Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:29:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Rosana Pereira Morais Balian - 2014.pdf: 11248041 bytes, checksum: c5e17257fc2aa971ce5615831d8147ae (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:36:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Rosana Pereira Morais Balian - 2014.pdf: 11248041 bytes, checksum: c5e17257fc2aa971ce5615831d8147ae (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T15:36:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Rosana Pereira Morais Balian - 2014.pdf: 11248041 bytes, checksum: c5e17257fc2aa971ce5615831d8147ae (MD5) Previous issue date: 2014-04-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Protozoa of the genus Leishmania, which affects the skin and/or mucous membranes, cause American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). It is an endemic zoonosis whose numbers of cases in the Brazil Midwest region are growing. In the Goiás state, 2798 ACL cases were been reported between 2007 and 2013. In the present study, our proposal was to investigate the epidemiological and molecular characteristics of ACL patients attended at the ambulatory of the Hospital Anuar Auad in the period 2000 at 2006 and identify the species of Leishmania sp. The study included 152 patients with ACL, 124 were from of the state of Goiás and 28 at Mato Grosso, aged between 6-79 years, and center and thirteen these individuals were male. For diagnosis, clinical, epidemiological and laboratory data were collected, such as direct examination (ED), histopathology (AH), Montenegro skin test (MST), indirect immunofluorescence (IIF). ELISA using crude extract of L. (Viannia) braziliensis was performing. Characterization of Leishmania species was carried out by polymerase chain reaction (PCR). The positivity of ED, AH, MST, IIF and ELISA was 70.6%, 80.9%, 68.9%, 44.2% and 73.0%, respectively. Specific IgG to L. (V.) braziliensis were detecting in 84.7% of patients with mucosal leishmaniasis (ML), significantly higher than those found in patients with cutaneous leishmaniasis (CL), which was 69.0% (p < 0.05). Detection of IgG before and after treatment was performed using ELISA and was observed a statistically significant difference only in samples obtained from patients with CL after 6 and 18 months of treatment. The data serological monitoring of patients with ACL before and after treatment indicates that the total IgG levels tend to decrease after 6 months of treatment. PCR was performed on 69 samples obtained from scraping the edge of lesions of patients with ATL, these, 62 (89.8%) were positive, 53 patients with LC and 9 patients with ML. The samples were characterized by PCR as L. (V.) braziliensis (93.5%) and L. (L.) amazonensis (6.5%). It was found that 25.8% of cases of leishmaniasis in the state of Goiás occurred in Campestre, Goiânia, Aparecida de Goiânia and Niquelândia. By analyzing the frequency of cases of ATL over the months during the years analyzed, it was observed that there was a distribution of ACL in all seasons from 2000 to 2006, with a larger number of cases in winter. PCR represents important and powerful tool in the diagnosis and species identification in ACL in endemic areas. ACL controlling in endemic areas is difficult and requires an accurate idea of its epidemiology. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é causada por protozoários do gênero Leishmania, que acomete pele e/ou mucosas. É uma zoonose endêmica, cujos números de casos na região Centro-Oeste são crescentes. No Estado de Goiás, foram notificados 2798 casos de LTA, entre os anos de 2007 e 2013. No presente trabalho a nossa proposta foi Investigar as características epidemiológicas e moleculares da LTA de pacientes atendidos no ambulatório de endemias do hospital Anuar Auad no período de 2000 a 2006 e identificar as espécies de Leishmania spp. Participaram do estudo 152 pacientes com LTA, 124 do Estado de Goiás e 28 do Mato Grosso, com faixa etária de 6 a 79 anos. Destes, 113 eram do sexo masculino. Para o diagnóstico foi realizada a avaliação clínicoepidemiológica e laboratorial, tais como exame direto (ED), análise histopatológica (AH), intradermorreação de Montenegro (IRM), imunofluorescência indireta (IFI) e ELISA utilizando extrato total de L. (Viannia) braziliensis. Foi feita a caracterização das espécies de leishmânias por reação em cadeia da polimerase (PCR). A positividade do ED, AH, IRM, IFI e ELISA foi de 70,6%, 80,9%, 68,9%, 44,2% e 73,0%, respectivamente. Foram detectadas IgG específica para L. (V.) braziliensis em 84,7% dos pacientes com leishmaniose mucosa (LM), sendo significativamente superiores às encontradas em pacientes com leishmaniose cutânea (LC), que foi de 69,0% (p<0,05). A detecção de IgG antes e após o tratamento foi feita utilizando ELISA e foi observado que apenas nas amostras dos pacientes com LC obtiveram uma diferença estatística significante após 6 e 18 meses de tratamento. Os dados do acompanhamento sorológico dos pacientes com LTA antes e após o tratamento indicam que os níveis de IgG total tendem a diminuir após 6 meses de tratamento. A PCR foi realizada em 69 amostras obtidas a partir de raspado das bordas das lesões de pacientes com LTA. Destes, 62 (89,8%) foram positivas, sendo 53 de pacientes com LC e nove de pacientes com LM. As amostras foram caracterizadas por PCR como Leishmania (V.) braziliensis (93,5%) e L. (L.) amazonensis (6,5%). Verificou-se que 25,8% dos casos de LTA no Estado de Goiás ocorreram em Campestre, Goiânia, Aparecida de Goiânia e Niquelândia. Ao analisar a frequência de casos de LTA ao longo dos meses durante os anos analisados, observou-se que houve uma distribuição de LTA em todas as estações do ano, com um maior número de casos no inverno. A PCR representa uma importante e poderosa ferramenta no diagnóstico e na identificação das espécies de LTA em áreas endêmicas. O controle da LTA em áreas endêmicas é difícil e requer uma ideia exata de sua epidemiologia.

INTRODUÇÃO: A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecciosa endêmica no Brasil, causada por protozoários do gênero Leishmania e possui duas formas clínicas principais, a leishmaniose cutânea (LC) e a leishmaniose mucocutânea (LMC). Os macrófagos têm papel crucial na patogênese da Leishmaniose como hospedeiros do parasita e atuam como células apresentadoras de antígenos, promovendo uma resposta imune de perfil Th1 contra a Leishmania. Os macrófagos polarizados M2, relacionados com resposta anti-inflamatória (Th2), são envolvidos no controle da inflamação e dano tecidual em várias doenças e estão associados à cronicidade nas doenças infecciosas. O objetivo deste trabalho foi verificar a participação dos macrófagos M2 nos sítios de lesão cutânea da LTA MÉTODOS: Sessenta e três biópsias de pele de lesões de LTA, obtidas de 48 doentes com LC e 15 de LMC, foram submetidas ao método imuno-histoquímico com os anticorpos anti-CD163 e anti-CD206, marcadores de macrófagos M2. Dez espécimes foram também submetidos à técnica imuno-histoquímica de dupla marcação com a utilização dos marcadores pSTAT-1 e CD68 para identificação de macrófagos M1 e CMAF e CD163 para identificação de macrófagos M2. RESULTADOS: Os espécimes de pele com reação inflamatória difusa (n = 26) exibiram maior número de células imunomarcadas com CD163, quando comparadas ao grupo com reação granulomatosa bem organizada (n = 37) (p= 0,01). Os macrófagos CD163+ também foram mais numerosos nas lesões de pele com a presença de formas amastigotas de Leishmania (n = 39) ao exame histopatológico (p=0,02), quando comparadas às lesões onde os parasitas não foram observados (n = 24). O mesmo ocorreu quando comparados somente os espécimes do grupo de doentes com LC com a presença de parasitas (n = 31) e ausência dos mesmos (n = 17) (p = 0,04). As lesões de pele de doentes com LMC mostraram maior número de células CD206+ (n = 15) que a de doentes com LC (n = 48) (p=0,008). Houve correlação positiva entre o número de células imunomarcadas com os anticorpos CD163 e CD206 (r de Spearman= 0,369). Os macrófagos +pSTAT1/CD68+ (M1) mostraram-se mais numerosos que os macrófagos CMAF+/CD163+ (M2) nos sítios de lesão cutânea da LTA. CONCLUSÕES: Os resultados obtidos sugerem que os macrófagos M2 têm um papel na resposta imune \"in situ\" da LTA. Essas células devem atuar como células alvo, facilitando a entrada dos parasitas, a progressão da doença e parecem estar envolvidos nos mecanismos de cronicidade e nos processos de remodelamento tecidual dessa doença. As moléculas CD163 e CD206 podem ser consideradas bons marcadores teciduais de macrófagos M2, uma vez que mostraram correlação positiva em sua expressão. A técnica de dupla marcação confirmou a presença dos macrófagos M2 nas lesões cutâneas da LTA. Embora ocorra a presença de macrófagos M2, os macrófagos M1 são a população macrofágica predominante da resposta imune \"in situ\" da LTA / INTRODUCTION: American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an endemic infectious disease in Brazil, caused by Leishmania parasites and it has two main clinical forms, cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). Macrophages play a key role in leishmaniasis pathogenesis. They are definite parasite host and act as antigen presenting cells, eliciting a Th1 pattern of immune response (M1) against Leishmania. M2 polarized macrophages, related to an anti-inflammatory response (Th2), are involved in controlling inflammation and tissue damage in several diseases and are related to chronicity in infectious diseases. The aim of this study was verifying M2 macrophages \"in situ\" participation in ATL. METHODS: Sixty-three skin biopsies from LTA lesions, obtained from patients with CL (n=48) and MCL (n=15), were subjected to imunohistochemical technique with M2 macrophages markers CD163 and CD206 antibodies. Ten samples were selected for double staining technique with pSTAT1 and CD68 markers for M1 identification, and CMAF and CD163 markers for M2 macrophages identification. RESULTS: Skin samples displaying diffuse inflammatory reaction (n = 26) exhibited higher number of CD163 immune stained macrophages when compared to the well-organized granulomatous reaction group (n = 37) (p=0.01). CD163+ macrophages were higher in samples displaying Leishmania parasites (n = 39) at histopathology exam than the samples without parasites (n = 24) (p=0.02). Same result was observed when comparing the lesions of CL lesions with (n = 31) and without (n = 17) parasites (p = 0.04). MCL skin lesions (n = 15) showed higher number of CD206+ cells (p = 0.008) in comparison with skin lesions taken from CL patients (n = 48). Spearman test demonstrated a positive correlation between the number of CD163+ and CD206+ immune stained cells (Spearman r = 0,369). M1 macrophages (pSTAT1+/CD68+) were present in higher number when compared to M2 macrophages (CMAF+/CD163+) in the samples studied. CONCLUSIONS: The results suggest that M2 macrophages play a role in the in situ immune response of ATL. M2 polarized macrophages may act as host target cells facilitating parasites entry and promoting disease progression, but also seem to be involved with chronicity and tissue remodeling of ATL lesions. CD163 and CD206 molecules may be considered as good markers for M2 macrophages. Double staining technique confirmed the presence of M2 macrophages, although M1 macrophages are the predominant macrophagic component in skin lesions of ATL

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-03T09:59:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Souza Azeredo Bastos - 2014.pdf: 2662232 bytes, checksum: 6d11a68317a80555fa7005a2f51b625b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-05T13:29:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Souza Azeredo Bastos - 2014.pdf: 2662232 bytes, checksum: 6d11a68317a80555fa7005a2f51b625b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-05T13:29:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Souza Azeredo Bastos - 2014.pdf: 2662232 bytes, checksum: 6d11a68317a80555fa7005a2f51b625b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Insects of Lutzomyia genus have considerable importance in the transmission of diseases such as bartonellosis, arboviruses, and especially visceral and cutaneous leishmaniasis, both diseases present in the city of Goiás, place chosen to capture insects using CDC traps during twelve months in order to study the existing population of sandflies. Traps were placed throughout the urban area repeatedly for three nights in the last weekend of each month between September 2012 and August 2013. At the same time of trapping insects, relevant eco-epidemiological data were collected. After captures, all sandflies were identified. Were encountered in the city of Goiás eight species, in a total of 370 captured. The species were: Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia whitmani, Lutzomyia intermédia, Lutzomyia lenti, Lutzomyia shannoni, Lutzomyia peresi, Lutzomyia baculus and Lutzomyia goiana. The results obtained through analysis by Kruskal -Wallis test and Poisson distribution showed significance for the relationship formed between the amount of gathered sandflies with season and rural area characteristic. Although few sandflies were obtained, the presence of female L. longipalpis was associated with the human and canine visceral leishmaniasis cases. / Os insetos do gênero Lutzomyia tem considerável importância na transmissão de doenças como bartonelose, arboviroses e, principalmente, a leishmaniose visceral e a leishmaniose tegumentar amer icana, ambas presentes na cidade de Goiás, local escolhido para realizar capturas de insetos com armadilhas tipo CDC durante doze meses, a fim de estudar a população de flebotomíneos existentes. As armadilhas foram posicionadas ao longo de toda a área urbana, repetidamente por três noites seguidas, no último final de semana de cada mês, entre setembro de 2012 e agosto de 2013. Além da captura de insetos, foram coletados dados eco-epidemiológicos. Após a captura, todos os flebotomíneos foram identificados. Ao final, foram identificados oito espécies na cidade de Goiás, de um total de 370 capturados. As espécies identificadas foram: Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia whitmani, Lutzomyia intermédia, Lutzomyia lenti, Lutzomyia shannoni, Lutzomyia peresi, Lutzomyia baculus e Lutzomyia goiana. Os resultados obtidos, através de análise feita pelo Kruskal-Wallis e pelo modelo linear generalizado com distribuição de Poisson, apresentaram significância para a relação formada entre a quantidade de flebotomíneos capturados e o estágio lunar, estação do ano e as áreas com características rurais. Apesar de terem sido capturados poucos flebotomíneos, contatou-se a presença de fêmeas da espécie L. longipalpis além de caso humano e canino de leishmaniose visceral.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-27T11:23:07Z No. of bitstreams: 2 Tese - Rodolpho de Campos Braga - 2015.pdf: 15048949 bytes, checksum: 8c5fe5ec8f286e33101963872c33d8d5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-27T11:26:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Rodolpho de Campos Braga - 2015.pdf: 15048949 bytes, checksum: 8c5fe5ec8f286e33101963872c33d8d5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T11:26:29Z (GMT). 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Furthermore, it was recently shown that inhibition of CYP51 of L. donovani is essential for the growth of the parasite, and therefore, is a validated target for the development of new leishmanicidal drugs. The aim of this work was the development and implementation of integrated strategies in medicinal chemistry to identify new bioactive compounds against L. infantum using CYP51 enzyme as molecular target. For this, we compiled, integrated and prepared the largest publicly available data sets related to CYP51 and phenotypic assays for Leishmania infantum amastigotes. Virtual screening models (VS) were constructed and extensively validated and applied to filter over 1 million of commercial compounds. The best models for VS were ROCS (LBDD) and pharmacophore (SBDD), with an area under the ROC curve (AUC) values of 0.86-0.90. The consensus between the two models had greater performance, with AUC of 0.93 and high recognition ability active ligands in the top 1% hits. Quantitative structure-activity relationship (QSAR) models robust and predictive were generated and validated for L. infantum (amastigote forms). The models were able to discriminate inactive active compounds with correct classification rate (CCR) values of 0.77 to 0.95 when evaluated for the external validation set. After the virtual screening, QSAR models were used to assist in the final selection of the compounds to be experimentally evaluated. This strategy allowed the identification of 12 compounds that were selected and acquired for in vitro assays against Leishmania (L.) infantum (MHOM / BR / 1972 / LD) in promastigote and amastigote forms, and determination of selectivity/cytotoxicity in NCTC in mammalian cells. Of the twelve compounds tested, six of them showed 50% inhibitory concentration (IC50) values raging from 3.48 to 58.94 μM and were more potent than the standard drug meglumine antimoniate, which is the drug of choice for the treatment of all forms of leishmaniasis. Three most promising compounds (LabMol-007, LabMol-009 and LabMol-012), had activity in leishmanicidal as amastigote and selectivity index promising (IC50 < 5.21 μM and selectivity index > 6.8) and were selected as new hits. We analyzed the parasite metabolic changes in the presence of known CYP51 inhibitors and new inhibitors using HR-MAS NMR 1H . We observed major changes in the energetic metabolism, amino acids catabolism, sterol biosynthesis, purine biosynthesis and thiol-redox system of the parasite. The three hit compounds identified in this work will continue in the drug development process, being necessary to carry out in vivo studies, elucidation of the mechanism of action, hit optimization, as well as the study of pharmacokinetic properties and toxicity. / Tendo em vista o quadro alarmante da leishmaniose visceral no Brasil e no mundo, especialmente devido ao crescente número de casos de resistência e aos poucos medi- camentos disponíveis, é imprescindível a busca de novas alternativas terapêuticas para esta parasitose. O sequenciamento completo do genoma das principais espécies de Leish- mania abriu grandes possibilidades no entendimento desses organismos e iniciou a era pós-genômica da descoberta de fármacos contra tripanossomatídeos. Nesse contexto, destaca-se a enzima 14 a-esterol desmetilase (CYP51) de Leishmania, que é especial- mente envolvida na biossíntese do ergosterol, principal esterol de membrana e vital para o parasito. Além disso, recentemente foi demonstrado que a inibição da CYP51 de L. donovani é essencial para o crescimento do parasito, sendo, portanto, um alvo validado para o desenvolvimento de novos fármacos leishmanicidas. O objetivo geral deste trabalho foi o desenvolvimento e a aplicação de estratégias integradas em Química Medicinal para a identificação de novas substâncias bioativas contra L. infantum, utilizando a enzima CYP51 como alvo molecular. Para isso, foram compilados, integrados e preparados os maiores conjuntos de dados disponíveis publicamente relacionados a CYP51 e a ensaios fenotípicos para Leishmania spp. Modelos de triagem virtual (VS) foram construídos, exaustivamente validados e aplicados para filtrar uma quimioteca com mais de 1 milhão de compostos comerciais. Os melhores modelos para a VS foram o ROCS (LBDD) e o farmacofórico (SBDD), com valores de área sob a curva ROC (AUC) de 0,86-0,90. O consenso entre esses dois modelos foi superior com valor de AUC de 0,93 e alta capacidade de reconhecimento de ligantes ativos no topo de 1% hits. Modelos de relação quantitativa entre estrutura e atividade (QSAR) robustos e preditivos foram gerados e validados para um conjunto de dados de compostos com atividade contra L. infantum (formas amastigota). Os modelos de QSAR foram capazes de discriminar compostos ati- vos de inativos com uma taxa de acerto (CCR) de 0,77-0,95, quando avaliados utilizando o conjunto de validação externa. Após a triagem virtual, os modelos de QSAR foram usados para auxiliar na seleção final dos compostos a avaliados experimentalmente. Essa estratégia permitiu a identificação de 12 compostos que foram selecionados e adquiridos para realização de ensaios de atividade biológica in vitro contra Leishmania (L.) infantum (MHOM/BR/1972/LD) em formas promastigotas e amastigotas, e determinação de sele- tividade/citotoxidade em células mamíferas NCTC. Dos doze compostos testados, seis deles apresentaram valores de concentração inibitória de 50% (IC50) entre 3,48-58,94 μM e foram mais potentes que o fármaco padrão antimoniato de meglumina, que é o fármaco de primeira escolha para o tratamento de todas as formas de leishmaniose. Três compostos mais (LabMol-007, LabMol-009 e LabMol-012) tiveram atividade em leishmanicida na forma amastigota e índice de seletividade bastante promissores (IC50 < 5,21 μM e índice de seletividade > 6,8) e foram selecionados como novos hits. Analisou-se as alterações metabólicas do parasito na presença inibidores conhecidos de CYP51 e dos novos inibi- dores, empregando-se RMN HR-MAS 1H. Foram observadas alterações principais nas vias de metabolismo energético, catabolismo de aminoácidos, biossíntese de esteróis, metabolismo purinas e no sistema tiol-redox do parasito. Os três hits identificados neste trabalho prosseguirão no processo de desenvolvimento de novos fármacos, sendo necessá- ria a realização de estudos in vivo, elucidação do mecanismo de ação, otimização dos hits, além do estudo de propriedades farmacocinéticas e toxicidade.

Submitted by Izabel Monteiro (izabel_22@hotmail.com) on 2016-08-03T14:05:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-17T15:30:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-17T15:34:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T15:34:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Ana Flávia Chagas.pdf: 2651636 bytes, checksum: 31f422b87baf13b0e63decdbaeb0d66e (MD5) Previous issue date: 2015-09-10 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The American Cutaneous Leishmaniasis is characterized as an infectious parasitic disease, not contagious, caused by parasites of the genus Leishmania, which has a heteroxenic life cycle, alternating between hosts invertebrates and vertebrates. Leishmaniasis is a neglected disease, affecting 98 countries, estimated 1.3 million new cases each year. Patients with American cutaneous leishmaniasis may present different clinical picture, namely: the cutaneous and mucocutaneous. The cutaneous form is the most frequent and widely distributed characterized by localized skin lesions, and can display a spontaneous healing above, depending on the host immune response and Leishmania species. The mucocutaneous form manifests as lesions in the mucosa, usually ulcerative and can produce disfiguring lesions. In Brazil leishmaniasis has become endemic, with notifications of cases of leishmaniasis in all states. The first-line drug used in Brazil is the pentavalent antimoniate N- methylglucamine ( Glucantime® ) and its management is done through daily injections. As second choice drugs are sodium stibogluconate (Pentostan®), pentamidine isethionate, amphotericin B, liposomal amphotericin B, miltefosine, among others. Although efficacy of these drugs usually present, some problems may be cited as the high toxicity which induces an array of side effects which often preclude treatment continuity and resistance of some species of Leishmania. In this context it is necessary to search for new compositions which have anti- Leishmania activity and low toxicity to the patient. Based on studies on the activity of metal complexes, especially with antitumor activity, we have seen the possibility of using such complexes for the treatment of cutaneous leishmaniasis. Studies have demonstrated the potential to cover the treatment of disorders showing promising activity antimicrobial, antitumor and anti- inflammatory. This study aimed to evaluate the leishmanicidal activity six copper complexes against promastigote forms and amastigote Leishmania (Leishmania) amazonensis and Leishmania ( Viannia) guyanensis , and the complexes [Cu(thp)4]PF6 and [Cu(PCN)(HBPz3] showed higher leishmanicidal activity, respectively. / A Leishmaniose Tegumentar Americana caracteriza-se como uma doença infecto-parasitária, não contagiosa, causada por parasitos do gênero Leishmania, que possui um ciclo de vida heteroxênico, alternando entre hospedeiros invertebrados e vertebrados. A leishmaniose é uma doença negligenciada e acomete 98 países, estimando 1,3 milhões de novos casos a cada ano. Os pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana podem apresentar quadro clínico diferenciado, sendo eles: a forma cutânea e mucocutânea. A forma cutânea é a mais frequente e mais amplamente distribuída, caracterizando-se por lesões localizadas na pele, podendo apresentar um quadro de cura espontânea, dependendo da resposta imune do hospedeiro e da espécie de Leishmania. A forma mucocutânea manifesta-se como lesões na mucosa, normalmente ulcerativas, podendo produzir lesões desfigurantes. No Brasil a leishmaniose apresenta-se endêmica, apresentando notificações de casos de leishmaniose em todos os estados. O medicamento de primeira escolha utilizado no Brasil é o antimoniato pentavalente de N-metilglucamina (Glucantime®) e sua administração é feita por meio de injeções diárias. Como drogas de segunda escolha estão estibogluconato de sódio (Pentostan®), isetionato de pentamidina, anfotericina B, anfotericina B lipossomal, miltefosina, entre outras. Apesar desses fármacos normalmente apresentarem eficácia, alguns problemas podem ser citados como a alta toxicidade que induz a uma gama de efeitos colaterais que muitas vezes impossibilitam a continuidade do tratamento e a resistência de algumas espécies de Leishmania. Nesse contexto faz-se necessário a busca por novas composições que apresentem atividade anti-Leishmania e com baixa toxicidade ao paciente. Com base em estudos sobre a atividade de complexos metálicos, principalmente com atividade antitumoral, tem-se visto a possibilidade de utilizar esses complexos para o tratamento de leishmaniose cutânea. Estudos tem demonstrado o potencial do cobre para o tratamento de patologias apresentando atividade promissora com ação antimicrobiana, antitumoral e anti-inflamatória. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade leishmanicida de seis complexos de cobre contra as formas promastigota e amastigota de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) guyanensis, tendo os complexos [Cu(thp)4]PF6 e [Cu(PCN)(HBPz3] apresentado maior atividade leishmanicida, respectivamente.

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The LV diagnosis is dificult, mainly for patients co infected with HIV, because LV paients present atipical clinic forms and the sorology is not trustfull Objectives: The aim of this thesis is to evaluate the accuracy of Immunochromatographic rK39 tests in the diagnosis of Visceral Leishmaniasis in serum and saliva of HIV-co-infected patients Methods: VL suspected patients were treated at the Institute of Tropical Diseases Natan Portela - IDTNP, Teresina, Piauí, Brazil, from March 2011 to October 2012. In addition to the clinical examination, it was performed the IC rK39 test in saliva and blood and also the bone marrow aspiration for parasitological and the PCR-RFLP tests. As routine in the institution, VL suggestive patients were also investigated for HIV. Bone marrow samples were collected for Leishmania research in smear, culture and PCR. For the research of Leishmania spp. in bone marrow aspirate, the Panoptic stain was used (RANYLAB Pharmaceutical Chemistry). The analyses of the stained slides were done in an optical microscope with immersion objective, magnification of 1000x. To perform the bone marrow aspirate culture, the aspirate was cultivated in 3 mL of NNN medium (McNeal, Novy & Nicolle) and 500 μL Schneider medium at 26°C. The search for promastigotes. was performed every seven days in blade - cover slip in an optical microscope. 5 mL were collected from peripheral blood in Vaccutainer® tubes without any anticoagulant in order to obtain the serum. Sera were then aliquoted in cryoassay tubes and kept in a freezer at -70°C. Saliva was collected in 50 mL polypropylene tubes and, in order to increase the amount of saliva, the patients received a piece of Parafilm® for chewing. Saliva was aliquoted in cryoessay tubes and kept in a freezer at -70°C. Results: VL patients who possessed the IC rK39 test with positive serum showed 58.6% of positivity (n = 17) in saliva (SalPos), while all of the healthy donors (CT) (n = 20) were negative in serum and saliva. The amount of total and specific IgG in the serum of patients with VL was significantly higher than that in the CT group. The specific IgG of the SalPos group was greater than in VL patients with negative saliva (SalNeg), but it was not statistically xv significant. The amount of total or specific IgA was similar in all groups. The amount of specific IgG for Leishmania found in saliva of both the SalPos and SalNeg groups was higher than in the control group, but the group with SalPos saliva presented more specific IgG to Leishmania than the SalNeg group. Among the 86 VL patients, 33 had positive serology for HIV and five tested negative serology, however, they were carriers of the virus and were being treated, totalizing 37 infected individuals. The sensitivity of VL in PCR was of 100%, since this test was considered gold standard in this study. The other tests had sensitivity of 57.14% (n = 49) (bone marrow aspiration culture), 48.71% (n = 78) (marrow aspirate smear analysis), 55.81% (n = 86) and 56 25% (n = 85) for the IC rK39 tests in Orangelife or Kalazar Detect serum, respectively. In the case of using the parasitological test as the gold standard, the sensitivity of serological tests was greater than 82%. It is not clear if HIV infection is able to interfere in the serological tests yet. Conclusions: The rK39 IC tests, with the utilization of serum, have a low sensitivity when applied to patients co-infected with HIV and VL, and the use of saliva for VL diagnosis is limited. / Introdução: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma antropozoonose causada por protozoários do gênero Leishmania, especialmente Leishmania (Leishmania) infantum ou Leishmania (Leishmania) donovani. Está presente em regiões tropicais e subtropicais e é considerada uma doença negligenciada. O diagnóstico preciso da LV é geralmente difícil, principalmente em pacientes coinfectados pelo HIV, porque a LV apresenta formas clínicas atípicas e porque o diagnóstico sorológico se torna pouco confiável. Objetivo: Avaliar a acurácia de Testes Imunocromatográficos rK39 no diagnóstico da LV em soro e saliva de pacientes coinfectados com HIV. Métodos: Pacientes suspeitos de LV foram atendidos no Instituto de Doenças Tropicais Natan Portela - IDTNP, Teresina, Piauí, Brasil, no período de março de 2011 a outubro de 2012. Além do exame clínico, foi realizado o teste IC rK39 em saliva e sangue, aspiração de medula óssea para exames parasitológicos e PCR- RFLP. Como rotina na instituição, pacientes sugestivos de LV também foram investigados para HIV. Foram coletadas amostras de medula óssea para pesquisa de Leishmania em esfregaço, cultura e PCR. Para pesquisa de Leishmania spp. em aspirado de medula óssea, utilizou-se a coloração pelo Panótico (RANYLAB Química Farmacêutica). A leitura das lâminas coradas foi realizada em microscópio óptico com objetiva de imersão, aumento de 1000x. Para realização da cultura de aspirado de medula óssea, o aspirado foi cultivado em 3 mL de meio NNN (McNeal, Novy & Nicolle) e 500 μL de meio Schneider a 26ºC. A pesquisa de formas promastigotas de Leishmania spp. foi realizada a cada sete dias em lâmina – lamínula em microscópio óptico. Foram coletados 5 mL de sangue periférico em tubos Vaccutainer® sem anticoagulante para obtenção do soro. Em seguida, os soros foram aliquotados em tubos de crioensaio e mantidos em freezer a -70ºC. A saliva foi recolhida em tubos de polipropileno de 50 mL e para aumentar a quantidade de saliva, os pacientes receberam um pedaço de Parafilm® para mastigar. A saliva foi aliquotada em tubos de crioensaio e mantidas em freezer a -70ºC. Resultados: Pacientes com LV que possuiam o teste IC rK39 positivo no soro, apresentaram uma positividade de 58,6% (n = 17) na saliva (SalPos), enquanto todos os doadores saudáveis (CT) (n = 20) foram negativos no soro e na saliva. A quantidade de IgG total e específica no soro do paciente com LV foi significativamente mais elevada do que no grupo CT. A IgG xiii específica do grupo SalPos foi maior do que no grupo de pacientes com LV com saliva negativa (SalNeg), mas não foi estatisticamente significativa. A quantidade de IgA total ou específica foi semelhante em todos os grupos. A quantidade de IgG específica para Leishmania observada na saliva de ambos os grupos SalPos e SalNeg foi maior do que no grupo controle, mas o grupo com saliva SalPos apresentou mais IgG específico para Leishmania do que o grupo SalNeg. Dos 86 pacientes com LV, 33 possuíam sorologia positiva para HIV, cinco apresentaram sorologia negativa, porém, eram portadores do vírus e estavam em tratamento, totalizando 37 indivíduos infectados. A sensibilidade para LV na PCR foi de 100%, já que este foi o teste considerado ouro neste estudo. Os demais testes tiveram sensibilidade de 57,14% (n= 49) (cultura de aspirado medular), 48,71% (n = 78) (análise de esfregaço de aspirado medular), 55,81% (n = 86) e 56,25% (n = 85) para os testes IC rK39 no soro Orangelife ou Kalazar Detect respectivamente. No caso do uso do teste parasitológico como padrão ouro, a sensibilidade dos testes sorológicos foi superior a 82%. Ainda não está bem esclarecido se a infecção pelo HIV é capaz de interferir nos testes sorológicos. Conclusões: Os testes IC rK39, com utilização de soro, tem uma baixa sensibilidade quando aplicados a pacientes coinfectados com LV-HIV, e o uso da saliva para o diagnóstico da LV é limitado.

A leishmaniose pertence à classe de doenças infecciosas e é causada por parasitas do gênero Leishmania. Essa enfermidade se manifesta nas formas visceral ou cutânea e o tratamento de ambas consiste em quimioterapia utilizando fármacos à base de antimônio. A aplicação desses medicamentos, no entanto, apresenta diversas desvantagens, como o surgimento de efeitos colaterais severos e a disseminação de parasitas resistentes aos fármacos convencionais. Dessa forma, há uma grande necessidade de se desenvolver novos medicamentos, bem como, novas técnicas de tratamento e diagnostico. Neste trabalho foram sintetizados novos fotossensibilizadores derivados da riboflavina (vitamina B2) com potencial aplicação no tratamento de leishmaniose cutânea (através de terapia fotodinâmica) e foram sintetizados novos complexos de Ru (II) com potencial uso como sensores luminescentes de antimônio. Os derivados da riboflavina foram obtidos utilizando a vitamina B2 como material de partida e as transformações químicas estudadas fizeram uso de reações de acilação das hidroxilas da cadeia ribitil e de alquilações do nitrogênio 3 do sistema de anéis isoaloxazina. Essas modificações estruturais permitiram a construção de uma biblioteca de fotossensibilizadores que contém partes hidrofílicas, hidrofóbicas, anfifílicas e iônicas, que possibilitaram estudos da relação estrutura atividade. Com a otimização dessas rotas sintéticas foram obtidos dois derivados flavínicos-catiônicos inéditos na literatura com rendimentos de até 68%. Foi mostrado que as transformações químicas estudadas não afetaram significantemente as propriedades fotofísicas dos derivados flavínicos, sendo todos eles fluorescentes e capazes de fotossensibilizar a produção de oxigênio singlete com rendimento quântico semelhante ao da riboflavina (&#934;&#916. &#8776; 0,5). Por outro lado, as modificações estruturais na riboflavina alteraram as propriedades físico-químicas em termos de solubilidade e coeficiente de partição. Os derivados sintetizados foram testados contra promastigotas de Leishmania major utilizando LED azul (470 nm). Os fotossensibilizadores apresentaram baixa toxicicidade no escuro (CE50 (concentração efetiva 50%)> 100 &#181;M para todos os compostos) e todos os derivados testados apresentaram maior fototoxicidade (CE50 de até 5 &#181;M) que a riboflavina (CE50 de 50 &#181;M). Foi observado que a fototoxicidade dos derivados da riboflavina está fortemente associada à lipofilicidade do fotossensibilizador. Um complexo de Ru (II) que responde à presença de antimônio foi preparado a partir do bis-complexo Ru(bpz)2Cl2 e do ligante derivado da fenantrolina contendo o grupo bitiofeno (bitiofeno-imidazo-fen). Esse complexo apresenta potencial na construção de sensores luminescentes de antimônio. Foi mostrado que o novo complexo sintetizado [Ru(bpz)2(bitiofeno-imidazo-fen)2+] apresenta baixa luminescência na região do vermelho devido à auto-supressão causada pelo grupo bitiofeno. No entanto, estudos preliminares mostraram que a adição de SbCl3 ou tartarato de antimônio ao meio intensifica significativamente a emissão nessa região do espectro. Devido à formação do complexo Sb-bitiofeno, ocorre o aumento percentual da espécie eletronicamente excitada e a mesma é auto-suprimida com menos eficiência. / The leishmaniases belong to a group of infectious diseases caused by a parasite of the genus Leishmania. This disease manifests as the visceral or the cutaneous forms and the treatment of both types is based on chemotherapies with antimony drugs. The application of these drugs, however, presents drawbacks like several side effects and dissemination of parasites resistant to this conventional treatment. Thus, there is a growing need to develop new drugs, as well as new modalities of treatment and diagnosis. In this work, novel photosensitizers derived from riboflavin (vitamin B2) with potential application in the treatment of cutaneous leishmaniasis (by photodynamic therapy) were synthesized. Also, novel Ru (II) complexes with potential usage as luminescent sensors of antimony were synthesized. The riboflavin derivatives were obtained by using vitamin B2 as the starting material, and the chemical transformations were based on acylation of the hydroxyl groups from the ribityl side chain and alkylation of nitrogen 3 of the isoalloxazine ring system.These structural modifications yielded a library of photosensitizers containing hydrophilic, hydrophobic, amphiphilic or ionic moieties, which provide molecules for a study of the structure-activity relationship. By optimizing these synthetic routes, two novel cationic riboflavin derivatives were obtained in good yield (up to 68%). It has been shown that the chemical modifications performed have not significantly affected the photophysical properties of the riboflavin derivatives. All compounds are fluorescent and able to photosensitize singlet oxygen in yields similar to riboflavin itself (&#934;&#916 &#8776; 0,5). On the other hand, these structural modifications varied the physic-chemical properties related to solubility and partition coefficient of the derivatives. The obtained derivatives were tested against promastigotes of Leishmania major using blue LED (470 nm). The photosensitizers displayed low dark toxicity (EC50 (Effective Concentration 50%) > 100 &#181;M for all the studied compounds) and all derivatives showed greater phototoxicity (EC50 up to 5&#181;M) when compared to riboflavin (EC50 = 50&#181;M). It was observed that the phototoxicity of the riboflavin derivatives is strongly associated with the lipophilicity of photosensitizer. A Ru (II) complex that responds in the presence of antimony was prepared from Ru(bpz)2Cl2 and a phenanthroline ligand containing a bithiophene group (bithiophen-imidazo-phen). This complex can be potentially applied in the construction of luminescent sensors of antimony. It has been demonstrated that the novel complex [Ru(bpz)2(bitiofeno-imidazo-fen)2+] displays low red luminescence due to the self-quenching promoted by the bithiophen moiety. However, preliminary studies have evidenced that, upon addition of SbCl3 or antimony tartrate to the media, the emission intensifies in the red region of the spectrum. Due to the formation of the chelate Sb-bithiophene, the elf-quenching of the electronic excited species occurs less efficiently.

A leishmaniose é uma doença tropical negligenciada causada por diferentes espécies do gênero Leishmania que atinge grande parte da população mais pobre do mundo e sua manifestação visceral, que é fatal se não tratada, tem se alastrado atingindo grandes cidades, aumentando o número de pessoas com risco de infecção. Dentre os medicamentos em uso, está o análogo lipídico sintético hexadecilfosfocolina (miltefosina), administrado oralmente, que age nas membranas celulares do parasita e pode induzir apoptose, mas com modo de ação não totalmente esclarecido. O primeiro local de interação desse fármaco é a membrana celular do parasita, sendo importante o conhecimento da sua forma de interação. Neste trabalho examinamos propriedades de diversos modelos de membrana com diferentes composições, levando em consideração o conhecimento existente sobre a composição da membrana plasmática da Leishmania. Assim, as membranas modelo foram vesículas unilamelares grandes e gigantes (LUVs e GUVs), de fosfolipídios puros, de misturas binárias com fosfolipídios e colesterol e ainda misturas ternárias com ceramida, um esterol presente nas membranas de Leishmania. A interação com a miltefosina foi estudada em diferentes intervalos de concentração do fármaco. Como técnicas principais utilizamos a espectroscopia de fluorescência, estática e resolvida no tempo, a espectroscopia de correlação de fluorescência, microscopia de fluorescência e confocal e imagens por tempo de vida de fluorescência. Observou-se que a interação entre o fármaco e as membranas lipídicas ocorre de diferentes formas, dependendo i) da razão molar entre o fármaco e os lipídios; ii) da concentração real do fármaco, se abaixo ou acima da concentração micelar crítica (CMC); iii) da composição do modelo de membrana e da fase lipídica da bicamada. Em concentrações abaixo da CMC, a miltefosina tem efeito de fluidificação das bicamadas, principalmente quando elas se encontram em na fase gel, mas esse efeito é pouco pronunciado na presença de colesterol, pois esse composto protege a bicamada do efeito do fármaco. Em vesículas de misturas ternárias de fosfolipídio, colesterol e ceramida em alta concentração, não há separação de fases, e a presença de 10 mol% de miltefosina promove a formação de domínios de ceramida; nas vesículas em que a ceramida está em concentração molar mais baixa, formando domínios, a separação de fases fica menos evidente com o acréscimo de miltefosina. Em razões de concentração miltefosina/lipídio elevadas, mas ainda abaixo da CMC, observa-se diminuição no tamanho das vesículas, por formação de agregados de fármaco/lipídio com porções da bicamada. Em concentrações acima da CMC, ocorrem efeitos drásticos com solubilização de partes cada vez maiores da bicamada da membrana, e esses efeitos ocorrem em tempos menores quanto maior a concentração de miltefosina. Portanto, de maneira geral, o colesterol protege a bicamada do efeito da miltefosina, mas o fármaco tem efeito pronunciado em modelos de membrana de misturas ternárias contendo ceramida. Os efeitos variam com a concentração da miltefosina, com aumento da fluidez da bicamada em baixas razões fármaco/lipídios, solubilização de pequenas porções da bicamada e diminuição do tamanho das vesículas em razões maiores, mas ainda abaixo da CMC, e acima da CMC, formação de agregados do fármaco com porções dos lipídios da bicamada e fragmentação da membrana. / Leishmaniasis is a complex of diseases part of the neglected tropical diseases caused by several species of the genus Leishmania. It reaches a large part of the poorest people in the world and its visceral form, which is fatal if left untreated, has been spread around big cities, increasing the number of people at risk of infection. Among the used drugs for the treatment, there is the synthetic lipid analogue hexadecylphosphocholine (miltefosine), orally administrated, which acts in the cell membranes and can induce apoptosis like death, but its mechanism of action is not totally clear. The first interactions site of this drug is the cell membrane, and it is important to know its mechanism of interaction. In this work we explore properties of several membrane models with different compositions, taking into account the existent knowledge about the composition of the Leishmania plasma membrane. Therefore, the model membranes were giant and large unilamellar vesicles (GUVs and LUVs), formed from pure phospholipids, binary mixtures of phospholipids and cholesterol and ternary mixtures with ceramide, a sterol present in the Leishmania membranes. The interaction with miltefosine was studied in different intervals of drug concentration. The main techniques used were the steady-state and time-resolved fluorescence spectroscopy, fluorescence correlation spectroscopy, confocal and fluorescence microscopy and fluorescence lifetime imaging. The interaction depends on i) the molar ratio of drug and lipids; ii) the real concentration of the drug, if it is below or above the critical micelle concentration (CMC); iii) the composition of the model membrane and the lipid phase of the bilayer. In concentration below the CMC, miltefosine has an effect of bilayer fluidization, mainly when it is in a more ordered phase, but this effect is less pronounced in cholesterol presence, because this compound protects the bilayers from the drug effect. In vesicles from ternary mixtures of phospholipid, cholesterol and ceramide in high concentration, there is no phase separation, and the presence of 10 mol% of miltefosine promotes ceramide domains formation; in vesicles in which ceramide is in low concentration, forming domains, the phase separation is less evident with miltefosine addition. In high concentration ratio miltefosine/lipids, but below CMC, it is observed a decrease in vesicles size with drug/lipids aggregates formation from portion of the bilayer. In concentrations above the CMC, drastic effects occur, with solubilization of bigger portions of the membrane bilayer, and the effects occur in lower times for higher drug concentration. Therefore, generally, cholesterol protects bilayer from the effect of miltefosine, but the drug has a pronounced effect in model membranes of ternary mixtures containing ceramide. The effects vary with miltefosine concentration, increasing the bilayer fluidity in lower drug/lipid ratio, solubilization of small portions of the bilayer and decrease of vesicles size in higher ratios, but still below CMC, and above CMC, formation of aggregates of the drug with portions of bilayer lipids, and membrane fragmentation.

Made available in DSpace on 2016-08-16T18:18:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE SOFIA SOUSA SALES.pdf: 1314406 bytes, checksum: cf0a23c2cfdc8d768fd9d2a3edfd3773 (MD5) Previous issue date: 2012-08-11 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / The aim of this study was to evaluate the protective effect of the flagellar fraction of Leishmania (L) amazonensis and BCG in dogs from endemic area for canine visceral leishmaniasis (CVL). Initially a study was conducted on an epidemiological survey in order to determine the frequency of antibodies against Leishmania in dogs of both sexes, with aged above six months and their correlation with clinical variables such as : hypertrophy of popliteal lymph nodes, skin lesions , onychogryphosis, cachexia and ocular lesions. A total of 341 dogs were used in this study. The serum of these animals was submitted to ELISA/S7 ® test. The serological results shwoed that 173 (50.73%) were positive and 135 (39.59%) were negative for anti-Leishmania antibodies. Among Seropositive animals was observed that 79 (45.66%) presented lymph node hypertrophy, 25 (14.45%) skin lesions, 23 (13.29%) onychogryphosis, 22 (12.72%) cachexia and 11 (6.36%) with the presence of ocular lesions. To evaluate the protective effect of flagellar fraction and BCG were evaluated 90 seronegative animals divided in three groups of 30animals: Group I - animals immunized with flagellar fraction doses of BCG and Group II - animals immunized with BCG and Group III - control animals inoculated with PBS. After immunization the animals remained in the endemic area and they were followed up during 14 months. For immunohistochemical analysis just 06 dogs of each group were selected randomly. However, all dogs were negative for the presence of anti-Leishmania, the immunohistochemical analysis showed amastigotes of Leishmania in the skin of 2 animals, one belonging to the Group II (5 parasites / field) and another belonging to the Group III (18 parasites / field ). The animals of group I (immunized with BCG and flagellar fraction) did not present parasites in the skin. In conclusion this study reinforce the same results obtained in murine model that immunization with flagellar fraction of L. amazonensis in combination with BCG is able to protect dogs analyzed, and the immunohistochemistry was more efficient in the diagnosis of CVL in this study. / O propósito do presente estudo foi avaliar a capacidade protetora da fração flagelar de Leishmania (L) amazonensis sob imunomodulação do BCG em cães provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC) por meio da avaliação sorológica, histológica e imunohistoquímica. A priori foi realizado um estudo do tipo inquérito, sobre a ocorrência de anticorpos anti-Leishmania em cães macho e fêmea, com idade igual ou superior a seis meses e sua correlação com as variáveis clínicas: hipertrofia de linfonodos poplíteos, alterações cutâneas, onicogrifose, caquexia e lesões oculares. Os cães foram analisados sorologicamente, através do teste de ELISA/S7®, utilizando-se amostras de sangue periférico num total de 341 amostras analisadas. Desse total, 173 (50,73%) foram soropositivos e 135 (39,59%) foram soronegativos para anticorpos anti-Leishmania. Dos animais com sorologia positiva observou-se 79 (45,66%) com hipertrofia de linfonodos, 25 (14,45%) com alterações cutâneas, 23 (13,29%) com onicogrifose, 22 (12,72%) com caquexia e 11 (6,36%) com presença de lesões oculares. Para avaliar a capacidade protetora da fração flagelar imunomodulada pelo BCG, foram avaliados 90 animais com sorologia negativa para LVC, divididos em três grupos de 30 animais: Grupo I animais imunizados com doses de fração flagelar e BCG; Grupo II animais imunizados apenas com BCG e o Grupo III animais controles inoculados com PBS. Após a imunização os animais foram deixados em área endêmica e acompanhados por 14 meses. Na etapa seguinte, 06 cães de cada grupo, escolhidos aleatoriamente, tiveram sangue e fragmentos de pele da ponta da orelha coletados para posterior realização de sorologia anti-Leishmania, imunohistoquímica, imprinting e histologia. A avaliação dos resultados mostrou que todas as amostras coletadas foram negativas para a presença de anticorpos anti-Leishmania. Já a análise imunohistoquímica evidenciou formas amastigotas de Leishmania sp na pele de 2 animais, um pertencente ao Grupo II (5 parasitos/campo) e outro pertencente ao Grupo III (18 parasitos/campo). Os animais do grupo I (imunizados com fração flagelar e BCG) não apresentaram positividade em nenhuma das análises. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que a imunização com fração flagelar de L. amazonensis em associação com BCG foi capaz de proteger os cães analisados e que a técnica de imunohistoquímica mostrou-se mais eficiente no diagnóstico da LVC no presente estudo.

Made available in DSpace on 2016-08-19T17:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joao Freitas de Almeida.pdf: 224070 bytes, checksum: e823447b5af3454f3861d310f6e1d693 (MD5) Previous issue date: 2006-05-19 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / The Vila Nova town located in the municipality of Raposa, Maranhão, has been reported as endemic area for visceral leishmaniasis. Knowing the importance of dogs as reservoir household, this study aimed to identify the dogs for leishmaniasis infected through test immunoassay (ELISA). Collections of blood of all dogs resident in the locality were held in the period of February to April 2005, giving a sample of 233 dogs. The results of the ELISA showed that 69 dogs showed positive results, corresponding to a seroprevalence of approximately 29.6% of the dogs of the town. / A localidade Vila Nova situada no município de Raposa, Maranhão, tem sido relatada como área endêmica para a leishmaniose visceral. Sabendo da importância dos cães como reservatório doméstico, este trabalho teve como objetivo identificar os cães infectados para leishmaniose por meio de teste imunoenzimático (ELISA). Coletas de sangue de todos os cães domiciliados na localidade foram realizadas no período de fevereiro a abril de 2005, perfazendo uma amostra de 233 cães. Os resultados do ELISA demonstraram que 69 cães apresentaram resultados positivos, correspondendo a uma soroprevalência de aproximadamente 29,6% dos cães da localidade.