Cell surface saccharides are involved in a variety of essential biological events. Fluorescent sensors for saccharides can be used for detection, diagnosis, analysis and monitoring of pathological processes. The boronic acid functional group is known to bind strongly and reversibly to compounds with diol groups, which are commonly found on saccharides. Sensors that have been developed for the purpose of saccharide recognition have shown great potential. However, they are very hydrophobic and this lack of essential water-solubility makes them useful in biological applications. The first section of this dissertation details the process of developing water-soluble saccharide sensors that change fluorescent properties upon binding to saccharides. The second section of the dissertation focuses on the development of DNA-minor groove binders as antiparasitical agents. Parasitical diseases comprise some of the world’s largest health problems and yet current medication and treatments for these parasitical diseases are often difficult to administer, costly to the patients, and have disruptive side effects. Worse yet, these parasites are developing drug resistance, thus creating an urgent need for new treatments. Dicationic molecules constitute a class of antimicrobial drug candidates that possess high activity against various parasites. The second section details the development of a series of di-cationic agents that were then screened in in vitro activities against parasitical species.

Submitted by LOURDES APARECIDA ZAMPIERI D'ANDREA null (zampieri@muranet.com.br) on 2018-01-08T08:37:28Z No. of bitstreams: 1 Tese -D ANDREA, Lourdes Aparecida Zampieri.pdf: 8216517 bytes, checksum: cc8882ddd2cecf7137d25aa22f866c59 (MD5) / Approved for entry into archive by Claudia Adriana Spindola null (claudia@fct.unesp.br) on 2018-01-08T10:39:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dandrea_laz_dr_prud.pdf: 8216517 bytes, checksum: cc8882ddd2cecf7137d25aa22f866c59 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-08T10:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dandrea_laz_dr_prud.pdf: 8216517 bytes, checksum: cc8882ddd2cecf7137d25aa22f866c59 (MD5) Previous issue date: 2017-08-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A questão central desenvolvida na presente tese é uma abordagem integrada de elementos que envolvem as ações de vigilância e o controle da leishmaniose visceral (LV), relacionando dados e análise do mundo microbiológico ao conjunto de informações espaciais existentes sobre o tema. Teve como principal objetivo, avaliar a distribuição espacial dos casos humanos com LV notificados e relacioná-los com a infecção na população canina nos municípios pertencentes à Rede Regional de Atenção à Saúde – RRAS 11 de Presidente Prudente – SP e as rotas de dispersão do agente patógeno. Para isto, foram utilizados conhecimentos geoepidemiológicos e de ferramentas de geoprocessamento e análise espacial para analisar as rotas de disseminação dos agentes e da infecção da doença na população canina na área urbana e rural. O estudo foi desenvolvido nos 45 municípios da macrorregião de Presidente Prudente – SP, com base populacional, no delineamento transversal e na coleta de dados in locu. Para entender o contexto da área foi realizado: levantamento de dados secundários, que constitui a criação de bases cartográficas que tenham sido elencadas como explicativas do fenômeno estudado (LV), com base na bibliografia sobre o tema; identificação das espécies de Leishmania circulantes na população canina, discutindo-se fatores de risco individuais para soropositividade de Leishmania em cães em áreas urbanas e rurais, bem como avaliando a prevalência de LV canina em assentamentos rurais da Região de Saúde de Presidente Prudente – SP. Também foi estratificado áreas para LV humana e canina, segundo o risco epidemiológico, com base em mapas temáticos, análises espaciais e proposto um modelo preditivo de rotas de dispersão e fluxos de transmissão da LV na população humana e canina. Com base nesses resultados, foi possível identificar na RRAS 11 de Presidente Prudente três diferentes tipos de centros de dispersão da LV: core, eixo e borda e a necessidade de a política pública repensar o Programa de Vigilância e Controle da LV e estabelecer estratégias diferenciadas para cada tipo de centro de dispersão, visando a quebra da cadeia de transmissão da doença e/ou o retardo do processo de dispersão em território Paulista. / The central issue developed in this thesis is an integrated approach of elements that involve actions of surveillance and controlling of the visceral leishmaniasis (VL), relating data and analysis of the microbiological world to the set of spatial information on this subject. The main objective was to evaluate the spatial distribution of human cases with reported VL and to relate them to infection in the canine population in the municipalities belonging to the Regional Network of Health Care - RRAS 11 of Presidente Prudente - SP and the pathogen's routes of dispersion. Geoepidemiological knowledge, geoprocessing tools and spatial analysis were used to analyze the agents' routes of dissemination and the disease's infection in the canine population in urban and rural areas. The study was carried out in the 45 municipalities of macroregion of Presidente Prudente - SP, with population base, in the cross - sectional design and in locu data collection. To understand the context of the area, were carried out: secondary data collection, for the creation of cartographic bases that have been listed as explanatory of the phenomenon studied (VL), based on the bibliography on the subject; identification of the circulating Leishmania species in the canine population, discussing individual risk factors for Leishmania seropositivity in dogs in urban and rural areas, as well as evaluating the prevalence of canine VL in rural settlements of the Health Region of Presidente Prudente – SP. Areas for human and canine VL were also stratified, according to the epidemiological risk, based on thematic maps and spatial analyzes, and a predictive model of dispersion routes and VL transmission flows in the human population and Canine was proposed. Based on these results, in RRAS 11 of Presidente Prudente were identified three different types of VL dispersion centers: core, axis and border, and the need for public policy to rethink the VL Surveillance and Control Program and to establish differentiated strategies for each type of dispersion center, aiming at breaking the chain of transmission of the disease and / or delaying the dispersal process in the Sao Paulo state area.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 598716 bytes, checksum: d6fd3f536714334d84a8944a61d08272 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva 1912) has wide distribution in the Brazilian territory and is incriminated as transmitting the Leishmania (Leishmania) infantum chagasi (Cunha & Chagas 1937). Considering the inconsistency of information about the possibility of L. (L.) longipalpis to be a complex or not of species for Brazilian populations, and that information on the biology of this phlebotomine sand fly are still insufficient for the success of the shares to control the LVA, this paper aims to contribute to the knowledge of some Brazilian populations of L. (L.) longipalpis of Teresina (PI), Jequié (BA), and Sobral Massapé (CE) (the latter two were considered four populations, according to the pattern of abdominal spots in males), studying the morphology and morphometry of specimens adult males, and the eating habits of females. In morphology and morphometry were considered 21 characters, distributed by the head, thorax and abdomen, analyzed by ANOVA and Student-Newman-Keuls (SNK). For the knowledge of the blood sources of females the ELISA test was applyied. Data obtained through morphology revealed, among the six populations analyzed, individuals with one par and two pairs of abdominal spots, within the predominance of "one-pair" males. The most frequent palpal formula was 1.2.4.3.5; other two formulae were also observed, although in a few specimens, 1.4.2.3.5 and 1. (2.4) .3.5. In morphometric analysis, through SNK test, were found unions, disjunctions and intersections among populations analyzed. Based on the analysis of six characters, could observe that the Jequié and Teresina populations produced an individual set from those formed by the Ceará populations. In population of Jequié, when compared to population of Ceará (Massapê and Sobral), it can be observed that 79 to 95% of the characters revealed significant differences. By ANOVA, at the crossroads between the population of Ceará, few significant differences were detected. The dendogram created by TFPGA, revealed a split between the Ceará and others populations, and verified that Sobral populations, S1P and S2P, were in isolated arms. Values of bootstrap showed that the populations of Ceará (S1P, S2P, M1P and M2P) in Teresina/Jequié branches are isolated, with a confidence level of 100%. The populations of Sobral, S1P and S2P, have become isolated arms, with 53% of bootstrap. About the blood feeeding sources studies, 609 females were tested, obtaining an index of general positivity of 40.72%. In the municipality of Jequié, the females showed greater positive for the anti-serum of bird, followed by the human, dog and opossum. In Teresina, was found the highest rate of positivity, although with reactivity only for the anti- serum from bird (higher percentage), followed by the dog anti-serum. In sand flies from Sobral, once again, bird anti- serum showed a higher percentage of positivity, followed by dog and opossum. In specimens from Massapê, it was found the greatest diversity of blood sources combinations, being the only population who got reactivity for all anti-sera. Also, in Teresina, Jequié and Sobral, females were identified with reactivity for more than one anti-serum. / Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva, 1912) possui ampla distribuição no território brasileiro e está incriminada como transmissora da Leishmania (Leishmania) infantum chagasi (Cunha & Chagas 1937). Considerando a discordância de informações quanto à hipótese de L. (L.) longipalpis ser ou não um complexo de espécies em relação às populações brasileiras, e que informações sobre a biologia deste flebotomíneo, ainda, são insuficientes para o sucesso das ações de controle da LVA, o objetivo deste trabalho foi o de contribuir com o conhecimento de algumas populações brasileiras de L. (L.) longipalpis de Teresina (PI), Jequié (BA), Sobral e Massapê (CE) (as duas últimas foram consideradas quatro populações, de acordo com o padrão de manchas abdominais nos machos), estudando a morfologia e morfometria de espécimes adultos machos, e os hábitos alimentares das fêmeas. Na morfologia e morfometria foram considerados 21 caracteres, distribuídos pela cabeça, tórax e abdome, analisados pelos testes ANOVA e Student-Newman- Keuls (SNK) e para conhecimento das fontes alimentares utilizou-se a técnica de ELISA. Os dados obtidos através da morfologia revelaram, nas seis populações analisadas, exemplares com um par e dois pares de manchas abdominais, havendo sempre a predominância de machos da forma um- par . A fórmula palpal mais freqüente foi 1.2.4.3.5; outras duas fórmulas, também, foram observadas, ainda que em poucos exemplares, 1.4.2.3.5 e 1.(2.4).3.5. Na análise morfométrica, através do teste de SNK foram encontradas uniões, disjunções e intersecções entre as populações analisadas. Baseado na análise de seis caracteres foi possível observar que as populações de Jequié e Teresina formavam um conjunto disjunto daqueles formados pelas populações do Ceará. Na população de Jequié, quando comparada às populações do Ceará (Massapê e Sobral), pode-se observar que 79 a 95% dos caracteres revelaram diferenças significativas. Através da ANOVA, no cruzamento entre as populações do Ceará, foram detectadas poucas diferenças significativas. O dendograma gerado a partir do programa TFPGA, revelou separação entre as populações do Ceará e as demais, bem como evidenciou as populações de Sobral, S1P e S2P, em ramos isolados. Valores de bootstrap demonstraram que as populações do Ceará (S1P, S2P, M1P e M2P) e Teresina/ Jequié constituem ramos isolados, com um nível de confiança de 100%. As populações de Sobral, S1P e S2P se apresentaram como ramos isolados, com bootstrap de 53%. Com relação aos estudos das fontes alimentares, foram testadas 609 fêmeas, obtendo-se um índice geral de positividade de 40,72%. No município de Jequié, as fêmeas revelaram maior positividade para o anti-soro de ave, seguido de humano, cão e de gambá. Em Teresina obteve-se o mais alto índice de positividade, embora com reatividade, apenas, para o anti-soro de ave (maior percentual), seguido do anti- soro de cão. Nos flebotomíneos procedentes de Sobral, mais uma vez, o anti-soro de ave revelou maior percentual de positividade, seguido de cão e gambá. Nos espécimes procedentes de Massapê foi encontrada a maior diversidade de combinações de fontes alimentares, sendo esta a única população que obteve reatividade para todos os anti-soros. Também, em Teresina, Jequié e Sobral, foram identificadas fêmeas com reatividade para mais de um anti-soro.

Orientador: Mary Marcondes Feitosa / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Banca: Aparecido Antonio Camacho / Resumo: A importância do diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil reside no fato de que, dentre as estratégias de controle da doença indicadas pela Fundação Nacional de Saúde, encontra-se a eliminação do cão doméstico sorologicamente positivo. Desta forma, torna-se necessário o conhecimento da sensibilidade e da especificidade das provas sorológicas utilizadas para a correta identificação destes animais. Para avaliar o desempenho dos métodos sorológicos no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, foram determinadas e comparadas as características dos métodos de ELISA, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e imunocromatografia, adotando-se como padrão o método parasitológico. Para tanto, foram utilizados 50 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral e 45 cães sadios provenientes de área não endêmica para a doença. A RIFI revelou sensibilidade de 98% e especificidade de 91,1%, além de ótima concordância com o método parasitológico (Kappa = 0,893). Os métodos de ELISA e de imunocromatografia apresentaram boa concordância com o método parasitológico (coeficientes Kappa de 0,788 e 0,769, respectivamente) e valores de sensibilidade de 94% e 86% e especificidade de 84,4% e 91,1%, respectivamente. Com relação à ocorrência de reações cruzadas com leishmaniose visceral, das 14 amostras de soro positivas para doença de Chagas, nove (64,3%) foram consideradas positivas pela técnica de ELISA e seis (42,9%) pela RIFI, não se observando resultados positivos por imunocromatografia. Das 13 amostras de soros de animais portadores de erliquiose, uma (7,7%) apresentou resultado positivo por meio dos métodos de ELISA e de imunocromatografia. / Abstract: The importance of canine visceral leishmaniasis diagnosis in Brazil is based on the fact that, according to the Ministry of Health, a seropositive dog must be culled. Thus, itþs important to know the sensitivity and specificity values of the methods employed for the diagnosis of the disease. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of canine leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA, indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunochromatographic test using the parasitological test as the gold standard. For this purposal, the study was carried out with a group of 50 naturally infected dogs from an endemic area and 45 healthy dogs from a non endemic area for visceral leishmaniasis. The IFAT was 98% sensitive and 91,1% specific, and showed a very good concordance with the parasitiological test (k = 0,893). The ELISA showed a sensitivity of 94% and specificity of 84,4% and when kappa index was analysed, a good concordance was obseved (k = 0,788). The immunochromatographic test was 86% sensisitive and 91,1% specific and showed a good concordance with the parasitiological test (k = 0,769). About the occurrence of cross reaction with visceral leishmaniasis, nine (64,3%) out of 14 positive samples for Chagas’ disease were positive by ELISA and six (42,9%) out of 14 were positive by IFAT, while the immunocromatographic test didn’t yield any positive result. One (7,7%), out of 13 positive samples for ehrlichiosis, was positive by ELISA and immunocromatografic test. Five (83,3%) out of six positive samples for ehrlichiosis and babesiosis were positive by ELISA and three (50%) by immunocromatography, while IFAT didnþt yield any positive result. Five (50%) out of 10 positive samples for toxoplasmosis were positive by IFAT and one (10%) by immunocromatography. / Mestre

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-01-30T13:39:15Z No. of bitstreams: 1 GiselleSCO_DISSERT.pdf: 1058104 bytes, checksum: 89fd1032b2b20bfc50ba7056a41faafa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T13:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GiselleSCO_DISSERT.pdf: 1058104 bytes, checksum: 89fd1032b2b20bfc50ba7056a41faafa (MD5) Previous issue date: 2016-01-15 / The visceral leishmaniasis (VL) is an infectious disease and a zoonosis. It is still considered a public health challenge, due to the frequency and mortality caused on the population. The overall objective is to develop an instrument for prevention of Visceral Leishmaniasis in the context of the Family Health Strategy, analyzing the knowledge of health professionals. The specific objectives are characterizing the profile of health professionals on the Family Health Strategy Program; developing an instrument to assess the interest of Health Professionals in the Family Health Strategy Program (FHS) on measures to prevent visceral leishmaniasis in their community; identifying the influencing factors which come into play when those professionals take actions to prevent visceral leishmaniasis; identifying areas of greatest prevalence of visceral leishmaniasis in Mossoró and evaluating the influence of health professionals’ knowledge on the prevalence of visceral leishmaniasis. It is an exploratory, descriptive and quantitative research which was carried out in 30 Basic Health Centers (BHC) of the Family Health Strategy Program in the urban area in the town of Mossoró-RN. The population were health professionals from the FHSP, and the sample composed by 227 elements. Two questionnaires have been administered, one related to knowledge on VL and the other one for identifying the factors that guide health professionals. Data were expressed on standard average and deviation, minimum, maximum, simple frequencies and percentages obtained through the software Statistical Package for Social Science (SPSS) version 20.0. The instrument was developed and submitted to content validation with application of Kappa Index and Content Validity Index. Then, the instrument was applied to health professionals. Being validated with 20 items, divided into five factors such as the work process, environment, socio-personal difficulties, financing, prevention and control. The instrument is suitable and can be used for research in primary health care regarding to prevention and control of visceral leishmaniasis, particularly in endemic areas. Regarding to the knowledge on VL, it was identified that health professionals know the animals that may be affected, enabling an increase in the identification of cases of this disease (OR: 2.74; IC95%=1.17 – 6.41). Knowing the symptoms of the disease in animals is the key to realize its existence (OR: 2.75; IC95%=1.09 – 6.89). In addition, the fact of knowing prevention is a contributing factor to detect the disease in the regions (OR: 2.38; IC95%=1.07 – 5.31). Regarding the transmission times of the disease, it was most relevant to a greater detection of VL cases (OR: 2.75; IC95%=1.24 – 6.05). In conducting an active search for HVL and Canine Visceral Leishmaniasis (CVL), there is a greater risk of finding positive cases of the disease (OR: 2.57; IC95%=1.13 – 5.61). After the crude analysis of the O.R., the adjusted data revealed that these variables are more important. The health professionals have a limited knowledge about the VL, there are still gaps to be considered, especially on the prevention and control of disease in the researched areas. Thus, requiring an ongoing training and implementation of incisive governmental actions / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença infecciosa e uma zoonose. Considerada um desafio à saúde pública pela frequência e morbimortalidade ocasionada. Objetiva-se desenvolver um instrumento para prevenção da Leishmaniose Visceral no âmbito da Estratégia de Saúde da Família, analisando o conhecimento dos profissionais de saúde. Mais especificamente, caracterizar o perfil dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família; elaborar um instrumento que avalie o interesse dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família (ESF) sobre as ações de prevenção da Leishmaniose Visceral da sua comunidade; identificar os fatores influenciadores dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família (ESF) sobre as ações de prevenção da Leishmaniose Visceral; avaliar a influência do conhecimento dos Profissionais de Saúde da Estratégia de Saúde da Família (ESF) sobre a prevalência de Leishmaniose Visceral; realizar um levantamento das áreas de maior prevalência da Leishmaniose Visceral em Mossoró, Rio Grande do Norte. Trata-se de uma pesquisa exploratória, descritiva e quantitativa. Foi realizada em 30 Unidades Básicas de Saúde (UBS) da ESF na zona urbana, no Município de Mossoró-RN. A população foi composta pelos profissionais de saúde das ESF, sendo a amostra composta por 227 elementos. Foram aplicados dois questionários, um relacionado ao conhecimento sobre LV e outro para identificação de fatores que norteiam os profissionais de saúde. Os dados foram expressos em média e desvio padrão, valores mínimos, máximos, frequência simples e porcentagem obtidos através do programa (SPSS) versão 20.0. O instrumento foi desenvolvido, sendo submetido à validação de conteúdo com aplicação do Índice Kappa e Índice de Validade de Conteúdo. Em seguida, foi aplicado o instrumento aos profissionais de saúde. Ficando validado com 20 itens, subdividido em cinco fatores caracterizados em processo de trabalho, ambiente, dificuldades sócios pessoais, financiamento, prevenção e controle. O instrumento encontra-se adequado, podendo ser utilizado em pesquisas na atenção primária de saúde em relação à prevenção e controle da Leishmaniose visceral, principalmente em áreas endêmicas. Em relação ao conhecimento da LV, foi identificado que os profissionais de saúde conhecem os animais que podem ser acometidos, possibilitando um aumento na identificação de casos da doença (OR: 2,74; IC95%=1,17 – 6,41). O conhecimento da sintomatologia da doença no animal é um determinante para perceber a sua existência (OR: 2,75; IC95%=1,09 – 6,89). Além disso, o fato de conhecer a prevenção é um fator que contribui para detectar a doença nas regiões. (OR: 2,38; IC95%=1,07 – 5,31). Em relação aos horários de transmissão da doença foi relevante para uma maior detecção de casos de LV (OR: 2,75; IC 95%1,24 – 6,05). Na realização de busca ativa de LVH e Leishmaniose Visceral Canina (LVC), existe um maior risco de encontrar casos positivos da doença (OR: 2,57; IC95%=1,13 – 5,61). Após a análise bruta do OR, o ajustado revelou que essas variáveis são mais importantes. Os profissionais de saúde possuem um conhecimento restrito acerca da LV, existindo ainda lacunas a serem consideradas, principalmente sobre a prevenção e controle da doença nas áreas estudadas, necessitando assim, de capacitação continuada por parte das ações governamentais contudentes / 2017-01-27

Submitted by Beatriz Batista Trigo (beatrizbtrigo@hotmail.com) on 2018-08-21T18:41:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Beatriz Batista Trigo.pdf: 1261932 bytes, checksum: 24b3472ef232d399d51c17b258886009 (MD5) / Approved for entry into archive by Ederson Vasconcelos Pereira null (edersonpereira@fmva.unesp.br) on 2018-08-21T19:12:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 trigo_bb_me_araca_int.pdf: 1261932 bytes, checksum: 24b3472ef232d399d51c17b258886009 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T19:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 trigo_bb_me_araca_int.pdf: 1261932 bytes, checksum: 24b3472ef232d399d51c17b258886009 (MD5) Previous issue date: 2018-08-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As diferentes espécies de Leishmania causam amplo espectro de manifestações clínicas sendo genericamente classificadas em leishmaniose cutanêa (LC), mucocutânea (LMC) e leishmaniose visceral (LV), acometendo tanto crianças como adultos, e várias espécies de mamíferos. Para a identificação da espécie faz-se necessário o isolamento do protozoário a partir de amostras biológicas e o diagnóstico em laboratórios de referência. Atualmente, o “padrão ouro” para identificação de cepas de Leishmania spp. em estudos epidemiológicos é o multilocus enzyme electrophoresis (MLEE), a qual é uma técnica laboriosa e de aplicação restrita à amostras em cultivo. As técnicas baseadas na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) têm sido bastante utilizadas para caracterizar e diferenciar as espécies de Leishmania. Tal diferenciação pode ser importante para a determinação do tratamento correto aos pacientes, diminuindo a letalidade, e para estudos epidemiológicos com o mapeamento do padrão de distribuição das leishmanioses, auxiliando assim na priorização das medidas de controle desta zoonose. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar in silico os oligonucleotídeos iniciadores já utilizados no diagnóstico molecular e validar, por PCR em Tempo Real, sua especificidade em cepas de referência cultivadas in vitro. / Different species of Leishmania cause a wide spectrum of clinical manifestations which are generically classified as cutaneous leishmaniasis (CL), mucocutaneous (MCL) and visceral leishmaniasis (VL), affecting children and adults, as well as several species of mammals. Species identification requires isolating the protozoan from biological samples and the use of diagnostic techniques done in reference laboratories. Currently, the "gold standard" for identifying strains of Leishmania spp. in epidemiological studies is the multilocus enzyme electrophoresis (MLEE), which is a laborious technique and restricted used in cultured samples. Techniques based on the Polymerase Chain Reaction (PCR) are being more frequently used in order to characterize and differentiate Leishmania species. Such differentiation is important to indicate the adequate treatment for the patients minimizing lethality and for epidemiological purposes as mapping its distribution pattern, in order to help prioritizing the control measures for this zoonosis. The present research aimed to evaluate the currently used primers for molecular diagnosis and validate them by Real Time PCR for their specificity in reference strains cultivated in vitro.

Nesse trabalho, foram sintetizados seletivamente, a partir do óxido do limoneno em oposição a diversas aminas primárias e secundárias, onze b-aminoálcoois derivados do limoneno através de aquecimento convencional e sob irradiação com microondas, fornecendo produtos com moderados a bons rendimentos. O limoneno e nove destes aminoálcoois foram testados contra ovos e larvas de carrapatos da espécie de Rhipicephalus (Boophilus) microplusn no intervalo de concentração de 0,150-10mg/mL. Os resultados revelaram que em doses entre 10 μl/ml - 2.5 μl/ml todos os compostos testados foram letais às larvas. Frente ao teste ovicida os compostos 2, 6, 8, 9 e 10 foram os mais ativos, impedindo a eclosão total ou quase total dos ovos na menor dose utilizada (0,150 μg/ml). Este é o primeiro relato da atividade carrapaticida de limoneno, óxido de limoneno e dos b- aminoálcoois do limoneno para a espécie de carrapato Rhipichephalus (Boophilus) microplus. O limoneno e sete β-aminoálcoois foram testatdos in vitro contra forma promastigota de Leishmania (Vianna) braziliensis. Os resultados dos testes mostraram que, dentre os sete β-aminoálcoois testados dois deles foram mais ativos que o padrão pentamidina (48,5 ± 28,7 μM) e cinco foram mais ativos que o limoneno 1. Destes, dois deles (compostos 7 e 9) apresentaram alta atividade frente a formas promastigotas do ciclo parasitário numa concentração de 0,156mg/mL. O Limoneno 1 nesse teste se mostrou inativo (876,2 ± 216 μM) demonstrando que este terpeno isolado não é um bom antiparasitário contra formas promastigotas de Leishmania (Vianna) braziliensis. Este é o primeiro relato de atividade contra leishmania para amino-álcoois derivados do limoneno. / In this work, a series of seven limonene β-amino alcohols derivatives have been regioselectively synthesized from moderate to good yields. The eleven β-amino alcohols Limonene derivatives were synthesized through aminólisis of Limonene oxide, using several primary and secondary amines by both conventional heating and under microwave irradiation. Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives were investigated for the effect on egg hatchability and mortality rates of newly hatched larvae of cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. At the doses between 10 μl/ml to 2.5 μl/ml all compounds were highly lethal to the larvae and at lower concentrations some of them (2, 6, 8, 9 and 10) showed activity. The effect on hatchbility of the eggs was observed in all treatments. This is the first report of carrapicide activity for Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives against cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The leishmanicidal activity was performed and according to the results two of these compounds were more powerful against in vitro cultures of Leishmania (Vianna) braziliensis promastigote form in a range of μM. The activities observed for 3b and 3f were about 100 folds more potent than the drug standard Pentamidine, while the limonene hasn’t shown any activity in the same test. This is the first report of antileishmanial activity of Limonene β-amino alcohol derivatives.

Leishmaniasis is among the most neglected diseases in the world. Currently, the drugs available for its treatment are limited and highly toxic, so the search for more effective and safer medicines is necessary. Thus, this paper aims to investigate the leishmanicidal activity of new natural, and synthetic. Two series of new 1,4-naphthoquinone derivatives were synthesized. The series of bis-2-hydroxy-1,4-naphthoquinone substituents exhibited significant activity against Leishmania amazonensis and Leishmania braziliensis promastigotes, six compounds showed good activity without toxic effects against the host cell. Moreover, compound 3a, which was selected to an in vivo infection assay with Leishmania amazonensis, reduced the size of the infected ear, but did not reduce parasite burden of the ear and draining lymph node. Furthermore, treatment with 3a induced no change in spleen weight or changes in alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), creatinine, and urea levels. The series of 2-N,N'-dialkylamino-1,4-naphthoquinone substituents showed activity against promastigotes of L. chagasi and L. amazonensis, especially 1d, 1h and 1i, which exhibited L. amazonensis promastigote growth inhibition over 50%, and 1d, 1e, 1f, 1h, 1k and 1n derivatives which inhibited the growth of L.chagasi promastigotes over 70%. In the assay against the amastigote intracellular forms, 1a, 1b, 1c, 1d, 1h, 1i, 1k and 1m derivatives presented significant activity. The flavonoids SP1, SP2, and SP3 and S. palodosum crude extract inhibited the growth of promastigotes and amastigotes of L. amazonensis and L. chagasi. Moreover, SP4 inhibited the growth of promastigotes L. amazonensis. In regard an intracellular forms growth inhibition, SP1, SP3, and crude extract were active significantly. Furthermore, in the in vivo assay of infection with L. amazonensis, the compounds SP1 and SP3 reduced the parasitic burden on the infected ear, but did not reduce parasite burden on draining lymph node. On Leishmania cell cycle analysis, it was observed that SP1 and SP3 induced modifications on S and G2/M phases of cell cycle. In addition, SP3 induced death by apoptosis, and changed autophagy intensity, suggesting anti-proliferative activity at the concentration of 100 μM. The compound 3,7,3',4'-tetra-O-methylquercetin (retusin) inhibited the growth of promastigotes and amastigotes of L. amazonensis and L. chagasi. In the infection assay using hamsters infected with L. chagasi, retusin decreased the parasite burden in the spleen of infected animals. However, in the in vivo assay of infection using Balb/c mice infected with L. amazonensis, retusin did not reduce the parasitic load in the ear and draining lymph node. Moreover, retusin induced morphological alterations in L. chagasi promastigotes observed by scanning electron microscopy. In addition, retusin induced death by apoptosis at the concentration of 100 μM, which is probably not dependent on caspases; besides retusin inhibited Leishmania topoisomerases. The results indicate that the 1,4-naphthoquinone derivatives and flavonoid compounds derived from S. paladosum are active against Leishmania, mainly 1a, 1b, 1c, and 1m, which were active against Leishmania in the in vitro assays, without induce damage in host cells; and SP1, SP3, and rutesin, which were active in vivo by intraperitoneal route, suggesting they can be useful lead compounds candidates for antileishmanial drugs. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A leishmaniose está entre as doenças mais negligenciadas do mundo. Atualmente, os medicamentos disponíveis para o tratamento são limitados, de toxicidade elevada e cepas de Leishmania spp. têm apresentado resistência aos tratamentos preconizados. Assim faz-se necessário a busca de medicamentos mais eficazes e mais seguros. Dessa forma, este trabalho visa investigar a atividade leishmanicida de novos compostos de origem natural e sintéticos. Foram sintetizados duas séries de novos derivados 1,4-naftoquinonas. A série com substituintes bis-2-hidroxi-1,4-naftoquinona exibiram atividade significante contra promastigotas de Leishmania amazonensis e Leishmania braziliensis, seis destes compostos mostraram boa atividade sem efeito tóxico para célula hospedeira, além disso o composto 3a selecionado para o tratamento no ensaio in vivo de infecção com Leishmania amazonensis reduziu a lesão da orelha infectada, porém não reduziu a carga parasitária da orelha e do linfonodo drenante, além disso, o tratamento com o composto 3a não induziu alteração no peso do baço, nem alterações de alanino aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), creatinina e ureia. Compostos da série com substituintes 2-N,N’-dialquilamino-1,4-naftoquinona apresentaram atividade contra promastigotas de L.chagasi e L. amazonensis, com destaque para os derivados 1d, 1h e 1i que inibiram o crescimento de promastigotas de L. amazonensis acima de 50%, e os derivados 1d, 1e, 1f, 1h, 1k e 1n que exibiram pronunciada inibição do crescimento de promastigotas de L.chagasi, com mais de 70% de inibição. No ensaio contra as formas amastigotas de L.chagasi, os derivados 1a, 1b, 1c, 1d, 1h, 1i, 1k e 1m apresentaram significante atividade contra o crescimento das formas intracelulares do parasito. Os flavonoides SP1, SP2, SP3 e o extrato bruto de Solanum paladosum inibiram o crescimento de promastigotas de L. amazonensis e L. chagasi. Além disso, SP4 inibiu o crescimento de promastigotas de L. amazonensis. No que diz respeito à inibição do crescimento das formas intracelulares, SP1, SP3 e o extrato bruto foram estatisticamente significantes. Além disso, no ensaio in vivo de infecção com L. amazonensis os compostos SP1 e SP3 reduziram a carga parasitária da orelha infectado, porém não reduziram a carga parasitária do linfonodo. Na análise do ciclo celular da Leishmania, foi observado que SP1 e SP3 induziram mudança na fase S e G2/M do ciclo celular. Ademais, o composto SP3 na concentração de 100 μM induziu morte por apoptose e alterou a intensidade de autofagia, indicando atividade antiproliferativa. O composto 3,7,3',4'-tetra-O-methylquercetin (retusin) inibiu o crescimento de promastigotas e amastigotas de L.chagasi e L. amazonensis. No ensaio de infecção utilizando hamsters infectados com L. chagasi, o composto retusin diminuiu a carga parasitária no baço dos animais infectados. Entretanto, no ensaio in vivo de infecção de camundongos Balb/c com L. amazonensis, o composto retusin não reduziu a carga parasitária da orelha e do linfonodo drenante. Além disso, o ensaio de microscopia eletrônica de varredura revelou que o composto retusin induziu alterações morfológicas em promastigotas de L. chagasi. O composto retusin foi capaz de induzir morte por apoptose na concentração de 100 μM, provavelmente não dependente de caspases, além disso, inibiu topoisomerase de Leishmania. Os resultados indicam que os derivados 1,4-naftoquinonas e os compostos flavonoides de S. paladosum são ativos contra espécies de Leishmania, principalmente os compostos 1a, 1b, 1c, and 1m que foram ativos contra espécies de Leishmania nos ensaios in vitro, sem efeito deletério para célula hospedeira, e os flavonoides SP1, SP3 e retusin que foram ativos por via intraperitoneal no ensaio in vivo, indicando que estes são fortes candidatos a fármacos leishmanicidas.

Notre travail est une contribution à l'étude des leishmanioses en Iran. Il s'est focalisé sur trois volets. Le principal concerne les Phlébotomes. Les deux autres sont constitués par les Rongeurs réservoirs de L. major et l'Homme.L'étude des phlébotomes s'est réalisée selon deux axes : systématique et épidémiologique. Les approches de systématique nous a conduit à réaliser des inventaires faunistiques dans plusieurs régions d'Iran (nord-ouest, Nord-est, est et centre du pays). Ces inventaires nous ont permis de réactualiser la distribution de certains groupes, notamment les phlébotomes du sous-genre Adlerius et de mentionner deux espèces nouvelles pour la faune du l'Iran : Phlebotomus turanicus et P. salangensis. A côté de ces travaix de faunistique, nous avons réalisé deux travaux de systématique évolutive qui couplent des approches morphologique et morphométrique à des approches moléculaires associant un marqueur ribosomique à un marqueur mitochondrial. Nous avons ainsi étudié P. perfiliewi s.l. et le sous-genre Adlerius sur un échantillonnage débordant largement le cadre de l'Iran. Les travaux d'épidémiologie nous ont permis de vérifier que les foyers que nous avons étudiés fonctionnent sur un mode classique dans lequel P. papatasi, et à un degré probablement moindre les femelles du groupe Caucasicus transmettent Leishmania major alors que P. sergenti assure la transmission de L. tropica. L'identification des parasites est réalisée par voie moléculaire : PCR et RFLP et/ou séquençage de marqueurs ribosomiques. L'étude des Rongeurs réservoirs de L. major nous a permis de constater le rôle essentiel de réservoir de Rhombomys opimus et de Meriones libycus dans le pays avec l'observation de prévalences très élevées, supérieures à 30 % chez ces espèces.Enfin, une étude a été conduite dans la region de Fars où sévissent classiquement des leishmanioses à L. major, L. tropica et à L. infantum. Chez 44 patients présentant des lésions cutanées, nous avons isolé et identifié essentiellement L. major et quelques souches de L. tropica. / This work focused on the leishmaniases in Iran. It includes three topics: i) the Phlebotomine sand flies, ii) the rodent reservoirs of Leishmania major and iii) the Humans.The entomological studies concern both systematics and epidemiology.The systematic part of the study of Phlebotomine sand flies includes several inventories carrired out in several provinces of Iran (North-West, North-East, East and Center of the country). Our results update the distribution of the subgenus Adlerius. We also recorded two new species for the fauna of Iran: Phlebotomus turanicus and P. salangensis. We also carried out evolutive and comparative systematics including specimens from Iran, neighbouring and Mediterranean countries. We coupled morphology to morphometrics and molecular systematics. In the latter approach, we coupled a ribosomal DNA marker to a mitochondrial one. We studied P. perfiliewi s.l. and the subgenus Adlerius. Our epidemiological works focusing on the epidemiology in several parts of the country showed that the studied foci are classical: P. papatasi, and also the females of the Caucasicus group transmit Leishmania major whereas P. sergenti is the vector of L. tropica.The identification of the Leishmania has been done using PCR then RFLP and/or sequencing of rDNA Internal Transcribed Spacer 1.We studied the rodent reservoirs of L. major. Rhombomys opimus and Meriones libycus play an important role and the percentage of L. major infection is high (> 30%).Lastly, we carried out a study on patients from the province of Fars. In this area, leishmaniases are due to L. major, L. tropica and L. infantum. We have typed strains isolated from 42 ot 44 patients. The majority of the strains have been identified as L. major and a few L. tropica.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-29 / As Leishmanioses são classificadas pela OMS como uma das dez doenças negligenciadas tropicais (DNT), as quais apresentam alta incidência, atingem segmentos empobrecidos da população e não obtêm visibilidade social, portanto o investimento em diagnóstico, terapêutica e imunização é precário. As Leishmanioses fazem parte das doenças tropicais em expansão e não existem mecanismos adequados para sua prevenção e controle. Representam um problema de saúde pública mundial: 88 países apresentam pelo menos uma das trinta espécies de Leishmania e 350 milhões de indivíduos estão expostos à contaminação. Em algumas espécies, a letalidade das Leishmanioses pode alcançar 100% em pacientes sem tratamento. Diante desse quadro, realizou-se uma investigação com o objetivo de identificar o perfil da produção científica brasileira sobre o tema das Leishmanioses, no período 2004-2008, a fim de subsidiar o processo de formulação de políticas e tomada de decisões da gestão governamental, no tocante ao fomento à pesquisa em saúde nessa área do conhecimento. A pesquisa se refere a um estudo descritivo, elaborado com emprego da análise bibliométrica e da pesquisa documental. A Bibliometria consiste em um conjunto de leis e princípios empíricos que compõem os fundamentos teóricos da Ciência da Informação. A análise bibliométrica compreendeu a consulta, coleta e recuperação de informações quantitativas, em bases de dados da ciência da saúde no Brasil, seguida da organização dos dados coletados, sistematização em categorias de indexação, registro da coleta em banco de dados Excel e análise interpretativa das informações científicas e tecnológicas obtidas. A pesquisa documental constou de coleta e análise de dados em acervos institucionais de setores do órgão governamental federal de saúde. Em todas as bases consultadas, foram localizadas 749 publicações, produzidas no período 2004-2008 sobre o tema das Leishmanioses, das quais 521 atenderam aos critérios de inclusão. Foram publicados 415 artigos científicos por pesquisadores brasileiros em revistas indexadas, nacionais e internacionais. No diretório dos grupos de pesquisa da Plataforma Lattes, foi identificado o cadastro de 214 grupos dedicados ao tema. Receberam títulos nessa linha de pesquisa (Leishmanioses) 43 mestres e 44 doutores. A análise bibliométrica e documental permitiu identificar tendências de crescimento da produção científica brasileira sobre as Leishmanioses, no período 2004-2008, de grande relevância para a saúde pública, por tratar-se de doença negligenciada tropical. O Brasil detém o maior número de centros de pesquisa sobre Leishmanioses no mundo e atua em cooperação técnico-científica em âmbito nacional e internacional. Pode-se afirmar, portanto, que existe capacidade de médio porte instalada no país para a pesquisa sobre a doença. Além disso, foram identificados estudos em rede e multicêntricos, que podem favorecer a expansão e fortalecimento dos grupos voltados à pesquisa sobre Leishmaniose em âmbito nacional. Entende-se que seja oportuna a indução de ações e políticas públicas de fomento à pesquisa sobre estudos clínicos de fases I, II e III e sobre desenvolvimento tecnológico, a fim de propiciar o incremento do diagnóstico e tratamento das Leishmanioses no país. / The Leishmaniasis are classified by WHO as one of ten tropical neglected diseases (NTD), which have high incidence, affecting impoverished segments of the population and do not get social visibility, so the investment in diagnostic, therapeutic and immunization are poor. The Leishmaniasis is part of the tropical diseases in expansion process and there aren’t appropriate mechanisms for its prevention and control. They represent a public health problem worldwide: 88 countries have at least one of the thirty species of Leishmania and 350 million individuals are exposed to contamination. In some species, the lethality of Leishmaniasis may reach 100% in untreated patients. Given this situation, we carried out an investigation to identify the profile of Brazilian scientific literature on the subject of Leishmaniasis in the period 2004-2008 in order to support the process of policy formulation and decision making of government administration, with regard to development of health research in this area of knowledge. The survey refers to a descriptive study with use of bibliometric analysis and documentary research. The Bibliometrics consists of a set of empirical laws and principles that form the theoretical foundations of information science. Bibliometric analysis included query, collection and recovery of quantitative information in the databases of health science in Brazil, then organization of the data collected, systematized into categories of indexing, record collection in Excel database and interpretative analysis of scientific and technological information obtained. The collection consisted of desk research and data analysis in institutional sectors of the federal government body health. In all of the following databases were located 749 publications produced in the period 2004-2008 on the theme of Leishmaniasis, of which 521 met the inclusion criteria. 415 scientific articles were published by Brazilian researchers in indexed journals, national and international. In the directory of research groups of the Lattes Platform, were identified from the register 214 groups dedicated to the theme. Received titles in this line of research (Leishmaniasis) 43 masters and 44 doctors. Bibliometric analysis and documentation identified growth trends of the Brazilian scientific production on Leishmaniasis, in the period 2004-2008, of great relevance to public health, because it is neglected tropical disease. Brazil has the largest number of research centers on Leishmaniasis in the world and serves on scientific-technical cooperation in national and international areas, so it can be stated that there is midsize capacity for research on the disease installed in the country. Identified studies in multi-center network can promote the expansion and strengthening of the groups directed to research on Leishmaniasis nationwide. It is understood that is desirable the induction of actions and policies to encourage research on clinical trials of phases I, II and III and on technological development in order to facilitate the increase in diagnosis and treatment of Leishmaniasis in the country. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações