Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2012-10-26T07:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 299994.pdf: 1365385 bytes, checksum: 40a721590b9fe56096cc9269e3ae2ed5 (MD5) / A modulação da expressão gênica de proteínas envolvidas nas respostas antifúngicas em camarões Litopenaeus vannamei e Farfantepenaeus paulensis foi avaliada após infecção experimental com esporos de Fusarium solani. Camarões F. paulensis foram desafiados com uma dose não-letal de esporos (6 x 106 esporos/ml) e a expressão da proteína de reconhecimento de fungos, ?GBP, não foi alterada em resposta a essa infecção branda. Já camarões L. vannamei desafiados com dose letal de esporos (108 esporos/ml) de F. solani apresentaram uma queda significativa na expressão da ?GBP, da pró-fenoloxidase (proPO), dos subgrupos 2, 3 e 4 da peneidina (PEN 2, PEN 3, PEN 4) e da stylicina, indicando o envolvimento do fungo na depleção do nível de transcritos dessas moléculas de defesa. Uma superexpressão gênica da proteína que reconhece LPS e ?-1,3-glicanas (LGBP) e do fator antilipopolissacarídeo (ALF) foi também encontrada nesses animais, sugerindo o envolvimento destas proteínas na fase aguda da infecção por F. solani. Paralelamente, camarões L. vannamei injetados com dsRNA específico para a LGBP apresentaram silenciamento de 18% a 95% em 2 e 3 dias, respectivamente, após a injeção de duas doses sequenciais de dsRNA. Esses resultados, no entanto, não foram reproduzidos em animais provenientes de uma fazenda de cultivo, sugerindo que exista uma resposta diferenciada associada à ativação prévia do sistema imunológico de acordo com as condições ambientais. Os resultados deste estudo apontam para um potencial envolvimento das moléculas imunoefetoras proPO, PEN 2, PEN 3, PEN 4, ALF e stylicina na defesa antifúngica de camarões L. vannamei, e representam uma contribuição pioneira para um maior conhecimento das respostas moleculares desencadeadas por camarões frente a uma infecção por F. solani, um reconhecido patógeno oportunista dos peneídeos.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: f. 63-84 / A lectina KM+, purificada de sementes de Artocarpus integrifolia, induz migração de neutrófilos de maneira depende do domínio de reconhecimento de carboidratos e por haptotaxia, sendo esta mediada por interação da lectina com seu glicoligante na superfíci / The lectin KM+, purified from seeds of Artocarpus integrifolia, induces haptotatic neutrophil migration dependent on the CRD, which is mediated by the interaction of the lectin with its glycoligand on the neutrophil surface and in the extracellular matrix

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-08-25T16:40:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1084743 bytes, checksum: 1f4401e739fab43ab255d4a9e73125c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T16:40:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1084743 bytes, checksum: 1f4401e739fab43ab255d4a9e73125c1 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Animais e microrganismos causadores de doenças estão em constante confronto. Enquanto patógenos evoluem de forma a superar barreiras dos hospedeiros, as defesas imunes do hospedeiro são aprimoradas para impedir o estabelecimento de doenças. Não só indivíduos, mas populações podem ser afetadas pela ação de patógenos. Assim, organismos possuem mecanismos que evitam o processo infeccioso através da percepção de sinais ambientais. O aumento da densidade de co-específicos é um destes sinais e indivíduos capazes de percebê-los poderiam aumentar plasticamente o investimento em defesas imunes; hipótese conhecida como “Profilaxia Densidade- Dependente” (PDD). Outra forma de proteção em nível de população é a transferência de defesas imunes para a prole, especialmente via herança epigenética. Defesas imunes tem um alto custo metabólico e a combinação de ambas as estratégias, PDD e transferência vertical, poderia otimizar a prevenção de doenças em organismos que estão sujeitos a surtos populacionais e possivelmente apresentam sobreposição de gerações, como insetos-praga. Anticarsia gemmatalis é conhecida por ter hábito solitário, porém apresenta plasticidade fenotípica dependente da densidade como algumas espécies de insetos gregários. Por isso, A. gemmatalis foi escolhida como modelo para testar se há transferência transgeracional de PDD. Para isso, avaliamos a atividade antimicrobiana (provavelmente uma lisozima), através da zona de inibição em placas contendo a bactéria Micrococcus lysodeikticus, em ovos de mariposas de diferentes fenótipos (i.e. lagartas foram criadas solitárias ou gregárias e expressaram o fenótipo verde ou preto, respectivamente). Casais foram acasalados em gaiolas nas quatro combinações possíveis entre fêmeas e machos exibindo os fenótipos “verde” ou “preto”. Dessa forma, seria possível identificar qual dos parceiros estaria contribuindo mais para a transferência de defesas à prole. Além disso, foram avaliados o número de ovos por fêmea como forma de investigar possíveis trade-offs entre a defesa imune e reprodução. Não houve diferenças significativas na atividade antimicrobiana nem no número de ovos de mariposas expressando o fenótipo verde ou preto na fase larval. Os resultados indicam que, pelo menos para essa defesa imunológica, não há transferência transgeracional de PDD à prole de A. gemmatalis. Como essa espécie é migratória, talvez a prole não experimente as mesmas condições ambientais dos pais, não precisando assim transferir defesas imunológicas à prole mediante estímulos sofridos pelos pais. Propomos investigar a transferência de DDP em outros ínstares larvais da prole, através da avaliação de diferentes parâmetros imunes, para melhor subsidiar nossa conclusão. / Animals and disease-causing microorganisms are in a constant fight. While pathogens evolve ways to breach the host defences, hosts enhance defences to prevent the establishment of diseases. Not only individuals themselves, but populations may be affected by pathogens. Thus, organisms have mechanisms to avoid infectious processes through perception of environmental clues. The increase in population density of conspecifics may be such a clue, and individuals able to perceiving it could increase plastically the investment in immune defences; hypothesis known as ‘Density- dependent prophylaxis’ (DDP). Furthermore, organisms may invest plastically in defences of offspring via epigenetic. It is known that immune defences pose a high cost to hosts, and the use of the two strategies – DDP and transgenerational transfer – could optimize the prevention of disease in organisms subject to population fluctuation and likely overlap of generations, such as insect pests. Anticarsia gemmatalis is known to be a lone-living insect, but presents density-dependent plasticity in phenotype as such group-living insects. Thus, A. gemmatalis was chosen as model to test if there is transgenerational transfer of DDP. It was assessed the antimicrobial activity (lysozyme- like activity), through inhibition zone in plates with the bacterium Micrococcus lysodeikticus, in eggs of moths from different phenotypes (i.e. caterpillars were raised alone or in groups and expressed green or black phenotype, respectively). Moths were paired in cages in four possible combinations between females and males expressing “green” or “black” phenotypes. Thus, it was possible to identify the contribution of each partner in the provision of immune defence to offspring. Furthermore, it was assessed the number of eggs per female as a way to find out likely trade offs between immunity and reproduction. There were no significant differences in antimicrobial activity neither in the number of eggs from moths of green or black phenotype. These results indicate that, at least for the immune defence assessed here, there is no transgenerational transfer of DDP to offspring. As this is a migratory species, maybe the offspring do not experience the same environmental conditions of the parents; hence they do not transfer immune defences to offspring by stimuli experienced by parents. It is proposed to investigate the transfer of DDP in other larval instars of offspring, through the assessing of different immune parameters, to better support our conclusion. / O autor não apresentou título em português.

O sistema imunológico é formado por um conjunto de células e moléculas envolvidas primariamente na defesa do organismo contra agentes infecciosos. Neste sentido, destaca-se a ação das proteínas codificadas pela região do MHC-I, as quais são responsáveis pela apresentação de pequenos peptídeos (normalmente entre 8 e 12 aminoácidos), gerados a partir da via de processamento endógeno, para Receptores de Células T (TCRs) citotóxicas. As bases moleculares subjacentes à apresentação de peptídeos no contexto das moléculas de MHC-I ainda não foram totalmente esclarecidas, principalmente em função da complexidade inerente a esse processo biológico. Sabe-se, no entanto, que padrões moleculares presentes na área de interação do pMHC-I com o TCR, bem como a estabilidade dos complexos pMHC-I na superfície celular, são fatores determinantes para a imunogenicidade de diferentes complexos. Com o nascimento e desenvolvimento da bioinformática, uma grande evolução foi observada na área, especialmente no que tange ao estudo de sequências lineares de genes e proteínas. Entretanto, o estudo a nível estrutural ainda é lento, especialmente devido ao limitado número de estruturas tridimensionais resolvidas experimentalmente e à falta de modelos acurados. Assim sendo, esta tese se propôs a automatizar e otimizar uma ferramenta de modelagem de complexos pMHC-I (técnica D1-EM-D2) e, posteriormente, criar uma protocolo para avaliar a estabilidade in silico de complexos pMHC-I, com foco na interação entre epitopo e MHC-I. Como resultado, criamos uma nova ferramenta, a qual chamamos DockTope, validada sobre um conjunto mais amplo de dados experimentais (135 estruturas em relação às 46 estruturas do estudo anterior). Esta ferramenta permite que qualquer usuário modele seu próprio pMHC-I, através de uma interface web acessível. Ainda, um estudo via dinâmica molecular realizado com base nos complexos pMHC-I modelados a partir do DockTope nos permitiu inferir algumas das variáveis envolvidas na estabilização dos complexos. Os resultados apresentados aqui contemplam várias áreas de conhecimento da área biológica, favorecendo o desenvolvimento de vacinas mais racionalizadas e alavancando o conhecimento e a compreensão de eventos imunológicos. / The immunologic system is constituted by a group of cells and molecules involved mainly in the organism defense against infectious agents. In this way, the action of proteins encoded by the MHC-I region should be highlighted, since they are responsible for the presentation to T Cell Receptors (TCRs) of small peptides (normally 8 to 12 amino acids in length) generated by the endogenous processing pathway. The molecular bases underlying the presentation of peptides in the context of MHC-I molecules are not fully understood, especially because the complexity inherent to this process. However, it is known that molecular patterns presented in the TCR-interaction surface of each pMHC-I, as well as complex stability on cellular surface, are pivotal factors to determine immunogenicity. The bioinformatics development brings together a great evolution in the field, especially in respect to the analysis of genes and proteins sequences. Yet, the structural study is still delayed, mainly because we have a limited number of threedimensional structures experimentally resolved and there is a lack of accurate models. In this way, we aimed to automatize and optimize a bioinformatics tool to pMHC-I modeling (D1-EM-D2 approach) and, posteriorly, to create an in silico protocol to evaluate the pMHC-I complex stability, focusing on the interaction between epitope and MHC-I. As a result, we created a new tool, which we called DockTope, validated over a wider group of experimental data (135 structures in respect to the 46 structures previously published). This tool allows any user to model its own pMHC-I complex trough a user-friendly web interface. Also, a molecular dynamics study performed using modeled pMHC-I complexes through DockTope allowed us to infer important variables involved on complex stabilization. The results presented here encompass several knowledge areas, favoring the vaccine development and propelling the knowledge and understanding of immunologic events.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:19Z : No. of bitstreams: 1 Publico-153.pdf: 1204724 bytes, checksum: ed68cb50409b37ef0c3a8ec996a58a9d (MD5) / Objetivos: Avaliar, em pacientes transplantados renais, os aspectos clínico- epidemiológicos, microbiológicos e os fatores de risco para ocorrência e mortalidade por ICS. Métodos: Através da análise retrospectiva de prontuários médicos, foram avaliados todos os episódios com infecção de corrente sanguínea que ocorreram em pacientes submetidos a transplante renal no período de primeiro de janeiro de 2000 a 31 de janeiro de 2006 nos Hospitais São Paulo e do Rim e Hipertensão. Através de estudo caso-controle (1:1, pareando os controles por idade e época da realização do transplante) foram analisados os fatores de risco para ocorrência de ICS precoce e tardia (antes e após os seis primeiros meses do transplante) usando análise multivariada. Para análise de fatores de risco relacionados à mortalidade por ICS, utilizou-se grupo controle interno, comparando aqueles que sobreviveram ou faleceram em 1 mês após o evento. Resultados: 185 pacientes foram incluídos para análise de fatores de risco. A incidência foi de 4,11 por cento (considerando apenas 136 pacientes transplantados entre 2000 e 2006). A maioria foi proveniente do Hospial do Rim (157 pacientes ou 84,9 por cento), 108 (58,4 por cento) eram do sexo feminino, com média de idade de 44,26 anos e 53 por cento receberam o enxerto de um doador de receptor vivo. A fonte primária de infecção mais freqüente foi o trato urinário. As bactérias Gram-negativas prevaleceram, sendo o principal agente isolado Escherihia coli (30,3 por cento). Os fatores associados a ICS precoce foram à rejeição aguda pós-transplante (OR=3,69 e IC95: 1,36-9,97, p=0,03), uso do cateter de duplo J após o transplante (OR=3,36 e IC95: 1,50-7,52 p=0,002) e receptor de enxerto de doador de receptor falecido (OR=3,16 e IC95: 1,39-7,17, p =0,001). Na ICS tardia, os fatores associados foram os pacientes com rejeição aguda (OR=4,04 e IC95: 1,78-9,17, p=0,001), índice de Charlson ≥ três (OR=6,98 e IC95: 2,43-20,01, p=0,01) e receptor de enxerto de doador de receptor falecido (OR= 3,37 e IC95: 1,73-6,55, p=0,001). Em relação à mortalidade, os fatores associados foram índice de APACHE II ≥ 20 no momento do diagnóstico da ICS (OR 6,39 IC95= 2,07-19,73, p=0,001), uso de droga vasoativa pós ICS (OR 9,87 IC95= 2,95-32,94, p=0,001) e necessidade de ventilação mecânica (OR 7,66 IC95= 2,56-22,87, p=0,001). Conclusões: A infecção do trato urinário é o principal sítio de origem da ICS, prevalecendo as bactérias gram-negativas. Embora fatores relacionados ao aumento do grau de imunossupressão sejam fatores de risco durante todo o período pós-transplante, a ICS precoce esteve relacionada ao uso de cateter de duplo J e a tardia a presença de comorbidades. Os fatores associados a mortalidade em 30 dias foram os pacientes mais graves. / Objectives: To evaluate, in kidney-transplant patients, the clinical-epidemiological and microbiological aspects, and the risk factors for the occurrence and mortality by BSI (blood stream infection). Methods: through the retrospective analyses of medical charts, we evaluated all episodes of blood stream infection that occurred in patients submitted to kidney transplants from January 1st, 2000 to January 31st, 2006 in the São Paulo Hospital and the Rim e Hipertensão Hospital. Through the study of the control-case (1:1, pairing the controls for age and time when the transplant took place) the risk factors for the occurrence of early and late BSI (before and after six months of the transplant) were analysed using multivaried analysis. For the analysis of risk factors related to death by BSI, the internal control group was used, comparing those who survived or died in a month after the event. Results: 185 patients were included for the risk factor analysis. The incidence was of 4.11% (considering only 136 patients transplanted between 2000 and 2006). The majority was from Rim Hospital (157 patients or 84.9%), 108 (58.4%) were female, average age of 44.26 years old and 53% received the graft from a living donor. The most frequent primary source of infection was the urinary tract. The Gram-negative bacteria prevailed, being the principal isolated agent Escherihia coli (30.3%). The early BSI was associated to acute posttransplant rejection (OR=3.69 e IC95: 1.36-9.97, p=0.03), use of double catheter J after the transplant (OR=3.36 e IC95: 1.50-7.52 p=0.002) and being the recipient of graft from a deceased donor (OR=3.16 e IC95: 1.39-7.17, p=0.001). In late BSI, the associated factors were patients with acute rejection (OR=4.04 e IC95: 1.78-9.17, p=0.001), Charlson index ≥ 3 (OR=6.98 e IC95: 2.43-20.01, p=0.01) and being the recipient of graft from a deceased donor (OR= 3.37 e IC95: 1.73-6.55, p=0.001 ). Related to mortality, the associated factors were APACHE II index ≥ 20 at the diagnoses of BSI (OR 6.39 IC95= 2.07-19.73,p=0.001), use of vasoactive drugs after BSI (OR 9.87 IC95= 2.95-32.94,p=0.001) and the need of mechanical ventilation (OR 7.66 IC95= 2.56-22.87, p=0.001). Conclusions: The urinary infection is the principal origin site of BSI, prevailing gram-negative bacteria as principal agents. Although factors related to the increase of the immune depression degree are risk factors during all the posttransplant period, the early BSIs are related to the use of double J catheter and the late ones to the presence of comorbidities. The mortality in 30 days is related to clinical gravity of the patient at the moment of and after the occurrence of the BSI. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2014. / Prêmio UFSC de Tese / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:02:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325610.pdf: 3663894 bytes, checksum: 51d7bf0a2601fb6288a633503857f238 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os ácidos orgânicos e seus sais podem ser utilizados como aditivos promotores de crescimento na produção animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de sais orgânicos na criação de camarões marinhos, auxiliando na nutrição e saúde de Litopenaeus vannamei. No primeiro estudo, após avaliação de seis sais de sódio (formiato, acetato, propionato, lactato, butirato e citrato) pode-se observar que os sais orgânicos possuem atividade inibitória contra vibrios patogênicos para camarões marinhos. Além disso, a atratividade e consumo de dietas comerciais aumentaram com a suplementação de propionato e butirato. A suplementação de propionato também aumentou a digestibilidade de energia e fósforo das dietas para o L. vannamei. No ensaio de crescimento em água clara, os camarões alimentados com dietas suplementadas com diferentes concentrações de propionato e butirato (0,5 a 2%) também apresentaram modificações na microbiota intestinal e aumento do ganho de peso. A suplementação de 2% de butirato em dietas para camarões marinhos também melhorou a eficiência alimentar e sobrevivência do cultivo em água clara, além da retenção de nitrogênio e taxa de eficiência proteica. No cultivo do L. vannamei em bioflocos a suplementação de 2% de butirato de sódio aumentou a sobrevivência e produtividade, além de diminuir a concentração de bactérias heterotróficas totais e vibrios no intestino, aumentar o número de hemócitos granulares e hialinos e o título de aglutinação. Portanto, o butirato de sódio possui potencial para ser usado com promotor de crescimento em cultivo de L. vannamei melhorando o balanço da flora bacteriana intestinal e índices zootécnicos do cultivo de camarões marinhos em diferentes sistemas, podendo atuar também como estimulante do sistema imunológico.<br> / Abstract : Organic acids or their salts can be used as growth promoters in animal production. The objective of this study was to evaluate the use of organic salts in the marine shrimp culture, aiding in nutrition and health of Litopenaeus vannamei. In the first study, sodium salts (formate, acetate, propionate, lactate, butyrate and citrate) had inhibitory activity against pathogenic vibrios for marine shrimp. Moreover, the attractiveness and feed intake of the commercial diets increased with propionate and butyrate supplementation. Propionate supplementation also increased energy and phosphorus digestibility for L. vannamei. Under clear water, shrimp fed diets supplemented with different concentrations of propionate and butyrate (0.5 to 2%) also showed changes in the intestinal microbiota and higher growth. Supplementation of 2% butyrate in diets for marine shrimp also improved feed efficiency, final shrimp survival, nitrogen retention and protein efficiency rate. Under biofloc system, shrimp fed diets supplemented with 2% sodium butyrate increased survival and productivity, reduced the concentration of total heterotrophic bacteria and vibrios in the intestine, while increasing the number of granular and hyaline hemocytes, and agglutination titre. Thus, it can be concluded that sodium butyrate has the potential to act as growth promoter in L. vannamei diets, and improve the balance of intestinal bacterial flora and shrimp growth performance under different systems, and act as stimulant of the immune system.

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-05T18:34:39Z No. of bitstreams: 1 Tatiana Oliveira Fulco.pdf: 6352891 bytes, checksum: 35625276b78761742a718df841963873 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T18:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Oliveira Fulco.pdf: 6352891 bytes, checksum: 35625276b78761742a718df841963873 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Estudos anteriores de nosso grupo demonstraram que o Mycobacterium leprae induz apoptose de monócitos humanos por uma via dependente de proteasoma. No presente trabalho nós demonstramos que o M. leprae induz a produção de TNFa e induz apoptose de monócitos por uma via dependente de NF-?B. A talidomida, utilizada no tratamento do Eritema Nodoso Hansênico, possui atividade anti-TNF por um mecanismo ainda não completamente elucidado. Nós demonstramos que a Talidomida suprime a produção de TNF por uma via dependente de p38 MAPK e NF-?B. O papel da remoção de células apoptóticas também foi avaliado. Apesar de macrófagos ativados pela via alternativa ou Mf2 possuírem maior capacidade de associação com o M. leprae quando comparados a macrófagos ativados pela via clássica ou Mf1, o estímulo com células apoptóticas levou ao aumento na associação do M. leprae em macrófagos Mf1, mas não Mf2. Esse aumento na associação do M. leprae com macrófagos Mf1 estimulados com células apoptóticas está associado ao aumento da expressão gênica de COX-2 e elevados níveis de PGE2, IL-10 e TGF-ß, com redução dos níveis de IL-6 e IL-15. Em conjunto, tais dados sugerem que na presença de células apoptóticas, macrófagos pró-inflamatórios estimulados com o M. leprae, desviam para um fenótipo antiinflamatório o que pode explicar o estabelecimento da infecção em pacientes com a forma tuberculóide da doença / Previous studies o four group revealed that Mycobacterium. leprae induces apoptosis of human monocytes by a proteasome-dependent pathway. In the present work we demonstrated that M. leprae induces TNFa and apoptosis by a NF-?B-dependent pathway. Thalidomide, drug used in treatment of erithema nodosum leprosum, has been described by its anti-TNFa activity although the mechanism is not fully understood. We demonstrated that thalidomide suppress TNFa production by p38 MAPK and NF-?B – dependent pathways. The role of apoptotic cell clearance was also evaluated. Although macrophages activated by alternative pathway or Mf2 have increased phagocytic activity when compared to macrophages activated by classical pathway or Mf1, apoptotic cell uptake increased the association of M. leprae with Mf1 but not Mf2. The increase in M. leprae association with apoptotic cell stimulated Mf1 is associated with the increased COX-2 gene expression and higher levels of PGE2, IL-10 and TGF-ß, with reduced levels of IL-6 and IL-15. Together, these data suggest that in the presence of apoptotic cells, M. leprae stimulated pro-inflammatory macrophages deviates to an anti-inflammatory phenotype that could explain the establishment of M. leprae infection in patients with the tuberculoid form of the disease

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-06T12:07:05Z No. of bitstreams: 1 rosane_b_oliveira_ioc_bp_0007_2003.pdf: 28903576 bytes, checksum: 4167a22455a36ea7147bd41b4dc7b566 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T12:07:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rosane_b_oliveira_ioc_bp_0007_2003.pdf: 28903576 bytes, checksum: 4167a22455a36ea7147bd41b4dc7b566 (MD5) Previous issue date: 2003 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / A principal complicação na hanseníase é o desenvolvimento de deformidades ao longo do curso crônico da doença. Neste estudo, nós utilizamos uma linhagem humana maligna de células de Schwann (ST88-14) para caracterizar a indução do fenômeno de morte celular e a produção de citocinas em células de Schwann (CS) in vivo e in vitro. Têm sido demonstrado que CS tornam-se ativadas e podem produzir citocinas durante injúria experimental e em algumas neuropatias. As funções fisiológicas das células de Schwann e a compreensão de como citocinas, M. leprae e seus componentes causam danos a estas células foram investigados. As células infetadas estimulam a formação do granuloma e subsequentes destruição bacilar e o dano no nervo. A recente descrição dos mecanismos de entrada da bactéria nesta célula e, conseqüentemente, o estudo da interação do M. leprae e da CS no que se refere à resposta imune inata (expressão de receptores Toll - TLR) são essenciais para tentar esclarecer os mecanismos envolvidos no desenvolvimento de lesões do nervo. Assim a expressão do receptor Toll foi avaliado na linhagem ST88-14, em células de Schwann primárias e em biópsias de pele. Investigamos também a possibilidade de células de Schwann humanas serem susceptíveis a morte pela ativação do TLR2. Foi observado a expressão de TLR2 em células de Schwann e a ativaçao destas células com um agonista TLR2, um lipopeptídeo sintético que abrange a porção N-terminal putativa da lipoproteína 19kD de M. leprae induziu a relativa secreção de citocinas IL-6 e IL-8, bem como induziu um aumento no número de células com características de células apoptóticas. A apoptose induzida pelo lipopeptídeo e a produção de citocinas nas CS foi bloqueada com anticorpo monoclonal anti-TLR2. Foi também observado que as CS em lesões de pele de pacientes com hanseníase expressam TLR2 bem como a presença de apoptose in vivo. A capacidade de ligantes de M. leprae induzirem apoptose de CS através de TLR2 proporciona um mecanismo pelo qual a ativação da resposta imune inata contribui para a lesão de nervo na hanseníase. Neste projeto, a capacidade e efeitos de TNFa/TGFb e do M. leprae nas células ST88-14 foram investigados. Neste estudo nós mostramos que as células de Schwann expressam constitutivamente ambos os receptores de TNF. Os resultados demonstraram um índice aumentado de apoptose nas culturas das células na presença de TNFa /TGFb em comparação com controle. Finalmente, um índice aumentado de apoptose também foi observado quando na ST88-14 foi mantida em cultura na presença de M. leprae vivo ou morto. Os dados indicam que TNF-Rs bem como uma resposta específica para TNFa e o efeito sinergístico com TGFb, assim como a infecção pelo M. leprae podem estar implicados na patogênese da lesão do nervo na hanseníase / A major complication in leprosy is the development of deformities along the chronic course of disease. In the present study, a malignant human Schwann cell line (ST88-14) was used to characterize the induction of cell death and the production of cytokines in these in vivo and in vitro SCs. It had previously been shown that, in some neuropathies, SC became activated and produced cytokines during experimental injury. Here, the physiological functions of SC and how cytokines, M. leprae, and M. leprae components possibly cause damage to these cells were investigated. The recent description of the mechanisms utilized by M. leprae to enter SCs and, consequently, the study of M. leprae-SC interaction in the innate immune response (Toll-like receptors - TLR) are essential to understanding what is involved in the development of nerve damage. In this connection, an evaluation was made of TLR expression in skin biopsies and the ST88-14 cell line and whether these cells were susceptible to cell death through TLR2 activation. It was found that TLR2 expression on SCs and their activation by a TLR2 agonist - a synthetic lipopeptide comprising the N-terminal portion of the putative M. leprae 19kD lipoprotein – simultaneously induced IL-6 and IL-8 secretion and triggered increased production of apoptotic cells, which, along with cytokine production, was blocked by an anti-TLR2 monoclonal antibody. Besides demonstrating the presence of TLR2 expression in the SCs of skin lesions of leprosy patients, SCs were also identified in lesions that had undergone apoptosis in vivo. The ability of M. leprae ligands to induce apoptosis of schwann cells through TLR2 provides a mechanism by which activation of the innate immune response contributes to nerve injury in leprosy. Thus, by investigating the capacity and effects of TNFa/TGFb and M. leprae within the human ST88-14 cell line, this study showed that SCs constituitively expressed both TNF receptors and that, in comparison to the controls, their presence triggered increased apoptosis in culture, also observed when ST88-14 was maintained in culture in the presence of live and/or dead M. leprae.. It would, therefore, seem apparent that these observations are clear indications that the TNF-Rs, in conjunction with a specific TNFa response, the synergistic effect with TGFb, and M. leprae infection are all implicated in the pathogenesis of nerve damage

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-17T13:31:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda Trindade Madeira Araujo.pdf: 853168 bytes, checksum: c511cd0ade336e4ad59b3e3dd2cf020e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-17T13:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda Trindade Madeira Araujo.pdf: 853168 bytes, checksum: c511cd0ade336e4ad59b3e3dd2cf020e (MD5) / A sensibilidade e a precisão dos resultados em pesquisas dependem do uso de animais padronizados para diversos parâmetros como pré-requisito importante para a reprodutibilidade em experimentação animal. Assim, a determinação destes parâmetros em valores de referência em uma população de espécimes mantidas em cativeiro é uma ferramenta de diagnóstico essencial para estimar suas condições de saúde e diagnosticar doenças mesmo antes do aparecimento dos sintomas. Neste estudo foram estabelecidos valores de referência para parâmetros hematológicos e bioquímicos e avaliado o perfil imunológico de linhagens de camundongos produzidas nos biotérios do Centro de Pesquisas René Rachou / FIOCRUZMinas e Centro de Criação de Animais de Laboratório / FIOCRUZ. Foram utilizados 332 camundongos, com idade entre 6 e 8 semanas, das linhagens Swiss webster, BALB/c, C57BL/6 e Ifn-γ(-/-) knockout. Após a anestesia dos animais foi realizado o procedimento de punção cardíaca para determinação de parâmetros hematológicos (hemoglobina, eritrócitos, hematócrito, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média, concentração da hemoglobina corpuscular média, global e diferencial de leucócitos e plaquetas), bioquímicos (uréia, creatinina, aspartato transaminase, alanina transaminase, fosfatase alcalina e proteínas totais) e imunológicos (linfócitos T e subpopulações CD4+ e CD8+ e linfócitos B). A determinação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos e a avaliação dos perfis imunológicos foram realizadas por meio do cálculo da mediana, média global e dos valores mínimos e máximos obtidos. Os testes Mann-Whitney e Kruskal-Wallis foram utilizados para comparações entre os grupos e as diferenças foram consideradas estatisticamente significativas para um valor de p<0,05. Os resultados deste trabalho demonstraram existir diferenças estatisticamente significativas no que diz respeito ao sexo, biotério e linhagem na maioria dos parâmetros analisados. Contudo, foi possível perceber uma grande similaridade dos perfis imunológicos, com exceção da comparação feita entre as linhagens. De uma forma geral, os machos apresentaram valores superiores aos das fêmeas em todas as linhagens. Além disso, a linhagem Swiss webster apresentou os maiores valores de referência, evidenciando assim a variabilidade genética destes animais, enquanto que C57BL/6 apresentou as maiores diferenças quando comparada com as outras linhagens. Neste contexto, os resultados obtidos fortalecem a necessidade de estabelecimento de valores de referência para cada biotério instituição, pois está evidenciado que o padrão sanitário dos animais interfere diretamente na caracterização de diferentes parâmetros. Adicionalmente, a caracterização desses parâmetros por sexo, idade e linhagem permite uma correta validação dos experimentos ao mesmo tempo em que auxilia na promoção do sucesso da criação destes animais em cativeiro. / The sensitivity and accuracy of experimental results in research projects involving murine models rely on the use of animals that exhibiting standardized laboratorial parameters as important prerequisites for the data reproducibility in animal experimentation. Thus, the determination of each parameters and its use as reference values in a population of specimens kept in captivity is an essential tool to assess their health status as well as to detect potential diseases even before any symptoms manifest. The current study has established reference values for hematological and biochemical parameters and has still evaluated immunological profile of mice strains produced in the animal houses at Research Center René Rachou /FIOCRUZ-Minas and Breeding Center of Laboratory Animals / FIOCRUZ. We studied 332 mice belong to the Swiss webster, BALB/c, C57BL/6 and Ifn-γ knockout strains, aged from 6 to 8 weeks. After the cardiac puncture of the animals, hematological parameters (hemoglobin, erythrocytes, hematocrit, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin concentration, platelets, global and differential leukocyte count, biochemical (urea, creatinine, aspartate transaminase, alanine transaminase, alkaline phosphatase and total protein) and immunological (T lymphocyte and subpopulations CD4+ and CD8+ and B lymphocytes) were determined. The assessment of these features were performed by evaluating the median, global mean and minimum and maximum values for each analyte. Comparisons among distinct groups were performed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney Tests and the values were considered significant when p < 0,05. These significance differences were found according to animal gender, animal house and strain in most parameters. However, regarding the immunological profile, in most cases, it was possible to observe a great similarity between the groups with exception presented when this profile was compared among strains. In general, for all the strains, males showed higher values than females. In addition, the Swiss Webster strain showed a higher range for the reference values, revealing the genetic variability of these animals. The C57BL/6 strain showed the greatest differences when compared with the additional strains. In this context, the results obtained support the need to establish reference values for each animal house /institution, since it has been evidenced that the health standard of the animals directly interferes in the characterization of different parameters. Additionally, the characterization of hematological, biochemical and immunological features by sex, age and strain might allow us to a correct validation of the experiments as well as help us in promoting the successful creation of these animals in captivity.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-24T17:47:03Z No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Magalhaes Freire Campos.pdf: 4772318 bytes, checksum: 555a5b9ad51faf9705b69cd3e50f2676 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-24T17:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Magalhaes Freire Campos.pdf: 4772318 bytes, checksum: 555a5b9ad51faf9705b69cd3e50f2676 (MD5) / FAPEMIG, CNPq, PAPES V, CPqRR / Os estudos sobre os mecanismos patogênicos que levam à malária grave foram durante muitos anos restritos basicamente ao Plasmodium falciparum. Entretanto, o número de casos de P. vivax vem aumentando em todo o mundo, incluindo aqueles de malária grave. Evidências recentes sugerem que a infecção pelo P. vivax induz uma resposta imune inflamatória mais intensa que aquela induzida pelo P. falciparum. Diante disso, os objetivos deste trabalho foram: (i) investigar mediadores plasmáticos relacionados à inflamação que poderiam ser utilizados como marcadores de morbidade da malária por P. vivax; (ii) identificar indivíduos geneticamente susceptíveis e/ou resistentes à malária clínica. Na busca de biomarcadores, a hipótese investigada foi a de que as micropartículas (MPs) – vesículas resultantes da ativação e/ou apoptose celular – e os ácidos nucléicos circulantes (CNAs) estariam associados à infecção pelo P. vivax. Em pacientes bem caracterizados clinicamente foi possível demonstrar que as MPs, de diferentes origens, estavam significativamente aumentadas na malária por P. vivax, sendo as MPs de origem plaquetária associadas à sintomatologia da doença. Os níveis de CNAs plasmáticos estavam aumentados nos pacientes infectados pelo P. vivax sendo estes níveis associados ao espectro clínico da doença. Um achado interessante no presente trabalho foi que os níveis de CNAs também correlacionaram- se com a trombocitopenia. Um resultado de grande importância foi que os níveis de MPs e CNAs no plasma retornaram aos valores basais após o tratamento antimalárico específico, o que sugere que ambos os fatores podem ser bons marcadores de morbidade por P. vivax. Na segunda parte do estudo, buscou- se a associação entre os polimorfismos genéticos de citocinas (MIF, TNF-α, IL-10 e TGF-β) e de glicoproteínas plaquetárias (GPIa/IIa e GPIIb/IIIa) com as complicações clínicas e hematológicas da infecção pelo P. vivax. Os resultados obtidos evidenciaram associações entre os polimorfismos dos genes GPIa/IIa, TNF-α, MIF e IL-10 e alterações clínicas e hematológicas na malária causada pelo P. vivax. Em resumo, os dados apresentados reforçam a influência de múltiplos genes do hospedeiro vertebrado na malária por P. vivax. Espera-se que os resultados observados no presente trabalho possam contribuir no esclarecimento dos mecanismos envolvidos na patogenia do P. vivax . / Study of the mechanisms involved in the pathogenesis of severe malaria has been widely concentrated in malaria caused by P. falciparum. However, the number of severe cases of P. vivax has been increasing, placing P. vivax infection in a higher status of global health concern. The few studies that had addressed the pathogenesis of vivax malaria had shown that P. vivax infection induces greater host inflammatory responses compared to P. falciparum malaria. Here, the main objectives of the study were: (i) to investigate plasma-derived mediators of inflammation that could be a potential marker of P. vivax clinical disease, (ii) to identify individuals who are genetically susceptible and/or resistant to vivax malaria. Searching for biomarkers, the hypothesis investigated was that cellular microparticles (MPs) – submicron membrane vesicles released upon cellular activation or apoptosis– and circulating nucleic acids (CNAs) are involved in P.vivax infection. In patients clinically well characterized, it was possible to demonstrate that MPs from different cellular origins were significantly increased in P. vivax infection, and those platelet-derived were associated with acute malaria symptoms. Also, the levels of CNAs were increased in plasma of P. vivax patients, with their levels associated with the clinical spectrum of vivax malaria. An interesting finding was that the levels of CNAs were correlated with thrombocytopenia. Of importance, the levels of MPs and CNAs in plasma returned to basal values after specific antimalarial treatment, which suggested they may have potential as biomarkers of vivax morbidity. Further, we sought to investigate the association between genetic polymorphisms in cytokines (MIF, TNF-α, IL-10 and TGF-β) and platelet surface glycoproteins (GPIa/IIa and GPIIb/IIIa) with clinical complications of P. vivax infection. The results showed associations between genetic polymorphisms of several genes – GPIa/IIa, TNF-α, MIF and IL-10 – with hematological and clinical parameters of P. vivax infection. Taken together, the results presented here may shed light on the mechanism involved in the pathogenesis of P.vivax, and it might contribute to the current studies on P. vivax malaria.