Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T21:22:36Z No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Papel da proteína hemeoxigenase....pdf: 1624634 bytes, checksum: 6f830105c144bc3c799743a490e5a511 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T21:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nivea Farias Luz Papel da proteína hemeoxigenase....pdf: 1624634 bytes, checksum: 6f830105c144bc3c799743a490e5a511 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) apresenta ampla distribuição geográfica e é fatal caso não seja tratada. As manifestações hematológicas são constantes na LV e em casos não tratados os pacientes evoluem à óbito por sangramento maciço ou anemia grave. Neste cenário, mecanismos ligados à hemólise, metabolismo do heme e atividade da enzima heme oxigenase podem estar envolvidos na imunopatogênese da LV, no entanto essa perspectiva ainda não foi explorada. A heme oxigenase (HO) tem importantes propriedades regulatórias e está envolvida em processos fisiológicos e patofisiológicos como citoproteção e inflamação. Apesar de sua sugestiva participação no contexto da infecção por Leishmania, uma rápida pesquisa no PubMed com as palavras heme oxigenase e Leishmania remete a somente três trabalhos até a presente data. Nesse projeto testaremos a hipótese de que a ativação da enzima heme oxigenase-1 (HO-1) favorece a infecção por Leishmania (L) chagasi, principal agente etiológico da LV humana no Brasil. Nossas observações nesse trabalho indicam que a enzima HO-1 é induzida em macrófagos durante a infecção por L. chagasi e que a indução farmacológica da HO-1, pela CoPP aumenta a carga parasitária de macrófagos infectados por L. chagasi e reduz a produção de mediadores pró-inflamatórios frente à estimulação por LPS, tais como TNF, NO, PGE2, MCP-1, IL-1β e IL-6. Além disso, a HO-1 favorece um ambiente anti-inflamatório onde prevalece a presença de IL-10 sobre a de TNF. Macrófagos derivados de medula óssea de camundongos deficientes no gene HO-1 tem menor carga parasitária, quando infectados por L. chagasi em comparação aos macrófagos de camundongos selvagens. Esses achados indicam um potencial deletério para a HO-1 na infecção por L. chagasi, bem como sugerem possíveis mecanismos envolvidos na imunopatogênese da LV. / Visceral leishmaniasis (VL) is a widespread disease and is fatal if left untreated. Hematological manifestations are common in VL and untreated patients evolve to death from massive bleeding and severe anemia. In this scenario, mechanisms related to hemolysis, heme metabolism and enzyme activity of heme oxygenase may be involved in the immunopathogenesis of VL. But that panorama has not been explored. Heme oxygenase (HO) has important regulatory properties and is involved in patho-physiological processes such as cytoprotection and inflammation. Despite HO participation in the context of Leishmania infection is suggestive, a quick search on PubMed with the words heme oxygenase and Leishmania refers to only three papers to date. This project will test the hypothesis that heme oxygenase- 1 (HO-1) activation favors Leishmania (L) chagasi, the main etiology agent of human VL in Brazil. Our observations indicate that HO-1 is induced in macrophages during L. chagasi infection and pharmacological induction of HO-1 by CoPP increases parasite load of infected macrophages and results in inhibition of TNF- α, IL-1β, IL-6, MCP-1, PGE2 and Nitrite levels upon LPS stimulation and simultaneously induced a higher IL-10/TNF-α ratio in peritoneal macrophages contributing to the anti inflammatory pathway that favors L. chagasi replication. Beyond this, we observed that bone marrow derived macrophages knockout to HO-1 gene have a significant low parasite load when infected by L. chagasi than their wild type counterparts. In summary, our findings suggest that this enzyme can play a deleterious role in VL and clarify one of the immunoregulatory mechanisms involved in VL.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:38Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:19:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf.txt: 243367 bytes, checksum: 9df9a4fb8bc7a3cd21d749f05648f537 (MD5) Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Gonçalo Moniz, Instituto de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC. OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos potencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos. RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5) produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço, detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas. OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO: Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e, consequentemente, não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes. OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada. METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão. RESULTADO: Observou-se uma variação na distribuição na carga parasitária do baço do mesmo animal. Avaliações histológicas (desorganização polpa branca, granulomas, periesplenite, células plasmáticas, e infiltração polimorfonuclear) mostraram uma variação na freqüência (granulomas) ou intensidade (perisplenite) no baço de 2 dos 6 cães. CONCLUSÃO: Conclui-se que a distribuição da carga parasitária e as alterações histológicas no baço de cães com LV mostram um certo grau de heterogeneidade. / INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFN- γ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ). RESULTS: There was a variation in parasitic load distribution in the spleen of the same animal. Histological evaluations (disorganized white pulp, granulomas, periesplenite, plasma cells, and polymorphonuclear infiltration) showed a variation in the frequency (granulomas) or intensity (perisplenite) in spleen in 2 of 6 dogs. CONCLUSION: Therefore, the distribution of the parasitic load and histological changes in dogs spleen with VL show a certain degree of heterogeneity.

Orientadora: Profª Drª Márcia Aparecida Sperança / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. / A leishmaniose visceral, causada pelos parasitas das espécies Leishmania infantum e Leishmania donovani, do Velho Mundo, e pela Leishmania infantum chagasi, do Novo Mundo, é uma doença infecciosa e letal se não for tratada. O número de casos desta doença está aumentando no Estado de São Paulo. Uma vez diagnosticada, o tratamento para a leishmaniose visceral tem efeitos colaterais importantes, além da ocorrência de parasitas resistentes aos medicamentos disponíveis. Sabe-se que algumas peptidases desempenham um papel importante na fisiologia e doença causada por parasitas do género Leishmania. A inibição específica destas enzimas pode constituir uma importante estratégia para a produção de potentes agentes antiparasitários. Em bactérias E. coli, inibidores de serino peptidases (ISPs) denominados ecotinas, têm sido descritos, sendo também identificados em espécies de Leishmania. A caracterização funcional da ISP1 e ISP2 de L. major mostrou o seu papel na formação de flagelo de promastigotas e na inibição da elastase de neutrófilos de hospedeiro vertebrado, respectivamente. Portanto, os objetivos deste projeto são a expressão e a purificação das proteínas ISP1 e ISP2 de L. i. chagasi (LcISP1 e LcISP2) recombinantes. A amplificação das sequências que codificam as LcISP1 e LcISP2 foi realizada por PCR a partir do DNA genômico, de L. i. chagasi extraído de uma estirpe de referência cedida pelo Laboratório Nacional de Referência de Espécies de Leishmania da Fiocruz, Rio de Janeiro. Os fragmentos de PCR foram clonados no vetor de expressão bacteriano pET28a e as proteínas recombinantes LcISP2 e LcISP1 foram obtidas na fração solúvel do extrato proteico bacteriano. Após expressão das proteínas recombinantes, elas foram purificadas por cromatografia de afinidade em níquel. / Visceral leishmaniasis, caused by the Old World parasites species Leishmania infantum and Leishmania donovani, and by the New World Leishmania infantum chagasi, is an infectious and lethal disease, if untreated. The number of cases of this disease is increasing in the State of São Paulo. Once diagnosed, treatment for visceral leishmaniasis has important side effects, besides occurrence of parasites resistant to the available drugs. It is known that some peptidases play an important role in physiology and disease caused by parasites of the genus Leishmania. The specific inhibition of these enzymes may constitute an important strategy for producing potent antiparasitic agents. In bacteria E. coli, inhibitors of serine peptidases (ISPs) called ecotins, have been described, being also identified in Leishmania species. Characterization of genes encoding ISP1 and ISP2 of L. major, showed its role in the promastigote flagellum formation and in the inhibition of vertebrate host neutrophil elastase, respectively. Therefore, the aims of this project are to produce L. i. chagasi ISP1 (LcISP1) and ISP2 (LcISP2) recombinant forms and to evaluate the its biochemical activity. Amplification of the LcISP1 and LcISP2 encoding sequences were performed by PCR from L. i. chagasi DNA extracted from a reference strain obtained from the Leishmania collection of the Leishmania National Reference Laboratory of the Instituto Oswaldo Cruz. PCR fragments were cloned into the pET28a bacterial expression vector and the recombinant LcISP1 and LcISP2 proteins were present in soluble bacterial extract fraction. After purification by niquel affinity chromatography, recombinant LcISP1 and LcISP2 proteins e were tested for biochemical activity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-04Bitstream added on 2014-06-13T18:53:46Z : No. of bitstreams: 1 zanette_mf_me_araca.pdf: 477117 bytes, checksum: 33b9b6dcc94d610c9edaafc75071b1a8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A importância do diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil reside no fato de que, dentre as estratégias de controle da doença indicadas pela Fundação Nacional de Saúde, encontra-se a eliminação do cão doméstico sorologicamente positivo. Desta forma, torna-se necessário o conhecimento da sensibilidade e da especificidade das provas sorológicas utilizadas para a correta identificação destes animais. Para avaliar o desempenho dos métodos sorológicos no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, foram determinadas e comparadas as características dos métodos de ELISA, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e imunocromatografia, adotando-se como padrão o método parasitológico. Para tanto, foram utilizados 50 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral e 45 cães sadios provenientes de área não endêmica para a doença. A RIFI revelou sensibilidade de 98% e especificidade de 91,1%, além de ótima concordância com o método parasitológico (Kappa = 0,893). Os métodos de ELISA e de imunocromatografia apresentaram boa concordância com o método parasitológico (coeficientes Kappa de 0,788 e 0,769, respectivamente) e valores de sensibilidade de 94% e 86% e especificidade de 84,4% e 91,1%, respectivamente. Com relação à ocorrência de reações cruzadas com leishmaniose visceral, das 14 amostras de soro positivas para doença de Chagas, nove (64,3%) foram consideradas positivas pela técnica de ELISA e seis (42,9%) pela RIFI, não se observando resultados positivos por imunocromatografia. Das 13 amostras de soros de animais portadores de erliquiose, uma (7,7%) apresentou resultado positivo por meio dos métodos de ELISA e de imunocromatografia. / The importance of canine visceral leishmaniasis diagnosis in Brazil is based on the fact that, according to the Ministry of Health, a seropositive dog must be culled. Thus, itþs important to know the sensitivity and specificity values of the methods employed for the diagnosis of the disease. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of canine leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA, indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunochromatographic test using the parasitological test as the gold standard. For this purposal, the study was carried out with a group of 50 naturally infected dogs from an endemic area and 45 healthy dogs from a non endemic area for visceral leishmaniasis. The IFAT was 98% sensitive and 91,1% specific, and showed a very good concordance with the parasitiological test (k = 0,893). The ELISA showed a sensitivity of 94% and specificity of 84,4% and when kappa index was analysed, a good concordance was obseved (k = 0,788). The immunochromatographic test was 86% sensisitive and 91,1% specific and showed a good concordance with the parasitiological test (k = 0,769). About the occurrence of cross reaction with visceral leishmaniasis, nine (64,3%) out of 14 positive samples for Chagas disease were positive by ELISA and six (42,9%) out of 14 were positive by IFAT, while the immunocromatographic test didn t yield any positive result. One (7,7%), out of 13 positive samples for ehrlichiosis, was positive by ELISA and immunocromatografic test. Five (83,3%) out of six positive samples for ehrlichiosis and babesiosis were positive by ELISA and three (50%) by immunocromatography, while IFAT didnþt yield any positive result. Five (50%) out of 10 positive samples for toxoplasmosis were positive by IFAT and one (10%) by immunocromatography.

Submitted by Marcio Emanuel Paixão Santos (marcio.santos@ucsal.br) on 2017-02-17T23:08:31Z No. of bitstreams: 1 CARREIRA, C.A..pdf: 2903543 bytes, checksum: 4e26432df50eaf861aa2bdb236c62a8c (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Emília Carvalho Ribeiro (maria.ribeiro@ucsal.br) on 2017-02-22T15:23:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CARREIRA, C.A..pdf: 2903543 bytes, checksum: 4e26432df50eaf861aa2bdb236c62a8c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T15:23:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CARREIRA, C.A..pdf: 2903543 bytes, checksum: 4e26432df50eaf861aa2bdb236c62a8c (MD5) Previous issue date: 2011-09-27 / No Brasil, a Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania chagasi, típica de regiões tropicais com condições ambientais propícias para a reprodução do agente transmissor, um pequeno inseto, o flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis. O presente trabalho trata de uma pesquisa realizada no Distrito de Monte Gordo, Município de Camaçari, Litoral Norte do Estado da Bahia, a qual tem por objetivo evidenciar e fazer conhecer a presença da referida patologia, correlacionando-a à devastação ambiental, em decorrência do crescimento urbano desordenado na localidade em questão. Com base em índices da evolução da LV, obtidos mediante pesquisas em banco de dados governamentais e aplicação de 200 questionários por amostragem intencional junto à população nativa, foram elaborados quadros e tabelas para melhor visualização da situação em que se encontra a região. Os mesmos serviram de suporte para a utilização de ferramentas de Geoprocessamento, a fim de pontuar a realidade da doença dentro do espaço territorial em pauta. A partir dos resultados encontrados, foram apresentadas propostas de solução para fins de subsídio com vistas à melhoria da qualidade de vida da população local. / In Brazil, the Visceral Leishmaniasis (VL) is a disease caused by a protozoan named Leishmania chagasi, typical from tropical areas under favourable environmental conditions to the transmitting agent reproduction, a insect, phlebotomine Lutzomyia longipalpis. Its a search that covers Monte Gordo District, Camaçari County, Northern Coast of Bahia - which aims to highlight the presence of this pathology, relating to the environmental destruction, due to urban sprawl in the locality concerned. Based on the index of the evolution of LV, obtained through the government database and 200 sample questionnaires collected from the local community, research tables and charts were created to more effectively visualize the situation that the region is facing. The research tables and charts will indicate the utilization of Geoprocessing tools intended to present the reality of this disease within the territorial space in question. Based on the results found, solutions were presented in order to improve the quality of life of the local community.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-09Bitstream added on 2014-06-13T20:16:24Z : No. of bitstreams: 1 marangoni_nr_me_araca.pdf: 326349 bytes, checksum: 7dc73435330e73a5c923b91991a9e1f1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral canina, causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi, é uma doença de grande ocorrência principalmente na América Latina. A caracterização das lesões sistêmicas associadas à infecção pelo parasita tem sido amplamente estudada, entretanto, poucos autores elucidam a patogenia na forma nervosa. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos envolvidos na inflamação do sistema nervoso central de cães naturalmente infectados por L. chagasi, amostras de liquor e plexo coróide foram colhidas e submetidas à zimografia para a detecção de metaloproteinases (MMPs). Amostras do plexo coróide e liquor de cães sadios foram avaliadas como controle. Os géis de zimograma foram analisados quanto à presença e atividade proteolítica das metaloproteinases -2 e -9. Formas inativas das proteases foram detectadas no plexo coróide, sendo que o Grupo de animais positivos não diferiu do negativo. No liquor foram encontradas formas ativas e inativas das MMPs-2 e -9 e a atividade proteolítica das mesmas diferiu entre os Grupos positivo e negativo. A MMP-2 teve maior detecção nos animais negativos e a MMP-9 nos positivos. O aumento da MMP- 9 no liquor dos cães doentes representa seu possível envolvimento na patogenia das lesões encefálicas ao ocasionarem o rompimento das barreiras hematoencefálica e/ou hematoliquórica, permitindo a passagem de células e proteínas envolvidas no processo inflamatório / Canine visceral leishmaniasis, caused by the protozoan Leishmania (Leishmania) chagasi, is a disease with high occurrence in Latin America. The characteristics of the systemic lesions related to the infection have been widely studied, but few studies clarify the disease on a neurological aspect. With the aim of a better understanding of the inflammation mechanisms within the central nervous system of dogs naturally infected by L. chagasi, some samples of cerebrospinal fluid and choroid plexus were collected and submitted to zymography to detect metalloproteinases (MMPs). Samples of choroid plexus and cerebrospinal fluid from healthy dogs were evaluated as control. The zymogram gels were analysed taking into account the presence and the proteolytic activity of metalloproteinase -2 and -9. Inactive forms of the proteases were detected in the choroid plexus, and the group of positive animals did not differ from negative ones. In the cerebrospinal fluid, active and inactive forms of MMP-2 and -9 were found, and their proteolytic activity differed between negative and positive groups. MMP-2 had higher detection in the negative animals and MMP-9 in the positive ones. The increasing of MMP-9 in the cerebrospinal fluid of infected dogs represents its possible involvement in the brain injuries, by causing the disruption of blood-cerebrospinal fluid barrier and/or blood-brain-barrier, allowing the passage of cells and proteins involved in inflammation process

Submitted by NATÁLIA POIANI HENRIQUES null (natihenriques@yahoo.com.br) on 2018-03-02T02:05:43Z No. of bitstreams: 1 HENRIQUES_NP_MS_PRUD_2017.pdf: 6694485 bytes, checksum: cd01092160e4ce028ff35a29fc2395ce (MD5) / Approved for entry into archive by Claudia Adriana Spindola null (claudia@fct.unesp.br) on 2018-03-05T11:27:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 henriques_np_me_prud.pdf: 6694485 bytes, checksum: cd01092160e4ce028ff35a29fc2395ce (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T11:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 henriques_np_me_prud.pdf: 6694485 bytes, checksum: cd01092160e4ce028ff35a29fc2395ce (MD5) Previous issue date: 2017-10-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária, não contagiosa, transmitida aos mamíferos através da picada de fêmeas de flebotomíneos, infectadas por protozoários do gênero Leishmania. Caracterizada por afecções dermatológicas, a doença apresenta atualmente três padrões epidemiológicos e ampla distribuição geográfica. A preocupação em se entender a doença e seus fatores determinantes não é recente, e dentre eles, é preciso considerar como se processa a produção do espaço e a relação da sociedade com a natureza, o que reforça a importância dos estudos geográficos. Os Parques Estaduais do Aguapeí (PEA) e do Rio do Peixe (PERP) e os municípios que os integram, compõem a área do presente estudo, cujo objetivo geral consistiu em analisar a relação entre o espaço geográfico e a LTA, de modo a contribuir com a gestão destes espaços especialmente protegidos. Para tanto, na revisão bibliográfica, retomamos os processos de ocupação da região e os estudos da doença no estado de São Paulo em diferentes contextos históricos. Consideramos as notificações dos casos humanos da doença de 1998 a 2016, a ocorrência de casos nas proximidades dos parques e as relações socioespaciais existentes no interior dos mesmos. Utilizamos armadilhas luminosas tipo CDC para a captura de espécies de flebotomíneos e analisamos os planos de manejo com vistas à identificação da abordagem epidemiológica. Assim, constatamos que a situação epidemiológica da doença na área de interesse caracteriza-se por casos esporádicos com evidências da ocorrência de um surto em alguns municípios do PEA no ano de 2015, quando observamos um incremento significativo na participação da área de estudo nos casos totais do Estado. Foram capturadas 12 espécies de flebotomíneos, das quais Bichromomyia flaviscutellata, Migonemyia migonei, Nyssomyia neivai, Nyssomyia whitmani e Pintomyia fischeri estão associadas à transmissão da LTA. Constatamos ainda que os planos de manejo atuais não contemplam o levantamento entomológico e não abordam aspectos epidemiológicos desta ou de outras doenças. Considerando os perfis epidemiológicos da LTA e as relações sociais que ocorrem no interior dos parques, ao trazermos para a reflexão a noção de risco e vulnerabilidade em saúde, propomos ações e destacamos medidas preventivas individuais e coletivas, contribuindo para a gestão destes espaços no tocante ao risco da transmissão desta doença. / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is a non-contagious infectious-parasitic disease transmitted to mammals through the bite of female sandflies infected by protozoa of the genus Leishmania. Characterized by dermatological conditions, the disease currently presents three epidemiological patterns and a wide geographic distribution. The concern to understand the disease and its determinants is not recent, and among them, it is necessary to consider how the production of space and the relation of society to nature are processed, which reinforces the importance of geographic studies. Aguapeí and Rio do Peixe State Parks and the municipalities that comprise them integrate the area of the present study, whose general aim was to analyze the relationship between geographic space and the ACL, in order to contribute with the management of these specially protected spaces. Therefore, in the bibliographic review, we return to the processes of occupation of the region and the studies of the disease in the state of São Paulo in different historical contexts. We consider the reports of the human cases of the disease from 1998 to 2016, the occurrence of cases in the vicinity of the parks and the socio-spatial relationships existing within them. We used CDC type light traps to capture sandflies species and analyzed management plans to identify the epidemiological approach. Thus, we verified that the epidemiological situation of the disease in the area of interest is characterized by sporadic cases with evidence of the occurrence of an outbreak in some municipalities of the Aguapeí State Park in the year 2015, when we observed a significant increase in the participation of the study area in the total cases of state. Twelve species of sandflies were captured, of which Bichromomyia flaviscutellata, Migonemyia migonei, Nyssomyia neivai, Nyssomyia whitmani and Pintomyia fischeri are associated with the transmission of ACL. We also found that the current management plans do not contemplate the entomological survey and do not address the epidemiological aspects of this or other diseases. Considering the epidemiological profiles of the ACL and the social relations that occur within the parks, in bringing to the reflection the notion of risk and vulnerability in health, we propose actions and highlight individual and collective preventive measures, contributing to the management of these spaces in relation to the transmission of this disease. / FAPESP: 2012/23959-9

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1379407 bytes, checksum: d5005cc4450b0eb6d68a115e4f3fa732 (MD5) Previous issue date: 2005-02-03 / The objective of this study was to investigate the extracelular matrix changes in skin of dogs naturally infected by Leishmania chagasi. Fourty dogs were selected naturally infected with L. chagasi come from São Luis-MA, contained in agreement with the clinical symptoms, 20 symptomatic dogs with cutaneous lesions (group I), 20 oligosymptomatic with cutaneous lesions (group II) with positive serologically for Leishmania by Indirect Immunofluorescence Assay (IFAT) and by enzyme-linked immunosorbence assay (ELISA), and 20 dogs negative for leishmaniasis (group III), dogs not infected. Skin biopsies were accomplished for analyses of the histological alterations by technique of Hematoxylin and Eosin (HE), analyses of the collagen system for technical Picrus Sirius Red and Reticulin of Gordon & Sweets. The elastic system was evaluated by the technique of Verhoeff. Indirect Immunoperoxidase for detection of Leishmania in the cutaneous tissue. The fibers adhesive fibronectin (FN) and laminin (LN) they were detected by immunohistochemical technique with the use of the monoclonal antibodies anti-fibronectin and anti-laminin, respectively. The averages of the reactivity serologycal of the animals measure for ELISA were: 0,44 ± 0,21, for the group I; 0,23 ± 0,08 for the group II and 0,037 ± 0,007, group III, with cutoff=0,09, results were significant statistically. The largest frequencies of clinical signs presented by the dogs of the group I and II were: weight loss, generalized alopecia, dermatitis, located and widespread ulcers, opaque coat and onychogryphosis, clinical signs have been objectives of great discussions in the literature, observed so much in natural infections as in experimental. The histological alterations observed in the skin of the dogs of the groups I and II were hiperqueratose that varied of accentuated at discreet, acantosys generally accentuated, vacuolization of the basal membrane. In the derme it was observed an infiltrated inflammatory diffuse constituted mainly by neutrophils, lynphocytes, macrophages and in some cases, mast cell associated to the presence of the parasite. It was proven the prevalence of the collagen of the type III in the skin of the dogs of the group I (79,5 ± 10,0), while in the animals of the group II the collagens of the type I and of the type III was observed in variable proportions, results considered statistically significant. The presence of the collagen of the type III was confirmed by the technique of Reticulin of Gordon & Sweets. The elastic fibers of the groups I and II seemed more disforms and thicken when compared the one of the group III. The expression of the fibronectin and of the laminin it was reduced in the skin of the infected animals, being associated to the presence of parasites. These results demonstrate the intense degradation of the extracelular matrix in the skin caused by Leishmania. / O objetivo deste estudo foi investigar as alterações da matriz extracelular em pele de cães naturalmente infectados por Leishmania chagasi. Foram selecionados 40 cães naturalmente infectados com L. chagasi provenientes de São Luís-MA, agrupados de acordo com a sintomatologia clínica: 20 cães sintomáticos com lesões cutâneas (Grupo I), 20 oligossintomáticos com lesões cutâneas (grupo II) com sorologia positiva para Leishmania pela RIFI e por ELISA e 20 cães sorologicamente negativos para leishmaniose (grupo III), não infectados. Foram realizadas biopsias de pele para análises das alterações histológicas através da técnica de Hematoxilina e Eosina (HE), análises do sistema colágeno pela técnica Picrus Sirius Red e Reticulina de Gordon & Sweets. O sistema elástico foi avaliado pela técnica de Verhoeff. Utililizou-se a Imunoperoxidase Indireta para detecção de Leishmania no tecido cutâneo. As fibras adesivas fibronectina (FN) e laminina (LN) foram detectadas através da técnica de imunohistoquímica com o uso dos anticorpos monoclonais anti-fibronectina e antilaminina, respectivamente. As médias da reatividade sorológica dos animais medida pelo ELISA foram: 0,44 ± 0,21, para o grupo I; 0,23 ± 0,08 para o grupo II e 0,037 ± 0,007, grupo III, com cut-off=0,09, resultados estatisticamente significativos. As maiores freqüências de sinais clínicos apresentados pelos cães do grupo I e II foram: emagrecimento, alopecia generalizada, dermatite furfurácea, úlceras localizadas e generalizadas, pelagem opaca e onicogrifose, sendo que estes sinais clínicos têm sido alvos de grandes discussões na literatura, observados tanto em infecções naturais como em experimentais. As alterações histológicas observadas na pele dos cães dos grupos I e II foram hiperqueratose que variava de acentuada a discreta, acantose geralmente acentuada, vacuolização da camada basal. Na derme observou-se um infiltrado inflamatório difuso constituído principalmente por neutrófilos, linfócitos, macrófagos e em alguns casos, mastócitos associados à presença do parasita. Comprovou-se a predominância do colágeno do tipo III na pele dos cães do grupo I (79,5 ± 10,0), enquanto nos animais do grupo II os colágenos do tipo I e do tipo III foram observados em proporções variáveis, resultados considerados estatisticamente significativos. A presença do colágeno do tipo III foi confirmada pela técnica da Reticulina de Gordon & Sweets. As fibras elásticas dos grupos I e II apresentavam-se mais desuniformes e espessas quando comparadas as do grupo III. A expressão da fibronectina e da laminina foi reduzida na pele dos animais infectados, estando associada à presença de parasitas. Estes resultados demonstram a intensa degradação dos constituintes da MEC da pele causadas por Leishmania.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1442239 bytes, checksum: 5f0041bc266aa2b219384708dc4dd876 (MD5) Previous issue date: 2012-11-20 / In response to an infection, blood cells such as neutrophils produce defensins within minutes to two hours to aid pathogens lysis and stimulate chemotaxis, reaching peak levels in the body in 24 hours. These peptides can also be produced without any stimulus by epithelial cells of the integumentary system. The aim of this work was to study the expression of β-defensins (cBD102 and cBD103) of canine skin diagnosed with canine visceral leishmaniasis (CVL). There were selected 43 skin samples from dogs positive to CVL and healthy, they were included in paraffin blocks and divided into three groups: I desquamative dermatitis (DD) with 16 blocks, II ulcerative dermatitis (UD) 21 blocks and the control group (6 blocks without canine skin problems). It was used the indirect immunoperoxidase technique (IIP) to confirm the LVC diagnosis and the identification of β-defensins, using human primary antibodies (hBD-2 and hBD-3, SIGMA®). The experimental delineation was completely casualized, with a confidence level of 0.95. Note that there was difference (p = 0.03) in the immunostaining intensity between groups, showing higher marcation intensity with cBD102 and cBD103 in the epidermis of the control group compared with DD and DU groups. In the dermis there was difference (p = 0.001) of the two β-defensins studied, being the cBD103 expression higher than the cBD102. This study is the first one relating to the immunological interaction of the extension and intensity expression between the β-defensin cBD102 and cBD103 and canine visceral leishmaniasis in the DD and DU dermatological standards, assessed by immunohistochemistry. / Em resposta a uma infeção as defensinas são produzidas em questão de minutos ou até 2 horas por células sanguíneas como neutrófilos, para auxiliar a lise de patógenos e estimular a quimiotaxia, alcançando níveis máximos no organismo em 24 horas. Também estes peptídeos podem ser produzidos sem estimulo algum pelas células epiteliais do sistema tegumentário. Com base no exposto anteriormente, o objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de β-defensinas (cBD102 e cBD103) de pele de cães diagnosticados com leishmaniose visceral canina (LVC). Para tal, foram selecionados 43 amostras de pele entre cães acometidos por LVC e sadios incluídas em blocos de parafina, distribuídos em 3 grupos: I com dermatite descamativa (DD) por 16 blocos, II dermatite ulcerativa (DU) 21 blocos e o grupo controle (6 blocos de cães sem problemas dermatológicos). Foi empregada a técnica de imunoperoxidase indireta (IPI) para a confirmação do diagnóstico de LVC e identificação de β-defensinas, usando os anticorpos primários humanos (hBD102 e hBD103, SIGMA®). O delineamento foi inteiramente casualizado, adotando 0,05% de probabilidade para o erro Tipo I. Nota-se que houve diferença (p=0,003) na intensidade da imunomarcação entre os grupos, observando-se maior intensidade de marcação da cBD102 e cBD103 no grupo controle quando comparados com os grupos DD e DU. Na derme houve diferença (p=0,001) entre a expressão das duas β-defensinas estudadas, sendo a expressão de cBD103 superior a de cBD102. O presente estudo é o primeiro referente à interação imunológica da expressão de extensão e intensidade entre a β-defensina cBD102 e cBD103 e a leishmaniose visceral canina, nos padrões dermatológicos DD e DU, avaliados pela técnica de imunoistoquímica.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1544318 bytes, checksum: 458a87e82a4f75c2f8b02abcdb7d9ed9 (MD5) Previous issue date: 2009-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The yeast Kluyveromyces lactis has a potential applicability as a host in biotechnological production of heterologous recombinant proteins of biotechnological interest. In this context the objective of this work was to express the protein of Leishmania major GDPase for biotechnology applied to human and canine leishmaniasis. The GDPase of L. major belongs to the family of E-NTPDases or apirases, proteins involved in infectivity and virulence of parasites. For a system of expression and secretion of heterologous proteins in K. lactis, the technique of polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify a sequence of 2073 bp covering the complete coding region of the GDPase "of L. major, which is inserted into the amplicon plasmid pKLAC1 sites in Sal I and Bgl II.The construction pKLAC1- GDPase was confirmed by PCR, linearized by the enzyme Ahd I and used for transformation of wild strain CBS 2359. The transformants were selected in YCB medium containing 5 mM acetamide induced in batch and in YPGal. Extract and supernatant of these cultures were analyzed by SDS-PAGE and Western blot using a polyclonal antiserum anti-GDPase of L. major. The analysis revealed a single protein of approximately 120 kDa in the wild strains and transformants of K. lactis. Perform a search in GenBank are two homologous genes in the genome of yeast: KlGDA1 and KlYND1que may explain the cross-reactivity. The results point to the failure to obtain transformants producing GDPase of L. major, probably due not to reconstitute the promoter PLAC4 that would direct the expression of the gene of GDPase. But that raises the chances of a wild strain to be tested as to induce the production of antibodies against species of the genus Leishmania and signal that the system contains flaws that compromise its use due to the dependence of reconstitution of the promoter PLAC4. / A levedura Kluyveromyces lactis apresenta potencial aplicabilidade biotecnológica como hospedeira na produção heteróloga de proteínas recombinantes de interesse biotecnológico. Neste contexto o objetivo deste trabalho foi expressar a proteína GDPase de Leishmania major em K. lactis para fins biotecnológicos aplicados às leishmanioses humana e canina. A GDPase de L. major pertence à família das E-NTPDases ou apirases, proteínas envolvidas na infectividade e virulência de parasitos. A técnica da Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) foi utilizada para amplificar uma seqüência de 2073 pb referente a região codificante completa da GDPase de L. major, sendo este amplicon inserido no plasmídeo pKLAC1 nos sítios Sal I e Bgl II. A construção pKLAC1-GDPase foi confirmada por PCR, linearizada pela enzima Ahd I e utilizada para transformação da cepa selvagem de K. lactis CBS 2359. Os transformantes foram selecionados em meio YCB contendo 5 mM de acetamida e cultivados sob condições de indução em batelada em meio YPGal. Extrato e sobrenadante destas culturas foram analisados por SDS-PAGE e Western Blot utilizando um anti-soro policlonal anti-GDPase de L. major. As análises revelaram uma única proteína de cerca de 120 kDa nas cepas selvagem e transformantes de K. lactis. Pesquisa no Genbank revelou a presença de dois genes homólogos a GDPase no genoma da levedura: KlGDA1 e KlYND1que podem explicar a reatividade cruzada. Os resultados demonstram que os transformantes obtidos não produzem a GDPase de L. major, provavelmente devido a não reconstituição do promotor PLAC4 que dirigiria a expressão do gene da GDPase. Porém levanta as hipóteses de que a cepa selvagem possa ser testada quanto à indução da produção de anticorpos contra espécies do gênero Leishmania e de sinalizar que o sistema utilizado contém falhas que comprometem seu uso, devido à dependência de reconstituição do promotor PLAC4.