Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:10:40Z : No. of bitstreams: 1 rosa_fa_me_araca.pdf: 638635 bytes, checksum: 6da71a7df4b64d7dee14e747e3b9a7cd (MD5) / O acometimento cardíaco é raro em pacientes com leishmaniose visceral (LV). Porém, existem relatos demonstrando graus variáveis de comprometimento desse órgão em cães e seres humanos acometidos. O presente estudo teve por objetivos avaliar a ocorrência de alterações histopatológicas e a presença de Leishmania sp. no miocárdio (átrio direito, ventrículo direito, septo interventricular e ventrículo esquerdo) de 30 cães naturalmente infectados. As principais alterações macroscópicas observadas foram dilatação ventricular direita em 53,3% (16/30) dos animais e hipertrofia concêntrica do ventrículo esquerdo em 20% (6/30). Reação inflamatória caracterizada pela presença de infiltrado linfoplasmocitário em graus variados de intensidade foi observada em 90% (27/30) dos cães, necrose coagulativa de cardiomiócitos ou em bandas de contração em 80% (24/30), aumento de colágeno intersticial em 73,3% (22/30), granuloma em 23,3% (7/30), infiltração gordurosa em 16,7% (5/30) e necrose fibrinóide em 10% (3/30) dos cães. A presença de formas amastigotas no tecido cardíaco foi identificada por imuno- histoquímica em 66,7% (20/30) dos animais. Apesar da elevada prevalência de alterações histopatológicas e da presença de formas amastigotas de Leishmania sp. no miocárdio, tais alterações foram discretas e insuficientes para produzir manifestações clínicas nos cães com LV. Como os animais do presente estudo foram submetidos a eutanásia, permanece incerto se o envolvimento cardíaco teria sido mais severo se a doença tivesse seguido seu curso natural / Cardiac involvement is rare in patients with visceral leishmaniasis, however some studies have shown several degrees of heart impairment in dogs as well as in human beings. The present study aimed to evaluate the occurrence of histopathological lesions and the presence of Leishmania sp. in the myocardium (right atrium, right ventricle, interventricular septum and left ventricle) of 30 naturally infected dogs. The most frequent macroscopic findings were right ventricular enlargment in 53.3% (16/30) and concentric left ventricular hypertrophy in 20% (6/30) of the dogs. Inflammatory reaction characterized by the presence of lymphocytic infiltrate in different degrees of intensity was observed in 90% (27/30), coagulative necrosis of cardiomyocytes or contraction bands necrosis in 80% (24/30), increased interstitial collagen in 73.3% (22/30), lepromatous granuloma in 23.3% (7/30), fat infiltration in 16.7% (5/30) and fibrinoid necrosis in 10% (3/30) of the dogs. The presence of amastigotes in the cardiac tissue was identified by immunohistochemistry in 66.7% (20/30) of the dogs. Despite the high prevalence of histopathological changes and the presence of amastigotes of Leishmania sp. in the myocardium, such changes were mild and insufficient to produce clinical signs in dogs with VL. Since the animals used in this study were euthanized, it remains unclear whether cardiac involvement would have been more severe if disease had followed its natural course

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-08T12:54:48Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1516121 bytes, checksum: 772d5ba3351de06ed346dc46430f7188 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T12:54:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1516121 bytes, checksum: 772d5ba3351de06ed346dc46430f7188 (MD5) Previous issue date: 2016-03-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The first-line drugs in Brazil for leishimaniasis treatment is the pentavalent antimonial, considered a prodrug because it is converted in trivalent (SbIII) during the treatment which presents many limitations, including the rising of the resistant parasite. Seeking to understand of these resistance effects in Leishmania (L.) amazonensis, promastigotes forms were cultured in glowing concentrations of SbIII then 2 mutants were selected, SbIII 1 and SbIII2 that gain resistance, respectively, 15,8 and 22,5 times bigger than wild cultures'. The morphological analysis show significant diferences in mutant's form and size when compared with the wild ones, once it has a long and slender cell body and with a long flagellum, while the majority mutants, with a resistance level 6,42 (SbIII 1) and 5,62 (SbIII 2) times bigger, presented a rounded cell body, with long flagellum. Curiously, when the mutants obtain a resistance level 15,8 (SbIII 1) e 22,5 (SbIII 2) times bigger, the morphological diference diminishes. The resistance phenotype to the SbIII manifested itself also in the amastigote like derived of both mutants. The SbIII 2 mutant presented a more stable profile of resistance than SbIII 1 one's when cultured in the absence of the drug, which denote diferences in the resistance mechanism. There was not observed cross-resistance to Amphotericin B. The promastigote forms of both mutants showed theirselves significantly more resistant to lysis throught the complement system, compared to the wild one's, sugesting that the parameter to the resistance to the antimonials and virulance might be correlated in Leishmania (L.) amazonensis. / A droga de primeira escolha para o tratamento das leishmanioses no Brasil é um antimonial pentavalente, considerado uma pró-droga por ser convertido na forma trivalente (SbIII) durante o tratamento, o qual apresenta várias limitações, incluindo o crescente surgimento de parasitos resistentes. Buscando compreender os efeitos desta resistência em Leishmania (L.) amazonensis, formas promastigotas foram cultivadas em concentrações crescentes de SbIII e selecionados dois mutantes, SbIII 1 e SbIII 2, que adquiriram, respectivamente, um nível de resistência 15,8 e 22,5 vezes maior que o apresentado pelas culturas selvagens. A análise morfológica mostrou diferenças significantivas no tamanho e formato dos mutantes em relação ao tipo selvagem, visto que estas apresentaram corpo celular alongado, delgado e com flagelo longo, enquanto que a maioria dos mutantes, com um nível de resistência 6,42 (SbIII 1) e 5,62 (SbIII 2) vezes maior, apresentaram um corpo celular arredondado, com flagelo alongado. Curiosamente, quando os mutantes adquiriram um nível de resistência 15,8 (SbIII 1) e 22,5 (SbIII 2) vezes maior, esta diferença morfológica diminuiu. O fenótipo de resistência ao SbIII se manifestou também nas formas amastigotas axênicas derivadas dos dois mutantes. O mutante SbIII 2 apresentou um perfil de resistência mais estável que o SbIII 1 quando cultivado na ausência da droga, o que pode indicar diferenças nos mecanismos de resistência. Não foi observada resistência cruzada com o fármaco Anfotericina B. As formas promastigotas dos dois mutantes mostraram-se significativamente mais resistentes à lise pelo sistema complemento, comparado aos selvagens, sugerindo que os parâmetros resistência a antimoniais e virulência podem estar correlacionados em Leishmania (L.) amazonensis.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-08T13:35:45Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1367389 bytes, checksum: 70492033540e8808b1cc0349fd4d1a1a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T13:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1367389 bytes, checksum: 70492033540e8808b1cc0349fd4d1a1a (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, transmitted by insects phlebotomines. The recommended treatments for leishmaniasis are very toxic and unsatisfactory. Therefore, it is urgent to find new anti-Leishmania drugs that are more effective against the parasite and exhibit low toxicity to the host. Thus, this study sought to synthesize, characterize and evaluate the anti-Leishmania potential novel 2- amino-thiophenes. Thirty-two 2-amino thiophenes indole derivatives were studied by our research group. The synthesis of compounds showed a yield ranging from 31.7% (TN7-6) to 96.4% (TN6-4). In addition, the fusion ranged between of 150 ° C (TN5) and 295ºC (TN6-4). All compounds showed antipromastigota activity obtained with different IC50 values, ranging from the 2.07 - 1067 μg/ml. None of tiofenicos indole derivatives showed cytotoxicity to erythrocytes of human origin, compared to the referenced drugs. Among compounds with anti-Leishmania activity, TN8-7 substance was selected to proceed with the studies due to its high selectivity index (SI> 193.2). It was observed that L. amazonensis strains resistant to trivalent antimony continued with the same levels of sensitivity to TN8-7 presented by crops sensitive to antimony. Additionally, it was observed that the anti-Leishmania TN8-7 activity is associated with DNA fragmentation of promastigotes of the parasite. Therefore, the results of this study suggest that indole 2-amino thiophenes derivatives are promising molecules and possible drug candidates for the therapy of leishmaniasis. / As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, transmitida por insetos flebotomíneos. Os tratamentos recomendados para as leishmanioses são muito tóxicos e pouco satisfatórios, portanto se faz urgente a necessidade de encontrar novas drogas anti-Leishmania que sejam mais eficazes contra o parasito e que apresentem baixa toxicidade para o hospedeiro. Logo, este trabalho buscou sintetizar e caracterizar e avaliar o potencial anti-Leishmania de novos derivados 2-amino-tiofenos. Foram estudados 32 derivados 2-amino tiofenos indólicos por nosso grupo de pesquisa. A síntese dos compostos apresentou um rendimento variando de 31,7% (TN7-6) a 96,4% (TN6-4). Além disso, a faixa de fusão variou entre 150ºC (TN5) e 295ºC (TN6-4). Todos os compostos apresentaram atividade antipromastigota, sendo obtido diferentes valores de IC50, variando de 2,07 a 1067 μg/ml. Nenhum dos derivados tiofênicos indólicos apresentou citotoxicidade para hemácias de origem humana, comparados as drogas de referência. Dentre os compostos com atividade anti-Leishmania, a substância TN8-7 foi selecionada para prosseguir com os estudos, devido ao seu alto índice de seletividade (IS > 193,2). Foi observado que cepas de L. amazonensis resistentes ao antimônio trivalente continuaram com os mesmos níveis de sensibilidade ao TN8-7 apresentado pelas culturas sensíveis ao antimônio. Adicionalmente foi observado que atividade anti-Leishmania do TN8-7 está associada à fragmentação do DNA das formas promastigotas do parasito. Portanto, os resultados do presente estudo sugerem que os derivados 2-amino tiofenos indólicos são moléculas promissoras e possíveis candidatos a fármacos para a terapêutica das leishmanioses.

Submitted by ÁGHATA REGINA DE OLIVEIRA ALVES PALMEIRA null (gataegu@yahoo.com.br) on 2018-03-28T17:41:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertação mestrado - Aghata R O A Palmeira.pdf: 2700462 bytes, checksum: b24495d6d208f380437b17f49034841c (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-03-29T17:36:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 palmeira_aroa_me_bot.pdf: 2700462 bytes, checksum: b24495d6d208f380437b17f49034841c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-29T17:36:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 palmeira_aroa_me_bot.pdf: 2700462 bytes, checksum: b24495d6d208f380437b17f49034841c (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Trypanosomatidae é constituída por diversas espécies de protozoários que causam doenças em humanos e outros animais. Destacam-se os protozoários Leishmania spp. causadores das leishmanioses e Trypanosoma spp. causadores da doença de Chagas. O cão doméstico é considerado o principal reservatório da leishmaniose no meio urbano, porém o homem e animais silvestres também podem ser infectados atuando como reservatórios de tripanossomatídeos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de Leishmania spp. e Trypanosoma spp. em amostras provenientes de animais silvestres atropelados, procedentes do estado de Santa Catarina pela técnica molecular de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), a fim de mapear e identificar áreas de risco para a infecção humana. Foram coletadas 1063 amostras de tecido pulmão, fígado, baço, pele e coração de 297 animais silvestres. Utilizou-se primers LITST/L5.8S e LITSV/L5.8SR para triagem da família Trypanosomatidae, onde 12 amostras de sete roedores foram positivas. Na pesquisa de L. infantum e T. cruzi foram utilizados primers específicos, LCS1/LCS3 e TCZ1/TCZ2 respectivamente, sendo todas as amostras foram negativas. O sequenciamento foi realizado a partir das amostras positivas e nove amostras apresentaram similaridade entre 79% a 100% com Trypanosoma brucei (GenBank KX700175.1), Trypanosoma brucei gambiense (GenBank XM_011780373.1), Trypanosoma vivax (GenBank HE573020.1), Trypanosoma rangeli (GenBank KJ742907.1) e com o gênero Trypanosoma. Os animais foram, Oxymycterus sp. (rato do brejo), Scapteromys sp. (rato d’ àgua), Nectomys squamipes (rato d’ àgua) e dois Oligoryzomys sp. (rato do mato). Verifica-se que a localização dos animais positivos foi próxima as atividades de indústria, comércio e lazer, permitindo o contato entre animais e homem, facilitando a manutenção de agentes infecciosos de caráter zoonótico. Os resultados aqui obtidos mostram a problemática da larga ocorrência de animais silvestres atropelados em nossas estradas, ao mesmo tempo em que enfatiza sobre o aproveitamento deste importante recurso biológico para o estudo da ocorrência ambiental de patógenos. / The family Trypanosomatidae consists several species of protozoans that cause diseases in humans and other animals. Leishmania spp. is responsible to cause leishmaniasis diseases and Trypanosoma cruzi cause Chagas disease. The domestic dog is considered the main reservoir of leishmaniasis, although wild animals can also be acting as reservoirs of trypanosomatids. The objective of the present study was to evaluate the occurrence of the Leishmania spp. and Trypanosoma spp in samples from wild animals from Santa Catarina State, using the molecular technique Polymerase Chain Reaction (PCR), in order to map and identify risk areas for human infection. A total of 1,063 tissue samples of lung, liver, spleen, skin and heart of 297 wild animals. Primers (LITST / L5.8S and LITSV / L5.8SR) were used for screening of Trypanosomatidae family, with samples from seven rodents were positive. In the research of L. infantum and T. cruzi specific primers were used, where all the samples were used, LCS1 / LCS3 and TCZ1 / TCZ2 respectively, all of which were negative. Sequencing was performed from the positive samples and nine samples from five animals showed similarity between 79% to 100% with Trypanosoma brucei (GenBank KX700175.1), Trypanosoma brucei gambiense (GenBank XM_011780373.1), Trypanosoma vivax (GenBank HE573020.1), Trypanosoma rangeli (GenBank KJ742907.1) and the genus Trypanosoma spp. The animals were, Oxymycterus sp. (marsh rat), Scapteromys sp. (water rat), Nectomys squamipes (water rat) and two Oligoryzomys sp. (bush rat). It is found that the location of the positive animals were near to the activities of industry, market and recreation, allowing the contact between animals and man, facilitating the maintenance of agents of infectious zoonotic diseases. The results obtained here show the problem of the frequent occurrence of road-killed wild animals in our roads, while emphasizing the use of this important biological resource to study the environmental occurrence of pathogens. It is found that the location of the positive animals. / Fapesp: 2015/17519-4

Orientador: Adelino Vieira de Godoy Netto / Co-orientador: Regina Celia Galvao Frem / Banca: Vania Martins Nogueira / Banca: Antonio Eduardo Mauro / Banca: Alexandre Cuin / Banca: Adriano Bof de Oliveira / Resumo: Apesar de não ser um elemento biológico essencial, a prata metálica e seus derivados (ex. AgNO3 e complexos) têm apresentado várias aplicações medicinais como na purificação da água, tratamento de ferimentos, recobrimentos anti-infecção de instrumentos médicos, no tratamento de queimaduras pois possuem propriedades anti-microbianas potentes com baixa toxicidade em seres humanos. Sua utilização como agente antimicrobiano nos remete ao inicio da história humana, sendo muito utilizada na preservação de água potável durante anos, recurso primordial em conflitos militares. Neste trabalho foram sintetizados e caracterizados novos complexos de prata(I) do tipo Ag(NN)(tu)X, onde NN = 2,2'-bipiridina (bpy), 1,10-fenantrolina (phen), dipirido[3,2-a:2',3'-c]fenazina (dppz) e 1,10-fenantrolina-5,6-diona (phd); tu = tiouréia e X = NO3 -, CF3SO3 -, BF4 - e SO4 2-. Os complexos foram caracterizados pelas técnicas de espectroscopia na região do IV, ressonância magnética nuclear (1H), análise elementar e espectrometria de massas. As estruturas moleculares dos complexos [{Ag(bpy)(μ-tu)}2](NO3)2 (A1) e [{Ag(phd)(μ-tu)(tu)}2](CF3SO3)2 (D2) foram determinadas por difração de raios-X de monocristal, indicando um sistema binuclear com os centros de prata(I) conectados em ponte pelo atomo de enxofre da molécula de tiouréia. A atividade biológica in vitro dos compostos [Ag2(bpy)2(tu)2](NO3)2 (A1), [Ag2(phen)2(tu)2](NO3)2 (B1) e [Ag2(phen)2(tu)2](CF3SO3)2 (B2) foram estudadas frente a fungos (C. albicans, C. tropicalis e C. krusei), bactérias (S. aureus, E. coli e P. aureginosa), M. tuberculosis e formas amastigota e promastigota da L. amazonensis. Mesmo sendo um estudo bastante reduzido, tendo em vista a quantidade de microorganismos e de compostos estudados, foi possível averiguar algumas varições no comportamente biológico com a alteração tanto do ligante quelante NN quanto do contra-íon. Com resultados promissores, os estudos de... / Abstract: Even Ag0, and its derivates, being not an essential element, they have presented medicinal applications such as water purification, injuries treatment, antiinfection recovery of medical instruments, burn treatment as they have powerful antimicrobial properties and low human toxicity. Silver compounds have been used as antimicrobial agent since the beginning of human history when it was added to potable water for preservation as a primary resource in military conflicts. In the present work novel silver complexes (I) of Ag(NN)(tu)X type in which X = 2,2-bipiridine (bpy), 1,10-phenantroline (phen), dipirido[3,2-a:2',3'-c]phenazine (dppz) and 1,10- phenantroline-5,6-dione (phd); tu= thiourea and X=NO3 -, CF3SO3 -, BF4 - and SO4 2- have been synthesized and characterized. The complexes had been characterised by infrared spectroscopy, 1H nuclear magnetic resonance, elementary analysis and mass spectroscopy techniques. The crystal structures of [{Ag(bpy)(μ- tu)}2](NO3)2 (A1) and [{Ag(phd)(μ-tu)(tu)}2](CF3SO3)2 (D2) were determined by single crystal X-ray diffraction indicating a binuclear system with silver(I) centers bridgebonded by sulphur atoms of thiourea molecule. The in vitro biological activity of [Ag2(bpy)2(tu)2](NO3)2 (A1), [Ag2(phen)2(tu)2](NO3)2 (B1) e [Ag2(phen)2(tu)2](CF3SO3)2 (B2) compounds had been studied for fungi (C. albicans, C. tropicalis e C. krusei), bacteria (S. aureus, E. coli e P. aureginosa), M. tuberculosis and amastigote and promastigote forms of L. amazonensis. Although a reduced study has been performed in view of the microorganisms and compounds quantities it was possible to evaluate some changes on biological behavior by both chelant ligand NN and counterion modification. Promising results were obtained on the antileishmanial activity for B2 compound which have showed a selectivity index (SI) of 13,8-15,5 values much higher than the observed for AmpB, the standard drug (5,5-5,83). / Doutor

Orientador: Wagner Luís Ferreira / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Renée Aufer Amorim / Resumo: O acometimento cardíaco é raro em pacientes com leishmaniose visceral (LV). Porém, existem relatos demonstrando graus variáveis de comprometimento desse órgão em cães e seres humanos acometidos. O presente estudo teve por objetivos avaliar a ocorrência de alterações histopatológicas e a presença de Leishmania sp. no miocárdio (átrio direito, ventrículo direito, septo interventricular e ventrículo esquerdo) de 30 cães naturalmente infectados. As principais alterações macroscópicas observadas foram dilatação ventricular direita em 53,3% (16/30) dos animais e hipertrofia concêntrica do ventrículo esquerdo em 20% (6/30). Reação inflamatória caracterizada pela presença de infiltrado linfoplasmocitário em graus variados de intensidade foi observada em 90% (27/30) dos cães, necrose coagulativa de cardiomiócitos ou em bandas de contração em 80% (24/30), aumento de colágeno intersticial em 73,3% (22/30), granuloma em 23,3% (7/30), infiltração gordurosa em 16,7% (5/30) e necrose fibrinóide em 10% (3/30) dos cães. A presença de formas amastigotas no tecido cardíaco foi identificada por imuno- histoquímica em 66,7% (20/30) dos animais. Apesar da elevada prevalência de alterações histopatológicas e da presença de formas amastigotas de Leishmania sp. no miocárdio, tais alterações foram discretas e insuficientes para produzir manifestações clínicas nos cães com LV. Como os animais do presente estudo foram submetidos a eutanásia, permanece incerto se o envolvimento cardíaco teria sido mais severo se a doença tivesse seguido seu curso natural / Abstract: Cardiac involvement is rare in patients with visceral leishmaniasis, however some studies have shown several degrees of heart impairment in dogs as well as in human beings. The present study aimed to evaluate the occurrence of histopathological lesions and the presence of Leishmania sp. in the myocardium (right atrium, right ventricle, interventricular septum and left ventricle) of 30 naturally infected dogs. The most frequent macroscopic findings were right ventricular enlargment in 53.3% (16/30) and concentric left ventricular hypertrophy in 20% (6/30) of the dogs. Inflammatory reaction characterized by the presence of lymphocytic infiltrate in different degrees of intensity was observed in 90% (27/30), coagulative necrosis of cardiomyocytes or contraction bands necrosis in 80% (24/30), increased interstitial collagen in 73.3% (22/30), lepromatous granuloma in 23.3% (7/30), fat infiltration in 16.7% (5/30) and fibrinoid necrosis in 10% (3/30) of the dogs. The presence of amastigotes in the cardiac tissue was identified by immunohistochemistry in 66.7% (20/30) of the dogs. Despite the high prevalence of histopathological changes and the presence of amastigotes of Leishmania sp. in the myocardium, such changes were mild and insufficient to produce clinical signs in dogs with VL. Since the animals used in this study were euthanized, it remains unclear whether cardiac involvement would have been more severe if disease had followed its natural course / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Juliana Regina Peiró / Resumo: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma antropozoonose considerada uma das mais importantes zoonoses parasitárias emergentes em expansão por todo o mundo. A transmissão de Leishmania (L.) chagasi, se dá pela picada de fêmeas de insetos dípteros, denominados flebotomíneos, conhecidos popularmente como mosquitos "palha" ou "birigui". A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença crônica, fatal, sistêmica e infecciosa. No Brasil é causada pelo protozoário L. chagasi. Cães são os maiores hospedeiros e reservatórios do parasita L. infantum e L. chagasi com um papel central no ciclo da transmissão do parasita para os humanos, com um grande contingente de animais assintomáticos. A infecção em cães é clinicamente semelhante à infecção humana e a apoptose tem sido associada à redução de linfócitos T e células mononucleares de sangue periférico e à falha na imunidade, pois ocorre diminuição na secreção do IFN- . A desregulação da apoptose tem sido associada a várias doenças e as principais moléculas implicadas são o sistema FAS/FASL e o TRAIL, que envolvem reações imunológicas e citotoxicidade mediada pelas células T. O entendimento de tal mecanismo em cães infectados pode permitir futuras intervenções terapêuticas para reduzir a depleção dos linfócitos. Para investigar a apoptose nas células CD4+ e CD8+ e a expressão e função dos principais receptores envolvidos no processo apoptótico, FAS/FASL e TRAIL foram avaliados nas células do sangue periférico e baço de 38 cães sintomáticos com leishmaniose visceral moderada e de 25 cães saudáveis. A apoptose das células CD4+ e CD8 + do sangue e baço foi maior nos cães infectados que nos saudáveis. Nas células CD4+ do sangue e baço dos cães infectados a expressão de FAS e FASL foi menor do que a dos saudáveis, nas células CD8+ do sangue e do baço dos cães...(Resumo completo, clicar acesso aletrônico abaixo) / Abstract: Visceral leishmaniasis (VL) is a anthropozoonosis considered one of the most important emerging parasitic zoonoses expanding worldwide. The transmission of Leishmania (L.) chagasi, occurs through the bite of female insects flies, called sandflies, mosquitoes popularly known as "straw" or "birigui." Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a chronic, fatal, systemic and infectious. In Brazil it is caused by the protozoan L. chagasi. Dogs are the greatest hosts and reservoirs of the parasite L. infantum and L. chagasi with a central role in the transmission cycle of the parasite to humans, with a large contingent of asymptomatic animals. The infection in dogs is clinically similar to human infection and apoptosis has been associated with reduction of T lymphocytes and peripheral blood mononuclear cells and failure to immunity, because there is a decrease in the secretion of IFN- . Dysregulation of apoptosis has been associated with various diseases and key molecules involved are the FAS/FASL and TRAIL, which involve immune reactions and cell-mediated cytotoxicity T. The understanding of this mechanism in infected dogs may allow future therapeutic interventions to reduce the depletion of lymphocytes. To investigate apoptosis in CD4+ and CD8+ lymphocytes and the expression and function of major receptors involved in apoptotic FAS/FASL and TRAIL were assessed in peripheral blood cells and spleen of 38 dogs symptomatic patients with visceral leishmaniasis moderate and 25 healthy dogs. Apoptosis of CD4+ and CD8+ spleen and blood was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, Laboratório de Interação Parasito-Hospedeiro, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-04T12:28:41Z No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-04T14:36:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-04T14:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CamilaLasseSilva.pdf: 1435079 bytes, checksum: 0449d2829c5a9fa86a65062e5bbb9333 (MD5) / As leishmanioses representam um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e é endêmica em 98 países atingindo mais de 12 milhões de pessoas no mundo. O tratamento disponível para esta doença pode levar a sérios efeitos colaterais e, por se tratar de uma doença negligenciada, os incentivos para o desenvolvimento de novos medicamentos são insuficientes. Este cenário revela a necessidade de estudar a biologia do parasito focalizando na busca de fatores de virulência como alvos potenciais para novos fármacos. As proteases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações peptídicas e estão envolvidas em diversos processos fisiológicos, bem como na patogenia de doenças infecciosas e crônicas. Neste contexto, este trabalho de mestrado se concentrou nos estudos iniciais da prolil oligopeptidase de Leishmania chagasi, uma serino protease, por meio da sua caracterização bioquímica. Primeiramente, para expressar a proteína recombinante, o gene POPLc foi clonado no vetor pET15b e a proteína foi expressa em E. coli BL21-AI sob indução com 0,5 mM de IPTG e 0,2% de L-arabinose a 20 °C por 4 h. A rPOPLc foi expressa de forma solúvel e foi purificada por afinidade da sua cauda de 6 x His em coluna de Ni- Agarose. A partir da enzima purificada foram realizados testes cinéticos, onde a melhor atividade foi encontrada em tampão HEPES 25 mM, DTT 5 mM e NaCl 150 mM, pH 7,5, sendo estabelecido como o tampão ótimo para a atividade enzimática. A enzima apresentou Km de 58,56744 e Vmáx de 4.651,16 mFU/min a partir da hidrólise de Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, substrato que apresentou maior atividade dentre todos testados neste estudo. A rPOPLc foi inibida por TLCK e TPCK, mas não por ABESF, um inibidor de serino protease. Além do mais, a rPOPLc foi inibida por Z-Pro-Prolinal, um inibidor específico de POPs, com IC50 de 5,2 nM. De acordo com a imunocitolocalização, foi observado que a rPOPLc está presente na região citoplasmática do parasito. Este trabalho permitiu realizar uma primeira caracterização da POP de Leishmania chagasi e o entendimento do seu papel na biologia do parasito poderá contribuir para a busca de novos medicamentos alternativos para as leishmanioses. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis represents a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and is endemic in 98 countries reaching more than 12 million people worldwide. The available treatment for this disease can lead to serious side effects and, since it is a neglected disease, the incentives for the development of new drugs are insufficient. This scenario shows the need to study the biology of the parasite focusing on the search for virulence factors as potential targets for new drugs. Proteases are enzymes that catalyze the hydrolysis of peptide bonds and are involved in many physiological processes, as well as in the pathogenesis of infectious and chronic diseases. In this context, this work focused on the initial studies of Leishmania chagasi prolyl oligopeptidase a serine protease, through its biochemical characterization. First, to express the recombinant protein, POPLc gene was cloned into pET15b vector and the protein was expressed in Escherichia coli BL21 -AI upon induction with 0.5 mM IPTG and 0.2 % L- arabinose at 20 ° C for 4 h. The rPOPLc was expressed soluble and purified by affinity chromatography in Ni - Agarose column. The kinetic tests show thatPOPLc the best activity was found in HEPES 25 mM, DTT 5 mM and NaCl 150 mM, pH 7.5, buffer set as the optimum one for all enzyme activity test. N-Suc - Gly - Pro - Leu - Gly - Pro - AMC substrate showed the highest activity among all tested in this study and rPOPLc presented a Km and Vmx values of 58,56744 and 4.651,16 mFU/min, respectively, using this substrate. The rPOPLc was inhibited by TPCK and TLCK, although it was insensible to AEBSF. Furthermore, the rPOPLc was inhibited by Z- Pro- prolinal, a specific inhibitor of POPs with IC50 of 5.2 nM. According to immunocitolocalization, it was observed that rPOPLc is present in the cytoplasmic region of the parasite. This work allowed for an initial characterization of Leishmania chagasi POP and the understanding of POPLc role in the biology of the parasite may contribute to the search of new alternative drugs for leishmaniasis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-07T17:26:45Z No. of bitstreams: 1 2015_JonatasBarbosaCavalcanteFerreira.pdf: 3527643 bytes, checksum: 157e765d94d7b90acc06ff5debdfb3f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-14T12:17:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JonatasBarbosaCavalcanteFerreira.pdf: 3527643 bytes, checksum: 157e765d94d7b90acc06ff5debdfb3f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-14T12:17:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JonatasBarbosaCavalcanteFerreira.pdf: 3527643 bytes, checksum: 157e765d94d7b90acc06ff5debdfb3f9 (MD5) / O objetivo deste estudo foi analisar a ocorrência de flebotomíneos em matas de galeria do Distrito Federal (DF), em diferentes estações climáticas, estratos verticais e condições de preservação das matas. As capturas foram realizadas em três áreas na Fazenda Água Limpa da Universidade de Brasília. Em cada área foi analisada a ocorrência de flebotomíneos em 20 pontos visitados em dois meses, novembro de 2012 (estação chuvosa) e maio de 2013 (estação seca). Armadilhas luminosas HP foram instaladas a 1,5 m e a 10 m de altura do solo, operando entre 17:00 e 07:00 h, por três dias consecutivos. Foram instaladas 359 armadilhas noite na estação chuvosa e 291 na seca. Nenhum flebotomíneo foi capturado na estação chuvosa. Na estação seca foram capturados 250 exemplares. As espécies identificadas foram Psathyromyia runoides (Fairchild & Hertig) (79,9%), Pintomyia monticola (Costa Lima) (9,7%), Micropygomyia quinquefer (Dyar) (3,7%), Psathyromyia shannoni (Dyar) (3%), Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira) (0,7%), Brumptomyia sp. (0,7%), Pintomyia kuscheli (Le Pont, Martinez, Torrez-Espejo & Dujardin) (0,7%), Psathyromyia lutziana (Costa Lima) (0.7%) e Sciopemyia sordellii (Shannon & Del Ponte) (0,7%). Os resultados indicam que em matas de galeria do DF há uma maior ocorrência de flebotomíneos na estação seca, no nível do solo e em áreas preservadas. Registra-se pela primeira vez Pa. runoides, Pi. kuscheli e Mi.quinquefer no DF. / We analyzed the occurrence of phlebotomine sand flies in the gallery forests of the Federal District (FD), in different seasons, forest strata and conservation status. The samples were collected in three areas in the Água Limpa Farm, University of Brasília. In each area the occurrence data were analyzed in 20 collection sites visited on two months, November 2012 (rainy season) and May 2013 (dry season). HP light traps were installed at 1.5 m and 10 m above the ground operating from 17:00 to 7:00 h, during three consecutive days. We set 359 trap-nights during the rainy season and 291 during the dry season. None sand fly was caught during the rainy season. In the dry season 250 sand flies were captured. The identified species were Psathyromyia runoides (Fairchild & Hertig) (79.9%), Pintomyia monticola (Costa Lima) (9.7%), Micropygomyia quinquefer (Dyar) (3.7%), Psathyromyia shannoni (Dyar) (3%), Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira) (0.7%), Brumptomyia sp. (0.7%), Pintomyia kuscheli (Le Pont, Martinez, Torrez-Espejo & Dujardin) (0.7%), Psathyromyia lutziana (Costa Lima) (0.7%), and Sciopemyia sordellii (Shannon & Del Ponte) (0.7%). The results indicated that in the gallery forests of the FD there is a higher occurrence of sand flies in the dry season, at ground level and in preserved areas. Pa. runoides, Pi. kuscheli and Mi. quinquefer were recorded for the first time in the FD.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-10-05T19:36:15Z No. of bitstreams: 1 2006_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 1203430 bytes, checksum: 36215600471c8f3d13d782989baadd05 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-28T17:37:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 1203430 bytes, checksum: 36215600471c8f3d13d782989baadd05 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-28T17:37:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 1203430 bytes, checksum: 36215600471c8f3d13d782989baadd05 (MD5) Previous issue date: 2006 / Foi realizado um estudo descritivo transversal com o objetivo de estimar a magnitude da co-infecção Leishmania/HIV em pessoas vivendo com HIV/aids atendidos no Ambulatório de Doenças Infecciosas e Parasitárias do Hospital Universitário de Brasília. Foram incluídos no estudo 163 indivíduos, dos quais, sete apresentavam a síndrome clínica sugestiva de leishmaniose visceral e 156 eram assintomáticos em relação a essa síndrome. Após aceitação e assinatura do termo de consentimento, os pacientes foram submetidos à entrevista, exame clínico e coleta de sangue periférico para detecção da infecção por Leishmania spp. Os pacientes com a síndrome sugestiva de leishmaniose visceral foram submetidos também ao aspirado de medula óssea. O sangue coletado foi avaliado por meio das técnicas de imunofluorescência indireta (RIFI), ELISA com antígeno bruto de L. chagasi (ELISA), ELISA com antígeno rK39 (rK39) e reação em cadeia pela polimerase (PCR) com alvo de amplificação de 120 pares de bases da região conservada do k-DNA. Os espécimes de medula óssea foram submetidos ao exame direto em lâminas coradas pelo Giemsa, cultura para Leishmania e PCR. Vinte e seis pacientes (16%) apresentaram resultado positivo nas provas sorológicas. A positividade foi de 2,4% pela RIFI; 12,3% pelo ELISA; e 4,9% pelo rK39. A PCR do sangue periférico foi positiva em 1,8% dos pacientes. Nenhum dos pacientes sintomáticos teve resultados positivos no material obtido da medula óssea. A exploração de prováveis fatores associados com a positividade dos testes aplicados não revelou associação com: gênero, exposição prévia a área endêmica de leishmaniose, história de casos de leishmaniose visceral no grupo familiar ou na vizinhança e uso de drogas injetáveis. Observou-se associação estatisticamente significativa entre ter pelo menos um teste positivo e ser mais jovem (33 versus 39 anos; p=0,005); ter sorologia positiva para doença de Chagas (p=0,029); não ter evoluído para aids (p=0,004); não estar em uso de tratamento antiretroviral (p<0,001); e apresentar uma intercorrência infecciosa no momento da coleta do sangue para a avaliação sorológica. O estudo mostrou a importância da co-infecção Leishmania/HIV na amostra avaliada, em uma região que não era considerada até o ano de 2005 como área endêmica de leishmaniose visceral e que apresenta unicamente casos esporádicos de leishmaniose tegumentar. Provavelmente o teste de ELISA com antígeno bruto de Leishmania chagasi seja o que apresente maior potencial como teste de triagem para a detecção sensível de indivíduos co-infectados, no entanto, a especificidade do ensaio principalmente em pacientes com co-infecção por Trypanosoma cruzi e outras doenças causadas por micobactérias possa estar comprometida. A complexidade da técnica de PCR e sua baixa positividade nos casos assintomáticos ou subclínicos de co-infecção Leishmania/HIV limitam o seu uso como teste de triagem para a detecção sensível desta condição. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In order to estimate the magnitude of Leishmania/HIV co-infection, it was conducted a transversal study in people living with HIV/AIDS assisted at the outpatient Infectious and Parasitic Diseases Clinic of the Brasilia University Hospital. One hundred sixty-three patients were enrolled, seven of whom presented the clinical syndrome suggestive of visceral leishmaniasis and 156 were asymptomatic. After acceptance and signature of the informed consent, patients were submitted to a structured interview, clinical examination and collection of venous peripheral blood to detect the infection by Leishmania spp. Patients with suspicion of visceral leishmaniasis were submitted to bone marrow aspiration. The collected blood was evaluated by means of Indirect immunofluorescence test (IFAT), ELISA using soluble antigen of Leishmania chagasi (ELISA), ELISA with rK39 antigen (rK39) and polimerase chain reaction (PCR) targeted to a k-DNA conserved region of 120 bp. Bone marrow aspirate was submitted to direct examination in smears stained by Giemsa, culture for Leishmania and PCR. Twenty-six patients (16%) had positive serologic tests. The positivity was 2.4% by IFAT; 12.3% by ELISA; and 4,9% by rK39. PCR in blood was positive in three patients (1.8%). None of the symptomatic patients had positive results in bone marrow. The exploration of probable factors associated with the positivity of the applied tests did not revealed associations with: gender, previous exposition to visceral leishmaniasis endemic area, history of relatives or neighbors with visceral leishmaniasis, neither history of intravenous drug abuse. Significant statistical association was observed among positive tests and younger age (33 vs 39 years old; p=0,005); positive serologic test for Chagas disease (p=0,029); non-AIDS disease stage (p=0,004); non-use of antiretroviral therapy (p<0,001); and the presence of an infectious intercurrence at the moment of blood collection. The study demonstrated the importance of Leishmania/HIV co-infection in the assessed sample, in a region that was not considered as endemic area for visceral leishmaniasis until 2005, and only sporadic cases of cutaneous leishmaniasis in the last decades. The ELISA performed with soluble antigen of L.chagasi seems to be the method with the greater potential for the sensitive screening in order to detect Leishmania/HIV co-infected individuals. However, the specificity could be jeopardized in patients co-infected with Trypanosoma cruzi and other diseases caused by mycobacteria. The complexity and low positivity of PCR in the asymptomatic cases of Leishmania/HIV co-infection limit its use as screening of this condition. _______________________________________________________________________________________ RESUMEN / Fue realizado un estudio descriptivo transversal con el objetivo de estimar la magnitud de la co-infección Leishmania/HIV en personas viviendo com HIV/SIDA atendidas en el Consultório de Enfermedades Infecciosas y Parasitárias del Hospital Universitário de Brasília. Fueron incluidos 163 indivíduos, de los cuales siete presentaban el síndrome clínico sugestivo de leishmaniasis visceral y 156 eran asintomáticos en relação al sindrome. Luego de la aceptación y firma del término de consentimiento, los pacientes fueron sometidos a entrevista, examen clínico y colecta de sangre periférica para detección de la infección por Leishmania spp. Los pacientes com el síndrome sugestivo de leishmaniasis visceral fueron sometidos también a aspirado de médula ósea. La sangre colectada fue evaluada por médio de las técnicas de imunofluorescencia indirecta (RIFI), ELISA con antígeno bruto de L. chagasi (ELISA), ELISA con antígeno rK39 (rK39) y reacción em cadena de polimerasa (PCR) dirigida a amplificar 120 pares de bases de la región conservada del k-DNA. Las muestras de médula ósea fueron sometidas a examen directo em láminas teñidas con Giemsa, cultivo para Leishmania y PCR. Veintiseis pacientes (16%) presentaron resultado positivo en las pruebas serológicas. La positividad fue de 2,4% para RIFI; 12,3% para ELISA; y 4,9% para rK39. La PCR en sangre periférica fue positiva en 1,8% de los pacientes. Ningún paciente sintomático tuvo resultados positivos en médula ósea. La exploración de probables factores asociados com la positividad de las pruebas aplicados no reveló asociación com gênero, exposición previa a área endêmica de leishmaniasis visceral, historia de casos de leishmaniasis visceral en el grupo familiar o en la vecindad y uso de drogas inyectables. Se observó asociación estadísticamente significativa entre tener por lo menos una prueba positiva y ser más joven(33 vs 39 años; p=0,005); tener serología positiva para enfermedad de Chagas (p=0,029); no haber desarrollado SIDA (p=0,004); no estar en uso de tratamiento antiretroviral (p<0,001); y presentar una intercurrencia infecciosa concomitante a la obtención de sangre venosa para la evaluación. El estudio mostró la importancia de la co-infección Leishmania/HIV en la muestra evaluada, en una región que no era considerada hasta el año 2005 como área endémica de leishmaniasis visceral y que presenta únicamente casos esporádicos de leishmaniasis cutánea. Probablemente, la prueba de ELISA con antígeno bruto de L. chagasi sea la que presente el mayor potencial como método de tamizaje para la detección sensible de indivíduos co-infectados, sin embargo, la especificidade de la prueba principalmente en pacientes con co-infeción por Trypanosoma cruzi y otras enfermedades causadas por micobacterias puede estar comprometida. La complejidad de la técnica de PCR y su baja positividad em los casos asintomáticos de co-infección Leishmania/HIV limitan su uso como método de tamizaje para la detección sensible de esta condición.