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Polimorfismo por Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) em metacestódeos de Taenia solium provenientes de diferentes áreas geográficas do Brasil e a reatividade de anticorpos IgG séricos de pacientes com neurocisticercose frente aos isolados obtidosBarcelos, Ivanildes Solange da Costa 07 April 2006 (has links)
Neurocysticercosis (NC) is a polymorphic disease and the immune response in
human carrier is heterogenic. In this study, 35 primers were used for amplifications by
Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) of Taenia solium metacestodes, from five
different geographic areas in Brazil: 1) Distrito Federal (DF), Center West; 2) Barreiras
(BA), Northeast and Southeast; 3) Hydro Basin of the Mosquito River (North of Minas
Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) and 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG).
Metacestodes saline crude extracts of four populations (DF, BA, RM-MG e SP) were used
for the detection of specific IgG antibodies by ELISA and Western Blotting (WB). A total
of 157 serum samples of three groups, (G1): 49 NC patients; (G2): 68 patients with other
helminthiasis: hydatidosis (10), taeniasis (20), strongyloidiasis (20), schistosomiasis (10)
and hymenolepiasis (8); and (G3): 40 healthy individuals; were analyzed by ELISA. From
these, the 98 serum samples were assayed by WB; G1 (49), G2 (39) and G3 (10). The
genetic distances, in disagreement percentage, between the metacestode populations were
calculated from of 15 RAPD markers and showed 49.5% (DF), 48% (BA), 38.5% (UBMG)
and 28% (RM-MG and SP) of genetic distances. Six primers identified polymorphic
fragments and the primers 26 (GGGTTTGGCA) and 29 (TCGCCAGCCA) allowed a
better differentiation of populations. The fragments of 1000, 500 and 326 pb (pairs of
bases) in the UB-MG and of 600 and 244 pb in RM-MG were amplified by primer 26. The
fragments generated by primer 29 were 500, 800 and 1191 pb, 300 and 1377 pb, 1000 pb
and 244 and 434 pb in SP, UB-MG, DF and BA populations, respectively. In G1, the
positivity by ELISA was: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) and 67% (SP). The DF extract
was more antigenic than others (p=0.02). In WB, the 64-68 kDa antigens were recognized
in all extracts, exclusively, in serum samples from active NC patients (p=0.001). Variation
in banding pattern was detected between the extracts (p<0.05). In G2, the serum samples
of hydatidosis patients presented from 70 to 90% positivity by ELISA in antigenic
extracts (p<0.05); however, the bands recognition pattern in WB was different from that
presented in G1 samples. The 77 kDa band was significantly identified in hydatidosis
samples (p=0.0001). In conclusion, the T. solium populations analyzed showed genetic
variability and antigenic differences. / A neurocisticercose (NC) constitui doença polimórfica, apresentando
heterogeneidade da resposta imune no hospedeiro humano. Nesse estudo, o teste Random
Amplified Polymorphic DNA (RAPD) foi utilizado com 35 primers na detecção de
polimorfismo em metacestódeos de Taenia solium provenientes de cinco áreas geográficas
distintas do Brasil: 1) Distrito Federal (DF), região Centro-Oeste; 2) Barreiras (BA), região
nordeste e da região sudeste: 3) Bacia Hidrográfica do Rio Mosquito (norte de Minas
Gerais, RM-MG), 4) São Paulo (SP) e 5) Uberaba (Minas Gerais, UB-MG). Os extratos
salinos totais de metacestódeos de quatro populações (DF, BA, RM-MG e SP) foram
utilizados na detecção de anticorpos IgG específicos pelo ELISA e Western Blotting
(WB). As 157 amostras de soro de três grupos (G) de indivíduos: G1: 49 pacientes com
NC; G2: 68 pacientes com outras helmintíases, sendo hidatidose (10), teníase (20),
estrongiloidíase (20), esquistossomose (10) e himenolepíase (8) e G3: 40 indivíduos
saudáveis (controles); foram analisadas pelo ELISA. Foram ensaiadas 98 amostras de
soro: G1 (49), G2 (39) e G3 (10) pelo WB. As distâncias genéticas, por porcentagem de
desacordo, foram de 49,5% (DF), 48% (BA), 38,5% (UB-MG) e 28% (RM-MG e SP) nas
populações de metacestódeos, calculadas a partir de 15 marcadores de RAPD. Seis
primers geraram fragmentos polimórficos nos isolados analisados, sendo que os
primers 26 (GGGTTTGGCA) e 29 (TCGCCAGCCA) permitiram melhor diferenciação
entre as populações, o primer 26 gerou os fragmentos de 1000, 500 e 326 pb (pares de
bases) na amostra de UB-MG, e de 600 e 244 pb em RM-MG. O 29 gerou fragmentos em
quatro das populações analisadas, sendo 500, 800 e 1191 pb em SP, 300 e 1377 pb em UBMG,
1000 pb no DF e 244 e 434 pb na BA. No G1, as freqüências de positividade no
ELISA, foram: 90% (DF), 69% (BA), 71% (MG) e 67% (SP), sendo o extrato do DF mais
antigênico que os demais (p = 0,02). No WB, o peptídeo de 64-68 kDa foi reconhecido em
todos os extratos, exclusivamente, em amostras de pacientes com NC ativa (p=0,001).
Detectou-se variação no padrão de reconhecimento de bandas entre os extratos (p<0,05).
No G2, as amostras de soro de pacientes com hidatidose apresentaram de 70 a 90% de
positividade no ELISA frente aos extratos analisados (p<0,05); porém, o padrão de
reconhecimento de bandas no WB diferiu do apresentado pelas amostras do G1, sendo que
a banda de 77 kDa foi significativamente identificada pelas amostras de pacientes com
hidatidose (p=0,0001). Concluiu-se que as populações de T. solium analisadas nesse
estudo, apresentaram variabilidade genética e diferenças de antigenicidade. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Antígeno leucocitário bovino (BoLA) de classe I e perfil de TNF-α e TGF-β1 na placenta bovina durante a gestação / Bovine leucocyte antigen (BoLa) class I and profile of TNF-α and TGF-β1 in bovine placenta during pregnancyGallo, Juliana Martins da Silva 16 July 2012 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The purpose of this study is to evaluate the amount of transcripts from the Major Histocompatibility Complex (MHC) class I classical (BoLA-N *) and non-classical (BoLA-NC*), as well as of TNF-α (Tumor Necrosis Factor alpha) and TGF-β1 (Transforming Growth Factor beta 1) cytokines in bovine non-pregnant uterus, caruncles, cotyledons and blastocysts throughout the pregnancy period, in order to understand the immune and physiological mechanisms that occur in pregnancy in cows. The samples were analyzed by qPCR, the qualification (presence or absence) by conventional RT-PCR and the immune fluorescence with sheep monoclonal antibody against MHC class I. As positive control we used a sample of tissue from the bovine lymph node and/or spleen in all experimental tests. The amount of transcript BoLA-N* and BoLA-NC* was small (fold change 0 to 3) in blastocysts and cotyledons. Cotyledons transcription BoLA-NC* is greater than the transcription of BoLA-N*. Blastocysts transcription of BoLA-N* was higher than BoLA-NC*. Blastocysts transcribed more BoLA-NC2 than in cotyledons. Blastocysts not transcribed BoLA-NC4. Cotyledons transcribed BoLA-NC4 more than BoLA-NC2. The caruncles showed large amounts of transcripts (fold change 5 to 400), which were higher for pregnancy period of \"8-9\" month to BoLA-N* and one month for BoLA-NC*. Caruncles BoLA-NC2 transcription was higher than the BoLA-NC4. The uterus non pregnant had fewer transcripts BoLA-N* and BoLA-NC* than in caruncles. The uterus non pregnant no have transcripts of BoLA-NC2, but they had a small amount of transcripts of BoLA-NC4. Caruncles had large amounts of transcripts (fold change 50 to 500) of BoLA-NC2 with pregnancy age greater than one month; those are seemed to protect the fetus from rejection. TNF-α appears in greater amount in late gestation (8 and 9 months), showing the beginning of an inflammatory reaction, necessary to the adequate removal of the fetus and the placenta during delivery. Since TGF-β1 has a peak of expression in the sixth and seventh months of gestation, just when the fetus has its greatest growth, demonstrating a probable involvement of this cytokine in this phenomenon. / Com o intuito de entender os mecanismos imunofisiológicos da gestação em vacas esta tese teve como objetivo avaliar a quantidade de transcritos do Complexo de Histocompatibilidade Principal (MHC) de classe I clássico (BoLA-N*) e não clássico (BoLA-NC*), bem como das citocinas TNF-α (Fator de Necrose Tumoral alfa) e TGF-β1 (Fator de Crescimento Transformador beta 1) em úteros não gestantes, carúnculas, blastocistos e cotilédones bovino durante todo o período gestacional. Utilizou-se a quantificação por qPCR, a qualificação (presença ou ausência) via RT-PCR convencional e a imunofluorescência com anticorpo primário monoclonal MHC de classe I ovino. Como controle positivo foi utilizado uma amostra de tecido de linfonodo e/ou baço bovino em todos os ensaios experimentais. A quantidade de transcrito de BoLA de classe I clássico e não clássico foi pequena (fold change variando de 0 a 3) nos blastocistos e cotilédones. Nos cotilédones a transcrição de BoLA-NC* foi maior do que a transcrição de BoLA-N*. Nos blastocistos houve maior transcrição de BoLA-N* do que de BoLA-NC*. BoLA-NC2 transcreveu mais nos blastocisto do que nos cotilédones. BoLA-NC4 não transcreveu nos blastocistos. Os cotilédones transcreveram mais BoLA-NC4 do que BoLA-NC2. As carúnculas apresentaram grandes quantidades de transcritos (fold change variando de 5 a 400), que foram maiores nos períodos gestacionais de 8 a 9 para BoLA_N* e até 1 mês para BoLA-NC*. A transcrição de BoLA-NC2 foi maior do que a de BoLA-NC4 nas carúncula. O útero não gestante teve menor quantidade de transcritos de BoLA-N* e BoLA-NC* do que nas carúnculas. Não há transcrição de BoLA-NC2 no útero não gestante, mas há uma pequena quantidade de transcritos de BoLA-NC4 neste tecido. A presença de grandes quantidades de transcritos (fold change variando de 50 a 500) de BoLA-NC2 nas carúnculas, com idade gestacional maior do que um mês, parece proteger o feto da rejeição. Nas carúnculas parece existir um pico de transcrição de TGF-β1 no sexto e sétimo meses de gestação, justamente quando o feto tem seu maior crescimento, sinalizando um provável envolvimento desta citocina neste fenômeno. O TNF-α surge em maior quantidade no final da gestação, tanto nas carúnculas quanto nos cotilédones, demonstrando o início de uma reação inflamatória, necessária para a adequada expulsão do concepto e da placenta durante o parto. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Papel do ferro na infecção experimental por Toxoplasma gondii / Role of iron in experimental infection with Toxoplasma gondiiOliveira, Mário Cézar 28 February 2018 (has links)
CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Muitos microorganismos desenvolveram a habilidade de adquirir ferro a partir do seu hospedeiro para seu próprio metabolismo. Toxoplasma gondii, um parasito intracelular obrigatório, produz proteinas de roptrias que são capazes de ligar ao transportador de ferro. Além disso, quelante de ferro foi capaz de controlar o parasitismo em células intestinais de rato. Logo, este trabalho teve como objetivo investigar a relação do efeito da adição ou privação de ferro na multiplicação de T. gondii e resultado da infecção quando o parasito é administrado por via oral e em cultura celular. Camundongos C57BL/6 foram infectados oralmente com T. gondii e tratados com um quelante de ferro, deferoxamina ou suplementados com ferro e o parasitismo, parâmetros imunológicos e histológicos foram analisados. Observou-se que a infecção aumentou a deposição de ferro no intestino delgado, pulmão e fígado e também sistematicamente. O tratamento com deferoxamina foi capaz de diminuir os níveis de ferro nas amostras de soro. O tratamento com deferoxamina diminuiu a carga parasitária no intestino delgado e alterações inflamatórias no órgão, preservando seu comprimento e também diminuiu o parasitismo pulmonar. Além disso, a suplementação com ferro aumentou a carga parasitária no intestino delgado, pulmão e fígado, associado com alterações inflamatórias nesses órgãos, bem como houve aumento da proliferação parasitária em cultivo celular com células Caco-2. A infecção oral modulou o perfil de expressão de marcadores de absorção de ferro, aumentando os níveis de IL-6 sistêmicos. Juntos, nossos resultados sugerem que a quelação de ferro comumente usada para tratar a sobrecarga de ferro pode ser um medicamento promissor para controlar a proliferação de T. gondii e consequentemente a inflamação causada por infecção e que o ferro é um nutriente essencial para o metabolismo de T. gondii. / Many microorganisms have developed the ability to acquire iron from their host to their own metabolism. Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite, produces rhoptry proteins that are capable of binding to the iron transporter. In addition, iron chelator was able to control parasitism in rat intestinal cells. Therefore, the objective of this work was to investigate the relationship of the effect of iron addition or deprivation on the multiplication of T. gondii and the result of infection when the parasite is administered orally and in cell culture. C57BL/6 mice were orally infected with T. gondii and treated with an iron chelator, deferoxamine or iron supplemented and parasitism, immunological and histological parameters were analyzed. It was observed that the infection increased the deposition of iron in the small intestine, lung and liver and also systematically. Treatment with deferoxamine was able to decrease iron levels in the serum samples. Treatment with deferoxamine reduced parasite burden in the small intestine and inflammatory changes in the organ, preserving its length and also decreased pulmonary parasitism. In addition, iron supplementation increased parasite burden in the small intestine, lung and liver, associated with inflammatory changes in these organs, as well as increased parasite proliferation in cell culture with Caco-2 cells. Oral infection modulated the expression profile of iron absorption markers, increasing systemic IL-6 levels. Together, our results suggest that iron chelation commonly used to treat iron overload may be a promising drug to control T. gondii proliferation and consequently inflammation caused by infection and that iron is an essential nutrient for the metabolism of T. gondii. / Tese (Doutorado)
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Cinética de detecção de coproantígenos e de antígenos, anticorpos e imunocomplexos em amostras de soro e de lavado bronco alveolar de ratos imunossuprimidos e experimentalmente infectados por Strongyloides venezuelensis / Kinetic of coproantigen, antigens, antibodies and immune complexes detection in serum and bronchoalveolar lavage fluid samples from rats experimentally infected with Strongyloides venezuelensisGonçalves, Ana Lúcia Ribeiro 19 December 2011 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The definitive diagnosis of strongyloidiasis is normally done by detection of larvae
on faecal samples; however, the number of parasites is limited in most cases and
the elimination of larvae is irregular. Thus, developing reliable serological methods
for the diagnosis of strongyloidiasis becomes imperative. The aim of this study
was to establish a coproantigen ,antigen, antibody and immune complex detection
by enzyme-linked immunosorbent assay in serum and bronchoalveolar lavage
fluid (BALF) samples of non immunosuppressed or immunosuppressed rats
experimentally infected with Strongyloides venezuelensis. For kinetics of
coproantigen detection (0 and 5, 8, 13 and 21 days post-infection (d.p.i)), we
used an anti-L3 polyclonal antibody produced in rabbits. For antigen and immune
complex detection in serum and BALF samples (0 and 2, 5, 8, 13 and 21d.p.i),
the microtitre plates were coated with IgG anti-S. venezuelensis and with alkaline
parasite extract for antibody detection. The statistical analysis were analyzed
using Two Way ANOVA, followed by the Bonferroni test. The criterion for
statistical significance was set at p<0,05. The number of eggs/g of faeces
recovered at 8 d.p.i was significantly higher for non immunosuppressed and
immunosuppressed animals (p<0.01). The coproantigen detection was
significantly higher at 13° d.p.i in non immunosuppressed (p<0.05) and in
immunosuppressed it was anticipated to the 5th d.p.i. It was observed that antigen
detection in serum samples was not a good approache for evaluating the infection
however in BALF samples it showed superior results. In immunosuppressed
animals, IgG specific for S. venezuelensis was preferentially detected during the
5° and 13° d.p.i and in immunosuppressed animals, during the entire
experimental kinetics. In BALF samples, antibodies detection was observed from
the 8° to the 21° d.p.i in non immunosuppressed animals and in
immunosuppressed animals it was anticipatedto the 2° d.p.i, with higher reactivity
at 5° d.p.i (p<0.05). The immune complex detection in serum samples of the non
immunosuppressed animals was observed from the 5° to the 13° d.p.i and in
immunosuppressed animals, during the entire kinetics. In BALF samples, immune
complex detection was higher in non immunosuppressed animals. In conclusion,
coproantigen and immune complex detection in serum and BALF samples are
alternatives for early strongyloidiasis diagnosis, mainly in immunocompromised
cases. / O diagnóstico definitivo da estrongiloidíase normalmente é realizado mediante a
detecção de larvas nas fezes; porém a quantidade de parasitos é limitada e a
eliminação de larvas é reduzida e irregular. Sendo assim, o desenvolvimento de
testes sorológicos confiáveis para o diagnóstico da estrongiloidíase torna-se uma
alternativa necessária. O objetivo deste estudo foi demonstrar a cinética de
detecção de coproantígenos e de antígenos, anticorpos e imunocomplexos
circulantes em amostras de soro e de lavado bronco alveolar (LBA) de ratos
imunossuprimidos e experimentalmente infectados por Strongyloides
venezuelensis. Para a cinética (0 e 5, 8, 13 e 21 dias pós-infecção (d.p.i)) de
coproantígenos utilizou-se anticorpo policlonal anti-L3 produzido em coelhos.
Para a detecção de antígenos e de imunocomplexos em amostras de soro e de
LBA (0 e 2, 5, 8, 13 e 21 d.p.i), placas de microtitulação foram sensibilizadas com
IgG anti-S. venezuelensis e com extrato alcalino de larvas para a detecção de
anticorpos. A análise estatística foi realizada por Two Way ANOVA, seguida pela
teste de Bonferroni, considerando p<0,05 significativo. A cinética de eliminação
de ovos/g de fezes mostrou que o pico ocorre no 8° d.p.i sendo significativamente
maior nos animais imunossuprimidos (p<0,01). O pico de detecção de
coproantígenos nos animais não imunossuprimidos foi no 13° d.p.i (p<0,05),
sendo que nos animais imunossuprimidos a detecção foi antecipada para o 5°
d.p.i. A detecção de antígeno em amostras de soro não foi uma boa ferramenta
diagnóstica para avaliar a infecção enquanto que em amostras de LBA mostrou
ser ferramenta auxiliar. A detecção de IgG específica para S. venezuelensis em
amostras de soro de animais não imunossuprimidos foi preferencialmente
durante o 5° e o 8° d.p.i. e em animais imunossuprimidos, durante toda a cinética
experimental. Nas amostras de LBA, a detecção de anticorpos ocorreu do 8° ao
21° d.p.i em animais não imunossuprimidos e em animais imunossuprimidos, foi
antecipada para o 2° d.p.i, como pico de reatividade no 5° d.p.i (p<0,05). A
detecção de imunocomplexos em amostras de soro de animais não
imunossuprimidos foi possível do 5° aos 13° d.p.i e em animais
imunossuprimidos, durante toda a cinética. Em amostras de LBA, a detecção de
imunocomplexo foi maior em animais não imunossuprimidos. Concluiu-se que a
detecção de coproantígeno e de imunocomplexos circulantes em amostra de soro
e em amostras de LBA são uma alternativa para o diagnóstico precoce da
estrongiloidíase principalmente nos casos de imunossupressão. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Cepas TgChBrUD2 e ME49 de Toxoplasma gondii induzem polarização de macrófagos humanos para o perfil M1Gois, Paula Suellen Guimarães 01 April 2016 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Several immunological mechanisms are responsible for the control of Toxoplasma gondii infection. The immune response occurs initially because of the participation of innate immune cells, in which macrophages play an important role. The existence of atypical strains of T. gondii with a genetic pattern different from clonal strains lead concern worldwide, principally because these strains cause severe symptoms especially in immunocompromised individuals and congenitally infected newborn. In this sense, we investigated the in vitro polarization of human macrophages to M1 or M2 profile after the infection with RH, ME49 clonal strains and TgChBrUD2 Brazilian strain. THP-1 cells were treated with PMA to induce their differentiation into macrophages. The cells were plated and infected with T. gondii tachyzoites from TgChBrUD2, RH or ME49 strains at a 2:1 (parasites: host cell) ratio or incubated only with medium (control uninfected cells). The supernatant was collected for cytokine analysis and measurement of nitrite. The macrophages were used for quantification of urea, evaluation of parasitism, analysis of morphology and surface markers. Our results showed an up-regulation of MIF during infection by TgChBrUD2, RH and ME49, and low levels of IL-10 compared to control. In addition, TgChBrUD2-infected macrophages show high levels of IL-6 production compared to non-infected macrophages and RH infection. Regarding secretion of nitrite, the infection by TgChBrUD2 exhibited high levels of nitrite compared to control and RH infection. The urea production showed a down-regulation in macrophages infected with TgChBrUD2 and ME49 in comparison to control. The analysis of morphology revealed that TgChBrUD2-infected macrophages induced the cells to change their morphology to spindle shaped. On the other hand, PCR analysis showed an increased amount of T. gondii DNA in RH-infected macrophages compared to infection with TgChBrUD2 and ME49. Thus, our results showed that RH strain produced an insuficient pro-inflamatory response that influenced the proliferation of parasite, in contrast, TgChBrUD2 and ME49 induced characteristic factors of polarization to M1 macrophages, in which the atypical strain showed high production of pro-inflamatory mediators that helped to countain the replication of this strain. / Vários mecanismos imunológicos são responsáveis pelo controle da infecção por Toxoplasma gondii. A resposta imune a este patógeno ocorre inicialmente pela participação de células da imunidade inata, na qual macrófagos têm papel importante. A existência de cepas atípicas de T. gondii com padrão genético diferente das clonais desperta grande preocupação mundial, uma vez que, geralmente, causam sintomas graves particularmente em indivíduos imunocomprometidos e naqueles infectados congenitamente. O objetivo deste estudo foi comparar, in vitro, a polarização de macrófagos humanos derivados da linhagem THP-1 para um perfil M1 ou M2 após infecção com as cepas clonais RH, ME49 e a cepa atípica TgChBrUD2. Células THP-1 foram tratadas com PMA para induzir sua diferenciação em macrófagos funcionais. Após a diferenciação, esses macrófagos foram plaqueados e infectados com as cepas TgChBrUD2, RH ou ME49 de T. gondii em diferentes abordagens experimentais. Como controle foram utilizados macrófagos não infectados. Os sobrenadantes de cultura de macrófagos nas diferentes condições experimentais foram coletados para análise de citocinas pelo teste ELISA e dosagem de nitrito pela reação de Griess. As células foram utilizadas para avaliação da morfologia, quantificação da ureia por espectrofotometria, dos marcadores expressos na superfície celular por citometria de fluxo e do parasitismo por PCR. Nossos resultados mostraram um aumento das citocinas MIF durante infecção pelas cepas TgChBrUD2, RH e ME49, bem como uma diminuição de IL-10 quando comparado aos macrófagos não infectados. Além disso, macrófagos infectados pela cepa atípica apresentaram altos níveis de secreção de IL-6 em relação ao controle. Em relação a produção de nitrito, apenas os macrófagos infectados por TgChBrUD2 apresentaram aumento em relação aos macrófagos controle e aos infectados por RH. A dosagem de ureia revelou uma redução da atividade de arginase na infecção por TgChBrUD2 e ME49 comparado aos macrófagos não infectados. A análise da morfologia celular mostrou que a infecção por TgChBrUD2 induziu os macrófagos a mudarem seu formato de circulares para fusiformes. Por outro lado, a análise de PCR mostrou que a cepa RH proliferou significativamente mais nos macrófagos em comparação com as cepas TgChBrUD2 e ME49. Desse modo, nossos resultados mostraram que a cepa RH induziu resposta pró-inflamatória insuficiente que influenciou na proliferação do parasito, por outro lado, TgChBrUD2 e ME49 induziram fatores característicos da polarização para macrófagos M1, de modo que a cepa atípica mostrou maior liberação de mediadores pró-inflamatórios que auxiliaram a conter a replicação desta cepa. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Comparação dos métodos parasitológico, imunológico e molecular em amostras de fezes de ratos (Rattus norvegicus Wistar) imunossuprimidos experimentalmente infectados por Strongyloides venezuelensis / Comparison of parasitological, immunological and molecular methods in fecal samples of rats (Rattus norvegicus Wistar) immunosuppressed experimentally infected by Strongyloides venezuelensisChaves, Leilane Alves 04 August 2014 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The diagnosis of strongyloidiasis is difficult the irregular larval excretion and in most cases, individuals are asymptomatic; detection of latent cases of Strongyloides stercoralis in immunosuppressed may decrease morbidity and mortality. In this sense, the improvement of reliable diagnostic methods is essential. The objective of the study was to compare the release of eggs in the feces by the technique of Egg counts per gram of feces (EPG), coproantigens detection by ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) and amplification bands by conventional (Polymerase Chain Reaction) PCR from feces of non immunosuppressed and immunosuppressed mice experimentally infected with Strongyloides venezuelensis. In the experimental kinetic days 0 and 5, 8, 13, and 21 after infection p.i. were used. Comparing the EPG, coproantigens detection by ELISA and PCR, it was observed in the non immunosuppressed group the release of eggs from the EPG test day on 5 to day 13 p.i, being absent on day 21 p.i. Coproantigen positivity was observed in 33.3% 5 and 8 p.i. and 100% on days 13:21 p.i. and PCR, the presence of amplified bands was observed along the entire kinetics. In immunosuppressed animals, 100% of the released eggs in the feces, the data of the ELISA, 100% of the animals were evaluated in both positive and PCR, the presence of amplified bands during kinetics. It is concluded that detection of coproantigens by ELISA and PCR diagnosis could be useful tools for diagnosis of strongyloidiasis especially in cases of immunosuppression. / O diagnóstico da estrongiloidíase é difícil, pois, a excreção larval é irregular e na maioria dos casos, os indivíduos são assintomáticos; a detecção de casos latentes de Strongyloides stercoralis em imunossuprimidos pode diminuir a morbidade e mortalidade da infecção. Assim, o aprimoramento de métodos confiáveis de diagnóstico são imprescindíveis. O objetivo do estudo foi comparar a liberação de ovos nas fezes pela técnica de Contagem de Ovos por Grama de Fezes (OPG), a detecção de coproantígenos pelo ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) e amplificação de bandas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) convencional de fezes de ratos não imunossuprimidos e imunossuprimidos e experimentalmente infectados por Strongyloides venezuelensis. Na cinética experimental foram utilizados os pontos 0 e 5, 8, 13 e 21 pós-infecção (d.p.i). Para o cálculo dos resultados foram utilizadas porcentagens simples e descrição dos resultados obtidos. Comparando-se o OPG, a detecção de coproantígenos pelo ELISA e a PCR, observou-se no grupo não imunossuprimido a liberação de ovos no teste OPG do dia 5 ao dia 13 p.i, sendo ausente no 21 d. p.i. Para a detecção de coproantígeno observou-se positividade de 33,3% no 5 e 8 d. p.i e de 100% no 13 e 21 d. p.i e na PCR, a presença de bandas amplificadas em todos os dias da cinética. Nos animais imunossuprimidos, 100% liberaram ovos nas fezes, no teste ELISA, 100% dos animais foram positivos e na PCR, a presença de bandas amplificadas em toda a cinética. Concluiu-se que a detecção de coproantígenos pelo ELISA e o diagnóstico por PCR podem ser ferramentas úteis para o diagnóstico em animais não imunossuprimidos e imunossuprimidos. Em comparação ao OPG, a detecção de coproantígenos pelo ELISA e amplificação de bandas pela PCR mostraram mais sensíveis nos dias analisados e podem ser métodos de escolha para diagnóstico da estrongiloidíase principalmente nos casos de imunossupressão. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Evidência sorológica de infecção por riquétsias do grupo da febre maculosa e Rickettsia bellii em pequenos mamíferos na área periurbana de Uberlândia, Minas GeraisCoelho, Marcella Gonçalves 26 February 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Rickettsiosis is a human disease caused by bacteria of the genus Rickettsia, and its main
vector ticks (Ixodidae), which are also considered reservoirs of the Spotted Fever Group
rickettsiae in Brazil. Small mammals are frequent hosts for immature stages of rickettsial
diseases vector ticks, and it is known that some species of small mammals are hosts amplifiers
for Rickettsia sp..The aim of this study was to determine seropositivity against five species of
Rickettsia and tick fauna of small mammals captured in periurban region of Uberlândia, MG,
Brazil. For this purpose, 416 small mammals representing 13 species of wild rodents and
marsupials were captured between the months of July 2011 to August 2012. Of these, 48 were
infested with ticks of the genus Amblyomma and Ixodes, and 70 (16.8%) of the animals were
seropositive for Rickettsia spp.. Our results indicate the circulation of four species of
Rickettsia, R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali and R. bellii, in the periurban area of
Uberlândia. The first two Rickettsia species are considered pathogenic to man and thus a more
thorough investigation to confirm the species of bacteria and epidemiological aspects related
to these Rickettsia spp. is the detection locations. / Riquetsiose é uma doença causada em humanos por bactérias do gênero Rickettsia, e tem
como principais vetores os carrapatos, que são considerados também reservatórios de
riquétsias do grupo da febre maculosa no Brasil. Frequentemente os estágios imaturos de
carrapatos vetores de riquetsioses têm pequenos mamíferos como hospedeiros, e sabe-se que
algumas espécies de pequenos mamíferos são hospedeiros amplificadores para Rickettsia sp..
O objetivo deste trabalho foi determinar a sororreatividade contra cinco espécies de riquétsias
e a fauna de carrapatos de pequenos mamíferos na região periurbana de Uberlândia, MG,
Brasil. Foram capturados, entre julho de 2011 a agosto de 2012, 416 animais representando
13 espécies de roedores silvestres e marsupiais. Destes, 48 estavam infestados com carrapatos
dos gêneros Amblyomma e Ixodes, e 70 (16,8%) dos animais foram soropositivos para
Rickettsia spp.. Nossos resultados indicam a circulação de quatro espécies de riquétsias, R.
rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali e R. bellii, próximo à área urbana do município de
Uberlândia. As duas primeiras espécies são consideradas patogênicas ao homem,
evidenciando a necessidade de se realizar uma investigação mais minuciosa tanto para a
confirmação das espécies de bactérias circulantes, quanto para a compreensão do ambiente
que mantém as riquétsias nos locais de detecção. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Microbiota das mãos de enfermeiras, estudantes universitários e técnicos de laboratório associada à lavagem higiênicaRocha, Lílian Alves 24 July 2007 (has links)
Handwashing frequency may result in harmful effects on the skin, promoting the
increase of the prevalence of nosocomial important microorganisms. This study
purpose was to assess the quantitative and qualitative changes of the total
microbiota (both permanent and transient) from hands of nursing professionals
and university laboratory technicians and students due to the irritant action
provoked by frequent washing and/or wearing gloves. Sixty health professionals
were enrolled from whom collections were performed by the sterile polyethylene
bag, before and after washing hands with 3 mL of nonantimicrobial soap for 30
seconds. In the group formed by students and laboratory technicians (n=30),
these collections were performed before and after consecutive washings with
water and soap. Damaged hands health professionals hands contamination
was higher when compared with healthy hands. Hygiene proved to be efficient
in both students and laboratory technicians without complaints of irritation after
successive washings, a fact not seen among health care workers. Nurses with
damaged hands presented higher frequency of S. aureus, Gram negative
bacteria and yeast than the healthy ones (P>0.05), as well as the sum of these
microorganisms (P=0.07) and presence of S. haemolyticus (P=0.02). The
frequency of S. aureus and antimicrobial resistant Gram negative bacteria was
higher among nurses damaged hands. The irritation caused on the skin by the
frequent washing and/or wearing of gloves may cause changes of hands
microbiota and should be considered when choosing hygiene products. / A freqüência da lavagem de mãos pode resultar em efeitos prejudiciais na pele
promovendo aumento da prevalência de microrganismos de importância
hospitalar. Os objetivos deste trabalho foram avaliar quantitativa e qualitativamente as alterações na microbiota total (residente e transitória) das mãos de profissionais de enfermagem e estudantes universitários e técnicos de
laboratório associadas à ação irritante provocada pela freqüente lavagem e/ou uso de luvas. Foram incluídos 60 profissionais de saúde, nos quais foram realizadas coletas, pelo método do saco estéril de polietileno, antes e após a lavagem com 3 mL de sabão não medicamentoso, por 30 segundos. No grupo constituído por estudantes e técnicos de laboratório (n=30), estas coletas foram realizadas antes e após lavagens consecutivas com água e sabão. A contaminação das mãos de profissionais de saúde com danos na pele foi maior em relação às sadias. A higiene se mostrou eficiente nos estudantes e técnicos de laboratório sem queixas de irritação após lavagens sucessivas, fato não
observado entre profissionais de saúde. Enfermeiras com mãos com danos apresentaram maior freqüência de S. aureus, bacilos Gram-negativos e fungos leveduriformes do que as sadias (P>0,05), assim como quanto à soma destes
microrganismos (P=0,07) e a presença de S. haemolyticus (P=0,02). A freqüência de S. aureus e bacilos Gram-negativos resistentes aos antibióticos foi maior nas mãos lesadas de enfermeiras. A irritação causada na pele devido à lavagem freqüente e/ou uso de luvas pode provocar alterações da microbiota das mãos e deve ser considerada pelas instituições quando da escolha de produtos de higiene. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Pneumonia associada à ventilação mecânica (PAV) por Pseudomonas aeruginosa em Unidade de Terapia Intensiva (UTI): aspectos epidemiológicos e moleculares de amostras produtoras de metalo-β-lactamasesRodrigues, Dayane Otero 25 February 2010 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The incidence of infections caused by multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa
producing metallo-β-lactamase is increasing, especially in critically ill patients. The
objective of this study was to evaluate the incidence of ventilator associated-pneumonia
(VAP) caused by P.aeruginosa producing metallo-β-lactamase (MBL-PA) or non-MBL-PA
in patients admitted at a adult intensive care unit (ICU) of a Uberlândia Federal University
Hospital Clinic, looking epidemiologic and molecular aspects. A cohort study was
performed including 93 patients with VAP caused by P.aeruginosa from January/2004 to
November/2006. The collection of the tract respiratory superior secretions was made by the
swab-rinse sampling method and of the endotracheal aspirate when for suspicion of VAP.
In total, 40 (43%) patients had VAP by MBL-PA and 53 (57%) by non-MBL-PA. The
study was approved by the Ethical Committee of the University. The results of univariate
analysis of risk factors for MBL-PA VAP showed that the ASIS score, clinical condition in
admission, prior hospitalization, prolonged stay in the ICU, prolonged time of mechanical
ventilation, exposure of carbapenems, fluorquinolones and use of three or more antibiotics
were risk factors for VAP by MBL-PA. After logistic regression the following risk factors
continued significant: prior hospitalization and prolonged time of mechanical ventilation.
Additionally, the mortality was also independently associated with MBL-PA VAP. During
the study period we identified 40 (43%) isolates of P.aeruginosa presumptive MBL
producers according to the disk approximation tests and of the 59% of the AmpC
phenotype. Resistance to β-lactam and non-β-lactam agents was significantly higher among
MBL-PA isolates with the 82,5% of this multidrug-resistant. Only 18,8% (3/16) of MBLproducing
strains were positive for the blaSPM-1 gene. To determine the genomic diversity of
P.aeruginosa multidrug-resistant 20 isolates were analysed by macrorestriction profile
analysis following PFGE. That showed of polyclonal Pseudomonas aeruginosa (16
genotypes). Altogether the detection of horizontal dissemination was observed in three
patients (Clone A), two (Genotype C) and more two patients (Genotype E). The two
epidemic MBL-PA isolates from the outbreak in 2003 presented macrorestriction profiles
different from the endemic MBL-PA. The presence of MBL-PA in our unit indicates
problems in nosocomial infection control practice, likely associated with low adherence to
hand hygiene and especially in the abusive use of antibiotics. / A incidência de infecções causadas por Pseudomonas aeruginosa multiresistente produtora
de metalo-β-lactamase está aumentando mundialmente, especialmente em pacientes
críticos. O objetivo deste estudo foi determinar a incidência de pneumonia associada à
ventilação mecânica (PAV) por Pseudomonas aeruginosa produtora ou não de metalo-β-
lactamases em pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de adultos do
Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU), caracterizando
aspectos epidemiológicos, dentre os quais fatores de risco dos pacientes, e moleculares das
amostras. Foi realizado um estudo de coorte incluindo 93 pacientes com PAV por
Pseudomonas aeruginosa no período de janeiro/2004 a novembro/2006. Foram realizadas
coletas de secreção de orofaringe das primeiras 48 horas de internação, depois em quatro
dias, e a seguir semanalmente, e de aspirado endotraqueal quando da indicação clínica da
pneumonia. No estudo epidemiológico, 40 (43 %) pacientes tiveram PAV por
P.aeruginosa produtora de metalo-β-lactamase (PA-MBL) e 53 (57 %) PAV por não-PAMBL,
com os seguintes fatores de risco significativos (p≤0,05) associados com PAV por
PA-MBL: escore ASIS, diagnóstico clínico na admissão, hospitalização prévia, estada
prolongada na UTI, uso prolongado de ventilação mecânica (VM), uso de carbapenemas,
fluorquinolonas e de três ou mais antibióticos, na análise univariada; e, confirmados como
independentes por análise multivariada apenas hospitalização prévia e tempo mais longo
de VM. Adicionalmente, a taxa de mortalidade foi significantemente maior no grupo de
PAV por PA-MBL, tanto na análise univariada quanto na regressão logística. Quarenta (43
%) amostras de P.aeruginosa foram identificadas como produtoras de MBL pelo teste
fenotípico de sinergismo com duplo-disco e a maioria (59 %) comportou-se como do
fenótipo AmpC. A resistência aos agentes β-lactâmicos assim como aos demais
antibióticos foi significantemente maior entre as amostras de PA-MBL, detectando-se a
presença de multiresistência na maioria (82,5%) daquelas MBL positivas. O gene blaSPM-1
foi detectado em apenas três (18,8%) das 16 amostras do fenótipo MBL testadas. O estudo
de epidemiologia molecular através da técnica de PFGE revelou a ocorrência de uma
policlonalidade (16 genótipos em 20 amostras), com evidência de transmissão cruzada em
três pacientes (clone A), dois (genótipo C) e outros dois pacientes (genótipo E) e de
similaridade entre amostras recuperadas de dois pacientes colonizados e posteriormente
infectados. As duas amostras associadas ao surto responsável pela emergência das PAMBL
em nosso hospital, diferiram das amostras de PA-MBL recuperadas em condições
endêmicas no nosso estudo. A presença destas amostras representa uma grave ameaça aos
pacientes, exigindo uma revisão quanto a uma política do uso mais racional de antibióticos
e na implementação de programas de controle e prevenção de infecções hospitalares mais
efetivos. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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Papel do adaptador indutor de Interferon-β contendo domínio TIR (TRIF) na resistência de camundongos a infecção por Neospora caninumMiranda, Vanessa dos Santos 19 February 2016 (has links)
Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Neospora caninum is an intracellular parasite that has the dog as its definitive host and other mammals, especially cattle, as intermediate hosts. Economically, neosporosis is an important disease in Veterinary medicine due to the induction of relevant clinical signs, as abortions in cattle and neuromuscular paralysis in dogs. The aim of this study was to evaluate the role of the TLR adaptor protein TRIF in the resistance against N. caninum infection. For this, in vitro experiments with bone marrow derived macrophages (BMDMs) from C57BL/6 wild-type (WT) and TRIF knockout (TRIF-/-) mice, stimulated by tachyzoites and in vivo infections, were performed in order to investigate the production of cytokines and antibodies, cellular and tissue parasitism, histological changes during different phases of infection and survival analysis. We observed that TRIF-/- BMDMs presented notable defects in inflammatory cytokine production in relation to WT macrophages. Additionally, we found that the concentration of NO, IL-12p40, IFN-y and TNF were decreased in peritoneal fluids and lungs of TRIF-/- mice, while IL-2, IFN-γ, TNF and IL-17 were reduced in sera of these animals compared to WT mice. Higher parasite burden was observed in peritoneal cells, lungs and brain during the acute and chronic phases of infection, which were associated with inflammatory changes in the analyzed tissues, while TRIF-/- mice survival rate decreased 2-fold compared to WT. In conclusion, our results show that TRIF is required for resistance against the infection induced by N. caninum, regulating the production of key Th1 cytokines and participating in the control of the tissue parasitism and inflammatory lesions induced against the parasite. / Neospora caninum é um parasito intracelular que tem como hospedeiro definitivo o cão e outros mamíferos, especialmente bovinos, como hospedeiros intermediários. Economicamente, a neosporose é uma doença de grande importância na medicina veterinária por induzir relevantes sinais clínicos, como abortos em bovinos e paralisia neuromuscular em cães. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da molécula adaptadora TRIF da via de sinalização dos TLRs na resistência contra a infecção por N. caninum. Para isso, experimentos in vitro com macrófagos derivados de medula óssea (BMDMs) obtidos de camundongos do tipo selvagem (WT) e TRIF knockout (TRIF-/-) estimulados com taquizoítos e infecções in vivo foram realizadas a fim de se investigar a produção de citocinas e anticorpos, parasitismo celular e tecidual, alterações histológicas durante diferentes fases da infecção e análise de sobrevida. Nós observamos que BMDMs TRIF-/- apresentaram reduções significativas na produção de citocinas inflamatórias em relação a macrófagos WT. Adicionalmente, foi visto que as concentrações de NO, IL-12p40, IFN- e TNF foram diminuídas no lavado peritoneal e nos pulmões de camundongos TRIF-/-, enquanto que IL-2, IFN-γ, TNF e IL-17 foram reduzidas no soro desses animais em comparação aos WT. Alta carga parasitária foi encontrada nas células peritoneais, pulmões e cérebro durante as fases aguda e crônica da infecção, associada com alterações teciduais inflamatórias significativas nos pulmões. Além disso, camundongos TRIF-/- tiveram uma taxa de sobrevida 2 vezes menor quando comparada aos animais WT. Concluindo, nossos resultados mostram que TRIF é requerido para a resistência contra a infecção induzida por N. caninum, regulando a produção de citocinas chave do perfil Th1 de resposta imune e participando no controle do parasitismo tecidual e das lesões inflamatórias oriundas desta infecção. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
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