Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VirginiaPMS.pdf: 3411673 bytes, checksum: dfe2ec0cb317ad239d62da9c99560ecf (MD5) Previous issue date: 2008-09-04 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Leishmaniasis are endemic diseases wild spread in the New and Old World, caused by the flagelated protozoan Leishmania. In the New World, the distribution of different forms of leishmaniasis is mostly in tropical regions. In the State of Rio Grande do Norte, Northeast Brazil, 85% of the captured sand flies fauna is Lutzomyia longipalpis. The distribution of the sand fly vector in the state overlaps with the disease distribution, where the presence of sand flies is associated with presence of animals shelters. The aim of this study was to analyse the blood meal preference of sand flies vector from the genus Lutzomyia spp. in laboratory conditions, to verify the vector life cicle at different temperatures sets and to identify the main blood meal source in endemic areas for visceral leishmaniasis (VL) at peri-urban regions of Natal. Sand flies samples were collected from the municipalities of S?o Gon?alo do Amarante and N?sia Floresta where female sand flies were grouped for the colony maintenance in the laboratory and for the analysis of the preferred source of sand fly blood meal in natural environment. The prevalence of blood meal preference and oviposition for the females sand flies was 97% for Cavia porcellus with oviposition of 19 eggs/female; 97% for Eqqus caballus with 19 eggs/female; 98% for human blood with 14 eggs/female; 71.3% for Didelphis albiventris with 8.4 eggs/female; 73% for Gallus gallus with 14 eggs/female; 86% for Canis familiaris with 10.3 eggs/female; 81.4% for Galea spixii with 26 eggs/female; 36% for Callithrix jachus with 15 eggs/female; 42.8% for Monodelphis domestica with 0% of oviposition. Female sand flies did not take a blood meal from Felis catus. Sand flies life cycle ranged from 32-40 days, with 21-50 oviposition rates approximately. This study also showed that at 32?C the life cycle had 31 days, at 28? C it had 50 days and at 22?C it increased to 79 days. Adjusting the temperature to 35?C the eggs did not hatch, thus blocking the life cycle. A total of 1540 sand flies were captured, among them, 1.310 were male and 230 were female. Whereas 86% of the sand flies captured were Lu. longipalpis as compared to 10.5% for Lu. evandroi and, 3.2% for L. lenti and 0.3% for Lu whitmani. The ratio between female and male sandfly was approximately 6 males to 1 female. In N?sia Floresta, 50.7% of the collected females took their blood meal from armadillo, 12.8% from human. Among the female sand flies captured in S?o Gon?alo do Amarante, 80 of them were tested for the Leishmania KDNA infectivity where 5% of them were infected with Leishmania chagasi. Female Lutzomyia spp. showed to have an opportunistic blood meal characteristic. The behavioral parameters seem to have a higher influence in the oviposition when compared to the level of total proteins detected in the host s bloodstream. A higher Lu. longipalpis life cycle viability was observed at 28?C. The increase of temperature dropped the life cycle time, which means that the life cycle is modified by temperature range, source of blood meal and humidity. Lu longipalpis was the most specie found in the inner and peridomiciliar environment. In N?sia Floresta, armadillos were the main source of blood meal for Lutzomyia spp. At S?o Gon?alo do Amarante, humans were the main source of blood meal due to CDC nets placed inside their houses / As leishmanioses s?o doen?as end?micas em regi?es do Velho e Novo Mundo causadas por protozo?rios flagelados do g?nero Leishmania. No Novo Mundo, a distribui??o das diversas formas de leishmaniose ? quase que inteiramente intertropical. No Rio Grande do Norte, nordeste do Brasil, 85% da fauna flebotom?nica capturada no Estado, corresponde a Lutzomyia longipalpis e sua distribui??o se sobrep?e ? distribui??o da doen?a estando associada ? presen?a de abrigos de animais dom?sticos. A exposi??o de pessoas a esses ambientes aumenta a probabilidade de infec??o por diversas esp?cies de Leishmania. O estudo teve como objetivo avaliar a prefer?ncia alimentar de f?meas do g?nero Lutzomyia em condi??es laboratoriais, observar o ciclo biol?gico a diferentes temperaturas e identificar as principais fontes de repasto sangu?neo em ?reas end?micas de leishmaniose visceral na Grande Natal. Foram realizadas coletas nos munic?pios de S?o Gon?alo do Amarante e N?sia Floresta dos quais foram separados grupos de f?meas para manuten??o de col?nia em laborat?rio e para avalia??o da prefer?ncia alimentar em ambiente natural. As f?meas apresentaram um percentual de prefer?ncia alimentar e taxa de oviposi??o de 97,0% para Cavia porcellus com oviposi??o de 19 ovos/f?mea; 97,0% para Equus caballus, com 19 ovos/f?mea; 98,0% para sangue humano, com 14 ovos/f?mea; 71,3% em Didelphis albiventris, com 8,4 ovos/f?mea; 73,0% em Gallus gallus, com 14 ovos/f?mea; 86,0% em Canis familiaris, com 10,3 ovos/f?mea; 81,4% em Galea spixii, com 26 ovos/f?mea; 36,0% em Callithrix jachus, com 15 ovos/f?mea; 42,8% para Monodelphis domestica com 0,0% de oviposi??o. As f?meas n?o realizaram repasto sangu?neo em Felis catus. O ciclo de vida de flebotom?neos em laborat?rio ? de 32-40 dias, com taxa de oviposi??o de aproximadamente 21-50 ovos/f?mea. Foi observado que a 32?C o ciclo biol?gico ? de 31 dias, enquanto que a 28?C este aumenta para 50 dias e a 22?C para 79 dias. Com o aumento da temperatura para 35?C, os ovos n?o eclodiram, inviabilizando o curso do ciclo biol?gico. Foi coletado um total de 1.540 flebotom?neos, sendo 1310 machos e 230 f?meas. A esp?cie mais encontrada foi Lutzomyia longipalpis com 86,0%, Lutzomyia evandroi 10,5%, Lu. lenti com 3,2% e Lu. whitmani com 0,3%. A rela??o entre macho e f?mea foi de aproximadamente 6 machos para 1 f?mea. 50,7% das f?meas coletadas em N?sia Floresta realizaram repasto apenas em peba, 12,8% das f?meas coletadas em S?o Gon?alo do Amarante realizaram repasto sangu?neo somente em humanos. Dentre as f?meas coletadas em S?o Gon?alo do Amarante, 80 foram analisadas para a infectividade para o kDNA de Leishmania e 5% apresentaram amplifica??o para o kDNA de Leishmania. F?meas de Lutzomyia spp. apresentaram perfil alimentar oportunista. Os par?metros comportamentais parecem ter uma maior influ?ncia na oviposi??o do que os n?veis de prote?nas totais encontrados no sangue dos hospedeiros. Uma maior viabilidade do ciclo de Lu. longipalpis foi observada a temperatura de 28?C. A eleva??o da temperatura reduziu a dura??o do ciclo biol?gico, sendo este possivelmente influenciado pela temperatura, fonte de repasto e umidade relativa do ar. Lu. longipalpis foi a esp?cie mais encontrada em ambiente intra e peridomiciliar. Em N?sia Floresta, os pebas foram a principal fonte de repasto sangu?neo de f?meas Lutzomyia spp. No munic?pio de S?o Gon?alo do Amarante, os humanos foram a principal fonte de repasto em conseq??ncia das coletas terem sido realizadas no intradomic?lio

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HenioGL_TESE.pdf: 1861952 bytes, checksum: 59df83a02a682e8397eb8b241531d77b (MD5) Previous issue date: 2011-11-16 / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by protozoa of the Leishmania donovani complex, whose infection has clinical spectrum ranging from asymptomatic infection to active disease characterized by fever, cachexia, hepatosplenomegaly, and immunosuppression. The healing or protective immunity require an antigen-specific type 1. The Montenegro skin test (DTH) has been interpreted as a marker of protective immunity. However, there is no known correlation between the DTH response to type 1 and DTH and immunity of type 1 are maintained in the long term. Thus, a longitudinal study of 8 years, nested in a cohort family held in Brazil, documented the status of DTH and cytokine production by peripheral blood mononuclear cells in response to antigen-specific stimulation. This study was the interdisciplinary approach of physicians, biochemists, nutritionists, veterinary medicine, biology and statistics. The results show that 46.2% of subjects were analyzed DTH positive at baseline. The prevalence of positive and DTH induration size increased with age (p = 0.0021). 15.7% of individuals positive DTH "retro-converted" the negative and 50.4% (64) of individuals negative DTH became positive. The size of DTH induration was correlated significantly with the antigen-induced production of IFN-γ (r = 0.6186, p = 0.0001). IL-6 was secreted at higher levels in peripheral blood mononuclear cells of individuals who "retro-converted" DTH positive to negative than individuals who remained stable DTH status (p = 0.005). Thus, IFN-γ produced by peripheral blood mononuclear cells, may be a surrogate marker for protective immunity instead of the DTH response. In addition, differences in innate immune response may determine whether individuals maintain or eliminate the infection by Leishmania infantum chagasi in asymptomatic patients / A leishmaniose visceral (LV) ? uma doen?a ocasionada por protozo?rios do complexo Leishmania donovani, cuja infec??o possui espectro cl?nico variando desde infec??o assintom?tica a doen?a ativa caracterizada por febre, caquexia, hepatoesplenomegalia e imunossupress?o. A cura ou prote??o exigem uma imunidade ant?geno espec?fica do tipo 1. O teste cut?neo de Montenegro (DTH) tem sido interpretado como um marcador de imunidade protetora. No entanto, n?o se sabe a correla??o do DTH com a resposta tipo 1 e se o DTH e a imunidade do tipo 1 s?o mantidos a longo prazo. Assim, um estudo longitudinal de 8 anos, aninhado a uma coorte familiar realizada no Brasil, documentou o status do DTH e a produ??o de citocinas por c?lulas mononucleares do sangue perif?rico em resposta a estimulo ant?geno-espec?fico. Os resultados obtidos mostram que 46,2% dos indiv?duos analisados foram DTH positivos no in?cio do estudo. A preval?ncia do DTH positivo e o tamanho da endura??o aumentaram com a idade (p = 0,0021). 15,7% dos indiv?duos DTH positivos retroconverteram a negativos e 50,4% (64) dos indiv?duos DTH negativos tornaram-se positivos. O tamanho da endura??o do DTH correlacionou-se significativamente com a produ??o ant?geno induzida de IFN-γ (r=0,6186, p=0,0001). IL-6 foi secretado em n?veis mais elevados por c?lulas mononucleares do sangue perif?rico dos indiv?duos que retroconverteram de DTH positivo para negativo do que os indiv?duos que mantiveram o status de DTH est?vel (p=0,005). Assim, o IFN-γ, produzido por c?lulas mononucleares do sangue perif?rico, pode ser um marcador substituto para a imunidade protetora em vez da resposta DTH. Al?m disso, as diferen?as na resposta imune inata podem determinar se os indiv?duos mant?m ou eliminam a infec??o por L. infantum chagasi em assintom?ticos

Infection is the major complication for neutropenic patients, and cause of morbidity and mortality. Clinical signs are nonspecific and fever may be a late marker for the early use of antibiotics, which may complicate the prognosis. The approaches of most protocols focus on adult patients. Thus, to improve safety in the clinical approach in pediatric neutropenic patients, this work was performed in order to evaluate biomarkers involved in the inflammatory response in pediatric patients. In the period 2010 to 2012 were included 70 children with neutropenia with neutrophil count ≤ 1000 cells / mm ³, 35 pediatric patients with visceral leishmaniasis (VL) and 35 patients with onco-hematological disease, ranging in age from 0 to 18, from the oncology service of the Hospital Emergency ward Segipe and Pediatrics Diseases, University Hospital of Sergipe. Serum levels of biomarkers were evaluated following: Interferon gamma (IFN-γ), interleukin-5 (IL-5), interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), lactate, ultrasensitive CRP (hsCRP), nprocalcitonina (PCT) and Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α). The results showed that the average of the groups was no significant difference with biomarkers IFN-γ, IL-10 and TNF-α with p <0.001, IL-5 and p = 0.020, p = 0.002 with lactate and p = 0.011 PCT The hsCRP and IL-6 did not show statistical significance. Correlating CAN groups with the average of biomarkers, there was no statistical significance. This study suggests that biomarkers biomarkers that IFN-γ, IL-5, IL-10, lactate, procalcitonin and TNF-α, laboratory values showed a significant difference between the group of patients neutropenic patients with LV disease and onco- hematologic, this is not happening with the results presented by biomarkers IL-6 and hsCRP, leading us to observe that although the groups have in common neutropenia, interpretation of these biomarkers should be performed separately for each group. Except for lactate and procalcitonin, all other biomarkers showed increased results when comparing the mean of the two groups, which leads us to conclude that studies with larger numbers of subjects are important to verify the use of IFN-γ biomarkers, IL- 5, IL-6, IL-10 and TNF-α in the diagnosis of infection in neutropenic patients. / A infecção constitui a maior complicação para o paciente neutropênico, sendo causa de morbidade e mortalidade. Sinais clínicos são inespecíficos e febre pode ser um marcador tardio para início do uso de antibióticos, podendo complicar o prognóstico. As abordagens da maioria dos protocolos focam-se em pacientes adultos. Desta forma, para reforçar a segurança na abordagem clínica em pacientes neutropênicos pediátricos, foi realizado este trabalho com o objetivo de avaliar os biomarcadores envolvidos na resposta inflamatória em pacientes pediátricos. No período de 2010 a 2012 foram incluidos 70 crianças portadoras de neutropenia, com contagem de neutrófilos ≤ 1000 cel/mm³, sendo 35 pacientes pediatricos portadores de Leishmaniose visceral(LV) e 35 portadores de doença onco-hematológica , com idade variando de 0 a 18 anos, oriundos do serviço de oncologia do Hospital de Urgência de Sergipe e da enfermaria de Pediatria do Hospital Universitário de Sergipe. Os níveis séricos dos seguintes biomarcadores foram avaliados: Interferon gamma (IFN-γ), Interleucina-5(IL-5), interleucina-6(IL-6), interleucina-10(IL-10), lactato, Proteina C Reativa ultrassensível(PCR-US),procalcitonina(PCT) e Fator de Necrose Tumoral alfa(TNF-α) . Os resultados mostraram que na média dos grupos estudados houve diferença significativa com os biomarcadores IFN-γ, IL-10 e TNF-α com p <0,001, IL-5 com p=0,020, lactato com p=0,002 e PCT com p=0,011 A PCR-US e a IL-6 não apresentaram estatiscamente significância. Correlacionando a CAN dos grupos com a média dos biomarcadores, não foi observado significancia estatística. Este trabalho sugere que os biomarcadores que os biomarcadores IFN-γ, IL-5, IL-10, lactato, procalcitonina e TNF-α, apresentaram valores laboratoriais com diferença significativa entre o grupo de pacientes neutropênicos portadores de LV e doença onco-hematológica, o mesmo não acontecendo com os resultados apresentados pelos biomarcadores IL-6 e a PCR-US, levando-nos a observar que apesar dos grupos terem a neutropenia em comum, a interpretação destes biomarcadores deve ser realizada de forma distinta para cada grupo. Excetuando-se o lactato e a procalcitonina, todos os demais biomarcadores apresentaram resultados aumentados quando comparadas as médias dos dois grupos, fato que nos faz concluir que estudos com um número maior de indivíduos são importantes para verificar o uso dos biomarcadores IFN-γ, IL-5, IL-6, IL-10 e TNF-α no diagnóstico de infecção em pacientes neutropênicos.

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Renato Andreotti e Silva / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Resumo: O objetivo deste estudo foi detectar reações cruzadas por Leishmania spp. e Trypanossoma cruzi pelo Ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA), pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Assim, foram colhidas 408 amostras sanguíneas de cães domiciliados no município de Araçatuba,SP, de ambos os sexos, de diversas raças e com idade a partir de seis meses. Em relação à Leishmania spp., pela RIFI, 14,95 % (61/408) foram reagentes. A positividade por meio do ELISA, foi de 20,10% (82/408) e pela PCR, 29,66% (121/408), com diferença significativa para o sexo e a idade destes animais (p<0,05). Para Trypanosoma spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 10,54% (43/408) e pela PCR, 2,45% (10/408) cães foram positivos. Pela RIFI, 10,29% (42/408) dos animais foram considerados positivos e somente o sexo apresentou diferença significativa (p<0,05). Neste trabalho, constatou-se que 10,54%(43/408) dos animais foram soropositivos por ELISA para Trypanosoma spp., sendo que 79,07%(34/43) obtiveram resultados positivos no diagnóstico molecular para Leishmania spp. e dos 10,29% (42/408) positivos por RIFI, 95,24% (40/42) dos cães confirmaram a infecção por este parasita. Por meio dos resultados obtidos, pode-se inferir que foram evidenciadas reações cruzadas nos ensaios sorológicos para ambos os protozoários, nos animais analisados neste trabalho / Abstract: The aim of this study was to detect cross-infection by Leishmania spp. and Trypanosoma spp. by indirect immunosorbent assay (ELISA), by Indirect Immunofluorescence (IFA) and by the Polymerase Chain Reaction (PCR). Thus, blood samples were collected from 408 domestic dogs of both sexes, different races and ages from six months. For Leishmania spp. by IFA, 14.95% (61/408) were positive. Positive by ELISA, was 20.10% (82/408), and PCR 29.66% (121/408), with significant difference for sex and age of animals (p <0.05). For Trypanosoma spp., the occurrence of antibodies by ELISA, was 10.54% (43/408), and PCR, 2.45% (10/408) dogs were positive. By IFA, 10.29% (42/408) of the animals were considered positive and only sex was significant difference (p <0.05). In this work it was found that 10.54% (43/408) animals were seropositive by ELISA for Trypanosoma spp., 79.07% (34/43) had positive results in molecular diagnostic for Leishmania spp. and 10.29% (42/408) positive by IFA, 95.24% (40/42) dogs confirmed the infection by this parasite. Through the results obtained can be inferred that cross-infection were observed by both protozoa in animals of this paper / Mestre

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Virgínia Bodelão Richini Pereira / Resumo: A família Trypanosomatidae inclui agentes etiológicos responsáveis por ocasionar doenças em humanos e demais animais, englobando dezenas de protozoários pertencentes a diferentes gêneros, destacando-se os protozoários representantes dos gêneros Leishmania, causadores das leishmanioses e Trypanosoma, causador de tripanosomíase. Enquanto a transmissão das leishmanioses ocorre devido à picada de insetos fêmeas de flebotomíneos pertencentes ao gênero Phlebotomus no Velho Mundo e Lutzomyia no Novo Mundo, a transmissão da tripanossomíase depende da espécie de tripanosoma envolvida na infecção, podendo ocorrer pela picada de insetos adultos do gênero Glossina; pelas fezes de triatomíneos, sobretudo do gênero Triatoma e mecanicamente por moscas hematófagas, principalmente do gênero Stomoxys. Além dos humanos, animais domésticos e silvestres podem atuar como reservatórios de tripanosomatídeos, incluindo os primatas não humanos, os quais estão associados com o ciclo enzoótico das leishmanioses e tripanosomíase, sendo que a infecção natural por protozoários do gênero Trypanosoma e Leishmania em mamíferos selvagens é comum na natureza. O objetivo do trabalho foi pesquisar tripanosomatídeos em primatas de cativeiro procedentes do Parque Zoológico Municipal de Bauru - SP por meio de anticorpos contra o parasito e pela amplificação do DNA do protozoário. Para tanto, foram coletadas amostras de sangue de 39 primatas. A técnica molecular de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foi aplicada na... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The family Trypanosomatidae includes etiological agents responsible for causing diseases in humans and other animals. There are dozens of protozoa belonging to different genres, especially protozoa representatives of Leishmania genre, which causes leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis. While the transmission of leishmaniasis is due to the bites of female sand flies belonging to the genus Phlebotomus in the Old World and Lutzomyia in the New World, the transmission of trypanosomiasis depends on the species of trypanosome involved in the infection. It may occurs by the bite of adult insects of the genus Glossina or by the feces of insects, especially by the genre Triatoma and mechanically by bloodsucking flies, especially the Stomoxys genre. In addition to humans, domestic and wild animals can act as trypanosomatids reservoirs, including non-human primates, which are associated with the enzootic cycle of leishmaniasis and trypanosomiasis; the natural infection by Trypanosoma and Leishmania protozoa in wild mammals is common in nature. The aim of the study was to investigate trypanosomatids in captive primates coming from Municipal Zoological Park of Bauru by antibodies against the parasite and the amplification of the DNA of the parasite. For this, blood samples were collected from 39 primates. The molecular technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) was applied in research for Leishmania braziliensis, Leishmania amazonensis and Leishmania infantum us... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A leishmaniose visceral americana (LVA) é uma doença em expansão no Brasil, para a qual se dispõem de poucas, e aparentemente ineficientes, estratégias de controle. Um dos grandes problemas para a contenção da leishmaniose visceral americana é a falta de um método acurado de identificação dos cães infectados, considerados os principais reservatórios da doença no meio urbano. Neste sentido, a caracterização de marcadores clínico-laboratoriais da infecção neste reservatório e a avaliação mais adequada do desempenho de testes para diagnóstico da infecção podem contribuir para aumentar a efetividade das estratégias de controle da LVA. Com isso, o presente estudo tem dois objetivos principais: (1) desenvolver e validar um modelo de predição para o parasitismo por Leishmania chagasi em cães, baseado em resultados de testes sorológicos e sinais clínicos e (2) avaliar a sensibilidade e especificidade de critérios clínicos, sorológicos e parasitológicos para detecção de infecção canina por L. chagasi mediante análise de classe latente. O primeiro objetivo foi desenvolvido a partir de estudo em que foram obtidos dados de exames clínico, sorológico e parasitológico de todos os cães, suspeitos ou não de LVA, atendidos no Hospital Veterinário Universitário da Universidade Federal do Piauí (HVU-UFPI), em Teresina, nos anos de 2003 e 2004, totalizando 1412 animais. Modelos de regressão logística foram construídos com os animais atendidos em 2003 com a finalidade de desenvolver um modelo preditivo para o parasitismo com base nos sinais clínicos e resultados de sorologia por Imunofluorescência Indireta (IFI). Este modelo foi validado nos cães atendidos no hospital em 2004. Para a avaliação da área abaixo da curva ROC (auROC), sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo (VPP), valores preditivos negativo (VPN) e acurácia global, foram criados três modelos: um somente baseado nas variáveis clínicas, outro considerando somente o resultado sorológico e um último considerando conjuntamente a clínica e a sorologia. Dentre os três, o último modelo apresentou o melhor desempenho (auROC=90,1%, sensibilidade=82,4%, especificidade=81,6%, VPP=73,4%, VPN=88,2% e acurácia global=81,9%). Conclui-se que o uso de modelos preditivos baseados em critérios clínicos e sorológicos para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina pode ser de utilidade no processo de avaliação da infecção canina, promovendo maior agilidade na contenção destes animais com a finalidade de reduzir os níveis de transmissão. O segundo objetivo foi desenvolvido por meio de um estudo transversal com 715 cães de idade entre 1 mês e 13 anos, com raça variada avaliados por clínicos veterinários no HVU-UFPI, no período de janeiro a dezembro de 2003. As sensibilidades e especificidades de critérios clínicos, sorológicos e parasitológicos para detecção de infecção canina por Leishmania chagasi foram estimadas por meio de análise de classe latente, considerando quatro modelos de testes e diferentes pontos de corte. As melhores sensibilidades estimadas para os critérios clínico, sorológico e parasitológico foram de 60%, 95% e 66%, respectivamente. Já as melhores especificidades estimadas para os critérios clínico, sorológico e parasitológico foram de 77%, 90% e 100%, respectivamente. Conclui-se que o uso do exame parasitológico como padrão-ouro para validação de testes diagnósticos não é apropriado e que os indicadores de acurácia dos testes avaliados são insuficientes e não justificam que eles sejam usados isoladamente para diagnóstico da infecção com a finalidade de controle da doença. / American visceral leishmaniasis (AVL) is an expanding disease in Brazil, for which few, and apparently inefficient, control strategies are available. A major problem for the containment of visceral leishmaniasis is the lack of an accurate test for the identification of infected dogs, which are considered the main reservoirs of the disease in urban areas. In this sense, the characterization of clinical and laboratory markers of the infection in this reservoir, as well as, a more appropriate assessment of the performance of tests for the diagnosis of infection, might increase the effectiveness of control strategies for AVL. Thus, this study has two main objectives: (1) to develop and validate a prediction model for parasitism by Leishmania chagasi in dogs, based on the results of serological tests and clinical signs and (2) to evaluate the sensitivity and specificity of a clinical criterion, and of parasitological and serological tests for canine infection by L. chagasi using latent class analysis. The first goal was developed from a study in which clinical, serological and parasitological data were obtained for all dogs, suspicious or not to AVL, admitted at the Veterinary Hospital at the Federal University of Piauí, Teresina, in the years of 2003 and 2004, totaling 1412 animals. Logistic regression models were constructed with the animals admitted in 2003 with the aim of developing a predictive model for parasitism based on clinical signs and results of serology by indirect immunofluorescence (IIF). This model was validated in dogs admitted at the hospital in 2004. To evaluate the area under the ROC curve (AuROC), sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV) and overall accuracy, three models were developed: one based only on clinical variables, other only with the serological results and a final model based on both the clinical and serological data. Among the three, the last model showed the best performance (AuROC=90.1%, sensitivity 82.4%, specificity=81.6%, PPV=73.4% NPV=88.2% and overall accuracy=81.9%). It is concluded that the use of predictive models based on clinical and serological data for diagnosis of canine visceral leishmaniasis might be useful in the evaluation of canine infection, allowing the anticipation of ontainment of these animals in order to reduce transmission levels. The second goal was developed through a cross-sectional study of 715 dogs aged between 1 month and 13 years, with varied races evaluated by veterinarians at VUH-UFPI in the period January to December 2003. The sensitivities and specificities of clinical, parasitological and serological tests for detection of canine infection by Leishmania chagasi were estimated using latent class analysis, considering four types of models and different cutoffs. The best sensitivity estimates for the clinical, serological and parasitological tests were 60%, 95% and 66% respectively. The best estimates for the specificity of clinical, serological and parasitological tests were 77%, 90% and 100% respectively. It is concluded that the use of parasitological assays as the gold standard for validation of diagnostic tests is not appropriate and that the indicators of accuracy of the tests evaluated are insufficient to justify that they are used alone for diagnosis of infection in order to control the disease.

In this work was developed an electrochemical immunosensor that can detect label free specific antibody for visceral leishmaniasis using graphite electrode modified with poly(4-HPA) as a platform and DPV as electrochemical technique support. Therefore, investigations of main structural characteristics, thermal and electrochemical poly(4-HPA), obtained by electropolymerization of acid 4-HPA, were conducted using the following techniques: FTIR, UV-vis and Fluorescence. The FTIR spectra showed that the functional groups present in the monomer are preserved and that new groups are formed after electropolymerization, and the obtained polymer is 1,2,4,5-tetra-substituted, with strong evidences that these two new substituents are diphenyl ethers and ring-ring bonds, which justifies the increase in the extension of conjugation and the presence of new chromophore groups observed in UV-vis and Fluorescence studies. Thus, it was possible to discuss about the structure of poly(4-HPA), as well as propose the possible reaction mechanisms involved in its formation. These studies were of great importance in the search for a better understanding and discussion of the results. The thermal stability of the polymer, evaluated by TGA shows that the poly(4-HPA) presents a complex and heterogeneous structure and do not exhibits good thermal stability after 100 ° C. It was also investigated the growth of polymer in function of the number of potential scans. Through of this investigation it was possible obtained a profile for the increased electrochemical response of this material in relation to the time of electropolymerization, and such profile showed that the number of potential scans used in electrosynthesis is a good parameter to be used at the studies of this material. For the immunosensor development, the immobilization of the rK39 antigen, specific for visceral leishmaniasis, onto EG/poly(4-HPA) was confirmed through electrochemical studies. A electrochemical detection of IgG+ was conducted using CV and DPV techniques, using Coomassie Brilliant Blue G-250 and ruthenium hexamine II chloride as possible indicators of the formation of Antigen-Antibody complex. The Coomassie was efficient to indicate the surface modification of EG/poly(4-HPA) with rK39, however, did not show satisfactory sensitivity for IgG+, as well as selectivity for the non-complementary target (IgG-, negative control). However, the ruthenium hexamine II chloride, showed high efficiency to indicate the surface modification of EG/poly (4-HFA) with rK39 and good sensitivity for IgG+ and selectivity towards IgG-; enabling the development of the electrochemical immunosensor proposed in this work. / Neste trabalho foi desenvolvido um imunossensor eletroquímico capaz de detectar o anticorpo, livre de marcação, específico para leishmaniose visceral utilizando-se EG modificado com ácido poli(4-HFA) como plataforma e VPD como técnica eletroquímica suporte. Para isso, investigações das principais características estruturais, térmicas e eletroquímicas do ácido poli(4-HFA), obtido por eletropolimerização do ácido 4-HFA, foram conduzidas utilizando-se as técnicas FTIR, UV-vis e Fluorescência. Os espectros de FTIR mostraram que os grupos funcionais presentes no monômero são preservados e que novos grupos são formados após a eletropolimerização, e ainda, que o polímero obtido é tetra-1,2,4,5-substituído, com fortes indícios de que esses dois novos substituintes sejam éteres difenílicos e ligações anel-anel, justificando o aumento na extensão de conjugação e a presença de novos grupos cromóforos observados nos estudos de UV-vis e Fluorescência. Neste sentido, foi possível iniciar as discussões sobre a estrutura do ácido poli(4-HFA), bem como, dos possíveis mecanismos de reação envolvidos na sua formação, e estes estudos foram de grande importância na busca de uma melhor compreensão e discussão dos resultados obtidos. A estabilidade térmica do polímero, avaliada por TGA, mostrou que o ácido poli(4-HFA) apresenta estrutura heterogênea e complexa e que este não apresenta boa estabilidade térmica após 100 °C. Investigou-se também o crescimento do filme polimérico em função do número de varreduras de potencial. Com esta investigação foi possível traçar um perfil para o aumento da resposta eletroquímica desse material em função do tempo de eletropolimerização e, tal perfil, indicou que o número de varreduras potenciais utilizados na eletrossíntese é um bom parâmetro a ser empregado na condução dos estudos deste material. Para o desenvolvimento do imunossensor, a imobilização do antígeno rK39, específico para leishmaniose visceral, sob EG/poli(4-HFA) foi comprovada por meio dos estudos eletroquímicos. A detecção eletroquímica do IgG+ foi conduzida por meio das técnicas de VC e VPD utilizando Coomassie Brillant Blue G-250 e Cloreto de hexaaminrutênio II como possíveis indicadores da formação do complexo Ag-Ac. O Coomassie mostrou-se eficiente para indicar a modificação da superfície do EG/poli(4-HFA) com rK39, entretanto, não apresentou sensibilidade satisfatória para o IgG+, bem como, seletividade perante o alvo não complementar (IgG-, controle negativo). Já o Cloreto de hexaminrutênio II, além de apresentar alta eficiência para indicar a modificação da superfície do EG/poli(4-HFA) com rK39, também apresentou boa sensibilidade para o IgG+ e seletividade perante IgG-, possibilitando o desenvolvimento do imunossensor eletroquímico proposto neste trabalho. / Mestre em Química

As leishmanioses são doenças consideradas antropozoonoses, ou seja, doenças primárias de animais que podem ser transmitidas ao homem. São causadas por microorganismos do gênero Leishmania e transmitidas através da picada de flebotomíneos, que são insetos alados da ordem Diptera (mesmo grupo das moscas, mosquitos e borrachudos). Apresentam-se sob duas formas clínicas: Leishmaniose Visceral ou Calazar (LV) e Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). As leishmanioses apresentam distribuição geográfica vasta pelo Velho e Novo Mundo, sendo estimado dessa maneira que aproximadamente 350 milhões de pessoas estejam sob iminente risco de contrair algum tipo de leishmaniose. No Brasil, as leishmanioses são encontradas em todas as unidades federadas, e o estado do Rio de Janeiro vem apresentando franca expansão dessas doenças em áreas urbanas, devido principalmente ao desmatamento ocasionado pela expansão não planejada da malha urbana. Nesse contexto, faz-se necessário desenvolver estudos sobre o espaço e o processo saúde-doença, relação estabelecida pela Geografia da Saúde, a fim de que se compreenda a correlação entre o homem e o ambiente vivido. / The leishmaniasis are diseases considered as zoonosis, primary diseases of animals which can be transmitted to humans. They are caused by microorganisms of the Leishmania genus and transmitted by the phlebotominaes pitch: these are winged insects from the Diptera group (Psycodidae;Plebotominae;Lutzomyia). They are presented in two clinical forms: Visceral Leishmaniasis or Kala-azar - VL and Cutaneous Leishmaniasis - CL. The leishmaniasis have wide geographic distribution throughout the Old and New World and it has been estimated that about 350 million people are under imminent risk of contagious of some type of leishmaniasis. In Brazil, the leishmaniasis are found in all the federated units, and the state of Rio de Janeiro has been presenting an increasing number of these diseases in urban areas, mainly due to deforestation caused by unplanned expansion of urban zones. In this context, it is necessary to carry out studies on space and the health-disease relationship established by the Health Geography, in order to explain the relationship between man and the environment, to determinate the spatial elements and social determinants that compose this relationship. Therefore, the main objective of this research is to discuss the health-disease process in the ambit of Geographic science in the actuality, looking up to demonstrate the distribution of the leishmaniasis in Rio de Janeiros state on the 2000-2010 period. It was verified at the end of the study that the VL-kind presents a regular standard of distribution in the state and the CL-kind are more likely an irregular default of distribution. Although, for the analyzed period, it has been pointed the presence of the CL-kind in areas like Rio de Janeiros Metropolitan and Costa Verde (Green Coast) Regions, a fact that deserves attention because of the high/expressive tourist vocation and activity of those.

Nesse trabalho, foram sintetizados seletivamente, a partir do óxido do limoneno em oposição a diversas aminas primárias e secundárias, onze b-aminoálcoois derivados do limoneno através de aquecimento convencional e sob irradiação com microondas, fornecendo produtos com moderados a bons rendimentos. O limoneno e nove destes aminoálcoois foram testados contra ovos e larvas de carrapatos da espécie de Rhipicephalus (Boophilus) microplusn no intervalo de concentração de 0,150-10mg/mL. Os resultados revelaram que em doses entre 10 μl/ml - 2.5 μl/ml todos os compostos testados foram letais às larvas. Frente ao teste ovicida os compostos 2, 6, 8, 9 e 10 foram os mais ativos, impedindo a eclosão total ou quase total dos ovos na menor dose utilizada (0,150 μg/ml). Este é o primeiro relato da atividade carrapaticida de limoneno, óxido de limoneno e dos b- aminoálcoois do limoneno para a espécie de carrapato Rhipichephalus (Boophilus) microplus. O limoneno e sete β-aminoálcoois foram testatdos in vitro contra forma promastigota de Leishmania (Vianna) braziliensis. Os resultados dos testes mostraram que, dentre os sete β-aminoálcoois testados dois deles foram mais ativos que o padrão pentamidina (48,5 ± 28,7 μM) e cinco foram mais ativos que o limoneno 1. Destes, dois deles (compostos 7 e 9) apresentaram alta atividade frente a formas promastigotas do ciclo parasitário numa concentração de 0,156mg/mL. O Limoneno 1 nesse teste se mostrou inativo (876,2 ± 216 μM) demonstrando que este terpeno isolado não é um bom antiparasitário contra formas promastigotas de Leishmania (Vianna) braziliensis. Este é o primeiro relato de atividade contra leishmania para amino-álcoois derivados do limoneno. / In this work, a series of seven limonene β-amino alcohols derivatives have been regioselectively synthesized from moderate to good yields. The eleven β-amino alcohols Limonene derivatives were synthesized through aminólisis of Limonene oxide, using several primary and secondary amines by both conventional heating and under microwave irradiation. Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives were investigated for the effect on egg hatchability and mortality rates of newly hatched larvae of cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. At the doses between 10 μl/ml to 2.5 μl/ml all compounds were highly lethal to the larvae and at lower concentrations some of them (2, 6, 8, 9 and 10) showed activity. The effect on hatchbility of the eggs was observed in all treatments. This is the first report of carrapicide activity for Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives against cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The leishmanicidal activity was performed and according to the results two of these compounds were more powerful against in vitro cultures of Leishmania (Vianna) braziliensis promastigote form in a range of μM. The activities observed for 3b and 3f were about 100 folds more potent than the drug standard Pentamidine, while the limonene hasn’t shown any activity in the same test. This is the first report of antileishmanial activity of Limonene β-amino alcohol derivatives.

Orientador: Cáris Maroni Nunes / coorientadora: Silvana de Cássia Paulan / Banca: Valérioa Marçal Felix de Lima / Banca:Adam Taiti Harth Utsunomiya / Resumo: As diferentes espécies de Leishmania causam amplo espectro de manifestações clínicas sendo genericamente classificadas em leishmaniose cutanêa (LC), mucocutânea (LMC) e leishmaniose visceral (LV), acometendo tanto crianças como adultos, e várias espécies de mamíferos. Para a identificação da espécie faz-se necessário o isolamento do protozoário a partir de amostras biológicas e o diagnóstico em laboratórios de referência. Atualmente, o "padrão ouro" para identificação de cepas de Leishmania spp. em estudos epidemiológicos é o multilocus enzyme electrophoresis (MLEE), a qual é uma técnica laboriosa e de aplicação restrita à amostras em cultivo. As técnicas baseadas na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) têm sido bastante utilizadas para caracterizar e diferenciar as espécies de Leishmania. Tal diferenciação pode ser importante para a determinação do tratamento correto aos pacientes, diminuindo a letalidade, e para estudos epidemiológicos com o mapeamento do padrão de distribuição das leishmanioses, auxiliando assim na priorização das medidas de controle desta zoonose. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar in silico os oligonucleotídeos iniciadores já utilizados no diagnóstico molecular e validar, por PCR em Tempo Real, sua especificidade em cepas de referência cultivadas in vitro. / Mestre