A tuberculose é uma doença crônica granulomatosa caracterizada por um déficit de imunidade antígeno específica do hospedeiro, cuja resposta imune é ativamente regulada por citocinas. No Brasil há mais de 50 milhões de habitantes infectados pelo Mycobacterium tuberculosis. O objetivo foi avaliar a linfoproliferação e a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico (PBMC) estimuladas por quatro diferentes antígenos do M. tuberculosis, um complexo, o antígeno sonicado, e três purificados, ESAT-6, antígeno 85B e antígeno HBHA, eventuais candidatos à vacina anti-tuberculose. Para avaliação da produção de IFN-g e IL-10 foram utilizados dois métodos: Elispot e Elisa à partir de sobrenadante de cultura de PBMC. Para essas avaliações, os pacientes com tuberculose ativa (TB-A) foram comparados a dois subgrupos de indivíduos controles. O primeiro subgrupo foi constituído por indivíduos saudáveis PPD+ e o segundo por indivíduos curados de um episódio de tuberculose (TB-C). Nossos resultados de linfoproliferação e de Elisa revelaram diminuição da resposta linfoproliferativa e da produção de IFN-g dos pacientes em comparação com os indivíduos PPD+, enquanto os indivíduos TB-C apresentaram em geral resultados intermediários. Observou-se também que as respostas à PHA não diferiam significativamente entre os grupos, ressaltando a natureza antígeno específica da hiporreatividade na tuberculose. Adicionalmente, verificamos maior reatividade ao antígeno complexo, sonicado, que aos antígenos purificados, e entre estes, a reatividade foi maior para ESAT-6 e 85B que para HBHA, A resposta ao HBHA pode ter sido eventualmente subestimada por razões técnicas, como utilização de dose sub-ótima ou perda da atividade biológica. Em relação ao Elispot para IFN-g, não pudemos observar diferenças entre os grupos, tanto quando se considerou o número total de spots, como quando se contou apenas spots com diâmetro > 65 mm, apresentando portanto uma sensibilidade aparentemente menor comparado aos outros 2 métodos. A comparação entre os métodos revelou pouca correlação entre seus resultados, que pode ser eventualmente explicado pela diferente contribuição das populações celulares (T CD4+ e T CD8+) para cada uma das provas munológicas. Finalmente, a análise da produção de IL-10 medida por Elisa no sobrenadante de cultura e por spots de IL10, também não revelou diferenças entre os grupos. Convém notar que o Elisa detectou baixas concentrações de IL-10 nos sobrenadantes, porém o Elispot demonstrou número elevado de spots e boa correlação entre as resposta aos antígenos. Em conclusão, nossos resultados sugerem que métodos \'clássicos\', e já estabelecidos, como linfoproliferação e Elisa, persistem válidos para se avaliar a imunidade celular, e que em nossas condições laboratoriais, a técnica de Elispot não representou, até o momento, uma melhora na qualidade da avaliação imunológica. / Tuberculosis is a chronic granulomatous disease characterized by a deficit of the antigen-specific immunity of the host, whose immune response is actively regulated by cytokines. In Brazil there are 50 million people infected with Mycobacterium tuberculosis. The objective of the present work was to evaluate the lymphoproliferative response e the IFN-g response by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) indiced with 4 different antigens isolated from Mycobacterium tuberculosis: a complex, crude, the sonicate antigen, and 3 other, purified ones, Esat-6, 85B, and HBHA, the last 3 eventual candidates to the design of a vaccine against tuberculosis. We used 2 methods to evaluate the IFN-g and IL-10 productions, namely Elispot and Elisa of supernatant of PBMC cultures. We studied a group of active tuberculosis patients (TB-A), and compared them with controls individuals comprising 2 groups, one made of healthy PPD+ individuals and the second one of individuals who have been cured from an episode of tuberculosis in the past (TB-C). Our results of lymphoproliferation and Elisa revealed decrease in the lymphoproliferative and IFN-g responses by patients\' PBMC as compared to the PPD+ group, with the TB-C group in general presenting intermediate results. We also observed that the responses to the mitogen PHA were not statisically different among the groups, denoting the antigen-specific nature of the immune deficit in tuberculosis. In addition, we verified that stronger reactivity to the complex antigen than with the purified antigens, and, among the latter, the reactivity was stronger with Esat-6 and 85B as compared to HBHA, Reactivity to HBHA may have been understimated due to technical reasons, such as loss of .the biological activity of the molecule or use of a sub-optimal dose. By using the Elispot for IFN-g we were not able to detect differences among the groups, even when we counted all spots formed or spots with more than > 65 mm in diameter. Thus our Elispot for IFN-g apparently showed lower sensitivity than the other 2 methods. Furthermore, comparisons between the methods revealed low correlation between their results, a finding that may be explained by the differning contribution of different subpopulations (T CD4+ and T CD8+) to each of the results. Finally, analysis of the production of IL-10 as measured by Elisa in the culture supernatants as well as by Elispot revealed no differences among the groups. It is noteworthy that the levels of IL-10 detected by Elisa were low, but the Elispot revealed high number of spots and a good correlation between the antigen responses. In conclusion, we may say that our well standardized \'classical\' methods Elisa and lymphoproliferation persist useful to evaluate cellular immunity responses, and that the Elispot technique, up to now and in our laboratorial conditions, did not represent an improvement in the quality of the immunological evaluation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:49:31Z : No. of bitstreams: 1 000731361.pdf: 750399 bytes, checksum: 349ccb1a1690653ecab3850aed937652 (MD5) / A proteção conferida pela resposta imunológica de cordeiros, às infecções seriadas com Haemonchus contortus (Hc) e Haemonchus placei (Hp) e desafios, por infecções homólogas e heterólogas, com ambas as espécies, foi avaliada. Quarenta e dois cordeiros, com peso corporal inicial médio de 21,3 kg, foram divididos em sete grupos experimentais. No primeiro grupo, 12 cordeiros receberam infecções seriadas (Is) 12 vezes (três vezes por semana) durante quatro semanas, com 500 larvas infectantes (L3) de H. placei e foram posteriormente desafiados (D), em dose única, com 4000 L3 de H. placei (Grupo IsHp+DHp, n=6) ou com 4000 L3 de H. contortus (Grupo IsHp+DHc, n=6). Os animais do segundo grupo (n=12) foram infectados com H. contortus da mesma maneira que o grupo 1 (500 L3, três vezes por semana) e foram desafiados com 4000 L3 de H. contortus (Grupo IsHc+DHc, n=6) ou com 4000 L3 de H. placei (Grupo IsHc+DHp, n=6). O terceiro grupo foi somente desafiado com 4000 L3 de H. placei (Grupo DHp, n=6), 4000 L3 de H. contortus (Grupo DHc, n=6), ou permaneceram livres de infecções durante todo o período experimental (Grupo Controle, n=6). Análises hematológicas e contagem de ovos por grama de fezes (OPG) foram realizadas semanalmente, o plasma sanguíneo foi armazenado para a realização de análises imunológicas (teste de ELISA). Após a eutanásia dos animais os parasitas foram recuperados, bem como tecido e muco abomasal. Animais que receberam infecções homólogas por H. placei (Grupo IsHp+DHp) apresentaram intensa resposta imune com elevados níveis de imunoglobulinas anti-parasita e número de células inflamatórias na mucosa do abomaso. Em adição, esse grupo (IsHp+DHp) apresentou a menor taxa de estabelecimento de parasitas (2,68% de 4000 L3). Estes resultados podem ser associados às infecções em série, que estimularam uma forte resposta imunológica contra a espécie H. placei, pois... / The protection conffered by serial infections with Haemonchus contortus (Hc) and Haemonchus placei (Hp) was evaluated in lambs. Forty two lambs, with initial average body weight of the 21.3 kg, were divided in three experimental groups. In the first group, 12 lambs was serially infected (Si) 12 times (three times a week) for four weeks, with 500 infective larvae (L3) of H. placei and then challenged (Ch), in a single dose, with 4000 L3 of H. placei (Group SiHp+ChHp, n=6) or with 4000 L3 of H. contortus (Group SiHp+ChHc, n=6). The animals of the second group (n=12) were infected with H. contortus, in the same way that group 1 (500 L3, three times a week) and then challenged with 4000 L3 of H. contortus (Group SiHc+ChHc, n=6) or with 4000 L3 of H. placei (Group SiHc+ChHp, n=6). A third group of lambs was single challenged with 4000 L3 of H. placei (Group ChHp, n=6), 4000 L3 of H. contortus (Group ChHc, n=6), or remained uninfected throughout the trial period (Group Control, n=6). Haematological and fecal eggs counts (FEC) occurred weekely, the blood plasma was stored to immunological exams (ELISA test). After the animals sacrifice, the worms were recoverd, as well as, abomasal tissue and mucus. Animals that received homologous infection with H. placei (Group SiHp+ChHp) presented the most intense immune response and number of inflammatory cells in the abomasal mucosa. In adition, this group (SiHp+ChHp) presented the lowest rate of parasite establishment (2.68% of the 4000 L3). These results can be associated to serial infection that stimulated to strong immune respose against H. placei, which presents lower adaptability to sheep. The opposite was observed in animals that only received the challenge infection, with H. placei (group ChHp), in which the rate of establishment was relatively high (25.3%). However, the animals that received heterologous infection, previously infected serially with H. placei and ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-12Bitstream added on 2014-06-13T19:30:55Z : No. of bitstreams: 1 hoffmann_jl_me_botfm.pdf: 1011094 bytes, checksum: 5a00c88dc2c531f42992842568ecd338 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A resposta imune na leishmaniose pode resultar em uma polarização da subpopulação dos linfócitos T, levando a um fenótipo celular distinto, que resultam em proteção imune ou exacerbação da doença. As leishmânias persistem no organismo tanto em infecções assintomáticas como após o tratamento, representando risco em condições de imunossupressão. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da infecção e da imunossupressão com dexametasona associada à pentoxifilina, sobre o peso dos animais, peso do baço, carga parasitária do baço e do fígado, e da imunopatologia quanto à produção de IFN-γ, IL-10, IL-4 e IL-2 em cultura de células esplênicas de camundongos Balb/c infectados com Leishmania chagasi. A infecção não alterou o ganho de peso dos animais, mas sim o peso e o tamanho do baço. A imunossupressão utilizando a dexametasona associada à pentoxifilina afetou tanto ganho de peso, quanto o peso e o tamanho do baço, de animais infectados e não infectados. A imunossupressão não alterou significativamente o curso da carga parasitária, tanto do baço, como do fígado. A dexametasona e a pentoxifilina afetaram a produção das citocinas estudadas, mas não direcionaram o perfil de resposta Th1/Th2 nos animais infectados. / The immune response in leishmaniasis can result in a polarization of a subpopulation of T lymphocytes, leading to a different cell phenotype, resulting in immune protection or exacerbation of the disease. Leishmanias persist in the body both in asymptomatic infections and after the treatment, representing risk in terms of immunosuppression. The objective of this study was to evaluate the effect of infection and immunosuppression with dexamethasone associated with pentoxifylline on the weight of the animals, weight of the spleen, the parasitic load in the spleen and liver, and immunopathology on the production of IFN-γ, IL - 10, IL-4, and IL-2 in spleen cell culture of Balb/c mice infected with Leishmania chagasi. The infection did not alter the animals’ weight gain, but the weight and size of the spleen increased. The immunosuppression using dexamethasone associated with pentoxifylline affected both weight gains, as the weight and size of the spleen of infected and not infected animals. The immunosuppression did not alter significantly the course of the parasite burden of the spleen and the liver. Dexamethasone and pentoxifylline affected the studied cytokines production, but not influenced the profile of Th1/Th2 response in infected animals.

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:03Z : No. of bitstreams: 1 000866514.pdf: 721949 bytes, checksum: b2b82006264cf49d3bb27b0ee11c8afe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Este estudo teve por objetivo avaliar o desempenho zootécnico, a composição corporal, o perfil hematológico, a resposta imune inata, a taxa de sobrevivência frente à infecção experimental com Aeromonas hydrophila e confirmar a presença do probiótico no intestino de tilápia-do-nilo, Oreochromis niloticus, alimentados com adição na ração dos prebióticos: Actigen® mananoligossacarídeo - MOS (P1) e a alga marinha Kappaphycus alvarezii (P2), além do probiótico PAS-TR® composto por Bacillus cereus e Bacillus subtilis (P). Os aditivos foram testados separadamente e em associação (S1 = PAS-TR® + MOS e S2 = PAS-TR® + K. alvarezii). Sendo um grupo alimentado com dieta controle (C). O experimento foi dividido em duas etapas. Na primeira 240 juvenis, com peso médio inicial de 8,86±3,22g, distribuídos aleatoriamente em 6 tratamentos e 4 repetições foram alimentados durante 63 dias com as rações específicas de cada tratamento, para avaliação de desempenho, e coleta de material para as análises propostas. Na segunda etapa, 180 animais foram infectados experimentalmente com Aeromonas hydrophila, após 21 de alimentação teste. O tempo de observação da mortalidade foi de 15 dias pós-inoculação. Não foram encontradas diferenças estatísticas (p>0,05) no desempenho zootécnico, na composição corporal, nas variáveis hematológicas e imunológicas. Foi possível recuperar as bactérias probióticas no trato intestinal dos exemplares alimentados com as dietas adicionadas de probiótico. Os peixes tratados apresentaram melhores índices de sobrevivência (p<0,05) em comparação ao grupo controle quando desafiados com A. hydrophila / This study aimed to evaluate the growth performance, corporal composition, haematological parameters, innate immune response, resistance against the experimental infection with Aeromonas hydrophila and confirm the presence of probiotic bacteria in the intestines of Nile tilapia, Oreochromis niloticus, fed with addition of prebiotics Actigen® MOS - MOS (P1), Kappaphycus alvarezii seaweed (P2), and PAS-TR® probiotic composed of Bacillus cereus and Bacillus subtilis (P). The additives were tested separately and in combination (S1 = PAS-TR® + MOS and S2 = PAS-TR® + K. alvarezii). One group was fed with control diet (C). The experiment was divided into two stages. In the first stage, 240 juveniles, with initial average weight of 8.86 ± 3.22g, distributed in a completely randomized design of 6 treatments and 4 replications were fed with the specific diets for 63 days. In the second stage, the feeding period was 21 days and the 180 animals were experimentally infected with Aeromonas hydrophila on the 22nd day. The observation of mortality rates period was 15 days post-infection. There were no statistical differences (p> 0.05) on performance, corporal composition, haematological and immunological parameters. It was possible to recover the probiotic bacteria in the intestinal tract of exemplary fed with diets containing added probiotics. The fish treated with immunostimulants presented better survival rates (p <0.05) compared to the control group when challenged with A. hydrophila, confirming the feasibility of including these in the diet

Made available in DSpace on 2015-07-02T02:14:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000471496-Texto+Completo-0.pdf: 3473251 bytes, checksum: 4c713013d9c0095e2989171bafa30fb2 (MD5) Previous issue date: 2015 / The elderly population is now the fastest growing in the world. The immune system becomes compromised with age, being less effective in fighting malignancies. An amended fee of CD8 T cells, increased compared to CD4 cells (usually more frequent in the blood) defines the concept of immune risk profile in the elderly (less than 1 ratio). In this research, we studied the immunological profile of 58 women with breast cancer, determining the ratio of CD4+/CD8+ in peripheral blood. We compare this link into groups according to age of the patient (less or more than 60 years), lymph node involvement, tumor size, the immunohistochemical profile, and the occurrence of adverse events (local recurrence, axillary recurrence and metastasis). The ratio of CD4+ /CD8+ lymphocytes average was 1. 87 (1. 1 to 3. 32), therefore, no patient had a concept immune risk profile. Comparing the groups according to age, the presence of lymph node metastases, tumors smaller or higher than 2 cm, were no statistically significant differences. However, the CD4 / CD8 ratio in patients positive for human epidermal growth factor (HER-2 / neu) was higher than in samples of patients with hormone receptor positive carcinoma and Her-2 / neu negative (p = 0. 036 ). As far as was possible to search, these are the first data on CD4+ and CD8 T+ cells specifically in a population with breast cancer. The increase in the number of CD4+/CD8+ current evidenced in these women with Her-2 carcinoma / neu positive, seems to signal an activation of the immune system in women with poor prognosis of tumors. / A população de idosos é hoje a que mais cresce no mundo. O sistema imune torna-se comprometido com a idade, sendo menos eficaz no combate a neoplasias malignas. Uma taxa alterada de células T CD8 positivo (CD8+), aumentada em relação às células CD4 positivo (CD4+) (normalmente mais freqüentes no sangue) define o conceito de perfil de risco imunológico no idoso (relação menor que 1). Nesta pesquisa, estudamos o perfil imunológico de 58 mulheres com câncer de mama, determinando a relação das células T CD4+/CD8+ no sangue periférico. Comparamos esta relação em grupos conforme a idade da paciente (menos ou mais que 60 anos), o comprometimento linfonodal, o tamanho do tumor, o perfil imunohistoquímico, e a ocorrência de eventos adversos (recidiva local, axilar e metástases). A proporção de linfócitos T CD4+/CD8+ média foi 1,87 (1,1 a 3,32), portanto, nenhuma paciente apresentou por conceito perfil imunológico de risco. Comparando os grupos conforme a idade, a presença de metástases linfonodal, tumores menores verso maiores que 2cm não houveram diferenças estatisticamente significativas. No entanto, a relação CD4+/CD8+ em pacientes positivos para o fator de crescimento epidérmico humano (Her-2/neu) foi mais elevada do que em amostras de pacientes com carcinomas receptor hormonal positivos e Her-2/neu negativo (p=0,036). Tanto quanto foi possível pesquisar, estes são os primeiros dados sobre células T CD4+ e CD8+ especificamente em uma população com câncer de mama. O aumento do número de linfócitos T CD4+/CD8+ circulante evidenciado nestas mulheres com carcinoma Her-2/neu positivo, parece sinalizar uma ativação do sistema imunológico em mulheres com tumores de pior prognóstico.

Made available in DSpace on 2015-11-06T01:05:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000476006-Texto+Completo-0.pdf: 2870247 bytes, checksum: 76076f40e5be705d3be21ff4d7ceb1f3 (MD5) Previous issue date: 2015 / Aging has been associated with increased generation of free radicals as well as immunosenescence. Previous studies have identified older individuals with inverted T CD4:CD8 cell ratio and increased immunity to cytomegalovirus (CMV). Here, we investigated markers of oxidative stress and antioxidant defences in older individuals with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. From 421 healthy community-dwelling older adults recruited, 61 subjects were identified with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. Older individuals with a CD4:CD8 ratio < 1 had increased levels of plasma advanced oxidation protein products (AOPP) and Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP), but reduced levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) as compared to subjects with normal CD4:CD8 T-cell ratio. The CMV IgG serology was negatively correlated with CD4:CD8 ratio. These markers were more evident among elderly men than women. Our data suggest a close relationship between chronic CMV infection and oxidative profile in older individuals in the midst of its influence on the peripheral T-cell subsets. / O envelhecimento tem sido associado com o aumento da geração de radicais livres, bem como com a imunossenescência. Estudos anteriores já haviam identificado os idosos que apresentavam a inversão da razão CD4:CD8 e a sorologia mais acentuada para citomegalovírus (CMV). Aqui, investigamos marcadores de estresse oxidativo e as defesas antioxidantes em idosos com a relação invertida entre as células T CD4 e CD8. De um total de 421 idosos recrutados na comunidade, 61 sujeitos foram identificados com a inversão da razão CD4:CD8. Os idosos com CD4:CD8<1 tinham níveis aumentados de produtos proteicos de oxidação avançada (AOPP) e atividade antioxidante total pelo método de redução do ferro (FRAP) no plasma, mas níveis reduzidos de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), em comparação com indivíduos com razão CD4:CD8 normais. A sorologia para CMV (IgG) foi negativamente correlacionada com a razão CD4:CD8. Estes marcadores foram mais evidentes entre os homens do que as mulheres idosas. Nossos dados sugerem uma estreita relação entre a infecção por CMV crônica e perfil oxidativo em indivíduos mais velhos no meio de sua influência sobre os subtipos de células T periféricas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnológico / Heme (Ferro Protoporfirina IX), uma molécula ubíqua presente em organismos de todos os reinos, é composta de um átomo de ferro ligado a um anel tetrapirrólico. Como grupamento prostético de apoproteínas inativas, o heme desempenha várias funções biológicas determinadas em parte pelo polipeptídeo associado a ele. Doenças de hemólise elevada ou dano celular extensivo podem levar a altos níveis de heme livre , como a anemia falciforme, malária, febres hemorrágicas e sepse. O heme induz estresse oxidativo e tem diversas propriedades próinflamatórias. Uma das principais características da resposta inflamatória é o recrutamento de leucócitos da vasculatura para os tecidos. O heme parece afetar este processo de muitas maneiras: a) induzindo a expressão de moléculas de adesão em células endoteliais in vitro ou in vivo; b) aumentando a permeabilidade vascular; c) aumentando a expressão e secreção de quimiocinas; d) induzindo a migração de leucócitos in vivo e in vitro. O mecanismo pelo qual o heme ativa as células do sistema imune inato causando inflamação não é totalmente compreendido. Nós recentemente observamos que o heme ativa macrófagos através do TLR-4. Considerando que o heme induz a migração de neutrófilos in vitro, nós hipotetizamos que o heme tenha um efeito quimiotático direto sobre este leucócito através da ativação de um receptor acoplado a proteína G. Nós mostramos que o heme induz a migração de neutrófilos in vivo e in vitro e estimula a secreção de citocinas de forma dose-dependente. Sangue, hemoglobina e diversos análogos do heme apresentam uma capacidade semelhante em recrutar neutrófilos in vivo. Por outro lado, a biliverdina e as mesoporfirinas não são eficientes em recrutar neutrófilos e o tratamento com mesoporfirina in vivo inibe o efeito do heme sobre o recrutamento. Finalmente, o efeito quimiotático do heme foi revertido com o uso de toxina pertussis. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem que o heme induza a quimiotaxia de neutrófilos através da ativação de um receptor acoplado a proteína G. / Heme (Iron Protoporphyrin IX), a ubiquitous molecule present in organisms of all kingdoms, is composed of an atom of iron linked to the four ligand groups of porphyrin. As a prosthetic moiety on inactive apo-heme proteins, heme provides a wide range of biological functions determined in part by the polypeptide associated to it. Diseases of increased hemolysis or extensive cell damage can lead to high levels of free heme, as sickle cell anemia, malaria, hemorrhagic fevers, and sepsis. Heme induces oxidative stress and has several proinflammatory activities. A hallmark of the inflammatory response is the recruitment of leukocytes out of the vasculature to tissues. Heme seems to affect this process in several ways: a) inducing cell adhesion molecule expression on endothelial cells in vitro or in vivo; b) increasing vascular permeability; c) enhancing chemokine expression and secretion; d) inducing migration of leukocytes in vivo and in vitro. The mechanism by which heme activates cells of the innate immune system causing inflammation is not fully characterized. We have recently observed that heme activates macrophages through TLR-4. Considering that heme induces neutrophil migration in vitro, we hypothesize that heme has a direct chemotactic effect on this leukocyte through activation of a G protein coupled receptor. In the present work we show that heme induces neutrophil migration in vivo and in vitro and stimulates the secretion of the inflammatory cytokines, IL-6 and TNF-a, in a dose-dependent fashion. Blood, hemoglobin and diverse heme analogs are also able to induce neutrophil recruitment. In contrast, biliverdin and mesoporphyrins are not efficient to recruit neutrophil and mesoporphyrin treatment in vivo inhibits the heme-induced neutrophil migration. Finally, the chemotactic effect of heme was abolished by pertussis toxin treatment in vitro . Taken together, these results suggest that heme induces neutrophil chemotaxis by activation of a G protein coupled receptor.

Orientador: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Leonardo Susumu Takahashi / Banca: Marco Antônio de Andrade Belo / Banca: Ana Paula Baldan / Banca: Maria Célia Portella / Resumo: Este trabalho está dividido em três artigos no formato para a submissão e publicação. No primeiro, testamos níveis de carboidratos (CHO) associados ao jejum e realimentação como estratégia de induzir as vias catabólicas e anabólicas dos diferentes nutrientes e auxiliar no entendimento da intolerância dos peixes aos CHOs; no segundo, avaliamos o uso da amônia sérica como indicador de dietas desbalanceadas; e, ainda, no terceiro artigo avaliamos como o jejum afeta a imunidade e a estratégia metabólica adotada pelos peixes para sustentar a resposta imune em condições de déficit energético. Os resultados indicam que o pacu pode tolerar altos níveis de CHO, uma vez que os valores de glicemia e glicogênio hepático foram semelhantes entre os peixes que ingeriram 25 e 45% CHO, além de suportar longos períodos de jejum (30 dias), sem comprometer a capacidade de resposta de ganho em peso. Entretanto, 25% CHO resultou em menor acúmulo de lipídeo visceral, associado com maior lipólise (mais ácidos graxos livres circulantes) e menores níveis de triglicerídeo e colesterol circulantes após 30 dias de alimentação. Após 30 dias de jejum, os peixes consumiram as reservas energéticas avaliadas, mas após um dia de re-alimentação, apenas as reservas de glicogênio e os níveis circulantes de triglicerídeo e colesterol normalizaram, enquanto as reservas lipídicas teciduais foram restauradas ao final dos 30 dias de realimentação. As atividades da hexoquinase (HK), glicoquinase (GK), glicose 6-fosfato desidrogenase (G6PDH) e aspartato aminotransferase (AST) acompanharam o perfil das variáveis metabólicas, reforçando que o pacu é capaz de usar altos níveis de CHO e ajustar seu metabolismo para suportar longos períodos de jejum. Como foram utilizadas duas dietas, uma balanceada em proteína e energia (45% CHO), e outra desbalanceada (25% CHO), testamos a determinação da concentração da amônia plasmática para validar ... / Abstract: This study is divided in three papers formatted to be submitted and publishing. In the first one, we tested carbohydrate (CHO) levels associated to fasting and refeeding as strategy to induce catabolic and anabolic pathways of different nutrients and assist in understanding of CHO intolerance in fish; in the second, we evaluated the serum ammonia as indicator of unbalanced diets utilization; and also, in a third paper, we evaluated how fasting affect the fish immunity and the metabolic strategies adopted by fish to sustain the immune response under energy deficit conditions. The results indicate pacu use efficiently high CHO levels, once values of blood glucose and liver glycogen were similar between fish fed with 25 and 45% CHO, besides this, pacu tolerates long-term fasting (30 days), without compromise the ability of weight gain response. However, 25% CHO resulted in lower mesenteric fat accumulation and higher lipolysis (more current non-esterified fatty acids) and lower levels of triglycerides and cholesterol after 30 days feeding. After 30 days fasting, fish consumed the evaluated energy reserves, but after one day re-feeding, only reserves of liver glycogen, triglycerides and cholesterol normalized, while the tissue lipid reserves were reestablished at the end of 30 days re-feeding. The hexokinase (HK), glucokinase (GK), glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) and aspartate aminotransferase (AST) follow the metabolic variables profile, reinforcing that pacu is able to use high CHO levels and adjust their metabolism to tolerate long-term fasting. As we used two diets with different protein/energy ratio, we tested the serum ammonia determination to validate the use of this parameter as indicator of unbalanced diets utilization in pacu. The AST activity was used to prove the occurrence of protein catabolism after feeding fish during 30 days with both diets. At the end of period, we observed increasing in serum ammonia and AST ... / Doutor

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Marcos Ferreira Minicucci / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Virmondes Rdorigues Junior / Banca: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Resumo: Este projeto foi baseado na propriedade imunorreguladora da hsp65 micobacteriana. A proposta geral foi avaliar se a vacina gênica contendo o gene da hsp65 do Mycobacterium leprae (pVAXhsp65) pode ser utilizada como estratégia profilática ou terapêutica na encefalite autoimune experimental (EAE). Na primeira etapa desta investigação constatamos que camundongos previamente imunizados com pVAXhsp65 perderam menos peso e apresentaram sintomatologia clínica mais branda. Essa melhora clínica esteve associada com redução da produção de IL-10 por células esplênicas estimuladas in vitro com MOG ou ConA. A análise histopatológica revelou redução do processo inflamatório na medula lombar dos animais previamente vacinados em comparação com o grupo controle EAE. Na segunda etapa avaliamos o efeito terapêutico de 4 doses de pVAXhsp65 no desenvolvimento da EAE. A vacina foi capaz de induzir resposta imune específica para hsp65 em camundongos com EAE, o que foi constatado pela produção de IFN-g e IL- 10. Além disso, a terapia modulou a imunidade específica para MOG reduzindo a produção de IFN-g, IL-6 e IL-17 por células esplênicas. Essa modulação não foi, entretanto, capaz de alterar o decurso clínico da doença. O processo inflamatório no sistema nervoso central (SNC) e a frequência de células T reguladoras (Tregs) na periferia e no SNC também não foram alterados pelo tratamento. Na última etapa desse projeto avaliamos mais detalhadamente a participação da IL-17 no decurso clínico da EAE. Na fase aguda (19º dia) foram observados perda acentuada de peso e elevado escore clínico (média de 2,75) enquanto que na fase crônica os animais recuperaram o peso perdido e o escore clínico se estabilizou em torno de 1,5. A produção de citocinas por órgãos linfoides secundários caracterizou-se por níveis elevados de IFN-g na fase aguda e de IL-17 na fase crônica. Já os linfócitos infiltrantes do SNC estimulados in... / Abstract: This project was mainly based on the immunoregulatory property of the mycobacterial hsp65. The proposal of this work was to evaluate if a DNA vaccine containing the hsp65 mycobacterial gene (pVAXhsp65) could be used as a prophylactic or therapeutic strategy to control experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) development. In the first part of this investigation we demonstrated that mice previously vaccinated with pVAXhsp65 lost less body weight and presented lower clinical score. Clinical improvement was associated with lower production of IL-10 by spleen cell cultures stimulated with MOG or ConA. Comparative histopathological analysis revealed less inflammatory process in the lumbar spinal cord of previously vaccinated mice in comparison to EAE control group. The second approach was designed to evaluate the possible therapeutic effect of pVAXhsp65 on EAE development. Even though this vaccine was immunogenic for mice with EAE and also able to downmodulate the induction of cytokines by MOG, it was not able to decrease the clinical severity of the disease. Vaccination did not decrease intensity of the inflammatory process neither the frequency of regulatory T cells (Tregs) in the central nervous system (CNS). Finally, we investigated the contribution of the peripheral and local IL-17 production to acute and chronic EAE stages. Mice submitted to EAE induction presented an initial acute phase characterized by accentuated weight loss and high clinical score, followed by a partial recovery when the animals reached normal body weight and smaller clinical scores. Spleen cells stimulated with MOG produced significantly higher levels of IFN-g during the acute period whereas similar IL-17 levels were produced during both Abstract disease stages. CNS infiltrating cells stimulated with MOG produced similar amounts of IFN-g but IL-17 was produced only at the acute phase of EAE. The percentage of Foxp3+ Treg cells, at the spleen and the CNS, was... / Doutor

Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: Mônica Serra / Banca: Fabiana Garcia / Resumo: Esta revisão discorre como a biotecnologia pode ser aplicada no tratamento de efluente de indústria de pescado para obtenção de biomassa e, ainda, como esta biomassa pode ser utilizada na alimentação de peixes. Atualmente, com a intensificação da aquicultura há o surgimento de surtos de doenças parasitárias e bacterianas que devastam economicamente a criação de peixes. Com isso, surgem os problemas relacionados ao uso inconsequente e errôneo de produtos como antimicrobianos e desinfetantes com a finalidade de controlar mortalidades e evitar grandes perdas econômicas. A fim de contornar esse obstáculo do uso indiscriminado de substâncias não registradas para a aquicultura e controlar o surgimento das doenças em peixes, o emprego de imunoestimulantes e vacinas têm se destacado como métodos preventivos eficazes e seguros. Algumas substâncias podem atuar como imunoestimulante e influenciar as respostas do sistema imune dos peixes e o seu desempenho produtivo. Rubrivivax gelatinosus é uma bactéria gram negativa, púrpura fototrófica, anaeróbica e com movimentação por flagelo que despolui efluentes industriais pois utiliza o carbono orgânico como principal fonte de carbono para o seu crescimento, contribuindo assim para a retirada de carbono e nitrogênio da água. Além disso, esta bactéria fornece uma biomassa com elevado valor nutricional, pois contém elevada quantidade de proteínas e carotenóide da série esferoidene, considerado potente imunoestimulante devido sua ação antioxidante. O uso desta bactéria otimiza a cadeia produtiva de pescados, renovando a água poluída de efluente, e ainda, nos proporciona através da biotecnologia empregada, uma massa biológica imunoestimulante para uso na própria aquicultura / Abstract: This review clarifies how biotechnology may be applied on treatment of fish industry effluent to obtain biomass, and also, how this biomass can be applied as a fish food supplement. Currently, with the intensification of aquaculture has been occurrence of parasitic and bacterial outbreaks diseases that economically devastate the fish farming. Thus, arising problems related to inconsistent and incorrectly use of products such as antimicrobials and disinfectants applied in order to control mortality and avoid huge economic losses. To circumvent these obstacles of indiscriminate use of unregistered substances and in order to control the emergence of fish diseases, the use of immunostimulants and vaccines has been shown to be effective as prevention methods besides safety. Some substances can act as an immunostimulant and influence the responses of the fish immune system and its productive performance. Rubrivivax gelatinosus is a gram negative bacterium, purple phototrophic, anaerobic with movement by flagellum which depollute industrial effluents because it uses organic carbon as the main carbon source for growth, thereby, contributing to the removal of carbon and nitrogen from the water. Furthermore, this bacterium provides a biomass with a high nutritional value because it contains a high amount of protein and carotenoid of spheroidene class, considered potent immunostimulant due to its antioxidant action. The use of this bacterium optimizes the fish supply chain, renewing the polluted wastewater, and also gives us by the biotechnology employed, a biological mass immunostimulatory for use in aquaculture itself / Mestre