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ModulaÃÃo imunolÃgica preventiva aplicada ao controle de infecÃÃes bacterianas por salmonella typhimurium pelo uso de lectinas / Preventive immune modulation applied to the control of bacterial infections by Salmonella typhimurium by the use of lectinsAyrles Fernanda BrandÃo da Silva 22 April 2014 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / DoenÃas infecciosas constituem a principal causa de morte em todo o mundo. Dentre estas, as causadas por infecÃÃes bacterianas se destacam devido à diversidade de bactÃrias e à sua capacidade evolutiva e adaptativa. Respostas inflamatÃrias inadequadas estÃo associadas a essas infecÃÃes e em detrimento de avanÃos cientÃficos, o diagnÃstico precoce e o tratamento de quadros de infecÃÃes bacterianas sistÃmicas permanecem um desafio à saÃde pÃblica. Neste contexto, este estudo avaliou a capacidade da lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) e Cratylia argentea (CFL) em modular a inflamaÃÃo sistÃmica causada por Salmonella enterica sorotipo Typhimurium. As lectinas foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex G-50 e ensaios de avaliaÃÃo toxicolÃgica e seguranÃa farmacolÃgica foram realizados. Ambas as lectinas nÃo demonstraram toxicidade atà a mÃxima dose de 2000 mg/kg. EntÃo, camundongos foram inoculados, por via intraperitoneal, com as lectinas (10 mg/kg), 72, 48 e 24 horas antes de serem infectados com a Salmonella (107 UFC/mL). Foi observada uma sobrevida de 100% e 90% dos animais tratados com a ConBr e CFL, respectivamente, avaliados no sÃtimo dia. Este protocolo reduziu significativamente o nÃmero de bactÃrias no sangue, fluÃdo peritoneal e nos principais ÃrgÃos da infecÃÃo (baÃo e fÃgado). Foi observado ainda reversÃo da falÃncia na migraÃÃo de neutrÃfilos, leucopenia, bem como, reduÃÃo nos nÃveis de citocinas (TNF-α, IL-1 e IL-10) e Ãxido nÃtrico no soro. Foi tambÃm verificado um aumento na concentraÃÃo de Ãxido nÃtrico no fluido peritoneal e do nÃmero de plaquetas no sangue. AnÃlises in vitro mostraram que ambas as lectinas nÃo apresentam atividade bactericida, reduzem o tempo de ativaÃÃo do sistema complemento e aumentam o tempo de coagulaÃÃo intrÃnseca e extrÃnseca. As lectinas nÃo apresentaram efeito curativo quando administradas apÃs a infecÃÃo e nÃo demonstraram efeito preventivo quando inoculadas por via endovenosa ou oral. AtravÃs da anÃlise proteÃmica, proteÃnas relacionadas à infecÃÃo e à aÃÃo moduladora das lectinas foram identificadas. Assim, as lectinas possivelmente atuam sobre os macrÃfagos/monÃcitos, controlando sua ativaÃÃo, e desta forma, atenuando o processo inflamatÃrio e protegendo os animais do choque sÃptico. Estes resultados representam uma interessante perspectiva para o controle de infecÃÃes, com uso independente ou associado a antibiÃticos de aÃÃo direta sobre microrganismos / Infectious diseases are a leading cause of death throughout the world. Among these, bacterial infections stand out due to the enormous diversity of bacteria and their evolutionary and adaptive abilities. Inappropriate inflammatory responses have been associated with these infections and despite contemporaneous scientific approaches, timely diagnosis and proper treatment of systemic bacterial infection are still a challenge for public health. Thus, this study evaluated the ability of Canavalia brasiliensis (ConBr) and Cratylia argentea (CFL) lectin in modulating systemic inflammation caused by Salmonella enterica serovar Typhimurium. The lectins were purified by affinity chromatography on Sephadex G50. Toxicology and the pharmacological security of lectins was evaluated. Both lectins exhibited no toxicity up to 2000 mg/kg. Mice were inoculated intraperitoneally with lectins (10 mg/kg) within 72, 48 and 24 h before infection with Salmonella (107 CFU/mL). Animals treated with ConBr and CFL, respectively, showed 100% and 90% survival, seven days after infection. This protocol significantly reduced the bacteria in blood, peritoneal fluid and in main organs such as liver and spleen. It was also observed a reversal of the neutrophil migration failure, leukopenia, as well as reduction of cytokine levels (TNF- α, IL- 1 and IL -10) and nitric oxide on the serum. In addition, elevated peritoneal fluid concentration of nitric oxide and increase in the number of platelets were found. In vitro analyzes identified that both lectins did not exhibit antibacterial activity, can decrease the time of activation of complement system and increase intrinsic and extrinsic clotting time. Lectins had no curative effect when administered after infection and none protective effect when inoculated either intravenously or orally. Through proteomic analysis, proteins related to infection and to modulating action of lectins were identified. According to our results, we found that lectins can act on macrophages/monocytes, controlling their activation and thereby influencing the inflammatory process, protecting the animals from septic shock. These results represent an interesting approach for the control of infections, using lectins independently or associated with antibiotics whose action is directly on microorganisms.
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Hanseníase: pesquisa de marcadores para diagnóstico e prognóstico / Leprosy: searching for diagnosis and prognosis markersPinto, Emerith Mayra Hungria 11 November 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-11-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / This thesis concerns two immunologic issues which are relevant for leprosy control activities: laboratory diagnosis of paucibacillary leprosy/PB and evaluation of the prognostic value of Mycobacterium leprae specific serology for leprosy reactions.
Immunodiagnostic laboratory tests for PB leprosy (PB) depend on cellular immunity and these tests and this study evaluated a whole blood assay/WBA prototype using antigen combinations in PB and multibacillary leprosy patients (MB) and controls from two Brazilian endemic regions (Goiânia/GO and Fortaleza/CE). The M. leprae specific cellular immunity was evaluated by WBA using heparinized tubes containing different antigen combinations: 46f+LID-1 and ML0276+LID-1; controls: PBS, PHA, MLCS-M. leprae cell sonicate, PPD. After 24 hours incubation (37°C, 5% CO₂) plasma was collected and ELISA used to detect IFNγ (QuantiFERON/Qiagen, cut-off: 50pg/mL) and CXCL10 (Sigma-Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA, cut-off: 500 pg/mL). Newly diagnosed, untreated leprosy patients (MB, n=30, PB, n=38) and controls (27 household contacts/HHC, 61 endemic controls/EC) were tested. The new platform in tube validated previous IFNγ results obtained in culture plates. Production of IFNγ to 46f+LID-1 was detected in 84% PB patients, 55% HHC; for ML0276+LID-1: 71% PB, 55% HHC. For both antigen combinations, the IFNγ response of PB leprosy patients differed from the EC (p<0.0001), however the response in PB leprosy and HHC was similar (p>0.05). Studies in tuberculosis/TB have shown that the CXCL10 response differentiate individuals with active TB from those with latent Mycobacterium tuberculosis infection. In leprosy, CXCL10 levels did not differentiate PB leprosy from HHC. Despite this limitation, our results show that WBA in tube could be a supplementary tool in assessing M. leprae infection rates and evaluating the impact of control measures.
The application of leprosy serology as a predictor for the occurrence of leprosy reactions observed during clinical monitoring post treatment was evaluated by ELISA tests to detect M. leprae-specific antibodies, IgM anti PGL-I, IgG anti LID-1 and IgM and IgG anti ND-O-LID. Serum samples from 452 patients were tested and these patients participated of Clinical Trial for Uniform Multidrug Therapy Regimen for Leprosy Patients in Brazil/U-MDT/CT-B who were clinically monitored for more than six years post treatment for the development of leprosy reactions. Serological tests were performed in samples collected in untreated patients at diagnosis (baseline) and the results were analyzed taking into account the clinical outcome post treatment (reaction and reaction-free). Reactional patients (RR and ENL) had higher seropositivity rates and optical density/OD medians for PGL-I, LID-1 and ND-O-LID compared to reaction-free patients (p<0.0001). In leprosy, both the development of reactions and the serologic response are strongly influenced by the patients’ bacillary index (BI) and a positive correlation was found between both the BI and the proportion of reactional patients and the antibody levels. Negative BI group: 10% reactional patients, intermediary BI (>0<3): 50% reactional patients, high BI (>=3): 66% reactional patients. The serological results stratified according to the BI showed: in BI negative patients higher anti-PGL-I levels in RR patients compared to reaction-free ones (p=0.014); group IB> 0<3: reactional patients (RR) showed higher anti-PGL-I (p=0.014) and anti-LID-1 (p=0.035) antibody levels compared to reaction-free patients; group IB => 3: patients who developed ENL showed higher levels of anti-LID-1 antibodies (p=0.028) when compared with reaction-free ones. The accuracy of a serological test to predict the occurrence of leprosy reactions as determined by ROC curve showed that only anti-PGL-I serology provided limited value to predict RR (area-under-the-curve/AUC=0.702). The anti-PGL-I serology showed low sensitivity for RR prognosis, indicating the need to identify other plasma biomarkers for prediction of RR. In patients who developed ENL during follow-up was observed high positivity in the anti-LID-1 serology at diagnosis indicating the potential application of serology in the identification of patients at higher risk of developing ENL. / Esta tese aborda dois temas imunológicos importantes para o controle da hanseníase: diagnóstico laboratorial da hanseníase paucibacilar/ PB e valor prognóstico da sorologia específica para Mycobacterium leprae para reações hansênicas.
O diagnóstico laboratorial da hanseníase PB se baseia em testes que avaliam a imunidade celular e este estudo avaliou um protótipo de ensaio de sangue total/EST com combinações antigênicas do M. leprae em pacientes multibacilares-MB e PB e controles de duas regiões endêmicas (Goiânia/GO e Fortaleza/CE). A avaliação da imunidade celular específica se baseou em EST em tubos heparinizados contendo diferentes combinações de antígenos do M. leprae: 46f+LID-1 e ML0276+LID-1; controles: PBS, PHA, MLCS-M. leprae cell sonicate, PPD. Após 24 horas de cultura (37ºC, 5% CO₂), o plasma foi coletado e ELISA utilizado para mensurar IFNγ (QuantiFERON/Qiagen, cut-off: 50pg/mL) e CXCL10 (Sigma-Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA, cut-off: 500 pg/mL). Pacientes com hanseníase, recém diagnosticados, não tratados (30 MB, 38 PB) e controles (27 contatos domiciliares/CD, 61 controles saudáveis/CS) foram avaliados. A nova plataforma de tubos foi validada demonstrando produção de IFNγ similar a obtida em placas de cultura. A produção específica de IFNγ para a combinação 46f+LID-1 foi: 84% pacientes PB, 55% CD; para ML0276+LID-1: 71% PB, 55% CD. Para ambas as combinações antigênicas a resposta de IFNγ em pacientes PB diferiu da obtida para os CS (p<0,0001), contudo foi similar em pacientes PB e CD (p>0,05). Estudos em tuberculose/TB mostraram que a produção de CXCL10 discrimina indivíduos com TB ativa daqueles com infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis. Avaliamos na hanseníase se a produção de CXCL10 é capaz de diferenciar pacientes PB/infecção ativa de CD com infecção “latente”, assintomática. Nossos resultados mostraram produção de CXCL10 induzida por combinações antigênicas do M. leprae, entretanto sem diferenciar resposta de infecção ativa em PB de infecção assintomática em CD. Apesar desta limitação, nossos resultados mostram que o EST em tubo poderia ser uma ferramenta para avaliar as taxas de infecção PB pelo M. leprae e o impacto das medidas de controle.
A aplicabilidade da sorologia específica para hanseníase como ferramenta preditora de reações hansênicas foi avaliada por ELISA para detectar anticorpos para específicos do M. leprae, IgM anti PGL-I, IgG anti LID-1 e IgM e IgG anti ND-O-LID Utilizamos amostras de soro de 452 pacientes que participaram do Ensaio Clínico para Avaliação da Eficácia de um Esquema Único de Multidrogaterapia em pacientes com hanseníase no Brasil (U-MDT/ CT-BR) que foram monitorados por mais de 6 anos após o tratamento quanto ao desenvolvimento de reações. Resultados da sorologia realizada em amostras coletadas ao diagnóstico, antes do início da terapia (baseline) foram analisados segundo os desfechos clínicos (ocorrência ou não de reações hansênicas). Independente do tipo de reação (reação reversa/RR ou eritema nodoso hansênico/ENH), pacientes reacionais apresentaram maior soropositividade e medianas de D.O para PGL-I, LID-1 e ND-O-LID comparados com pacientes não reacionais (p<0,0001). Na hanseníase o desenvolvimento de reações e a soropositividade são fortemente influenciadas pelo índice bacilar (IB) do paciente. Nossos resultados corroboram este paradigma mostrando associação positiva do IB tanto com a proporção de pacientes reacionais como com os níveis de anticorpos. Grupo de pacientes com IB negativo: 10% reação, IB intermediário (IB>0<3) 50% reacionais e IB >3, 66% de pacientes reacionais. Os resultados da sorologia, estratificados de acordo com o IB mostrou no grupo com IB negativo que pacientes que desenvolveram RR apresentaram maiores níveis de anticorpos anti PGL-I comparados com pacientes não reacionais (p=0,014); Grupo com IB>0<3: pacientes reacionais (RR) apresentaram maiores níveis de anticorpos para PGL-I (p=0,014) e LID-1 (p=0,035) comparados com pacientes não reacionais; Grupo IB=>3: pacientes que desenvolveram ENH apresentaram maiores níveis de anticorpos anti LID-1 comparados com pacientes não reacionais (p=0,028). De acordo com resultados da curva ROC para avaliar a acurácia de um teste sorológico para prever o desenvolvimento de reações durante o monitoramento, a sorologia anti PGL-I apresentou limitado valor para prever o desenvolvimento futuro de RR (área sob a curva/AUC=0,702). A sorologia para LID-1 mostrou capacidade de prever o desenvolvimento de ENH (AUC= 0,85). A sorologia anti-PGL-I apresentou baixa sensibilidade para prognóstico da RR, indicando a necessidade da identificação outros biomarcadores plasmáticos para predição da RR. Já em pacientes que desenvolveram ENH durante o seguimento apresentaram alta positividade na sorologia anti LID-1 ao diagnóstico, indicando a potencial aplicação da sorologia na identificação de pacientes com maior risco de desenvolver ENH.
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Diagnóstico imunoenzimático da larva migrans visceral / Immunoenzimatic Diagnosis of the Visceral larva migransSchoenardie, Elizandra Roselaine 24 June 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005-06-24 / The Visceral Larva Migrans (VLM) is a zoonotic disease caused by the helminth
Toxocara cannis. The precocious diagnosis of this disease in humans is very
important to determinate the evolution of the clinical case and the patient's
treatment. The goal of the first experiment was determinate the presence of
antibodies anti-T. cannis in children from Pelotas through the Indirect Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay (ELISA) front to the antigen TES, as well as to
define the pattern of bands recognized by the positive serums in ELISA through
the "Western blotting . For this experiment 427 serums from children, with ages
between one to eleven yeas old was tested, those serums was adsorved with
AgSoAl and determinate that 50,6% was positive for antibodies anti-TES,
showing a significant association among the positive children for antibodies
anti-TES and the contact with dogs and cats. This association was also
observed in the children's different age groups, but not regarding the gender of
the same ones. To perform the Western Blotting , 70 serums witch give a
positive result in the Indirect ELISA was been used, all serums recognize
glicoproteic bands in the range between 30 and 120 kDa. Was observed a
diminution in the crusade reaction with AgSoAl when the adsorved and not
adsorved serums with this antigen has been test in the Western blotting ,
where a band of 30 kDa demonstrate to be an important glicoprotein to specific
diagnosis of VLM. In the second experiment, 25 mice BALB/c were inoculated
with approximately 1000 eggs containing the larvae L3. Each fifteen days blood collection was made through the reto orbital plexus until the 105 days after de
animals infection. The serums was tested in the Indirect ELISA using the
Antigen TES and urea 6M in order to discriminate recent and late infection,
through the percentile of avidity of the IgG in the different days after the
infection. A low percentile of avidity was observed to the 15 days after
inoculation (between 7,25 and 27,5%). After 60 days of infection, all the animals
presented avidity between 31,4 and 58%. This result suggests that in mice
BALB/c, to the 60 days after infection the chronic phase of VLM is already
established. / A Larva Migrans Visceral (LMV) é uma doença zoonótica que possui como
principal agente etiológico o helminto Toxocara canis. O diagnóstico precoce da
doença no homem é importante para estudos de evolução clínica e tratamento
do paciente e os inquéritos epidemiológicos para determinar a freqüência da
infecção em uma população. Por isso, o primeiro experimento teve como
objetivo, determinar a presença de anticorpos anti-T. canis em crianças da
região de Pelotas através de Enzyme linked immnosorbent assay (ELISA) com
o antígeno de excreção e secreção de larvas de Toxocara canis (TES), bem
como definir, através de Western blotting , o padrão de bandas do TES
reconhecidas pelos soros positivos ao ELISA. Foram ensaiados no ELISA
Indireto 427 soros de crianças de um a 12 anos de idade adsorvidos com
antígeno somático de Ascaris lumbricoides e determinado que 50,6%
apresentaram anticorpos anti-TES, ocorrendo uma associação significativa
entre as crianças positivas e o contato com cães e gatos. Esta associação
também foi observada em diferentes faixas etárias das crianças, mas não com
relação ao sexo das mesmas. Setenta soros positivos no ELISA foram
ensaiados no Western blotting e todos reconheceram frações proteicas entre
30 e 120 kDa. Uma diminuição da reação cruzada com o AgSoAl foi observada
quando soros adsorvidos com este antígeno foram testados no Western
blotting , sendo que uma fração antigênica de 30 kDa apresentou-se como uma
proteína importante para o diagnóstico específico da LMV. No segundo
experimento, 25 camundongos BALB/c foram inoculados com aproximadamente 1000 ovos contendo a larva infectante (L3). Colheitas
quinzenais de sangue foram realizadas através do plexo retro orbital até os 105
dias pós-infecção dos animais. Os soros foram ensaiados no ELISA Indireto
utilizando o antígeno TES e a uréia 6M a fim de discriminar infecção recente e
tardia, através do percentual de avidez da IgG nos diferentes dias após a
infecção. Um baixo percentual de avidez, característico da infecção aguda, foi
observado aos 15 dias pós-inoculação (entre 7,3 e 27,5%). Após 60 dias de
infecção, todos os animais apresentaram avidez entre 31,4 e 58%. Através
destes resultados, sugere-se que em camundongos BALB/c, aos 60 dias pós-infecção
a fase crônica da LMV já está estabelecida.
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Efeito adjuvante e potencial imunoestimulador das lectinas de Artocarpus integrifolia (KM+ e Jacalina) e Synadenium carinatum (ScLL) na imunização de camundongos contra Neospora caninumCardoso, Mariana de Resende Damas 25 February 2011 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Lectins are proteins that bind specifically to carbohydrates and have important role in
modulation of the immune response. KM+ and Jacalin (JAC) are lectins from the seeds from
jackfruit (Artocarpus integrifolia) and ScLL is a lectin from the Synadenium carinatum latex.
Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes neuromuscular disease in dogs and
reproductive disorders in cattle, with serious economic impact on the livestock industry. The
immunestimulatory role of plant lectins has been investigated in several parasitic infections, but
not in neosporosis. This study aimed to evaluate the adjuvant effect and the immunestimulatory
potential of KM+, JAC and ScLL in immunization of mice against neosporosis. C57BL 6 mouse
groups were subcutaneously immunized three times at 15-day intervals with Neospora lysate
antigen (NLA) associated with lectins (NLA+KM, NLA+JAC and NLA+ScLL groups), NLA
alone, lectins alone (KM, JAC and ScLL groups), and PBS group (infection control). Animals
were challenged with Nc-1 isolate (2x107 tachyzoites) and evaluated for morbidity, mortality,
specific antibody response, cytokine production by spleen cells, cerebral parasite burden and
histopathological lesions. Serological assays demonstrated higher levels of IgG to N. caninum
for NLA+KM and NLA+ScLL than NLA+JAC and NLA groups. NLA+KM group induced
higher levels of IgG2a isotype whereas NLA+ScLL induced higher levels of IgG1 isotype. In all
groups, IgG1 response was higher than IgG2a response before and after challenge, but the
IgG2a/IgG1 ratio increased after challenge in NLA+KM, NLA+ScLL and KM groups. Cytokine
production after in vitro antigenic stimulation showed that NLA+KM induced high levels of
IFN-g and IL-10, presenting the highest IFN-g/IL-10 ratio, followed by NLA+ScLL group,
indicating a pattern of immune response toward Th1 type. NLA+JAC induced low levels of
these cytokines and the lowest IFN-g/IL-10 ratio in relation to other groups, indicating a profile
of Th2 type immune response. After parasite challenge, NLA+KM mice showed the highest
survival with low brain parasite burden and moderate tissue inflammation, whereas NLA+ScLL
mice presented intermediate survival with low brain parasite burden and low scores of
morbidity and inflammation. NLA+JAC group exhibited intermediate survival, but with the
highest brain parasite burden and mild inflammation. In conclusion, KM+ and ScLL lectins
showed suitable adjuvant effect by increasing NLA immunogenicity and immunostimulatory
role by conferring partial protection of mice immunized and challenged with lethal dose of N.
caninum, while the JAC lectin showed no adequate adjuvant effect in the immunization against
neosporosis. / Lectinas são proteínas que se ligam especificamente a carboidratos e possuem
importantes papéis na modulação da resposta imune. KM+ e Jacalina (JAC) são lectinas da
semente da jaca (Artocarpus integrifolia) e ScLL é uma lectina do látex da planta Synadenium
carinatum. Neospora caninum é um parasito do filo Apicomplexa que causa doença
neuromuscular em cães e desordens reprodutivas em bovinos, causando sério impacto
econômico na indústria agropecuária. O papel imunoestimulador de lectinas de plantas tem sido
investigado em diversas infecções parasitárias, mas não na neosporose. Esse estudo teve como
objetivo avaliar o efeito adjuvante e o potencial imunoestimulador de KM+, JAC e ScLL na
imunização de camundongos contra a neosporose. Grupos de camundongos C57BL/6 foram
imunizados subcutaneamente por três vezes, em intervalos de quinze dias, com o antígeno de
lisado total de Neospora (NLA) associado com as lectinas (grupos NLA+KM, NLA+JAC,
NLA+ScLL), NLA somente, lectinas somente (KM, JAC e ScLL), além do grupo PBS (controle
da infecção). Os animais foram desafiados com isolado Nc-1 (2x107 taquizoítas) e avaliados
quanto aos escores de morbidade, mortalidade, resposta imune humoral específica, produção de
citocinas por células do baço, carga parasitária cerebral e lesões histopatológicas. Resultados
sorológicos demonstraram maiores níveis de IgG anti N. caninum produzidos pelos animais dos
grupos NLA+KM e NLA+ScLL que NLA+JAC e NLA somente. O grupo NLA+KM induziu
maiores níveis do isotipo IgG2a, enquanto NLA+ScLL induziu maiores níveis do isotipo IgG1.
Em todos os grupos, a resposta de IgG1 foi maior do que de IgG2a antes e após o desafio,
porém a razão IgG2a/IgG1 aumentou após o desafio nos grupos NLA+KM, NLA+ScLL e KM.
A produção de citocinas após o estímulo antigênico in vitro demonstrou que NLA+KM induziu
altos níveis de IFN-g e IL-10, apresentando a maior razão IFN-g/IL-10, seguido pelo grupo
NLA+ScLL, indicando um padrão de resposta imune direcionado ao perfil Th1. NLA+JAC
induziu baixos níveis destas citocinas e menor razão IFN-g/IL-10 em relação aos demais grupos,
indicando um padrão de resposta imune do tipo Th2. Após o desafio com o parasito,
camundongos do grupo NLA+KM apresentaram a maior sobrevida com baixa carga parasitária
cerebral e moderada inflamação tecidual, enquanto animais imunizados com NLA+ScLL
apresentaram sobrevida intermediária com baixa carga parasitária cerebral e baixos escores de
morbidade e inflamação. O grupo NLA+JAC exibiu sobrevida intermediária, mas com alta
carga parasitária cerebral e suave inflamação. Em conclusão, as lectinas KM+ e ScLL mostraram
ser adjuvantes satisfatórios por aumentar a imunogenicidade do NLA e apresentaram efeito
imunoestimulador por conferir proteção parcial dos camundongos imunizados e desafiados com
dose letal de N. caninum, enquanto a lectina Jacalina não produziu efeito adjuvante suficiente
na imunização contra a neosporose. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Caracterização genética dos hantavírus em roedores sigmodontíneos e humanos em área endêmica de síndrome cardiopulmonar por hantavírus no estado de Minas GeraisLimongi, Jean Ezequiel 06 May 2013 (has links)
The hantaviruses are among the most important zoonotic pathogens of humans, especially due
to high fatality, those associated with Hantavirus Pulmonary Syndrome (HPS). In Brazil,
more than 1600 cases of HPS have been confirmed since 1993, with a fatality rate of 40%.
The viral genotypes associated with HPS in humans, as well as those present in wild rodents
were investigated in an endemic area of the state of Minas Gerais in this study. Furthermore,
the seroprevalence for hantaviruses, the karyotyping of rodent species captured and the
population dynamics of these animals on the Cerrado vegetation types were also evaluated in
an ecoepidemiological approach. The ELISA and / or RT-PCR were used to test sera from
human cases of SPH and wild rodents and rodent lung fragments. In our study, six patients
were evaluated, of these six (100%) were seroreactive in ELISA in six (100%) was possible to
amplify viral genetic material and in five (83.3%) was possible sequencing. Were observed in
all the viral genotype Araraquara (ARAV), but with the formation of two well-defined
clusters. The case fatality rate was 50%. Regarding rodents, 258 specimens were captured.
Nine taxa were identified to species level and seven in genus level, all belonging to the
subfamily Sigmodontinae. Necromys lasiurus was the most abundant (70.2). We observed a
greater diversity of rodents in a fitofisionomy called semi-deciduous dry forest (07 taxa in
species level and four in genus level). The winter dry season was associated with the highest
capture success (p <0.0001). There was a higher prevalence of pregnancy during the rainy
season (p <0.0001). There was a prevalence of IgG antibodies against hantavirus of 1.6%, all
specimens of N. lasiurus. Among the four seroreactive rodents, three (75%) was possible to
amplify viral genetic material and two (50%) was possible sequencing. Only ARAV viral
genotype was observed. Samples of rodents had higher phylogenetic identity with the
genotype sequenced of the human sample of Uberlândia, Minas Gerais, where the rodents
were also captured. Samples identified with ARAV analyzed in this study were distributed at
a distance of approximately 400 kilometers. Despite the geographical distance, we observed a
high phylogenetic identity between two samples 384 km distant from each other. The
environmental and demographic changes that have occurred in recent decades in the study
area affected the ecology of wild rodents and facilitated the occurrence of hantavirus
infections in humans and the emergence of HPS in this region, mainly ARAV transmitted by
N. lasiurus. The observation in this study only the genotype ARAV in specimens of N.
lasiurus and humans, does not exclude the possibility of co-circulation of other viral
genotypes in this area, beyond the possibility of the existence of other reservoirs of
hantaviruses, including non-rodents. / Os hantavírus estão entre os patógenos zoonóticos mais importantes para o homem,
especialmente devido a alta letalidade, daqueles associados à Síndrome Pulmonar por
hantavírus (SPH). No Brasil, mais de 1600 casos de SPH foram confirmados desde 1993, com
uma taxa de letalidade de 40%. Os genótipos virais associados à SPH em humanos, bem
como os presentes nos roedores silvestres foram investigados em uma área endêmica do
estado de Minas Gerais neste estudo. Além disso, a soroprevalência para hantavírus, a
cariotipagem das espécies de roedores capturadas e a dinâmica populacional destes animais
nas fitofisionomias do Cerrado também foram avaliadas em uma abordagem
ecoepidemiológica. O ELISA e/ou o RT-PCR foram utilizados para testar amostras de soro de
casos humanos suspeitos de SPH e de roedores silvestres e fragmentos de pulmão de
roedores. Em nossa casuística, seis pacientes foram avaliados, destes (100%) foram
sororreativos no ELISA, e em seis (100%) foi possível amplificar material genético viral e em
cinco (83,3%) foi possível o sequenciamento. Em todos foram observados o genótipo viral
Araraquara (ARAV), porém com a formação de dois clusters bem definidos. A taxa de
letalidade dos casos foi de 50%. Em relação aos roedores, 258 espécimes foram capturados.
Nove táxons foram identificados a nível específico e sete a nível genérico, todos pertencentes
à subfamília Sigmodontinae. Necromys lasiurus foi a espécie mais capturada (70,2). Foi
observada maior diversidade de roedores na fitofisionomia Mata seca semidecídua (07 táxons
a nível específico e quatro a nível genérico), A estação inverno seco esteve relacionada com o
maior sucesso de captura (p < 0,0001). Houve maior prevalência de prenhez durante a estação
chuvosa (p<0,0001). Observou-se uma prevalência de anticorpos IgG contra hantavírus de
1,6%, todos espécimes de N. lasiurus. Dentre os quatro roedores sororreativos, em três (75%)
foi possível amplificar material genético viral e em dois (50%) foi possível o sequenciamento.
Somente o genótipo viral ARAV foi observado. Estes tiveram maior identidade filogenética
com o genótipo viral sequenciado de uma amostra humana do município de Uberlândia-MG,
local onde também os roedores foram capturados. As amostras identificadas com ARAV
analisados no presente estudo foram distribuídas a uma distância de aproximadamente 400
quilômetros. Apesar da distância geográfica, observamos uma alta identidade filogenética
entre duas amostras distantes 384 km entre si. As alterações ambientais e demográficas
ocorridas nas últimas décadas na área de estudo afetou a ecologia dos roedores silvestres e
facilitou a ocorrência de infecções humanas por hantavírus e a emergência da SPH nesta
região, principalmente por ARAV transmitido por N. lasiurus. A observação neste estudo
apenas do genótipo ARAV em espécimes de N. lasiurus e humanos, não exclui a
possibilidade de cocirculação de outros genótipos virais nesta área, além da possibilidade da
existência de outros reservatórios de hantavírus, inclusive não roedores. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Estudo epidemiológico molecular da resistência a carbapenêmicos e fluorquinolonas e sua associação com sistema de secreção tipo III em Pseudomonas aeruginosaFerreira, Melina Lorraine 29 August 2014 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Introduction: Has been observed the global spread of different variants of P. aeruginosa that is often associated with increased virulence or the emergence of new antimicrobial resistance genotypes. There are few studies describing the association of the Type III Secretion System (TTSS) with antibiotic resistance and outcome of patients with pneumonia and bacteremia. Objectives: Determine the relation among resistance to carbapenems and fluoroquinolones and the Type III Secretion System (TTSS) effector genotype and its association with the poor prognostic in patients with ventilator-associated pneumonia (VAP) and bacteremia, identify mutations in the Quinolone Resistance Determining Regions (QRDRs), Metallo-β-Lactamase genes (MβL), virulence genes (algD, lasB e toxA) and clonal spread of isolates producing MβL. Material and Methods: A retrospective cohort was conducted to determine the risk factors for 30-day mortality in patients with the first episode of bacteremia (157 patients) and VAP (60 patients) caused by P. aeruginosa. Genes blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM and blaSPM, TTSS genes (exoT, exoS, exoY, exoU ) and virulence genes (lasB, algD, toxA) were detected by PCR; the sequencing was conducted for QRDR genes (gyrA e parC) on fluoroquinolone-resistant strains and the Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) for molecular typing of positive strains for the MβL genes Results: The multivariate analysis showed that predictors independently associated with death in patients with bacteremia were inappropriate therapy and cancer. Carbapenem resistance was more frequent among strains of VAP (53.3%), however with the detection of MβL genes in one isolate (blaIMP), unlike blood, where the frequency of these genes was 16.1%, being 10.7% blaSPM genotype and 5.4% blaVIM genotype. The exoS gene was found in all blood and lung isolates and the exoU gene only in 9.4%. Substitution of threonine to isoleucine at position 83 in gyrA was the most frequent mutation among fluoroquinolone-resistant strains. It was detected a mutation at position 91 in parC gene (Glu91Lys) associated with mutation in gyrA (Thre83Ile) in a strain of extensively drug-resistant P. aeruginosa, exoT+exoS+exoU+ genotype, isolate from lung, not described in Brazil yet. Among the strains that harboring the TTSS virulence genes it was observed high resistance to gentamicin (93.7%) and low for amikacin (37.5%). The evaluation of the clonal relationship between isolates producing blaSPM, blaVIM and blaIMP genes showed similarity (more than 80%) among the blaSPM strains, which was not observed for those producing blaVIM gene. Conclusions: Our results confirm previous findings regarding the spread of blaSPM clone, with indirect evidence of its cross-spread in our hospital and polyclonal those containing the blaVIM gene. Inappropriate therapy is significant factor for poor prognosis among patients with bacteremia caused by multidrug-resistant P. aeruginosa , independent of the virulence TTSS genotype associated. / Introdução: Vem sendo observado a disseminação global de diferentes variantes de P. aeruginosa que está frequentemente associada a maior virulência ou a emergência de novos genótipos de resistência aos antimicrobianos. Há poucos estudos descrevendo a associação do Sistema de Secreção Tipo III (TTSS) com resistência aos antibióticos e evolução dos pacientes com pneumonia e bacteremia. Objetivos: Determinar a relação entre resistência a fluorquinolonas e carbapenêmicos e a virulência de Pseudomonas aeruginosa pelo Sistema de Secreção Tipo III e sua associação com pior prognóstico em pacientes com Pneumonia Associada a Ventilação Mecânica (PAV) e bacteremia, identificar mutações na Região Determinante de Resistência as Quinolonas (QRDR), genes para Metalo-β-Lactamase (MβL), genes de virulência (algD, lasB e toxA) e disseminação clonal das amostras produtoras de MβL. Material e Métodos: Foi realizada uma coorte retrospectiva para determinar os fatores de risco para mortalidade em 30 dias em pacientes com primeiro episódio de bacteremia (157 pacientes) e PAV (60 pacientes) por P. aeruginosa. Os genes blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM e blaSPM, os genes do TTSS (exoT, exoS, exoY, exoU ) e os genes de virulência (lasB, algD, toxA) foram detectados por PCR; o sequenciamento foi realizado para os genes do QRDR (gyrA e parC) nas cepas resistentes a fluorquinolonas e o Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) para tipagem molecular das amostras positivas para o gene produtor de MβL. Resultados: A análise multivariada mostrou que os preditores independentemente associados com mortalidade nos pacientes com bacteremia foram terapia antimicrobiana inapropriada e câncer. A resistência aos carbapenêmicos foi maior entre as amostras de PAV (53,3%), porém com a detecção dos genes que codificam MβL em apenas um isolado (blaIMP), ao contrário do sangue, onde a frequência desses genes foi de 16,1%, sendo 10,7% blaSPM e 5,4% blaVIM. O gene exoS foi encontrado em todas as amostras avaliadas de sangue e pulmão e o gene exoU em apenas 9,4% das mesmas. A substituição de uma treonina por isoleucina na posição 83 no gene gyrA foi a mais frequente entre as cepas resistentes a fluorquinolonas. Foi detectada uma mutação na posição 91 no gene parC (Glu91Lys) associada com a mutação em gyrA (Thre83Ile) em uma amostra de P. aeruginosa ,isolada do pulmão, extensivamente resistente, do genótipo exoT+exoS+exoU+ , ainda não descrita no Brasil. Entre as amostras que carreavam os genes de virulência TTSS observou-se alta resistência a gentamicina (93,7%) e baixa para amicacina (37,5%). A avaliação da relação clonal entre as amostras contendo os genes blaSPM, blaVIM e blaIMP , apresentou alta similaridade (maior que 80%), naquelas contendo blaSPM, o que não foi observado para as amostras contendo o gene blaVIM. Conclusões: Nossos resultados confirmam achados prévios com relação a disseminação do clone blaSPM, com evidências indiretas da sua disseminação cruzada no nosso hospital e policlonal daquelas contendo o gene blaVIM. A terapia inapropriada é fator significativo para pior prognóstico entre os pacientes com bacteremia por P. aeruginosa multirresistente, independente do genótipo de virulência TTSS associado. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Seleção e aplicação de peptídeos recombinantes e sintéticos obtidos por Phage display no imunodiagnóstico da estrongiloidíase humana / Selection and application of recombinant and synthetic peptides obtained by phage display in the immunodiagnosis of human strongyloidiasisFeliciano, Nágilla Daliane 17 January 2014 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Human strongyloidiasis is an important intestinal parasitic infection worldwide, 50% of infected individuals are asymptomatic, however it can cause hyper infection and dissemination in immunocompromised hosts leading to death. Early detection of the disease prevents the development of hyper infection and dissemination syndromes, so the use of an efficient diagnostic tool has great importance to identify and control this parasitic disease. Due to the lack of efficiency in parasitological and serological tests currently available to detect human strongyloidiasis it is necessary to improve immunodiagnostic tests using recombinant and synthetic antigens once there are limitations to obtain and use homologous antigens produced from the parasite. The aim of this study was to select using phage display technology Strongyloides stercoralis mimetic peptides ligands to immunoglobulin G from patients with strongyloidiasis. The PhDTM-C7C library was used in the selection process and the DNA of the selected clones was extracted, sequenced and analyzed using bioinformatics tools. ELISA tests were done by using five distinct phage clones, which presented significant similarity with proteins from S. stercoralis, and the two synthetic peptides corresponding to the sequences displayed on two phage clones. Binding specificity of each phage clone to the pool of sera from patients with strongyloidiasis was analyzed by competitive ELISA. Sensitivity, specificity, diagnostic efficiency, area under curve and likelihood ratio were calculated for each antigen. All phage clones presented high diagnostic potential achieving area under curves higher than 0.8, the C9 clone presented reasonable sensitivity (87.5%), specificity (80%) and diagnostic efficiency (82.5%).Synthetic peptides C10 and D3 showed superior diagnostic performance, with areas under the curve greater than 0.9 and excellent sensitivity (95%, 95%), specificity (86.3%, 92.5%) and diagnostic efficiency (89 2%, 93.3%) respectively. It was concluded that the selected peptides by Phage display can mimic S. stercoralis epitopes and represent promising alternative to the currently available antigens for human strongyloidiasis diagnosis. / Estrongiloidiase humana é uma importante parasitose intestinal em todo mundo, 50% das pessoas infectadas são assintomáticas, entretanto pode haver hiperinfecção e disseminação em pacientes imunocomprometidos, levando à morte. A detecção precoce da doença previne o desenvolvimento das síndromes de hiperinfecção e disseminação, assim, o uso de uma ferramenta diagnóstica eficiente é de grande importância para identificar e controlar esta parasitose. Devido à falta de eficiência nos testes parasitológicos e sorológicos disponíveis atualmente para detectar estrongiloidiase humana é necessário aprimorar os testes imunodiagnósticos utilizando antígenos recombinantes e sintéticos, uma vez que há limitações para obter e utilizar antígenos homólogos, produzidos a partir do parasito. O objetivo deste trabalho foi selecionar por Phage display peptídeos miméticos a Strongyloides stercoralis ligantes a imunoglobulinas G de pacientes com estrongiloidiase. Uma biblioteca PhDTM-C7C foi utilizada no processo de seleção e o DNA dos clones selecionados foi extraído, sequenciado e analisado por ferramentas de bioinformática. Os testes ELISA foram feitos utilizando cinco clones de fagos distintos, os quais tiveram similaridades significantes com proteínas de S. stercoralis, e dois peptídeos sintéticos correspondentes às sequências expressas por dois clones selecionados. A especificidade de ligação de cada clone de fago ao pool de soros de pacientes com estrongiloidiase foi analisada por ELISA de competição. Sensibilidade, especificidade, eficiência diagnóstica, áreas sob a curva e razão de verossimilhança foram calculados para cada antígeno. Todos os clones de fagos analisados apresentaram alto potencial diagnóstico alcançando área sob a curva maiores que 0,8, se destacando o clone C9 com razoável sensibilidade (87,5%), especificidade (80%) e eficiência de diagnóstica (82,5%). Os peptídeos sintéticos C10 e D3 apresentaram desempenho diagnóstico superior, com áreas sob a curva maiores que 0,9 e excelente sensibilidade (95%, 95%), especificidade (86,3%, 92,5%) e eficiência de diagnóstica (89,2%, 93,3%) respectivamente. Concluiu-se que os peptídeos selecionados por Phage display podem mimetizar epitopos de S. stercoralis e representam alternativa promissora aos antígenos atualmente disponíveis para utilização no diagnóstico da estrongiloidiase humana. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Efeito da infusão de Artemisia annua cultivada em solo com aplicação de silicato de cálcio e magnésio sobre o controle de Toxoplasma gondii in vitroRostkowska, Cristina 24 August 2012 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Toxoplasmosis is an important zoonotic disease due to ability of its causal agent,
Toxoplasma gondii, to infect large number of vertebrates and to be associated with congenital
infection or opportunistic disease in immunosuppressed patients. As the traditional treatment
has shown adverse effects, low-toxicity compounds including artemisinin and its derivatives
have been researched, as well Artemisina annua tea infusion. The use of silicon in the soil of
A. annua crops and its role on artemisinin content has not been studied yet. This study aimed
to investigate the effects of silicon on A. annua plant physiology and the role of the tea
infusion obtained from these plants in the control of T. gondii infection in cell culture. The
experimental design was a completely randomized design (CRD), in which A. annua was
planted in the soil with five different doses of calcium/magnesium silicate (0, 200, 400, 800
and 1600 kg ha-1) and five replications, and maintained in a greenhouse. Analysis of foliar
macronutrients showed a significant increase only for nitrogen, in the presence of the highest
dose of silicate in the soil. The foliar micronutrient and Si concentrations as well the plant
height were not significantly changed with any silicate doses in the soil. The use of 400 kg
ha-1 of silicate induced the highest total glandular trichome area that was also associated with
the intact glandular trichomes, as observed by scanning electron microscopy, and with the
highest artemisinin content in plant leaves and tea infusion, as determined by thin layer
chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC), respectively.
HeLa cell treatments along with or after T. gondii infection, with infusion of A. annua grown
in the soil without or with silicate (400 kg ha-1), induced a decrease of parasite proliferation in
a dose-dependent manner, as also seen for cell treatment with pure artemisinin. In conclusion,
the use of silicon had positive effect on the glandular trichome areas and artemisinin contents,
but this outcome was not associated with a better efficacy of A. annua tea infusion on T.
gondii replication. These findings suggest that other components rather than artemisinin could
be contributing to this effect, such as flavonoids present in its leaves, which may act in
synergism with the artemisinin and improve its efficacy. / A toxoplasmose é uma zoonose importante devido à capacidade de seu agente causal,
Toxoplasma gondii, de infectar um grande número de vertebrados e ser associada com
infecção congênita ou doença oportunista em pacientes imunocomprometidos. O tratamento
tradicional mostra efeitos adversos levando à pesquisa de compostos de baixa toxicidade
como a artemisinina, seus derivados e a infusão da planta Artemisia annua. A utilização de
silício no solo de culturas de A. annua e seu papel no conteúdo de artemisinina ainda não
foram estudados. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do silício sobre a fisiologia
da planta A. annua e o papel da infusão destas plantas sobre o controle da infecção de T.
gondii em cultura celular. Foi utilizado o delineamento inteiramente ao acaso (DIC), no qual
A. annua foi plantada em solo com aplicação de cinco diferentes dosagens de silicato de
cálcio/magnésio (0, 200, 400, 800 e 1600 kg ha-1), em cinco repetições e mantida em casa de
vegetação. A análise de macronutrientes foliares mostrou um aumento significativo apenas
para o nitrogênio, na presença da maior dosagem de silicato no solo. As quantidades de
micronutrientes e silício foliares bem como a altura da planta não foram significativamente
alteradas em quaisquer dosagens de silicato no solo. A aplicação de 400 kg ha-1 de silicato
induziu a maior área de tricomas glandulares totais que foi associada com os tricomas
glandulares intactos, como observado por microscopia eletrônica de varredura, e com o mais
alto conteúdo de artemisinina nas folhas e na infusão da planta, como determinado por
cromatografia em camada fina (TLC) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC),
respectivamente. Os tratamentos de células HeLa, simultaneamente ou após a infecção por T.
gondii, com infusão de A. annua cultivada sem ou com silicato (400 kg ha-1) aplicado ao solo,
induziram decréscimo dependente da dose na proliferação parasitária, como também
verificado para o tratamento das células com artemisinina pura. Em conclusão, o uso de silício
teve efeito positivo sobre as áreas de tricomas glandulares e seu conteúdo de artemisinina,
mas este resultado não foi associado com melhor eficácia da infusão de A. annua sobre a
replicação intracelular de T. gondii. Estes resultados sugerem que outros componentes além
da artemisinina poderiam contribuir para este efeito, como os flavonóides presentes nas folhas
de A. annua que podem atuar em sinergismo com a artemisinina e melhorar a sua eficácia. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Administração oral das bactérias probióticas Lactobacillus spp. controla a translocação bacteriana e reduz a ileíte experimental induzida por Toxoplasma gondii em camundongos C57BL/6Sousa, Romulo Oliveira de 27 May 2013 (has links)
Toxoplasma gondii infection in susceptible C57BL/6 mice induces a strong Th1 immune response causing intense inflammation and lesions in ileum in response to microbial antigens and if controlled causes death of animals. The Th1 immune response is similar to that in patients with inflammatory bowel disease (IBD) such as Crohn\'s disease (CD) and ulcerative colitis (UC). Therefore find alternative treatments that have adjuvant effect of conventional treatments are of great interest. The use of probiotics is increasing due to several benefits found in inflammatory diseases. To verify the effects of probiotics Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus acidophilus and Lactococcus lactis NCDO 2118 in C57BL/6 mice, we treat one day before and 7 days after oral infection with 30 cysts of the ME-49 strain. We found that L. casei- and L. acidophilus-treatment mice decreased intestinal parasitism reducing the pathology in small intestine of C57BL/6 mice and prevent death. In addition, the microbiological culture of organs shows L. casei- and L. acidophilus-treatment mice prevent bacterial translocation from the intestinal lumen to organs such as liver, spleen, lung and blood, moreover the microbiological analysis of feces showed that there were fewer gram negative bacteria species in feces of probiotic treated mice.
The NAG, MPO and EPO assay that are characteristic of macrophages, and eosinophils neutrophils respectively showed that there was a decrease in the activity of enzymes MPO and NAG and a small increase in activity and EPO. Finally, the qPCR analysis revealed that treatment with L. acidophilus decreased IFN-γ and TNF-α mRNA induced by infection with T. gondii and L.casei treatment increased the expression of Foxp3 and IL-10. Our results demonstrate the ability of probiotics to control the inflammation response and reduce mortality caused by ileitis.
However, further studies are needed to find out what the precise mechanisms that probiotics L. casei and L. acidophilus modulate the host immune response. / A infecção por Toxoplasma gondii em camundongos susceptíveis C57BL/6 com 30 cistos da cepa ME-49 induz uma forte resposta do sistema imune do tipo Th1 causando uma intensa inflamação com lesão no íleo em resposta a antígenos da microbiota e se não for controlada causa a morte dos animais. Essa resposta é semelhante à encontrada em pacientes com doenças inflamatórias intestinais (IBD) como a doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC). Portanto encontrar tratamentos alternativos que tenham efeito adjuvante aos tratamentos convencionais é de grande interesse. O uso de probióticos em produtos fermentados vem aumentando devido aos vários benefícios encontrados em pacientes com doenças inflamatórias que utilizam esses produtos. Com o objetivo de investigar o efeito da administração dos probióticos Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus acidophilus e Lactococcus lactis NCDO 2118 no intestino delgado, tratamos camundongos C57BL/6 um dia antes e 7 dias depois da infecção oral com 30 cistos da cepa ME-49 de T. gondii. O tratamento com L. casei ou L. acidophilus diminuiu o parasitismo intestinal, reduziu a patologia associada ao intestino delgado e evitou a morte dos animais. Além disso, a cultura microbiológica dos órgãos revelou que L. casei e L. acidophilus foi capaz de impedir a translocação de bactérias do lúmen intestinal para órgãos como fígado, baço, pulmão e também para o sangue. O cultivo microbiológico das fezes mostrou que houve menos espécies de bactérias gram negativas encontradas nas fezes dos animais tratados com probióticos. A análise das enzimas NAG, MPO e EPO que são características de macrófagos, neutr´filos e eosinófilos, respectivamente mostrou que houve diminuição na atividade das enzimas MPO e NAG e um pequeno aumento na atividade e EPO. Por último, a análise em qPCR revelou que o tratamento com L. acidophilus diminuiu a expressão de IFN-γ e TNF-α induzido pela infecção por T. gondii e o tratamento com L.casei aumentou a expressão de Foxp3 e IL-10. Esses resultados demonstram a capacidade dos probióticos em controlar a resposta inflamação e reduzir a mortalidade causada pela ileíte. Contudo, serão necessários mais estudos para descobrir quais os mecanismos precisos que os probióticos L. casei e L. acidophilus utilizam para modular a resposta imune em favor do hospedeiro. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Cinética da eliminação de cistos e resposta imune humoral sistêmica e secretora intestinal em gerbils (Meriones unguiculatus) infectados experimentalmente com Giardia duodenalisAmorim, Rúbia Mara Rodrigues 31 July 2008 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Giardia duodenalis is one of the main causative agents of diarrhea worldwide, being
transmitted by oral-fecal route. Giardiasis is usually self-limiting in immunocompetent
individuals, indicating the presence of effective host defense mechanisms. The objective of
that study was to determine the prepatent period and to evaluate the kinetics of elimination of
cysts and the immune response humoral systemic (IgA, IgG1, IgG2a, IgM, IgE) and intestinal
secretory (IgA) in gerbils (Meriones unguiculatus) inoculated, experimentally, with different
doses of trophozoites of Giardia duodenalis, in the primary infection, reinfection,
immunosuppression and reinfection/immunosuppression. We used 48 animals, 6-8 weeks old,
distributed in 5 groups inoculated with different doses of trophozoites of G. duodenalis (101,
102, 103, 104 and 105) and a group control. Coproparasitology exams were carried out, daily,
using the method of fluctuation in zinc sulfate 33%, to determine the prepatent period and the
kinetics of elimination of cysts. Weekly, blood collections for retro-orbital puncture were
performed and samples of feces were processed for obtaining of faecal extracts. In the 45th
day after inoculation, the animals of each group were redistributed in 4 subgroups and
submitted to the reinfection, immunosuppression or reinfection/immunosuppression. It was
verified that all the gerbils inoculated with different trophozoites doses were susceptible to the
primary infection, with prepatent period between 9 and 13 days. The reinfected animals didn't
eliminate cysts and the immunosuppressed or reinfected/immunosuppressed again they
presented recrudescence of the infection. The production of antibodies was induced by the
parasite, although the systemics antibodies just reflect the stimulation of the immune response
for G. duodenalis, since they don't act in the elimination of the parasite. In the reinfection it
was observed fast production of both serum and secretory antibodies and the
immunossuppressed animals they presented smaller levels of responsible antibodies for the
control of the infection. Fecal IgA showed increase in the titles in the period in that absence of
cysts was verified in the feces, could be correlated with the control of the giardiasis in this
experimental model. / Giardia duodenalis é um dos principais agentes causadores de diarréia em todo o mundo,
sendo transmitido por via oro-fecal. A giardíase é, usualmente, auto-limitante em indivíduos
imunocompetentes, indicando a presença de mecanismos efetivos de defesa do hospedeiro. O
objetivo desse estudo foi determinar o período pré-patente e avaliar a cinética de eliminação
de cistos e a resposta imune humoral sistêmica (IgA, IgG1, IgG2a, IgM, IgE) e secretora
intestinal (IgA) em gerbils (Meriones unguiculatus) inoculados, experimentalmente, com
diferentes doses de trofozoítos de Giardia duodenalis, na infecção primária, reinfecção,
imunossupressão e reinfecção/imunossupressão. Foram utilizados 48 animais, com idade
entre 6 e 8 semanas, distribuídos em 5 grupos inoculados com diferentes doses de trofozoítos
de G. duodenalis (101, 102, 103, 104 e 105) e um grupo controle. Exames coproparasitológicos
foram realizados, diariamente, utilizando método de flutuação em sulfato de zinco a 33%,
para determinar o período pré-patente e a cinética de eliminação de cistos. Semanalmente,
coletas sanguíneas por punção retro-orbital foram realizadas e amostras de fezes foram
processadas para obtenção de extratos fecais. No 45º dia após inoculação, os animais de cada
grupo foram redistribuídos em 4 subgrupos e submetidos à reinfecção, imunossupressão ou
reinfecção/imunossupressão. Verificou-se que todos os gerbils inoculados com diferentes
doses de trofozoítos mostraram-se susceptíveis à infecção primária, com período pré-patente
entre 9 e 13 dias. Os animais reinfectados não voltaram a eliminar cistos e os
imunossuprimidos ou reinfectados/imunossuprimidos apresentaram recrudescência da
infecção. A produção de anticorpos foi induzida pelo parasito, embora os sistêmicos apenas
reflitam a estimulação da resposta imune por G. duodenalis, já que não atuam na eliminação
do parasito. Na reinfecção foi observada rápida produção de anticorpos séricos e secretores e
os animais imunossuprimidos apresentaram baixos níveis de anticorpos responsáveis pelo
controle da infecção. A IgA fecal mostrou aumento nos títulos no período em que se verificou
ausência de cistos nas fezes, podendo estar correlacionada com o controle da giardíase neste
modelo experimental. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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