Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-06T18:32:25Z No. of bitstreams: 1 Natalia Machado Tavares Avaliação dos mecanismos de controle da infecção...pdf: 5207322 bytes, checksum: 2d216124e5d301463a0d412a4be8ca4f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-06T18:32:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Natalia Machado Tavares Avaliação dos mecanismos de controle da infecção...pdf: 5207322 bytes, checksum: 2d216124e5d301463a0d412a4be8ca4f (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / As Leishmanioses compõem um complexo de doenças causadas pelo parasito protozoário do gênero Leishmania. Os neutrófilos são rapidamente recrutados para o local da infecção, capturando parasitos na pele, e são a principal fonte de leucotrieno B4(LTB4), um mediador lipídico pró- nflamatório. Porém, o papel do LTB4 no controle da infecção por Leishmania amazonensis em neutrófilos humanos tem sido pouco investigado. Neste estudo, foi demonstrado que L. amazonensis ou seu lipofosfoglicano (LPG) induziram ativação dos neutrófilos com liberação dos conteúdos granulares e produção de LTB4. Observamos também que este mediador lipídico está envolvido na eliminação de Leishmania dentro do neutrófilo por regular a degranulação e produção de radicais livres de oxigênio (ROS). A infecção por L. amazonensis também induziu um rápido aumento na expressão de TLR2 e TLR4. Porém, apenas TLR2 é internalizado após 3horas e sua expressão é parcialmente dependente de LTB4. Zileuton, o inibidor farmacológico da 5-lipoxigenase (5-­‐LO), e portanto, inibidor da produção de LTB4, reduziu a capacidade leishmanicida e fagocitose dos neutrófilos. Também demonstramos que NFkB é a principal cascata de sinalização responsável pelo mecanismo leishmanicida induzido por LTB4. Tais mecanismos induzidos por LTB4 são, provavelmente, mediados pelo seu receptor endógeno, PPARα. Estes achados revelam o papel essencial do LTB4 na regulação da fagocitose de L.amazonensis por neutrófilos humanos pela internalização de TLR2. Esta via leva à eliminação da L. amazonensis por mecanismos dependentes de LTB4. / Leishmaniasis is a complex of diseases caused by a protozoan parasite from the Leishmania genus. Neutrophils are rapidly recruited to the site of Leishmania infection and play an active role by capturing parasites in the skin. They are known as the main source of leukotriene B 4 (LTB4), a potent pro-­‐inflammatory lipid mediator. However, the role of LTB4 in the control of Leishmania amazonensis infection by human neutrophils has not yet been investigated. In this study, we demonstrated that L. amazonensis or its lipophosphoglycan (LPG) induced neutrophil activation with release of granules content and LTB4 production. We found that this lipid mediator is involved in Leishmania killing inside the neutrophil through the regulation of enzymes granules release and ROS production. L. amazonensis infection also induced a rapid increase of TLR2 and TLR4 expression. However, only TLR2 is internalized at later time point and its expression is partially LTB4-­‐dependent. Zileuton, the pharmacological inhibitor of 5-­‐lipoxigenase (5-­‐LO) and therefore, inhibitor of LTB4 production, decreased killing ability and phagocytosis in L. amazonensis-­‐infected neutrophil. We confirmed that NFkB is the main signaling cascade responsible for the leishmanicidal mechanism induced by LTB4. These effectors mechanisms triggered by LTB4 are probably mediated through its endogenous receptor, PPARα. Our findings reveal the essential role of LTB4 in regulating L. amazonensis phagocytosis by human neutrophils through TLR2 internalization. This pathway leads to L. amazonensis elimination also by LTB4-­‐ dependent mechanisms.

Made available in DSpace on 2014-03-18T17:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carla_honse_ipec_mest_2008.pdf: 692967 bytes, checksum: eadada79ac6bb425b22a8acdfd310d3a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Foram estudados 35 cães adultos, sem raça definida, divididos em 2 grupos: LVC (leishmaniose visceral canina; n=11) e CNCP (cães negativos em cultura parasitológica; n=24). Um terceiro grupo (sadio, n=18) foi utilizado como parâmetro de referência dos testes de coagulação sanguínea. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de alterações hemostáticas em cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi provenientes de inquéritos sorológicos para LVC realizados pela Secretaria Municipal de Saúde do Rio de Janeiro. A hemostasia primária foi avaliada através da contagem de plaquetas e mensuração do tempo de sangramento; a hemostasia secundária, através da mensuração dos tempos de protrombina e tromboplastina parcial ativada; e a fibrinólise, através da detecção dos produtos de degradação da fibrina em teste de aglutinação em látex Adicionalmente, foram realizados o hemograma e detecção de anticorpos contra Ehrlichia canis e Borrelia burgdorferi e antígenos de Dirofilaria immitis de todos os animais. De acordo com os resultados obtidos, não foi observada diferença significativa (p>0,05) entre o grupo LVC e o grupo CNCP, ainda que ambos apresentassem alterações na hemostasia primária, secundária e/ou fibrinólise. Em virtude da co-infecção de alguns animais do grupo LVC por Ehrlichia canis, não foi possível atribuir as alterações encontradas exclusivamente ao agente Leishmania (Leishmania) chagasi, sendo necessária a realização de novos estudos para melhor compreensão sobre a patogenia desta doença / Thirty five adult mongrel dogs were divided into two groups: CVL (canine visceral leishmaniasis; n=11) and DNPC (dogs with negative parasitological culture; n=24). A third group (healthy, n=18) was used as a reference in the coagulation tests. The purpose of this study was to evaluate the occurrence of haemostatic changes in dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi from the VL serological surveys done by Secretaria Municipal de Saúde do Rio de Janeiro. The primary haemostasis was evaluated by the platelet count and measurement of the bleeding time; the secondary haemostasis was evaluated through the measurement of the prothrombin time and the activated parcial thromboplastin time; and the fibrinolysis through the detection of the fibrin degradation products by latex agglutination test. In addition to that, the blood count and detection of antibodies against Ehrlichia canis and Borrelia burgdorferi , as well as antigens of Dirofilaria immitis were carried out in all the animals. According to the results, no significant difference (p>0,05) was observed among the CVL group and DNPC group, even though both presented changes in the primary and secondary haemostasis and/or the fibrinolysis. Due to the co-infection of some animals from the CVL group by Ehrlichia canis , it was not possible to attribute the alterations to agent Leishmania (Leishmania) chagasi exclusively. Hence, further studies are necessary for a better comprehension of the pathogeny of the disease.

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:01:39Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 0000038.pdf: 2738587 bytes, checksum: 7dd6564c63323c9353ec15e4c463c4a5 (MD5) 0000038.pdf.txt: 326814 bytes, checksum: 1acd256ee177408fef6eab95a8608842 (MD5) 0000038.pdf.jpg: 1316 bytes, checksum: 9be572866ac5936e7312385f6a8bde28 (MD5) Previous issue date: 2013 / A Leishmaniose Visceral Americana (LVA) no Brasil é um importante problema de Saúde Pública, cuja expansão geográfica tem possibilitado o seu eselecimento em áreas urbanas das médias e grandes cidades. Desta forma, ressalta-se a importância da produção de conhecimentos sobre os fatores determinantes associados ao novo perfil epidemiológico. Este estudo procurou identificar fatores da expansão e urbanização dovetor, Lutzomyia (L.) longipalpis, numa abordagem ampla no contexto epidemiológico da LVA, considerando múltiplas interações: ambiente, parasita e reservatórios. Os objetivos foram: discutir os estudos sobre hábitos alimentares de insetos vetores de patógenos humanos, com ênfase na subfamília Phlebotominae; analisar os fatores associados ao processo de expansão e urbanização da LVA; discutir a expansão da LVA no Estado do Tocantins correlacionando incremento de desflorestamento, estratificação da doença, classes do uso do solo e presença do vetor L. (L.) longipalpis; diagnosticar a infecção natural por Leishmania (L.) infantumchagasi em associação com a fonte alimentar, através de métodos moleculares, em exemplares de L. (L.) longipalpis procedentes dos municípios de Araguaína (TO), Fortaleza (CE), Sobral (CE), e Rio de Janeiro (RJ). No atual cenário das mudanças ambientais, é fundamental a condução de estudos voltados para as doenças relacionadas ao ambiente, como a LVA. Nesta perspectiva, pesquisas sobre o vetor L. (L.) longipalpis devem produzir conhecimentos que permitam entender a epidemiologia da doença, além de subsidiar o planejamento de estratégias de controle. A análise ecoepidemiológica da LVA em Tocantins revelou que, dos 139 municípios, 120 apresentaram registros de casos humanos. / As áreas de incremento do desmatamento se mantiveram frequentes, principalmente na região norte,onde se observa elevado número de casos humanos. Em relação ao perfil de estratificação, 40% dos municípios apresentaram expansão da LVA. Lutzomyia (L.) longipalpis se mostrou presente em todas as classes do uso do solo, com correlação negativa apenas para pastagem cultivada. Em relação ao registro anual de casos humanos de LVA, dentre as áreas que apresentaram correlação positiva com maior frequência destacam-se áreas de influência urbana e ambiente urbanizado. A avaliaçãodos hábitos alimentares em flebotomíneos é capaz de responder questões importantes sobre o comportamento, ecologia e adaptação dos vetores. Dentre as técnicas já descritas, as mais utilizadas ainda são as técnicas imunológicas, embora as técnicas moleculares vem sendo empregadas com maior frequência, pois permitem de forma mais sensível a identificação da fonte alimentar e da infecção natural. Tais informações são importantes, não apenas para um melhor conhecimento acerca dos vetores, mas também sobre potenciais reservatórios de Leishmania. Em relação à preferência alimentar, L. (L.) longipalpis apresentou índice de positividade de 29,3% relacionado com fonte alimentar humana, seguido de cão e ave, não sendo encontradas fêmeas alimentadas em gambá. O índice geral de infecção natural por L. (L.) infantum chagasi foi de 4,51%, sendo 4,9% em Araguaína e 9,75% em Sobral. Das fêmeas infectadas de Araguaína, uma estava alimentada com sangue de cão e outra em sangue humano. Em Sobral, das quatro fêmeas infectadas, três estavam alimentadas em sangue humano.

FONSECA, F. R. M. Influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster. 2016. 90 f. Dissertação (mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:30Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- ɣ, TNF- α and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. / Leishmania braziliensis é o principal agente causador de leishmaniose cutânea no Brasil, e apesar de sua importância para a Saúde Pública, há carência de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecção na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradérmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradérmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesões foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplíteo), fígado e baço, para a avaliação da carga parasitária, expressão de mediadores inflamatórios e análise das alterações histopatológicas. As lesões surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesões na orelha ulceraram e foram maiores (p<0,0001) ao contrário das lesões da pata, que se apresentaram como pequenos nódulos, sem úlceras. Na orelha foi observada significante carga parasitária após 30, 40 e 60d.p.i., tanto na lesão como no linfonodo, sendo a carga parasitária sempre maior na lesão. Independente da via de inoculação, o fígado e baço não estavam aumentados, não apresentavam nódulos e nem parasitos. No linfonodo retromaxilar, observou-se uma maior expressão das citocinas inflamatórias IFN-ɣ, TNF-α e IL-6 e da enzima arginase, com 30 e 60d.p.i., e isso foi corroborado com as alterações histológicas observadas na orelha, processo inflamatório mais intenso e cronicidade da doença. Ao contrário, no linfonodo poplíteo (pata), apresentou um misto de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias, sugerindo uma regulação bem precoce da resposta imunológica e inflamatória. Observou-se também que quanto maior o inóculo, mais intensa a resposta inflamatória e maiores as lesões, entretanto, sem disseminação do parasito para fígado e baço, sugerindo menor comprometimento sistêmico e maior tempo de sobrevida para o animal. Em suma, os dados indicam que o inóculo de 105 parasitos no modelo de infecção na orelha poderia facilitar a visualização de um possível efeito protetor de novos fármacos ou candidatos vacinais.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-07T10:17:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6010143 bytes, checksum: 17ea0355849d60b92bc6d90854eac3ef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T10:17:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6010143 bytes, checksum: 17ea0355849d60b92bc6d90854eac3ef (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses compreendem um amplo espectro de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania. No hospedeiro vertebrado estes parasitos infectam principalmente os macrófagos, onde conseguem escapar dos mecanismos de defesa e se proliferam. Muitos trabalhos relatam que a sinalização purinérgica é modulada durante o desenvolvimento e ativação das células do sistema imune. Para obterem sucesso na infecção, vários patógenos conseguem subverter a resposta imune através da modulação da sinalização purinérgica, promovendo uma diminuição dos níveis de ATP (molécula pró-inflamatória) e levando a um aumento dos níveis de adenosina (molécula imunossupressora). Este desfecho resulta da atividade conjunta de algumas ecto- nucleotidases, das E-NTPDases e da 5’-ecto-nucleotidase, tema que é abordado no segundo capítulo desta tese. Em Leishmania, as E-NTPDases são consideradas importantes porque participam da via de salvação de purinas, além de serem citadas em diversos artigos como responsáveis por aumento de virulência e infectividade em diferentes espécies. Em trabalhos desenvolvidos por nosso grupo de pesquisa, as E- NTPDases 1 e 2 de L. infantum foram caracterizadas em sistema bacteriano, demonstrando resultados promissores. A possibilidade de expressar essas proteínas em sistema de expressão Leishmania (Leishmania Expression System – LEXSY – Jena Bioscience) nos impulsionou a desenvolver o presente projeto, com o intuito de caracterizar essas enzimas em um organismo bem mais próximo ao original e avaliar o seu potencial uso como vacina viva. Portanto, a clonagem das Lic-E-NTPDases sistema LEXSY é o tema abordado no primeiro capítulo desta tese. / Leishmaniasis comprises a broad spectrum of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania. In vertebrate host, these parasites mainly infect macrophages, where they can escape of defense mechanisms and proliferate. Several works have reported that the purinergic signaling is modulated during development and activation of immune cells. To achieve successful infection, many pathogens can subvert the immune response through modulation of purinergic signaling by promoting a reduction in ATP levels (pro- inflammatory molecule) and leading to increased adenosine levels (immunosuppressive molecule). This outcome results from the joint activity of some ecto-nucleotidases, the E- NTPDase and 5'-ecto-nucleotidase, a topic that is discussed in the second chapter of this thesis. In Leishmania, the E-NTPDases are considered important because they participate in purine salvage pathway, and are cited in various articles to be responsible for increased infectivity and virulence in different species. In work carried out by our research group, the E-NTPDase 1 and 2 of L. infantum were characterized in bacterial system, demonstrating promising results. The ability to express these proteins in Leishmania expression system (Leishmania Expression System - LEXSY - Jena Bioscience) prompted us to develop this project, in order to characterize these enzymes in an organism similar to the original and evaluate its potential use as a live vaccine. Therefore, the cloning of Lic-E-NTPDases in LEXSY system is the subject discussed in the first chapter of this thesis.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-01T16:28:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2181156 bytes, checksum: 1a75ca604e9d172abff343dcc414bc44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T16:28:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2181156 bytes, checksum: 1a75ca604e9d172abff343dcc414bc44 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são uma das mais significantes doenças tropicais negligenciadas em todo o mundo, apresentando cerca de 1,3 milhão de novos casos anualmente e 20.000 a 30.000 mortes no mesmo período. Leishmania braziliensis é a principal espécie responsável pela Leishmaniose Tegumentar no Novo Mundo, sendo o Brasil o país com a maior incidência da doença frente a outros países da América do Sul. O arsenal terapêutico contra a Leishmaniose Tegumentar é ainda bastante restrito, e mesmo quando eficazes, as drogas de escolha causam efeitos colaterais graves. Dessa forma, este trabalho é parte de um esforço de várias instituições nacionais e internacionais, financiado pela Comunidade Europeia através do consórcio A- ParaDDisE (http://a-paraddise.cebio.org/), cujo objetivo é a descoberta de novas drogas para o tratamento de doenças parasitárias negligenciadas, incluindo as Leishmanioses. Enzimas modificadoras de Histonas (HMEs), como as histonas deacetilases (HDACs), estão envolvidas em processos celulares cruciais, como a ativação e inibição da expressão gênica. Inibidores dessas enzimas têm sido investigados como drogas candidatas para aplicação na quimioterapia de uma variedade de doenças, incluindo o câncer e doenças parasitárias, uma vez que eles inibem a progressão do ciclo celular e/ou induzem a apoptose. Neste trabalho foram testados compostos inibidores de HMEs (iHMEs), enviados por pesquisadores parceiros do consórcio A-ParaDDisE, em formas promastigotas axênicas e amastigotas intracelulares de L. braziliensis em infeção de células hospedeiras (macrófagos da linhagem Raw 264.7). Os resultados mostram diferentes efeitos para esses iHMEs em promastigotas e amastigotas, como observado para os compostos BSF38 e BSF39, que apresentaram efeito significante em promastigotas, mas não em amastigotas. Já o composto BSF2 foi eficaz em matar tanto as formas promastigotas axênicas quanto as amastigotas intracelulares, atingindo cerca de 95% de ação leishmanicida, similar à droga controle Anfotericina B. Além disto, a toxicidade destes compostos para macrófagos foi mínima ou não existiu. Sendo assim, o BSF2 pode ser considerado um bom alvo para continuidade do desenvolvimento de novas drogas leishmanicidas com ação sobre L. braziliensis. / Leishmaniasis is one of the major neglected tropical diseases worldwide, featuring about 1.3 million new cases annually and 20.000 - 30.000 deaths in the same period. Leishmania braziliensis is the main species responsible for cutaneous leishmaniasis in New World, and Brazil is the country with the highest incidence of the front disease to other countries in South America. The therapeutic arsenal against cutaneous leishmaniasis is still quite limited, and even when effective, the choice drugs cause serious side effects. Thus, this work is part of an effort of several national and international institutions, financed by the European Community by the consortium A-ParaDDisE (http://a-paraddise.cebio.org/), whose objective is the discovery of new drugs for the treatment of neglected parasitic diseases, including leishmaniasis. Histone modifying enzymes (HMEs), such as histone deacetylases (HDACs), are involved in key cellular processes such as activation and inhibition of gene expression. Inhibitors of these enzymes have been studied as candidate drugs for use in the chemotherapy of a variety of diseases, including cancer and parasitic diseases since they inhibit cell cycle progression and / or induce apoptosis. In this study we tested HMEs compounds inhibitors (iHMEs), submitted by A-ParaDDisE research partners, in promastigotes and intracellular amastigotes of L. braziliensis infection in host cells (macrophages of Raw 264.7 lineage). The results show different effects of these iHMEs in promastigotes and amastigotes, as observed for compounds BSF38 and BSF39, which showed significant effect in promastigotes, but not in amastigotes. BSF2 compound was effective in killing both promastigotes axenic forms as intracellular amastigotes, reaching about 95% of leishmanicidal action, similar to drug control Amphotericin B. In addition, the toxicity of these compounds to macrophages was minimal or did not exist. Thus, the BSF2 can be considered a good target for continued development of new drugs acting against L. braziliensis.

FRUTUOSO, Mércia Sindeaux. Efeito adjuvante da lectina de Canavalia brasiliensis no tratamento de Leishmaniose cutânea experimental. 2016. 117 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T19:05:19Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) / Rejected by Jairo Viana (jairo@ufc.br), reason: Está faltando título em inglês on 2017-09-19T19:06:36Z (GMT) / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T19:07:21Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-19T19:08:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T19:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_msfrutuoso.pdf: 247932 bytes, checksum: dab45373eaaf1211d8520597a25ac2da (MD5) Previous issue date: 2017 / The leishmaniases are importante public health problem, comprising a very wide spectrum of clinical presentations. The host protection and cure, depend on his or her capacity to mount an imune response type Th1, and IFN-γ is a key molecule on this protective response. The drugs of first choice for the treatment are the pentavalent antimonials, which cause several side effects and the most concerning side effect is the cardiotoxic ones. On the search for alternative treatment, fluconazole has shown promising results, however it has to be given for a longer time and in higher doses to achieve a better response. The Canavalia brasiliensis lectin (ConBr) has been described as a potent immune modulator, as it induces lymphocytic proliferation, with the production of IFN-γ. Based on these data we studied, if ConBr would potentiate the effect of fluconazole on the treatment of experimental cutaneous leishmaniasis, caused by L. braziliensis. To evaluate this, BALB/c mices (n=40) were infected with L. braziliensis and were divide randomly 10 days post-infection, in 5 groups, with the following treatments: 1- fluconazole (30mg/Kg/day/10days, per os); 2- Glucantime® (60mg/Kg/day/10days, intramuscular); 3- ConBr (10μg/50μl/day/5days, intramuscular); 4- Fluconazole (30mg/Kg/day/10days, per os) plus ConBr (10μg/50μl/day/5days, intramuscular); 5- Saline solution per os. The parameters evaluated on the 200 day post infection were: the thickness of the lesion every third day; parasite load on the draining lymph node; production of IFN-γ, IL-10, and TGF-β in cell culture of the draining lymph node supernatant, stimulated in vitro with promastigotes of L. braziliensis; relative liver and spleen weight and histopathological analysis of the lesions. Animals that were treated with the association of fluconazole and ConBr, when compared with those treated with saline solution, presented a significant reduction on the parasite load on the draining lymph nodes (p=0,006), reduction in lesion size (p=0,03) and higher production of IFN-γ on the supernatant of cell culture of regional lymph nodes (p=0,03). Similar data were observed on the group treated with Glucantime®, and all together, demonstrate that the association of fluconazole and ConBr was capable of inducing a therapeutic response similar to the one seen in the group treated with Glucantime®, which is considered the gold standard in the treatment for leishmaniasis. / As leishmanioses constituem grande problema de saúde pública, compreendendo um amplo espectro de síndromes clínicas que pode ter manifestações diversas. Proteção e cura do hospedeiro se correlacionam com o desenvolvimento de resposta imune tipo Th1, e IFN-γ é considerada uma molécula chave nesta resposta protetora. A droga de primeira escolha para o tratamento das leishmanioses é o antimonial pentavalente, que possui vários efeitos colaterais, especialmente seu efeito cardiotóxico. Na busca de novas alternativas de tratamento, o fluconazol vem apresentando dados promissores, porém necessita de um maior tempo de tratamento ou de doses mais elevadas para apresentar uma melhor resposta. A lectina de Canavalia brasilienses (ConBr) tem sido descrita como potente imunomodulador, pois induz proliferação linfocitária com produção de IFN-γ. Com base nesses dados, buscou-se avaliar se ConBr potencializaria o efeito do Fluconazol no tratamento da leishmaniose cutânea experimental por Leishmania (Viannia) braziliensis. Para isso, camundongos BALB/c (n=40) foram infectados com L. braziliensis e divididos aleatoriamente, após 10 dias de infecção, em cinco grupos, com os seguintes tratamentos: 1- Fluconazol (30mg/Kg/dia/10dias, por via oral); 2- Glucantime® (60mg/Kg/dia/10dias, por via intramuscular); 3- ConBr (10µg/50µl/dia/5dias, por via intramuscular); 4- Fluconazol (30mg/Kg/dia/10dias, por via oral) associado com ConBr (10µg/50µl/dia/5dias, intramuscular); 5- solução salina por via oral. Os parâmetros avaliados no 20o dia pós-infecção foram: a espessura das lesões a cada três dias; a carga parasitária no linfonodo de drenagem; secreção de IFN-γ, IL-10, TGF-β no sobrenadante de culturas de células do linfonodo de drenagem reestimulados in vitro com promastigotas de L. braziliensis; peso relativo do fígado e do baço e análise histopatológica das lesões. Os animais que foram tratados com a associação Fluconazol-ConBr, quando comparados com o grupo tratado com salina, apresentaram uma redução significativa da carga parasitária do linfonodo de drenagem (p=0,006), redução no tamanho da lesão (p=0,03) e maior síntese de IFN-γ no sobrenadante das culturas de células do linfonodo regional (p=0,03). Dados semelhantes foram observados no grupo tratado com Glucantime®, o que em conjunto, demonstra que a associação Fluconazol-ConBr foi capaz de induzir uma resposta terapêutica semelhante ao tratamento com Glucantime®, considerado padrão ouro.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330011.pdf: 10288260 bytes, checksum: 4f2e6f664c9ef0b1ddbc6b2c49b93c33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os fármacos utilizados nos tratamentos atuais de tripanossomatídeos, Trypanosoma cruzi (doença de Chagas) e Leishmania spp. (leishmanioses) são caros, limitados e não são eficazes, o que aponta para a necessidade urgente de desenvolvimento de novas moléculas ativas. Neste sentido, o presente trabalho está direcionado à síntese de compostos potencialmente ativos contra esses parasitas. Considerando a abordagem de planejamento de fármacos, o ponto de partida desse trabalho foram alguns estudos prévios indicando a atividade antitripanossoma promissora de neolignanas. Neste trabalho, partindo dos aldeídos comerciais (4-metoxibenzaldeído, 3,4-dimetoxibenzaldeído, benzaldeído e 1,3-benzodioxole-5-carbaldeído), foram preparados os respectivos derivados isoxazólicos 3,5-dissubstituídos, através da reação de cicloadição[3+2] 1,3 dipolar entre um dipolo (óxido de nitrila) e um dipolarófilo (álcool propargílico), com rendimentos entre 55-76%. A partir desses heterociclos foram preparados os derivados azida como intermediários para a segunda reação de cicloadição. Essa reação, catalisada por cobre(I), envolveu a adição de alcinos terminais ao grupamento azido (1,3 cicloadição azida- alquino catalisada por cobre, reação de Huisge), resultando na formação de uma biblioteca de 72 compostos contendo os anéis isoxazol e 1,2,3 triazol, com rendimentos na ordem de 50- 98%. Esses compostos, a maioria dos quais de estrutura ainda não descrita na literatura, foram caracterizados através dos RMN 1H, 13C ou HSQC e espectrometria de massas (LC-MS) de alta resolução. A obtenção dos compostos bis-heterocíclicos contendo os anéis isoxazol e triazol foi através de uma rota sintética relativamente simples e, de modo geral, com ótimos rendimentos, sem subprodutos e em um curto tempo reacional.<br> / Abstract : The drugs used in current treatments of trypanosomatids, Trypanosoma cruzi (Chagas disease) and Leishmania spp. (leishmaniasis) are expensive, limited and are not effective, poiting the urgent need for development of new active molecules. In this way, the aim of this work is the synthesis compounds with potentially active against these parasites. Considering the approach of drug design, the starting point of this work was some previous studies indicating promising trypanocidal activity for some neolignans. In this work, initially four commercial aldehydes (4-methoxybenzaldehyde, 3,4-dimethoxybenzaldehyde, benzaldehyde and 1,3-benzodioxole-5-carbaldehyde) were used to prepare the 3,5-disubstituted isoxazoles derivative by cycloaddition reaction 1,3dipole between a dipole (nitrile oxide) and dipolarophile (propargyl alcohol), in 55-76% of yields. With these compounds, were prepared heterocycles azides derivatives as intermediates for the second cycloaddition reaction. This reaction of cycloaddition was catalyzing by copper(I), it involved the addition of terminal alkynes to azide group (1,3 azide-alkyne cycloaddition catalyzed by copper, Huisgen reaction), resulting in a library of 72 compounds containing the isoxazole ring and 1,2,3 triazole, with yields in the range 50-98%. Most of these compounds have not been described in the literature and all of them were characterized by 1H NMR, 13C NMR or HSQC and mass spectrometry (LC-MS) in high resolution. The attainment of the bis-heterocyclic compounds containing isoxazole and triazole rings was possible a relatively simple synthetic route, generally in good yields, without by products and at a short reaction time.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:05:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330536.pdf: 3500374 bytes, checksum: 15992ed423b9beb5fa061d0b05f86e13 (MD5) Previous issue date: 2014 / As Leishmanioses afetam cerca de 15 milhões de pessoas e constiuem um importante problema de saúde pública mundial. O controle da parasitose baseia-se principalmente na quimioterapia, usando como medicamento de primeira escolha o antimonial pentavalente SbV (Glucantime®). O surgimento de resistência aos fármacos de uso clínico, a ausência de vacinas eficazes, a propagação de vetores resistentes aos inseticidas tornam o controle das Leishmanioses difícil e complexo. Para entender melhor o papel dos macrófagos na Leishmaniose humana e estabelecer estratégias para prevenir os efeitos nocivos da Leishmania, dados sobre os padrões de expressão de genes e proteínas, em Macrófagos Derivados de Monócitos de Humanos (MDM) infectados com Leishmania sob condições de tratamento, são essenciais. Neste estudo, foram analisadas as alterações nos níveis de expressão de genes e proteínas de macrófagos humanos, durante a infecção in vitro por Leishmania braziliensis e tratamento com Glucantime usando qPCR-arrays, ensaios de Western blot, microscopia confocal e ensaios de inibição usando siRNA. Os resultados indicam que a infecção com L. braziliensis e o tratamento SbV conjuntamente, modulam a expressão de genes em macrófagos, em particular aqueles envolvidos na via de biossíntese da glutationa. Análises de correlação permitiram determinar superexpressão dos marcadores GSTP1, GCLM, GSR, GSS, TRX e ABCB5 tanto nos níveis do mRNA quanto das proteínas, em MDM de humanos infectados e tratados quando comparados ao grupo controle. O estudo da localização subcelular mostrou que o transportador ABCB5 apresenta uma localização predominantemente fagolisossomal, indicando que essa proteína poderia estar envolvida no transporte de Glucantime. Nos ensaios de inibição selectiva o silenciamento dos genes gstp1, gss e abcb5 aumentaram o efeito leishmanicida in vitro do SbV induzindo uma redução da sobrevivência intracelular de L. brazilienisis em macrófagos THP-1. Essa resposta foi igualmente confirmada para o gene gstp1 onde os resultados de tempo e concentração dependente mostraram que a redução da sobrevivência intracelular era observada 24h após exposição ao SbV e a uma dose menor. Nossos resultados sugerem que há uma ativação de genes envolvidos na defesa antioxidante em macrófagos humanos como resposta a infecção com L. braziliensis e o tratamento com Glucantime, potencializando a detoxificação do fármaco. Conclui-se que as proteínas GSTP1, GSS e ABCB5 seriam potenciais alvos candidatos para intervenção terapêutica mediante a inibição seletiva destes marcadores. <br> / Abstract: Leishmaniasis affects millions of people worldwide and represents a major public health problem. Leishmaniasis control relies primarily on chemotherapy, with the mainstay being pentavalent antimony (SbV) complexed to carbohydrates in the form of sodium stibogluconate (Pentostam®) or meglumine antimoniate (Glucantime®). Due to the emergence of drug resistance, the absence of effective vaccines and the spread of insecticide-resistant vectors, Leishmaniasis control is becoming extremely difficult and complex. To better understand the role of macrophages in human Leishmaniasis and to advance in new strategies to prevent the harmful effects of Leishmania parasites, information about the protein expression patterns in the context of Leishmania-infected human monocyte-derived macrophages (MDM) under drug treatment conditions are essential. In this study, we analyzed the changes in the expression levels of human MDM proteins during in vitro infection by Leishmania braziliensis and treatment with Glucantime using qPCR arrays, Western blot, confocal microscopy and siRNA inhibition assays. The results indicate that L. braziliensis infection/SbV treatment modulated the host gene expression, particularly in the glutathione biosynthesis pathway. Comparing results from gene transcription and protein expression analysis, allowed to determine that GSTP1, GCLM, GSR, GSS, TXN, and ABCB5 were strongly up-regulated at both mRNA and protein levels when compared to the control group. Subcellular localization studies showed mostly fagolissosomal location of the ABCB5 transportes, indicating that this protein may be involved in the transport of Glucantime. Selective inhibition assays by gene silencing siRNA assays of gstp1, gss and abcb5 showed an increased in vitro leishmanicidal effect to Sb exposure inducing a decrease in intracellular survival of L. brazilienisis in THP-1 macrophages. This response was also confirmed for gstp1 gene in which the results showed a time and dose-dependent effect in the reduction of intracellular survival where even at 24 hours of exposure to SbV and a lower dose of 8 mg/mL significant intracellular leishmanicidal effects were found. These analyses suggest that, modulations of human MDM by L. braziliensis infection and Glucantime treatment raise the activation of genes participating in antioxidant defense enhancing the drug detoxification. Therefore we concluded that GSTP1, GSS and ABCB5 proteins could be potential targets for therapeutic interventions by selective inhibition of these markers.

Made available in DSpace on 2012-05-07T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000001.pdf: 2146845 bytes, checksum: be41c6f640ad1e8648af9fc24c2b3ad0 (MD5) Previous issue date: 2006 / A busca de marcadores de doença ativa e a validação de critérios de cura pós-terapêutica têm sido amplamente investigados na LV. Entretanto, o estabelecimento de um critério de cura sorológico ainda permanece inconclusivo. Os critérios adotados atualmente para estabelecer uma eficácia terapêutica dependem da avaliação clínica 12 meses pós-tratamento. O objetivo desse trabalho, foi avaliar a aplicabilidade da citometria de fluxo na pesquisa de anticorpos anti-promastigotas fixadas de L. (L.) chagasi (AAPF) na avaliação 12 meses após o tratamento e encontrar um indicador laboratorial de cura 2 meses e 6 meses pós-tratamento. Foi estabelecida uma relação entre os níveis de anticorpos anti L. (L.) chagasi e a eficácia do tratamento na LV, através da AAPF. Neste estudo foram avaliados soros de 21 pacientes com diagnóstico parasitológico positivo para LV, coletados antes e após o tratamento. As amostras de soro diluídas (1:1.000 a 1:128.000) foram incubadas com promastigotas fixadas, posteriormente incubadas com anti-IgG humana marcadas com FITC e IgG subclasses marcadas com SAPE na diluição de 1.000 a 128.000 para a pesquisa de IgG1 e 1:40 a 1:5.120 na pesquisa de IgG2, IgG3 e IgG4 e analisadas no citômetro de fluxo. Os resultados foram expressos como o percentual de parasitas fluorescentes positivos (PPFP) para cada amostra individual, estabelecendo 50 porcento como ponto de pacientes avaliados 12 meses após o tratamento (71,4 porcento). Entretanto, 2 meses após o tratamento foi encontrado valores de PPFP < 50 porcento em menos de 50 porcento dos pacientes. Em relação a subclasses de IgG foi encontrado valores reagentes em IgG1 e IgG3. Na pesquisa da AAPF para IgG1 pacientes apresentou melhor desempenho na monitoração terapêutica. Observamos 90,5 porcento de queda nos níveis de PPFP 6 meses e 71,4 porcento 2 meses pós-tratamento. Nossos resultados mostraram a aplicabilidade da citometria de fluxo para detecção de anticorpos anti-L. (L.) chagasi e na monitoração de cura na LV