Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-24Bitstream added on 2014-06-13T19:04:08Z : No. of bitstreams: 1 000735718.pdf: 2141423 bytes, checksum: 581a76413b45fc590a05b11af8c88bbc (MD5) / O câncer colorretal (CCR) um dos principais tipos de tumor em todo mundo. Em alguns casos observa-se forte influência hereditária em seu desenvolvimento nas formas familiares, enquanto que na maioria dos pacientes (85%) essa doença se apresenta na forma esporádica, cuja origem é multifatorial, com grande influência da alimentação, tabagismo e etilismo, além de processos inflamatórios crônicos. Seu tratamento convencional consiste em intervenção cirúrgica acompanhada de terapias com doses elevadas de drogas citotóxicas. Apesar dessa intervenção radical, recidivas em pacientes com CCR são muito freqüentes, apontando para a necessidade de abordagens mais efetivas e para a possibilidade de combinação de diferentes formas de tratamento. Dada a importância do CCR como problema de saúde pública e da possibilidade de modulação do sistema imunológico dos pacientes, o presente trabalho é apresentado em dois capítulos, sendo o primeiro uma revisão de literatura sobre a doença propriamente dita, abordando os tratamentos empregados, a influência da resposta inflamatória em sua gênese e o papel da resposta imunológica na doença. Essa revisão foi redigida de acordo com as normas da revista Cancer Science. O segundo capítulo, redigido seguindo as normas da revista Cancer Immunology, Immunotherapy, refere-se ao desenvolvimento do estudo experimental, no qual foi avaliada a eficiência funcional de células dendríticas (DCs) humanas transfectadas com RNA total de células tumorais pré-tratadas com concentrações não tóxicas ou efetiva mínima de 5-fluorouracil (5-FU). Os resultados obtidos indicam que a transfecção das DCs com RNA de células tumorais expostas à droga aumenta sua capacidade de apresentação de antígenos alogênicos aos linfócitos T e de indução de resposta tumor-específica (geração in vitro de linfócitos T citotóxicos e produção de INF-γ). Esse achado mostra... / Colorectal cancer (CRC) is one of the most frequent tumor types worldwide, mainly in developed countries, and can be classified as inheritedfamilial (25%) or sporadic (75%) forms, which suggest an important relationship of gene-gene and gene-environment interactions in the development of the disease. CRC is characterized by genetic and epigenetic alterations, and is histologically featured by the infiltration of inflammatory cells among malignant and stromal cells. The most common inflammatory cells in tumor tissue are neutrophils, mast cells, natural killer cells, macrophages and dendritic cells as well as lymphocytes. However, the presence of these cells in CRC can both be associated with cancer inhibition and tumor progression, since the development a chronic inflammatory response can be a predisposal condition for the development of this type of cancer. Considering these multifactorial aspects of CRC development, in this review we present data on the main genetic and epigenetic aspects, and the influence of diet and inflammation on tumor progression. Moreover, we discuss the importance of dendritic cells on CRC immunological responsiveness and their use as therapeutic vaccine for cancer immunotherapy

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:44:56Z : No. of bitstreams: 1 penhafilho_rac_dr_jabo.pdf: 670109 bytes, checksum: 048e4ba89a0df3d41f36db27a93c0f9b (MD5) / Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... / Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below)

A presente tese aborda os principais aspectos da biologia do vírus Epstein-Barr (EBV), suas relações com doenças, seu potencial uso como ferramenta para a biologia celular e a reprodutibilidade desta célula para o auxílio no diagnóstico de Erros Inatos do Metabolismo (EIM) através da medida de atividades de hidrolases lisossômicas. Os objetivos deste trabalho foram investigar as alterações celulares e morfológicas nos linfócitos B infectados com EBV, afim de confirmar a transformação celular nos 12 dias de cultura, para certificação do protocolo empregado; determinar a atividade, no momento da coleta (12 dias de cultivo) e imediatamente após 180, 365 e 730 dias de criopreservação em nitrogênio líquido, das enzimas β-galactosidase, β-glicosidase, a-galactosidase, a- glicosidase e a-iduronidase em Linhagens Celulares Linfoblastóides (LCL) transformados com EBV de indivíduos normais e determinar a atividade, no momento da coleta (12 dias de cultivo) e imediatamente após 180 dias de criopreservação das enzimas β-glicosidase, a-galactosidase e a- iduronidase em LCLs transformados com EBV de pacientes com doenças de Gaucher e Fabry e Mucopolissacaridose tipo I. Este trabalho mostrou que o protocolo empregado foi eficiente na transformação de linfócitos B pelo EBV através das 3 ferramentas utilizadas: imunohistoquímica, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia confocal. Foram observados, através destes instrumentos, o aparecimento de clusters celulares, vacúolos citoplasmáticos, binucleação e aumento no conteúdo de organelas, o que é esperado em células infectadas por EBV. Foi observado também que as células cultivadas por 12 dias com EBV apresentavam a atividade da β-glicosidase e da a-iduronidase diferente significativamente daquela de linfócitos não infectados. Após 6 meses, 1 e 2 anos de criopreservação das células transformadas com EBV, em nitrogênio líquido, as enzimas β-galactosidase, β-glicosidase, a-galactosidase, a-glicosidase e a-iduronidase mantiveram suas atividades semelhantes aquelas após 12 dias de cultivo celular. O mesmo ocorreu quando utilizamos amostras de pacientes com doença de Gaucher, Fabry e Mucopolissacaridose tipo I após 6 meses de criopreservação. Este trabalho mostrou que o protocolo empregado foi eficiente na transformação de linfócitos B pelo vírus Epstein Barr e que uma vez congeladas até pelo menos 1 ano em nitrogênio líquido, todas as enzimas analisadas mantém suas atividades semelhantes aquelas após 12 dias de cultivo celular. / The present study addresses the main aspects of the biology of the Epstein-Barr virus (EBV) and its relationships with diseases, its potentials as a tool in cell biology, and the reproducibility of EBV-infected cells to assist in the diagnosis of Inborn errors of metabolism (IEM) using a measure of the activities of lysosomal hydrolases. The objectives of this study were (i) to investigate the cellular and morphological changes in B-lymphocytes infected with EBV to confirm cell transformation within the 12-day culturing period in order to verify the applicability of the method; (ii) to determine the activity of the enzymes β- galactosidase, β-glucosidase, α-iduronidase, α-galactosidase and α- glucosidase in lymphoblastoid cell lines at the moment of collection (12-day culturing) and immediately after 180, 365 and 730 days in lymphoblastoid cell lines (LCLs) transformed with EBV of normal individuals frozen in liquid nitrogen and (iii) to determine the activities of the enzymes β-glucosidase, α- galactosidase and α-iduronidase at the moment of collection (12 days of culturing) and immediately after 180 days in LCLs transformed by the EBV of patients with Gaucher and Fabry diseases and with muccopolysaccharidosis type I frozen in liquid nitrogen. The results showed that the protocol was efficient to transform B-lymphocytes by EBV using three tools: immunohistochemistry, transmission electron microscopy and confocal microscopy. The technique afforded to observe the emergence of clusters, cytoplasm vacuoles, binucleatoon and increased organelle contents, which are expected in EBV-infected cells. Also, it was observed that cells cultured with EBV for 12 days presented β-glucosidase and α-iduronidase significantly different from that of non-infected lymphocytes. Activity of the enzymes β- galactosidase, β-glucosidase, α-galactosidase. α-glucosidase and α- iduronidase measured after 180, 635 and 730 days in cryopreservation of EBVtransformed cells in liquid nitrogen were similar to that of samples after 12-day culturing of cells. The same was observed when we used samples from patients with Gaucher, Fabry and muccopolysaccharidosis type I after a 6-month cryopreservation period. This study shows that the protocol was efficient in transforming B-lymphocytes by EBV and that the activities of all enzymes frozen for at least one year in liquid nitrogen remained similar to that of samples collected after 12-day culturing.

Submitted by Valquíria Barbieri (kikibarbi@hotmail.com) on 2018-04-18T21:33:42Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Helen Aguiar Lemes da Silva.pdf: 1095638 bytes, checksum: 6455f6c98e8a5cf2bacf4cd9e2f12fae (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-04-27T17:33:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Helen Aguiar Lemes da Silva.pdf: 1095638 bytes, checksum: 6455f6c98e8a5cf2bacf4cd9e2f12fae (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T17:33:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Helen Aguiar Lemes da Silva.pdf: 1095638 bytes, checksum: 6455f6c98e8a5cf2bacf4cd9e2f12fae (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / FAPEMAT / CNPq / A leishmaniose tegumentar americana é causada por protozoários do gênero Leishmania e a transmissão ocorre através da picada de flebotomíneos. É uma doença infecciosa, que acomete pele e mucosa. A resposta imune celular tem sido apontada como um importante fator na progressão das lesões da leishmaniose tegumentar. A proteína anti-inflamatória anexina-A1 é reconhecida como um importante mediador no processo inflamatório. O objetivo deste trabalho foi quantificar a expressão da anexina-A1, nos macrófagos e nas células T CD4+ e T CD8+ de fragmento da pele de paciente com leishmaniose cutânea, e correlacionar com o aspecto histopatológico. Biópsias de pele de pacientes (n=55) com leishmaniose cutânea foram processadas e analisadas. Para caracterizar a espécie de Leishmania foi utilizada PCR–ITS1/RFLP, identificando que todas as amostras biológicas apresentavam o parasita Leishmania brasiliensis. Na análise histopatológica, observou-se intensa migração leucocitária, evidenciando infiltrado histiolinfoplasmocitário. Em seguida foi realizada a determinação da expressão de anexina-A1 nos macrófagos e nas células T CD4+ e T CD8+ dos pacientes pela técnica de imunofluorescência. Na quantificação da expressão da anexina-A1, observou-se um aumento dessa proteína nos macrófagos da pele de pacientes com leishmaniose cutânea, quando comparados com essas células em individuos saudáveis (controle: 64,6 ± 3,0 UA; LT: 107,0 ± 2,7 UA; p<0,0001). Esses dados podem indicar a atuação dessa proteina durante o processo de fagocitose. Além disso, os macrófagos presentes nas lesões do tipo reação exudativa necrótica da pele de pacientes com leishmaniose cutânea apresentavam maior expressão dessa proteína (123,5 ± 6,9 UA) quando comparados com as células presentes nas lesões do tipo reação exudativa granulomatosa e reação exudativa celular (100,0 ± 4,1, p<0,01; e 104,6 ± 3,0, p<0,05). Esses dados podem indicar que, nas lesões do tipo reação exudativa necrótica, os macrófagos expressam mais anexina-A1 devido a ativação celular para fagocitose dos parasitas e de fragmentos celulares provenientes das regiões necróticas. Com relação as células T CD4+ e T CD8+, nossas análises demonstraram que essas células apresentavam maiores níveis de anexina-A1 nas lesões do tipo reação exudativa celular (TCD4+: 123,9 ± 11,6 UA) (TCD8+: 121,3 ± 9,0 UA), quando comparadas com as células presentes nas lesões do tipo reação exudativa granulomatosa e reação exudativa necrótica (TCD4+: 87,7 ± 5,2, p<0,05; e 53,7 ± 15,7, p<0,01) (TCD8+: 76,0 ± 11,4, p<0,05; e 77,0 ± 10,4, p<0,05). Esses dados demonstram que essa proteína está expressa durante a resposta celular frente aos antígenos da Leishmania. Além disso, a expressão aumentada da anexina-A1 nas células T presentes nas lesões do tipo reação exudativa celular pode ser explicada pelo aspecto mais disseminado do infiltrado histiolinfoplasmocitário, com maior presença de edema e ausência de contenção da infecção como ocorre nas lesões do tipo reação exudativa granulomatosa. Em conclusão, os dados apresentados nesse trabalho, em associação com os dados da literatura, demonstram a relevância da dinâmica da anexina-A1 na regulação do sistema imunológico durante a leishmaniose cutânea. Esses dados trazem, pela primeira vez, uma contribuição para o entendimento do papel da anexina-A1 na ativação dos macrófagos e células T na leishmaniose cutânea. Estudos futuros permitirão o entendimento preciso do mecanismo de ação da anexina-A1 no processo infeccioso da leishmaniose cutânea. / American tegumentary leishmaniasis is caused by protozoa of the genus Leishmania, and the transmission occurs through the sandflies bite. It is an infectious disease that affects the skin and mucosa. The cellular immune response has been identified as an important factor in the progression of tegumentary leishmaniasis lesions. The anti-inflammatory protein annexin A1 is recognized as an important mediator in the inflammatory process. The aim of this study is quantify the annexin-A1 expression in macrophages and CD4+ and CD8+ T cells from skin fragment of patients with cutaneous leishmaniasis, and correlates with histopathological aspects. Skin biopsies of patients (n= 55) with cutaneous leishmaniasis were processed and analyzed. To characterize the species of Leishmania, it was used ITS1-PCR/RFLP, which identified that all biological samples had parasite Leishmania brasiliensis. In the histological analysis, there was an intense leukocyte migration, showing lymphohistiocytic and plasmocytic infiltrate. Then, it was conducted the determination of annexin-A1 expression in macrophages and CD4+ and CD8+ T cells by immunofluorescence technique. In annexin-A1 expression quantification, there was an increase of this protein in macrophages from patients skin with cutaneous leishmaniasis, when compared to these cells from healthy individuals (control: 64.6 ± 3.0 AU, LT: 107.0 ± 2.7 AU; p <0.0001). These data might indicate the role of this protein in the phagocytic process. In addition, macrophages present in the necrotic exudative reaction skin lesions of patients with cutaneous leishmaniasis showed higher expression of the protein (123.5 ± 6.9 AU) when compared with cells present in the granulomatous exudative reaction and cellular exudative reaction lesions (100.0 ± 4.1, p <0.01, and 104.6 ± 3.0, p <0.05). These data may indicate that in necrotic exudative reaction lesions, macrophages express more annexin-A1 due to cell activation induce by phagocytosis of parasites and cellular debris from necrotic regions. Regarding CD4+ and CD8+ T cells, our analysis showed that these cells had higher levels of annexin-A1 in cellular exudative reaction lesions (CD4+: 123.9 ± 11.6 AU) (CD8+: 121.3 ± 9.0 AU) when compared with cells present in necrotic exudative reaction and granulomatous exudative reaction lesions (CD4+: 87.7 ± 5.2, p <0.05; and 53.7 ± 15.7, p <0.01) (CD8+ T: 76.0 ± 11.4, p <0.05; and 77.0 ± 10.4, p <0.05). These data demonstrate that this protein is active during the cellular response to Leishmania antigens. Furthermore the increased annexin-A1 expression in T cells from cellular exudative reaction lesion could be explained by the widespread aspect of lymphohistiocytic and plasmocytic infiltrate, with higher presence of edema and absence infection containment, as occurs in the granulomatous exudative reaction lesions. In conclusion, the data presented here, together with the literature, show the relevance of the annexin-A1 dynamics in the immune system regulation during cutaneous leishmaniasis. These data shows for the first time, a contribution to understanding the role of annexin-A1 in the activation of macrophages and T cells in the cutaneous leishmaniasis. Future studies will allow the accurate understanding of the annexin-A1 mechanism of action in the infection process of cutaneous leishmaniasis.

Orientador: Ramon Kaneno / Banca: Ângela Maria VC Soares / Banca: Denise Fecchio / Banca: Andréa Vanessa Domeneghini / Banca: Silvia B. Mazzon / Resumo: O câncer colorretal (CCR) um dos principais tipos de tumor em todo mundo. Em alguns casos observa-se forte influência hereditária em seu desenvolvimento nas formas familiares, enquanto que na maioria dos pacientes (85%) essa doença se apresenta na forma esporádica, cuja origem é multifatorial, com grande influência da alimentação, tabagismo e etilismo, além de processos inflamatórios crônicos. Seu tratamento convencional consiste em intervenção cirúrgica acompanhada de terapias com doses elevadas de drogas citotóxicas. Apesar dessa intervenção radical, recidivas em pacientes com CCR são muito freqüentes, apontando para a necessidade de abordagens mais efetivas e para a possibilidade de combinação de diferentes formas de tratamento. Dada a importância do CCR como problema de saúde pública e da possibilidade de modulação do sistema imunológico dos pacientes, o presente trabalho é apresentado em dois capítulos, sendo o primeiro uma revisão de literatura sobre a doença propriamente dita, abordando os tratamentos empregados, a influência da resposta inflamatória em sua gênese e o papel da resposta imunológica na doença. Essa revisão foi redigida de acordo com as normas da revista Cancer Science. O segundo capítulo, redigido seguindo as normas da revista Cancer Immunology, Immunotherapy, refere-se ao desenvolvimento do estudo experimental, no qual foi avaliada a eficiência funcional de células dendríticas (DCs) humanas transfectadas com RNA total de células tumorais pré-tratadas com concentrações não tóxicas ou efetiva mínima de 5-fluorouracil (5-FU). Os resultados obtidos indicam que a transfecção das DCs com RNA de células tumorais expostas à droga aumenta sua capacidade de apresentação de antígenos alogênicos aos linfócitos T e de indução de resposta tumor-específica (geração in vitro de linfócitos T citotóxicos e produção de INF-γ). Esse achado mostra ... / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the most frequent tumor types worldwide, mainly in developed countries, and can be classified as inheritedfamilial (25%) or sporadic (75%) forms, which suggest an important relationship of gene-gene and gene-environment interactions in the development of the disease. CRC is characterized by genetic and epigenetic alterations, and is histologically featured by the infiltration of inflammatory cells among malignant and stromal cells. The most common inflammatory cells in tumor tissue are neutrophils, mast cells, natural killer cells, macrophages and dendritic cells as well as lymphocytes. However, the presence of these cells in CRC can both be associated with cancer inhibition and tumor progression, since the development a chronic inflammatory response can be a predisposal condition for the development of this type of cancer. Considering these multifactorial aspects of CRC development, in this review we present data on the main genetic and epigenetic aspects, and the influence of diet and inflammation on tumor progression. Moreover, we discuss the importance of dendritic cells on CRC immunological responsiveness and their use as therapeutic vaccine for cancer immunotherapy / Doutor

Sabe-se que um dos principais problemas odontológicos na clínica de felinos é a gengivite crônica e intratável. Tal afecção pode ser iniciada e/ou exacerbada por agentes virais, como o vírus da imunodeficiência dos felinos (FIV), o Herpesvírus tipo 1 e o Calicivírus. Os gatos da raça Maine Coon apresentam grande predisposição ao desenvolvimento de gengivite-estomatite juvenil e intratável. A depleção de linfócitos T CD4+ e T CD8+ pode exercer papel determinante na iniciação e manutenção das doenças inflamatórias da gengiva. O escopo do presente estudo foi verificar se os animais da raça Maine Coon são mais predispostos à calicivirose, bem como avaliar quantitativamente a resposta imunológica celular, mediada por linfócitos TCD4+ e TCD8+, visando a correlacionar à influência do número de linfócitos na presença e curso da gengivite nesta determinada raça, utilizando-se como controle gatos de outras raças com e sem gengivite. Os valores absolutos médios de linfócitos totais em Maine Coons com gengivite crônica mostraram-se inferiores aos de gatos da raça Maine Coon sem doença oral e de gatos de outras raças com gengivite crônica (p<0,05); os valores médios de linfócitos TCD4+ em Maine Coons com gengivite crônica mostraram-se inferiores quando comparados aos valores de animais da mesma raça, sem doença oral instalada (p<0,05); animais da raça Maine Coon possuem menor relação CD4+:CD8+ quando comparados a animais de outras raças com gengivite crônica e também quando comparados a Maine Coons sem doença oral (p<0,05). O calicivírus está altamente relacionado à ocorrência da gengivite, independentemente da raça estudada, não havendo maior prevalência na raça Maine Coon. O efeito do calicivírus não foi significativo nas alterações de nenhuma das variáveis celulares estudadas. Tais fatos apontam para uma possível predisposição racial ao quadroinflamatório gengival, com alteração de alguns componentes celulares relacionados à imunidade celular. Isto tem como fator importante alertar o clínico frente ao uso de glicocorticóides no tratamento da gengivite crônica nesta raça, visando a evitar maior comprometimento da imunidade celular destes animais. / Chronic untreatable feline gingivitis is widely recognized as one of the major oral diseases seen in feline patients. It can be either triggered or exacerbated by virus such as feline immunodeficiency virus, feline herpesvirus type 1 and calicivirus. One may therefore propose that lymphocytes T CD4+ and T CD8+ depletion can play an important role in initiating and maintaining the inflammatory gingival disease. Maine Coon cats are highly predisposed to juvenile untreatable gingivitis. The purpose of this study was to evaluate whether Maine Coon cats are more predisposed to calicivirus infection and to verify, quantitatively, their immunological cellular response mediated by lymphocytes T CD4+ and TCD8+. The main idea was to investigate the influence imposed by lymphocyte counts in gingivitis development and progression within this breed; for this, we selected non-Maine Coon cats (with and without gingivitis) to serve as controls. Mean absolute values of total lymphocytes in Maine Coon cats presented with gingivitis were inferior than the same values taken for both Maine Coon cats free of oral disease and non-Maine Coon cats with chronic gingivitis (p<0,05); lymphocytes TCD4+ average values in Maine Coon cats with chronic gingivitis were also lower than the ones taken from cats of the same breed but without oral disease (p<0,05). Maine Coon cats have lower CD4+:CD8+ ratio when compared to non-Maine Coon cats with chronic gingivitis as well as with Maine Coon cats without oral disease (p<0,05). The calicivirus is highly involved with the occurrence of gingivitis, no matter the breed being evaluated. The action virus imposes in changing cellular immunology was not significant, at least considering the cellular variables studied. All these lead us to point out a possible breed predisposition to the gingival inflammation, with modification of some cellular components related with cellular immunity. Furthermore, concerning practical terms, these results serve as a relevant alert to the clinicians regarding the use of glucocorticoids for treating chronic gingivitis in this breed, in order to prevent further impairment of cellular immunity of these animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-13Bitstream added on 2014-06-13T20:35:49Z : No. of bitstreams: 1 fattori_kr_me_jabo.pdf: 1180528 bytes, checksum: c9f4f1fa166892babcb54db127d3ed53 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desde estudo foi avaliar a apoptose de linfócitos T do baço e do sangue periférico de cães naturalmente infectados com leishmaniose visceral (LV) apresentado sintomas clínicos da doença e comparar ao observado em cães saudáveis. Treze cães provenientes do CCZA de Araçatuba (SP) área endêmica para leishmaniose visceral canina foram diagnosticados como positivos para a doença utilizando dos três métodos: o ELISA indireto utilizando antígeno total, a imunocromatografia com antígeno rK39 e a PCR. No grupo controle foram utilizados seis cães oriundos de área não endêmica que apresentaram resultados negativos nos testes para Leishmania spp e apresentaram hemograma normal. Após a eutanásia dos cães infectados, o sangue periférico e fragmentos de baço foram coletados para análise da apoptose. As amostras de baço do grupo controle foram retiradas por excisão cirúrgica após sedação, o sangue foi obtido por punção venosa, e coletado em tubos contendo EDTA. As amostras dos dois grupos foram processadas imediatamente após a coleta para determinação de apoptose utilizando dois marcadores diferentes e simultânea marcação para CD3 com anticorpo monoclonal. Nos cães infectados os linfócitos T do sangue periférico e do tecido esplênico mostram um aumento significativo dos níveis de apoptose comparado com o observado em cães controles. Esses resultados sugerem que em cães infectados a imunossupressão da resposta celular associada à infecção crônica pode ser conseqüência da aceleração das taxas de apoptose de células T, esses dados contribuem para o entendimento da resposta imune em cães infectados com L. (L.) chagasi, que pode levar ao desenvolvimento de medidas profiláticas ou preventivas para estes animais / The aim of this study was to evaluate the apoptosis of T lymphocytes in the spleen and peripheral blood of dogs naturally infected with visceral leishmaniasis demonstrating symptoms of the disease and comparing to those observed in healthy dogs. Thirteen dogs from CCZA of Araçatuba, SP endemic area for canine visceral leishmaniasis were diagnosed as positive for the disease using three methods: ELISA using total antigen, the antigen rK39 immunochromatography and PCR. Six dogs from non-endemic area were tested negative in tests for Leishmania spp and had normal blood account. After euthanasia of infected dogs, the peripheral blood and fragments of spleen were collected for analysis of apoptosis. Samples of spleen in the control group were removed by surgical excision after sedation; blood was obtained by venipuncture and collected into tubes containing EDTA. Samples of both groups were processed immediately after collection to determinate of apoptosis using two different markers and simultaneous marking with CD3 monoclonal antibody. In dogs infected T lymphocytes from peripheral blood and spleen tissue showed a significant increasing in levels of apoptosis compared to those seen in control dogs. These results were supposed to be about those dogs in the immunosuppression of the cellular response associated with chronic infection being a consequence of accelerated rates of apoptosis of T cells, these data contributed to understanding the immune response in dogs infected with L. (L.) chagasi, which may lead to the development of prophylactic or preventive procedures for these animals

Made available in DSpace on 2015-05-22T12:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000468627-Texto+Completo-0.pdf: 868809 bytes, checksum: da322f4444f2d9e11e6d453c3af66303 (MD5) Previous issue date: 2015 / Tooth movement in response to orthodontic forces is results from remodeling changes that affect the periodontal ligament and the bone surrounding teeth. This movement may be faster or slower depending on the physical characteristics of the force applied and the biological response induced, and is characterized by zones of compression and tension on the periodontal ligament. Knowledge about the tissue changes generated in this process is essential to plan the movement of teeth and their adjoining structures into a new position without any damage to tissues. In this study, the literature was reviewed to improve our understanding of the cellular, biochemical and molecular phenomena that affect the structures of the periodontal ligament (PL), as well as the alveolar bone surrounding the tooth and involved in the tooth movement that is induced in the process. The purpose of our systematic review was to evaluate studies about cytokines in gingival fluid (GF) during orthodontic treatment, summarize the patterns of cytokine regulation that have been more frequently studied and discuss their clinical implications.Additionally, we investigated changes in immunological and bone modulators in response to the application of orthodontic forces. For that purpose, GF of teeth that were involved in maxillary expansion was evaluated qualitatively to measure interleukin concentrations and their predictive value as a market of inflammatory response intensity and bone turnover during orthodontic movement. The purpose of this investigation was to evaluate whether the force applied on the PL during maxillary expansion affected the composition of the gingival crevicular fluid (GCF), specifically the level of IL-17 on the sides where tension and compression were applied. GCF samples were collected from the mesiobuccal and mesiolingual areas of 32 molars of 16 patients aged 7 to 14 years who had to undergo maxillary expansion.These patients started orthodontic treatment sometime between 2012 and 2013 at the School of Dentistry of the Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS), Porto Alegre, Brazil. Metal bands were placed around the permanent maxillary first molars to hold a modified Hyrax expander. One of the investigators collected clinical data about the sites listed above during activation of the expander. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect interleukin levels. The sites were examined to measure IL-17 before the device was placed and at 1, 7 and 14 days of active use of the expander. The forces applied resulted in an increase in IL-17 expression in periodontal tissues one day after the application of tension and compression at both measurement sites. IL-17 levels tended to be higher (p ≤ 0. 05) seven days after the Hyrax screw was activated. From that time to the fourteenth day, there was a tendency to a decrease in IL-17 levels (p ≤ 0. 05). We concluded that there was an increase in IL-17 expression at both tension and compression sites in response to force application. / O movimento dentário promovido por forças ortodônticas é baseado em alterações remodeladoras que ocorrem no ligamento periodontal e no osso que circundam os dentes. Este movimento pode ocorrer de forma mais rápida ou lenta, dependendo das características físicas da força aplicada e da resposta biológica induzida e é caracterizado por criação de zonas de compressão e tensão no ligamento periodontal. O conhecimento das alterações teciduais geradas é essencial para o planejamento do movimento do dente e de suas estruturas anexas para uma nova posição, sem danos aos tecidos.Neste estudo, uma revisão de literatura teve como objetivo possibilitar a compreensão dos fenômenos celulares, bioquímicos e moleculares que ocorrem nas estruturas do ligamento periodontal (PDL) e, também do osso alveolar ao redor do dente e que estão envolvidos na movimentação dentária induzida.A revisão sistemática teve como objetivo avaliar estudos sobre citocinas no fluido gengival (GCF) durante o tratamento ortodôntico, resumindo os padrões de regulação das citocinas mais estudadas e explorar suas implicações clínicas.Além disso, foram investigadas alterações dos moduladores imunológicos e ósseos em resposta a aplicação da força ortodôntica. Para tanto o fluido gengival de dentes submetidos ao procedimento de expansão maxilar foi avaliado qualitativamente verificando concentrações de interleucinas e seu valor preditivo como marcador da intensidade da resposta inflamatória e turnover ósseo na movimentação ortodôntica. O objetivo da investigação foi avaliar se a força aplicada sobre o ligamento periodontal durante a expansão maxilar se reflete na composição do Fluido do Sulco Gengival (FSG), mais especificamente no nível de interleucina IL-17 dos lados de tensão ou compressão. As amostras do FSG foram coletadas das regiões mesiovestibulares e mésiopalatinas de 32 molares de 16 pacientes com idade entre 7 a 14 anos, que tinham necessidade de expansão maxilar. Estes pacientes iniciaram o tratamento ortodôntico durante o período compreendido entre 2012 e 2013, na Faculdade de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS). Eles receberam anéis nos primeiro molares permanentes superiores para a confecção de um aparelho disjuntor de Hyrax modificado. Os dados clínicos foram coletados por um investigador nas regiões supracitadas durante o período de ativação do aparelho.Empregando-se o ensaio imunoenzimático (ELISA) foram detectados os níveis da interleucina. Os locais foram analisados para IL-17 antes da colocação do aparelho, 1, 7 e 14 dias de uso ativo do aparelho. As forças empregadas resultaram em um aumento da expressão de IL-17 nos tecidos periodontais após um dia de aplicação em ambos os lados, de tensão e compressão. Os níveis de IL-17 tenderam a ser maiores (p ≤ 0,05) após sete dias de ativação do parafuso. Deste momento, até o décimo quarto dia, observou-se uma tendência para diminuição dos níveis de IL-17 (p ≤ 0,05). Concluiu-se que houve um aumento na expressão de IL-17 em ambos os locais, de tensão e compressão, em resposta à aplicação de força.

A utilização da terapia antiretroviral, atualmente mais amplamente acessível, implica na permanência da identificação da resistência viral e monitoramento da doença como itens importantes em adultos e pacientes pediátricos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1. Os principais marcadores da infecção por HIV-1, utilizados no monitoramento da infecção e curso da doença, são as contagens de células T CD4+ e a carga viral. Ambos são úteis como parâmetros indicadores para o início da terapia e na avaliação de sua eficácia. Além disto, a sua associação a testes de genotipagem para a identificação de mutações de resistência viral, pode auxiliar na indicação da conduta clínica mais adequada. No presente estudo, analisamos os valores da carga viral e taxas de linfócitos T CD4+ e CD8+ na avaliação do status imunológico de 25 crianças com indicação para a terapia antiretroviral, condicionando o regime terapêutico aos resultados do teste de genotipagem. A identificação dos subtipos virais foi feita por análise filogenética e a genotipagem incluiu a análise dos genes protease e transcriptase reversa do HIV-1. Dezoito amostras foram agrupadas no subtipo viral B e três no subtipo F1; cepas recombinantes também foram observadas, sendo uma BF, duas BD e uma DF. Dezoito crianças apresentaram mutações conferindo resistência viral aos inibidores da transcriptase reversa análogos de nucleosídeo e sete crianças apresentaram resistência aos inibidores não-análogos, com seis relatando resistência a nevirapina, delavirdina e efavirenz. Além disto, duas crianças, nas quais a terapia havia sido descontinuada dois a três anos antes da avaliação do teste de genotipagem, apresentaram as mutações K101E, K103N e G190A, conferindo resistência às três drogas. As mutações mais frequentes para o gene da transcriptase reversa foram observadas nos codons M41L, M184V e T215FY. Entretanto, dez crianças apresentaram relevante número de mutações de resistência viral, variando entre cinco a dez, que conferiram resistência a no mínimo quatro e até onze drogas antiretrovirais. Para o gene da protease, as mutações de resistência mais comuns foram observadas nos codons M46I, D30N e I54LV. Treze crianças apresentaram resistência viral a, no mínimo, duas e até 12 drogas. A adequação da terapia antiretroviral altamente potente (HAART), de acordo com o padrão de resistência viral, permitiu observar aumento dos valores de células T CD4+ em 12 dos 25 pacientes pediátricos, demonstrando melhoria na sua condição de imunodeficiência associada ao HIV. Decréscimos importantes da carga viral foram observados em 17 crianças, com níveis indetectáveis de RNA HIV alcançados em 13 delas, sendo 11 com linhagens virais resistentes a múltiplas drogas. O desenvolvimento de linhagens virais resistentes é uma das principais razões da falha terapêutica. Mesmo considerando outros fatores causais, tais como aderência, metabolismo e níveis adequados das drogas, a identificação do perfil de resistência viral é um importante fator na conduta para a adequação de esquemas terapêuticos, dando suporte ao uso racional das drogas antiretrovirais em programas de tratamento. / With antiretroviral therapy becoming more widely available nowadays, Human Immunodeficiency Virus type 1 resistance identification and monitoring of disease remains of great importance in adults and infected children. The major HIV-1 infection markers usually used for monitoring viral infection and disease course are CD4+ T cell counts or percentages and HIV viral load. Both of them are helpful indicating when to start therapy and evaluating its efficacy. Also, their association with genotyping tests to identify viral resistant mutations may help clinicians for the most adequate clinical conduct. In the present study, we assessed HIV-1 viral load and CD4+ and CD8+ T lymphocyte rates for the immunological status evaluation of 25 antiretroviral-treated children managing therapeutic regimens according to genotyping test results. Drug resistance evaluation was done using genotyping covering protease and reverse transcriptase genes. Additionally, all of the 25 vertically HIV-1 infected children were assessed for viral subtyping throughout phylogenetic analysis. Eighteen samples clustered at B subtype and three clustered at F1 subtype; one BF, two BD and one DF recombinant strains were also observed. Eighteen children presented, at least, one mutation conferring resistance to the nucleoside reverse transcriptase inhibitors, and seven children presented resistance to the non-nucleoside inhibitors, with six resistant to all three drugs, nevirapine, delavirdine, and efavirenz. In addition, two children in whom the therapy had been discontinued two to three years before testing presented K101E, K103N, and G190A mutations conferring resistance to the all three drugs. Reverse transcriptase gene mutations were more frequently observed at codons M41L, M184V, and T215FY. However, ten children presented an important number of viral resistance mutations, ranging from five to ten mutations, conferring resistance to at least four to up to eleven antiretroviral drugs. Protease gene mutations were more frequently seen at codons M46I, D30N, and I54LV. Thirteen children presented viral resistance to at least two to up to twelve drugs. The management of the highly active antiretroviral therapy (HAART) according to viral resistance in our group of pediatric patients allowed an increase in CD4+ T cell counts and/or percentage in 12 of the 25 children, showing an improvement in their HIV-associated immunodeficiency status. Important viral burden declines were observed in 17 children, and HIV RNA undetectable levels were reached in 13 of them. Among these 17 children, 11 were multi-drug resistant. The development of resistant viral strains is one of the main reasons for failure of antiretroviral therapy. Even considering other causal factors such as compliance of the patient, metabolism of drugs and drug levels, viral resistance profile identification is an important factor in the management of therapeutic regimens, supporting the rational use of antiretroviral drugs by treatment programs.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000419691-Texto+Completo-0.pdf: 1447789 bytes, checksum: 5ccd4a3822fedcf2320dfa685397b746 (MD5) Previous issue date: 2008 / The interaction between a B cell and a primed T cell, in the T-B border, leads to a germinal center reaction, where an antigen specific B cell increases the affinity and specificity for the antigen. After the generation of the high affinity and specificity, some clones differentiate into antibody producing cells. The antibody is the effector molecule of the B cell, and has major functions such as opsonization, neutralization, fixing complement and immunomodulation. In most individuals, the antibody mediated immune response is exclusively specific to non-self antigens, but for reasons not well understood, some individuals develop autoimmune responses. Little is known about the mechanisms behind the generation and survival of autoreactive cells. One of the models of how B cells are recruited in autoimmune responses, like Systemic Lupus Erythemathosus, predicts that B cells are driven into an autoimmune reaction through the presentation of peptides derived from the B cell receptor. The B lymphocytes can randomly combine several gene segments, generating a single cell receptor. Because the frequency of a B cell expressing a particular V gene is low, it was originally postulated that T cells were not rendered tolerant to immunoglobulin derived peptides. Since autoimmunity is the exception, not the rule, mechanisms that suppress the T cell responses against immunoglobulin derived peptides are required. The goal of my Thesis is to test two hypotheses. The first is how immunoglobulin specific T cells are rendered tolerant. The second is to test if a B cell can be recruited in an autoimmune response, through the presentation of immunoglobulin derived peptides. In this model only the sequences of the immunoglobulin that have somatic hypermutated have the potential to generate a T cell epitope. In the first chapter, using a combination of two transgenes and the mixed bone marrow technique, a third animal was generated. In this model the frequency of a B cell expressing a particular V gene (3671-κTg B cells) is similar to the B cell repertory diversity, and the T cells (CA30), are specific to peptides derived from the κ-chain of 3671-κTg B cells. The results demonstrated that the majority of the CA30 T cells were deleted in the thymus; however some T cells were able to reach the periphery. The escapees expressed an endogenous α-chain, were antigen experienced, but did not proliferate to peptide stimulation in vitro. The second chapter’s objective was to test the receptor presentation hypothesis, as an avenue for T cell help to autoreactive B cells, using a partial transgene animal to the B cell receptor. Even with autoimmunity being spontaneously induced, no autoreactive B cell carrying the transgene autoreactive receptor was found in the periphery. / A interação de uma célula B com uma célula T ativada na borda T-B leva a formação de um centro germinativo que tem como resultado o aumento da especificidade e afinidade da célula B pelo antígeno. Após a formação de uma célula B de alta especificidade e afinidade, alguns clones diferenciam-se em células produtoras de anticorpos. O anticorpo é a molécula efetora da célula B e tem como principais finalidades a opsonização, a neutralização, a fixação de complemento e a imunomodulação. Na maioria dos indivíduos, a resposta imune mediada por anticorpo é direcionada apenas contra antígenos não-próprios, porém, devido a fatores até hoje não compreendidos, alguns indivíduos montam respostas auto-imunes. Pouco se sabe quais os mecanismos que estão por trás da formação e manutenção das células auto-reativas. Em um dos modelos que propõe como as células B são recrutadas em resposta auto-imunes, como no Lupus Eritematoso Sistêmico, as células B recebem auxílio via apresentação de peptídeos derivados do receptor de célula B. Os linfócitos B podem aleatoriamente combinar diversos segmentos gênicos para criar um único receptor na superfície da célula. Devido à baixa freqüência de uma célula B expressar um gene V em particular, originalmente foi proposto que as células T não eram tolerantes aos peptídeos derivados da imunoglobulina. Em virtude que a auto-imunidade não é a regra, mecanismos que controlam a resposta de células T a peptídeos derivados da imunoglobulina se fazem necessários. Este trabalho tem como objetivo testar estas duas hipóteses. A primeira questão é a de como as células T imunoglobulinas específicas são tornadas tolerantes. A segunda questão é a de que uma célula B auto-reativa pode ser conduzida a uma resposta auto-imune pela apresentação de peptídeos derivados da imunoglobulina. Neste modelo, apenas as seqüências da imunoglobulina que sofressem hipermutações somáticas teriam o potencial de gerar um epitopo de célula T. No segundo capítulo, usando uma combinação de dois animais transgênicos e a técnica de transplante de medula óssea, um terceiro animal transgênico foi gerado. Neste modelo, a freqüência de uma célula B expressando um gene V em particular (células B 3671-κTg) é semelhante à diversidade do repertório de células B, e as células T(CA30) são, na grande maioria, específicas para um peptídeo derivado da cadeia κ das células B 3671-κTg. Os resultados demonstraram que as células T são, na grande maioria, eliminadas no timo destes animais, porém algumas células são capazes de alcançar a periferia. As células que escapam o timo aparentemente expressam uma cadeia α endógena, são antígenos experientes, porém não respondem à estimulação in vitro com o peptídeo. O terceiro capítulo teve como objetivo testar a apresentação do receptor como via para as células B auto-reativas, usando um animal transgênico parcial para o receptor de célula B. Apesar de a auto-imunidade ter sido induzida de forma espontânea nesses animais, nenhuma célula B auto-reativa encontrada na periferia expressava o receptor transgênico.