-114 can be used as heterologous purified antigen for the serological diagnosis of human NC in the IB. / A Neurocisticercose (NC), resultado do acometimento do sistema nervoso central pelas formas metacestódeas de Taenia solium, é uma doença polimórfica podendo ser confundida com outras síndromes neurológicas que apresentam achados clínicos e de imagem similares. Uma vez que esta parasitose é endêmica no Brasil o diagnóstico sorológico é de grande importância, pois auxilia na rotina laboratorial de pacientes com suspeita clínica. A busca por antígenos alternativos se faz necessária diante da dificuldade de obtenção de suínos naturalmente infectados com metacestódeos de T. solium, para a produção do antígeno homólogo. Uma vez que antígenos purificados apresentam sensibilidade e especificidade superiores aos extratos totais, o objetivo deste estudo foi avaliar os testes enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) e Immunoblotting (IB) no diagnóstico sorológico da NC humana utilizando o extrato salino total (S) de metacestódeos de Taenia saginata e suas frações purificadas com Triton X-114 (TX-114). Uma alíquota do extrato S foi fracionada com TX-114, para obtenção das frações antigênicas: hidrofóbica ou detergente (D) e hidrofílica ou aquosa (A). Os extratos antigênicos foram analisados em SDS-PAGE 12% e utilizados no ELISA na concentração de 10μg/mL. Foram analisadas 115 amostras de soro: 40 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC, 45 de pacientes com Taenia sp. e por outros parasitos e 30 de indivíduos saudáveis. As amostras foram diluídas a 1:200 para o ELISA, sendo apenas as positivas submetidas ao IB, na diluição de 1:100. A sensibilidade e especificidade do ELISA foram: 95% e 73,3% (S), 95% e 82,6% (D) e 65% e 61,3% (A), respectivamente. O cálculo de eficiência do diagnóstico e Youden Index foram: 83,9% e 0,74 (S); 88,5% e 0,80 (D) e 72,8 % e 0,46 (A), respectivamente. No IB a fração D apresentou com exclusividade a banda imunodominante de 70-64 kDa, sendo detectada em 92,5% dos pacientes com NC. A fração D foi significativamente mais eficiente que a fração A, tanto no ELISA quanto no IB, sendo assim, recomendada como antígeno heterólogo purificado no diagnóstico sorológico da NC humana no IB. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

This study was conducted to determine the prevalence of intestinal protozoa in elderly people coming from Institutions of Long Term Elderly (ILPI), nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers and food handlers, identifying risk factors associated with infections. Fecal specimens from 293 elderly, 63 nurses and/or nursing technicians and/or caregivers and 19 food handlers were studied. Were collected from each individual, three faecal samples collected on alternate days to obtain more reliable results. The fecal samples were divided and used to develop techniques of flotation in zinc sulfate solution to 33%, to search for Giardia duodenalis and Entamoeba histolytica/dispar, concentration by formalin-ether and staining Zieh-Nelsen, for research of Cryptosporidium spp.. Questionnaires were applied on sociodemographic characteristics, hygienic, and related to behavioral health care. The prevalence of Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. and Entamoeba histolytica/dispar in the elderly was 4.0%, 1.0% and 0.3% respectively. The nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers and food handlers were 4.8% and 5.2% positive only for Giardia duodenalis, respectively. Regarding the elderly, the origin of individuals and contact with pets were associated with Giardia duodenalis, although the latter variable was a risk factor for infection; the time of completion of the last stool examinations was related to Cryptosporidium spp.. None of the variables were related to Entamoeba histolytica/dispar. On the nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers, who often wash their hands each day was significantly associated with Giardia duodenalis. The positive for Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. and Entamoeba histolytica/dispar show that the ILPI are environments conducive to infection due to contact among the elderly, nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers and food handlers, who are often misled as to the measures of hygiene and handling food / Esse estudo foi realizado para determinar a prevalência de protozoários intestinais em gerontes procedentes das Instituições de Longa Permanência para Idosos (ILPI), de enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e manipuladores de alimentos, identificando os fatores de risco associados às infecções. Amostras fecais de 293 idosos, 63 enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e 19 manipuladores de alimentos foram estudadas. Foram coletadas, de cada indivíduo, três amostras fecais, obtidas em dias alternados para se obter maior confiabilidade dos resultados. As amostras fecais foram divididas e utilizadas para elaboração de técnicas de flutuação em solução de sulfato de zinco a 33%, para pesquisa de cistos de Giardia duodenalis e Entamoeba histolytica/dispar; concentração por formol-éter e coloração de Zieh-Nelsen, para pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp.. Foram aplicados questionários sobre as características sociodemográficas, higiênicas, comportamentais e relacionados aos cuidados com a saúde. A prevalência para Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. e Entamoeba histolytica/dispar nos idosos foi de 4,0%, 1,0% e 0,3% respectivamente. Os enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e os manipuladores de alimentos apresentaram 4,8% e 5,2% de positividade somente para Giardia duodenalis, respectivamente. Em relação aos idosos, a procedência dos indivíduos e o contato com animal doméstico associaram-se com Giardia duodenalis, sendo que a última variável foi fator de risco para infecção; e o tempo de realização do último exame coproparasitológico relacionou-se com Cryptosporidium spp.. Nenhuma das variáveis apresentou relação com Entamoeba histolytica/dispar. Sobre os enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores, a freqüência que lavavam as mãos por dia foi significativamente associada à Giardia duodenalis. A positividade para Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. e Entamoeba histolytica/dispar comprovam que as ILPI são ambientes propícios a infecção devido ao contato entre idosos, enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e manipuladores de alimentos, que são muitas vezes mal orientados quanto às medidas de higiene e manipulação de alimentos. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Universidade Federal de Uberlândia / Neonatal Intensive Care Unit is the unit in which hospital infectious problems (HI) are the most significant ones, due to high frequency of intrinsic e extrinsic risk factors. Two investigations were performed. The first of them was a retrospective study from January, 2001 to December, 2003, whose aim was to compare hospital infection rates before, during and after a unit reform; the second one was a prospective search that analyzed infection incidence and colonization respective prevalence for Staphylococcus aureus. The first study showed a significant 12.8 to 18.6 increase on hospital infection rate, after the removal to a temporary location as well a more expressive decline (p<0,001) in catheter-related bacteremia after the removal to new unit, in spite of an increased central vascular catheter utilization density (CVC) from 0.18 to 0.55 in both periods. This difference has simultaneously occurred with the substitution of vein dissection CVC insertion technique (phlebotomy) by the employment of a peripheral insertion catheter (PICC). In the second phase of the investigation, staphylococcus infections were detected by laboratorial and NNISS vigilance techniques. The detected incidence rates for hospital infection was 23/1000 patient/day. From 32 evaluated newborn, 17 were infected and 15 colonized. Sepsis was the most frequent infectious syndrome (61%) and the nose was the most colonized site (66%). Antibiotic use showed to be the only significant variable for S. aureus infection. Risk factors by univariate analysis were the following ones: antibiotics use, central vascular catheter (CVC) utilization, CVC use for more than seven days and phlebotomy insertion. This was the only significant variable by multivariate analysis. Molecular analysis of 37 samples showed a policlonality (12 genotypes), and B clone prevailed (34%) over the other ones. Clone identity was observed in all cases in which it was possible to determinate the relationship between colonizing and infecting samples. The pvl gene was detected in four colonizing samples. MSSA infection was associated to previous colonizing by pathogen, with evidence of horizontal transmission among newborn, in function of B clone prevailing as well micro-clusters occurrence in the unit. / A Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) é uma das unidades onde o problema das infecções hospitalares (IHs) é mais significativo, em função da alta freqüência de fatores de risco intrínsecos e extrínsecos. Foram realizados dois estudos, o primeiro retrospectivo (janeiro/2001 a dezembro/2003), com o objetivo de comparar as taxas de infecções hospitalares, antes, durante e após uma reforma na unidade; e o segundo prospectivo (janeiro/2004 a junho/2005), analisando a incidência de infecção e prevalência de colonização, respectivamente, por Staphylococcus aureus. O primeiro estudo evidenciou um aumento significativo de 12,8 para 18,6 na taxa de infecção hospitalar, após a mudança para a localização temporária; e um declínio ainda mais expressivo (p<0,001) na de bacteremia relacionada ao cateter após a mudança para a unidade nova, apesar do aumento na densidade de utilização de cateter vascular central (CVC) de 0,18 para 0,55 nos dois períodos. Essa diferença ocorreu simultaneamente à substituição da técnica de inserção do CVC pela dissecação de veia (flebotomia) pelo emprego do cateter de inserção periférica (PICC). Na segunda fase da investigação, os casos de infecções estafilocóccicas foram detectados pelas técnicas de vigilância NNISS e laboratorial. A taxa de incidência de infecção hospitalar detectada foi de 23/1000 pacientes/dia; dos 32 neonatos avaliados, dezessete estavam infectados e quinze colonizados. A síndrome infecciosa mais freqüente foi sepse (61%), sendo a narina o sítio mais colonizado (66 %). O uso de antibióticos foi a única variável significante para infecção por S. aureus. Os fatores de risco por análise univariada para infecção/colonização por este microrganismo foram: o uso de antibióticos, utilização de cateter vascular central (CVC), uso do CVC por mais que sete dias e sua inserção por flebotomia, sendo a última variável a única significativa pela análise multivariada. A análise molecular das 37 amostras demonstrou uma policlonalidade (doze genótipos), com o predomínio do clone B (34%), e identidade clonal foi observada em todos os casos em que foi possível determinar a relação entre amostras de colonização e de infecção; o gene pvl foi detectado em quatro amostras de colonização. A infecção por MSSA foi associada com colonização prévia pelo patógeno, com evidência de transmissão horizontal entre os neonatos em função da predominância do clone B, e da ocorrência de micro-clusters na unidade. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan that belongs to the Apicomplexa phylum and causes toxoplasmosis which is especially severe in immunocompromised individuals and who acquired the infection by congenital transmission. Dense granules are organelles involved in this parasite invasion and replication of the parasite inside the cell. Among the proteins secreted by dense granules, jointly called GRAs, the GRA 2 is particularly immunogenic. In the present work, we aim to study the role of this protein in inducing adaptive immune response by produced and characterized a monoclonal antibody against GRA2. The parasite treated with this antibody showed the lowest rate of replication in intracellular proliferation assay compared to treatment with irrelevant antibody. The epitopes of this protein that binds to the monoclonal antibody have been mapped by phage display. Through bioinformatics analysis, epitopes for B cells and T GRA2 were predicted and based on that and on the results of phage display amino acid sequences were chosen to synthesize two peptides that were tested as potential vaccine. Immunization tests were carried out in C57BL/6 mice with synthetic peptides and these animals were subsequently infected with T. gondii. There was a significant reduction in mortality in the group immunized with the mixture of both peptides. The negative control group, immunized only with BSA, showed the highest mortality and analysis of cytokine present in the sera of these animals there was a predominance of proinflammatory cytokines while antiinflammatory cytokines were shown to be almost nonexistent in the serum of these animals. Given these results, it was found that the group with higher survival showed better Th1/Th2 balance. This demonstrates that immunization with epitopes recognized by both B cells and T cells appear to be more effective. Thus, peptide mimetics GRA2 regions of the protein may be likely candidates for the development of vaccines against toxoplasmosis. / Toxoplasma gondii é um protozoário do filo Apicomplexa intracelular obrigatório causador da toxoplasmose, que é especialmente grave em indivíduos imunocomprometidos e em indivíduos que adquiriram a infecção por transmissão congênita. Grânulos densos são organelas deste parasito envolvidas no processo de invasão e replicação do parasito no interior da célula. Dentre as proteínas secretadas pelos grânulos densos, chamadas conjuntamente de GRAs, a GRA 2 é particularmente imunogênica. No presente trabalho, no sentido de estudar a participação dessa proteína na indução da resposta imune adaptativa, foi produzido e caracterizado um anticorpo monoclonal contra GRA2. O parasito tratado com esse anticorpo apresentou menor taxa de replicação em ensaio de proliferação intracelular comparado ao tratamento com anticorpo irrelevante. Os epítopos de ligação da proteína GRA2 ao anticorpo monoclonal foram mapeados por phage display. Por meio de análises de bioinformática, epítopos para células B e T da GRA2 foram preditos e com base nisso e nos resultados do phage display foram escolhidas seqüências de aminoácidos para sintetizar dois peptídeos que foram testados quanto ao potencial vacinal. Foram feitos ensaios de imunização em camundongos C57BL/6 com estes peptídeos sintéticos e os animais foram posteriormente infectados com T. gondii. Foi observada redução significativa na mortalidade no grupo imunizado com a mistura de ambos os peptídeos. O grupo controle negativo, imunizado somente com BSA, apresentou a maior mortalidade e nas análises de produção de citocinas presentes nos soros destes animais observou-se uma predominância de citocinas pró-inflamatórias enquanto as citocinas anti-inflamatórias mostraram-se quase inexistentes no soro destes animais. Tendo em vista esses resultados, percebeu-se que o grupo com maior sobrevivência apresentou melhor balanço Th1/Th2. Isso demonstra que a imunização com epítopos reconhecidos tanto por células B quanto por células T parece ser mais efetiva. Assim, peptídeos miméticos de regiões da proteína GRA2 podem ser prováveis candidatos no desenvolvimento de vacinas anti Toxoplasmose. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Nocomial bloodstream infections (BSI) are most frequent infection in neonatal intensive care units (NICU), increasing considerably the length of stay in the unit and hospital costs besides contributing to poor prognosis, manly in hospitals developing countries settings. The aims of the study were to assess the impact of a care bundle for managment of Central Venous Catheter (CVC) to reduce nosocomial bloodstream infection, and to describe the pathogenesis and molecular epidemiology of infections due to S. epidermidis in a NICU of a Brazilian university hospital. The study included newborns admitted to the unit of Clinical Hospital of Federal University of Uberlândia from October / 2010 to August / 2012. Epidemiological surveillance used to follow BSI was the \"National Healthcare Safety Network\" (NHSN), and an insertion protocol for insetion and maintenance of central venous catheter based on Center for Disease Control (CDC) guidelines was adopted in unit. For the study of the pathogenesis of these infections due to S. epidermidis, cultures of the skin in the insertion site and CVC hub, as well as the nasal and intestinal mucosa of neonates were performed from 48 hrs to 14 days using the invasive procedure, or positive hemoculture, and the tip of the CVC after its withdrawal. The study was approved by the ethics committee in research of the UFU (protocol 464/10). A total of 112 infants developed BSI (20.3%) totaling 178 episodes (32.3%), 139 (25.2%) defined as hospital acquired. Incidence rates of BSI during the sudy research were 16.1 /1000 patient-days and 23.0/1000 CVC-days, but with significant variations during the investigation period, with increasing rates (59.6 / 1000 patient-days) in January 2011 and 2012 when compared with the rates of other months (16.6/1000 patient-days; IRR 3.59; P <0.001) In addition, there was also a significant reduction in the rate of these infections during the relocation of the unit for a provisory site, with rate of 10.3/1000 patient-days vs 26.7 / 1000 patient-days in the previous monitoring period (IRR= 2.59; P=0.007). The adoption the bundle resulted in significant reduction of BSI incidence of 23.4/1000 patient-days during the pre-intervention period to 14.7 / 1000 patient-days (IRR = 1.59; P = 0.04). S. epidermidis was the most frequent etiologic agent, accounting for 38.3% of the episodes of sepsis, followed by Staphylococcus aureus (12.5%). When analyzed by molecular techniques 8 cases of BSI due S. epidermidis 50,0% were related to CVC. The contamination of hub (68.4%), and skin at the insertion site colonization (57.8%), and nasal and intestinal mucoca (73.6%) of neonates was high. All isolates of S. epidermidis of 19 newborns in the study of the pathogenesis were resistant to oxacillin and 63.1% with multidrug resistance profile. S distinct genotypic profiles of MRSE were found by a 80.0% similarity coefficient, with the presence of a dominant clone in the unit (clone A), including 77.8% of the samples, suggesting horizontal transmission through the hands of unit staff. Half of bloodstream infections by S. epidermidis analyzed by molecular techniques were indicative as acquired by intestinal translocation. It is necessary to continue these investigations using a larger population of neonates for a better definition of the origin of S. epidermidis, to enable adoption of effective measures to prevent these infection in newborns. / As infecções de corrente sanguínea de natureza hospitalar são as mais frequentes em unidades de terapia intensiva neonatal (UTIN), aumentando consideravelmente o tempo de permanência na unidade e os custos hospitalares, além de contribuírem para pior prognóstico do paciente, principalmente em hospitais de países em desenvolvimento. Os objetivos do estudo foram: avaliar o impacto de um pacote de medidas relativo aos cuidados e manutenção de Cateter Venoso Central (CVC) na redução das infecções de corrente sanguínea de origem hospitalar (ICSh), e definir a patogênese e epidemiologia molecular dessas infecções causadas por S. epidermidis em uma UTIN de um hospital universitário brasileiro. O estudo incluiu os neonatos admitidos na unidade do Hosiptal de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, durante o período de outubro/2010 a agosto/2012. A vigilância epidemiológica utilizada para busca ativa de ICSh foi a do National Healthcare Safety Network (NHSN), e um protocolo de inserção e manutenção do cateter venoso baseado nas diretrizes do Center for Disease Control (CDC) foi adotado na unidade. No estudo da patogênese das ICSh por S. epidermidis, foram realizadas culturas da pele no sítio de inserção e do canhão do CVC, assim como das mucosas nasal e intestinal dos neonatos, a partir de 48 h até 14 dias da utilização do procedimento invasivo, ou sua positivação, e da ponta do CVC após sua retirada. O trabalho obteve a aprovação do comitê de ética em pesquisa da UFU (protocolo 464/10). No total, 112 recém-nascidos desenvolveram ICS (20,3%) totalizando 178 episódios (32,3%), com 139 (25,2%) definidos como de natureza hospitalar. As taxas de incidência durante a investigação de ICSh foram de 16,1/1000 pacientes-dia e 23,0/1000 CVC-dia, com variações significativas durante o período de investigação, sendo maiores (59,6/1000 pacientes-dia) nos meses de janeiro de 2011 e 2012 quando comparadas com as taxas dos outros meses (16,6/1000 pacientes-dia, IRR:3,59; P<0,001). Adicionalmente, também houve uma redução significativa nas taxas destas infecções no período de relocação da Unidade para uma unidade provisória, com taxa de 10,3/1000 pacientes-dia vs 26,7/1000 pacientes-dia, no período anterior de vigilância (IRR=2,59; P=0,007). A adoção do protocolo de prevenção e controle dessas infecções, resultou na redução significativa da incidência de ICSh de 23,4/1000 pacientes-dia durante a pré-intervenção para 14,7/1000 pacientes-dia (IRR=1,59; P=0,04). O S. epidermidis foi o agente etiológico mais frequente, respondendo por 38,3% dos episódios de sepse, seguido pelo Staphylococcus aureus (12,5%). Na avaliação por análise molecular das amostras de 8 casos de ICSh por S. epidermidis, 50,0% foram relacionadas ao CVC e a contaminação do canhão (68,4%), colonização da pele no sítio de inserção (57,8%), e mucosas nasal e intestinal (73,6%) dos neonatos foram elevadas. Todos os isolados de S. epidermidis dos 19 neonatos incluídos no estudo da patogênese foram resistentes a oxacilina, com 63,1% mostrando perfil de multirresistência. Foram encontrados 7 perfis genotípicos distintos de MRSE, diferenciados por um coeficiente de similaridade de 80,0%, com a presença de um clone dominante na unidade (clone A), incluindo 77,8% das amostras, sugestivo de transmissão horizontal através das mãos de profissionais da unidade. Na metade das infecções de corrente sanguínea por S. epidermidis analisadas por técnica molecular, os resultados foram sugestivos de sua disseminação através da translocação da mucosa intestinal. A continuidade nessas investigações utilizando população maior de neonatos é necessária para uma melhor definição da origem de S. epidermidis, de forma a possibilitar a adoção de medidas mais efetivas na prevenção destas infecções em neonatos. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

With more than 12 million people affected worldwide, 2 million new cases occurring per year, and the rapid emergence of drug resistance and treatment failure, leishmaniasis is an infectious disease for which research on drug and vaccine development, hostpathogen, and vector-parasite interactions are current international priorities. Polyamines are important regulators of growth and differentiation in a variety of cells, including parasitic protozoa. The inhibition of parasitic biosynthesis by polyamines has been an interesting chemotherapeutic approach in the design of novel antiparasitic drugs against mainly leishmaniasis. In this work we evaluate the in vitro effect of N-dodecyl- 1,2-ethanediamine (GUT) on morphology and replication of Leishmania. A concentration of 0.31 &#956;g/ml of this compound was highly effective against Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi and no toxicity against mammalian cell lines as well HFF, THP-1, J774.G8 or murine peritoneal cells was observed. So, there was inhibition of multiplication of the L. amazonensis, L. braziliensis and L. chagasi amastigotes into inflammatory peritoneal cells in presence of 1 &#956;g/ml and 0.5 &#956;g/ml of this compound. Promastigotes form of L. amazoneneis it was with intracellular disorganization by transmission electron microscope observation following 1 to 24 h of treatment with GUT. Thus, N-dodecyl-1,2-ethanediamine shown be a promising drug against Leishmania. / Leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta mais de 12 milhões de pessoas em todo mundo. Com mais de 2 milhões de novos casos por ano e falhas no tratamento há o surgimento de resistência às drogas. Como prioridades são realizadas pesquisas relacionadas ao ciclo de vida do parasito, interação com o hospedeiro, desenvolvimento de vacinas e novas drogas. A inibição da biossíntese do parasito por poliaminas tem sido uma importante abordagem quimioterápica no desenvolvimento de novas drogas contra leishmaniose. As poliaminas são importantes reguladores do crescimento e diferenciação em vários tipos celulares incluindo protozoários. Nesse trabalho avaliamos in vitro o efeito do composto N-dodecil-1,2- etanodiamina (GUT) na susceptibilidade de diferentes espécies de Leishmania sp. A concentração de 0,31 &#956;g/ml foi altamente eficiente contra Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis e Leishmania chagasi, entretanto em diferentes células de mamíferos (THP-1, HFF, macrófagos murinos J774.G8 e macrófagos peritoneais de camundongos) a mesma citoxicidade não foi observada. A inibição nos índices de multiplicação e infecção de amastigotas de L. amazonensis, L. braziliensis e L. chagasi em macrófagos peritoneais foi observada na presença das concentrações de 1Ug/ml e 0,5Ug/ml de (GUT). Formas promastigotas de L. amazonensis mostraram diversas alterações ultraestruturais por microscopia eletrônica de transmissão causada pelo tratamento com o composto Ndodecil- 1,2- etanodiamina. O composto N-dodecil-1,2- etanodiamina mostrou ser um novo composto promissor contra a leishmaniose. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Specific polyclonal antibodies obtained from egg yolk of the immunized chicken are named immunoglobulin Y (IgY). Although functionally related to mammal immunoglobulin G (IgG), IgY presents advantages, as follows: (i) elevated purified amounts of antibodies from one egg; (ii) the reduced of immunized animal number (iii) no interference with rheumatoid factor or mammal Complement proteins; (iv) binds only to chicken specific Fc fragment receptor. Polyclonal IgY antibodies could be employed as a primary or secondary reagent to investigate pathogen and host relationship, proteomic studies or infectious microorganisms biology. Toxoplasma gondii is a worldwide intracellular parasite which infects warm-blood hosts, including human. Toxoplasmosis causes fetal disorders in human and domestic animals. Tachyzoites and bradyzoites of T. gondii are stages related to host cell parasitism and also toxoplasmosis pathogeny. The specific IgG antibodies of mice are used to investigate virulence factors associated to T. gondii and evaluate mechanisms correlated to host immune response modulation by parasite antigens. However reduced amounts of specific IgG antibodies are obtained from a bled animal. Chickens and mice could have distinct antigenic proteins recognition profile even though using identical immunization protocols, probably this a consequence of phylogenetic distance between these two species. Specific polyclonal IgY were obtained from T. gondii soluble total antigens (STAg) immunized chickens at average of 4 mg/mL of pure yolk by a low cost and easy method. High avidity anti-STAg polyclonal IgY recognized distinct weight molecular antigenic proteins at second booster, and these antibodies were applied in standardized immunoassays with T. gondii. First, tissue cysts, parasitophorus vacuoles and also extracellular tachyzoites were detected in sections of chronically infected mice brain by a IgY-immunohistochemistry assay, complementally tachyzoites also were identified in a monolayer of infected HeLa cells by a IgY-immunocytochemistry assay, both methods used a anti-IgY FITC-conjugate secondary antibody. Additionally, STAg proteins two-dimensionally resolved were proved against T. gondii purified specific IgY and mice antiserum by a Western blot assay, the results demonstrated that egg yolk chicken antibodies identified acid antigens better than mice antisera. Finally, incubation of T. gondii tachyzoites with polyclonal anti-STAg IgY reduced intracellular parasitism in HeLa cells culture. In conclusion, polyclonal anti-STAg IgY antibodies present efficacy for application in immunoassays which investigate antigenic proteins candidates to diagnostic or vaccines and T. gondii biology. / Anticorpos policlonais específicos podem ser obtidos em grandes quantidades a partir da gema do ovo de galinhas imunizadas, denominados anticorpos IgY. Embora semelhantes funcionalmente aos anticorpos IgG de mamíferos, os anticorpos IgY apresentam vantagens: (i) extração sem estresse para o animal; (ii) menor número de animais utilizados na produção; (iii) grandes concentrações de anticorpos por gema; (iii) não sofre interferência do fator reumatóide e de proteínas do sistema complemento de mamíferos; (iv) interage apenas com receptores para Fc de galinha. Os anticorpos IgY são utilizados em estudos da relação patógeno versus hospedeiro, proteômica e biologia de agentes infecciosos. Toxoplasma gondii é um parasito amplamente distribuído e com grande número de hospedeiros, incluindo o homem, e pode ocasionar lesões em fetos humanos e de animais domésticos. A relação T. gondii versus hospedeiros, o papel dos antígenos do parasito nos processos de infecção e manutenção do parasitismo intracelular, podem ser investigados pela incubação do parasito com anticorpos específicos obtidos de mamíferos. Os anticorpos de mamíferos são obtidos em concentrações limitadas e por meio de procedimentos dolorosos. Neste estudo, galinhas foram imunizadas com antígenos solúveis de T. gondii da cepa RH. Foram extraídos, em média, 4 mg de IgY/ mL de gema de ovo. Detectaram-se anticorpos IgY anti-STAg de alta avidez após o segundo booster, também reconheceram alvos antigênicos de distintos pesos moleculares. Os anticorpos IgY anti-STAg detectaram o parasito intracelular em cultivos de células HeLa e também em cortes histológicos de tecido fixado. Diferente dos anticorpos IgG de camundongos, nos ensaios Western blot 1D e 2D, os anticorpos IgY reconheceram proteínas antigênicas de pesos moleculares e pontos isoelétricos distintos, respectivamente. Em ensaio de proliferação do parasito, observou-se que a incubação dos taquizoítos de T. gondii com os anticorpos IgY específicos reduziu parcialmente o parasitismo intracelular. Concluiu-se que anticorpos IgY policlonais são ferramentas eficazes para estudos da biologia de T. gondii e podem auxiliar na pesquisa de alvos antigênicos para utilização em diagnóstico e produção de vacinas. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

A sepse é a Síndrome da Resposta Inflamatória Sistêmica decorrente de uma infecção por gram positivos/negativos, fungos ou vírus. É caracterizada por alta liberação de mediadores inflamatórios podendo levar à morte. As células B-1 são encontradas em cavidades peritoneal e pleural de camundongos e sua origem e função ainda não são completamente conhecidas. Apresentam marcadores de superfície de linhagem mielóide e linfóide e migram para focos inflamatórios comportando-se como macrófagos. Objetivo: investigar o papel da célula B-1 na resposta inflamatória após estímulo com lipopolissacáride (LPS) in vitro e in vivo. Métodos: TNF-, IL-6, IL-10 (ELISA) e nitrito (Griess) foram dosados em sobrenadante de cultura celular (106 cel./ml). As células em cultura receberam por 24h de estímulo com 10 g/mL de LPS de Escherichia coli (026:B6 Sigma®). Foram realizados os seguintes grupos cultura de célula B-1 (Balb/c), cultura de macrófagos de linhagem (RAW 264.7) coculturas (macrófagos de linhagem RAW 264.7 e células B-1 (Balb/c, C57BL/6 e C57BL/6 IL-10 -/-), e células peritoneais de camundongos Balb/c e Balb/Xid (imunodeficiente em célula B-1) A endotoxemia foi induzida com injeção de LPS 15 mg/kg (i.p.) em camundongos Balb/c e Balb/Xid. Foram quantificados, TNF-, IL-6, IL-10 e nitrito em soro, pulmão e intestino dos animais após 1,5, 4 e 6 horas após a injeção de LPS. Ensaios de inoculação de células B-1 (Balb/c) em camundongos Balb/Xid foram realizados, e curva de sobrevida foi analisada após indução de endotoxemia. Resultados: Após o estímulo com LPS, células B-1 produziram IL-10 e a presença destas células em cocultura com macrófago promoveu a diminuição na produção de TNF-, IL-6, Nitrito e aumento de IL-10. Contudo, célula B-1 (IL-10 -/-) em cocultura com macrófagos, não inibem a produção de mediadores pro inflamatórios. Análise com macrófagos peritoneais de camundongo Balb/Xid e Balb/c após estímulo com LPS em cultura mostrou reprodução do fenômeno encontrado com os experimentos com cultura de célula imortalizada, isto é, maior produção de TNF-, IL-6 e NO em Balb/Xid (B-1 deficiente). Os estudos in vivo mostraram 60% de mortalidade em camundongo Balb/Xid comparando com Balb/c (0%) após 16 horas de injeção de LPS. Nos animais Balb/Xid encontramos padrão pro inflamatório exacerbado com maiores concentrações de TNF-, IL-6 e menores concentrações de IL-10 no plasma e tecidos quando comparamos com Balb/c. Conclusões: Nossos dados mostraram que a presença de células B-1 promoveram diminuição de mediadores pro inflamatórios e aumento de IL-10 em coculturas com macrófagos e que a modulação da resposta inflamatória pode ser devida a secreção de IL-10 pela célula B-1. Este padrão de resposta pro inflamatória se repete in vivo e é a possível causadora da maior taxa de mortalidade em camundongos da linhagem Balb/Xid. / Sepsis syndrome is caused by inappropriate immune activation due to bacteria and bacterial components released during infection. This syndrome is the leading cause of death in intensive care units. Specialized B-lymphocytes located in the peritoneal and pleural cavities are known as B-1 cells. These cells produce IgM and IL-10, both of which are potent regulators of cell-mediated immunity. It has been suggested that B-1 cells modulate the systemic inflammatory response in sepsis. In this study, we conducted in vitro and in vivo experiments in order to investigate a putative role of B-1 cells in a murine model of LPS-induced sepsis. Macrophages and B-1 cells were studied in monocultures and in co-cultures. The B-1 cells produced the anti-inflammatory cytokine IL-10 in response to LPS. In the B-1 cell-macrophage co-cultures, production of proinflammatory mediators (TNF-, IL-6 and nitrite) was lower than in the macrophage monocultures, whereas that of IL-10 was higher in the co-cultures. Co-culture of B-1 IL-10/ cells and macrophages did not reduce the production of the proinflammatory mediators (TNF-, IL-6 and nitrite). After LPS injection, the mortality rate was higher among Balb/Xid mice, which are B-1 cell deficient, than among wild-type mice (65.0% vs. 0.0%). The Balb/Xid mice also presented a proinflammatory profile of TNF-, IL-6 and nitrite, as well as lower levels of IL-10. In the early phase of LPS stimulation, B-1 cells modulate the macrophage inflammatory response, and the main molecular pathway of that modulation is based on IL-10-mediated intracellular signaling.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-01T14:39:07Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-01T14:39:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-01T14:40:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T14:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2012-04-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leprosy is an infectious disease characterized by different clinical forms that are associated with the type of immune response against Mycobacterium leprae. Polymorphisms present in the first intron of IFN- may have an important role in the regulation of the immune response, which could have functional consequences for gene transcription. Later studies identified the present of five polymorphisms in the IL12RB2 promoter region, this polymorphisms will may transcriptional factor suppress IL12R2 expression affect the development of cellular immune response. In the present study we investigated a possible association of the +874 T/A SNP and IFN-, microsatellite and polymorphisms present in the IL12RB2 promoter region associated with susceptibility to leprosy or with development of clinical forms in patients from brazilian Legal Amazon states. Nucleotide sequencing was performed with samples from 118 leprosy patients and 114 controls subjects, as well as immunophenotyping of CD4 +, CD8 + and CD69 + T cells by flow cytometry. Between leprosy patients and controls subjects, as well as between PB and MB patients were no observed significant differences among the studied genotypes in the polymorphisms of IL12RB2 studies. The polymorphisms -1035, -1023 and -464 present an absolute correlation (p<0.0001) having a combination of a same genotype in this positions. The microsatellite encoding 16 CA repeats was significantly associated with PB compared to MB patients (p = 0.019), being individuals homozygous for the +874 A allele present IFN- and the mean level of CD4 + and CD69 + T cells were higher. Our data suggest that polymorphisms present in the first intron of IFN- and of the IL12RB2 promoter region are not associated with susceptibility to leprosy, nevertheless, the +874 A/A genotype and microsatellite encoding 16 CA repeats may be related to a higher cellular immune response in patients and are consistently more frequently detected in PB patients. / A hanseníase é uma doença infecciosa caracterizada por apresentar diferentes formas clínicas que estão associadas com o tipo de resposta imune ao Mycobacterium leprae. Polimorfismos genéticos presentes no primeiro íntron de IFN- podem apresentar importante papel na regulação da resposta imune, podendo resultar em consequências funcionais na transcrição do gene. Estudos anteriores identificaram a presença de cinco polimorfismos na região promotora de IL12RB2, sendo que estes polimorfismos poderiam suprimir fatores de transcrição na expressão de IL12R2, afetando o desenvolvimento da resposta imune celular. No presente estudo investigamos uma possível associação do SNP +874, do microssatélite de IFN- e de polimorfismos presentes na região promotora de IL12RB2 com a susceptibilidade à hanseníase ou com desenvolvimento das formas clínicas em pacientes dos Estados da Amazônia Legal brasileira. O sequenciamento nucleotídico foi realizado em 118 pacientes com hanseníase e 114 indivíduos controles, assim como a imunofenotipagem de células T CD4 +, CD8 + e CD69 + pela citometria de fluxo. Entre pacientes com hanseníase e indivíduos controles, assim como entre pacientes PB e MB não foram observadas diferenças significativas entre os genótipos estudados nos polimorfismos de IL12RB2. Os polimorfismos - 1035, -1023 e -464 apresentam uma correlação absoluta (p<0,0001) havendo combinação de um mesmo genótipo nas respectivas posições. O microssatélite com 16 repetições foi significativamente associado com pacientes PB quando comparado aos pacientes MB (p = 0,019). Indivíduos homozigóticos ao alelo +874 A apresentaram maiores níveis de IFN- e maior média de células T CD4 + e CD69 +. Nossos dados sugerem que polimorfismos presentes no primeiro íntron de IFN- e da região promotora de IL12RB2 não estão associados com a susceptibilidade à hanseníase. No entanto, o genótipo +874 A/A e 16 repetições de CA de IFN- podem estar relacionados à alta resposta imune celular observada nestes pacientes, sendo também mais frequentemente encontrados em pacientes PB.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-27T11:53:11Z No. of bitstreams: 2 Tese - Emerith Mayra Hungria Pinto - 2016.pdf: 2353103 bytes, checksum: b1bbe820e4f67491cf8298bcd67dc8b5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-27T11:57:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Emerith Mayra Hungria Pinto - 2016.pdf: 2353103 bytes, checksum: b1bbe820e4f67491cf8298bcd67dc8b5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-27T11:57:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Emerith Mayra Hungria Pinto - 2016.pdf: 2353103 bytes, checksum: b1bbe820e4f67491cf8298bcd67dc8b5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / This thesis concerns two immunologic issues which are relevant for leprosy control activities: laboratory diagnosis of paucibacillary leprosy/PB and evaluation of the prognostic value of Mycobacterium leprae specific serology for leprosy reactions. Immunodiagnostic laboratory tests for PB leprosy (PB) depend on cellular immunity and these tests and this study evaluated a whole blood assay/WBA prototype using antigen combinations in PB and multibacillary leprosy patients (MB) and controls from two Brazilian endemic regions (Goiânia/GO and Fortaleza/CE). The M. leprae specific cellular immunity was evaluated by WBA using heparinized tubes containing different antigen combinations: 46f+LID-1 and ML0276+LID-1; controls: PBS, PHA, MLCS-M. leprae cell sonicate, PPD. After 24 hours incubation (37°C, 5% CO₂) plasma was collected and ELISA used to detect IFNγ (QuantiFERON/Qiagen, cut-off: 50pg/mL) and CXCL10 (Sigma-Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA, cut-off: 500 pg/mL). Newly diagnosed, untreated leprosy patients (MB, n=30, PB, n=38) and controls (27 household contacts/HHC, 61 endemic controls/EC) were tested. The new platform in tube validated previous IFNγ results obtained in culture plates. Production of IFNγ to 46f+LID-1 was detected in 84% PB patients, 55% HHC; for ML0276+LID-1: 71% PB, 55% HHC. For both antigen combinations, the IFNγ response of PB leprosy patients differed from the EC (p<0.0001), however the response in PB leprosy and HHC was similar (p>0.05). Studies in tuberculosis/TB have shown that the CXCL10 response differentiate individuals with active TB from those with latent Mycobacterium tuberculosis infection. In leprosy, CXCL10 levels did not differentiate PB leprosy from HHC. Despite this limitation, our results show that WBA in tube could be a supplementary tool in assessing M. leprae infection rates and evaluating the impact of control measures. The application of leprosy serology as a predictor for the occurrence of leprosy reactions observed during clinical monitoring post treatment was evaluated by ELISA tests to detect M. leprae-specific antibodies, IgM anti PGL-I, IgG anti LID-1 and IgM and IgG anti ND-O-LID. Serum samples from 452 patients were tested and these patients participated of Clinical Trial for Uniform Multidrug Therapy Regimen for Leprosy Patients in Brazil/U-MDT/CT-B who were clinically monitored for more than six years post treatment for the development of leprosy reactions. Serological tests were performed in samples collected in untreated patients at diagnosis (baseline) and the results were analyzed taking into account the clinical outcome post treatment (reaction and reaction-free). Reactional patients (RR and ENL) had higher seropositivity rates and optical density/OD medians for PGL-I, LID-1 and ND-O-LID compared to reaction-free patients (p<0.0001). In leprosy, both the development of reactions and the serologic response are strongly influenced by the patients’ bacillary index (BI) and a positive correlation was found between both the BI and the proportion of reactional patients and the antibody levels. Negative BI group: 10% reactional patients, intermediary BI (>0<3): 50% reactional patients, high BI (>=3): 66% reactional patients. The serological results stratified according to the BI showed: in BI negative patients higher anti-PGL-I levels in RR patients compared to reaction-free ones (p=0.014); group IB> 0<3: reactional patients (RR) showed higher anti-PGL-I (p=0.014) and anti-LID-1 (p=0.035) antibody levels compared to reaction-free patients; group IB => 3: patients who developed ENL showed higher levels of anti-LID-1 antibodies (p=0.028) when compared with reaction-free ones. The accuracy of a serological test to predict the occurrence of leprosy reactions as determined by ROC curve showed that only anti-PGL-I serology provided limited value to predict RR (area-under-the-curve/AUC=0.702). The anti-PGL-I serology showed low sensitivity for RR prognosis, indicating the need to identify other plasma biomarkers for prediction of RR. In patients who developed ENL during follow-up was observed high positivity in the anti-LID-1 serology at diagnosis indicating the potential application of serology in the identification of patients at higher risk of developing ENL. / Esta tese aborda dois temas imunológicos importantes para o controle da hanseníase: diagnóstico laboratorial da hanseníase paucibacilar/ PB e valor prognóstico da sorologia específica para Mycobacterium leprae para reações hansênicas. O diagnóstico laboratorial da hanseníase PB se baseia em testes que avaliam a imunidade celular e este estudo avaliou um protótipo de ensaio de sangue total/EST com combinações antigênicas do M. leprae em pacientes multibacilares-MB e PB e controles de duas regiões endêmicas (Goiânia/GO e Fortaleza/CE). A avaliação da imunidade celular específica se baseou em EST em tubos heparinizados contendo diferentes combinações de antígenos do M. leprae: 46f+LID-1 e ML0276+LID-1; controles: PBS, PHA, MLCS-M. leprae cell sonicate, PPD. Após 24 horas de cultura (37ºC, 5% CO₂), o plasma foi coletado e ELISA utilizado para mensurar IFNγ (QuantiFERON/Qiagen, cut-off: 50pg/mL) e CXCL10 (Sigma-Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA, cut-off: 500 pg/mL). Pacientes com hanseníase, recém diagnosticados, não tratados (30 MB, 38 PB) e controles (27 contatos domiciliares/CD, 61 controles saudáveis/CS) foram avaliados. A nova plataforma de tubos foi validada demonstrando produção de IFNγ similar a obtida em placas de cultura. A produção específica de IFNγ para a combinação 46f+LID-1 foi: 84% pacientes PB, 55% CD; para ML0276+LID-1: 71% PB, 55% CD. Para ambas as combinações antigênicas a resposta de IFNγ em pacientes PB diferiu da obtida para os CS (p<0,0001), contudo foi similar em pacientes PB e CD (p>0,05). Estudos em tuberculose/TB mostraram que a produção de CXCL10 discrimina indivíduos com TB ativa daqueles com infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis. Avaliamos na hanseníase se a produção de CXCL10 é capaz de diferenciar pacientes PB/infecção ativa de CD com infecção “latente”, assintomática. Nossos resultados mostraram produção de CXCL10 induzida por combinações antigênicas do M. leprae, entretanto sem diferenciar resposta de infecção ativa em PB de infecção assintomática em CD. Apesar desta limitação, nossos resultados mostram que o EST em tubo poderia ser uma ferramenta para avaliar as taxas de infecção PB pelo M. leprae e o impacto das medidas de controle. A aplicabilidade da sorologia específica para hanseníase como ferramenta preditora de reações hansênicas foi avaliada por ELISA para detectar anticorpos para específicos do M. leprae, IgM anti PGL-I, IgG anti LID-1 e IgM e IgG anti ND-O-LID Utilizamos amostras de soro de 452 pacientes que participaram do Ensaio Clínico para Avaliação da Eficácia de um Esquema Único de Multidrogaterapia em pacientes com hanseníase no Brasil (U-MDT/ CT-BR) que foram monitorados por mais de 6 anos após o tratamento quanto ao desenvolvimento de reações. Resultados da sorologia realizada em amostras coletadas ao diagnóstico, antes do início da terapia (baseline) foram analisados segundo os desfechos clínicos (ocorrência ou não de reações hansênicas). Independente do tipo de reação (reação reversa/RR ou eritema nodoso hansênico/ENH), pacientes reacionais apresentaram maior soropositividade e medianas de D.O para PGL-I, LID-1 e ND-O-LID comparados com pacientes não reacionais (p<0,0001). Na hanseníase o desenvolvimento de reações e a soropositividade são fortemente influenciadas pelo índice bacilar (IB) do paciente. Nossos resultados corroboram este paradigma mostrando associação positiva do IB tanto com a proporção de pacientes reacionais como com os níveis de anticorpos. Grupo de pacientes com IB negativo: 10% reação, IB intermediário (IB>0<3) 50% reacionais e IB >3, 66% de pacientes reacionais. Os resultados da sorologia, estratificados de acordo com o IB mostrou no grupo com IB negativo que pacientes que desenvolveram RR apresentaram maiores níveis de anticorpos anti PGL-I comparados com pacientes não reacionais (p=0,014); Grupo com IB>0<3: pacientes reacionais (RR) apresentaram maiores níveis de anticorpos para PGL-I (p=0,014) e LID-1 (p=0,035) comparados com pacientes não reacionais; Grupo IB=>3: pacientes que desenvolveram ENH apresentaram maiores níveis de anticorpos anti LID-1 comparados com pacientes não reacionais (p=0,028). De acordo com resultados da curva ROC para avaliar a acurácia de um teste sorológico para prever o desenvolvimento de reações durante o monitoramento, a sorologia anti PGL-I apresentou limitado valor para prever o desenvolvimento futuro de RR (área sob a curva/AUC=0,702). A sorologia para LID-1 mostrou capacidade de prever o desenvolvimento de ENH (AUC= 0,85). A sorologia anti-PGL-I apresentou baixa sensibilidade para prognóstico da RR, indicando a necessidade da identificação outros biomarcadores plasmáticos para predição da RR. Já em pacientes que desenvolveram ENH durante o seguimento apresentaram alta positividade na sorologia anti LID-1 ao diagnóstico, indicando a potencial aplicação da sorologia na identificação de pacientes com maior risco de desenvolver ENH.