Made available in DSpace on 2016-04-07T13:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 521.pdf: 1271118 bytes, checksum: 875497805ab7b1625a92ed477fad5b66 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Dengue é considerada a mais importante arbovirose, constituindo um grave problema de saúde pública no mundo. A doença é causada por um Flavivirus com quatro sorotipos (DENV-1, 2, 3 e 4) antigenicamente similares, mas imunologicamente distintos. A circulação simultânea desses sorotipos é apontada como um importante fator de risco para determinação dos casos graves da doença, pois aumenta a probabilidade de ocorrência de infecções secundárias e o surgimento de genótipos mais virulentos. Inquérito sorológico de base populacional conduzido na cidade do Recife, Pernambuco, entre 2005-2006, em 2.833 indivíduos com idades entre 05 e 64 anos, residentes em três áreas com condições sócio-econômicas distintas encontrou prevalência global superior a 80 por cento, indicando elevada transmissão da infecção no município. Esse estudo investigou a imunidade antidengue sorotipo específica em uma amostra aleatória de 324 participantes com sorologia positiva (IgG) de uma das áreas investigadas. Além disso, estimou-se a proporção de susceptíveis aos diferentes sorotipos na população, com base na extrapolação dos resultados da amostra. O teste de neutralização por redução do número de placas (PRNT) foi utilizado na sorotipagem. A freqüência de infecções monotípicas e multitípicas foram analisadas de acordo com grupo etário, sexo, dengue auto-referida e busca por atendimento. Observou-se elevada proporção de indivíduos imunes ao DENV-3 (35,6 por cento; IC: 86,7-96,6) e de infecções multitípicas (61,6 por cento), não tendo sido observado diferenças entre os grupos etários (p=0,395). Houve maior proporção de susceptíveis aos sorotipos DENV-1 (15 anos

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 antonio_goncalves_ioc_dout_2013.pdf: 2946820 bytes, checksum: 18a0b77b3b95468e0be2f5a0005d91c4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O vírus da dengue compreende quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV1-4) e até o momento não existe nenhuma vacina disponível comercialmente contra este patógeno. Alguns autores apontam a proteína NS1 de DENV como um antígeno protetor. Entretanto, ainda não se sabe ao certo o seu papel na replicação viral, bem como na indução de proteção ou patogênese. Nosso grupo vem trabalhando com as vacinas de DNA contra a dengue, testando-os em modelos murinos. Camundongos imunizados com uma vacina de DNA (pcTPANS1), que contém o gene NS1 de dengue 2 (DENV2), mostraram altos níveis de anticorpos anti-NS1 e quase 100 % de proteção quando desafiados com DENV2 (4 LD50). Este projeto tem por objetivo o mapeamento da resposta imune protetora gerada pela vacina pcTPANS1. Os resultados revelaram que 50 % dos animais que receberam o soro de outros camundongos, previamente imunizados com o plasmídeo pcTPANS1, sobreviveram à infecção após o desafio com DENV2 (4 LD50). Entretanto quando utilizamos um segundo estoque viral com 40 LD50, todos os animais apresentaram altas taxas de mortalidade e fortes sinais clínicos da infecção, com exceção do grupo de camundongos imunizados com a vacina pcTPANS1. Posteriormente analisamos o papel da resposta imune celular na proteção. O ensaio de depleção in vivo mostrou que todos os animais vacinados e depletados de células CD4+ morreram após o desafio com DENV2, enquanto que 60 % dos animais depletados de CD8+ sobreviveram à infecção. Os ensaios de transferência adotiva de células T mostraram proteção somente no grupo de camundongos que receberam concomitantemente soro e linfócitos TCD4+ provenientes de animais imunizados com a vacina pcTPANS1 As células obtidas do baço de animais vacinados com o plasmídeo pcTPANS1 foram capazes de secretar IFN-\F067 após estímulo com o peptídeo 265AGPWHLGKL273, contido na proteína NS1 de DENV2 e descrito na literatura como específico para células TCD8+\F02E\F020Também avaliamos in vivo uma possível atividade citotóxica específica para este peptídeo. Nossos resultados mostraram que os camundongos imunizados com a vacina pcTPANS1 promoveram a lise das células alvo pulsadas anteriormente com o peptídeo. Além disso, quando células alvos foram administradas 72 horas após o desafio com DENV2, houve um aumento significativo do percentual de lise. Em outro ensaio para avaliação de citotoxicidade in vivo, os animais foram imunizados com pcTPANS1 e submetidos ao tratamento para depleção de células CD4+ ou CD8+ Nossos resultados demonstraram que a atividade citotóxica específica para o peptídeo 265AGPWHLGKL273 é atribuída principalmente à população de células TCD8+, pois quando analisamos os resultados obtidos com animais imunizados e depletados de células TCD8- o percentual de lise foi reduzido para 37,9 %, corroborando os dados da literatura que descreve este peptídeo como específico para células TCD8+. Além disso, avaliamos a indução de possíveis danos gerados com a vacina pcTPANS1, tanto por análises histopatológicas do fígado quanto por dosagens dos níveis séricos de enzimas hepáticas, sem a detecção de qualquer alteração nos animais imunizados. De um modo geral, o conjunto de resultados obtidos nesse trabalho sugere que a proteção mediada pela vacina pcTPANS1 no nosso modelo experimental está relacionada principalmente com a resposta de células TCD4+ em associação com anticorpos anti-NS1, embora a vacina ative também uma resposta de células TCD8+ citotóxica / Dengue virus comprises four antigenically distinct serotypes (DENV1 - 4) . Nowada ys, there is no commercially available vaccine against this pathogen. Some authors point out the NS1 protein fr om DENV as a protective antigen, h owever, its role in viral replication, as well as in the induction of protection or pathogenesis, remains still unclear. Our group has been working with DNA vaccines a gainst dengue testing them in murine models. Mice immunized with one DNA vaccine (pcTPANS1), which contains the NS1 gene from dengue 2 (DENV2), showed high levels of anti - NS1 antibodies and almost 100 % protection when challenged with DENV2 (4 LD 50 ). This project aims to map the protective immune response generated by the pcTPANS1. Results showed that 50 % of animals that received serum from other mice, previously immunized with the pcTPANS1, survived infection after challenge with DENV2 (4 LD 50 ). However when we used a second viral stock with 40 LD 50 , all animals showed high mortality rates and strong clinical signs of infection, except the mouse group immunized with the pcTPANS1 vaccine. Subsequently, we analyzed the role of the cellular immune response in protection. The in vivo depletion assay showed that all vaccinated and depleted from CD4 + cells died after challenge with DENV2, whereas 60 % of CD8 + depleted animals survived infection. The assays o f T cell adoptive transfer showed protection only in the mouse group receiving concomitantly serum and CD4 + T lymphocytes recovered from animals immunized with the pcTPANS1 vaccine . Splenocytes obtained from pcTPANS1 vaccinated animals were able to secrete IFN   after stimulation with the peptide 265 AGPWHLGKL 273 , present in NS1 protein from DENV2 and described as specific for CD8 + T cells  We also analyzed in vivo a possible cytotoxic activity specific for this peptide. Our results showed that mice immuniz ed with the pcTPANS1 vaccine promoted the lysis of target cells previously pulsed with the peptide. Besides, when target cells were given 72 hours after challenge with DENV2, there was a significant increase in the lysis percentage. In another assay for th e assessment of in vivo cytotoxicity, animals were immunized with pcTPANS1 and subjected to treatment for depletion of CD4 + or CD8 + cells. Our results showed that the cytotoxic activity specific for the peptide 265 AGPWHLGKL 273 is attributed mainly to the population of CD8 + T cells, because when we analyzed results obtained from animals immunized and depleted of CD8 Tcells, the lysis percentage was reduced to 37.9 %, corroborating data from literature which describes this peptide as specific for CD8 + T c ells. Moreover, we evaluated the induction of possible damages generated by the pcTPANS1 vaccine, either by histopathological analysis in the liver or by quantification of serum levels of hepatic enzymes, without detection of any alteration in immunized an imals. In general, results obtained in this work suggest that protection mediated by the pcTPANS1 vaccine in our experimental model is related mainly to the CD4 + T cells response in association with anti - NS1 antibodies, although the vaccine also activate s a CD8 + T cells cytotoxic response.

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 504.pdf: 2173150 bytes, checksum: abae2766ff91aefd467293045257eb6d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Nas últimas quatro décadas estudos mostram que inflamações e infecções modulam a expressão e atividade de enzimas citocromo P450 (CYP). A modulação negativa das atividades de CYPs hepáticas é o efeito mais frequente, mas a regulação positiva também tem sido relatada. Entretanto, os mecanismos pelos quais estímulos inflamatórios e infecções modulam a expressão e a atividade destas enzimas de biotransformação permanecem obscuros. Este estudo foi conduzido para ajudar a esclarecer os mecanismos pelo quais Cyp2a5, 1a1/2 e 2b9/10 são reguladas no tecido hepático quando a resposta imune é ativada. Na primeira parte do trabalho, avaliamos a expressão e atividade constitutiva e induzida de Cyp2a5 em camundongos fêmeas adultas de oito linhagens/colônias. Possíveis relações da indução de Cyp2a5 com a expressão aumentada da heme-oxigenase 1 (HO-1) e dano hepático também foram investigadas. Níveis de mRNA da Cyp2a4/5 e hmox-1 no tecido hepático foram determinados por qPCR, enquanto as atividades da COH (Cyp2a5), EROD (Cyp1a1/2) e BROD (Cyp2b9/10) foram avaliadas em microssomos hepáticos, e a toxicidade hepática provocada pelo tratamento com os indutores examinada medindo os níveis séricos de transaminase (ALT). Os resultados mostraram que os níveis constitutivos da atividade de Cyp2a5 variaram acentuadamente entre as linhagens, sendo a atividade mais elevada registrada em DBA-2, mas os níveis constitutivos de mRNA de Cyp2a4/5 e a expressão de HO-1 não apresentaram grandes variações. O pirazol (PIR) induziu a expressão e atividade de Cyp2a5 em todas as linhagens, o fenobarbital (FEN) apenas no DBA-2, enquanto a expressão de HO-1 não foi alterada pelos tratamentos. / Em contraste com o observado com Cyp2a5, as atividades constitutivas de Cyp1a1/2 e 2b9/10 exibiram apenas discretas variações entre as linhagens. O PIR praticamente não teve efeito sobre EROD e BROD, mas o FEN regulou positivamente as atividades de Cyp1a1/2 e 2b9/10. A hepatotoxina PIR induziu a expressão e atividade de Cyp2a5 em doses em que não provocou qualquer aumento de ALT. Na segunda parte do trabalho, avaliamos os efeitos do LPS sobre a atividade de Cyp2a5, 1a1/2 e 2b9/10 em fêmeas DBA-2, e investigamos se o bloqueio da resposta inflamatória, com a administração concomitante de pentoxifilina (PTX), atenuaria ou aboliria os efeitos do LPS. Os resultados mostraram que o LPS deprimiu as atividades de Cyp1a1/2 e 2b9/10 apenas em doses altas, mas o efeito sobre a atividade de Cyp2a5 seguiu uma curva dose-resposta não linear e não monotônica (forma de U , com depressão em doses baixas, retornando aos níveis basais com as doses mais altas). A atenuação do aumento da produção de citocinas e NO pelo co-tratamento LPS e PTX não alterou os efeitos da endotoxina sobre as atividades de Cyp1a1/2 e 2b9/10, sugerindo que a regulação negativa não depende do aumento dos níveis de NO e citocinas no sangue. O co-tratamento, todavia, modificou os efeitos relacionados à dose de LPS sobre a atividade de Cyp2a5: a depressão pelas doses baixas de LPS foi mantida, mas prolongou-se a extensão da faixa de doses em que o LPS causa depressão de COH, mostrando que o co-tratamento pareceu abolir a volta aos níveis quase basais de atividade de Cyp2a5 notado em doses altas. Por outro lado, o bloqueio da produção de NO pelo co-tratamento com LPS e aminoguanidina (Ag, inibidor seletivo de NOS2) mostrou que o retorno da atividade de Cyp2a5 aos níveis basais em doses altas de LPS foi abolido. A partir dos resultados aqui apresentados, é possível supor que os níveis aumentados de NO de alguma forma deflagram a transição da regulação negativa para a positiva da atividade de Cyp2a5.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T12:56:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T12:56:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T12:56:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:52Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf.txt: 157030 bytes, checksum: c1e93a8d2c64e66d80837be88c555677 (MD5) Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A dengue é uma doença viral transmitida de mosquitos para humanos sendo a arbovirose mais prevalente em países tropicais e subtropicais, atingindo milhões de pessoas em diferentes regiões do mundo. A dengue é causada pelo Dengue vírus (DENV), membro da família Flaviviridae, que possuem 4 sorotipos geneticamente distintos conhecidos como DENV 1-4. Uma vacina eficiente necessita de gerar resposta imune tetravalente balanceada. Para alcançarmos essa imunidade tetravalente balanceada,trabalhamos com a hipótese de que proteínas quimérica s expressando epítopos imunogênicos dos quatro sorotipos do DENV possam ser utilizadas no desenvolvimento de uma vacina segura e/ou um sistema de diagnóstico eficiente. Para este estudo onze proteínas quiméricas foram desenhadas contendo regiões de proteínas com potencial imunogênico derivado do envelope, capsídeo, membrana e/ou da proteína não estrutural NS1, dos quatro sorotipos do DENV. Tais regiões foram selecionadas in silico utilizando- se o algoritmo BepiPred. Regiões com alta homologia entre os quatro sorotipos do DENV foram preferencialmente incluídas, mas regiões antigênicas de um ou mais sorotipos do DENV também foram utilizados. As proteínas quiméricas foram construídas pela adição de resíduos de aminoácidos entre as sequências selecionadas, chamados de espaçadores, para que a estrutura dos epítopos expressos fosse mantida. A sequência final de aminoácidos foi traduzida e a sequência de nucleotídeos foi otimizada utilizando o algoritmo LETO 1.0 (Entelechon). Todas as onze proteínas quiméricas foram produzidas utilizando os vetores de expressão pET 28 TEV, pQE-9 ou pET-21ª, transformados em E. coli BL21 ou M15 e foram purificadas por cromatografia de afinidade utilizando resina de níquel para realização de ensaios de Western blot e ELISA para testar a reatividade das proteínas com soros de indivíduos já infectados pelo DENV e indivíduos nunca infectados e testes de imunogenicidade através da imunização de camundongos das linhagens BALB/c e C57BL/6. Nossos resultados mostraram um reconhecimento específico de cinco proteínas quiméricas com soros de pacientes sabidamente infectados pelo DENV-1, DENV-2 ou DENV-3. Além disso, a imunização de camundongos com a proteína quimérica EnvEpII, mostrou que esta proteína foi capaz de estimular uma produção robusta de anticorpos IgG1, IgG2a e IgG2c nas duas linhagens de camundongos testadas e de anticorpos neutralizantes em C57BL/6. Além disso, foi observada a ativação de células T CD4+ e CD8+ em BALB/c e o aumento dos níveis das citocinas IL-2, IL-4, IL-17 e IFNγ, quando camundongos foram imunizados com a proteína EnvEpII. Nossos resultados demonstram que desenhar, sintetizar, expressar e purificar proteínas quiméricas em sistemas bacterianos é viável e, dessa forma, proteínas artificiais podem ser estudadas como candidatas para o desenvolvimento de vacinas e/ou sistemas de diagnóstico contra doenças infecciosas / Dengue is the most common mosquito-borne viral disease of humans and the most prevalent arbovirus in tropical and subtropical countries, infecting thousands individuals annually in different regions of the world. Dengue is caused by Dengue virus (DENV), members of the Flaviviridae familyand is composed by 4 genetically distinct serotypes referred to as DENV 1–4. A safe vaccine demands a balanced tetravalent immune response. To address the balanced immune response, we hypothesized that chimeric proteins with potential immunogenic epitopes from the four DENV serotypes can be used to develop a safe dengue vaccine and/or an efficient diagnostic system. We designed eleven chimeras, for this the most potentially immunogenic regions of proteins derived from envelope, capsid, membrane and/or non-structural protein 1, NS1, from all DENV serotypes were in silico selected using the BepiPred algorithm. High homology regions among the four DENV serotypes were preferentially included, but antigenic regions from single or pairs of DENV serotypes were also used. The chimeras were constructed by adding non immunogenic amino acid residues between the selected sequences, named spacers residues, thus the expressed epitopes structure was maintained. The final chimeric amino acid sequence was back translated and the nucleotide sequence was optimized using the LETO 1.0 algorithm (Entelechon). All the eleven chimeric proteins were produced using the expression vectors pET 28 TEV, pQE-9 and pET-21a, transformed in E. coli BL21 or M15, and purified by Nickel-affinity chromatography to perform the Western blot and ELISA assays to test their reactivity with sera of DENV-infected patients and DENV-negative sera and to test their immunogenicity through the immunization of mice strains BALB/c and C57BL/6. Our results showed a specific recognition of five proteins by sera DENV-1, DENV-2 or DENV-3 infected patients. Moreover, the immunization using the chimera EnvEpII, shows that this protein are able to stimulate a robust production of antibodies IgG1, IgG2a and IgG2c in both mice strains tested and neutralizing antibodies were produced in C57BL/6. We also noted the activation of T cells CD4+ and CD8 + in BALB/c and the production of IL-2, IL-4, IL-17 and IFNγ when we immunized the mice with EnvEpII. Our results indicating that design, synthesize, express and purify artificial proteins in bacterial systems is viable and, thus, these proteins can be studied as candidates for the development of vaccines and/or diagnostic systems against infectious diseases.

Base teórica - A fisiopatologia da reestenose coronária pós angioplastia está relacionada ao aumento da produção de matriz extracelular, proliferação celular e alterações morfológicas da parede do vaso, proporcionadas principalmente por células musculares lisas e macrófagos. Embora as citocinas sejam proteínas fundamentais na regulação destas funções e estejam presentes nas placas reestenóticas, sua exata importância ao longo deste processo permanece indefinida, principalmente pela falta de um método capaz de sua avaliação seqüencial. Neste estudo, testamos a hipótese de que pacientes com reestenose coronária pós-angioplastia apresentam aumento da atividade imunoinflamatória plasmática através da mensuração de marcadores circulantes pelo método de ELISA. Objetivo - Comparar a expressão de interleucina l-beta (IL-1 J3), receptor solúvel da interleucina-2 (rs-IL 2), fator de necrose tumoral alfa (TNFa) e receptores solúveis I e H do fator de necrose tumoral alfa (rs I-TNFa e rs li-TNFa) no sangue periférico de pacientes com lesões reestenóticas, lesões ateroscleróticas primárias e indivíduos normais. Métodos- Foram estudados 11 pacientes com reestenose coronária pós-angioplastia e 10 pacientes com aterosclerose primária encaminhados para cineangiocoronariografia. Dez indivíduos normais sem cardiopatia isquêmica ou fatores de risco foram utilizados como grupo controle. As amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da cineangiocoronariografia, processadas e as concentrações plasmáticas do rs-IL 2, TNFa, rs-1 TNFa, rs-11 TNFa e IL-lf3 analisadas pelo método de ELISA. Os níveis de cada grupo foram comparados por análise de variância (ANOVA), sendo utilizado o método de Scheffé para análise das diferenças entre os subgrupos. Resultados - Não houve diferença quanto à idade, sexo, presença de fatores de risco para cardiopatia isquêmica e aspectos de tratamento entre os dois grupos de pacientes. Os pacientes com reestenose coronária apresentaram cardiopatia isquêmica mais grave, já que tinham maior número de vasos comprometidos e também apresentaram o último episódio de angina há menos tempo do que os pacientes com aterosclerose primária. Os níveis plasmáticos do rs-IL 2 foram significativamente mais elevados nos pacientes com reestenose coronária (1640 ± 576 pg/ml) do que nos nos indivíduos normais (796 ± 470 pg/ml), mas inferiores aqueles dos pacientes com aterosclerose primária (2283 ± 542 pg/ml) (p<0.05). Os níveis dos receptores do TNFa e do TNFa dos pacientes com reestenose coronária (rs-I TNFa=1021 ± 108 pg/ml; rs-II TNFa=2267 ± 447 pg/ml; TNF a=O pg/ml [0-2.8 pg/ml]) não foram diferentes dos indivíduos normais (rs-I TNFa= 888 ± 162 pg/ml; rs-II TNFa=2123 ± 345; TNFa=O pg/ml [0-0.3 pg/ml] ) mas foram significativamente menores do que aqueles dos pacientes com aterosclerose primária (rs-I TNFa= 1223 ± 194 pg/ml; rs-II TNFa= 2958 ± 716 pg/ml; TNFa= 0.65 pg/ml [0-3.0 pg/ml]) (p<0.05 para todas as diferenças). Os níveis de IL-1~ foram indetectáveis em todos os indivíduos. Não houve correlação entre a gravidade da cardiopatia isquêmica, a proximidade da angina ou a idade e os níveis de cada marcador. Conclusões - Os pacientes com reestenose coronária pós-angioplastia apresentam aumento do rs-IL 2, mas não do TNFa ou de seus receptores solúveis quando comparados com indivíduos normais. Os pacientes com aterosclerose primária apresentam aumento de todos estes marcadores quando comparados tanto com indivíduos normais quanto com os pacientes com reestenose coronária. Estes resultados indicam ativação linfocitária moderada nos pacientes com reestenose coronária pós-angioplastia e atividade imunoinflamatória mais intensa nos pacientes com aterosclerose primária. / Background - Overproduction of extracellular matrix, cellular proliferative events and morphologic remodelling of vessel wall, derived mainly from inapropriate activity of smooth muscle cells and macrophages, are key features in the pathophysiology of restenosis post coronary angioplasty. Several cytokines are known to be involved in the regulation of those cell functions but their exact role in the overall process remains to be defined, due to the lack of a method capable of sequential assessment over time. In this study, we sought to investigate the leveis o f circulating markers o f immunoinflamatory activity in patients with restenosis, to test the hypothesis that they are elevated when compared with patients with primary atherosclerosis and healthy volunteers. Objective- To compare the expression of interleukin 2 soluble receptor (sr-IL2), tumour necrosis factor (TNFu), soluble receptor I and II of tumour necrosis factor (sr-I TNFu and sr-II TNFa) and interleukin 1 beta (IL-lP) in periferic blood of patients with restenosis, primary atherosclerosis and healthy volunteers. Methods - Eleven patients with coronary restenosis post angioplasty and 1 O patients with primary atherosclerosis referred for coronary arteriography were studied. Ten normal volunteers without coronary artery disease or risk factors for its presence served as controls. Blood samples were drawn and processed immediately before coronary arteriography and plasmatic concentrations of fí:-IL2, TNFu, sr-I TNFa, sr-II TNFa and IL-1 P were analised by an ELISA method. Results were compared by ANOVA. Results - There were no significant differences in age, sex, risk factors for coronary artery disease and treatment in both groups of patients. The group of patients with coronary restenosis had more vessels involved in angiography and shorter time between the last episode of angina and blood sampling. Plasmatic leveis of sr-IL2 were significantly greater in restenosis patients (1640 ± 576 pg/ml) than normal indiviuals (796 ± 470 pg/ml), but smaller than patients with atherosclerosis (2283 ± 542 pg/ml) (p<0.05). There were no differences between TNFa and its soluble receptors leveis in coronary restenosis patients (sr-I TNFa=1021 ± 108 pg/ml; sr-II TNFa=2267 ± 447 pg/ml; TNFa=O pg/ml [0-2.8 pg/ml]) and normal individuais (sr-I TNFa= 888 ± 162 pg/ml; sr-II TNFa=2123 ± 345; O pg/ml [0-0.3 pg/ml] ) but primary atherosclerosis patients displayed leveis significantly greater than both groups (sr-I TNFa= 1223 ± 194 pg/ml; sr-II TNFa= 2958 ± 716 pg/ml; TNFa= 0.65 pg/ml [0-3.0 pg/ml]). IL-113 leveis were undetectable in all subjects. There was no correlation between the severity of coronary artery disease and time to last episode of angina with the leveis of each cytokine. Conclusions - Coronary restenosis patients present greater leveis of sr-IL2 but not of TNFa or its soluble receptors when compared with normal individuais. Primary atherosclerosis patients present greater leveis of ali this markers when compared Vvith either restenosis patients or normal individuais. These results point to moderate linfocitary activity in coronary restenosis patients and more significant immunoinflammatory activity in patients with primary atherosclerosis.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-11T20:18:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Suzanny Oliveira Mendes.pdf: 1218162 bytes, checksum: ba406f76a90163a9319cfc83b966766b (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-16T14:59:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Suzanny Oliveira Mendes.pdf: 1218162 bytes, checksum: ba406f76a90163a9319cfc83b966766b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-16T14:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Suzanny Oliveira Mendes.pdf: 1218162 bytes, checksum: ba406f76a90163a9319cfc83b966766b (MD5) / O complexo transcricional HIF-1 é responsável por controlar a transcrição de mais de 100 genes envolvidos em resposta celular a hipóxia. A subunidade HIF-1α é estabilizada em condições de hipóxia e dimeriza-se com um a subunidade HIF-1β, formando o complexo HIF-1 transcricionalmente ativo. Em células inflamatórias, uma elevada expressão de HIF-1α pode induzir os linfócitos à imunossupressão, reduzindo o reconhecimento dos antígenos tumorais, permitindo o crescimento tumoral. O presente trabalho objetivou investigar a relação entre a expressão de HIF-1α em linfócitos do infiltrado inflamatório intratumoral e peritumoral de 56 pacientes com carcinoma epidermoide de cavidade oral. Os resultados indicaram um valor prognóstico para esta expressão. Uma elevada expressão da HIF-1α em células do infiltrado inflamatório peritumoral foi significantemente relacionada com o pior prognóstico do paciente, enquanto esta elevada expressão nos linfócitos na região intratumoral foi correlacionado com um melhor prognóstico. Um perfil de risco indicando a chance para a recidiva e óbito foi desenhado baseado na expressão de HIF-1α nos linfócitos do infiltrado inflamatório peritumoral e intratumoral, definindo os riscos baixo, intermediário e alto. Este perfil de risco foi hábil para determinar que a expressão forte de HIF-1α nos linfócitos peritumorais são relacionados com um pior prognóstico, independente da expressão nas células intratumorais. A expressão fraca de HIF-1α nos linfócitos peritumorais e forte nos linfócitos intratumorais foram considerados um perfil de baixo risco, mostrando nenhum caso de recidiva da doença e óbito decorrente da doença. O risco intermediário foi associado com baixa expressão de HIF-1α tanto em infiltrado inflamatório intratumoral como peritumoral. Estes resultados sugerem que a expressão da HIF-1α em células linfoides do infiltrado inflamatório intratumoral e peritumoral pode exercer um papel importante como um marcador prognóstico tumoral. / The HIF-1 transcriptional complex is responsible for controlling transcription of over 100 genes involved in cell hypoxia response. HIF-1α subunit is stabilized in hypoxia conditions, dimerizes with HIF-1β forming the active HIF-1 transcriptional factor. In inflammatory cells, high HIF-1α expression might induce lymphocytic immunosuppression, decreasing tumoral antigen recognition, allowing tumor growth. The present work aimed to investigate the relationship between HIF-1α expression in lymphocytes inflammatory infiltrate from intratumoral and peritumoral region of 56 patients with oral cancer. Data indicates a prognostic value for this expression. High HIF-1α expression in peritumoral inflammatory cells was significantly related to worse patient outcome, whereas high expression in the intratumoral lymphoid cells correlates with a better prognosis. A risk profile indicating the chance of disease relapse and death was designed based on HIF-1α expression in inflammatory infiltrate cells, defining low, intermediate and high risks. This risk profile was able to determine that high HIF-1α expression in peritumoral lymphocytes correlates with worse prognosis, independently of intratumoral inflammatory infiltrate expression. Low HIF-1α in peritumoral lymphocytes and high expression in the intratumoral lymphocytes was considered a low risk profile, showing no cases of disease relapse and disease related death. Intermediate risk was associated with low HIF-1α expression in inflammatory infiltrate intratumoral and peritumoral. in tumor and tumor margins. These results suggest that HIF-1α expression in tumor and peritumoral inflammatory cells may play an important role as prognostic tumor marker.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-19T01:28:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-09. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:42Z : No. of bitstreams: 1 000854977.pdf: 1182056 bytes, checksum: 4d85f268c46ebb70907a865fa37c1b1b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Esta revisão discorre como a biotecnologia pode ser aplicada no tratamento de efluente de indústria de pescado para obtenção de biomassa e, ainda, como esta biomassa pode ser utilizada na alimentação de peixes. Atualmente, com a intensificação da aquicultura há o surgimento de surtos de doenças parasitárias e bacterianas que devastam economicamente a criação de peixes. Com isso, surgem os problemas relacionados ao uso inconsequente e errôneo de produtos como antimicrobianos e desinfetantes com a finalidade de controlar mortalidades e evitar grandes perdas econômicas. A fim de contornar esse obstáculo do uso indiscriminado de substâncias não registradas para a aquicultura e controlar o surgimento das doenças em peixes, o emprego de imunoestimulantes e vacinas têm se destacado como métodos preventivos eficazes e seguros. Algumas substâncias podem atuar como imunoestimulante e influenciar as respostas do sistema imune dos peixes e o seu desempenho produtivo. Rubrivivax gelatinosus é uma bactéria gram negativa, púrpura fototrófica, anaeróbica e com movimentação por flagelo que despolui efluentes industriais pois utiliza o carbono orgânico como principal fonte de carbono para o seu crescimento, contribuindo assim para a retirada de carbono e nitrogênio da água. Além disso, esta bactéria fornece uma biomassa com elevado valor nutricional, pois contém elevada quantidade de proteínas e carotenóide da série esferoidene, considerado potente imunoestimulante devido sua ação antioxidante. O uso desta bactéria otimiza a cadeia produtiva de pescados, renovando a água poluída de efluente, e ainda, nos proporciona através da biotecnologia empregada, uma massa biológica imunoestimulante para uso na própria aquicultura / This review clarifies how biotechnology may be applied on treatment of fish industry effluent to obtain biomass, and also, how this biomass can be applied as a fish food supplement. Currently, with the intensification of aquaculture has been occurrence of parasitic and bacterial outbreaks diseases that economically devastate the fish farming. Thus, arising problems related to inconsistent and incorrectly use of products such as antimicrobials and disinfectants applied in order to control mortality and avoid huge economic losses. To circumvent these obstacles of indiscriminate use of unregistered substances and in order to control the emergence of fish diseases, the use of immunostimulants and vaccines has been shown to be effective as prevention methods besides safety. Some substances can act as an immunostimulant and influence the responses of the fish immune system and its productive performance. Rubrivivax gelatinosus is a gram negative bacterium, purple phototrophic, anaerobic with movement by flagellum which depollute industrial effluents because it uses organic carbon as the main carbon source for growth, thereby, contributing to the removal of carbon and nitrogen from the water. Furthermore, this bacterium provides a biomass with a high nutritional value because it contains a high amount of protein and carotenoid of spheroidene class, considered potent immunostimulant due to its antioxidant action. The use of this bacterium optimizes the fish supply chain, renewing the polluted wastewater, and also gives us by the biotechnology employed, a biological mass immunostimulatory for use in aquaculture itself / FAPESP: 2013/08353-0

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:43:38Z : No. of bitstreams: 1 alegranci_p_dr_arafcf.pdf: 707044 bytes, checksum: e6d30cd26abce772eacd24b870674935 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, apresentando em geral, lesões cutâneas com proliferação via vasos linfáticos especialmente em pacientes imunocomprometidos, o que pode levar a doença sistêmica. Os macrófagos têm um papel importante na resposta imune inata contra diversos patógenos e dependendo do estimulo recebido podem ser polarizados em M1 e M2, os quais apresentam propriedades distintas, sendo que os primeiros possuem atividades proinflamatórias e o segundo anti-inflamatória. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar a participação das populações de macrófagos M1 e M2 através da avaliação das citocinas IL-12, IL-23, IL-10 e TGF-β, da produção de NO e da atividade da enzima arginase, juntamente com a avaliação fenotípica dessas populações durante todo período experimental. Os resultados revelaram que as células do exsudato peritoneal dos camundongos dos grupos infectados quando desafiadas ex vivo com o exoantígeno e o extrato lipídico foram capazes de levar a produção de IL-12, IL-10 e TGF- β durante todo o período experimental. A produção de IL-23 ocorreu na 2ª e 4ª semana mediante o desafio com o exoantígeno e em todo período experimental com o EL. A fenotipagem revelou a presença de macrófagos tanto M1 quanto M2 durante todo o período experimental, com aumento da expressão do receptor CD206 (M2) no período tardio da infecção, o que explica a produção dos mediadores tanto inflamatórios (IL-12 e IL-23) quanto anti-inflamatórios (IL-10 e TGF- β) encontrados durante toda a cinética. Além das citocinas também foi observada a produção de óxido nítrico e a atividade da enzima arginase. Desta forma os resultados encontrados evidenciam a participação dos macrófagos M1 e M2 durante a esporotricose, uma vez que os M1... / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus, Sporothrix schenckii, generally presenting skin lesions with spread via lymphatic vessels, especially in immunocompromised patients, what can lead to systemic disease. Macrophages play an important role in innate immune response against various pathogens and, depending on the eliciting signals, macrophage can be polarized in M1 and M2, which presents distinct proprieties, so macrophage activation can be either proinflammatory or antiinflammatory. Thereby, the aim of this study was to evaluate the role of macrophage populations M1 and M2, through the evaluation of IL-12, IL-23, IL-10 and TGF-β, NO production and activity of the enzyme arginase, along with phenotypic evaluation of these populations throughout the experimental period. The results showed that peritoneal exudate cells of infected mice groups, when challenged ex vivo with exoantigen and lipid extract, were able to lead to production of IL-12, IL- 10 and TGF-β throughout the experimental period. The production of IL-23 occurred in the 2nd and 4th week through the challenge with exoantigen and throughout the experimental period with the lipid extract. Phenotyping revealed the presence of both macrophages, M1 and M2, throughout the experimental period, with increased expression of the receptor CD206 (M2) in the late infection period, which could explain the production of proinflammatory (IL-12 and IL-23) and anti-inflammatory (IL-10 and TGF-β) mediators found throughout the kinetic, and the nitric oxide production and activity of the arginase enzyme. M1 macrophages are important during sporotrichosis, they have microbicidal activity and are responsible for releasing inflammatory mediators in an attempt to eliminate the fungus Sporothrix schenckii, while the M2 found during... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-24Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000814002.pdf: 1173956 bytes, checksum: f0571023b266097e79a4f39e523f7c80 (MD5) / Acredita-se que as frações ativas de mananoproteinas (FAM), obtidas a partir da extração e fracionamento da parede celular de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) possam modular de forma benéfica o sistema imune. Este estudo avaliou os efeitos imunológicos das FAM em cães adultos e idosos. Foram empregadas três dietas extrusadas, isonutritivas com inclusão de 0% (T0); 0,04% (T400) e 0,08% de FAM (T800). No total, foram utilizados 36 cães da raça beagle. Os tratamentos resultaram da combinação de idade (adultos e idosos) e dieta (T0, T400 e T800), gerando seis tratamentos experimentais. Para cada dieta foram utilizados seis cães adultos (4,0±2,0 anos) e seis cães idosos (11,0±1,0 anos). O experimento seguiu delineamento em blocos, com três blocos de 12 cães (seis adultos e seis idosos, dois cães por idade e dieta). Nos dias zero, 14 e 28, amostras de sangue foram coletadas para fenotipagem dos leucócitos sanguíneos e ensaio de fagocitose. Nos dias zero e 28 foram realizados: hemogramas, análises bioquímicas, teste de linfoproliferação, produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), avaliação da concentração de imunoglobulina A fecal e teste de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH). Os dados foram submetidos à análise de variância com medidas repetidas no tempo, exceto o DTH, no qual se analisou separadamente cada tempo do período experimental. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p≤0,05). A FAM mostrou-se segura nos teores e períodos estudados. Aos 28 dias, cães adultos alimentados com a dieta T400 em relação à T0 apresentaram contagens mais elevadas de linfócitos totais (p<0,05). Ao analisar a fenotipagem dos leucócitos sanguíneos demonstrou-se que, mais especificamente, o consumo de 0,04% de FAM pelos cães adultos elevou a contagem de linfócitos T totais (p=0,05). Independente da idade, neutrófilos de cães alimentados com T400, em relação à dieta ... / It is believed that the active fractions mananoproteínas (AFM), obtained from the extraction and fractionation of cell wall of yeast (Saccharomyces cerevisiae), may beneficially modulate the immune system. This study evaluated the immunological effects of FAM in adults or elderly dogs. Three extruded diets with isonutritives including 0% (T0); 0.04% (T400) and 0.08% of AFM (T800) were used. In total, 36 beagle dogs were used. The treatments resulted from the combination of age (adults and elderly) and diet (T0, T400 and T800), generating six experimental treatments. For each diet six adult dogs (4.0 ± 2.0 years) and six elderly dogs (11.0 ± 1.0 years) were used. The experiment was randomized complete block design with three blocks of 12 dogs (six older and six adults, two dogs by age and diet). At zero, 14 and 28 days, blood samples were collected for phenotyping of blood leukocytes and evaluation of phagocytic activity. In zero and 28 days, hemogram, biochemical analysis, lymphocyte proliferation, production of hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO), evaluation of the concentration of fecal immunoglobulin A and delayed test hypersensitivity (DTH) were performed. Data were subjected to analysis of variance with repeated measures, except DTH, in which we analyzed separately each time the trial period. Means were compared by Tukey test (p≤0.05). The AFM was safe in the levels and periods. At 28 days, adult dogs fed the diet T400 relative to T0 had higher counts of total lymphocytes (p<0.05). By analyzing the phenotype of the blood leucocytes was shown that, more specifically, adult dogs consuming 0.04% of the AFM increased the amount of total T-lymphocytes (p=0.05). Regardless of age, neutrophils from dogs fed T400, relative to T0 diet, tended to produce more H2O2 (p=0.09). Higher percentage of phagocytic activity of neutrophils were observed in adult dogs fed on T400 compared to the T800 diet (p<0.05). The skin response ...