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Análise molecular de isolados do gênero leishmania e clínica de pacientes portadores de leishmaniose tegumentar americana atendidos no Hospital Universitário de BrasíliaGraziani, Daniel 26 November 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-02-03T14:32:42Z
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2013_DanielGraziani.pdf: 1554428 bytes, checksum: 32ad8e784f99ba3a3cefc15be83c91bf (MD5) / A Leishmaniose Tegumentar Americana é um grave problema de saúde pública no Brasil e em vários países do mundo. As diferentes manifestações clínicas podem variar desde uma lesão localizada até multiplas lesões distribuidas por todo o corpo. Fatores inerentes às diferentes espécies do parasita contribuem para a diversidade clínica e para a patogênese da doença. O objetivo deste trabalho foi estudar através de metodologias moleculares isolados de Leishmania e relacionar com os aspectos clínicos dos pacientes fontes. A identificação foi realizada através da PCR do gene miniexon, PCR-RFLP e sequenciamento da região ITS1 do rDNA. Foram analisados 38 isolados provenientes de 36 pacientes e foram identificados: 22 L. (V.)
braziliensis, 3 L. (V.) panamensis, 1 L. (V.) guyanensis, 1 L. (V.) utingensis, 2 L. (V.)
spp, 8 L. (L.) amazonensis e 1 L. (L.) infantum. Os pacientes que predominaram eram do sexo masculino em idade reprodutiva com lesões nos membros superiores
e inferiores. Os pacientes infectados pelo subgênero Viannia desenvolveram em
81% dos casos leishmaniose cutânea. Apenas pacientes infectados por L. (V.)
braziliensis desenvolveram leishmaniose mucosa. Um paciente infectado por L. (V.)
braziliensis e co-infectado por HIV desenvolveu a Síndrome de Reconstituição
Imune. Entre os oito pacientes infectados pela espécie L. (L.) amazonensis, seis apresentaram leishmaniose cutânea, um apresentou a forma cutânea disseminada e um apresentou leishmaniose cutânea difusa. O único paciente infectado por L. (L.) infantum apresentou três lesões cutâneas ulceradas. A técnica RAPD permitiu comparar fingerprints de isolados de um mesmo paciente a fim de analisar as modificações ao longo de sucessivas recidivas. Através desta técnica foi possível caracterizar duas cepas de L. (L.) amazonensis como idênticas, isoladas de dois pacientes com formas clínicas graves e raras (LCD e LD). Neste estudo relata-se pela primeira vez como agentes etiológicos da leishmaniose tegumentar no Brasil as espécies: L. (V.) utingensis e L. (L) infantum. A L. (V.) utingensis é descrita pela
primeira vez infectando humanos e a L. (L) infantum desencadeando leishmaniose
cutânea. Devido ao amplo espectro clínico causado pelas espécies de Leishmania, o
diagnóstico molecular pode ser útil para o prognóstico clínico rotineiro da leishmaniose bem como para compreensão da ocorrência e comportamento de cada espécie. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis is a serious public health problem in Brazil and in several countries worldwide. The different clinical manifestations may vary since a localized lesion until multiple lesions distributed throughout the body. Factors inherent to the different species of the parasite contribute to the clinical diversity and pathogenesis of the disease. The aim of this work was to study through molecular methodologies of Leishmania's isolates and relate them with clinical aspects of the patient's sources. The identification was performed by PCR miniexon gene, PCR-RFLP and sequencing of ITS1 from rDNA gene. In this study 38 isolates from 36 patients were analyzed and were identified: 22 L. (V.) braziliensis, 3 L. (V.) panamensis, 1 L. (V.)
guyanensis, 1 L. (V.) utingensis, 2 L. (V.) spp, 8 L. (L.) amazonensis and 1 L. (L.) infantum. Patients were males in reproductive age with lesions in upper and lower limbs. The patients infected by the Viannia subgenus have developed cutaneous leishmaniasis, in 81% cases. Only patients infected by L. (V.) braziliensis developed ucosal leishmaniasis. One patient infected by L. (V.) braziliensis and co-infected with HIV developed immune reconstitution syndrome. Among the eight patients infected by the L. (L.) amazonensis, six have developed cutaneous leishmaniasis, one presented disseminated cutaneous form and the other had diffuse cutaneous leishmaniasis. The single patient infected by L. (L.) infantum has showed an atypical form of cutaneous leishmaniasis. The RAPD technique allowed us to compare
fingerprints of isolates from the same patient, in order to analyze changes over successive recurrences. By using this technique, it was possible to characterize two strains of L. (L.) amazonensis as identical, these was isolated from two patients with severe clinical and rare forms (LCD and LD). The present study reports, for the first time as etiologic agents of cutaneous leishmaniasis in Brazil, the following species: L. (V.) utingensis and L. (L) infantum. L. (V.) utingensis is first described infecting humans and L. (L) infantum unleashing cutaneous leishmaniasis. Due to the wide clinical spectrum caused by Leishmania species, the molecular diagnosis can be useful for routine clinical prognosis of leishmaniasis as well as for understanding the occurrence and behavior of each species.
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Eficácia e segurança da dose baixa de antimonial pentavalente no tratamento da leishmaniose cutânea por Leishmania (Viannia) braziliensis em área endêmica da Bahia, Brasil : ensaio clínico randomizado / Efficacy and safety of low-dose pentavalent antimonial for treatment of cutaneous leishmaniasis by Leishmania (Viannia) braziliensis in Bahia, Brazil: a randomized clinical trialAmpuero Vela, Julia Sonia 09 October 2009 (has links)
Tese (doutorado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2009. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2011-04-07T18:47:06Z
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2009_JuliaSoniaAmpuero.pdf: 15052956 bytes, checksum: 6bed1f9a5fbec7544dd71bcacdfbdfe6 (MD5) / Rejected by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br), reason: Item está com dois arquivos iguais em anexo. Favor remover um. on 2011-04-14T23:56:21Z (GMT) / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2011-04-27T17:43:24Z
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2009_JuliaSoniaAmpuero.pdf: 15052956 bytes, checksum: 6bed1f9a5fbec7544dd71bcacdfbdfe6 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-05-21T00:52:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2009_JuliaSoniaAmpuero.pdf: 15052956 bytes, checksum: 6bed1f9a5fbec7544dd71bcacdfbdfe6 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-21T00:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2009_JuliaSoniaAmpuero.pdf: 15052956 bytes, checksum: 6bed1f9a5fbec7544dd71bcacdfbdfe6 (MD5) / Foi desenvolvido, um ensaio clínico randomizado aberto para estimar a eficácia e segurança de uma dose de 5mg/kg/dia por 20 dias de antimoniato-N-metil-glucamina, no tratamento da leishmaniose cutânea (LC) por L. (V.) braziliensis, comparada com a dose padrão de 15mg/kg/dia por 20 dias (ClinicalTrials.gov número NCT00317980). Entre janeiro de 2006 e janeiro de 2007 foram incluídos 280 pacientes entre 7 e 50 anos de idade, de ambos os sexos com diagnóstico clínico e laboratorial de LC. Os pacientes foram alocados de maneira randômica, 140 pacientes em cada grupo de tratamento. Todos apresentavam até nove lesões cutâneas ulceradas com duração entre duas a 20 semanas. A cura clínica foi definida como a epitelização total de todas as lesões com ausência completa de eritema, edema, descamação e adenite ou linfangite regional, três meses após a finalização do tratamento. Segundo a análise por protocolo (180 pacientes), o coeficiente de incidência de cura foi 8,8% para o grupo que recebeu 5 mg/kg/d, e de 20,2% para o grupo que recebeu 15 mg/kg/d com uma diferença de risco de 11,4% (limite superior do IC95% unicaudal = 20,3). Na análise por intenção de tratar (280 pacientes), observou-se um coeficiente de incidência de cura de 9,3% para o grupo que recebeu dose baixa, e de 18,6% para o grupo que recebeu 15 mg/kg/d, com uma diferença de risco de 9,3% (limite superior do IC95% unicaudal = 16,2). A dose de 5 mg/kg/d mostrou ser inferior à dose de 15 mg/kg/d quando aplicado o teste de não inferioridade, comparando com a diferença proposta a priori de 15% para definir a dose baixa como não inferior. Os pacientes que receberam 15 mg/kg/d experimentaram maior quantidade de eventos adversos comparado com os pacientes que receberam dose baixa de antimonial. Não foi evidenciado desenvolvimento de lesões mucosas com dois anos de seguimento. Os pacientes que utilizaram dose baixa tiveram maior coeficiente de incidência de falhas entre os primeiros 20 a 40 dias de seguimento pós- tratamento, 28,6% (IC95% 20,0 a 38,5) versus 7,9% (IC95% 3,5 a 14,9) no grupo que recebeu 15 mg/kg/d (p < 0,001). Foram encontradas como variáveis preditoras de falha precoce a utilização da dose baixa, ser de sexo feminino, ter lesões localizadas na região de cabeça e pescoço e a presença de parasitos intestinais no momento do diagnóstico de leishmaniose. Em conclusão o coeficiente de incidência de cura da dose baixa foi consideravelmente inferior à dose de 15 mg/kg/dia, e a quantidade de eventos adversos foi maior no grupo que recebeu a dose padrão. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / A randomized open-label clinical trial was conducted to assess the efficacy and safety of an intravenous dose of 5 mg/kg/day antimony-N-methyl-glucamine for 20 days compared with the conventional dose of 15mg/kg/day for 20 days for treatment of cutaneous leishmaniasis (CL) associated with L. (V.) braziliensis infection. This trial was registered with clinicaltrials.gov, number: NCT00317980. From January 2006 to January 2007 were enrollment 280 patients aged 7 to 50 years old, of both sexes with clinical and laboratory diagnosis of CL. The volunteers were randomly assigned to one of the two treatment groups. All patients presented with up to nine ulcerated cutaneous lesions with less than twenty weeks of disease evolution. Clinical cure was defined as complete healing of the lesions defined as complete epithelization plus absence of erythema, oedema, flaking, and regional adenitis or lymphangitis, three months after finishing the exposure to the drug. According to the per-protocol analysis (180 patients) the cure rate was 8.8% and 20.2% for the group receiving 5 mg/kg/d and 15mg/kg/d respectively, and the cure rate difference was 11.4% (upper limit of a 1-sided 95% IC = 20.3). The intention-to-treat analysis (280 patients) showed effectiveness rate of 9.3% and 18.6% for the group receiving 5 mg/ kg/d and 15mg/kg/d respectively, and the cure rate difference was 9.3% (upper limit of a 1-sided 95% IC = 16.2), confirming the findings of the per-protocol analysis. The dose of 5mg/kg/d was shown to be inferior than 15 mg/kg/d when the non-inferiority test was applied compared to the proposed a priori difference of 15%. Patients who received the 15 mg/kg/d dose experienced more adverse events compared with patients who received the low dose schedule. By the end of the second year of follow-up there were no patients diagnosed with mucosal disease. Patients who received low dose had a higher failure rate between the first 20 to 40 days of followup, 28.6% (95% CI 20.0 to 38.5) versus 7.9% (CI 95% 3.5 to 14.9) in the group receiving 15 mg/kg/d (p < 0.001). Risk factors for early treatment failure identified in the final multivariate model were: exposition to the low dose schedule, to be female, to have lesions in the head and neck and the presence of intestinal parasites at the time of diagnosis of leishmaniasis. In conclusion, the incidence rate of cure of low dose was significantly lower than 15 mg/kg/d, and the number of adverse events was higher in the group receiving the standard dose.
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Síntese, elucidação estrutural e avaliação da atividade biológica de novas 5-(indol-3-il-metileno)-4-tioxo-tiazolidin-2-onasGOUVEIA, Allana Lemos Andrade 31 July 2015 (has links)
Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-01-22T13:42:59Z
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Previous issue date: 2015-07-31 / FACEPE / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença potencialmente fatal, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida por insentos flebotomíneos. O Brasil é um dos países mais afetados pela doença, a qual ocorre principalmente em áreas onde os serviços de saúde são limitados. Além disso, os medicamentos usualmente utilizados para o tratamento da enfermidade apresentam incômoda via de administração, efeitos tóxicos severos e algumas cepas já possuem resistência aos fármacos convencionais. Esse fato faz com que a busca por novas alternativas terapêuticas, mais eficazes e menos tóxicas, seja de grande importância. Neste cenário, a química medicinal é imprescindível, pois atua no planejamento e na descoberta de novas moléculas candidatas a fármacos. As tiazolidinas são um grupo de moléculas que possuem uma diversa lista de atividades biológicas relatadas na literatura. Neste trabalho, cinco novos derivados 5-(indol-3-il-metileno)-4-tioxo-tiazolidin-2-onas foram sintetizadas e avaliadas quanto a sua atividade leishmanicida, a partir de testes in vitro frente formas promastigotas de Leishmania infantum, e o ensaio do MTT para a determinação da citotoxicidade. Os compostos GQS-90, GQS-91 e GQS-93, destacaram-se entre os compostos testados, apresentando valores de IC50 que variaram de 0,42 a 23,96 μM. Esses compostos apresentamrem também valores de CC50 que variam de 8,52 a 54,34 μM. A partir dos resultados obtidos, foi possível concluir que três dos cinco derivados utilizados nesse trabalho apresentaram promissor potencial leishmanicida, com bons índices de seletividade, sendo necessários estudos complementares de microscopia eletrônica e ensaios in vivo para melhor elucidar a ação desses compostos. / Visceral leishmaniasis is a potentially fatal disease caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted by sandflies. Brazil is one of the most affected countries by this disease, wich occurs mainly in areas where health services are limited. Furthermore, the commonly used drugs for the treatment of the disease have a troublesome route of administration, severe toxic effects and already have some strains of resistance to conventional drugs. This fact makes the search for new therapeutic alternatives, more effective and less toxic, of great importance.In this scenario, medicinal chemistry is essential because acts in the design and discovery of new molecules drug candidates. The thiazolidines are a group of molecules wich have a different list of biological activities reported in the literature. In this work, five new derivatives 5-(indole-3-il-metileno)-4-thioxo-thiazolidin-2-one have been synthesized and evaluated for antileishmanial activity with in vitro tests using promastigotes forms of Leishmania infantum, and MTT assay for determination of citotoxicity. The compounds GQS-90, GQS-91 and GQS-93 stood out among the others tested compounds, with IC50 values raging from 0,42 to 23,96 μM. From the results obtained, we conclude that three of the five derivatives used in this study showed promising leishmanicidal potential with good indices of selectivity, and electron microscopy studies and in vivo assays are required to further elucidate the action of these compounds.
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Desenvolvimento de plataforma nanoestruturada para biodetecção de Leishmania InfantumGARCIA, Maria Flávia Karoline dos Santos 07 August 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-07T17:45:43Z
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Previous issue date: 2015-08-07 / CAPES / Leishmaniose visceral é uma zoonose em crescente expansão no Brasil, causada pela Leishmania infantum chagasi, tendo o cão como principal reservatório em ambiente urbano, mantendo o ciclo de transmissão nesses locais. Esta enfermidade é transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. A síntese de novos materiais híbridos, como o nanocompósito de ouro e polianilina (PANI) tem permitido a obtenção de sistemas com propriedades físico-químicas destacadas. Estes compósito híbridos destacam-se porque são formados da junção de dois ou mais materiais de propriedades diferentes, formando um com melhores propriedades. A modificação da superfície do eletrodo com compósitos híbridos tem levado ao desenvolvimento de sensores eletroquímicos com extrema eficiência. O objetivo deste trabalho foi a avaliação voltamétrica e impedimétrica de um sistema nanoestruturado baseado em PANI-AuNps na presença de K3[Fe(CN)6/K4[Fe(CN)6] (1:1), 10 mM, como par redox, para o diagnóstico de Leishmania infantum. Posteriormente o sistema foi avaliado utilizando-se uma sequência primer específico para L. infantum podendo-se assim avaliar a hibridização da fita complementar. As etapas de modificação do eletrodo são observadas na Espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE) na faixa de frequência de 100 mHz a 100 KHz, através do aumento gradativo do diâmetro do semicírculo de Cole-Cole após a adição dos componentes do sistema. Portanto, foi observado um aumento da resistência de transferência de carga (RTC) devido à adsorção destes componentes. O processo de interação do primer-genoma da L. Infantum foi evidenciado através do aumento da RTC devido ao fenômeno de hibridização das fitas complementares, obtendo como resposta um baixo limite de detecção 0.01 pg mL-1.Como esperado, respostas similares foram observadas através da técnica de Voltametria cíclica (VC) na faixa de varredura -0,2V a 0,7V, onde o eletrodo de ouro mostra correntes de pico anódicas e catódicas bem definidas. Posteriormente, após adsorção do compósito PANIAuNps há redução das correntes, sendo mais expressa após adsorção do primer e do genoma. Além das análises de EIE e VC, utilizamos a MEV onde visualizamos os aspectos mais detalhados da modificação da superfície do sistema. Nossos resultados indicaram uma boa sensibilidade, e desta forma o sistema sensor desenvolvido neste trabalho é uma alternativa viável para a biodetecção de leishmaniose. / Visceral leishmaniasis is a zoonosis becoming increasingly widespread in Brazil, caused by Leishmania infantum chagasi, with the dog as the main reservoir in urban environment while maintaining the transmission cycle in these locations. This disease is transmitted by the sand fly Lutzomyia longipalpis. The synthesis of new hybrid materials such as polyaniline (PANI) associated with gold nanoparticles (AuNPs) has allowed the obtaining of systems with physicochemical properties highlighted. These hybrid composite is distinguished because they are formed from the joining of two or more different materials properties, forming with better properties. The electrode surface modification with hybrid composites has led to the development of electrochemical sensors with extreme efficiency. The objective of this work was the voltammetric evaluation and prevent metric of a nanostructured system based on PANI-AuNPs in the presence of K3 [Fe (CN) 6 K4 [Fe (CN) 6] (1: 1), 10 mM, as redox couple for the diagnosis of Leishmania infantum. Subsequently the system was carried out by using a sequence specific primer for L. infantum can be thus evaluate the complementary strand hybridization.The modification steps are observed in the electrode electrochemical impedance spectroscopy (EIS) in the frequency range of 100 mHz to 100 KHz, through the gradual increase of the Cole-Cole semicircle diameter after the addition of system components. Therefore, an increase in charge transfer resistance was observed (RTC) due to the adsorption of these components. The interaction primer-genome of L. infantum was evidenced by increasing the RTC due to the phenomenon of hybridization of complementary strands, obtaining as a reply lower detection limit of 0.01 pg ml-1.As expected, similar responses were observed by cyclic voltammetry technique (VC) in the scan range -0,2V to 0.7V, where the gold electrode shows peak currents anodic and cathodic well defined. Subsequently, after adsorption of the composite PANIAuNps no reduction in current, it is more expressed after adsorption of the primer and the genome. In addition to the analysis of EIS and VC, we use the SEM where we visualize the most detailed aspects of system surface modification. Our results indicated good sensitivity, and thus the sensor system developed in this work is a viable alternative for bio-detection Leishmaniasis.
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Obtenção e caracterização de imunoconjugados baseados em pontos quânticos de CdTe para diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar AmericanaCARVALHO, Kilmara Higia Gomes 01 September 2014 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-17T20:27:52Z
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Previous issue date: 2014-09-01 / FACEPE / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma infecção causada por várias espécies de protozoários pertencentes à ordem Kinetoplastida, família Trypanosomatidae e ao gênero Leishmania, tendo L. (Viannia) braziliensis como agente etiológico de maior incidência no Brasil. A LTA é uma doença endêmica no país e que ainda apresenta dificuldades de diagnóstico laboratorial. Os pontos quânticos (PQ) são nanocristais fluorescentes de materiais semicondutores que recentemente vêm sendo empregados como fluoróforos no desenvolvimento de novos métodos imunoquímicos como alternativa diagnóstica, visando inovar e otimizar as técnicas atuais. O presente estudo demonstrou a viabilidade dos PQ como insumos fluoróforos em ensaios sorológicos para diagnóstico da LTA. PQ fluorescentes de Telureto de Cádmio (~3 nm) estabilizados com ácido mercaptosuccínico (AMS) foram preparados em meio coloidal e acoplados covalentemente à anti-imunoglobulinas G, via carbodiimida. Foi desenvolvida uma técnica de análise semiquantitativa para o monitoramento da bioconjugação baseada em leitura de fluorescência em microplacas negras. Os bioconjugados obtidos (PQ-Anti-IgG humana) foram submetidos à avaliação de desempenho para a pesquisa de anticorpos humanos anti-L. (Viania) braziliensis. pelas técnicas de citometria de fluxo, imunofluorescência indireta (IFI) e por ensaio imunofluorescente de adsorção baseado em pontos quânticos (PQ-FLISA). Empregou-se as formas promastigotas da cepa de referência (MHOM/BR/75/M2903) de Leishmania (V.) braziliensis na IFI e citometria de fluxo, enquanto que no PQ-FLISA utilizou-se o antígeno solúvel bruto de L. (V.) braziliensis. Os experimentos realizados por meio das técnicas de citometria de fluxo, IFI e PQ-FLISA em imunodiagnóstico para LTA demonstraram a afinidade dos conjugados obtidos de CdTe/AMS-Anti-IgG em se ligar a imunoglobulinas G, fornecendo resposta diferencial entre controles e amostras analisadas demonstrando a capacidade destes materiais como novos insumos em imunodiagnósticos. / The American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is an infection caused by various species of protozoa belonging to the Kinetoplastida order, family Trypanosomatidae of the Leishmania genre. The L. (V.) braziliensis genus is the most prevalent ethiologic agent of ATL in Brazil. ATL is endemic in the countrie and still presents difficulties in its laboratorial diagnosis. Quantum dots (QDs) are fluorescent semiconductor nanocrystals that have been applied as markers in the development of new immunochemical methods as diagnostic alternative protocols, aiming to innovate and optimize as current techniques. The present study demonstrated the feasibility of QDs as new fluoroimmunoassay active material for the serological diagnostic of ATL. Fluorescent CdTe QDs (~3 nm) stabilized with mercaptosuccinic acid (MSA) were prepared in aqueous colloidal media and coupled covalently to antiimmunoglobulin G by carbodiimide. A semiquantitative technique using a fluorescence plate reader was developed to monitor the bioconjugation procedure. The human QD-anti-IgG bioconjugates were tested for the detection of human antibodies against L (Viania) braziliensis, applying flow cytometry, indirect immunofluorescence (IIF) and adsorption fluoroimmunoassay (QD-FLISA). The promastigote forms of the reference strain (MHOM / BR / 75 / M2903) of Leishmania (V.) braziliensis were used in IFI and flow cytometry, whereas in the QD-FLISA the crude soluble antigen of L. (V.) braziliensis was used. The analysis of all the data demonstrated the capacity of the CdTe/MSA-Anti-IgG bioconjugates to bind to immunoglobulin G and succesfully detect the LTA positive serum compared to the controls. The results showed that these materials may be applied as new tools in the diagnosis of LTA.
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Avaliação farmacológica de novas hidrazonas, candidatas a fármacos leishmanicida e tripanocidaCOSTA, Lívia Bandeira 21 August 2015 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-09T20:04:46Z
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Previous issue date: 2015-08-21 / CAPES / As diversas formas de Leishmanioses e a doença de Chagas apresentam grande impacto na qualidade de vida dos indivíduos acometidos. Não existem vacinas para humanos disponíveis para essas enfermidades e as drogas utilizadas no tratamento apresentam efeitos adversos e eficácia limitada. Neste contexto, compostos orgânicos vêm sendo testados como alternativa terapêutica. Dentre esses, destacam-se as hidrazonas, moléculas que possuem ação antiparasitária entre outras atividades farmacológicas. A triagem de compostos, utilizando a metodologia atual de ensaios de alto rendimento (High-throughput screening-HTS), possibilita avaliar uma grande quantidade de moléculas candidatas com eficiência, baixo custo e confiabilidade. No presente trabalho, foram avaliadas as atividades leishmanicida, tripanocida e citotóxica de 50 hidrazonas (tiossemicarbazonas, tiazolinonas e tiazóis), através do método HTS. Os resultados demonstraram que 43 compostos não apresentaram citotoxicidade frente às células HepG2 (células de hepatoma humano). Entre esses, sete compostos apresentaram atividade leishmanicida no ensaio de infecção, além de serem inativos no teste de citotoxicidade em células THP-1 (linhagem celular da leucemia humana aguda monocítica). De acordo com os critérios de seletividade, o composto LpQM-15 foi o mais ativo contra Leishmania sp. sendo, por essa razão utilizado para estudos posteriores sobre os seus possíveis mecanismos de ação no parasito. A análise ultraestrutural da atividade desse composto em promastigotas de Leishmania chagasi foi realizada por microscopia eletrônica de transmissão. Com objetivo de analisar alterações morfofisiológicas causadas pelo LpQM-15, parasitos tratados e controles foram submetidos a marcação com Anexina V, Iodeto de Propídio e Rodamina 123, e analisados por microscopia confocal e citometria de fluxo. A análise ultraestrutural relevou aumento do volume da mitocôndria, perfis de membrana mitocondrial concêntricos, inchaço das cisternas do complexo de Golgi e do retículo endoplasmático, ruptura da membrana celular, desorganização das organelas e a forte presença de inclusões lipídicas. O LpQM-15 foi capaz de induzir alterações no potencial de membrana mitocondrial. Além disso, os dados mostraram que este composto, nas concentrações testadas, induziu um mecanismo de morte celular sugestivo de apoptose nos parasitos. Das 43 moléculas não tóxicas frente às linhagens HepG2 e NIH-3T3 (fibroblastos), 12 apresentaram atividade tripanocida. Entretanto, três moléculas exibiram melhores resultados (LpQM-19, LpQM-28 e LpQM-31), corroborados através do modelo de relação quantitativa entre estrutura e atividade (QSAR). Adicionalmente, os compostos selecionados com atividade tripanocida não afetaram a viabilidade de células THP-1. Esses resultados sugerem que as moléculas bioativas frente à Leishmania sp. (LpQM-15) e ao T. cruzi (LpQM-19) são promissoras, apontando-as como candidatas a fármacos contra leishmaniose e doença de Chagas. / The several forms of Leishmaniasis and the Chagas disease are illness that cause a great health impact to the life quality of infected individuals. No human vaccines are available for these diseases and the currently used therapy shows serious adverse effects and limited efficacy. Therefore, the development of new therapeutic strategies is needed. In this regard, several organic compounds have been tested as an alternative therapy. Among these compounds, the hydrazones have been recognized for having a potential antiparasitic activity. The screening of compounds using HTS (high-throughput screening) allows to evaluate a big set of molecules with efficiency, quickness, low costs, and reliability, in a standardized way. In the present work the leishmanicidal, trypanocidal and cytotoxic activities of 50 hydrazones (thiosemicarbazones, thiazolinones and thiazoles) were evaluated using HTS assay. Of the 50 compounds analyzed, 43 did not show cytotoxicity against HepG2 (human hepatocellular liver carcinoma cell line). Among these compounds, seven showed positive activity on the intramacrophage assay besides not presenting cytotoxicity against THP-1 (human monocytic leukemia cell line). According to the selectivity criteria, the LpQM-15 compound was the most effective against Leishmania sp., and in this regard, it was used for further studies on its putative action mechanisms on this parasite. The ultrastructural analysis of Leishmania chagasi promastigotes treated with LpQM-15 revealed an increase in the mitochondrial volume, presence of concentric membranous profiles inside the mitochondrion, the swelling of the Golgi apparatus cisternae and endoplasmic reticulum, disruption of plasma membrane, cellular disorganization and the presence of a number of lipid inclusions. Aiming to evaluate the effects of LpQM-15 on the cell viability and mitochondrial membrane potential treated and untreated cells were submitted to annexin-V/propidium iodide and Rhodamin 123 labelling, respectively and analyzed by confocal microscopy and flow cytometry. LpQM-15 caused alterations in the mitochondrial membrane potential. Furthermore, our results suggest that LpQM-15, at tested concentrations, induced an apoptosis-like death in parasites. In Chapter 2, the trypanocidal and cytotoxic activities of compounds were evaluated. Of the 43 non-toxic compounds against HepG2 and NIH-3T3 (fibroblasts), 12 showed trypanocidal activity. The LpQM-19 LpQM-28 and LpQM-31 compounds showed to be the most effective against T. cruzi, being their trypanocidal activities corroborated by the quantitative structure-activity relationship model (QSAR). The most effective selected compounds against Leishmania sp. and T. cruzi showed no effect on the viability of THP-1. Taken together, our results point the LpQM-15 and LpQM-19 as drug candidates against leishmaniasis and Chagas disease, respectively.
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Síntese e avaliação da atividade biológica dos novos derivados ariloxaetiltiossemicarbazônicosSILVA JUNIOR, Lecilio Soares da 21 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-21 / CNPq / Proteases de Cisteína da família papaína (Clã CA, família C1) tem sido relacionadas como fator-chave na patogênese de várias doenças, entre as quais, o câncer, artrite, osteoporose e infecções microbianas. Isto posto, as enzimas dessa família constituem alvo potencial para o desenvolvimento de estratégias que possam levar ao desenvolvimento de novos fármacos para essas patologias. Várias dessas enzimas têm sido caracterizadas nas espécies de Leishmania, tais como a catepsina L (CPA e CPB) e catepsina B (CPC), as quais têm sido atribuídas o papel de fator de virulência, permitindo-lhes evitar e suprimir o sistema imune do hospedeiro. No câncer, observou-se que as catepsinas eram frequentemente reguladas positivamente, principalmente nos tumores mais agressivos, e sido implicadas em vários processos tumorais, como como proliferação, disseminação, degradação da MEC (Matriz Extra Celular), invasão, angiogênese e metástase. Os inibidores das proteases de cisteína que formam ligação covalente irreversível, embora muito potentes, apresentam uma fraca seletividade e seu perfil toxicológico permanece um problema, já dos inibidores contendo um grupo reativo do tipo reversível como a tiossemicarbazida e seus derivados, pode-se esperar que possuam um melhor perfil de segurança no que diz respeito à sua potencial aplicação como medicamento. Neste contexto foram sintetizados sete novos derivados Ariloxaetiltiossemicarbazônicos, através de uma rota sintética composta de três etapas: formação dos intermediários acetais, através de uma reação SN2 entre o bromo acetaldeído dietil acetal e os diferentes compostos fenólico substituídos em meio básico tendo sido utilizado o KI como catalizador, passando em seguida pela hidrólise dos mesmos e concomitantemente condensação com a tiossemicarbazida, sendo obtidos de forma satisfatória. A elucidação estrutural foi realizada através da análise dos dados espectroscópicos de RMN 1H, 13C e IV. Três compostos foram testados frente a forma promastigota da Leishmania amazonensis, apresentandoatividade leishmanicida dose dependente e superior a droga de referência, o Glucantime, o composto Lss2 mostrou-se quase duas vezes mais potente que a Pentamidina, uma droga utilizada nos casos de resistência a primeira. No teste da atividade antiproliferativa as sete substâncias foram testadas em linhagens de células tumorais numa concentração de 25μg/mL, exibindo uma potência citotóxica que variou de 35,5% a 100%, sendo mais sensíveis às linhagens consideradas de tumores mais agressivos, com o composto Lss7 apresentando atividade superior que a Doxorrubicina para todas as linhagens. / Cysteine protease papain family (CA clan, family C1) has been implicated as a key factor in the pathogenesis of various diseases, including, cancer, arthritis, osteoporosis and microbial infections. So, the enzymes of this family are potential target for the development of strategies that can lead to the development of new drugs for these diseases. Many of these enzymes have been characterized in Leishmania species, such as cathepsin L (CPA and CPB) and cathepsin B (CPC), which have been assigned the responsibility of virulence factors, allowing them to avoid and suppress the immune system host. In cancer, it was observed that cathepsins were often upregulated, especially in more aggressive tumors and tumor been implicated in various processes such as proliferation, dissemination, degradation of ECM (extracellular matrix), invasion, angiogenesis and metastasis. Inhibitors of cysteine proteases that form an irreversible covalent bond, although very potent, have a low selectivity and toxicological profile remains a problem, while inhibitors containing a reactive group such as reversible type thiosemicarbazide and its derivatives, one can expect that have a better safety profile with regard to their potential use as a medicament. In this context seven new derivatives have been synthesized Ariloxaetiltiossemicarbazônicos, through a synthetic route comprises three steps: formation of acetals intermediate over the SN2 reaction between bromo acetaldehyde diethyl acetal and the various substituted phenolic compounds under alkaline conditions have been used as KI catalyst, followed by passing the same hydrolysis and condensation with thiosemicarbazide concomitantly being achieved satisfactorily. The structural elucidation was performed by analysis of spectroscopic data of RMN 1H, 13C and IV. Three compounds were tested against Leishmania amazonensis promastigote form, with dose-dependent leishmanicidal activity and greater than the reference drug, Glucantime, Lss2 compound proved to be almost twice as potent as pentamidine, a drug used in cases of resistance to first. In the test the antiproliferative activity of the seven compounds were tested on tumor cell lines at a concentration of 25 mcg/ml, exhibiting a cytotoxic potency that ranged from 35.5% to 100%, being more sensitive to strains considered more aggressive tumors with Lss7 compound showing higher activity than doxorubicin for all strains.
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AVALIAÇÃO do Papel do Agonista de Tlr1/2 (pam3csk4) na Potencialização do Efeito Protetor da Vacina Laag Administrada Por Via Intranasal Contra a Leishmaniose Visceral Murina.DIAS, E. L. 05 September 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-09-05 / PAM3CSK4 (PAM) é um agonista sintético de TLR1/2 composto por um lipopeptídeo triaciletado que imita a lipoproteína de bactérias e que apresenta uma potente capacidade em induzir atividade pró-inflamatória mediada por ativação de NF-kB. No presente estudo, foi investigada a capacidade da imunização intranasal com antígenos totais de promastigotas de L. amazonensis (LaAg) associados ao adjuvante PAM em potencializar a resposta imune imunogênica antígeno em camundongos. Assim, camundongos BALB/c foram imunizados por via intranasal (instilação nasal) com 20 μg de LaAg associados com 20 μg do adjuvante PAM em doses intervaladas por 7 dias. PBS, LaAg ou PAM sozinhos foram utilizados como controle. A dosagem das transaminases e da creatinina no soro animais demonstraram a biocompatibilidade e segurança da combinação LaAg/PAM. Os camundongos vacinados com LaAg/PAM demostraram maior reação de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH) 24 e 48 horas, respectivamente, após a injeção de 20 μg de LaAg na pata traseira, quando comparado ao grupo controle. Além disso, em comparação aos outros grupos, os esplenócitos de animais vacinados com LaAg/PAM produziram mais IFN-γ, TNF-α e IL-4 depois do reestimulo in vitro com o antígeno LaAg (50 μg/mL). Células analisadas ex vivo, demonstraram que a combinação LaAg/PAM não alterou a frequência das populações de células CD4+ e CD8+ de memória e totais no baço. A vacinação com LaAg/PAM foi capaz de induzir a redução no parasitismo do fígado, em comparação com o grupo não tratado. Os animais vacinados com LaAg/PAM demostraram um aumento significativo na produção de IFN-γ e a diminuição na produção de IL-4 nos sobrenadantes do baço. Além disso, observou-se um aumento significativo na produção de NO nos sobrenadantes do fígados dos animais vacinados com LaAg/PAM. Em conjunto, nossos dados demonstram, pela primeira vez a possibilidade de imunização intranasal com os antígenos totais de L. amazonensis (LaAg) associados com PAM como um mecanismo eficaz de indução de imunogenicidade.
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EFEITO IN VITRO DO ALFA-BISABOLOL E SEUS DERIVADOS SOBRE MACRÓFAGOS E FORMAS PROMASTIGOTAS E AMASTIGOTAS DE Leishmania amazonensis e L. infantumPERIN, L. R. 13 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-13 / O tratamento para a leishmaniose tegumentar e visceral tem um custo elevado e uma alta toxidade para o organismo, com isso, vem-se buscando alternativas. O alfabisabolol, um óleo essencial presente em várias plantas, é descrito como um bom agente leishmanicida. O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito in vitro, de diferentes concentrações, do alfa-bisabolol e seus derivados sintéticos sobre os macrófagos e formas promastigotas e amastigotas de Leishmania amazonensis e L. infantum. Avaliar se os derivados tem resultados melhores contra os parasitos e menor toxicidade, que o alfa-bisabolol. Para atividade contra as formas promastigotas, a L. amazonensis e L. infantum foram plaqueadas em placas de 96 poços e tratadas com diferentes concentrações do alfa-bisabolol e seus derivados (P1, P2 e P3), em um experimento foi feito a contagem das Leishmania spp. em microscópio óptico nos tempos de 24, 48 e 72 horas e no outro foi avaliado a viabilidade e feito o IC50 de cada composto no tempo de 48 horas. No teste de citotoxicidade, macrófagos foram plaqueados em placas de 96 poços e tratados com as mesmas concentrações dos compostos da avaliação das formas promastigotas, após 48 horas foi analisado a viabilidade e o CC50. Na avaliação da atividade contra as formas amastigotas, os macrófagos foram infectados e tratados com diferentes concentrações dos compostos. Após 48 horas de tratamento foi observado em microscópio óptico a porcentagem de macrófagos infectados e o número de amastigotas para cada macrófago. Foi calculado o índice de seletividade através da divisão do CC50 dos macrófagos pela IC50 das Leishmania spp. Para avaliação da carga intracelular de Leishmania spp. foi feito a infecção dos macrófagos e após as 48 horas de tratamento as células foram lisadas para liberar as amastigotas e analisar a viabilidade e a capacidade das mesmas se transformarem novamente em promastigotas. Foi analisado a morfologia, em microscópio óptico, de promastigotas tratadas com os compostos. Os resultados foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) e teste de tukey para comparação das médias e feito o cálculo do IC50, com o software GraphPad Prism 5.0.4. O alfa-bisabolol (IC50: 3,43 µg/mL) apresentou uma melhor atividade contra as formas promastigotas da L. amazonensis, para a L. infantum o melhor foi P1 (IC50: 9,1 µg/mL). O composto com menor toxidade para os macrófagos foi o P3 (CC50: 31,23 µg/mL). Na atividade contra as formas amastigotas o P3 (IC50:
3,39 µg/mL) e o alfa-bisabolol (IC50: 7,629 µg/mL) foram melhores para a L.
amazonensis e L. infantum, respectivamente. Considerando o índice de seletividade alfa-bisabolol e o P1 foram mais promissores para as formas promastigotas de L. amazonensis e L. infantum, respectivamente. E para a forma amastigota o derivado P3 foi melhor. Além disso, todos os compostos diminuem a capacidade das amastigotas de se transformarem novamente em promastigotas Observou que as promastigotas tratadas tinham presença de vacúolos e alteração do formato, mudança no número de núcleos e cinetoplasto.
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Identificação dos vetores da Leishmaniose tegumentar americana em Altos, Estado do PiauíVasconcelos, Sílvia Alcântara January 2017 (has links)
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silvia_vasconcelos_ioc_mest_2017.pdf: 3587086 bytes, checksum: 4d78bababf4956d9a42fb96d0a2d0446 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma antropozoonose tropical negligenciada que acomete o homem e animais silvestres. A transmissão ocorre através da picada do flebótomo infectado com a Leishmania. A LTA tem apresentado elevada incidência em algumas regiões do estado do Piauí e tem despertado a atenção da vigilância epidemiológica e dos serviços de saúde por ser uma patologia relativamente recente no estado. A procura por potenciais vetores da leishmaniose tegumentar no Piauí é de grande importância entomológica e epidemiológica pela carência de estudos nessa área, o qual permitirá estratégias de controle destes insetos. O objetivo deste estudo foi identificar os potenciais vetores da LTA em áreas de surto na cidade de Altos, município este que tem apresentado altas taxas de detecção de casos da doença nos últimos dez anos. Para este estudo, foram listados os endereços com registros de notificação da doença por meio do Sistema de Informação de Agravos de Notificação. Foram instaladas armadilhas luminosas tipo CDC nas regiões com maior ocorrência de notificações, abrangendo zona urbana e zona rural. Oitenta e seis coletas foram realizadas em 12 bairros da cidade de Altos. As capturas ocorreram de outubro de 2016 a janeiro de 2017. O material capturado foi conduzido ao laboratório de entomologia para seleção dos flebótomos e preparo para identificação O método de preparo das espécies para identificação foi o de Young e Duncan (1994). Foram identificados 1.308 espécimes de flebótomos, sendo 1.300 de Lutzomyia longipalpis, 06 Lutzomyia whitmani, 01 Lutzomyia sordelli e 01 Lutzomyia carmelinoi. Destacou-se uma variação anatômica verificada em três espécimes de Lutzomyia longipalpis, o que demonstra o predomínio da referida espécie em Altos no período de captura. O presente trabalho traz uma contribuição ao identificar flebótomos presentes na cidade de Altos, entre eles Lutzomyia whitmani, flebótomo incriminado como transmissor da LTA no Brasil e nos ajuda a começar a entender os mecanismos de transmissão da LTA no Piauí / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is a neglected tropical zoonosis that affects humans and wild animals. Transmission occurs through the bite of the sandfly infected with Leishmania. ACL has a high incidence in some regions of Piauí state and it has attracted the attention of epidemiological surveillance and a health service is a relatively new disease in the state. The study of potential vectors of cutaneous leishmaniasis in Piaui still unknown and is of great epidemiological and entomological importance in this area and will enable control strategies. Previous studies have only address vectors of visceral leishmaniasis. The aim of this study was to identify potential vectors of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) in an area of outbreak in the city of Altos. This municipality has shown a high case detection rate of ACL in the past decade. For this study, we initially accessed notification records of ACL through the Information System for Notifiable Diseases Later luminous type CDC traps were installed in regions with higher incidence of notifications, including urban and rural areas. A total of 86 sand fly captures were performed in 12 different neighborhoods in Altos, between October 2016 and January 2017. Captured sand flies were taken to an entomology laboratory for separation of sandflies and preparation for identification. Identification of sand fly species was performed according to Young and Duncan (1994). A total of 1.308 specimens were identified, including Lutzomyia longipalpis (n= 1.300), Lutzomyia whitmani (n= 06), Lutzomyia sordelli (n= 01) and Lutzomyia carmelinoi (n= 01). An anatomical variation was identified in three Lutzomyia longipalpis specimens, the predominant sand fly species in Altos. This work suggests that Lutzomyia whitmani, among the captured sandflies, might be responsible for transmitting ACL in Brasil contributing to the understanding of ACL transmission in Piauí
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